ΧΡΗΗ ΣΗ ΑΝΙΧΝΕΤΗ ΣΗ HPV ΠΡΩΣΕΙΝΗ Ε7 Ω ΤΜΠΛΗΡΩΜΑΣΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΤ ΔΙΑΛΟΓΗ Ε 16/18-ΘΕΣΙΚΕ Ή HR-HPV (ΜΗ 16/18) ΘΕΣΙΚΕ ΓΤΝΑΙΚΕ. ΑΠΟΣΕΛΕΜΑΣΑ ΣΗ ΜΕΛΕΣΗ PIPAVIR Κίμων Χατηθςταματίου 1, Andreas Kaufmann 2, Pidder Janssen-Duerr 3, Αλκμινθ κεντζρθ 4, Ειρινθ Λζκκα 5, Νικόλαοσ Μαγκλαβζρασ 5, ταματία Αγγελίδου 6, Ευαγγελία Κατςίκθ 6, Oliver Boecher 7, Isabel Koch 7, Achim Schneider 2, Ελευκζριοσ Αγγελισ 8, Θεόδωροσ Μωυςιάδθσ 9, Θεόδωροσ Αγοραςτόσ 1 1 Δ Μαιευτική-Γυναικολογική Κλινική, Ιατρικό Τμήμα, Αριςτοτέλειο Πανεπιςτήμιο Θεςςαλονίκησ, Ιπποκράτειο Γεν. Νοςοκομείο Θεςςαλονίκησ 2 Εργαςτήριο Ογκολογικήσ Ανοςολογίασ, Γυναικολογική Κλινική, Πανεπιςτημιακό Νοςοκομείο Charite Benjamin Franklin, Βερολίνο, Γερμανία 3 Ινςτιτοφτο Ιατροβιολογικών Ερευνών, Πανεπιςτήμιο Innsbruck, Αυςτρία 4 Κυτταρολογικό Εργαςτήριο, Ιπποκράτειο Γεν. Νοςοκομείο Θεςςαλονίκησ 5 Εργαςτήριο Ιατρικήσ Πληροφορικήσ, Ιατρικό Τμήμα, Αριςτοτέλειο Πανεπιςτήμιο Θεςςαλονίκησ 6 Παθολογοανατομικό Εργαςτήριο, Ιπποκράτειο Γεν. Νοςοκομείο Θεςςαλονίκησ 7 Εταιρεία Mikrogen, Μόναχο, Γερμανία 8 Τμήμα Πληροφορικήσ, Σχολή Θετικών Επιςτημών, Αριςτοτέλειο Πανεπιςτήμιο Θεςςαλονίκησ 9 Ινςτιτοφτο Εφαρμοςμένων Βιοεπιςτημών, Εθνικό Κέντρο Ζρευνασ και Τεχνολογικήσ Ανάπτυξησ, Θεςςαλονίκη
Χρθματοδότθςθ μελζτθσ PIPAVIR: Η μελζτθ χρθματοδοτικθκε από τθν Ευρωπαϊκι Ζνωςθ (EU 7 th framework programme, FP7-HEALTH- 304927)
Σκοπόσ H διερεφνθςθ τθσ αποτελεςματικότθτασ τθσ ανίχνευςθσ τθσ Ε7 ογκοπρωτεΐνθσ του HPV ωσ μεκόδου περαιτζρω διαλογισ των γυναικϊν που είναι κετικζσ για τουσ τφπουσ 16 ι/και 18 ςυγκριτικά με τθν κυτταρολογία ωσ μεκόδων διαλογισ γυναικϊν που ανευρίςκονται κετικζσ για τουσ υπόλοιπουσ υψθλοφ κινδφνου τφπουσ του HPV εκτόσ των τφπων 16 και 18
Ειςαγωγι (1) HPV 16/18+ Κολποςκόπθςθ HPV DNA testing με HPV 16/18 τυποποίθςθ HR HPV+ (non 16/18) HR HPV- NILM PAP test ASCUS+ F/U ρουτίνασ F/U 12 μινεσ Huh et al, 2015
Ειςαγωγι (2) HPV 16/18+ + Κολποςκόπθςθ HPV DNA testing με HPV 16/18 τυποποίθςθ E7 πρωτεΐνθ - F/U 12 μινεσ HR HPV+ (non 16/18) HR HPV- NILM PAP test ASCUS+ F/U ρουτίνασ F/U 12 μινεσ
Ειςαγωγι (3) HPV 16/18+ + Κολποςκόπθςθ HPV DNA testing με HPV 16/18 τυποποίθςθ E7 πρωτεΐνθ - F/U 12 μινεσ HR HPV+ (non 16/18) HR HPV- F/U ρουτίνασ
Υλικό Μζκοδοι (1) Υπο-ανάλυςθ των δεδομζνων τθσ Ευρωπαϊκισ μελζτθσ PIPAVIR για τθν ανίχνευςθ τθσ E7 πρωτεΐνθσ του HPV ςτα πλαίςια τθσ πρόλθψθσ του καρκίνου του τραχιλου τθσ μιτρασ. Σόποσ διεξαγωγισ τθσ μελζτθσ: Θεςςαλονίκθ, Βερολίνο, Μόναχο, Ίνςμπρουκ υμμετζχουςεσ: Γυναίκεσ 30-60 ετϊν που υποβάλλονται ςε λιψθ κολποτραχθλικοφ επιχρίςματοσ
Υλικό Μζκοδοι (2) 1258 γυναίκεσ εξετάςτθκαν μεταξφ Φεβρουαρίου 2013 και Απριλίου 2014. Η λιψθ του κολποτραχθλικοφ δείγματοσ ζγινε με: «Cervex Brush», Rovers Medical Devices B.V. Oss, The Netherlands «Cyto Brush», CooperSurgical, Inc. 75 Corporate Drive Trumbull, CT 06611 USA
Υλικό Μζκοδοι (3) Η κυτταρολογικι εξζταςθ των ςυλλεχκζντων δειγμάτων ζγινε με τθν μζκοδο κυτταρολογίασ υγρισ φάςθσ (ThinPrep, Hologic, Inc, Marlborough, MA, United States)
Υλικό Μζκοδοι (4) PCR - HPV Multiplex Genotyping Η τυποποίθςθ του HPV DNA ζγινε ςτο Εργαςτιριο Ογκοανοςολογίασ του Νοςοκομείου Charite του Πανεπιςτθμίου του Βερολίνου (CHARITE-UNIVERSITÄTSMEDIZIN Berlin Hospital, Germany www.charite.de) Το ςφςτθμα MPG περιλαμβάνει ζνα ευρφ φάςμα GP5+/GP6+ προαγωγζων τθσ PCR ςε ςυνδυαςμό με ειδικοφσ για τον τφπο ανιχνευτζσ και εμφανίηει υψθλι ευαιςκθςία για τθν ανίχνευςθ πολλαπλϊν τφπων (χαμθλοφ ι υψθλοφ κινδφνου) του HPV.
Υλικό Μζκοδοι (5) Ανίχνευςθ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ του HPV με τθν μζκοδο Sandwich ELISA =δοχείο well ELISA Y= Αντίςωμα που επικαλφπτει το «πθγάδι» τθσ πλακζτασ ELISA και δεςμεφει μθ ειδικά τθν Ε7 =Ε7 πρωτεΐνθ του HPV Y Y Y Y= Αντίςωμα που δεςμεφει ειδικά τθν Ε7 ςυγκεκριμζνων τφπων του HPV Y=Αντίςωμα εναντίον του Fc κλάςματοσ των ανκρϊπινων ανοςοςφαιρινϊν =Ζνηυμο ςυνδεδεμζνο με το αντίςωμα εναντίον των ανοςοςφαιρινϊν =Υπόςτρωμα ενηφμου
Υλικό Μζκοδοι (5) Ανίχνευςθ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ του HPV με τθν μζκοδο Sandwich ELISA =δοχείο well ELISA Y= Αντίςωμα που επικαλφπτει το «πθγάδι» τθσ πλακζτασ ELISA και δεςμεφει μθ ειδικά τθν Ε7 =Ε7 πρωτεΐνθ του HPV Y Y Y Y= Αντίςωμα που δεςμεφει ειδικά τθν Ε7 ςυγκεκριμζνων τφπων του HPV Y=Αντίςωμα εναντίον του Fc κλάςματοσ των ανκρϊπινων ανοςοςφαιρινϊν =Ζνηυμο ςυνδεδεμζνο με το αντίςωμα εναντίον των ανοςοςφαιρινϊν =Υπόςτρωμα ενηφμου
Υλικό Μζκοδοι (5) Ανίχνευςθ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ του HPV με τθν μζκοδο Sandwich ELISA =δοχείο well ELISA Y= Αντίςωμα που επικαλφπτει το «πθγάδι» τθσ πλακζτασ ELISA και δεςμεφει μθ ειδικά τθν Ε7 =Ε7 πρωτεΐνθ του HPV Y Y Y Y= Αντίςωμα που δεςμεφει ειδικά τθν Ε7 ςυγκεκριμζνων τφπων του HPV Y=Αντίςωμα εναντίον του Fc κλάςματοσ των ανκρϊπινων ανοςοςφαιρινϊν =Ζνηυμο ςυνδεδεμζνο με το αντίςωμα εναντίον των ανοςοςφαιρινϊν =Υπόςτρωμα ενηφμου =Ενεργοποιθμζνο υπόςτρωμα ενηφμου. Εκπζμπει ακτινοβολία ανιχνευόμενθ με το φαςματοςκόπιο
Υλικό Μζκοδοι (5) τρατθγικζσ ανίχνευςθσ Ε7 Σφςτθμα τριϊν wells well 1: ανίχνευςθ των 16, 18, και 45 E7 well 2: ανίχνευςθ των 39, 51, 56, και 59 E7 well 3: ανίχνευςθ των 16, 31, 33, 35, 52, και 58 E7 Σφςτθμα δφο wells Screening well: ανίχνευςθ 12 hr E7 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, and 59 E7) Well 16, 18, and 45 E7
Διάγραμμα ροισ πλθκυςμοφ τθσ μελζτθσ -4 Δείγματα με ανεπαρκζσ PAP test 1258 Κατάλλθλα δείγματα 1254 Δείγματα με κατάλλθλο PAP, HPV test και Ε7 89 Δείγματα με ASCUS ι χειρότερο 1165 Δείγματα με αρνθτικό PAP test 49 HR-HPV κετικά 40 HR-HPV αρνθτικά 223 HR-HPV κετικά 942 HR-HPV αρνθτικά -10 Δείγματα Γυναικϊν που αρνικθκαν κολποςκόπθςθ 16 HPV 16/18 κετικά 12-16 E7 κετικά 38 Αρνθτικζσ βιοψίεσ 83 Βιοψίεσ 302 Κολποςκοπιςεισ 20 CIN 1 13 CIN 2 5-9 E7 κετικά 12 CIN 3 9 HRHPV κετικά non16/18 5 ASCUS ι χειρότερο
Δείκτεσ διαγνωςτικισ ακρίβειασ ανίχνευςθσ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ για τθ διαλογι προσ κολποςκόπθςθ HPV 16/18 κετικϊν γυναικϊν Sensitivity PPV NPV CNP HPV 16/18 16/16 100% (79,4-100,0%) 16/184 8,69 (5,05-13,73%) - 11,5 HPV 16/18 and E7+ (well1) 16/16 100%(79,4-100,0%) 16/105 15,2% (8,96-23,6%) 79/79 100% (95,4-100,0%) 6,6 HPV 16/18 and E7+ (well3) 12/16 75% (47,6-92,7%) 12/58 20,68% (11,17-33,3%) 122/126 96,82% (92,1-99,1%) 4,8 HPV 16/18 and E7+ (screening well) 14/16 87,5% (61,6-98,4%) 14/110 12,7% (7,1-20,4%) 72/74 97,3% (90,57-99,7%) 7,8 HPV 16/18 and E7+ (E7_16_18_45 well) 12/16 75% (47,6-92,7%) 12/62 19,3% (10,4-31,4%) 118/122 96,7% (91,8-99,1%) 5,2 Sensitivity: Ευαιςκθςία PPV: Θετικι προγνωςτικι αξία PLR: Θετικόσ λόγοσ πικανοφάνειασ CNP: Αρικμόσ κολποςκοπιςεων για τθν ανίχνευςθ μίασ περίπτωςθσ CIN2+
Δείκτεσ διαγνωςτικισ ακρίβειασ ανίχνευςθσ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ και κυτταρολογίασ για τθ διαλογι προσ κολποςκόπθςθ HR HPV (non16/18) κετικϊν γυναικϊν HPV HR (non16/18) Sensitivity PPV NPV CNP 9/9 100,0% (66,4-100,0%) 9/88 10,2% (4,8-18,5%) - 9,7 HPV HR (non16/18) and cytology (ASCUS+) 5/9 55,5% (21,2-86,3%) 5/17 29,4% (10,3%-55,9%) 67/71 94,4% (86,2-98,4%) 3,4 HPV HR (non16/18) and E7+ (well 1) 6/9 66,7% (29,9-0.92,5%) 6/44 13,6% (5,1-27,3%) 41/44 93,2% (81,3-98,6%) 7,3 HPV HR (non16/18) and E7+ (well 2) 8/9 88,9% (51,7-99,7%) 8/36 22,2% (10,1-39,1%) 51/52 98,1% (89,7-99,9%) 4,5 HPV HR (non16/18) and E7+ (well 3) 7/9 77,7% (40,0-97,2%) 7/29 24,1% (10,3-43,5%) 57/59 96,6% (88,3-99,6%) 4,1 HPV HR (non16/18) and E7+ (screening well) 9/9 100,0% (66,4-100,0%) 9/54 16,7% (7,9-29,3%) 34/35 97,1% (85,1-99,9%) 6,0 HPV HR (non16/18) and E7+ (16/18/45 well) 6/9 66,7% (29,9-92,5%) 6/28 21,4% (8,3-40,9%) 57/60 95,0% (86,1-98,9%) 4,7
Συμπεράςματα Η ευαιςκθςία τθσ Ε7 (well1) test είναι 100%, ίςθ με του HPV16/18 και θ κετικι προγνωςτικι αξία ςχεδόν διπλάςια Όλα τα Ε7 tests ζχουν μεγαλφτερθ κετικι προγνωςτικι αξία ςε ςχζςθ με τθν HPV 16/18 τυποποίθςθ μόνο ε ςχζςθ με τθν κυτταρολογία θ Ε7 αυξάνει τθν ευαιςκθςία αλλά ελαττώνει τθν κετικι προγνωςτικι αξία ςτθ διαλογι HR HPV (non 16/18) κετικών γυναικών Με τθν εφαρμογι τθσ Ε7 χρειάηεται ςχεδόν ο μιςόσ αρικμόσ κολποςκοπιςεων για 1 CIN2+ θμαντικότερο μζγεκοσ για τον αρχικό προλθπτικό ζλεγχο είναι θ ευαιςκθςία Θα μποροφςε να αποτελεί εναλλακτικι τθσ κυτταρολογίασ εξζταςθ ε κάκε περίπτωςθ όμωσ θ ανίχνευςθ του HPV 16/18 είναι απόλυτα μοριακι μζκοδοσ και θ χριςθ τθσ κα μποροφςε να αποκλείςει τθν αναγκαιότθτα φπαρξθσ κυτταρολογικισ υποδομισ
... Ευχαριςτώ για τθν προςοχι ςασ.