Μειέηε ηεο επίδξαζεο ησλ αγγεηνπνηεηηλώλ ζην κεζνζειίσκα in vivo νθία Μαγθνύηα 1, Χάξεο Μόζρνο 1, Μάγδα πέιια 2, Μαξηαιέλα Βαδαθίδνπ 1, Γηάλλεο Ψαιιίδαο 1, Γηώξγνο ηαζόπνπινο 2 θαη Ησάλλεο Καινκελίδεο 1 1 Δξγαζηήξην «Μαξηάλζε ίκνπ», 1ε θιηληθή Δληαηηθήο Θεξαπείαο, ΓΝΑ ''Ο Δπαγγειηζκόο'', Ηαηξηθή ζρνιε, ΔΚΠΑ 2 Δξγαζηήξην Μνξηαθήο Καξθηλνγέλεζεο Αλαπλεπζηηθνύ, Δξγαζηήξην Φπζηνινγίαο, Ηαηξηθή ρνιή, Παλεπηζηήκην Παηξώλ
Αγγειοποιητίνες ζεκαληηθνί ξπζκηζηέο ηεο αγγεηνγελεζεο (Tait and Jones, 24) θιεγκνλήο (Fiedler and Augustin, 26) εθθξάδνληαη απν θύηηαξα ηνπ μεληζηή αιιά θαη απν πνιιά είδε θαξθηληθώλ θπηηάξσλ Ο ξόινο ηνπο ζην κεζνζειίσκα παξακέλεη αδηεπθξίληζηνο (Tabata et al, 21)
υπόθεση Οη αγγεηνπνηεηίλεο επλννύλ ηελ πξόνδν ηνπ κεζνζειηώκαηνο πξνάγνληαο ηελ αγγεηνγέλεζε θαη δεκηνπξγώληαο έλα θηιηθό πξνο ηνλ όγθν θιεγκνλώδεο κηθξνπεξηβάιινλ
Σηόρνη 1. Να εμεηάζνπκε αλ ε παξαγόκελε απν ηα θαξθηληθά θύηηαξα Ang-1 θαη/ή Ang-2 πξνσζνύλ ηελ αύμεζε ηνπ όγθνπ θαη ηε ζπζζώξεπζε πιεπξηηηθνύ πγξνύ ζην κεζνζειίσκα in vivo. 2. Να κειεηήζνπκε ηηο δξάζεηο ησλ αγγεηνπνηεηηλώλ ζην κηθξνπεξηβάιινλ ηνπ όγθνπ.
Ang-1 expression (% of ) πεηξακαηηθή δηαδηθαζία AE17 Ang1 overexpressing clone 5 4 3 2 1 AE17 Ang1.1 Καηαζθεπάζακε έλαλ θιώλν ΑΕ17 πνπ ππεξεθθξάδεη Ang-1. Η παξαγσγή ηεο Ang-1 πηζηνπνηήζεθε κε Real time PCR αιιά θαη κε western blotting O θιώλνο δελ παξνπζηάδεη δηαθνξά ζηνλ πνιιαπιαζηαζκό κε ηα θύηηαξα κάξηπξεο
πεηξακαηηθή δηαδηθαζία Εώα C57BL/6 (8-1 week-old)ρσξηζηηθαλ ζε δύν νκάδεο -Δλδνππεδσθνηηθέο ελεζεηο κε AE17 Ang1 over θαη ΑΔ17 θνξείο. -12-15 εκέξεο κεηά: ζπιινγή θαη κέηξεζε όγθνπ πιεπξηηηθνύ πγξνύ, ζπιινγή θαη κέηξεζε κάδαο ηνπ όγθνπ. TEMs κε θπηηαξνκεηξία ξνήο Αλνζνηζηνρεκεία ή αλνζνθζνξηζκόο γηα κειέηε αγγεηαθνύ δηθηύνπ (CD31, a-smα), πνιιαπιαζηακό (PCNA) θαη απόπησζε (TUNEL). Βαζηθνί κεζνιαβεηέο VEGF, ΜΗΡ-2, IL-6 ELISA
Ang-1 expression (% of ) Απνηειέζκαηα 25 2 15 1 5 ang1 over Όγθνη απν δώα πνπ εγρύζεθε AE17 Ang1.1 over παξνπζίαζαλ 226.66±16.63% απμεζε ζηελ έθθξαζε ηεο Ang-1
Pleural fluid volumme (κl) όγθνο πιεπξηηηθνύ πγξνύ 1 p=.535 9 8 7 n=9 n=11 6 752 κl 81 κl AE17 Ang1 over Γελ παξαηεξήζεθε ζηαηηζηηθά ζεκαληηθή δηαθνξά ζηνλ όγθν ηνπ πιεπξηηηθνύ πγξνύ κεηαμύ ησλ δύν νκάδσλ
tumor mass (g) κάδα όγθνπ p=.17.6.5.4.3.2.1 m=.38g m=.48g AE17 Ang1 over Ζ κάδα ηνπ όγθνπ ζηα δώα πνπ εγρύζεθε AE17 Ang1.1 over ήηαλ ζηαηηζηηθά ζεκαληηθά κεγαιύηεξε απν ηελ νκάδα κάξηπξα
CD31+ cells/hpf vessels covered by pericytes (%) αγγεηαθό δηθηπν Ang1 over anti asma anti- CD31 4 p<.1 1 p=.26 3 75 2 5 1 25 AE17 Ang1 over AE17 Ang1over Οη όγθνη ηεο AE17 Ang1 over νκάδαο παξνπζίαζαλ ζηαηηζηηθά ζεκαληηθά πεξηζζόηεξα θαη σξηκόηεξα αγγεία απν ηελ νκάδα κάξηπξα
PCNA+ cells (% ) πνιιαπιαζηαζκόο 1 p=.5 75 Ang1 over 5 Ang1 over Όγθνη απν δώα πνπ εγρύζεθε AE17 Ang1.1 over παξνπζίαζαλ πςειόηεξα πνζνζηό πνιιαπιαζηακνύ ζε ζρέζε κε ηελ νκάδα κάξηπξα
TUNEL + cells/hpf απόπησζε p=.46 25 2 15 1 Ang-1 over 5 Ang1 over Όγθνη απν δώα πνπ εγρύζεθε AE17 Ang1.1 over παξνπζίαζαλ ρακειόηεξν πνζνζηό απόπησζεο ζε ζρέζε κε ηελ νκάδα κάξηπξα
IL-6 pg/mg protein IL-6 (pg/ml) MIP-2 (pg/mg protein) MIP-2 (pg/mg protein) VEGF pg/mg protein VEGF (pg/ml) 25 βαζηθνί κεζνιαβεηέο 8 2 6 15 4 1 5 TL TL ang1over 2 PF PF ang1over 2 2 15 1 15 1 undetectable 5 5 TL TL ang1over PF PF ang1over 1 15 1.5 5 TL TL ang1over PF PF ang1over
CD11b+/F4/8+ (%) TEMs (%) Κπηηαξνκεηξηα ξνήο 6 4 PF Tumors 2 TIE-2 CD11b 1 75 AE17 Ang1over PF Tumors DAPI 5 25 AE17 Ang1over
ζπλνςίδνληαο.. Η Ang-1 πξνάγεη ηελ αύμεζε ηνπ όγθνπ ζην θαθόεζεο κεζνζειίσκα ρσξίο λα επεξεάδεη ηε ζπιινγή πιεπξηηηθνύ πγξνύ Η δξάζε ηεο απηή ζρεηίδεηαη κε ηελ αύμεζε ηεο αγγεηνγέλεζεο θαη ηε δεκηνπξγία σξηκόηεξσλ αγγείσλ Σρεηίδεηαη επίζεο κε ηελ επαγσγή ηνπ πνιιαπιαζηαζκνύ θαη ηε κείσζε ηεο απόπησζεο ζηνλ όγθν Δελ κεηαβάιεη ηνλ θιεγκνλώδε πιεζπζκό ζην κηθξνπεξηβάιινλ ηνπ όγθνπ.
επραξηζηνύκε! Χάξεο Μόζρνο Μάγδα πέιια Μαξηαιέλα Βαδαθίδνπ Γηάλλεο Ψαιιίδαο Γηώξγνο ηαζόπνπινο θαη Ησάλλεο Καινκελίδεο Διιεληθή Πλεπκνλνινγηθή Δηαηξεία -Υπνηξνθία 211