ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΡΙΤΗΡΙΑ ΕΠΙΛΟΓΗΣ ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ

- - ό ό : Ω ί ό ί ώ.. ά

ή ί ός ή ς ύ ί ί ή έ ώ ό. ή ς ά ς ής ό ός ά ς ή έ ός ή ς ί ής ί ς. ό έ ώ - ώ ή ής ή ς- ί ά ά ς ί ς.

ά ί ί έ έ ά ύ ή, ό ί ά, ό ό ά έ ά ής ί ύ George Wald

ή ί έ ς ί ύ ό ς ί ς ά έ ί ή ό (.. ή ί ). ή ί ύ ό ό έ ί ά (.. ός ά Southern).

ίς ί ές έ ές έ DNA ές έ RNA ές έ ϊ ώ

ή ί ή ί 1500 ί ό έ ό. ό ό ύ 50-200 m 1590- ώ ά ά ς έ ή ύ ά ό 50 m. Zacharias Janssen Robert Hooke Antony van Leuwenhoek

ή ί 1839- Theodor Schwann, Matthias Schleiden ώ έ ς ς ής ί ς ά ύ έ ό ά ύ 1839- Alfred Donne ύ ώ ά ί ό ό ό Trichomonas vaginalis. 1880- Carl Zeiss ό ό ή ί ό ό.

ή ί ώ ί ό ό ύ 1838 ό lfred Donne. ί ύ ί

ή ί ά ή ά ό ί ά ύ ό ό ά 380-760 nm. ά ά ώ, ά ό ί ό ύ ί, ύ ί, ί ς ά ς.. ά ύ ί ύ ό ύ ώ.

ή ί

έ ς 1885- Wilhelm Roux ί ϊ ά ύ ό ς ά ό ό. 1907- Ross Harrison ί έ ώ ς ό ί έ. ό έ ώ ά, ϊ ώ ά, ώ, ώ. ί έ ς έ ς ί ς.

έ ς έ έ ή ά έ ά in vitro ό ς ό 24 ώ ς. έ ς ύ ά ό έ ύ ά ό ό ώ ί ς ίς. ύ ύ ύ ά ά ώ ς ά.

3 3 Fibroblast cells Smooth muscle cells MCF7 breast cancer HeLa cervical cancer cells

έ ς ύ ώ ά ά ό έ ί ό. ή ύ ί ί Petri ή ές ά ς

έ ς Ό ί έ ς ός ός ή ύ, ύ ώ ό ί ς έ ς ύ έ ύ ό ό ό ό ί ί έ, ί ύ όά. ή ώ ά in vitro ί ό ύ ώ ό. Ά ς ή ς, έ ύ ά ά.

έ ς ό έ έ ύ ύ ύ ό ά ά ά ή. ή ά ό ώ ς ύς ( ή, ύ ς, ό ) ί ύ ή.

έ ς ή ς ύ ς ό ής (contact inhibition of growth) ός ά ά έ ά ή ς. ί ής άς. ές ές ί ές ύ ς ϊ ή έ.

έ ς έ ς in vitro ί ί ς ό ό ή ά ή ί. ύ έ ς : ός ά ή ί ός ά ς ός DNA ή έ ή ϊ ώ ά

ς ύ ύ έ ή?

ός ά ά ό ς ής ά ς ώ ά ί έ ς ς ά ς. ά ί ώ ά ς ές, ές ές ς ό ς. ό ό ς ί ς ής ί ό ς.

ά έ ς 500.000 g έ ής ς ής. ύ ς ό 100 έ ς 60,000 rpm ( ές/ ό) ά έ?

ί ά ς- έ ί ά ( ά ώ, ί ώ ί ). 1 έ ί : ή ς, έ ύ 2 έ ί : ό, ώ 3 έ ί : ώ, ύ έ ς ά ί έ ί ί, ύ ύ ή ς ό ς ί ς ύ ά ί, DNA, RNA ϊ ς ή ή.

Ω

DNA

Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

ό ς ής ϊ ά έ ϊ ς

ό ς ής ί ά ς

ϊ ά έ ύ ό ό ό ώ DNA: ϊ ό ύ RNA: ϊ ό ύ ή ά ί ί, ί ί ό: ύ ά ό ( ό ή ό ) ές ί ς ί ά ί ς ές ί ς.

DNA

DNA

Hydrogen Bonds H H H H O O H C C C C N N C ί H N H H N C C C C N N H N C ί H O N H C C C N N C ί H H H N C C C C N N H N C ί N H O H

DNA: ή έ 3 5 5 3 DNA έ ή ής έ ς. ί ώ ί ό έ ύ ύς ό ά ύ ώ ά.

Denaturation - Renaturation Denaturation Renaturation Doublestranded DNA Singlestranded DNA Initial Base pairing Renatured DNA

ό DNA ό DNA ό ύ, ά ά ς ά έ ά ί ά ί ά. ά ά ώ ά ά ί, ϊ ς ϊ ά έ ί ύ ά. ϊ ά έ ύ ί ύ ϊ ς. ϊ ά έ έ ύ ό ς ϊ ς. ός ί ή CHCl

ό DNA ά ί ϊ ώ ϊ ά έ ή ό. ό ς ές ς ί ς, DNA έ ί ό ά ώ. ή ς ά ς ί ή ό ό ς EDTA, ί ύ ό ά ά έ ά.

Polymerase Chain Reaction (PCR) ή ί ά ς ή έ ς ής DNA in vitro. ύ ή ή ώ DNA ά ύ ί. ή ί ά ός ύ ά έ ς ί ό ή : ά DNA (Denaturation) ό ώ (Annealing) ή ώ (Extension)

Polymerase Chain Reaction DNA ί - ές (Primers) ύ ς ά ς (dntps) DNA Taq ά ό ά dh 2 O

Polymerase Chain Reaction 1. έ ς ί ς ός ί DNA ί ό ά ά ό έ 2. ό ί 2 (Tm). ώ ώ ς ές ί ς 3. ή DNA. ς ά ί ς- ή ς ς ό ί ί ή ς ής DNA Taq ά ς.

Temperature 100 50 Melting 94 o C PCR 0 T i m e 3 5 5 3

Temperature 100 50 Melting 94 o C PCR 0 T i m e 3 5 Heat 5 3

Temperature 100 50 Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 0 T i m e 3 5 5 5 5 3

Temperature 100 50 Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x 0 T i m e 3 5 Heat 5 5 Heat 5 5 3

Temperature 100 50 Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x 0 T i m e 3 5 5 5 5 5 5 5 5 3

Temperature 100 50 Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x 3 5 5 0 T i m e 5 5 5 3 Heat 5 5 Heat 5

Temperature 100 50 Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x 3 5 5 0 T i m e 5 5 5 5 3 5 5 5 5 5 5

Temperature 100 50 Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x 3 5 5 0 T i m e 5 5 5 5 3 Fragments of defined length 5 5 5 5 5 5

DNA Between The Primers Doubles With Each Thermal Cycle Number 1 2 4 8 16 32 64 0 Cycles 1 2 3 4 5 6

Polymerase Chain Reaction έ ς PCR ί ά ή ί, έ ό ί ς ός ό ί DNA έ ί. PCR ί ή ά ώ ώ ώ ό. ί ς ί ή ό ά ί ό ό ί έ έ ό ό ( ί έ, ί ί ς, ύ, έ ς ή ή ά ώ ή ύ ). έ ς ή ί ή ς DNA fingerprinting.

Polymerase Chain Reaction ή PCR: ά ί, ό ύ. ά ό έ έ ό DNA. Έ ύ ά ές (primers) ύς ς ς ές ές ί ς DNA ή ό. ή PCR: ώς ές ά ς ί ς ύ. ώς ές ά ς ό ύ ς έ.

ό έ έ έ ς ί ς ϊό PCR ί ό έ (gel electrophoresis). ό PCR ώ έ gel ό ς. ό ό ί έ ός ύ ύ ς (buffer) ϊό ύ έ gel. DNA ί ά έ ό. ί ύ ώ ς, DNA ί ς ά έ ό.

ό έ ό ά DNA ύ ς ά ς ό ύ ά ύ. ς ά ς (bands) ί DNA ς ί ύ ί (ethidium bromide) ς ί ώ ς ς (UV). Έ έ ύ ς ώ ί ϊό έ έ ς. ά ός έ ϊό ς gel, ς έ ύ ς ί ό PCR.

ό έ ή ό ς

ό έ DNA buffer wells Cathode (negative) Anode (positive)

ό έ Gel ό ς ό ς ί UV. ή ί ός gel ό ς.

ό έ ή ό ό ς ή ή gel ό ς ές ό ς DNA ύ ί ές. ή ά ή ή ό ής ί ϊό ς b

ή ά DNA (DNA fingerprinting) ύ DNA. ώ 1985 ό Sir Alec Jeffreys. ή ή ς ής ί έ ός ά ί DNA ή ά ώ ύ ά έ έ ς ί ύ ό έ. ώ DNA έ ές ί ς ά ( ές ς ό DNA), ί ς ά ώς. ό ς ές

έ ς ά DNA (DNA fingerprinting) DNA fingerprinting ί έ ς : ί ό ς ί ά

έ ς ά DNA (DNA fingerprinting) 1. ός DNA PCR. 2. έ έ DNA. 3. ά ϊό PCR gel ό ς. 4. ά ά ς ό ς ά ς DNA ί ά έ ός ς. 5. Ό 2 ά ς DNA ά, έ ί ό ί, ί ό ά έ ά. ή ή ί έ ς ό ς ί ύ ύ ό.

έ ς ά DNA (DNA fingerprinting) ύ DNA έ ό ς.

http://www.biology.arizona.edu/human_bio/problem_sets/dna_forensics_2/10q.html http://www.biology.arizona.edu/human_bio/problem_sets/dna_forensics_2/07q.html

ύ ός ά Southern ή ό Ed Southern to 1975 ή ί ί ί ς ή ί ς έ ς ί ς ά DNA. ή ά DNA ό ή έ ί ύς ές ϊ ώ έ.

ύ ός ά Southern DNA έ ό ά ά ή ί ς ή ό ς ά ό ί ό ί ύ ί, ίς ί ή ά. ά ά ά, ό ύ ή ή έ ώ ί. έ ύ ύ ά ί ό.

ύ ός ά Southern

ύ ός ά Southern http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120078/bio_g.swf

ύ ός ά Southern

ύ ός ά Southern ή ή έ ή ά ή ό ή ό ό ς έ ς b

RNA

Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

Real-Time PCR PCR ό ό. ό έ ύ ύ ί ί ς ής έ ς ί. Real-time PCR ά ό έ ά ά ά ύ ς ής ί ς ς ά ς ό ό. ό έ PCR, ί ός ό ς ές έ έ ς ς (probes) έ ί ύ, ώ ί PCR- ϊό ό ό.

Real-Time PCR probes έ 5 ά ς ί ί 3 ά ς ά ί ί ά ό ς ώ ς ό ί ές έ ς. probes ύ ί ό DNA ά. ό ί έ probes ί ί. Ό ό ς ( ά ύ έ ά ό DNA ά ) ύ, ί ή ί ί ύ

ά ύ ί ό ί ή ή ύ ύ ί ί ός ός ά ή ί ς.

Real-Time PCR ή : ί ί ό ό ί ύ ή ό RNA ά ό ά έ ί ς ά ύ ϊό ς ς ί ς, ό ς ό έ. ή : ό ό ς ύ ί ί έ ή ή

ύ ός ά Northern ή ή ί ή ς ύ ς ύ ά Southern. ί έ ς ό ς ός ί ύς ύς.

ύ ός ά Northern ό RNA. ή ί ή ς ί ς ί ς έ. ό ύ ό ό ή, ί ό ή έ ί ή. Έ ί ί ή ύ ί ί ό ό ί. ός ά ς ί ά ς ό ό ί ί. (Ό ό ό mrna ά ό ύ ός ύ, ό ς ό ς ές ύ, έ ς ό ύ ή ί ς)

ύ ός Northern

ύ ός Northern

ί ς cdna Microarrays ό ή ά ί ό. ί ί ί ά έ ύ ί. ύ ς ής έ ς ί ύ ύς έ ύ ή ά. ά έ ώ ώ ώς ς ής ί ς ά ί έ ύ.

ί ς cdna ά ί έ ί έ ύ ς ί ς ί ς έ ς ί. Glass slide έ ά ς ί ς ί ή ά έ ά ί ύ.

ί ς cdna έ ά ί ς ά ύ έ ί ό ς έ ς ώ ί mrna. ί ί ό έ ά ί.

ί ς cdna

GREEN represents Control DNA, where cdna derived from control cells is hybridized to the target cdna. RED represents Sample DNA, where cdna derived from target cells hybridized to the target cdna. YELLOW represents a combination of Control and Sample cdna, where both hybridized equally to the target cdna. BLACK represents areas where neither the Control nor Sample cdna hybridized to the target cdna.

ί ς cdna : ά ί έ ς ά ί ή ό ό : ό ό ς ί ί ή Ά ώ ώ ά

ί ς ώ ί ς ώ ύ έ ς έ ς ύ ό ί ς έ ί ς. ό ύ ς 600 ί ύ ό ίς. έ ί έ ά ό. ώ ή ς ί, ώ ό..

ί ς cdna Έ ί ί ί ς ή έ ί ς ώ ά ί Έ ς ί ς ό

ί ς ώ ί ά ά / ό ή ί ά ό ύ ή ής ύ ί ς ή ς ό ί έ ό ί ό ό ύ.

Ϊ

Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

ό SDS- ί ς έ ς ό ϊ ώ. ός ό ί ά ό ς ί ή ά ό ς ά ς. ά ό έ ό ί. έ έ ό ύ ύ έ 1000 ές ϊ ς.

ό SDS- ί ς ά ϊ ώ ά έ SDS (sodium dodecyl sulfate). έ ϊ ώ ή έ ή (gel). ί ύ ί ό ή ά ή ή έ. ή ί ά έ ί ϊ ς ή ώ.

ό SDS- ί ς

ό SDS- ί ς

ό SDS- ί ς

ύ Western έ ς ύ ς ί ϊ ς έ ό ή έ ό, ά ό ύ ό ό έ ά.

ύ Western ά ή ή, ό ς ϊ ς ός ώ ς έ ά ί ς έ ά ί ό ς ή ί ϊ, ώ ς ί ί ί έ ά. ί ό, έ ά έ ϊό ή ό ό.

ύ Western H ό SDS- ί ς ά ϊ ώ ί ώ έ ί ί ϊ ς

ύ Western

ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ός ό ς έ ς έ. ή ί ϊ ς ή ά ς ής ί ς. ί ί ό ς ό ό ό (HIV, salmonella ) ό ς ί ώ.

ELISA έ ς ί ό ό ό έ ί έ ά ς ά ς. ός έ ς ύ ά ί έ ί, ί ύ ό ί ύ ή.

ELISA

ELISA

ELISA ύ ί ή ί ώ ή ό. ή ά ό. Ά έ. ά ή έ ς. ά ά ς ύς ά.

Western blot vs ELISA ί ί ς ύ ή ς ϊ ς ή ς ϊ ς ό ά ς ς ϊ ς ί ί ς ό ς ϊ ς έ ί ί ά ό ά ά ή έ ς

ί ής Flow cytometry έ ή ί ής FACS FACS (fluorescence activated cell sorter) έ ς ά ί ό. ί ής έ έ ώ / ώ ώ ά

ής

ί ής Charged Plates Single cells sorted into test tubes 488 nm laser - + ύ ί ί ς ές έ έ ό ή ί ώ ά ύ ί ί ύ ό έ έ ό ί ί. έ ός ή ς laser. έ ό ί ί ώς έ ά έ ς ά ς έ ά ά.

ί ής : ός ό ώ ώ ά ά ύ ύ (cell cycle analysis) ός ύ ά (apoptosis) ώ ί ώ ό ώ ί ό ό ά

ός ύ ς G 2 M G 0 s G 1 C o u n t 0 DNA Analysis G 0 G 1 s G 2 M 200 400 600 800 1000 2N 4N DNA content

0 75 Counts 225 300 ά ύ ύ 0 200 400 600 800 1000 2N 4N PI Fluorescence

B

Application of the nuclear factor- B inhibitor BAY 11-7085 for the treatment of endometriosis: a case study ός ός: έ ς ά ς ύ ά 11-7085 ύ ί ί ς ί ς. έ : ός ά ς 11-7085 ί ό ά ά ί ώ ς έ ώ ί caspase-3, -8-9 ή ς έ ς - ώ ί Bcl-2 Bcl-X L. Nasu et al., (2008), Am.J.Physiol.Endocrinol. Metab.

Elevated expression of CYP1A1 and -SYNUCLEIN in human ectopic endometriosis compared with eutopic endometrium ός ός ύ ώ ύ ύς ό ίς ί. έ : ί ά ίς ί Singh et al., (2008), Mol.Hum.Reprod.

ύ ά ώ ά ς έ ί ί ό ά ς ά ς ές ές ς ό ς. ές ς ής ί ς ύ ύ ό έ ύ ά ί ς ές 19 ώ. ός ό ς ώ ώ έ ή ή ό ά ά ή έ έ. ώ ή ς

Western Blot assay should not be used as a screening test. WB should be viewed as a supplemental test which can be used to confirm positive results obtained from EIA.