Downloaded from shefayekhatam.ir at 4: on Thursday January 31st 2019 [ DOI: /acadpub.shefa ] Substance as an Inducer

Transcript

1 دوره دوم شماره دوم بهار 1393 Research Article Neurogenic Differentiation of Rat Bone Marrow Stromal Cells by the Non Toxic Factors of Bioactive ABSTRACT Substance as an Inducer Parastoo Barati 1, Marzieh Darvishi 2, Taghi Tiraihi 1*, Taher Doroudi 1 1 Shefa Neuroscience Research Center, Khatam Alanbia Hospital, Tehran, Iran. 2 Department of Anatomy, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran.. Article Info: Received: 12 Jan 2014 Accepted: 19 Apr 2014 Introduction: Despite major progress in pharmacological and surgical approaches, spinal cord injury remains a complex medical challenge. Cell replacement therapy is one of the new approaches for spinal cord injury treatment. In this study, bioactive substance TNT (a new supplement) was utilized for induction of bone marrow stromal cells (BMSCs) into neural stem cells (NSCs). Materials and Methods: The BMSCs were extracted and cultured from the femurs and tibias of adult female wistar rats. After 3 or 4 passages, these cells were preinduced into neurospheres by TNT and neural induction supplement. Then neurospheres were induced into NSCs with B27 and TNT. The NSCs were evaluated with nestin, NF68 and SOX2. Results: The outcomes indicated that BMSCs were immunoreactive to CD106 (95.7±0.76), OCT4 (96.2±1.3) and CD45 (0.4±1.2). The optimal dose and time for application of TNT were 1 M and 6 days, respectively. Differentiated cells were able to express nestin and NF68. Conclusion: TNT as a non-toxic substance may be a good alternative for cell induction into NSCs for treatment of neurodegenerative disorders. Key words: 1. Mesenchymal Stromal Cells 2. Cell Transplantation 3. Spinal Cord Injuries 4. Neural Stem Cells * Corresponding Author: Taghi Tiraihi takialtr@modares.ac.ir 47 47

2 1393 بهار دوم شماره دوم دوره فعال مادۀ غيرسمي فاكتورهاي توسط صحرايي موش استخوان مغز استرومايي سلولهاي عصبي تمايز القاءكننده يك عنوان به زیستی 1 درودی طاهر 1* طریحی تقی 2 درویشی مرضیه 1 براتی پرستو ایران. تهران االنبياء خاتم بيمارستان شفا اعصاب علوم تحقیقات مرکز 1 ایران. تهران مدرس تربیت دانشگاه پزشکی دانشکده تشریح علوم گروه 2 مقاله: اطالعات 1393 فروردين 30 پذيرش: تاريخ 1392 دي 22 دريافت: تاريخ ه چكيد همچنان نخاعي ضايعۀ جراحي تكنيكهاي و داروشناسي زمينۀ در فراوان پيشرفتهاي عليرغم مقدمه: است نوين روشهای از یکی درمانی سلول است. مانده باقي پزشكي علم در پیچیده مسئلۀ يك عنوان به جديد( مكمل )يك TNT زيستي فعال مادۀ از مطالعه این در ميرود. کار به نخاعی ضایعات درمان برای که و مواد شد. استفاده عصبی بنیادی سلولهای به استخوان مغز از مشتق بنیادی سلولهای تبديل جهت مادۀ ويستار صحرایی موش درشتني و ران استخوانهای از استخوان مغز استرومایي سلولهاي روشها: فعال مادۀ توسط القاء پیش مرحلۀ در سلولی پاساژ 4 الی 3 از بعد سلولها این شدند. داده كشت و جدا بالغ سلولهای القاء مرحلۀ در سپس شدند. تبدیل نوروسفر سلولهای به نوروني القاي مكمل و TNT زیستی با عصبی بنیادی سلولهای یافتند. تمایز عصبی بنیادی سلولهای به TNT و B27 از استفاده با نوروسفر مغز از مشتق سلولهای یافتهها: گرفتند. قرار ارزیابی مورد SOX2 و 68 نوروفیالمنت نستین نشانگرهای میکنند. بیان را )0/4±1/2( CD45 و )96/2±1/3( OCT4 )95/7±0/76( CD106 نشانگرهاي استخوان یافته تمایز سلولهای بود. روز شش و موالر 1 غلظت در ترتيب به TNT از استفاده براي زمان و دوز بهترین است غيرسمي مادۀ يك TNT نتیجهگیری: میکنند. بیان را 68 نوروفیالمنت و نستین عصبی نشانگرهای تحليل اختالالت درمان در عصبی بنيادي سلولهاي به سلولي القاي برای مناسبی جایگزین میتواند كه باشد. عصبی سیستم برندۀ واژهها: كليد مزانشیمی سلولهای 1. استرومایی سلولي پيوند 2. نخاعي طناب آسيبهاي 3. عصبی بنیادی سلولهای 4. طریحی تقی مسئول: نويسنده * takialtr@modares.ac.ir الكترونيكي: آدرس 4848

3 پژوهشي مقاله 1393 بهار دوم شماره دوم دوره مقدمه درمان برای امروزه که است روشهایی از یکی درمانی سلول سيستم بیماریهای و صدمهها از ناشی آسیبهای و اختالالت جهت که سلولهایی است. شده گرفته کار به 1 مركزي عصبي قابل سهولت به بايد ميشوند برده كار به عصبي ضايعات درمان داشته را In vivo شرايط در ماندن زنده توانایی باشند دسترس 1(. )2 نکنند ایجاد فرد در ایمنی واکنش آن بر عالوه و باشند 2 مغزاستخوان) BMSCs ( مشتقاز مزانشیمی سلولهای برايناساس 3 چندتوان سلولها اين میباشند. فوق خصوصیات کلیۀ دارای كه وقتي ميآيند. دست به استخوان مغز از راحتي به و هستند سرعت به ميتوانند میشوند داده كشت آزمایشگاهی محیط در نتايج همچنین كنند ایجاد را سلولی كلنيهای و شوند تکثیر 3(. )4 است آنها در تمايز باالي قدرت از حاكي متعدد تحقيقات موش در BMSCs كه ميدهد نشان مشاهدات آن بر عالوه به مزانشيمي غير مشتقات به تمايز ظرفيت انسان و صحرايي بررسیها 5(. )6 دارند را نوروگلیاها و عصبی سلولهای خصوص توانایی و بیشتر تزریقی سلولهای تعداد چه هر که داده نشان و حسی اختالالت بهبود احتمال باشند داشته باالتری عملکرد همچون القایی فاکتورهای مییابد. افزایش آسیب از ناشی حرکتی 8 dbcamp و 7 IBMX 6 BHA 5 DMSO 4 بتامرکاپتواتانول به مزانشیمی سلولهای القاي وجود با كه هستند ترکیباتی درصد کاهش باعث بودن سمي علت به عصبی شبه سلولهای 4(. )7 میگردند یافته تمایز ماندۀ باقی سلولهای روشهای از استفاده دنبال به حاضر مطالعۀ در رو این از درصد میزان تا برآمدیم عصبی سلولهای تولید جهت غیرسمي لذا دهیم. افزایش تمایز طی را شده تولید عصبی سلولهای عصبی سلولهاي كشت و توليد فنآوري حصول منظور به صحرایی موش نمونههای از آمده دست به BMSCs سلولهای قرار سلولی تمایز تأثیر تحت القاء و القاء پیش مرحلۀ دو طی مطالعۀ در عصبی شبه سلولهای تولید ارتقاء برای گرفتند. تحریکی عامل عنوان به 9 زیستیTNT فعال مادۀ از حاضر شبه سلولهای بقاء و تولید میزان حال عین در و شد استفاده مورد مذکور مادۀ از استفاده با نوروسفر تولید دنبال به عصبی )8(. گرفت قرار مطالعه روشها و مواد حدود وزن با ماده بالغ صحرايي موشهاي ابتدا کتامین از ترکیبی وسيلۀ به و انتخاب تصادفي صورت به گرم سپس شدند. بیهوش 10( mg/kg( زایالزین و 50( mg/kg( اتولوگ روش به آنها 11 درشتني و 10 ران استخوانهای مغز از DMEM محيطكشت از ميليليتر 6 حاوي سرنگ کمک با و درصد )FBS( گاوي جنين سرم و ) Gibco )شركت سي سي 25 فالسك يك درون به و آسپیره )Gibco )شركت شدند نگهداري ساعت 48 مدت براي مرطوب شرايط در و تخليه محيط تعويض هنگام گردید. تعويض محيط اين روز 2 از پس و سلولهاي سپس شدند. شسته استريل 13 PBS توسط سلولها افزودن يعني آنزيمي روش كمك به فالسک کف به چسبيده كف از درصد 0/05 Trypsin/EDTA محلول از سي سي یک و پاساژ 4 براي حداقل كار اين و شد داده پاساژ و جدا فالسك یافت. ادامه فالسك كف شدن پر اساس بر بار هر روش از استفاده با BMSCs سلولهای تأیید ایمونوسیتوشیمی بعد BMSCs سلولهای اختصاصی نشانگرهاي بررسی براي مرحلۀ در شدند. منتقل خانه 6 پلیتهای به چهارم پاساژ از به شدند. فیکس درصد 4 پارافرمالدئید توسط سلولها بعد توسط سلولها غشای سیتوپالسمی عناصر رنگآمیزی منظور سپس شدند. نفوذپذیر دقیقه 30 مدت برای درصد 0/3 تریتون معرض در سانتيگراد درجۀ 4 دمای در ساعت 12 مدت برای مدت به ادامه در شدند. داده قرار 1( )جدول اولیه آنتیبادیهای غلظت با FITC به 14 متصل ثانویۀ آنتیبادی معرض در ساعت 2 DAPI با سلولها هستۀ افتراقی تشخیص گرفتند. قرار )1/500( 0/1 )غلظت دقیقه 1 مدت به )Cat: 9542 سيگما )شركت شد. انجام میلیلیتر( بر میلیگرم 10 موالر: )پیش نوروسفر تولید مرحلۀ در TNT مادۀ غلظت تعیین القاء( از محیط تأثیر تحت چهارم پاساژ از بعد سلولها مرحله این در پاساژ در منظور این برای شدند. تبدیل نوروسفر به عصبی القائی سلولهای درصد تعیین از بعد و شدند تريپسينه سلولها چهارم 6 پلیتهای به درصد 0/4 بلو تریپان حیاتی رنگ توسط زنده محیط توسط و خانه( هر در سلول هزار )500 شدند منتقل خانه شدند. داده کشت TNT از ترکیبی با DMEM صورت بدين شده تولید BMSCs سلولهای منظور این برای القاي تحت كنترل گروه عنوان به سلولهايي شدند: گروهبندي ) 0/5 %(-)شركت 16 EGF و )%2( 15 bfgf )%10( B27 مادۀ سه غلظتهای با سلولهايي همچنين و شدند داده كشت )Gibco )%0/5( EGF ) 2 %(و bfgf TNT موالر 0/25 و 0/01 0/1 1 تعداد و قطر شدند. انکوبه روز 6 و 3 مدت به و گروه چهار در TNT مادۀ غلظت و زمان بهترین و شد شمارش نوروسفرها نوروسفرها تأیید و بررسی منظور به روز 6 از بعد گردید. تعیین خانه 12 پلیتهای به آنها از گروهی ایمونوسیتوشیمی لحاظ از افزار نرم از استفاده با نوروسفرها تعداد و قطر شدند. داده انتقال 1 Central Nervous System (CNS) 2 Bone Marrow Stromal Cells 3 Multipotent 4 β-mercaptoethanol (BME) 5 Dimethylsulfoxide (DMSO( 6 Butylated Hydroxyanisole (BHA( 7 Isobutylmethylxanthine (IBMX( 8 Dibutyryl Cyclic AMP (dbcamp) 9 Bioactive substance TNT (a new supplement, code: ) 10 Femur bone 11 Tibia bone 12 Fetal bovine serum 13 Phosphate Buffer Saline 14 Conjugate 15 Basic fibroblast growth factor 16 Epidermal growth factor 49 49

4 1393 بهار دوم شماره دوم دوره 1 )غلظت TNT مادۀ غلظت و زمان بهترین و شمارش ImageJ گردید. تعیین القاء( از بعد روز 6 و موالر عصبی بنیادی سلول به نوروسفر سلول تبدیل در شده ایجاد معلق اسفرهای نوروسفر تشکیل از بعد روز 6 پوشیده خانه 6 پلیتهای به و شدند جدا پلیت کف محیط غلظت بهترین مرحله این در شدند. منتقل الیزین ال پلی با با زنده سلولهای درصد ارزیابی از استفاده با القاء زمان و ارزیابی بلو تریپان حیاتی رنگ توسط و Viability Test روش بنیادی سلولهای نشانگرهای از نوروسفرها تأیید جهت شد. عصبی بنیادی سلولهای به مربوط نشانگرهای همچنین و 1(. )جدول گردید استفاده بادیها آنتی لیست 1- جدول مشتق نوروسفرهای در شده القاء نسلهای تعداد بررسی BMSCs از سلولهای 17 پرتوانی میزان بررسی منظور به مرحله این در عصبی بنیادی سلولهای نسلهای تغییر شده تولید عصبی چند در شده تولید اسفرهای گرفت. قرار بررسی مورد شده ایجاد نظر از و شدند تبدیل عصبی بنیادی سلول به اسفر از مرحله مورد پرتوان سلولهای نشانگرهای بیان و سلول 18 ریختشناسی گرفتند. قرار بررسی یافتهها BMSCs سلولهای کشت و جداسازی از حاصل نتایج از استخوان مغز استرومایي سلولهاي کشت و جداسازی برای شد. استفاده بالغ صحرایی موش درشتني و ران استخوانهای کشت ظرف داخل به استخوان مغز بافت تودۀ انتقال از پس این ساعت 12 الی 6 گذشت با و نمایانتر خونی سلولهای و 1( )تصوير شده شناور کشت محیط سطح در خونی سلولهای گرد سلولهای این شدند. خارج کشت ظرف از محیط تعویض با خونی سلولهای حذف با و چسبیده ظرف کف به مشاهده قابل استرومایی سلولهای همان ظرف کف در باقیمانده سلولهای شدند. تکثیر زمان گذشت با که 1( )تصوير هستند به كه هستند سلولهایي استخوان مغز استرومایي سلولهاي سلولها این میشوند. تكثير سرعت به و چسبيده كشت ظروف ویژگیهای و شده داده تکثیر پاساژ 20 تا مطلوب شرایط در ریختشناسی نظر از سلولها نمييابد. تغییری آنها ریختشناسی داشتند. يكنواخت و يكدست نسبت به ظاهري چهارم پاساژ از 70 از بیش استخوان مغز استرومایي سلولهاي که شرایطی در فیبروبالستی شبه دوکی سلولهای کرده پر را کشت ظرف درصد اندازه نظر از و چسبندهتر و پهن صورت به سلولها از برخي و شدند. ديده كشت محيط در سلولها ساير از بزرگتر اختصاصی نشانگرهای ايمونوسيتوشيمي تست در سلولها این سلولهای اختصاصی نشانگر 95/7±0/76 را ت) CD106 ( BMSCs بیان را فیبرونکتین نشانگر و 96/2±1/3 را )OCT4( بنیادی بنیادی سلولهای اختصاصی نشانگر آن بر عالوه و میکنند 1(. )نمودار میکنند بیان 0/4±1/2 را )CD45( هماتوپوئیتیک نتايج همۀ و شد انجام ImageJ افزار نرم توسط سلولي شمارش شدهاست. گزارش Mean±SEM بهصورت آمادگی ب( کشت( شروع از بعد ساعت )12 ظروفکشت به سلولها اتصال الف(.BMSCs سلولهای کشت مراحل از فازکنتراست عکس 1- تصوير میکرومتر. 200 مقیاس: کشت(. شروع از بعد ساعت )72 اول سلولی پاساژ برای سلولها 17 Pluripotency 18 Morphology 5050

5 مقاله پژوهشي دوره دوم شماره دوم بهار 1393 نتایج به دست آمده از تمایز سلولهای BMSCs به نوروسفر تحت تأثیر القاي TNT نتایج نشان داد که سلولهای BMSCs بعد از قرارگرفتن در محیط کشت القائی عصبی حاوی مادۀ TNT توانایی تشکیل نوروسفر را دارند. سلولهای BMSCs که غلظت یک موالر مادۀ TNT را دریافت کردهاند 6 روز بعد از القاء نسبت به سایر غلظتهای استفاده شده با سرعت بیشتری در کنار هم جمع میشوند به عبارت ديگر قطر و تعداد نوروسفرها در اين گروه نسبت به ساير گروهها رشد چشمگيري داشته است )نمودار 2 و 3(. اسفرهای ایجاد شده در روز اول قطری حدود 100 میکرومتر دارند و از قرارگیری تعداد کمی از سلولها تشکیل شدهاند. از روز اول تا روز سوم تعداد اسفرها افزایش مییابد و از روز سوم تا هفتم از تعداد آنها کاسته شده و به قطر آنها افزوده میشود بهطوری که در روز هفتم به قطری در حدود 500 میکرومتر میرسند. در مطالعۀ انجام شده نوروسفرها توانایی انتقال تا 70 نسل را نشان دادند )تصوير 2(. بررسی ایمونوسیتوشیمی این سلولها نشان داد که سلولهای بنیادی عصبی توانایی بیان نشانگرهای بنیادی OCT4( و )SOX2 و عصبی )نوروفیالمنت 68 و نستین( را دارند. عالوه بر آن این نشانگرها بعد از 70 نسل نیز توانایی بیان نشانگرهای سلول بنیادی را دارا ميباشند )تصوير 3(. نتایج به دست آمده از تبدیل سلولهای نوروسفر به سلول شبه عصبی تحت تأثیر القاي TNT همچنین مشاهدات در این مطالعه نشان داد که نوروسفرها بعد از انتقال به پلیتهای پوشیده با پلیال الیزین بعد از 7 روز به کف پليت چسبیده و به صورت سلولهایی کشیده و دوقطبی دیده میشوند که سلولهای بنیادی عصبی هستند )تصوير 4(. نمودار 1- نتايج ايمونوسيتوشيمي ميزان بیان نشانگرهای سطح سلولی را در سلولهای BMSCs بعد از پاساژ سلولی چهارم نشان ميدهد كه بهصورت Mean±SEM گزارش شدهاست. همانطور که نشان داده شده است کمترین ميزان بیان مربوط به نشانگرهای خونی میباشد. شمارش سلولي توسط نرم افزار ImageJ انجام شد. نمودار 2- مقایسۀ اندازۀ قطر نوروسفر برحسب ميكرومتر در دوزهای مختلف داروی TNT كه به صورت Mean±SEM گزارش شده است. عالمت * بیشترین اندازۀ نوروسفر را در روز سوم القاء نشان میدهد و عالمت ** نشاندهندۀ بیشترین قطر نوروسفر در روز 6 بعد از القاء ميباشد. آزمون آماری One Way Anova بوده و سطح معن يداري 0/05<P در نظر گرفته شد

6 1393 بهار دوم شماره دوم دوره تعداد بیشترین * عالمت شدهاست. گزارش Mean±SEM بهصورت كه TNT داروی مختلف دوزهای در نوروسفر تعداد مقایسۀ 3- نمودار آماری آزمون ميباشد. القاء از بعد 6 روز در نوروسفر تعداد بیشترین نشاندهندۀ ** عالمت و میدهد نشان القاء سوم روز در را نوروسفر شد. گرفته نظر در 0/05<P يداري معن سطح و بوده One Way Anova دعب ساختارها اين میدهند. تشكيل محيطكشت در نوروسفر نام به شكلی كروي ساختارهاي و يافته تجمع هم كنار در شده ساخته عصبي محيطكشت تأثير تحت BMSCs سلولهاي 2- تصوير مييابد. افزايش آنها قطر همچنين و آنها تعداد 6 روز در و هستند كمتري تعداد و قطر داراي نوروسفرها اول روز در هستند. شناسايي قابل محيطكشت در روز يك از سلولهای در عصبی( )نشانگرهای نستین و 68 نوروفیالمنت و بنیادی( سلولهای )نشانگرهای SOX2 و OCT4 نشانگرهاي بيان 3- تصوير میکرومتر. 50 مقیاس: شد. ارزيابي مثبت BMSCs از مشتق نوروسفر 5252

7 مقاله پژوهشي دوره دوم شماره دوم بهار 1393 تصوير 4- بيان نشانگرهاي الف( نستین ب( نوروفیالمنت 68 ج( SOX2 در سلولهای شبه عصبی مشتق از نوروسفر مثبت ارزيابي شد. مقیاس: 200 میکرومتر بحث و نتیجهگیری تاكنون از سلولهاي زيادي در زمينۀ درمان اختالالت سیستم عصبی مرکزی استفاده گرديده كه از جملۀ آنها ميتوان به استفاده از سلولهاي استرومايي مغز استخوان سلولهای بنیادی مشتق از بافت چربی و سلولهای بنیادی عصبی اشاره کرد که از انواع سلولهاي بنيادي بالغ هستند )10 9(. از طرف دیگر تحقيقات نشان داده است كه سلولهاي استرومايي مغز استخوان ميتوانند طيف وسيعي از سلولها را ایجاد کنند. مطالعات متعددي به منظور تمايز سلولهاي استرومايي مغز استخوان به سلولهاي عصبي در محيط كشت صورت گرفته است 12(.)11 زيرمجموعهاي از سلولهاي مغز استخوان در انسان و جوندگان داراي ظرفيت تمايز به سلولهاي عصبي بوده و به خصوص نشانگرهاي مربوط به مراحل اوليۀ تكامل نورون را بيان مينمايند )13(. همچنين جهت بررسي اثرات فاكتورهاي آزاد شده توسط بافتهاي عصبي در حال تكامل و نيز واكنشهاي متقابل بين سلولي سلولهاي استرومايي مغز استخوان را با سلولهاي مزنسفاليك جنين موش و يا سلولهاي گليالي مغز نوزاد موش صحرايي كشت دادند كه در پي آن افزايش بيان NeuN وGFAP را مشاهده نمودند )14(. محققان ديگري از بتامرکاپتواتانول به عنوان عامل القاءكننده استفاده نمودند وليكن اين عامل تنها موجب تمايز سلولهاي استرومايي مغز استخوان به نورون گرديد. عوامل ديگري كه به طور مؤثر موجب تغيير فنوتيپ سلولهاي استرومايي مغز استخوان به فنوتيپ سلول عصبي گرديده شامل DMSO و BHA میباشند )15(. عوامل افزايشدهندۀ ميزان camp درون سلولي نيز موجب تمايز سلولهاي BMSCs و تغيير ريختشناسي آنها به ريختشناسي سلول عصبي ميگردد )16(. تاکنون مطالعات گستردهای در زمینۀ تولید نوروسفر از سلولهای بنیادی مشتق از مغز استخوان انجام شده است )17(. عباسزاده و دارابی در سال 2011 نشان دادند که BMSCs تحت تأثیر فاکتورهایEGF bfgf وB27 به نوروسفر و سپس سلول بنیادی عصبی تمایز مییابند )19 18(. همچنین اثر این فاکتورها روی تمایز سلولهای بنیادی مشتق از بافت چربی نیز تأیید گردید. این فاکتورها از عوامل میتوژنیک هستند و از طرفی فاکتور B27 عالوه بر خاصیت تمایزی سمي نیز میباشد )20(. فاکتورهایی که تاکنون برای تولید و تمایز سلولهای شبه عصبی استفاده میشود بهعنوان عوامل سمي شناخته شدهاند. از این رو مطالعات به سمتی پیش میرود که فاکتورهای مؤثرتر و غیرسمي را جایگزین فاکتورهای مذکور کنند. مطالعۀ حاضر نشان داد که مادۀ TNT توانایی تمایز سلولهای استرومایی مغز استخوان را به سلولهای شبه عصبی دارد )22 21(. در این مطالعه سلولهای BMSCs بعد از کشت و به دست آمدن بافت یکنواخت سلولی به ساختارهای اسفری تبدیل شدند و برای این منظور از غلظتهای مختلف مادۀ TNT استفاده شد. در بین غلظتهای به کار برده شده غلظت یک موالر تعداد نوروسفرهای بیشتر و در عین حال بزرگتری را در اختیار قرار داد. نورورسفرها با کاهش موالریتۀ مادۀ TNT از تعدادشان کاسته شده و عالوه بر آن زمان طوالنیتری برای تشکیل احتیاج داشتند. سلولهای BMSCs بعد از مجاورت با مادۀ TNT ابتدا به صورت گرد و شناور دیده شدند که این امر میتواند نشاندهندۀ سرعت باالی تقسیم آنها باشد. عالوه بر این این سلولها نشانگرهای سلولهای بنیادی و عصبی را بیان کردند که این میتواند نشاندهندۀ توانایی مادۀ TNT برای القاي عصبی باشد. همچنین بررسی نشان داد که این سلولها نشانگرهای پيشساز عصبی شامل نستین و SOX2 را نسبت به سایر نشانگرهای عصبی بیشتر بیان میکنند. عالوه بر آن بررسی نشان داد که تا حدود 70 نسل تولید نوروسفرها امكا نپذير ميباشد که این امر تأییدکنندۀ این مسئله است که مادۀ TNT عالوه بر قدرت القاي سلولهای مزانشیمی مغز استخوان به سلولهای نوروسفر و در نهایت سلول بنیادی عصبی پرتواني سلول را در این سلولها حفظ میکند. این مطالعه نشان داد که میتوان با استفاده از مادۀ TNT سلولهای BMSCs را به سلولهای نوروسفر و سپس به سلولهای بنیادی عصبی با توانایی باالی بیان نشانگرهای چندتواني تبدیل کرد که میتواند برای درمان بیماریهای تحليل برندۀ عصبي 19 مهم و کاربردی باشد. 19 Neurodegenerative 53 53

8 دوره دوم شماره دوم بهار Lee J, Kuroda S, Shichinohe H, Ikeda J, Seki T, Hida K, et al. Migration and differentiation of nuclear fluorescence-labeled bone marrow stromal cells after transplanrtation into cerebral infarct and spinal cord injury in mice. Neuropathology. 2003; 23: Zurita M, Vaquero J. Functional recovery in chronic paraplegia after bone marrow stromal cells transplantation. Neuroreport. 2004; 15: Kaka GR, Tiraihi T, Delshad A, Arabkheradmand J, Kazemi H. In vitro differentiation of bone marrow stromal cells into oligodendrocyte-like cells using triiodothyronine as inducer. Int J Neurosci. 2012; 122(5): Ankeny DP, Mctigue DM, Jakeman LB. Bone marrow transplants provide tissue protection and directional guidence for axons after contusive spinal cord injury in rats. Exp Neurol. 2004; 190(1): García R, Aguiar J, Alberti E, de la Cuétara K, Pavón N. Bone marrow stromal cells produce nerve growth factor and glial cell line derived neurotrophic factor. Biochem Biophys Res Commun. 2004; 316(3): Karami M, Bathaie SZ, Tiraihi T, Habibi M, Arabkheradmand J, Faghihihzadeh S. Crocin improved locomotor function and mechanical behavior in the rat model of contused spinal cord injury through decreasing calcitonin gene related peptide (CGRP). Phytomedicine. 2013; 21(1): Mezey E. Transplanted bone marrow generates new neurons in human brains. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003; 100: Mohammad-Gharibani P, Tiraihi T, Delshad A, Arabkheradmand J, Taheri T. Improvement of contusive spinal cord injury in rats by co-transplantation of gamma-aminobutyric acid-ergic cells and bone marrow stromal cells. Cytotherapy. 2013; 15(9): Inoue M, Honmou O, Oka S, Houkin K, Hashi K, Kocsis JD. Comparative analysis of remyelinating potential of focal and intravenous administration of autologous bone marrow cells into the rat demyelinated spinal cord. Glia. 2003; 44: Aligholi H, Hassanzadeh G, Azari H, Rezayat SM, Mehr SE, Akbari M, et al. A new and safe method for stereotactically harvesting neural stem/progenitor cells from the adult rat subventricular zone. J Neurosci Methods. 2014; 225: منابع 11. Abouelfetouh A, Kondoh T, Ehara K, Kohmura E. Morphogenic differentiation of bone marrow stromal cells co-culture with hypocampal slice. Brain Res. 2004; 1029(1): Cazalets JR, Bertrand S, Sqalli-Houssaini Y, Clarac F. GABAergic control of spinal locomotor networks in the neonatal rat. Ann N Y Acad Sci. 1998; 860: Hung SC, Cheng H, Pan CY, Tsai MJ, Kao LS, Ma HL. In vitro differentiation of size-sieved stem cells in vitro electrical active neural cells. Stem Cells. 2002; 20: Jin K, Mao XO, Batteur S, Sun Y, Greenberg DA. Induction of neuronal markers in bone marrow cells: differentiation of growth factors and pattern of intracellular expansion. Exp Neurol. 2003; 184(1): Abdanipour A, Tiraihi T, Delshad A. Transdifferentiation of the Adipose Tissue-Derived Stem Cells into Neuron-Like Cells Expressing Neurotrophins by Selegiline. Iran Biomed J. 2011; 15(4): Abdanipour A, Tiraihi T, Taheri T, Kazemi A. Microglial activation in rat experimental spinal cord injury model. Iran Biomed J. 2013; 17(4): Darabi S, Tiraihi T, Ruintan A, Abbaszadeh HA, Delshad A, Taheri T. Polarized neural stem cells derived from adult bone marrow stromal cells develop a rosettelike structure. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2013; 49(8): Abbaszadeh H, Tiraihi T, Delshad A. Bone marrow stromal cell transdifferentiation into oligodendrocytelike cells using triiodothyronine as a inducer with expression of platelet-derived growth factor α as a maturity marker. Iran Biomed J. 2013; 17(2): Gharibani P, Tiraihi T, Arabkheradmand J, Kazemi H. Induction of bone marrow stromal cells into GABAergic neuronal phenotype using creatine as inducer. Restor Neurol Neurosci. 2012; 30(6): Abdanipour A, Tiraihi T. Induction of adiposederived stem cell into motoneuron-like cells using selegiline as preinducer. Brain Res. 2012; 1440: Zhao LR, Duan WM, Reyes M, Keene CD, Verfaillie CM, Low WC. Human bone marrow stromal cells 5454

9 مقاله پژوهشي دوره دوم شماره دوم بهار 1393 exhibit neural phenotypes and ameliorate neurological deficiet after grafting into the ischemic brain of rats. Exp Neurol. 2002; 174(1): Cogle CR, Yachnis AT, Laywell ED, Zander DS, Wingard JR, Steindler DA. Bone marrow transdifferentiation in brain after transplantation: a retrospective study. Lancet. 2004; 363(9419):