Εργαστηριακή Διαγνωστική του ΕΝΥ

Transcript

1 Εργαστηριακή Διαγνωστική του ΕΝΥ ΕΝΥ αυχενική θωρακική ισχιακή Χοριοειδές πλέγμα Χρυσούλα Νικολάου

2 Εγκεφαλονωτιαίο υγρό ΤΟ ΕΝΥ είναι διαυγές, άχρωμο υγρό Βρίσκεται στον υπαραχνοειδή χώρο, στο σύστημα κοιλιών και δεξαμενών του εγκεφάλου, και περιβάλλει τον εγκέφαλο και το νωτιαίο μυελό

3 Παραγωγή ΕΝΥ 1. 70% από τα χοριοειδή πλέγματα (πτυχές της χοριοειδούς μήνιγγας ) των κοιλιών (πλάγιες, 3 η και 4η κοιλία) Αιμαγγειακός φραγμός 2. 30% από τα αγγεία της λεπτής μήνιγγας (piamater) στα σημεία εισόδου στις εγκεφαλικές πτυχές- Εγκεφαλικός φραγμός

4 ΔΙΑΔΡΟΜΗ ΕΝΥ Χοριοειδές πλέγμα Κοιλίες - δεξαμενές Αραχνοειδείς λάχνες Υπαραχνοειδής χώρος Συνεχής κυκλοφορία Απορροφάται από τις αραχνοειδείς λάχνες και μεταφέρεται στο αίμα Ολικός όγκος: ml Ρυθμός παραγωγής : 500 ml /ημέρα Χροιά : Άχρωμο Όψη : ιαυγές Ειδικό Βάρος : ph: Στείρο μικροβίων

5 Εγκεφαλονωτιαίο Υγρό (ΕΝΥ) Υγρό (ΕΝΥ) ΕΝΥ: άχρουν και διαυγές Πίεση mm H 2 O Κύτταρα 0-5 mm 3 Πρωτεΐνη Γλυκόζη mg/dl mg/dl ΕΝΥ ΟΡΟΣ Νερό % Λόγος Γλυκόζης 0.6 ΕΝΥ/ορού Συνολική ποσότητα cc Ρυθμός παραγωγής 0,35ml/dL Πρωτεΐνη mg/dl Γλυκόζη mg/dl ph 7,33 7,40

6 Φραγμός αίματος ΕΝΥ Για τη φυσιολογική λειτουργία του το ΚΝΣ απαιτεί την παρουσία ενός συνεχούς, σταθερού περιβάλλοντος στην εξασφάλιση του οποίου σημαντικό ρόλο παίζει η παρουσία Οστό κρανίου των δύο φραγμών του αιματοεγκεφαλικού φραγμού, μεταξύ των αιμοφόρων αγγείων και του εγκεφάλου, και του Αιμοφόρο αγγείο αιματοεγκεφαλονωτιαίου φραγμού, μεταξύ των αιμοφόρων αγγείων και ΕΝΥ του χοριοειδούς πλέγματος, όπου παράγεται το ΕΝΥ.. Εγκέφαλος Σκληρή μήνιγγα Αραχνοειδής μήνιγγα Υπαραχνοειδής χώρος Χοριοειδής μήνιγ Φραγμός αίματος εγκεφάλου

7 Αιματοεγκεφαλικός φραγμός (ΑΕΦ) Ο ΑΕΦ είναι ένα λειτουργικό φράγμα,, μια κυτταρική δομή που παρεμποδίζει την ελεύθερη διάχυση μεγαλομοριακών ουσιών, φαρμάκων και κυττάρων από το αίμα προς τον εγκέφαλο. Σχηματίζεται από: 1) τα ενδοθηλιακά κύτταρα των τριχοειδών του ΚΝΣ τα οποία διαθέτουν υψηλούς συνδετικούς δεσμούς που δεν επιτρέπουν ούτε την ελεύθερη διακίνηση των ιόντων. 2) Τη βασική μεμβράνη, 3) τα τελικά αγγειακά πόδια (προέκταση) των αστροκυττάρων, 4) από τα pericytes κύτταρα που περιβάλλουν εξωτερικά τα τριχοειδή και παίζουν σπουδαίο ρόλο στη συντήρηση του φραγμού, αλλά και στη ρύθμιση ροής αίματος, τη φαγοκυττάρωση και τη διαπερατότητα.

8 ΦΡΑΓΜΟΣ ΑΙΜΑΤΟΣ ΕΓΚΕΦΑΛΟΥ ενδοθήλιο αγγείο βασική μεμβράνη βάση αστροκυττάρων

9 Φραγμός Αίματος-ΕΝΥ Ανατομία Ενδοθηλιακά κύτταρα Βασική μεμβράνη Επιθηλιακά κύτταρα χοριοειδούς πλέγματος

10 ΦΡΑΓΜΟΣ ΑΙΜΑΤΟΣ Ε.Ν.Υ. αγγείο επιθήλιο χορειοειδούς πλέγματος επιθήλιο βασική μεμβράνη

11 Έλεγχος ακεραιότητας Αιματοεγκεφαλικού Φραγμού Ανατομία Δείκτης αλβουμίνης: (Alb ENY/Alb ορού)χ1000 <10

12 ΔΙΑΤΑΡΑΧΕΣ ΦΡΑΓΜΟΥ Διαταραχές Φραγμού Αίματος-ΕΝΥ Προεξάρχουσα η διαταραχή ανατομικής βάσης του φραγμού οξεία μηνιγγίτιδα εγκεφαλίτιδα χρόνιες φλεγμονώδεις εξεργασίες μηνιγγoβλαστώματα ατροφικές εκφυλιστικές εξεργασίες χωροκατακτητικές εξεργασίες Προεξάρχουσα η διαταραχή στην κυκλοφορία ΕΝΥ λόγω μηχανικού κωλύματος.

13 Εγκεφαλονωτιαίο Υγρό (ΕΝΥ) Βασικές λειτουργίες 1. Φυσική προστασία από μηχανικές κακώσεις ΚΝΣ 2. Ρύθμιση της ενδοκράνιας πίεσης 3. Παροχή θρεπτικών συστατικών στα νευρικά κύτταρα 4. Αποβολή άχρηστων προϊόντων μεταβολισμού των κυττάρων 5. Μεταφορά βιολογικών προϊόντων (ορμόνες, νευροδιαβιβαστές) 6. Διατήρηση της ομοιόστασης του περιβάλλοντος του ΚΝΣ 7. Διατήρηση κατάλληλης συγκέντρωσης ιόντων, πράγμα απαραίτητο για την δημιουργία και μεταφορά των νευρικών ερεθισμάτων. Παρέχει πολύτιμες πληροφορίες Διάγνωση Έρευνα

14 Ανοσοχημική ανάλυση εγκεφαλονωτιαίου υγρού (ΕΝΥ) Η ανοσοχημική ανάλυση του ΕΝΥ παρέχει στοιχεία που μπορεί να ενισχύσουν ή να αποδυναμώσουν την εκτίμηση μιας διάγνωσης για: Φλεγμονώδεις αντιδράσεις (οξείες/χρόνιες), με συμμετοχή ΚΝΣ Αυτοάνοσα νοσήματα (πολλαπλή σκλήρυνση, MS) Υπαραχνοειδείς αιμορραγίες Νεοπλασίες με διήθηση στο ΚΝΣ Ιδιοπαθή επιληψία και τραύματα Νευροεκφυλιστικά νοσήματα Κατά συνέπεια, είναι μια γρήγορη υψηλής ποιότητας διαγνωστική ανάλυση που ταυτοχρόνως είναι και ουσιαστική

15 Λήψη ΕΝΥ 1. Συλλογή ΕΝΥ σε 3 4 σωληνάρια α). 1 1,5 ml για βιοχημικό κυτταρολογικό έλεγχο β). 1 1,5 ml για καλλιέργεια (κοινών, Mycobacterium spp), γ). 1 1,5 ml για ανοσολογικό έλεγχο (IEF) δ). 0,5 1 ml PCR 2. Άμεση μεταφορά στο εργαστήριο (30 min 1h). 3. Ταυτόχρονη λήψη και δειγμάτων αίματος Απαραίτητη προϋπόθεση για την αξιολόγηση των ευρημάτων στο ΕΝΥ είναι ο διαχωρισμός εκείνων των στοιχείων που αν και ανευρίσκονται στο ΕΝΥ προέρχονται από το αίμα και δεν αφορούν παθολογικές διεργασίες Νευρικού Συστήματος

16 Γενική εξέταση του ΕΝΥ Ι. ΆΜΕΣΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΙΙ. ΒΑΣΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ (εξαρτώμενο από τα αποτελέσματα του Ι.) ΙΙΙ. ΕΙ ΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ (σύμφωνα με τα αποτελέσματα των Ι. και ΙΙ.)

17 Ι. ΆΜΕΣΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Γενική εξέταση του ΕΝΥ Μακροσκοπική εξέταση (Φυσικοί χαρακτήρες) Μικροσκοπική εξέταση Αριθμός λευκοκυττάρων/μl και τύπος κυττάρων στο ΕΝΥ Αριθμός ερυθροκυττάρων/μl Βιοχημική εξέταση Μέτρηση της συνολικής πρωτεΐνης στο ΕΝΥ και στον ορό Μέτρηση της γλυκόζης στο ΕΝΥ και στον ορό Μέτρηση γαλακτικού οξέος στο ΕΝΥ

18 Γενική εξέταση του ΕΝΥ ΙΙ. ΒΑΣΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ (εξαρτώμενο από τα αποτελέσματα του Ι.) Καλλιέργεια μικροβίων (Έλεγχος αντιμικροβιακής ευαισθησίας) Έλεγχος λειτουργίας αιματοεγκεφαλικού φραγμού (QAlb) Έλεγχος ενδοθηκικής παραγωγής αντισωμάτων (QIgG, QIgA, QIgM) Προσδιορισμός ολιγοκλωνικών ζωνών στο ΕΝΥ και στον ορό

19 Γενική εξέταση του ΕΝΥ ΙΙΙ. ΕΙ ΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ (σύμφωνα με τα αποτελέσματα των Ι. και ΙΙ.) Ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων στο ΕΝΥ και τον ορό (MRZ) Ανίχνευση παθογόνων με PCR Κυτταροπαθολογική ανάλυση στο ENY

20 Τρόποι διατήρησης του ΕΝΥ 1. Αρχικά θα εξετασθεί αμέσως το δείγμα για κυτταρολογική-βιοχημική εξέταση μέσα σε θάλαμο βιολογικής ασφάλειας 2. Φυλάσσεται στο ψυγείο για την Γενική εξέταση (διατήρηση μορφολογίας και αριθμού κυττάρων) 3. Σε θερμοκρασία δωματίου για την καλλιέργεια.

21 Τρόποι διατήρησης του ΕΝΥ 4. Το δείγμα μετά τον ενοφθαλμισμό της καλλιέργειας (10-2h) θα φυλαχτεί στον κλίβανο (37οC) μέχρι την άλλη μέρα για πιθανή νέα καλλιέργεια 5. Επίσης το δείγμα φυλάσσεται στην κατάψυξη (-20οC) για PCR, Ολιγοκλωνικές ζώνες (IEF), Abs ιών

22 Γενική εξέταση του ΕΝΥ ΆΜΕΣΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΒΑΣΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ

23 ΓΕΝΙΚΗ ΕΞΕΤΑΣΗ ΕΝΥ ΆΜΕΣΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Φυσιολογικό ENY Παθολογικό ENY Χροιά ιαυγές Θολερό Χρώμα Άχρωμο Ξανθoχρωματικό, Αιμορραγικό ph 7,30-7,45 Λευκο κύτταρα Ερυθρο κύτταρα Ολική Πρωτεΐνη Γλυκόζη Λόγος Γλυκόζης ΕΝΥ/ορού LDH 0-5/μL 0 μl mg/dl mg/dl U/L

24 ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΕΣ ΤΙΜΕΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΩΝ ΠΑΡΑΜΕΤΡΩΝ Ε.Ν.Υ. ΠΑΡΑΜΕΤΡΟΣ ΜΕΘΟ ΟΣ ΦΥΣΙΟΛ. ΤΙΜΕΣ Κύτταρα Μικροσκοπική, πλάκα Fuchs-Rosental, Neubauer -5/μl Ερυθροκύτταρα Μικροσκοπική, Πλάκα Fuchs- Rosental, Neubauer Όχι Γλυκόζη Ενζυμική 2/3 του ορού Ολική πρωτεΐνη Βιοχημική < 50 mg/dl Γαλακτικό Ενζυμική < 19 mg/dl Δείκτης-αλβουμίνης (Alb ENY/Alb Ανοσοχημική 10 (ενήλικοι) διαταραχή φραγμού ορού)χ1000 Δείκτης-IgG Ανοσοχημική <0.65 IgG ENY/ IgG ορού: Alb ENY/Alb ορού Ενδοθηκική σύνθεση IgG

25

26 Μικροσκοπικά χαρακτηριστικά ΕΝΥ: Μέτρηση κυττάρων Μεγάλος αριθμός κυττάρων: ΕΝΥ αυτούσιο Μικρός αριθμός κυττάρων : φυγοκέντρηση ΕΝΥ 1200 στροφές/5 10 Πλάκα Νeubauer : αρ.κυτ./μl = αρ. κυττάρων σε ένα μεγάλο τετράγωνο Χ 10 Πλάκα Fuchs-Rosental: αρ.κυτ./μl = αρ. κυττάρων σε ένα μεγάλο τετράγωνο /3

27 Μικροσκοπικά χαρακτηριστικά ΕΝΥ: Μέτρηση κυττάρων Η αρίθμηση κυττάρων πρέπει να εκτελεσθεί άμεσα <2 ώρες γιατί οι αλλαγές του ph και η χαμηλή περιεκτικότητα σε πρωτεϊνη μπορεί να οδηγήσουν σε εκφυλισμό και απώλεια των κυττάρων λευκοκύτταρα (μονοκύτταρα) νεογνά (0-30/μL), παιδιά (0-20/μL), ενήλικες (0-5/μL), ερυθροκύτταρα (0/μL)

28 Μικροσκοπικά χαρακτηριστικά του ΕΝΥ: κύτταρα Παθολογικό ΕΝΥ: Πολυμορφοπύρηνα ουδετερόφιλα (μηνιγγιτιδόκοκκος, πνευμονιόκοκκος, αιμόφιλος, ιογενείς μηνιγγοεγκεφαλίτιδες, φυματιώδης μηνιγγίτιδα). Β-λεμφοκύτταρα, πλασματοκύτταρα και μακροφάγα είναι ενδεικτικά φλεγμονώδους αντίδρασης (ιογενείςκαι άσηπτες μηνιγγίτιδες, φυματιώδης ή μυκητιασική μηνιγγίτιδα). Ιστιοκύτταρα-mast cells (ιογενείς, άσηπτες, μικροβιακές μαζί άλλα κύτταρα).

29 ENY αιμορραγικό είκτης κυττάρων Cell Index (CI) Λευκά ΕΝΥ Χ Ερυθρά Αίματος CI= Λευκά Αίματος Χ Ερυθρά ΕΝΥ ENY αιμορραγικό: συλλογή σε τρία σωληνάρια για διαφοροποίηση μεταξύ υπαραχνοειούς αιμορραγίας και αιμορραγίας από τρώση κατά την παρακέντηση και διόρθωση αριθμού κυττάρων

30

31

32 ΒΙΟΧΗΜΙΚΗ ΕΞΕΤΑΣΗ Βιοχημική εξέταση Η βιοχημική εξέταση του ΕΝΥ γίνεται από το υπερκείμενο φυγοκεντρηθέντος δείγματος. Περιλαμβάνει: 1. Γλυκόζη Ενζυματική δοκιμασία υπεριωδών εξοκινάσης. Φ.Τ % της γλυκόζης αίματος Ενήλικες: 45-80mg/dl Λόγος γλυκόζης ΕΝΥ/ορού= 0,6. Συνιστάται η μέτρηση της γλυκόζης αίματος πριν την ΟΝΠ για να αξιολογηθεί μια αυξημένη τιμή στο ΕΝΥ

33 Βιοχημικοί χαρακτήρες ΕΝΥ: γλυκόζη Μαζί με τον αριθμό κυττάρων βοηθά στη διάκριση της μηνιγγίτιδας σε μικροβιακή ή άσηπτη (μειώνεται στη μικροβιακή). Στα νεογνά και βρέφη επειδή δεν έχει εγκατασταθεί ο ΑΕΦ περνά όλη η γλυκόζη στο ΕΝΥ. Φλεγμονώδεις αντιδράσεις του ΚΝΣ, από βακτηρίδια ή μύκητες (σε αντίθεση με τους ιούς) οδηγούν σε σημαντική αύξηση κυττάρων (> 1000/μL) και γαλακτικού οξέος και ελάττωση γλυκόζης στο ΕΝΥ.

34 ΒΙΟΧΗΜΙΚΗ ΕΞΕΤΑΣΗ Βιοχημικοί χαρακτήρες ΕΝΥ: Ολική Πρωτεΐνη 2. Ολική Πρωτεΐνη : Χρωματομετρική πυρογαλλόλης Θολοσιμετρική θειοσουλφοσαλικυλικού οξέως (κατακριμνήσεως) Ανοσοχημική Νεφελομετρία Φ.Τ mg/dl >60 ετών mg/dl Στην περιοχή των δεξαμενών της βάσης είναι mg/dl, ενώ στις κοιλίες είναι 5-15 mg/dl, γεγονός που φανερώνει τη διαφορετική συμπεριφορά του ΑΕΦ στις κοιλίες από ότι στους υπαραχνοειδείς χώρους της οσφυϊκής μοίρας, όπου γίνεται μικρότερη διακίνηση της πρωτεΐνης. Στα παιδιά σε οσφυονωτιαία παρακέντηση η ολική πρωτεΐνη είναι 20 mg/dl

35 Πρωτείνη στο ΕΝΥ Ολική πρωτείνη Διάγνωση Έρευνα Θεραπεία Πρωτεϊνικά κλάσματα «Ειδικές πρωτείνες»

36 ΕΝΥ ΟΡΟΣ ολική πρωτείνη mg/dl προ-αλβουμίνη % 4 ίχνη αλβουμίνη % α1 σφαιρίνη % 4 5 α2 σφαιρίνη % 8 9 β σφαιρίνη % γ σφαιρίνη % 7 14 IgG mg/dl IgA mg/dl IgM mg/dl ελεύθερα αμινοξέα μmol/dl

37

38 Νοσος Πρωτείνη mg/dl Οξεία βακτηριδιακή μηνιγγίτις συχνά >1000 Ιογενής μηνιγγίτις < 100 Υποσκληρίδιο εμπύημα Εγκεφαλικό απόστημα Ενδοκοιλιακή ρήξη αποστήματος Επισκληρίδιο απόστημα ενδοκρανιακό Επισκληρίδιο απόστημα νωτιαίου μυελού Φλεβική θρόμβωση Βακτηριδιακή ενδοκαρδίτις (με εμβολή) Οξεία αιμορραγική εγκεφαλίτις Φυματίωση Κρυπτοκοκκική λοίμωξη Οξεία λοίμωξη απο ωχρά σπειροχαίτη 100 Σαρκοείδωση Guillain Barre

39

40 «Ειδικές πρωτείνες» στο ΕΝΥ Βασική πρωτείνη της μυελίνης (ΜΒΡ) Πρωτεϊλιπιδική πρωτείνη (PLP) P 2 πρωτείνη S 100 MAG

41 «Ειδικές πρωτείνες» στο ΕΝΥ Κυττοκίνες Λακτοφερρίνη Φερριτίνη Tau πρωτείνη Creatine Kinase CRP Καρκινικοί δείκτες Ένζυμα

42 Πρωτεϊνικοί «δείκτες» κυττάρων ΚΝΣ Νευρώνας Αστροκύτταρα Ολιγοδενδροκύτταρ α Μικρογλοία Ενολάση Πρωτείνη νευρογλοίας Βασική πρωτείνη μυελίνης Φερριτίνη

43 Βιοχημική εξέταση 3. Χλωριούχα : ιοντοεπίλεκτα ηλεκτρόδια Φ.Τ. : meq/ L 4. Γαλακτικό οξύ : ενζυματική χρωματομετρική Φ.Τ : mg/dl

44 Βιοχημική εξέταση 5. Γαλακτική δεϋδρογενάση (LDH) κινητική ενζυματική υπεριωδών (μη αιματηρό ΕΝΥ ) Φ.Τ : 7-30 U/L Ισοένζυμα LDH: ηλεκτροφορητική - χρωματομετρική και ανοσοενζυμική LDH 4,5 αυξημένη στη μικροβιακή μηνιγγίτιδα LDH 1,2 αυξημένη σε ιογενή μηνιγγίτιδα

45 Βιοχημική εξέταση 6. Προκαλσιτονίνη ορού : Ημιποσοτική, ανοσοενζυμιική τροποποιημένη ( χημειοφωταύγεια) Φ.Τ : < 0.5 ng /ml > 2 υψηλός κίνδυνος για σηψαιμία 7. CRP ENY ή ορού : ανοσοθολοσιμετρική, νεφελομετρική, ανοσοενζυμική Φ.Τ ΕΝΥ : ng/ml, Φ.Τ ορού < 0,5 mg/dl (ευαισθησία 96%, ειδικότητα93%) 8. Limulus test ENY: εκτίμηση ύπαρξης ενδοτοξινών σε μηνιγγίτιδα από gram(-),

46

47 ΕΝΥ στην ΠΟΛΛΑΠΛΗ ΣΚΛΗΡΥΝΣΗ Κύτταρα Αριθμός κυττάρων κ.φ. ή ήπια αυξημένος, 90% έχει 15/mm 3 Κυρίως λεμφοκύτταρα 80% Τ λεμφοκύτταρα Τα 2/3 είναι CD4 και ο CD4:CD8= 2-4 Ώριμα Β 2,5-5 % Μονοκυτταρική πλειοκυττάρωση 5>κύτταρα/mm 3 στο 13% ΠΣ Πρωτεΐνη Η ολική πρωτεΐνη του ΕΝΥ στην ΠΣ είναι κ.φ.στα 2/3 των ασθενών Ήπια αυξημένη (50-70mg-dl) στο 1/3 >100mg-dl αποκλύει ΠΣ, πιθανή λοίμωξη, νοσήματα συνδετικού ιστού, νεοπλασίες Γλυκόζη Επίπεδα Φυσιολογικά και αμετάβλητα

48 Εισαγωγή στη Μικροβιολογική εξέταση του ΕΝΥ Φυσιολογικά το ΕΝΥ είναι στείρο μικροβίων Οι μικροοργανισμοί που μπορεί να προκαλέσουν νόσο στις μήνιγγες ή το νευρικό ιστό είναι: Βακτήρια Ιοί Μύκητες Πρωτόζωα Κατά σειρά συχνότητας: Ιοί Βακτήρια Μύκητες - Πρωτόζωα

49

50 Άμεσο παρασκεύασμα Κεχρωσμένο παρασκεύασμα Χρώση κατά Gram (τεχνική παχείας σταγόνας) Κατά Ziehl-Neelsen Αρνητική χρώση με σινική μελάνη

51 Άμεσο παρασκεύασμα Νωπό παρασκεύασμα :παράσιτα (Naegleria) Ταχεία και φθηνή εξέταση Ευαισθησία: 65-90% (10 5 cfu/ml ENY) 25% (10³cfu/ml ENY)

52 Μικροσκοπική εξέταση 1.Χρωματισμένο παρασκεύασμα κατά Gram α) Διπλόκοκκοι Gram (-) ενδο ή εξωκυττάριοι Έχουν την μορφή κόκκων καφέ: μικρός αριθμός Ο μηνιγγιτιδόκοκος πρέπει να διαχωρισθεί από μικρόβια της ομάδας του Acinetobacter, της Mimapolymorfa β) Διπλόκοκκοι Gram (+) λογχοειδείς ή μη σε κοντές αλυσίδες: πνευμονιόκοκκος Βρίσκονται πολλοί σε κάθε οπτικό πεδίο γ) Gram (-) κοκκοβακτηρίδια με έντονο πολυμορφισμό: Haemophilus influenzae

53 Μικροσκοπική εξέταση 2. Οξεάντοχος χρώση: Μυκοβακτηρίδιο φυματίωσης 3.Αρνητική χρώση με σινική μελάνη: Cryptococcus neoformaus

54

55 Θρεπτικά υλικά 1. Αιματούχο άγαρ σε 2 τρυβλία Αερόβια στους 35-37οC Αναερόβια 2.Σοκολατόχρωμο άγαρ στους 37οC παρουσία 5-10% CΟ2 Καθημερινή επισκόπηση Διάρκεια επώασης 4-7 ημέρες 3. Mc Conkey άγαρ

56 Θρεπτικά υλικά 4. Ζωμός τρυπτικάσης σόγιας(tsb) ή Brain heart infusion broth (BHI) ή κατά περίπτωση Cooked meat broth Θα αναπτυχθούν τα μικροαερόφιλα βακτήρια Θα αναπτυχθούν τα βακτήρια όταν το μικροβιακό φορτίο είναι ελάχιστο Θα χρησιμοποιηθεί για ανακαλλιέργειες 5 Ζωμός Sabouraud (καθημερινή επισκόπηση για 4-7 ημέρες) 6. Άγαρ Levintha l: Βρασμένο αιματούχο άγαρ πηγμένο σε λοξά σωληνάρια, επώαση με CO 25-10% για 48 ώρες

57 οίηση και αντιβιόγραμμα Ταυτοποίηση και αντιβιόγραμμα Σε θετική καλλιέργεια : ταυτοποίηση με τις συμβατικές μεθόδους του εργαστηρίου Καθορισμός οροτύπου ή οροομάδος για H. Influenzae και Ν. meningitidis αντίστοιχα Αντιβιόγραμμα (σύμφωνα μεclsi) όταν αναπτυχθεί: S. pneumoniae S. aureus ή άλλοι σταφυλόκοκκοι Εντεροβακτηριακό Αζυμωτικό Gram ( ) βακτηρίδιο Εντερόκοκος (Isenberg, 2003)

58 Μέθοδοι ανίχνευσης μικροβιακών αντιγόνων Συγκόλληση σωματιδίων Latex Επισυγκόλληση σταφυλόκοκκου Ανάστροφη ανοσοηλεκτροφόρηση Ευαισθησία: % Ειδικότητα: %

59 ΙΟΓΕΝΕΙΣ ΛΟΙΜΩΞΕΙΣ ΚΝΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ PCR ΕΝΥ Αναζήτηση αιτιολογικού παράγοντα ΕΛΕΓΧΟΣ ΣΥΝΘΕΣΗΣ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΕΝΤΟΣ ΤΟΥ ΚΝΣ Ιολογικός έλεγχος ορού/ενυ

60 Μοριακές τεχνικές Polymerase Chain Reaction (PCR) Αλυσιδωτή Αντίδραση Πολυμεράσης (επιτρέπει τη σύνθεση ενός τεράστιου αριθμού αντιγράφων ενός γνωστού τμήματος του DNA ή του mrna) Για τα μη καλλιεργούμενα μικρόβια (ιοί, σύφιλη ) και τα βραδέως αναπτυσσόμενα (μυκοβακτηρίδιο φυματίωσης. Λιστέρια, βρουκέλλα) Real time PCR ( αντί ηλεκτροφόρησης )

61 «Ειδικές πρωτείνες» στο ΕΝΥ Βασική πρωτείνη της μυελίνης (ΜΒΡ) Πρωτεϊλιπιδική πρωτείνη (PLP) P 2 πρωτείνη S 100 MAG

62 «Ειδικές πρωτείνες» στο ΕΝΥ Κυττοκίνες Λακτοφερρίνη Φερριτίνη Tau πρωτείνη Creatine Kinase CRP Καρκινικοί δείκτες Ένζυμα

63 Πρωτεϊνικοί «δείκτες» κυττάρων ΚΝΣ Νευρώνας Αστροκύτταρα Ολιγοδενδροκύτταρ α Μικρογλοία Ενολάση Πρωτείνη νευρογλοίας Βασική πρωτείνη μυελίνης Φερριτίνη

64 Ενημέρωση κλινικής Α. ΓΕΝΙΚΗ ΕΞΕΤΑΣΗ ΕΝΥ 1. Φυσικοί χαρακτήρες 2. Μικροσκοπική εξέταση Αριθμός λευκοκυττάρων/μl Αριθμός ερυθροκυττάρων/μl 3. Βιοχημική εξέταση Β. ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΕΝΥ Γ. ΕΛΕΓΧΟΣ ΑΝΤΙΜΙΚΡΟΒΙΑΚΗΣ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑΣ Η προκαταρκτική και τελική ενημέρωση της κλινικής πρέπει να γίνεται άμεσα και υπεύθυνα Χρόνος πανικού (εντός 1h)