Anti-HBc. For the Qualitative Detection of Total Antibodies to Hepatitis B Core Antigen in Human Serum. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Anti-HBc For the Qualitative Detection of Total Antibodies to Hepatitis B Core Antigen in Human Serum For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Anti-HBc English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the qualitative detection of total antibodies against hepatitis B core antigen (HBcAg) in human serum or plasma (heparinized, sodium citrate or EDTA), as an aid in the determination of a prior immune status to the hepatitis B virus. Catalog Number: L2KHC2 (200 tests) L2KHC6 (600 tests) Test Code: abc Color: Light Gray Summary and Explanation Hepatitis B virus (HBV) is the sole human pathogen in the family of hepatitisassociated DNA viruses, and is found world-wide. Distribution of HBV infection will vary among geographical areas and population groups. Transmission of the virus is due to parenteral contact, through the exchange of blood or blood products, sexual contact, and perinatal spread from mother to newborn. 1,2 Clinical manifestations range from mild asymptomatic infections to severe fulminant hepatitis. 1,2,3 Over 90% of infected adults will have an acute selflimiting infection, 1 with jaundice and abnormal liver function. Recovery occurs without any chronic sequelae. 1,2 Chronic liver disease, a condition in which infection persists for more than six months, a known sequela of a hepatitis B infection, is usually progressive. 1,2 The risk of developing the chronic carrier state is more likely to follow infection acquired in childhood than as an adult. 4,5 In chronic HBV carriers, there is no evidence of continued hepatic damage, 1,2 however, the infection persists and the carrier maintains the ability to transmit the virus. 2 Availability of recombinant HBV vaccines, and the recommendation of universal immunization for infants and other highrisk persons has aided in the prevention of HBV infections. In addition, treatment with alpha-interferon to relieve symptoms is available. Results have shown positive response to treatment in 40 50% of selected individuals with chronic active hepatitis B. 4,5 Classification of a hepatitis B infection requires the identification of several serological markers expressed during three phases (incubation, acute and convalescent) of the infection. The first marker to appear during the incubation phase is HBsAg, and indicates an ongoing infection with HBV. 1,2,4 Anti-HBc appears shortly after the appearance of HBsAg and peaks during the acute phase prior to the appearance of anti-hbs. IgM antibody to the core antigen will decline in uncomplicated acute infection, whereas IgG antibody will persist for years. 4,5 Anti- HBc is also elevated in chronic HBV infections. 4 Presence of anti-hbc indicates an ongoing or previous HBV infection. When used in conjunction with tests for other HBV serological markers, diagnosis of viral hepatitis can be achieved. Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Anti-HBc is a solidphase, chemiluminescent two-step immunoassay. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, 2 IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, )

3 including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Anti-HBc has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 50 µl serum or plasma (heparinized, sodium citrate or EDTA). Storage: 3 days at 2 8 C. 6 For longer storage: at 20 C. 7 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. The Anti-HBc Adjustor, Anti-HBc Low Positive Control and Anti-HBc Positive Control contain HBcAg which has been inactivated by proven, documented methods. However, always handle all controls as if capable of transmitting infectious agents. The concentration of anti-hbc in a given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Anti-HBc EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Anti-HBc Bead Pack (L2HC12) With barcode. 200 beads coated with purified recombinant HBcAg. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KHC2: 1 pack. L2KHC6: 3 packs. Anti-HBc Reagent Wedge (L2HCA2) With barcode ml of a protein-based buffer, with preservative ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to purified monoclonal murine anti-hbc in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KHC2: 1 wedge. L2KHC6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations without damaging the barcode on the main label. Remove the foil seal from the top of the Reagent Wedge, and snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Anti-HBc Adjustor (LHCR) 2 ml human serum reactive to HBcAg in a buffer, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KHC2: 1 vial. L2KHC6: 2 vials. Anti-HBc Controls (LHCC1, LHCC2, LHCC3) Three vials containing 4 ml each. LHCC1 (Negative Control): human serum nonreactive to HBcAg, with preservative. LHCC2, LHCC3 (Low Positive Control, Positive Control): human serum reactive to HBcAg, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KHC2: 1 set. L2KHC6: 2 sets. For the current control ratio ranges, please refer to the Control insert. Aliquot Labels with barcodes are supplied with the kit, for use with the Adjustors and Controls. Before use, place the appropriate Aliquot Labels on test tubes, so the barcodes can be read by the barcode reader on the IMMULITE IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, ) 3

4 Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) Also Required Distilled or deionized water; test tubes. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, adjustment, assay and quality control procedures. Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: The controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor assay performance. For the current control ratio ranges, please refer to the Control insert. Calculation of Cutoff and CO/S Ratio: The Master Cutoff of the assay was determined from representative samples to achieve optimal sensitivity and specificity for the assay. The cutoff is set equal to the average counts per second of the Adjustor (from the most recent adjustment) multiplied by Curve Parameter 1. (See the Low Adjustor CPS and Curve Parameter 1 fields in the IMMULITE 2000 Kit Information screen, which can be accessed from the menu via Data Entry : Kit Entry.) Calculation of a cutoff/signal (co/s) ratio is done by using the following formula: CO/S Ratio = Mean Adjustor cps P1 Sample or Control cps Calculation and reporting of qualitative (reactive/nonreactive/indeterminate) and co/s ratio results are handled automatically by the IMMULITE The result for a sample is indeterminate if the counts per second for that sample fall within ±15% of the cutoff. The result is reactive if the sample's counts are below the indeterminate range, and nonreactive if above this range. Interpretation of Results A result of "Reactive" (co/s ratio of 1.15) indicates that the patient sample is reactive and that anti-hbc antibodies were detected in the sample, which is indicative of either ongoing or previous infection. A result of Nonreactive (co/s ratio of < 0.85) indicates that the patient sample is nonreactive and that anti- HBc antibodies were not detected in the sample. Any result of "Indeterminate" (co/s ratio between 0.85 and < 1.15) should be retested. Samples which still test as "Indeterminate" should be tested by an alternate method, or a second sample should be taken if possible within a reasonable period of time (e.g., one week). The results reported by the laboratory to the physician should include: The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Anti-HBc EIA. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably. Expected Values Individuals acutely infected with the hepatitis B virus will exhibit anti-hbc between two weeks and four months after exposure, usually through the course of clinical illness. 4 Antibody levels persist for life. Limitations The measurement of Anti-HBc may be affected by the presence of elevated levels of human albumin. The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical and vaccination history, symptomology and other laboratory findings. A nonreactive result does not indicate that the patient was not infected with HBV. The patient sample should be tested for the presence of other serological markers, such as HBsAg or anti-hbc IgM. 4 IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, )

5 Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed as a cutoff-tosignal ratio. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Bilirubin: Presence of unconjugated bilirubin in concentrations up to 400 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 504 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: Blood was collected from 57 laboratory volunteers into plain, heparinized, sodium citrate and EDTA vacutainer tubes, spiked with anti- HBc and then assayed by the IMMULITE 2000 Anti-HBc procedure. Results are expressed as a cutoff-to-signal ratio. (Heparin) = 0.98 (Serum) r = 0.99 (NaCitrate) = 1.07 (Serum) r = 0.94 (EDTA) = 0.97 (Serum) r = 0.99 Means: (Serum) (Heparin) (NaCitrate) (EDTA) Method Comparison 1: The assay was compared to IMMULITE Anti-HBc on 139 patient samples. Nonreac IML Reac Reactive 78 0 Nonreactive Agreement: 99.3% IMMULITE 2000 Relative Sensitivity Relative Specificity % 100% Method Comparison 2: The IMMULITE 2000 Anti-HBc procedure was compared to the Elecsys Anti-HBc immunoassay on 2,219 samples, consisting of seroconversion panels, potentially crossreactive samples, samples from patients with acute, chronic and resolved HBV infection, from blood donors, hospitalized patients, and routine samples. The table below presents the results of this study. No. of samples anti-hbc reactive anti-hbc nonreactive Sensitivity Specificity PPV NPV Elecsys Anti-HBc IMMULITE 2000 Anti-HBc Reactive Nonreactive 98.9% 99.9% 99.6% 99.8% 3 1,953 Reactive Nonreactive 0 1,944 References 100% 99.5% 96.7% 100% 1) Locarnini SA, Gust ID. Hepadnaviridae: hepatitis B virus and the delta virus. In: Balows A, et al, editors. Laboratory diagnosis of infectious diseases: principles and practices. New York: Springer-Verlag, 1988: ) Follett EAC. Diagnosis of hepatitis B infection. In: Young H, McMillan A, editors. Immunological diagnosis of sexually transmitted diseases. New York: Marcel Dekker, 1988: ) Hollinger FB, Dienstag JL. Hepatitis B and D viruses. In: Lennette EH, et al, editors. Manual of clinical IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, ) 5

6 microbiology. 6th ed. Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1995: ) Nowicki MJ, Balistreri WF. Hepatitis A to E: building up the alphabet. Contemporary Peds 1992: ) Zuckerman AJ, et al. Hepatitis B virus and hepatitis D virus. In: Principles and practice of clinical virology. 2nd ed. New York: John Wiley & Sons, 1992: ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995: ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1995: Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ratio) Intraassay 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Με την ίδια μέθοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Česky IMMULITE 2000 Anti-HBc Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení přítomnosti celkových protilátek proti dřeňovému antigenu viru hepatitidy B (HBcAg) v lidském séru nebo plazmě (heparinizované, s citrátem sodným nebo EDTA), jakožto pomůcky při stanovení předcházejícího imunitního stavu vůči viru hepatitidy B. Katalogové číslo: L2KHC2 (200 stanovení) L2KHC6 (600 stanovení) Kód metody: abc Barva: světle šedá Shrnutí a vysvětlení Virus hepatitidy B (HBV) je jediný lidský patogen v rodině hepatických DNA virů a je rozšířen celosvětově. Rozšíření HBV infekce se liší v závislosti na zeměpisné oblasti a skupině obyvatelstva. Přenos viru se děje parenterálně, krevními deriváty a krví, pohlavním stykem a perinatálně z matky na novorozence. 1,2 Klinické projevy se mohou různit od asymptomatické infekce po závažnou fulminantní hepatitidu. 1,2,3 Přes 90% infikovaných dospělých má akutní infekci 1 se žloutenkou a poruchami jaterní funkce. Uzdravení nastane bez dalších chronických následků. 1,2 Chronické onemocnění jater, kdy infekce přetrvává více než šest měsíců jako známý důsledek infekce virem hepatitidy B, bývá obvykle progresivní. 1,2 Riziko vývoje chronického stádia je větší u onemocnění v dětství než v dospělosti. 4,5 U chronických nosičů HBV nepokračuje poškození jater, 1,2 ale infekce přetrvává a je riziko přenosu viru. 2 Prevenci HBV infekcí napomáhá dostupnost rekombinantních HBV očkovacích látek a doporučení plošného očkování dětí a rizikových skupin obyvatelstva. Kromě toho je možná léčba příznaků onemocnění pomocí alfa interferonu. Táto léčba byla úspěšná u 40 50% vybraných jedinců s chronickým aktivním onemocněním hepatitidou B. 4,5 Klasifikace hepatitidy B vyžaduje identifikaci několika serologických markerů ve třech fázích (inkubační, akutní a rekonvalescentní) infekce. Prvním je HBsAg, jehož přítomnost se objevuje během inkubační fáze a indikuje chronické nosičství HBV. 1,2,4 Anti-HBc se objevuje krátce po HBsAg a dosahuje maxima během akutní fáze před nástupem anti- HBs. IgM protilátky proti dřeňovému antigenu vymizí po odeznění nekomplikované akutní infekce, ale IgG 6 IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, )

7 protilátky přetrvávají léta. 4,5 Anti-HBc protilátky jsou zvýšené rovněž u chronické infekce HBV. 4 Přítomnost protilátek anti-hbc indikuje přetrvávající nebo dřívější HBV infekci. Při použití s průkazy ostatních HBV serologických markerů je možné stanovit diagnózu virové hepatitidy. Princip Stanovení protilátek Anti-HBc na IMMULITE 2000 je založeno na chemiluminiscenční sekvenční dvoukrokové imunochemické reakci v pevné fázi. Inkubační cykly: 2 30 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Pro některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Anti- HBc na přístroji IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části Alternativní typ vzorků. Potřebný objem vzorku: 50 μl séra nebo plazmy (heparinizované, s citrátem sodným nebo EDTA). Skladování: 3 dny při 2 8 C. 6 Delší skladování při 20 C. 7 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Anti-HBc kalibrátor, Anti-HBc mírně pozitivní kontrola a Anti-HBc pozitivní kontrola obsahují HBcAg deaktivované použitím ověřených a doložených postupů. Se všemi kontrolami nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Koncentrace anti-hbc v daném vzorku stanovené pomocí testů od různých výrobců se mohou lišit s ohledem na rozdíly v použité metodě stanovení a specificitu reagencií. Proto by výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři měl obsahovat sdělení: "Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení Anti-HBc EIA na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat." Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici Anti-HBc zásobník s kuličkami (L2HC12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených purifikovaným IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, ) 7

8 rekombinantním antigenem HBcAg. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KHC2: 1 balení. L2KHC6: 3 balení. Anti-HBc reagencie (L2HCA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml pufrového roztoku na bázi bílkovin, s konzervačním prostředkem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s purifikovanou monoklonální myší protilátkou proti HBc v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KHC2: 1 nádobka. L2KHC6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Anti-HBc kalibrátor (LHCR) Ampulka (2 ml) obsahující lidské sérum reaktivní k HBcAg v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C, nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KHC2: 1 ampulka. L2KHC6: 2 ampulky. Anti-HBc kontroly (LHCC1, LHCC2, LHCC3) Tři ampulky, každá obsahující 4 ml jedné kontroly. LHCC1 (negativní kontrola): lidské sérum nereaktivní k HBcAg, s konzervačním prostředkem. LHCC2, LHCC3 (mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): lidské sérum reaktivní k HBcAg, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C, nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KHC2: 1 sada. L2KHC6: 2 sady. Aktuální rozmezí kontrolního ukazatele najdete na informačním letáčku přiloženém ke kontrole. Alikvotní štítky s čárovými kódy jsou součásti dodané soupravy a jsou určené na kalibrátory a kontroly. Před použitím nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky tak, aby zabudovaný snímač na analyzátorech IMMULITE 2000 mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Kontroly dodané se soupravou jsou určeny ke kontrole funkční způsobilosti stanovení. Aktuální rozmezí kontrolního ukazatele najdete na informačním letáčku přiloženém ke kontrole. Výpočet cut-off hodnoty a poměru CO/S: Hlavní cut-off hodnota tohoto testu byla určena z reprezentativních vzorků tak, aby bylo dosaženo optimální citlivosti a specificity metody stanovení. Cut-off hodnota je rovná průměrnému cps kalibrátoru (od poslední adjustace) vynásobenému parametrem kalibrační křivky 1 (Curve Parameter 1). (Viz políčka Low Adjustor CPS (cps nízkého kalibrátoru) a Curve Parameter 1 (parametr kalibrační křivky 1) na obrazovce přístroje IMMULITE Přístup je možný z nabídky přes Data Entry: Kit Entry.) K výpočtu poměru hodnoty cut-off /signál (co/s) se používá následující vztah: CO/S = Střední hodnota cps kalibrátoru P1 Cps vzorku nebo kontroly Výpočet poměru co/s a hlášení kvalitativních výsledků (udávaných ve tvaru reaktivní/nereaktivní/neurčitý) 8 IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, )

9 provádí analyzátor IMMULITE 2000 automaticky. Výsledek pro vzorek je neurčitý, když je příslušné cps v rozmezí ±15% cut-off hodnoty. Výsledek je reaktivní, když je cps pro vzorek pod neurčitým rozmezím a nereaktivní, když je nad tímto rozmezím. Vyhodnocení výsledků Výsledek "Reaktivní" (poměr co/s 1,15) značí, že vzorek pacienta je reaktivní a že protilátky anti-hbc byly ve vzorku přítomné, což svědčí o buď přetrvávající, nebo prodělané infekci. Výsledek Nereaktivní (poměr co/s < 0,85) značí, že vzorek pacienta je nereaktivitní a že protilátky anti-hbc nebyly ve vzorku zjištěny. Stanovení vzorků s výsledkem "Neurčitý" (poměr co/s mezi 0,85 a < 1,15) je třeba opakovat. Pokud je výsledek opět "Neurčitý", je třeba použít jinou metodu, nebo, pokud je to možné, za přiměřenou dobu (např. jeden týden) odebrat další vzorek. Výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři, by měl obsahovat sdělení: "Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení Anti-HBc EIA na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat." Očekávané hodnoty Anti-HBc se u jedinců akutně infikovaných virem hepatitidy B se objeví dva týdny až čtyři měsíce po kontaktu s nákazou, obvykle během průběhu klinické nemoci. 4 Množství protilátek přetrvává po celý život. Omezení Na stanovení Anti-HBc může mít vliv zvýšená přítomnost lidského albuminu. Výsledky stanovení je třeba posuzovat s ohledem na klinickou anamnézu a dosavadní očkování pacienta, symptomatiku a ostatní laboratorní nálezy. Nereaktivní výsledek neznamená, že pacient nebyl nakažen HBV. Vzorek pacienta je třeba otestovat, zda neobsahuje jiné serologické markery, jako například HBsAg nebo anti-hbc IgM. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají jako poměr cut-off / signál. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových separátorů, nebo přísad podporujících srážlivost.) Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva cykly za den, celkem 40 cyklů a 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Bilirubin: Přítomnost nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 400 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 504 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: Krev byla odebrána 57 dobrovolníkům do vacutainer zkumavek obyčejných, heparinizovaných, s citrátem sodným a EDTA, s přídavkem anti-hbc, a následně testovaná metodou Anti-HBc na analyzátorech IMMULITE 2000 Výsledky se udávají jako poměr hodnoty cut-off a signálu. IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, ) 9

10 (Heparin) = 0,98 (Sérum) + 0,018 r = 0,99 (Citrát sodný) = 1,07 (Sérum) + 0,027 r = 0,94 (EDTA) = 0,97 (Sérum) + 0,031 r = 0,99 Střední hodnoty: 0,255 (Sérum) 0,269 (Heparin) 0,301 (Citrát sodný) 0,280 (EDTA) Srovnání metody 1: Stanovení bylo porovnáno s testem Anti-HBc na analyzátoru IMMULITE na 139 vzorcích pacientů. IMMULITE 2000 IML Reaktivní Nereaktivní Reaktivní 78 0 Nereaktivní 1 60 Shoda: 99,3% Relativní citlivost Relativní specificita 98,7% 100% Srovnání metody 2: Metoda stanovení Anti-HBc na analyzátorech IMMULITE 2000 byla porovnána s imunologickým stanovením Elecsys Anti- HBc na vzorcích, mezi kterými byly sérokonverzní komplety, vzorky s potenciálem zkřížené reaktivity, vzorky od pacientů s akutním, chronickým a vyléčeným HBV onemocněním, od dárců krve a hospitalizovaných pacientů a běžné vzorky. Výsledky tohoto srovnání jsou uvedené v následující tabulce. Počet vzorků anti-hbc anti-hbc nereaktivní Citlivost Specificita PPV reaktivní NPV IMMULITE 2000 Anti-HBc Reaktivní Nereaktiv 98,9% 99,9% 99,6% 99,8% ní Elecsys Anti-HBc Reaktivní Nereaktiv ní % 99,5% 96,7% 100% Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Anti-HBc Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποιοτικό προσδιορισμό των ολικών αντισωμάτων κατά του πυρηνικού αντιγόνου της ηπατίτιδας B (HBcAg) σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα (ηπαρινισμένο, κιτρικό νάτριο ή EDTA), ως βοήθημα στον εντοπισμό υφιστάμενης ανοσίας στον ιό της ηπατίτιδας Β. Αριθμός καταλόγου: L2KHC2 (200 αναλύσεις) L2KHC6 (600 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: abc Χρώμα: Ανοικτό Γκρι Περίληψη και επεξήγηση Ο ιός της ηπατίτιδας Β (HBV) είναι ο μοναδικός ανθρώπινος παθογόνος παράγοντας στην ομάδα των ιών DNA που συνδέονται με την ηπατίτιδα και συναντάται σε όλο τον κόσμο. Η κατανομή της μόλυνσης από HBV ποικίλει ανά γεωγραφική περιοχή και πληθυσμιακή ομάδα. Η μετάδοση του ιού γίνεται παρεντερικά, μέσω της ανταλλαγής αίματος ή προϊόντων αίματος, τη σεξουαλική επαφή και την περιγεννητική μετάδοση από τη μητέρα στο νεογνό. 1,2 Οι κλινικές εκδηλώσεις ποικίλουν από ήπιες ασυμπτωματικές λοιμώξεις έως σοβαρή κεραυνοβόλο ηπατίδιδα. 1,2,3 Ποσοστό άνω του 90% των προσβεβλημένων ενηλίκων παρουσιάζουν οξεία αυτοπεριοριζόμενη λοίμωξη 1 με ίκτερο και μη φυσιολογική ηπατική λειτουργία. Η ανάρρωση δεν συνοδεύεται από χρόνιες συνέπειες. 1,2 Η χρόνια ηπατική νόσος, μια κατάσταση όπου η λοίμωξη επιμένει για διάστημα μεγαλύτερο των έξι μηνών και αποτελεί ένα γνωστό επακόλουθο της ηπατίτιδας Β, είναι συνήθως προοδευτική. 1,2 Ο κίνδυνος μετατροπής του ατόμου σε χρόνιο φορέα είναι μεγαλύτερος σε περίπτωση μόλυνσης κατά την παιδική ηλικία και μικρότερος στους ενήλικες. 4,5 Μεταξύ των 10 IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, )

11 χρόνιων φορέων HBV, δεν υπάρχουν ενδείξεις συνεχιζόμενης ηπατικής βλάβης, 1,2 ωστόσο η μόλυνση παραμένει και ο φορέας μπορεί να μεταδόσει τον ιό. 2 Η διαθεσιμότητα των ανασυνδυασμένων εμβολίων κατά του HBV και η σύσταση για γενική ανοσοποίηση των νεογνών και άλλων ατόμων υψηλού κινδύνου αποσκοπεί στην πρόληψη των μολύνσεων από HBV. Επιπλέον, διαθέσιμη είναι η θεραπεία με άλφα-ιντερφερόνη για την ανακούφιση των συμπτωμάτων. Τα αποτελέσματα έχουν δείξει θετική αντίδραση στη θεραπεία σε ποσοστό 40 50% τωμ επιλεγμένων ατόμων με χρόνια ενεργή ηπατίτιδα B. 4,5 Η κατηγοριοποίηση της μόλυνσης από ηπατίτιδα Β απαιτεί τον προσδιορισμό διαφόρων ορολογικών δεικτών, οι οποίοι εκφράζονται κατά τις τρεις φάσεις (επώαση, οξεία και ανάρρωση) της μόλυνσης. Ο πρώτος δείκτης που εμφανίζεται κατά τη φάση επώασης είναι ο HbsAg και υποδηλώνει τη συνεχιζόμενη μόλυνση με HBV. 1,2,4 Ο δείκτης αντί-hbc εμφανίζεται λίγο μετά την εμφάνιση του HBsAg και κορυφώνεται κατά την οξεία φάση, πριν την εμφάνιση του αντί-hbs. Το αντίσωμα IgM έναντι του πυρηνικού αντιγόνου μειώνεται κατά την χωρίς επιπλοκές οξεία μόλυνση, ενώ το αντίσωμα IgG παραμένει επί χρόνια. 4,5 Το αντί-hbc είναι επίσης αυξημένο στις περιπτώσεις χρόνιας μόλυνσης με HBV. 4 Η παρουσία του αντί-hbc υποδηλώνει μια συνεχιζόμενη ή προηγούμενη μόλυνση από HBV. Σε συνδυασμό με δοκιμές για άλλους ορολογικούς δείκτες HBV, μπορεί να δώσει τη διάγνωση ιογενούς ηπατίτιδας. Αρχή της διαδικασίας Το IMMULITE 2000 Anti-HBc είναι μία στερεής φάσης, χημειοφωταυγής ανοσοεξέταση σε δύο φάσεις. Κύκλοι επώασης: 2 x 30 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντρηση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Το IMMULITE 2000 Anti- HBc δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 50 µl ορός ή πλασμα (ηπαρινισμένο, κιτρικό νάτριο ή EDTA). Φύλαξη: 3 ημέρες στους 2 8 C. 6 Για παρατεταμένη φύλαξη: στους 20 C. 7 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, ) 11

12 εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Ο ρυθμιστής αντί-hbc, ο χαμηλός θετικός έλεγχος αντί-hbc και ο θετικός έλεγχος αντί-hbc περιέχουν HBcAg που έχει απενεργοποιηθεί με ελεγμένες, τεκμηριωμένες μεθόδους. Ωστόσο, μεταχειρίζεστε πάντα όλους τους ελέγχους σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Η συγκέντρωση αντί-hbc σε ένα δεδομένο δείγμα που προσδιορίζεται με μεθόδους διαφόρων κατασκευαστών μπορεί να ποικίλει εξαιτίας των διαφορών των αναλυτικών μεθόδων και της ακρίβειας των αντιδραστηρίων. Για τον λόγο αυτό, τα αποτελέσματα που εκδίδονται στους κλινικούς γιατρούς από το εργαστήριο θα πρέπει να αναφέρουν ότι: "Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν από το IMMULITE 2000 Anti-HBc EIA. Aποτελέσματα εξετάσεων άλλων κατασκευαστών που χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν κατ εναλλαγή." Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων Αντί-HBc (L2HC12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με εμπλουτισμένο ανασυνδυασμένο HBcAg. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KHC2: 1 συσκευασία. L2KHC6: 3 συσκευασίες. Δοχείο αντιδραστηρίου Αντί-HBc (L2HCA2) Με ραβδοκώδικα ml ρυθμιστικού πρωτεΐνης, με συντηρητικό. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένης σε εμπλουτισμένο μονοκλωνικό αντί-hbc ποντικού, σε ρυθμιστικό διάλυμα,με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KHC2: 1 δοχείο. L2KHC6: 3 δοχεία. Πριν την χρήση, σχίστε το επάνω μέρος της ετικέτας στο σημείο διάτρησης χωρίς να καταστρέψετε τον ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου αντιδραστηρίου και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστής αντί-hbc (LHCR) 2 ml ανθρώπινου ορού, θετικού στο HBcAg σε ρυθμιστικό, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KHC2: 1 φιαλίδιο. L2KHC6: 2 φιαλίδια. Οροί ελέγχου αντί-hbc (LHCC1, LHCC2, LHCC3) Τρία φιαλίδια των 4 ml έκαστο. LHCC1 (Αρνητικός έλεγχος): ανθρώπινος ορός, αρνητικός στο HBcAg, με συντηρητικό. LHCC2, LHCC3 (χαμηλός θετικός έλεγχος, θετικός έλεγχος): ανθρώπινος ορός, θετικός στο HBcAg, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KHC2: 1 σετ. L2KHC6: 2 σετ. Για τις πρόσφατες τιμές των ορών ελέγχου βλ. το αντίστοιχο ένθετο. Το kit περιλαμβάνει κατάλληλες ετικέτες με ραβδοκώδικα, για χρήση με τους ρυθμιστές και τους ελέγχους. Πριν τη χρήση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το IMMULITE Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) Χρειάζονται επίσης: Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό, σωληνάρια. Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, )

13 Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου. Χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Οι οροί ελέγχου που παρέχονται με το kit θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως υλικό ποιοτικού ελέγχου για την παρακολούθηση της επίδοσης της εξέτασης. Για τις πρόσφατες τιμές των ορών ελέγχου βλ. το αντίστοιχο ένθετο. Υπολογισμός του Cutοff και της αναλογίας CO/S: Το Κύριο Cutoff της εξέτασης υπολογίστηκε από αντιπροσωπευτικά δείγματα προκειμένου να επιτευχθεί η μέγιστη δυνατή ευαισθησία και ακρίβεια για την εξέταση. Το cutoff ορίστηκε ως ίσο με το μέσο όρο των χτύπων ανά δευτερόλεπτο του ρυθμιστή (από την πιο πρόσφατη ρύθμιση) πολλαπλασιασμένο με τη παράμετρο 1 της καμπύλης (Curve Parameter 1). (Βλ. τα πεδία "Low Adjustor CPS" και "Curve Parameter 1" στην οθόνη πληροφοριών του IMMULITE 2000 Kit, η οποία είναι προσπελάσιμη από το Data Entry: Kit Entry.) Ο υπολογισμός της αναλογίας cutoff/σήματος (co/s) γίνεται με τον παρακάτω τύπο: Αναλογία CO/S = Μ.Ο. Ρυθμιστή cps P1 Δείγμα ή Έλεγχος cps Ο υπολογισμός και η αναφορά των ποιοτικών, (θετικών / αρνητικών / ενδιάμεσων) αποτελεσμάτων και η αναλογία co/s γίνονται αυτόματα από το IMMULITE Το αποτέλεσμα ενός δείγματος αναφέρεται ως Indeterminate (ενδιάμεσο), εάν οι χτύποι ανά δευτερόλεπτο για το συγκεκριμένο δείγμα βρίσκονται εντός ±15% από το cutoff. Το αποτέλεσμα αναφέρεται ως reactive (θετικό) αν οι χτύποι ανά δευτερόλεπτο για το συγκεκριμένο δείγμα βρίσκονται κάτω από το «ενδιάμεσο» εύρος, και Nonreactive (αρνητικό) εάν βρίσκονται πάνω από αυτό. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Ένα θετικό αποτέλεσμα (Reactive - αναλογία co/s 1,15) υποδηλώνει ότι το δείγμα του ασθενούς είναι θετικό και ότι στο δείγμα εντοπίστηκαν αντιστώματα αντί-hbc, γεγονός ενδεικτικό συνεχιζόμενης ή προηγούμενης μόλυνσης. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα (Nonreactive - αναλογία co/s < 0,85) υποδηλώνει ότι στο δείγμα του ασθενούς δεν εντοπίστηκαν αντισώματα αντι-hbc. Οποιοδήποτε ενδιάμεσο αποτέλεσμα (Indeterminate - αναλογία co/s μεταξύ 0,85 και <1,15) θα πρέπει να επανεξεταστεί. Δείγματα τα οποία εξακολουθούν να είναι "Indeterminate" θα πρέπει να εξετάζονται από μία εναλλακτική μέθοδο, ή αν είναι δυνατό ένα δεύτερο δείγμα να λαμβάνεται μέσα σε ένα λογικό χρονικό πλαίσιο (π.χ. μία εβδομάδα). Τα αποτελέσματα που λαμβάνει ο κλινικός γιατρός από το εργαστήριο θα πρέπει να περιέχουν την εξής επισήμανση: "Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν από το IMMULITE 2000 Anti-HBc EIA. Τιμές που λαμβάνονται από εξετάσεις άλλων κατασκευαστών δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν κατ εναλλαγή." Αναμενόμενες τιμές Τα άτομα που παρουσιάζουν οξεία μόλυνση από τον ιό της ηπατίτιδας B θα εμφανίσουν αντί-hbc σε διάστημα δύο εβδομάδων έως τεσσάρων μηνών από την έκθεση, συνήθως στη διάρκεια εξέλιξης της κλινικής νόσου. 4 Τα επίπεδα του αντισώματος παραμένουν δια βίου. Περιορισμοί Η μέτρηση του αντί-hbc μπορεί να επηρεαστεί από την παρουσία αυξημένης ανθρώπινης αλβουμίνης. Τα αποτελέσματα της εξέτασης θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη στα πλαίσια του κλινικού ιστορικού του ασθενούς, του ιστορικού εμβολιασμών, της συμπτωματολογίας και άλλων εργαστηριακών ευρημάτων. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν υποδηλώνει απουσία μόλυνσης από τον HBV. Το δείγμα του ασθενούς θα πρέπει IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, ) 13

14 να ελεγχθεί για παρουσία άλλων ορολογικών δεικτών, π.χ. HBsAg ή αντί- HBc IgM. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης. Παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως αναλογία cutoff/σήματος. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ) Χολερυθρίνη: Η παρουσία έμμεσης χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 400 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 504 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί τύποι δείγματος: Συλλέχθηκε αίμα από 57 εθελοντές εργαστηρίου σε απλούς ηπαρινισμένους, κιτρικού νατρίου και EDTA δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες, εμπλουτίστηκε με αντί-hbc και έπειτα εξετάστηκε με τη μέθοδο IMMULITE 2000 Αντί-HBc. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως αναλογία cutoff/σήματος. (Ηπαρίνη) = 0,99 (ορός) + 0,018 r = 0,99 (Κιτρικό νάτριο) = 1,07 (ορός) + 0,027 r = 0,94 (EDTA) = 0,97 (ορός) + 0,031 r = 0,99 Μέσοι όροι: 0,255 (ορός) 0,269 (ηπαρίνη) 0,301 (κιτρικό νάτριο) 0,280 (EDTA) Σύγκριση της Μεθόδου 1: Η μέθοδος συγκρίθηκε με την αντίστοιχη μέθοδο IMMULITE Anti-HBc σε 139 δείγματα ασθενών. IML Θετ. Αρν. Θετικά 78 0 Αρνητικά 1 60 Συμφωνία: 99,3% IMMULITE 2000 Σχετική ευαισθησία Σχετική Ειδικότητα 98,7% 100% Σύγκριση της Μεθόδου 2: Η μέθοδος IMMULITE 2000 Anti-HBc συγκρίθηκε με την ανοσοεξέταση Elecsys Anti-HBc σε δείγματα, αποτελούμενα από οροθετικές ομάδες, δείγματα ενδεχόμενης διασταυρούμενης αντίδρασης, δείγματα ασθενών με οξεία, χρόνια και θεραπευμένη μόλυνση από HBV από αιμοδότες, νοσηλευόμενους ασθενείς και τακτικές εξετάσεις. Ο πίνακας παρακάτω περιέχει τα αποτελέσματα της μελέτης. 14 IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, )

15 Αρ.δειγμάτων θετικά αρνητικά αντί-hbc αντί-hbc Ευαισθ. Ειδικότ. PPV NPV IMMULITE 2000 Anti-HBc Θετικά Αρνητικά Elecsys Anti-HBc Θετικά Αρνητικά ,9% 99,9% 99,6% 99,8% 100% 99,5% 96,7% 100% Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Anty-HBc Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do jakościowego oznaczania wszystkich przeciwciał specyficznych dla antygenu rdzeniowego (HBcAg) wirusa zapalenia wątroby typu B w ludzkiej surowicy i osoczu (heparynowym, cytrynianowym oraz EDTA), przydatny w okreslaniu poziomu serokonwersji w stosunku do HBV. Numer katalogowy: L2KHC2 (200 testów) L2KHC6 (600 testów) Kod testów: abc Kolor: Jasno szary Wprowadzenie Wirus zapalenia wątroby typu B (HBV) jest wyłącznie ludzkim patogenem o zasięgu światowym, należącym do grupy wirusów DNA o tropizmie do wątroby. Częstość występowania zakażeń HBV różni się w zależności od położenia geograficznego i populacji. Przenoszenie wirusa zachodzi pozajelitowo poprzez krew i produkty krwiopochodne, na drodze kontaktów płciowych i w okresie okołoporodowym od matki do noworodka. 1,2 W obrazie klinicznym spotyka się infekcje bezobjawowe z jednej strony i ciężkie, piorunujące zapalenia wątroby z drugiej. 1,2,3 Ponad 90% zakażonych dorosłych przechodzi ostrą, ustępująca samoistnie infekcję 1, której towarzyszą żółtaczka i dysfunkcje wątroby. U ozdrowieńców nie obserwuje się chronicznych następstw. 1,2 Chroniczna choroba wątroby, stan, w którym infekcja utrzymuje się ponad 6 miesięcy - znane następstwo infekcji HBV, jest zwykle postępujący. 1,2 Ryzyko wystąpienia stanu chronicznego nosicielstwa jest większe w przypadku zakażeń przebytych w dzieciństwie niż w wieku dorosłym. 4,5 U chronicznych nosicieli HBV nie stwierdza się objawów trwałego uszkodzenia wątroby 1,2 mimo trwania infekcji i zdolności nosiciela do przenoszenia wirusa. 2 Dostępność szczepionek rekombinantowych, zalecenia szczepienia całej populacji niemowląt i osób z grupy wysokiego ryzyka są istotne w profilaktyce zakażeń HBV. Po za tym, możliwe jest leczenie alfa-interferonem, łagodzące objawy i dające pozytywne wyniki u 40 50% osób z chroniczną, aktywną, formą zapalenia wątroby typu B. 4,5 Klasyfikacja zakażenia HBV opiera się na identyfikacji szeregu markerów w surowicy ulegających ekspresji w przebiegu trzech faz choroby (wylegania, ostrej i zdrowienia). Pierwszym markerem stwierdzanym w surowicy w zapaleniu wątroby typu B jest antygen powierzchniowy HbsAg. 1,2,4 Jego obecność wskazuje na postępującą infekcję i jest stwierdzany w ostrej fazie choroby. Anty-HBc pojawia się krótko po HBsAg i osiąga szczyt w trakcie ostrej fazy przed pojawieniem się anty-hbs. Przeciwciało IgM specyficzne w stosunku do antygenu rdzeniowego zanika następnie w przebiegu nieskomplikowanej ostrej infekcji, natomiast przeciwciało w klasie IgG może się utrzymywać latami. 4,5 Podniesiony poziom anty-hbc utrzymuje się w trakcie chronicznej infekcji HBV. 4 Obecność anty-hbc wskazuje na przebiegającą infekcję HBV lub infekcję przebytą w przeszłości. Ostatecznego rozpoznania zapalenia wątroby można dokonać w oparciu o łączne oznaczenie szeregu markerów serologicznych HBV. IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, ) 15

16 Zasada testu IMMULITE 2000 Anty-HBc jest dwuetapowym, chemiluminescencyjnym testem fazy stałej. Czas inkubacji: 2 30 minut. Preparatyka próbek Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Stosowane przy pobieraniu krwi probówki różnych producentów mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotny jest materiał i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 Anty-HBc nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: Oznaczenie wymaga 50 µl surowicy lub osocza (heparynowego, cytrynianowego lub EDTA). Przechowywanie: 3 dni w 2 8 C, 6 dłużej w 20 C. 7 Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty- HCV. Azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl jest dodawany jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Kalibrator Anty-HBc i kontrole: niskododatnia i dodatnia zawierają HBcAg inaktywowany sprawdzonymi i udokumentowanymi metodami. Jednakże w trakcie pracy z kontrolami należy zawsze zachowywać środki ostrożności obowiązujące w pracy z materiałem zakaźnym. Poziom anty-hbc oznaczany w danej próbce przy użyciu testów różnych producentów mogą się różnić, w zależności od metody i swoistości reagentów. Wynik badania wysyłany do lekarza kierującego powinien być zaopatrzony w komentarz: Poniższy wynik otrzymano stosując immunoenzymatyczny test (EIA) IMMULITE 2000 anty-hbc. Nie należy poddawać interpretacji wyników uzyskanych u danej osoby wymiennie stosowanymi testami różnych producentów. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy Zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Anti-HBc Pojemnik z Kulkami (L2HC12) Z kodem kreskowym. 200 kulek spłaszczonych oczyszczonym rekombinantowym HBcAg. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KHC2: 1 pojemnik. L2KHC6: 3 pojemniki. Anti-HBc Klin odczynnikowy (L2HCA2) Z kodem kreskowym. 11,5 ml buforowanej matrycy białkowej, z konserwantem. 11,5 ml alkalicznej 16 IMMULITE 2000 Anti-HBc (PIEL2KHC-3CE {31CE}, )