Rubella Quantitative IgG

Transcript

1 Rubella Quantitative IgG For the Quantitative Measurement of IgG Antibodies to Rubella Virus in Human Serum For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of IgG antibodies to rubella virus in human serum, as an aid in the determination of immune status to rubella, particularly for women of childbearing age. The performance characteristics of the assay have not been established for use with neonate and cord blood specimens. Catalog Number: L2KRUB2 (200 tests), L2KRUB6 (600 tests) Test Code: RUB Color: Dark Gray Summary and Explanation Rubella, also known as German measles, occurs throughout the world. The prodromal stage includes malaise and a low-grade fever, followed by characteristic lymphadenitis and finally a macular or maculopapular rash. 5,7 While rubella is primarily an infection of children, rubella infections during pregnancy can result in congenital infections with disastrous consequences. Birth defects, such as deafness and/or congenital heart defects are the most common. Multiple defects such as mental retardation, cataracts and hepatosplenomegaly may also occur and contribute to death of the infant in the first year of life. 3,5,6 Infants with congenital infections may secrete virus for up to two years. Contact with these children poses a risk to susceptible pregnant women. 5 Clinical symptoms of rubella infection are frequently mild or nonspecific, making the infection difficult to diagnose clinically. 5 For these reasons, pregnant women with an undiagnosed illness with rash should be evaluated for the possibility of an acute, primary rubella infection. While the virus can be cultured in vitro, serology remains the principal means for establishing a clinical diagnosis of acquired rubella and congenital infections. As two-thirds of defects are not apparent at birth, it is recommended that children exposed in utero be monitored for clinical and serological status until school age. 4 A rubella vaccine, introduced in 1969, has significantly lowered the incidence of both acute disease and congenital rubella syndrome. 2 However, as the vaccination program may vary with geographical location and as the level of immunity provided by vaccination is not always adequate, pregnant women and women of child-bearing age are routinely screened for immune status. 2 The presence of rubella antibodies indicates a previous vaccination or infection and is indicative of presumptive immunity. Patients suspected of having primary, acute rubella infection should be tested for the presence of IgM antibodies. 1,3,5 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG is a solid-phase, enzyme-labeled chemiluminescent sequential immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with inactivated, partially purified rubella antigen (strain HPV77, from infected cell lysates). The liquid phase consists of two reagents: 1) protein based buffer and 2) alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG. In the first cycle, the on-board diluted patient sample (1-in-20) and the protein based buffer are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, IgG antibodies specific to rubella in the sample bind to the rubella antigen on the bead. Unbound sample is then removed by centrifugal washes. In the second cycle, the enzyme conjugated monoclonal murine anti-human IgG antibody is added to the original reaction tube for additional 30 minutes incubation. The enzyme conjugated monoclonal murine anti-human IgG antibody binds to immobilized IgG to form the antibody sandwich complex. The unbound enzyme conjugate is removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube 2 IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, )

3 containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes Time to first result: 65 minutes Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Samples which are cloudy or have particulate material should be clarified by low-speed centrifugation. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 10 µl serum. After automatic sample predilution, 10 µl is used for the immunoassay. Automatic Predilution Factor: 20 Storage: 3 days at 2 8 C, or 6 months at 20 C. 14 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight (see insert). Water: Use distilled or deionized water. The bead is coated with inactivated rubella antigen. However, caution is advised because of the possible presence of residual organism when working with, or disposing of, the materials supplied. The anti-rubella IgG results determined for a given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Rubella Quantitative IgG Bead Pack (L2RUB12) With barcode. 200 beads, coated with rubella antigen (strain HPV 77) partially purified from infected cells. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KRUB2: 1 pack L2KRUB6: 3 packs Rubella Quantitative IgG Reagent Wedge (L2RUBA2) With barcode. 2 reagents: 11.5 ml of a protein-based buffer, with preservative ml of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG antibody in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KRUB2: 1 wedge L2KRUB6: 3 wedges Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, ) 3

4 Rubella Quantitative IgG Adjustors (LRUBL, LRUBH) Two vials (Low and High), 4 ml each, of human serum with IgG reactive to rubella in a buffer, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KRUB2: 1 set L2KRUB6: 2 sets Rubella IgG Controls (LRUBC1, LRUBC2, LRUBC3) Three vials, (Negative, Low Positive and Positive), 2 ml each. LRUBC1 (Negative Control): One vial containing human serum with IgG nonreactive to rubella, with preservative. LRUBC2, LRUBC3 (Low Positive Control, Positive Control): Two vials containing human serum with IgG reactive to rubella, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. Refer to the Rubella IgG Controls insert for the respective concentrations in IU/mL. L2KRUB2: 1 set L2KRUB6: 2 sets The IMMULITE 2000 software performs automatic on-board dilution of control samples, and the results will be tracked in the QC database. Enter controls as controls. Before running adjustors or controls, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes, so that the barcodes can be read by the on-board reader. IgG/IgM Sample Diluent (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KRUB2: 1 vial L2KRUB6: 1 vial Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2KRUB2: 3 labels L2KRUB6: 5 labels Kit Components Supplied Separately IgG/IgM Sample Diluent (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2IGZ2: 1 vial Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2IGZ2: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LRUBCM: Tri-level Rubella IgG Control Module Also required Distilled or deionized water; test tubes Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks Quality Control Samples: The Rubella IgG Controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor the performance of the assay at the cutoff range and to monitor for substantial reagent failure. The Rubella IgG Low Positive Control is used to validate the IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG assay at a critical level when determining the immune status of a patient. Additional controls may be tested in accordance with guidelines or requirements of local, state and/or federal regulations or accrediting organizations. It is also recommended that both reactive and nonreactive specimens, with known IU/mL, be run periodically to assure pipetting accuracy for the dilution step. 4 IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, )

5 Users of the IMMULITE 2000 system are advised to consult the NCCLS document C24-A, Internal Quality Control Testing: Principles and Definitions, for additional guidance on quality control for the basic principles and definitions in dealing with internal quality control testing. 13 Interpretation of Results The NCCLS Subcommittee on Rubella Serology recommended identifying a "positive" sera as one with IgG antibody to rubella virus equal to, or greater than 10 IU/mL. 12 Reactive: A result greater than, or equal to 10 IU/mL is considered to be "reactive" for IgG antibody to rubella virus, and is indicative of a past infection or vaccination. Indeterminate: A result greater than, or equal to 5 IU/mL, and less than 10 IU/mL is considered to be "indeterminate". Nonreactive: A result less than 5 IU/mL is considered to be "nonreactive." Nonreactive results by this test do not preclude recent primary infection. A result less than 10 IU/mL may be obtained from an individual with a recent infection or vaccination. The presence of IgG antibodies to rubella virus is an indication of previous exposure to the virus, either through vaccination or prior infection, and a single specimen can be used to estimate the immune status of the individual. It is the opinion of the Immunization Practices Advisory Committee that any detectable antibody is indicative of immunity. 8 A result of "indeterminate" indicates an intermediate level of IgG antibodies to rubella virus in the sample: the sample should therefore be retested. Samples which still test as "indeterminate" should be examined by an alternate method, or a second sample should be collected, if possible, within a reasonable period of time (e.g. one week). The results sent by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG assay. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Expected Values According to the literature, in general, 90% of the U.S. population has either been vaccinated or exposed to rubella, 11 with rubella IgG values greater than or equal to 10 IU/mL. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations The presence of IgG antibodies in a single specimen is not sufficient to distinguish between active infection and past infection. The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical history, symptomology and other laboratory findings. Patients suspected of having primary, active infection should be tested for the presence of IgM antibodies to rubella virus. An increase in antibody levels to reactive ( 10 IU/mL) from nonreactive or indeterminate status ( 10 IU/mL) from the first to the second sample may be indicative of an acute, primary infection. The results in HIV patients, in patients undergoing immunosuppressive therapy, or in patients with other disorders leading to immunosuppression, should be interpreted with caution. The performance characteristics of this assay have not been established for use with specimens from neonates, cord blood, or pretransplant patients. A serum specimen taken very early during the acute stage of infection may contain levels of IgG antibody below 10 IU/mL. The performance of the IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG has not been established for sample matrices other than human serum. There was no attempt to correlate the assay's results with disease presence or absence. No judgment can be made on the comparison assay's accuracy to predict disease. The assay's predicative values are affected by the prevalence of the disease in a particular population. IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, ) 5

6 Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in IU/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 5 to 400 IU/mL (WHO 1 st IS RUBI-1-94) Analytical Sensitivity: 5.0 IU/mL Intraassay Precision: Statistics were calculated for seven samples from the results of 20 replicates in a single run. (See Intraassay Precision table.) Interassay Precision: Statistics were calculated for seven samples assayed in 4 different runs for a total of 20 replicates. (See Interassay Precision table.) Specificity: The specificity of the IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG assay was evaluated by testing 83 samples reactive for Mycoplasma pneumoniae, Toxoplasma, varicella-zoster virus, cytomegalovirus, Epstein-Barr virus, HSV 1 and measles. With these specimens, IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG and IMMULITE Rubella Quantitative IgG show 100% agreement (83/83). Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 539 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 17 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. All samples were assayed by the IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG procedure, with the following results. (Heparin) = 1.01 (Serum) IU/mL r = (EDTA) = 0.96 (Serum) IU/mL r = (SST) = 1.02 (Plain Tubes) IU/mL r = Means: 97 IU/mL (Serum) 99 IU/mL (Heparin) 96 IU/mL (EDTA) 100 IU/mL (SST) Clinical Performance In a clinical study, 418 specimens from pregnant women were tested. All 418 specimens were evaluated with the IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG procedure and a commercially available enzyme immunoassay for Rubella IgG (Kit A). The table below presents the results of this study. Kit A React Ind Nonreac Positive Indeterminate Negative IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG Relative Sensitivity Relative Specificity 100% 96.2% Agreement: 99.0% 95% Confidence Limits for Relative Sensitivity and Specificity, respectively: 98.8% 100% and 90.4% 98.9%. (Confidence limits by exact test.) Method Comparison: The assay was compared to IMMULITE Rubella Quantitative IgG on 229 serum samples (Concentration range: approximately 5 to 350 IU/mL. See graph.) By linear regression: 6 IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, )

7 (IML 2000) = 1.03 (IML) IU/mL r = Means: 82 IU/mL (IMMULITE 2000) 77 IU/mL (IMMULITE) References 1) Gershon A. Rubella virus (German measles). In: Mandell GL, et al, editors. Principles and practice of infectious disease. 3rd ed. New York: Churchill Livingstone, Inc., 1990: ) Lee SH, et al. Resurgence of congenital rubella syndrome in the 1990s. JAMA 1992;267: ) Morgan-Capner P. Rubella diagnosis. In: Spencer RC, et al, editors. Rapid methods and automation in microbiology and immunology. Andover, Hampshire, UK: Intercept Ltd, 1993: ) Peckham CS. Clinical and laboratory study of children exposed in utero to maternal rubella. Arch Dis Child 1992;47: ) Wiedbrauk DL, Johnston SLG. Manual of clinical virology. New York: Raven Press, 1993: ) Wolinski JS. Rubella. In: Fields BN, et al, editors. Virology. 2nd ed. New York: Raven Press, 1990: ) Ziring PR, et al. The diagnosis of rubella. Pediatr Clin N Am 1971;18: ) Centers for Disease Control morbidity and mortality weekly report Feb 6;30(4). Recommendation of the Immunization Practices Advisory Committee (ACIP). 9) Lundstrm R. Rubella during pregnancy: a followup study of children born in Sweden, with additional investigations on prophylaxis and treatment of maternal rubella. Acta Pediatr Scand 1962; 51 (Suppl 133): S1-S8. 10) Lerman SJ, et al. Accuracy of rubella history. Ann Intern Med 1971;74: ) Baltz ML, Searcy RL. Clinical significance and advanced serologic diagnosis of ToRCH infections. Am Clin Lab 1994;March/April: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Detection and quantitation of rubella IgG antibody: evaluation and performance criteria for multiple component test products and specimen handling and user of test products in the clinical laboratory; approved guideline. NCCLS Document I/LA6-A, Wayne, PA: NCCLS, ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Internal quality control testing: principles and definitions; approved guideline. NCCLS Document C24-A, Villanova, PA: NCCLS, ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3 rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995:358. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Intraassay Precision (IU/mL) Mean 1 SD 2 CV % % % % % % % Česky. 1 Střední hodnota, 2 Směrodatná odchylka, 3 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Μέσος όρος, 2 SD, 3 CV. Polski. 1 Średnia, 2 SD, 3 CV. Interassay Precision (IU/mL) Mean 1 SD 2 CV % % % % % % % Česky. 1 Střední hodnota, 2 Směrodatná odchylka, 3 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Μέσος όρος, 2 SD, 3 CV. Polski. 1 Średnia, 2 SD, 3 CV. Method Comparison (IU/mL) IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG IMMULITE Rubella Quantitative IgG, IU/mL IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, ) 7

8 (IML 2000) = 1.03 (IML) IU/mL r = English. Rubella Quantitative IgG Česky. Rubeola Kvantitativní IgG. Ελληνικά. Ποσοτική IgG Ερυθράς. Polski. Różyczka IgG Ilościowo. Česky IMMULITE 2000 Rubeola Kvantitativní IgG Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace IgG protilátek proti viru zarděnek v lidském séru, jakožto pomůcky při zjištění imunitního stavu, zejména žen ve fertilním věku. Tato metoda není určena ke stanovení vzorků od novorozenců a vzorků pupečníkové krve. Katalogové číslo: L2KRUB2 (200 stanovení), L2KRUB6 (600 stanovení) Kód metody: RUB Barva: Tmavě šedá Shrnutí a vysvětlení Zarděnky, rovněž známé jako německé spalničky, jsou rozšířeny celosvětově. Počáteční stádium infekce se projevuje malátností a slabou horečkou, následuje charakteristická lymfadenitida a nakonec makulární nebo makulopapulární vyrážka. 5,7 I když jsou zarděnky předně dětskou infekcí, nakažení virem zarděnek v těhotenství může způsobit kongenitální infekci s neblahými důsledky. Vrozené vady jako jsou hluchota a/nebo kongenitální srdeční vady patří mezi nejčastější. Můžou nastat i kombinovaná poškození jako mentální retardace, zákaly nebo hepatosplenomegalie, které vedou k úmrtí dítěte během prvního roku života. 3,5,6 Děti s kongenitální infekcí můžou vylučovat virus až dva roky. Kontakt s těmito dětmi sebou nese riziko pro těhotné ženy náchylné k infekci. 5 Klinické příznaky infekce zarděnek jsou často mírné a málo specifické, což stěžuje klinické diagnostikování této infekce. 5 Z těchto důvodů by u těhotných žen s nediagnózovanou vyrážkou měla být zvážena možnost akutní primární infekce zarděnek. Přestože virus lze kultivovat in vitro, sérologie zůstává hlavním prostředkem stanovení klinické diagnózy získané a kongenitální infekce zarděnek. Protože dvě třetiny vad není u narození zřejmých, doporučuje se monitorování klinického a sérologického stavu dětí vystavených této nákaze in utero až do školního věku. 4 Očkovací látka proti zarděnkám, která se začala používat v roce 1969, významně snížila výskyt jak akutního onemocnění, tak i kongenitálního zarděnkového syndromu. 2 Protože očkovací program se může v různých částech světa lišit a imunita získaná očkováním není vždy vyhovující, podstupují těhotné ženy a ženy v plodném věku rutinní screening zjišťující jejich imunitní stav. 2 Přítomnost zarděnkových protilátek svědčí o očkování nebo prodělané infekci a signalizuje pravděpodobnou imunitu. U pacientů s podezřením na primární akutní infekci zarděnek je třeba zjistit případnou existenci IgM protilátek. 1,3,5 Princip Metoda IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG je enzymem značené chemiluminiscenční sekvenční imunometrické stanovení v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažená inaktivovaným, částečně purifikovaným antigenem zarděnek (kmen HPV77 z infikovaných buněčných lyzátů). Kapalná fáze se skládá ze dvou reagencií: 1) pufr na bázi bílkoviny a 2) alkalická fosfatáza (z telecího střeva) konjugovaná s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgG. V prvním kroku se automaticky naředěný pacientský vzorek (1 : 20) a pufr na bázi bílkoviny inkubují po dobu 30 minut. Během této doby se IgG protilátky specifické pro zarděnky obsažené ve vzorku naváží na antigen zarděnek na kuličce. Nenavázaný vzorek se pak odstraní centrifugačním mytím. V druhém kroku se do testovací jednotky přidá s enzymem konjugovaná monoklonální myší protilátka proti lidskému IgG a proběhne další inkubace trvající 30 minut. S enzymem konjugovná myší protilátka proti lidskému IgG se naváže na imobilizovaný IgG a vznikne sendvičový komplex. Nenavázaný 8 IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, )

9 enzymový konjugát se odstraní centrifugačním mytím. Nakonec se do testovací jednotky s kuličkou přidá chemiluminiscenční substrát a generovaný signál je úměrný navázanému enzymu. Inkubační cykly: 2 30 minut Čas do prvního výsledku: 65 minut Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Zakalené vzorky nebo vzorky s částicemi je třeba upravit nízkootáčkovou centrifugací. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Pro některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Rubeola Kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku: 10 μl séra. Po automatickém předředění vzorku se pro stanovení použije 10 µl. Faktor automatického předředění: 20 Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců při teplotě 20 C. 14 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu (viz připojený letáček). Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Kuličky jsou potažené imobilizovaným antigenem zarděnek. Při práci s dodaným materiálem nebo při jeho likvidaci se ale doporučuje postupovat obezřetně, protože může obsahovat zbytkový organizmus. Výsledky stanovení IgG protilátek proti zarděnkám v daném vzorku získané pomocí testů od různých výrobců se můžou z důvodu rozdílů v použité metodě a specificity reagencie lišit. Proto by výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři měl obsahovat sdělení: Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení Rubeola Kvantitativní IgG EIA na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. Rubeola Kvantitativní IgG zásobník s kuličkami (L2RUB12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených antigenem zarděnek (kmen HPV 77) částečně purifikovaným od infikovaných buněk. Stabilní při teplotě 2-8 C do expirace. L2KRUB2: 1 balení L2KRUB6: 3 balení IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, ) 9

10 Rubeola Kvantitativní IgG reagencie (L2RUBA2) Opatřeno čárovým kódem. Dvě reagencie: 11,5 ml pufrového roztoku na bázi bílkovin, s konzervačním prostředkem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgG v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KRUB2: 1 nádobka L2KRUB6: 3 nádobky Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Rubeola Kvantitativní IgG kalibrátory (LRUBL, LRUBH) Dvě ampulky (každá 4,0 ml) s vysokou a nízkou koncentrací lidského séra s IgG reaktivním vůči zarděnkám, v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při 20 C. L2KRUB2: 1 sada L2KRUB6: 2 sady Rubeola IgG kontroly (LRUBC1, LRUBC2, LRUBC3) Tři ampulky (negativní, mírně pozitivní a pozitivní), každá 2 ml. LRUBC1 (Negativní kontrola): Jedna ampulka obsahující lidské sérum s IgG nereaktivním vůči zarděnkám s konzervačním prostředkem. LRUBC2, LRUBC3 (mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): Dvě ampulky obsahující lidské sérum s IgG reaktivním vůči zarděnkám, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při 20 C. Aktuální koncentrace v IU/ml najdete na informačním letáčku přiloženém ke kontrole. L2KRUB2: 1 sada L2KRUB6: 2 sady Software analyzátoru IMMULITE 2000 provádí automatické ředění kontrol a výsledky ukládá do QC databáze. Kontroly zadejte jako kontroly. Před testováním kalibrátorů nebo kontrol nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. IgG/IgM diluent vzorků (L2IGZ2) K automatickému ředění vzorků analyzátorem. 55 ml koncentrované (připravená k použití), nehumánní bílkovino/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při teplotě 20 C. L2KRUB2: 1 ampulka L2KRUB6: 1 ampulka Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2KRUB2: 3 štítky L2KRUB6: 5 štítků Materiál dodávaný zvlášť IgG/IgM diluent vzorků (L2IGZ2) K automatickému ředění vzorků analyzátorem. 55 ml koncentrované (připravená k použití), nehumánní bílkovino/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při teplotě 20 C. L2IGZ2: 1 ampulka Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2IGZ2: 5 štítků. L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků LRUBCM: Trojúrovňový Rubeola IgG kontrolní modul Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu, testovací zkumavky Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, )

11 V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny Vzorky ke kontrole kvality: Kontroly Rubeola IgG dodané v soupravě jsou určeny ke kontrole kvality při monitoringu výsledku stanovení v cut-off rozmezí a při kontrole případného závažného selhání reagencií. Mírně pozitivní kontrola Rubeola IgG slouží k ověření stanovení koncentrace IgG protilátek proti viru zarděnek na analyzátorech IMMULITE 2000 v mezních případech při určování imunitního stavu pacienta. V souladu s pokyny nebo požadavky příslušných místních, státních a/nebo federálních předpisů nebo akreditačních organizací je možné použít další kontroly. Rovněž doporučujeme pravidelné testování reaktivních i nereaktivních vzorků se známou hodnotou IU/ml, aby se zajistilo přesné pipetování pro fázi ředění. Uživatelům systému IMMULITE 2000 doporučujeme, aby rady ohledně kontroly kvality a další zásady a definice týkající se interního testování kontroly kvality hledali v dokumentu C24-A od NCCLS, Internal Quality Control Testing: Principles and Definitions, (Interní zkoušky kontroly kvality: Zásady a definice). 13 Vyhodnocení výsledků Podvýbor NCCLS Rubella Serology doporučuje označit za "pozitivní" sérum takové, ve kterém je koncentrace IgG protilátek proti viru zarděnek rovná nebo větší než 10 IU/ml. 12 Reaktivní: Výsledek větší nebo rovný 10 IU/ml je považován za "reaktivní" k IgG protilátkám proti viru zarděnek a značí prodělanou infekci nebo očkování. Neurčitý (Indeterminate): Výsledek větší nebo rovný 5 IU/ml a menší než 10 IU/ml je považován za "neurčitý (indeterminate). Nereaktivní: Výsledek menší než 5 IU/ml je považován za "nereaktivní." Nereaktivní výsledek tohoto stanovení nevylučuje nedávnou primární infekci. Jedinec s nedávnou infekcí nebo očkováním může mít výsledek pod 10 IU/ml. Přítomnost IgG protilátek proti viru zarděnek je znamením kontaktu s virem v minulosti, a to buď prostřednictvím očkování nebo prodělané infekce, a ke zjištění imunitního stavu jedince postačí jeden vzorek. Podle stanoviska Immunization Practices Advisory Committee (Poradního výboru pro očkování v praxi) je jakékoliv zjistitelné množství protilátek známkou imunity. 8 Výsledek "indeterminate" značí přechodnou hodnotu koncentrace IgG protilátek proti viru zarděnek ve vzorku a je třeba provést opakovanou zkoušku vzorku. Vzorek, u kterého se opakovaně dostaví výsledek "indeterminate", je třeba stanovit alternativní metodou, nebo, pokud je to možné, je nutné za přiměřenou dobu (např. jeden týden) odebrat další vzorek. Výsledky stanovení, které laboratoř posílá lékaři by měly obsahovat sdělení: Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení Rubeola Kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat. Očekávané hodnoty Podle údajů v literatuře, 90 % populace USA bylo buď očkováno vůči zarděnkám, nebo se dostalo s touto infekcí do styku 11 a má hodnoty koncentrace IgG protilátek proti zarděnkám větší nebo rovné 10 IU/ml. Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Přítomnost IgG protilátek v jediném vzorku nestačí k rozlišení mezi aktivní a prodělanou infekcí. Výsledky stanovení je třeba posuzovat s ohledem na klinickou anamnézu pacienta, symptomatiku a ostatní laboratorní nálezy. U vzorků pacientů s podezřením na primární aktivní infekci je třeba zkontrolovat přítomnost IgM protilátek proti viru zarděnek. IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, ) 11

12 Zvýšení koncentrace protilátek na reaktivní ( 10 IU/ml) z nereaktivní nebo neurčité úrovně ( 10 IU/ml) při porovnání prvního a druhého vzorku může být známkou akutní primární infekce. Výsledky stanovení vzorků pacientů s HIV, pacientů podstupujících imunosupresivní terapii nebo pacientů s jinými poruchami vedoucími k imunosupresi, by měly být interpretovány s obezřetností. Tato metoda není určena ke stanovení vzorků od novorozenců, vzorků pupečníkové krve nebo vzorků od pacientů před transplantací. Vzorky séra odebraného ve velmi ranném stádiu akutní fáze infekce můžou mít koncentraci IgG protilátek nižší než 10 IU/ml. Stanovení Rubeola Kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 není určeno pro jiné typy vzorků než lidské sérum. Výsledky stanovení jsme se v žádném případě nesnažili korelovat s existencí nebo neexistencí onemocnění. Názor si nelze utvořit na základě porovnání přesnosti metody při předpovědi onemocnění. Predikativní hodnoty stanovení jsou ovlivněny mírou rozšíření onemocnění v konkrétní populaci. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v IU/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření: 5 do 400 IU/ml (WHO 1 st IS RUBI-1-94) Analytická citlivost: 5,0 IU/ml Přesnost v rámci stanovení: Statistické údaje byly vypočítány pro sedm vzorků z výsledků 20 replikátů v jediném testu. (Viz tabulka Přesnost v rámci stanovení.) Přesnost mezi stanoveními: Statistické údaje byly vypočítány pro sedm vzorků analyzovaných ve čtyřech různých testech, celkem 20 replikátů. (Viz tabulka Přesnost mezi stanoveními.) Specificita: Pomocí stanovení Rubeola Kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 jsme hodnotili specificitu této metody pomocí analýzy 83 vzorků reaktivní vůči Mycoplasma pneumoniae, Toxoplasma, viru neštovic (varicellazoster),viru herpes (cytomegalovirus - CMV), viru Epstein-Barrové, HSV 1 a spalničkám. U těchto vzorků byla při použití testů Rubeola Kvantitativní IgG na analyzátoru IMMULITE 2000 a Rubeola Kvantitativní IgG na analyzátoru IMMULITE prokázána 100 % shoda (83/83). Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 539 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: Ke zjištění vlivu alternativních typů vzorku byly odebrány vzorky krve od 17 dobrovolníků do obyčejných, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Všechny vzorky byly analyzovány metodou IMMULITE IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, )

13 Rubeola Kvantitativní IgG, s následujícími výsledky. (Heparin) = 1,01 (Sérum) + 1,34 IU/ml r = 0,997 (EDTA) = 0,96 (Sérum) + 2,76 IU/ml r = 0,993 (SST) = 1,02 (Obyčejné zkumavky) + 0,80 IU/ml r = 0,994 Střední hodnoty: 97 IU/ml (Sérum) 99 IU/ml (Heparin) 96 IU/ml (EDTA) 100 IU/ml (SST) Klinická interpretace V rámci klinického výzkumu jsme stanovili 418 vzorků od těhotných žen. Všech 418 vzorků bylo testováno za použití metody Rubeola Kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 a pomocí komerčně dostupného enzymového imunologického stanovení Rubeola IgG (Kit A). Výsledky výzkumu jsou v následující tabulce. IMMULITE 2000 Rubeola Kvantitativní IgG Kit A Reaktivní Neurčitý Nereac -tivní Pozitivní Neurčitý (Indeterminate) Negativní Relativní citlivost Relativní specificita 100 % 96,2 % Shoda: 99,0 % 95 % Hranice spolehlivosti pro relativní citlivost a specificitu, v uvedeném pořadí: 98,8 % 100 % a 90,4 % 98,9 %, (Hranice spolehlivosti dle stejného testu.) Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno s testem Rubeola Kvantitativní IgG na analyzátoru IMMULITE na 229 vzorcích séra (Koncentrační rozsah: přibližně 5 až 350 IU/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,03 (IML) + 2,98 IU/ml r = 0,979 Střední hodnoty: 82 IU/ml (IMMULITE 2000) 77 IU/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Ποσοτική IgG Ερυθράς Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση των IgG αντισωμάτων έναντι του ιού της ερυθράς στον ανθρώπινο ορό, ως βοήθημα για την εκτίμηση του επιπέδου της ανοσίας, Ιδιαίτερα γυναικών σε γόνιμη ηλικία. Τα χαρακτηριστικά της απόδοσης της εξέτασης δεν έχουν καθοριστεί για χρήση σε δείγματα νεογνών και cord blood. Αριθμοί καταλόγου: L2KRUB2 (200 αναλύσεις), L2KRUB6 (600 αναλύσεις) Κωδικός εξέτασης: RUB Χρώμα: Σκούρο γκρι Περίληψη και Εξήγηση Η ερυθρά, γνωστή και ως German measles, συναντάται σε ολόκληρο τον κόσμο. Το προδρομικό στάδιο περιλαμβάνει γενική αδιαθεσία και χαμηλό πυρετό που ακολουθείται από χαρακτηριστική λυμφαδενίτιδα και στο τέλος εμφανίζεται ένα κηλιδώδες ή κηλιδοβλατιδώδες εξάνθημα. 5,7 Ενώ η ερυθρά είναι κυρίως μια παιδική λοίμωξη, η προσβολή από τον ιό κατά την διάρκεια της εγκυμοσύνης μπορεί να προκαλέσει γενετήσιες μολύνσεις με καταστροφικές συνέπειες. Οι πιο συνηθισμένες συγγενείς βλάβες είναι η κώφωση και/ή οι γενετήσιες καρδιακές βλάβες. Μπορεί επίσης να προκληθούν πολλαπλές βλάβες όπως η διανοητική καθυστέρηση, ο καταρράκτης και η ηπατοσπληνομεγαλία και να οδηγήσουν στον θάνατο του βρέφους τον πρώτο χρόνο της ζωής του. 3,5,6 Νήπια με γενετική μόλυνση μπορεί να εκκρίνουν ιό έως και για δύο χρόνια. Η επαφή με αυτά τα παιδιά μπορεί να θέσει σε κίνδυνο τις επιρρεπείς έγκυες γυναίκες. 5 IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, ) 13

14 Τα κλινικά συμπτώματα της ερυθράς είναι συχνά ήπια και μη συγκεκριμένα, δυσκολεύοντας την κλινική διάγνωση της νόσου. 5 Γι αυτούς τους λόγους, οι έγκυες γυναίκες που εμφανίζουν εξάνθημα λόγω μιας μη διαγνωσμένης ασθένειας, πρέπει να εξετάζονται για την πιθανότητα μόλυνσης από οξεία πρωτογενή ερυθρά. Ενώ μπορεί να γίνει καλλιέργεια του ιού in vitro, η ορολογία (serology) παραμένει το κύριο μέσο κλινικής διάγνωσης της ερυθράς και άλλων συγγενών λοιμώξεων. Επειδή τα δύο τρίτα των βλαβών δεν είναι εμφανή κατά την γέννα, συστήνεται να παρακολουθείται η ορολογική και κλινική κατάσταση των παιδιών (μέχρι την σχολική τους ηλικία) που έχουν εκτεθεί στον ιό μέσα στη μήτρα. 4 Το εμβόλιο ερυθράς, που εμφανίστηκε το 1969, έχει μειώσει σημαντικά τα περιστατικά και της οξείας νόσου και του συγγενούς συνδρόμου ερυθράς. 2 Όμως, επειδή το πρόγραμμα εμβολιασμού διαφέρει ανάλογα με την γεωγραφική τοποθεσία και επίσης επειδή το επίπεδο ανοσίας δεν είναι πάντα επαρκές, οι έγκυες γυναίκες και οι γυναίκες που βρίσκονται στην αναπαραγωγική ηλικία εξετάζονται τακτικά για την ανοσολογική τους κατάσταση. 2 Η παρουσία αντισωμάτων ερυθράς δείχνει προηγούμενο εμβολιασμό ή λοίμωξη και αποτελεί ένδειξη πιθανής ανοσίας. Οι ασθενείς που πιθανώς πάσχουν από οξεία ερυθρά πρέπει να εξετάζονται για την παρουσία αντισωμάτων IgM. 1,3,5 Αρχή της μεθόδου Η IMMULITE 2000 Ποσοτική IgG Ερυθράς είναι μια ξηρής φάσης, σημασμένη με ένζυμο επακόλουθη χημειοφωταυγής ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με απενεργοποιημένο, μερικώς κεκαθαρμένο αντιγόνο ερυθράς (αλυσίδα HPV77, από μολυσμένα λύματα κυττάρων). Η υγρή φάση αποτελείται από δύο αντιδραστήρια: 1) υπόστρωμα πρωτεϊνικού ρυθμιστικού διαλύματος και 2) αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντίανθρώπινης IgG. Στον πρώτο κύκλο, το αραιωμένο στον αναλυτή δείγμα ασθενούς (1 προς 20) και το υπόστρωμα πρωτεϊνικού ρυθμιστικού διαλύματος επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, τα ειδικά αντισώματα IgG για την ερυθρά του δείγματος προσδένονται στο αντιγόνο ερυθράς στο σφαιρίδιο. Το μη προσδεδεμένο δείγμα στη συνέχεια απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Στο δεύτερο κύκλο, το συνδεδεμένο ένζυμο σε μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντί-ανθρώπινης IgG προστίθεται στον αρχικό σωλήνα αντίδρασης για μία επιπλέον 30-λεπτη επώαση. Το συνδεδεμένο ένζυμο σε μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντίανθρώπινης IgG δένεται στην ακινητοποιημένη IgG για το σχηματισμό του σάντουϊτς συμπλέγματος αντισωμάτων. Το μη προσδεδεμένο σύμπλεγμα ενζύμου απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στον αρχικό σωλήνα αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Επωαστικοί κύκλοι: 2 30 λεπτά Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά Συλλογή δείγματος Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Απαιτείται η φυγοκέντριση των θολών δειγμάτων ή δειγμάτων που περιέχουν σωματίδια σε χαμηλές ταχύτητες. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα 14 IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, )

15 συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Ποσοτική IgG δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορός. Μετά την αυτόματη προαραίωση, χρησιμοποιούνται 10 µl για την ανοσοανάλυση. Αυτόματος Συντελεστής Προαραίωσης: 20 Αποθήκευση: 3 μέρες στους 2 8 C, ή 6 μήνες στους 20 C. 14 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για διαγνωστική εργαστηριακή χρήση Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά. Αζίδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl,σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Δεν πρέπει να μολυνθεί και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες Νερό: Χρήση αποσταγμένου ή απιονισμένου νερού Τα σφαιρίδια είναι επικαλυμμένα με απενεργοποιημένο αντιγόνο ερυθράς. Παρ όλα αυτά συνίσταται προσοχή εξ αιτίας της πιθανής παρουσίας υπολειμματικού ιού όταν εργαζόμαστε ή εναποθέτουμε στα απόβλητα τα παρεχόμενα υλικά. Τα αποτελέσματα της αντί-ποσοτική που υπολογίζονται για ένα συγκεκριμένο δείγμα με εξετάσεις από διαφορετικούς κατασκευαστές μπορεί να μην δίνουν το ίδιο αποτέλεσμα εξαιτίας διαφορών στις μεθόδους της εξέτασης και στην ειδικότητα των αντιδραστηρίων. Για τον λόγο αυτό τα αποτελέσματα που εκδίδονται στους κλινικούς γιατρούς από το εργαστήριο θα πρέπει να αναφέρουν ότι: Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν από το IMMULITE 2000 Ποσοτική IgG EIA. Aποτελέσματα εξετάσεων άλλων κατασκευαστών που χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους δεν θα πρέπει να χρησιμοποιoύνται κατ εναλλαγή. Υλικά που διατίθενται Τα υλικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Ποσοτική IgG Ερυθράς συσκευασία σφαιριδίων (L2RUB12) Με barcode. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με αντιγόνο ερυθράς (στέλεχος HPV 77) μερικώς καθαρισμένο από μολυσμένα κύτταρα. Σταθερό στους 2 8 C ως την ημερομηνία λήξης. L2KRUB2: 1 συσκευασία L2KRUB6: 3 συσκευασίες Ποσοτική IgG Ερυθράς Δοχείο Αντιδραστηρίου (L2RUBA2) Με barcode. 2 αντιδραστήρια: 11,5 ml ρυθμιστικού δ/τος, 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε μονοκλωνικό εναντίον του ανθρώπινου IgG αντίσωμα ποντικού, σε ρυθμιστικό διάλυμα (με συντηρητικό). Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KRUB2: 1 δοχείο L2KRUB6: 3 δοχεία Πριν την χρήση, αφαιρέστε την διαφανή ταινία προσέχοντας να μην καταστραφεί το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, ) 15

16 Ποσοτική IgG Ερυθράς Ρυθμιστές (LRUBL, LRUBH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) 4 ml το καθένα ανθρώπινου ορού με IgG ενεργό στην RUBELLA, σε ρυθμιστικό δ/μα, με συντηρητικό. Ο ρυθμιστής (adjustor) χρησιμεύει σαν το cut off της εξέτασης. Σταθερά στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα, ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KRUB2: 1 σετ L2KRUB6: 2 σετ Ποσοτική IgG οροί ελέγχου (LRUBC1, LRUBC2, LRUBC3) Τρία δοχεία, (Negative, Low Positive και Positive), 2 ml το καθένα. LRUBC1 (Αρνητικός έλεγχος): Ένα φιαλίδιο που περιέχει ανθρώπινο ορό με IgG αρνητική στην ερυθρά, με συντηρητικό. LRUBC2, LRUBC3 (χαμηλός θετικός έλεγχος, θετικός έλεγχος): Δύο φιαλίδια που περιέχουν ανθρώπινο ορό με IgG θετική στην ερυθρά, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 ημέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. Βλέπε το εσώκλειστο της Rubella IgG Controls για τις αντίστοιχες συγκεντρώσεις σε IU/mL. L2KRUB2: 1 σετ L2KRUB6: 2 σετ Το λογισμικό του IMMULITE 2000 εκτελεί την αυτόματη επί του συστήματος αραίωση των δειγμάτων ελέγχου, και τα αποτελέσματα θα καταγραφούν στην βάση δεδομένων. Εισάγετε τους ελέγχους ως controls. Πριν την χρήση ρυθμιστών ή ελέγχων τοποθετείστε την κατάλληλη ετικέτα ούτως ώστε η ετικέτα να μπορεί να διαβαστεί IgG/IgM Αραιωτικό Δειγμάτων (L2IGZ2) Για την επί του αναλυτή αραίωση των δειγμάτων των ασθενών. 55 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση), μη ανθρώπινης μήτρας πρωτεΐνης/ ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Αποθήκευση: 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KRUB2: 1 φιαλίδιο L2KRUB6: 1 φιαλίδιο Χωριστές γραμμογραφημένες (barcode) ετικέτες προμηθεύονται με το κιτ, για χρήση με το Αραιωτικό. Πριν την χρήση τοποθετείστε την κατάλληλη ετικέτα σε ένα σωληνάριο mm, ούτως ώστε η ετικέτα να μπορεί να διαβαστεί. L2KRUB2: 3 ετικέτες L2KRUB6: 5 ετικέτες Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά IgG/IgM Αραιωτικό Δειγμάτων (L2IGZ2) Για την επί του αναλυτή αραίωση των δειγμάτων των ασθενών. 55 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση), μη ανθρώπινης μήτρας πρωτεΐνης/ ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Αποθήκευση: 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2IGZ2: 1 φιαλίδιο Χωριστές γραμμογραφημένες (barcode) ετικέτες προμηθεύονται με το κιτ, για χρήση με το Αραιωτικό. Πριν την χρήση τοποθετείστε την κατάλληλη ετικέτα σε ένα σωληνάριο mm, ούτως ώστε η ετικέτα να μπορεί να διαβαστεί. L2IGZ2: 5 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες εξέτασης μιας χρήσης L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης του δείγματος LRUBCM: Μονάδα ελέγχου Ποσοτική IgG τριών επιπέδων Χρειάζονται επίσης: Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό, σωληνάρια Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες Ποιοτικοί Οροί ελέγχου: Οι Ποσοτική IgG οροί ελέγχου που παρέχονται με το kit θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως υλικό ποιοτικού ελέγχου για την παρακολούθηση της επίδοσης της εξέτασης στο σημείο του cut off. O θετικός έλεγχος χρησιμοποιείται για την αξιολόγηση της IMMULITE 2000 Ποσοτική IgG εξέτασης στο κρίσιμο σημείο που θα 16 IMMULITE 2000 Rubella Quantitative IgG (PIEL2KRUB-6 {18}, )