Ανίσνεςζη ςπεπέκθπαζηρ mrna ηυν ογκογονιδίυν Ε6/Ε7 ηος ιού HPV με Κςηηαπομεηπία Ροήρ Υπιζηίνα Κοηηαπίδη Βηνιόγνο, Δξγαζηήξην Γηαγλωζηηθήο Κπηηαξνινγίαο Ιαηξηθήο Σρνιήο Παλεπηζηεκίνπ Αζελώλ
Κςηηαπομεηπία ποήρ και HPV Τπεπέκθπαζη ηυν ογκογονιδίυν Ε6 και Ε7 Κςηηαπική αθαναηοποίηζη Κακοήθη μεηαζσημαηιζμό απενεργοποίηση της κστταρικής p53 L1 απενεργοποίση της κστταρικής prb E6 7904/1 7000 1000 E7 Άθικηα κύηηαπα Ενδοκςηηάπιο mrna L2 6000 500 0 4000 E4 2000 3000 E2 E1 E5
Κςηηαπομεηπία ποήρ και HPV HPV OncoTect ΤΜ (Invirion Diagnostics) Δλζωκάηωζε ηνπ ηνύ ζην γελωκηθό DNA Αλίρλεπζε ηεο ππεξέθθξαζεο ηνπ mrna ηωλ γνληδίωλ Δ6 θαη Δ7 ηωλ νγθνγόλωλ ηύπωλ HPV
Ανάλςζη δεδομένυν Κπηηαξόκεηξν ξνήο - 488 nm argon laser Μνλάδα ειεθηξνληθνύ ππνινγηζηή γηα ηελ επεμεξγαζία ηωλ ζεκάηωλ
Ανάλςζη δεδομένυν Η κέηξεζε κε ηνλ αληρλεπηή SSC δίλεη πιεξνθνξίεο γηα ηελ θπηηαξνπιαζκαηηθή θνθθίωζε Πηγή θυηόρ Φυηοδίοδορ Πηγή θυηόρ Πεγή θωηόο (αθηίλα LASER Argon-ion) Φυηοδίοδορ Υδξαπιηθό ζύζηεκα πνπ αλαγθάδεη ηα θύηηαξα λα ξένπλ ην έλα κεηά ην άιιν κπξνζηά ζηελ αθηίλα LASER Η κέηξεζε κε ηνλ αληρλεπηή FSC είλαη αληίζηνηρε ηνπ κεγέζνπο ηνπ θπηηάξνπ Αληρλεπηέο ηνπ θωηόο θαη ηνπ θζνξηζκνύ θαη ρξεζηκνπνηείηαη γηα λα μερωξίζεη δηαθνξεηηθά είδε θπηηάξωλ
Έλεγσορ επάπκειαρ ηος δείγμαηορ Ελάσιζηορ απιθμόρ κςηηάπυν εξυηπασήλος (Bethesda 2001) 5000 Κπιηήπια επάπκειαρ (Grundhoefer and Patterson) Κύηηαπα Εξυηπασήλος >1% Κύηηαπα Ενδοηπασήλος >1% Φλεγμονώδη Κύηηαπα <20% Φλεγμονώδη Κύηηαπα 8,6% Κύηηαπα Ενδοηπασήλος 21,15% Κύηηαπα Εξυηπασήλος 70,23% Region Count R1 5494 R2 1655 R3 673
Έλεγσορ επάπκειαρ ηος δείγμαηορ Ελάσιζηορ απιθμόρ κςηηάπυν εξυηπασήλος (Bethesda 2001) 5000 Κπιηήπια επάπκειαρ (Grundhoefer and Patterson) Κύηηαπα Εξυηπασήλος >1% Κύηηαπα Ενδοηπασήλος >1% Φλεγμονώδη Κύηηαπα <20% Φλεγμονώδη Κύηηαπα 0,51% Κύηηαπα Ενδοηπασήλος 0,81% Κύηηαπα Εξυηπασήλος 84,2% Region Count R1 5942 R2 60 R3 36
OncoTect ΣΜ test (Invirion Diagnostics) Κύηηαξα ελαηωξήκαηνο θηαιηδίνπ πγξήο θάζεο ThinPrep (1 ml-max 10 6 θύηηαξα) Μνληκνπνηνύληαη θαη θαζίζηαληαη δηαπεξαηά (PermiFlow, Invirion Diagnostics) (90 min) In situ πβξηδνπνίεζε FAM ζεκαζκέλνπ κίγκαηνο HPV ηρλεζεηώλ ζε άζηθηα θύηηαξα ηνπ εμωηξαρήινπ (30 min)
Αποηέλεζμα OncoTect Απνηηικό Θεηικό αποςζία ανίσνεςζηρ ςπεπέκθπαζηρ mrna Ε6 και Ε7 ανίσνεςζη ςπεπέκθπαζηρ mrna Ε6 και Ε7 αποςζία ενζυμάηυζηρ ηος ιού ιόρ ενζυμαηυμένορ ποζοζηό θθοπιζόνηυν κςηηάπυν<1,5% ποζοζηό θθοπιζόνηυν κςηηάπυν>1,5%
Δείγμα «ενηόρ θςζιολογικών οπίυν» - ποζοζηό θθοπιζόνηυν κςηηάπυν 0,5% απνηηικό για ςπεπέκθπαζη mrna E6 και Ε7 θλεγμονώδη κύηηαπα κύηηαπα ενδοηπασήλος κύηηαπα εξυηπασήλος Δείγμα «LgSIL/CINI» - ποζοζηό θθοπιζόνηυν κςηηάπυν 23% θεηικό για ςπεπέκθπαζη mrna E6 και Ε7 θλεγμονώδη κύηηαπα κύηηαπα ενδοηπασήλος κύηηαπα εξυηπασήλος
Αποηελέζμαηα ύγκπιζη Ιζηολογικήρ-OncoTect HPV mrna Θεηικόηηηαρ Negative HPV CIN I CIN II CIN III Ca ύνολο Oncotect + 130 14 18 15 10 8 195 Oncotect - 923 35 36 10 6 2 1012 ύνολο 1053 49 54 25 16 10 1207 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% Negative HPV CIN I CIN II CIN III Ca Oncotect + Oncotect - Ειδικόηηηα CINII+ 85,99% Εςαιζθηζία CINII+ 64,71%
ςμπεπάζμαηα Θεηηθόηεηα ζηα CIN I + πξαγκαηηθόο πιεζπζκόο κε ελεξγό ινίκωμεπεξηνξίδεηαη ην screening / 6 κήλεο ζην ζεηηθό πιεζπζκό Θεηηθόηεηα ζηα CIN IΙ + ηα πεξηζηαηηθά πνπ ζα ππνηξνπηάζνπλ κεηά από ζεξαπεία αλ παξακείλεη ε έθθξαζε ηνπ mrna ηωλ Δ6/Δ7
ςμπεπάζμαηα Με ηο OncoTect test μεηπάηαι η ενεπγόηηηα ηυν ογκοππυηεφνών πος είναι και ηο ππαγμαηικό μέηπο εκηίμηζηρ ηηρ ανάπηςξηρ καπκινογόνυν αλλαγών σεηικά ζύνηομη ηεσνική Δεν μποπεί Μποπεί να διακπίνει να ανισνεύζει ηον ηύπο mrna ηος ιού όλυν ηυν ζηελεσών ςτηλού κινδύνος Απαιηείηαι μόλιρ 1 ml εναιυπήμαηορ κςηηάπυν ζε ThinPrep
Εργαζηήριο Διαγνωζηικής Κσηηαρολογίας, Π.Γ.Ν. «ΑΤΤΙΚΟΝ» Διεσθσνηής: Π. Καρακίηζος, Αν. Καθηγηηής Μονάδα αναλσηικής και ποζοηικής κσηηαρολογίας Προζωπικό: Η. Γεσξγνπιάθεο, Λέθηνξαο Α. Καηέξεο, Φπζηθόο. Σζνύθνο, Φπζηθόο Χ. Κνηηαξίδε, Βηνιόγνο Α. παζεο, Βηνιόγνο Εθαρμογές ηαηηθή Κύηηαξνκεηξία Κπηηαξνκεηξία Ρνήο Μονάδα λειηοσργικής κσηηαρολογίας Προζωπικό: Ε. Χξηζηώλε, Μνξηαθή Βηνιόγνο Α. Μαξνύγγα, Βηνρεκηθόο Εθαρμογές FISH, CISH Άλνζνθπηηαξνρεκεία Μονάδα ηετνηηής νοημοζύνης Προζωπικό: Α. Πνπιηάθεο Κ. Κνπηξνύκπαο Σ. Μεγαινπνύινπ Μονάδα μοριακής κσηηαρολογίας Προζωπικό: Α. Χξαληώηε, Βηνρεκηθόο Χ. Κνηηαξίδε, Βηνιόγνο Ε. Χξηζηώλε, Μνξηαθή βηνιόγνο Α. πάζεο, Βηνιόγνο Μ. Αιεπάθε, Βηνιόγνο Λ. Αγά, Βηνιόγνο Μονάδα διαγνωστικής κυτταρολογίας Ιαηρικό προζωπικό Ε.Κ.Π.Α.: Η. Γεσξγνπιάθεο, Λέθηνξαο Ιαηρικό προζωπικό Ε.Σ.Υ.: Μ. ηακαηάθε, Γηεπζύληξηα, Κπηηαξνιόγνο Α. Άλνηλνο, Δπηκειεηήο Α, Κπηηαξνιόγνο Ν. Μάξγαξε, Δπηθνπξηθή ηαηξόο, Κπηηαξνιόγνο Χ. Μεξηζηνύδεο, Δπη. ηαηξόο, Κπηηαξνιόγνο Τετνολόγοι :. Καδίθα, Α. Λέθθα, Α. ηακνπιαθάηνπ, Κ. Κσλζηαληνπνύινπ Γραμμαηεία: Π. Σζηάξα, Δ. Αζαλαζηάδε Εθαρμογές Απνθσιηδσηηθή θπηηαξνινγία, Παξαθεληίζεηο ιεπηήο βειόλεο Κπηηαξνρεκηθέο ρξώζεηο Εθαρμογές: PCR, RT-PCR, qpcr DNA Microarrays Μονάδα ηηλε-κσηηαρολογίας Προζωπικό::. Σζνύθνο, Φπζηθόο Α. Καηέξεο, Φπζηθόο Ν. ηεξγίνπ, Ζιεθηξνιόγνο κεραληθόο Εθαρμογές: πκβνπιεηηθή δηάγλσζε εμ απνζηάζεσο Σειε-δηάζθεςεο Σειε-εθπαίδεπζεο