BD BBL Oxi/Ferm Tube II

Transcript

1 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ BBL Oxi/Ferm Tube II IA Αναθ.: April 2007 BD BBL Oxi/Ferm Tube II ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το BBL Oxi/Ferm Tube II είναι ένα έτοιμο προς χρήση σύστημα ταυτοποίησης για ζυμωτικά, θετικά στην οξειδάση και για αζυμωτικά Gram αρνητικά βακτηρίδια που απομονώνονται από κλινικά δείγματα. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Τα ζυμωτικά, θετικά στην οξειδάση, καθώς και τα αζυμωτικά, θετικά ή αρνητικά στην οξειδάση, Gram αρνητικά βακτηρίδια διαδραματίζουν ένα ρόλο ως λοιμώδεις παράγοντες. Αυτή η ομάδα βακτηριδίων χρησιμοποιεί υδατάνθρακες κυρίως με οξείδωση και, μόνο περιστασιακά, με ζύμωση. Οι μικροοργανισμοί αυτοί συνήθως διαθέτουν και τα δύο ένζυμα, την καταλάση, η οποία είναι δυνατό να διασπάσει το υπεροξείδιο του υδρογόνου σε νερό και οξυγόνο, και την οξειδάση (c-οξειδάση κυτοχρώματος), ένα ένζυμο που είναι δυνατό να οξειδώσει ταχέως τη διμεθυλ- ή τετραμεθυλ-παραφαινυλενοδιαμίνη. Η εξέταση οξειδάσης χρησιμοποιείται για το διαχωρισμό τους από τα μέλη της οικογένειας Enterobacteriaceae τα οποία είναι, με εξαίρεση το Plesiomonas shigelloides, αρνητικά στην οξειδάση. [Έχει προταθεί προσφάτως η συμπερίληψη του P. shigelloides στην οικογένεια Enterobacteriaceae με βάση τον προσδιορισμό αλληλουχίας του 16S rrna και επειδή περιέχει το εντεροβακτηριδιακό κοινό αντιγόνο. 1,2 Παλαιότερα, ο μικροοργανισμός αυτός, ο οποίος είναι θετικός στην οξειδάση, συμπεριλαμβανόταν στην οικογένεια Vibrionaceae.] Μέσω κλασικών βιοχημικών εξετάσεων και, τελικά, μιας ποικιλίας εξετάσεων επιβεβαίωσης για επιλεγμένους μικροοργανισμούς, είναι δυνατό να εκτελεστεί η ταυτοποίηση των κλινικώς σημαντικών τάξεων αζυμωτικών, θετικών ή αρνητικών στην οξειδάση, καθώς και ζυμωτικών, θετικών στην οξειδάση, Gram αρνητικών βακτηριδίων με το σύστημα BBL Oxi/Ferm Tube II. Το BBL Oxi/Ferm Tube II είναι ένα αυτοδύναμο, διαμερισματοποιημένο πλαστικό σωληνάριο που περιέχει δώδεκα διαφορετικά υλικά καλλιέργειας, τα οποία επιτρέπουν τον προσδιορισμό 14 βιοχημικών αντιδράσεων. Το σύρμα ενοφθαλμισμού που εσωκλείεται στη συσκευασία επιτρέπει τον ενοφθαλμισμό όλων των διαμερισμάτων σε ένα μόνο βήμα από μία ή λίγες μεμονωμένες αποικίες ενός απομονωμένου στελέχους. Επιπλέον, χρειάζεται εξωτερική εξέταση οξειδάσης. Μετά από 48 ώρες επώασης, γίνεται η ανάγνωση των αποτελεσμάτων και καταγράφονται όλες οι θετικές αντιδράσεις. Ο πίνακας αποτελεσμάτων και το διάγραμμα χρωματικών αντιδράσεων επιτρέπουν ένα ταχύ έλεγχο των θετικών αντιδράσεων που λαμβάνονται. Οι επιλεγμένοι θετικοί αριθμοί αθροίζονται και κατόπιν εντοπίζεται ο σύνθετος αριθμός στο εγχειρίδιο βιοκωδικών του BBL Oxi/Ferm Tube II για την ταυτοποίηση των μικροοργανισμών. Όπου παρατίθενται δύο ή περισσότεροι μικροοργανισμοί, παρέχονται επίσης οι εξετάσεις επιβεβαίωσης που απαιτούνται για περαιτέρω ταυτοποίησή τους. Το ακόλουθο διάγραμμα ροής παρουσιάζει τον τρόπο χρήσης της εξέτασης οξειδάσης για τη διαφοροποίηση των μελών της οικογένειας Enterobacteriaceae από αυτά τα ζυμωτικά, θετικά στην οξειδάση, καθώς και από τα αζυμωτικά, θετικά ή αρνητικά στην οξειδάση, Gram αρνητικά βακτηρίδια και όταν χρησιμοποιείται το BBL Oxi/Ferm Tube II ή το BBL Enterotube II: Καθαρή καλλιέργεια σε μη εκλεκτικό υλικό καλλιέργειας Εξέταση οξειδάσης θετική αρνητική Ενοφθαλμισμός του BBL Oxi/Ferm Tube II Ενοφθαλμισμός του BBL Enterotube II Αναερόβια εξέταση γλυκόζης Εξέταση γλυκόζης Θετική Αρνητική Θετική Αρνητική* Achromobacter spp., Enterobacteriaceae Acinetobacter spp., Alcaligenes spp., Bordetella Stenotrophomonas bronchiseptica, Moraxella maltophilia κ.λπ. spp., Pasteurella spp., κ.λπ. Aeromonas spp., Plesiomonas shigelloides, Vibrio spp. * Τα είδη αυτά είναι δυνατόν επίσης να ταυτοποιηθούν με το σύστημα BBL Enterotube II, αλλά η χρήση του BBL Oxi/Ferm Tube II ενδέχεται να είναι απαραίτητη για επιβεβαίωση. IA

2 ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ BBL Oxi/Ferm Tube II Υποστρώματα και άλλα δραστικά συστατικά (που περιέχονται σε κατάλληλα στερεά, βασικά υλικά καλλιέργειας), καθώς και χρώση των μη ενοφθαλμισμένων υλικών καλλιέργειας: Υλικό καλλιέργειας 1 (Ana-Gluc): Γλυκόζη (10,0 g/l), με κυανό της βρωμοθυμόλης ως δείκτη του ph. Το υλικό καλλιέργειας καλύπτεται με κηρό για την παροχή αναερόβιων συνθηκών. Μη ενοφθαλμισμένο: πράσινο. Υλικό καλλιέργειας 2 (Αργινίνη): Αργινίνη (10,0 g/l), με μωβ της βρωμοκρεζόλης ως δείκτη του ph. Το υλικό καλλιέργειας καλύπτεται με κηρό για την παροχή αναερόβιων συνθηκών. Μη ενοφθαλμισμένο: κίτρινο. Υλικό καλλιέργειας 3 (Λυσίνη): Λυσίνη (10,0 g/l), με μωβ της βρωμοκρεζόλης ως δείκτη του ph. Το υλικό καλλιέργειας καλύπτεται με κηρό για την παροχή αναερόβιων συνθηκών. Μη ενοφθαλμισμένο: κίτρινο. Υλικό καλλιέργειας 4 (Λακτόζη/N 2 ): Λακτόζη (20,0 g/l), νιτρικό κάλιο (2,0 g/l) και νιτρώδες νάτριο (0,5 g/l), σε συνδυασμό με ερυθρό της φαινόλης ως δείκτη του ph και καλυμμένο με κηρό, έτσι ώστε να επιτρέπεται η ανίχνευση τυχόν σχηματισμού αερίου. Μη ενοφθαλμισμένο: ερυθρό. Υλικό καλλιέργειας 5 (Σακχαρόζη/Ινδόλη): Σακχαρόζη (15,0 g/l) και θρυπτοφάνη (1,2 g/l), με κυανό της βρωμοθυμόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλμισμένο: πράσινο. Υλικό καλλιέργειας 6 (Ξυλόζη): Ξυλόζη (10,0 g/l), με κυανό της βρωμοθυμόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλμισμένο: πράσινο. Υλικό καλλιέργειας 7 (Aer-Gluc): Γλυκόζη (10,0 g/l), με κυανό της βρωμοθυμόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλμισμένο: πράσινο. Υλικό καλλιέργειας 8 (Μαλτόζη): Μαλτόζη (10,0 g/l), με κυανό της βρωμοθυμόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλμισμένο: πράσινο. Υλικό καλλιέργειας 9 (Μαννιτόλη): Μαννιτόλη (10,0 g/l), με κυανό της βρωμοθυμόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλμισμένο: πράσινο. Υλικό καλλιέργειας 10 (PA): Φαινυλαλανίνη (1,0 g/l) και κιτρικό σιδηρο(ιιι)αμμώνιο (1,0 g/l) σε κατάλληλο βασικό υλικό καλλιέργειας. Μη ενοφθαλμισμένο: μπεζ. Υλικό καλλιέργειας 11 (Ουρία): Ουρία (20,0 g/l), με ερυθρό της φαινόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλμισμένο: μπεζ, ενδέχεται να έχει αχνή τριανταφυλλί απόχρωση. Υλικό καλλιέργειας 12 (Κιτρικό): Κιτρικό νάτριο (2,0 g/l), με κυανό της βρωμοθυμόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλμισμένο: πράσινο. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τα σωληνάρια εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, αποκόλληση του κηρού από τα αντίστοιχα υλικά καλλιέργειας, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Οποιαδήποτε από τις ακόλουθες συνθήκες ενδέχεται να επηρεάσει την ορθότητα του BBL Oxi/Ferm Tube II: αφυδάτωση ή υγροποίηση, αποκόλληση του κηρού από τις επιφάνειες των υλικών καλλιέργειας, οποιαδήποτε μεταβολή των χρωμάτων των υλικών καλλιέργειας από εκείνα που υποδεικνύονται στην παράγραφο Μη ενοφθαλμισμένο στην ενότητα ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις άσηπτες διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε το BBL Oxi/Ferm Tube II στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στο αρχικό κουτί του, έως τη στιγμή της χρήσης. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα σωληνάρια είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Τα σωληνάρια από ανοιγμένες συσκευασίες είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν έως την ημερομηνία λήξης. Τα ανοιγμένα σωληνάρια θα πρέπει να χρησιμοποιούνται αμέσως. IA

3 ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε το BBL Oxi/Ferm Tube II με τα στελέχη που αναφέρονται παρακάτω. Για τον ενοφθαλμισμό, την επώαση και την ανάγνωση, προχωρήστε όπως περιγράφεται στην ενότητα Διαδικασία της εξέτασης. Μικροοργανισμοί * Ana-Gluc. Αργινίνη Λυσίνη Λακτόζη N2 Σακχαρόζ η Ινδόλη Ξυλόζη Aer-Gluc. Μαλτόζη Μαννιτόλη Φαινυλαλ ανίνη Ουρία Κιτρικό Οξειδάση Τυπικοί βιοκωδικοί Ac. lwoffii ATCC Aer. hydrophila / / ATCC 7966 B. bronchiseptica ATCC Br. diminuta ATCC Pl. shigelloides +/ / ATCC Ps. aeruginosa / / ATCC Ps. aeruginosa ATCC St. maltophilia ATCC / / / / * Ac. = Acinetobacter, Aer. = Aeromonas, B. = Bordetella, Br. = Brevundimonas, Pl. = Plesiomonas, Ps. = Pseudomonas, St. = Stenotrophomonas ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BBL Oxi/Ferm Tube II. Μικροβιολογικά ελεγμένο. Πίνακας αποτελεσμάτων, συμπεριλαμβανομένου ενός διαγράμματος χρωματικών αντιδράσεων για το BBL Oxi/Ferm Tube II. Υλικά που δεν παρέχονται Εγχειρίδιο βιοκωδικών του BBL Oxi/Ferm Tube II, αριθμός εγγράφου CM CE. Indole Dropper Reagent (ινδόλης Kovacs), 50 φύσιγγες, αρ. κατ ) Oxidase Dropper Reagent, 50 φύσιγγες, αρ. κατ Εναλλακτικά, είναι δυνατό να χρησιμοποιηθεί η εξέταση οξειδάσης BD DrySlide (αρ. κατ , 75 εξετάσεις). Υλικά και αντιδραστήρια για την εκτέλεση των συμπληρωματικών εξετάσεων, όπως αναφέρεται στο εγχειρίδιο βιοκωδικών του BBL Oxi/Ferm Tube II. Τύποι δειγμάτων Το BBL Oxi/Ferm Tube II είναι ένα σύστημα βιοχημικής ταυτοποίησης και δεν πρέπει να χρησιμοποιείται απευθείας με κλινικά δείγματα. Χρησιμοποιείτε απομονωμένα στελέχη από κατάλληλα μη εκλεκτικά υλικά καλλιέργειας (δείτε την ενότητα Διαδικασία της εξέτασης). Το BBL Oxi/Ferm Tube II είναι δυνατό να χρησιμοποιηθεί για την ταυτοποίηση αζυμωτικών, θετικών ή αρνητικών στην οξειδάση, καθώς και ζυμωτικών, θετικών στην οξειδάση, Gram αρνητικών ραβδίων που απομονώνονται από οποιοδήποτε δείγμα. Διαδικασία της εξέτασης Για τον ενοφθαλμισμό του BBL Oxi/Ferm Tube II, χρησιμοποιείται ανάπτυξη από μη εκλεκτικά υλικά καλλιέργειας όπως το BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood ή το BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood. Η καλλιέργεια που χρησιμοποιείται για τον ενοφθαλμισμό πρέπει να είναι ηλικίας τουλάχιστον 18 ωρών, αλλά γενικά όχι μεγαλύτερης από 48 ώρες. Μόνο σε πολύ σπάνιες περιπτώσεις, ενδέχεται να χρειαστεί μεγαλύτερο χρονικό διάστημα για την παραγωγή επαρκούς ανάπτυξης από τους μικροοργανισμούς για τον ενοφθαλμισμό. Βεβαιωθείτε ότι το απομονωμένο στέλεχος που θα ταυτοποιηθεί με το BBL Oxi/Ferm Tube II είναι μια καθαρή καλλιέργεια ενός Gram αρνητικού ραβδίου. 1. Πριν από τον ενοφθαλμισμό του BBL Oxi/Ferm Tube II, πρέπει να εκτελεστεί εξέταση οξειδάσης. Η εξέταση αυτή βοηθά το μικροβιολόγο να αποφασίσει εάν ο εν λόγω μικροοργανισμός είναι μέλος της οικογένειας Enterobacteriaceae ή ένα οξειδωτικό-ζυμωτικό Gram-αρνητικό ραβδίο και εάν θα ενοφθαλμίσει ένα BBL Enterotube II ή ένα BBL Oxi/Ferm Tube II. Εφαρμόστε μία έως τρεις IA

4 σταγόνες Oxidase Dropper Reagent σε ένα κομμάτι λευκού διηθητικού χαρτιού που έχει τοποθετηθεί μέσα στο καπάκι ενός τριβλίου Petri. Με ένα πλαστικό κρίκο, αφαιρέστε μια ορατή ποσότητα ανάπτυξης από μία ή διάφορες πανομοιότυπες αποικίες του απομονωμένου στελέχους από την πλάκα, η οποία χρησιμοποιείται για χορήγηση του ενοφθαλμίσματος για ενοφθαλμισμό του BBL Oxi/Ferm Tube II. Αναμείξτε ελαφρά το ενοφθάλμισμα με την κηλίδα αντιδραστηρίου οξειδάσης επάνω στο διηθητικό χαρτί και περιμένετε επί 15 έως 30 δευτερόλεπτα. Η εμφάνιση σκούρου κυανού έως μαύρου χρώματος υποδηλώνει θετική αντίδραση οξειδάσης. Μη χρησιμοποιείτε αποτελέσματα που λαμβάνονται μετά από 1 λεπτό! Εναλλακτικά, είναι δυνατό να χρησιμοποιήσετε την εξέταση οξειδάσης BD DrySlide. Ακολουθείτε τις οδηγίες που συνοδεύουν το προϊόν αυτό. 2. Ετοιμάστε ένα φύλλο από τον πίνακα κωδικοποίησης για το απομονωμένο στέλεχος, σημειώνοντας το όνομα του ασθενούς, τον αριθμό του δείγματος και την ημερομηνία. 3. Σημειώστε το αποτέλεσμα της εξέτασης οξειδάσης στο φύλλο αυτό. 4. Πάρτε ένα σωληνάριο BBL Oxi/Ferm Tube II και σημειώστε το όνομα του ασθενούς, τον αριθμό δείγματος και την ημερομηνία στην ετικέτα. 5. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια. Το άκρο του σύρματος ενοφθαλμισμού βρίσκεται κάτω από το λευκό καπάκι. Χωρίς να αποστειρώσετε σε φλόγα το σύρμα, επιλέξτε μια καλά απομονωμένη αποικία με το άκρο του σύρματος (Εικόνα 1). Μην τρυπήσετε το άγαρ. 6. Ενοφθαλμίστε το BBL Oxi/Ferm Tube II περιστρέφοντας πρώτα το σύρμα και κατόπιν αποσύροντας το σύρμα μέσω όλων των διαμερισμάτων με περιστροφική κίνηση (Εικόνα 2). 7. Επανεισαγάγετε το σύρμα (χωρίς αποστείρωση) στο BBL Oxi/Ferm Tube II έως ότου η εγκοπή στο σύρμα ευθυγραμμιστεί με το άνοιγμα του σωληναρίου (Εικόνα 3). Το άκρο του σύρματος πρέπει να διακρίνεται στο διαμέρισμα του κιτρικού. Σπάστε το σύρμα στην εγκοπή, λυγίζοντάς το. Το τμήμα του σύρματος που απομένει στο σωληνάριο διατηρεί αναερόβιες συνθήκες, οι οποίες είναι απαραίτητες για αληθή ζύμωση. 8. Με το αποσπασμένο τμήμα του σύρματος, διανοίξτε οπές μέσω του λεπτού φύλλου που καλύπτει τις εισόδους αέρα των ακόλουθων διαμερισμάτων: σακχαρόζης/ινδόλης, ξυλόζης, αερόβιας γλυκόζης (Aer-Gluc), μαλτόζης, μαννιτόλης, PA, ουρίας και κιτρικού (Εικόνα 4). Επανατοποθετήστε και τα δύο καπάκια. 9. Επωάστε στους C επί 48 ώρες, με το BBL Oxi/Ferm Tube II να κείτεται στην επίπεδη επιφάνειά του ή σε όρθια θέση. Αφήστε ένα κενό για την κυκλοφορία του αέρα μεταξύ των επωαζόμενων σωληναρίων. Σημειωτέον ότι απαιτείται επιθεώρηση του διαμερίσματος ουρίας μετά από 18 έως 24 επώασης, επειδή οι πληροφορίες αυτές ενδέχεται να χρειάζονται ως εξέταση επιβεβαίωσης ( ταχεία εξέταση ουρεάσης, δείτε το εγχειρίδιο βιοκωδικών του BBL Oxi/Ferm Tube II). Αποτελέσματα Για την ταυτοποίηση του απομονωμένου στελέχους, ακολουθήστε τις οδηγίες που δίνονται παρακάτω. Στον πίνακα 1 παρέχονται πληροφορίες σχετικά με την εμφάνιση των θετικών και των αρνητικών αντιδράσεων. 1. Μετά από 24 ώρες επώασης, παρατηρήστε μόνο την αντίδραση ουρίας και καταγράψτε ένα θετικό αποτέλεσμα, το οποίο ενδέχεται να χρειάζεται για αυτό το απομονωμένο στέλεχος ως συμπληρωματική εξέταση (ταχεία εξέταση ουρεάσης). 2. Μετά από 48 ώρες επώασης, ερμηνεύστε όλες τις αντιδράσεις. Με εξαίρεση την εξέταση ινδόλης, παρατηρήστε τις αντιδράσεις με διαδοχικό τρόπο, με σύγκριση των χρωμάτων των υλικών καλλιέργειας στο σωληνάριο μετά την επώαση, με εκείνα που δίνονται στο χρωματικό σχήμα στο εξώφυλλο του πίνακα κωδικοποίησης και (τελικά) με ένα μη ενοφθαλμισμένο BBL Oxi/Ferm Tube II, το οποίο πρέπει να φθάσει πρώτα σε θερμοκρασία δωματίου (Εικόνα 5). 3. Υποδείξτε κάθε θετικό αποτέλεσμα εξέτασης, συμπεριλαμβανομένου ενός θετικού αποτελέσματος ουρίας 48 ωρών, σημειώνοντας με κύκλο τον αριθμό που εμφανίζεται κάτω από το κατάλληλο διαμέρισμα στον πίνακα αποτελεσμάτων (Εικόνα 6). 4. Για την εκτέλεση της εξέτασης ινδόλης: Τοποθετήστε το BBL Oxi/Ferm Tube II οριζόντια στον πάγκο ή κάθετα σε βάση στήριξης με το διαμέρισμα αντίδρασης γλυκόζης στραμμένο προς τα κάτω. Χρησιμοποιώντας μία βελόνα ή το αποσπασμένο άκρο ενός σύρματος ενοφθαλμισμού BBL Oxi/Ferm Tube II ή μέσω τήξης με χρήση ενός θερμού σύρματος ενοφθαλμισμού, πραγματοποιήστε διάτρηση ή διάνοιξη μίας οπής διαμέτρου 3 4 mm με τη μέθοδο της τήξης στην πλαστική μεμβράνη που βρίσκεται πάνω από τα διαμερίσματα αντίδρασης Σακχαρόζη/Ινδόλη. 5. Προσθέστε 3-4 σταγόνες αντιδραστηρίου Kovacs (αρ. κατ ) στο διαμέρισμα αντίδρασης Σακχαρόζη/Ινδόλη και προσθέστε το αντιδραστήριο μέσα στο διαμέρισμα. Αφήστε το αντιδραστήριο να έλθει σε επαφή με την επιφάνεια του υλικού καλλιέργειας. Τυχόν θετική εξέταση υποδηλώνεται από την εμφάνιση ερυθρού χρώματος στο προστεθέν αντιδραστήριο εντός 10 δευτερολέπτων. IA

5 6. Προσθέστε όλους τους αριθμούς που βρίσκονται σε κύκλο εντός κάθε τμήματος με αγκύλες και σημειώστε το άθροισμα αυτό στο χώρο που παρέχεται κάτω από τα βέλη (Εικόνα 6). 7. Διαβάστε τους πέντε αριθμούς στους χώρους αυτούς ως αριθμό βιοκωδικού (π.χ ). 8. Εντοπίστε αυτόν τον πενταψήφιο αριθμό στο εγχειρίδιο βιοκωδικών του BBL Oxi/Ferm Tube II. Ο αριθμός αυτός χρησιμοποιείται για την ταυτοποίηση του γένους ή/και του είδους του μικροοργανισμού. Για τον αριθμό κωδικού που δίνεται στο παραπάνω παράδειγμα και στην εικόνα 6, λαμβάνεται η ταυτοποίηση του Pseudomonas aeruginosa. 9. Εάν εμφανίζονται περισσότερα από ένα ονόματα μικροοργανισμών πίσω από έναν αριθμό προφίλ, πρέπει να εκτελούνται οι εξετάσεις επιβεβαίωσης που δίνονται στο εγχειρίδιο βιοκωδικών για τη διαφοροποίηση μεταξύ των μικροοργανισμών αυτών. Εικόνα 1 Εικόνα 2 Εικόνα 3 Εικόνα 4 Εικόνα 5 Εικόνα 6: Πίνακας αποτελεσμάτων του BBL Oxi/Ferm Tube II IA

6 Πίνακας 1: Εμφάνιση αρνητικών και θετικών αντιδράσεων με το BBL Oxi/Ferm Tube II Αντίδραση Αρνητική Θετική Ειδικές παρατηρήσεις ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 1 Αναερόβια γλυκόζης Διϋδρολάση της αργινίνης Αποκαρβοξυ λάση της λυσίνης Πράσινο, κυανό Κίτρινο, γκρι Κίτρινο Μωβ Η θετική ζύμωση παρουσιάζεται με μεταβολή του χρώματος από πράσινο (ουδέτερο) σε κίτρινο (οξύ). Τα περισσότερα οξειδωτικάζυμωτικά Gram-αρνητικά ραβδία είναι αρνητικά. Το πράσινο και το κυανό χρώμα θεωρούνται αρνητικές αντιδράσεις. ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 2 Η αποκαρβοξυλίωση της αργινίνης έχει ως αποτέλεσμα το σχηματισμό αλκαλικών τελικών προϊόντων. Αυτό υποδηλώνεται από μεταβολή του χρώματος του δείκτη μωβ της βρωμοκρεζόλης από κίτρινο (οξύ) σε μωβ (αλκαλικό). Το γκρι είναι αρνητική αντίδραση. ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 3 Κίτρινο Μωβ Η αποκαρβοξυλίωση της λυσίνης έχει ως αποτέλεσμα το σχηματισμό αλκαλικών τελικών προϊόντων. Αυτό υποδηλώνεται από μεταβολή του χρώματος του μωβ της βρωμοκρεζόλης στο υλικό καλλιέργειας από κίτρινο (οξύ) σε μωβ (αλκαλικό). Το γκρι είναι αρνητική αντίδραση. ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 4 Λακτόζη Ερυθρό Κίτρινο Η ζύμωση της λακτόζης παρουσιάζεται με μεταβολή του χρώματος από ερυθρό (ουδέτερο) σε κίτρινο (οξύ). Τα περισσότερα οξειδωτικάζυμωτικά Gram-αρνητικά ραβδία είναι αρνητικά. Παραγωγή αερίου N 2 Σακχαρόζη Πράσινο, κυανοπράσ ινο ή κυανό Ανύψωση ή διαχωρισμ ός της επίστρωση ς κηρού Κίτρινο Η παραγωγή αερίου αζώτου καθίσταται εμφανής από την ανύψωση ή το διαχωρισμό της επίστρωσης κηρού από την επιφάνεια του άγαρ. Περιστασιακά, η παραγωγή αερίου αζώτου ανιχνεύεται επίσης από το διαχωρισμό του άγαρ από το τοίχωμα του διαμερίσματος. ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 5 Η οξείδωση αυτού του υδατάνθρακα καθίσταται εμφανής από τη μεταβολή του χρώματος από πράσινο (ουδέτερο) σε κίτρινο (οξύ). Το πράσινο και το κυανό χρώμα θεωρούνται αρνητικές αντιδράσεις. Ινδόλη Άχρωμο Ερυθρό Όλες οι αντιδράσεις του BBL Oxi/Ferm Tube II πρέπει να καταγράφονται πριν από την προσθήκη του αντιδραστηρίου ινδόλης Kovacs. Η παραγωγή ινδόλης από το μεταβολισμό της θρυπτοφάνης από το βακτηριδιακό ένζυμο θρυπτοφανάση ανιχνεύεται από την εμφάνιση ροζ έως ερυθρού χρώματος μετά την προσθήκη του αντιδραστηρίου Kovacs. Το αντιδραστήριο προστίθεται στο διαμέρισμα μετά από 48 ώρες επώασης του σωληναρίου.* ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑΤΑ 6, 7, 8, 9 Ξυλόζη, αερόβια γλυκόζης, μαλτόζη, μαννιτόλη Πράσινο, Κίτρινο κυανοπράσ ινο ή κυανό PA Μπεζ Ανοικτό καστανό Η οξείδωση της ξυλόζης, της γλυκόζης, της μαλτόζης και της μαννιτόλης καθίστανται εμφανείς από τη μεταβολή του χρώματος από πράσινο (ουδέτερο) σε κίτρινο (οξύ). Το πράσινο και το κυανό χρώμα θεωρούνται αρνητικές αντιδράσεις. ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 10 Η φαινυλαλανίνη αποδομείται σε φαινυλοπυροσταφυλικό οξύ, το οποίο παράγει ένα καστανωπό σύμπλοκο με άλατα του τρισθενούς σιδήρου. Οποιαδήποτε καστανή απόχρωση πρέπει να κατατάσσεται ως θετική αντίδραση. ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 11 Ουρία Μπεζ Μωβ Η ουρεάση, ένα ένζυμο που παράγεται από διάφορους μικροοργανισμούς, υδρολύει την ουρία σε αμμωνία προκαλώντας τη μετατόπιση του χρώματος του δείκτη ερυθρού της φαινόλης στο υλικό καλλιέργειας από μπεζ (όξινο) σε ροζ ή μωβ (αλκαλικό). Το αχνό τριανταφυλλί χρώμα πρέπει να θεωρείται αρνητική αντίδραση. IA

7 ΔΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 12 Κιτρικό Πράσινο Κυανό Με την εξέταση αυτή ανιχνεύονται εκείνοι οι μικροοργανισμοί που διαθέτουν την ικανότητα χρήσης κατανάλωσης κιτρικών, με τη μορφή τωνμετά νατρίου αλάτων του, ως τη μοναδική πηγή άνθρακα. Οι μικροοργανισμοί που διαθέτουν την ικανότητα χρήσης κατανάλωσης κιτρικών παράγουν αλκαλικούς μεταβολίτες, οι οποίοι μεταβάλλουν το ph του υλικού καλλιέργειας, με αποτέλεσμα τη μεταβολή του χρώματος του δείκτη κυανού της βρωμοθυμόλης από πράσινο (ουδέτερο) σε κυανό (αλκαλικό). Οποιαδήποτε κυανή απόχρωση πρέπει να κατατάσσεται ως θετική. * Το αντιδραστήριο ινδόλης Kovacs είναι δυνατό να διαλύσει την πυορουβίνη, γεγονός που προκαλεί την εμφάνιση ερυθρωπού-καστανού αποχρωματισμού, ο οποίος ενδέχεται να ερμηνευτεί εσφαλμένα ως θετική αντίδραση ινδόλης. Αυτή η πηγή σφάλματος εξαλείφεται με εφαρμογή του αντιδραστηρίου Kovacs κάτω από το πλαστικό λεπτό φύλλο και όχι απευθείας πάνω στο άγαρ. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το BBL Oxi/Ferm Tube II έχει σχεδιαστεί ειδικά για την ταυτοποίηση μη απαιτητικών, αζυμωτικών, θετικών ή αρνητικών στην οξειδάση, καθώς και ζυμωτικών, θετικών στην οξειδάση, Gram αρνητικών βακτηριδίων που απομονώνονται από κλινικά δείγματα. Σε διάφορες δημοσιεύσεις σχετικά με την απόδοση του συστήματος, υποδεικνύεται ορθότητα ταυτοποίησης 87 έως 93%. 3-5 Προκειμένου να επιτευχθεί σωστή ταυτοποίηση, πρέπει να ακολουθούνται αυστηρά οι διαδικασίες που δίνονται στην ενότητα Διαδικασία της εξέτασης. Εάν λαμβάνονται αριθμοί κωδικών που χρειάζονται επιπλέον εξετάσεις επιβεβαίωσης, οι εξετάσεις αυτές πρέπει να εκτελούνται όπως υποδεικνύεται στο ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 2 και 3 του εγχειριδίου βιοκωδικών. Χαρακτηριστικά απόδοσης Ορθότητα: Σε μια μελέτη απόδοσης, αναλύθηκαν 220 προηγουμένως ταυτοποιηθέντα στελέχη (συμπεριλαμβανομένων γνωστών καλλιεργειών του ATCC) με χρήση του συστήματος ταυτοποίησης BBL Oxi/Ferm Tube II. Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν είχαν ως εξής: τρία από τα δείγματα απέτυχαν να δώσουν ταυτοποίηση με ανταγωνιστική μέθοδο, δέκα από τα δείγματα απέτυχαν να δώσουν ταυτοποίηση με το BBL Oxi/Ferm Tube II, έξι από τα δείγματα έδωσαν αποτελέσματα πανομοιότυπου γένους αλλά διαφορετικών ειδών σε σύγκριση με την ανταγωνιστική μέθοδο και πέντε από τα δείγματα έδωσαν αποτελέσματα διαφορετικού γένους σε σύγκριση με την ανταγωνιστική μέθοδο. Τα δεδομένα αυτά υποδηλώνουν συμφωνία 97% μεταξύ των δύο μεθόδων, με βάση τόσο το γένος όσο και το είδος. Τα δείγματα της μελέτης συνοψίζονται στον πίνακα 2. Παρέχεται μια λίστα των γενών, των ειδών, του αριθμού των δειγμάτων που εξετάστηκαν και το ποσοστό των μικροοργανισμών που δίνουν θετικές βιοχημικές αντιδράσεις σε κάθε διαμέρισμα του BBL Oxi/Ferm Tube II. Πίνακας 2: Αποτελέσματα της αξιολόγησης απόδοσης Αρ. εξετασθέντ ANA-GLU ARG LYS LAC N2 SUC IND XYL AER-GLU MAL MAN PA URE CIT OXI Acinetobacter A. calcoaceticus A. Iwoffii* Achromobacter A. xylosoxidans Aeromonas Aer. hydrophila* Alcaligenes Al. denitrificans* IA

8 Αρ. εξετασθέντ ANA-GLU ARG LYS LAC N2 SUC IND XYL AER-GLU MAL MAN PA URE CIT OXI Bordetella B. bronchiseptic a Flavobacterium F species Moraxella M. species Pasteurella P. multocida Plesiomonas Pl. shigelloides Pseudomonas and related genera Delftia acidovorans Burkh cepacia Ps. aeruginosa Ps. fluorescens Ps mendocina Ps putida Ps species Ps stutzeri Ralstonia pickettii St maltophili a Vibrio V. alginolyticus V. parahaemolyticus Συντμήσεις: A.= Achromobacter, Aer.= Aeromonas, Al.= Alcaligenes, B.= Bordetella, F.= Flavobacterium, M.= Moraxella, P.= Pasteurella, Pl.= Plesiomonas, Burkh.= Burkholderia, Ps.= Pseudomonas, St.= Stenotrophomonas, V.= Vibrio. Περιορισμοί της διαδικασίας Το BBL Oxi/Ferm Tube II έχει σχεδιαστεί για τις τάξεις (γένη και είδη) που παρέχονται. Τάξεις διαφορετικές από εκείνες που παρατίθενται στον πίνακα 3 δεν προορίζονται για χρήση στο σύστημα αυτό. Οι αριθμοί προφίλ που φέρουν τη σήμανση L στο εγχειρίδιο βιοκωδικών έχουν ληφθεί με περιορισμένο αριθμό στελεχών μόνον. Η πιθανότητα των αριθμών αυτών δεν έχει προσδιοριστεί. Οι βιοκωδικοί του BBL Oxi/Ferm Tube II δεν είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό της φαινοτυπικής ταυτότητας μεταξύ απομονωμένων στελεχών από τα ίδια ή διαφορετικά δείγματα. Τα βιοχημικά αποτελέσματα που λαμβάνονται με το BBL Oxi/Ferm Tube II ενδέχεται να διαφέρουν από άλλες μεθόδους και δημοσιευμένο υλικό. IA

9 Οι βιοκωδικοί του BBL Oxi/Ferm Tube II δεν είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό της φαινοτυπικής ταυτότητας μεταξύ απομονωμένων στελεχών από τα ίδια ή διαφορετικά δείγματα. Η ταυτοποίηση των Gram αρνητικών βακτηριδίων πρέπει να γίνεται λαμβάνοντας υπόψη τα επιπλέον χαρακτηριστικά, όπως την πηγή του δείγματος, το ιστορικό του ασθενούς, την αποικιακή και τη μικροσκοπική μορφολογία, την ορολογία και τις μορφολογίες ευαισθησίας σε αντιμικροβιακούς παράγοντες. Η ταυτοποίηση σπάνιων απομονωμένων στελεχών πρέπει να επαναλαμβάνεται ή να εκτελούνται επιπλέον εξετάσεις για την επαλήθευση της ταυτοποίησης τέτοιων μικροοργανισμών. Μερικά στελέχη μικροοργανισμών ενδέχεται να εμφανίζουν ατυπικές βιοχημικές αντιδράσεις λόγω ασυνήθων θρεπτικών απαιτήσεων ή μεταλλάξεων και η ταυτοποίησή τους ενδέχεται να είναι δυσχερής. Μερικοί μικροοργανισμοί ενδέχεται να χρειάζονται περισσότερο από 48 ώρες επώασης για σωστή ταυτοποίηση. Παρότι έχει προταθεί προσφάτως η συμπερίληψη του Plesiomonas shigelloides στην οικογένεια Enterobacteriaceae με βάση τον προσδιορισμό αλληλουχίας του 16S rrna και επειδή περιέχει το εντεροβακτηριδιακό κοινό αντιγόνο, ο μικροοργανισμός αυτός συμπεριλαμβάνεται στη βάση δεδομένων του BBL Oxi/Ferm Tube II. 1,2 Πίνακας 3: Επισκόπηση των γενών και των ειδών που περιέχονται στη βάση δεδομένων του BBL Oxi/Ferm Tube II (αναθεώρηση: Ιούλιος 2003) ΤΑΞΕΙΣ ΜΙΚΡΟΟΡΓΑΝΙΣΜΩΝ Acinetobacter baumannii/calcoaceticusa Acinetobacter haemolyticusa Acinetobacter lwoffiia Aeromonas caviae Aeromonas hydrophila Aeromonas veronii bv. sobria Aeromonas veronii bv. veronii Achromobacter xylosoxidans subsp. denitrificans Achromobacter xylosoxidans subsp. xylosoxidans Alcaligenes faecalis Alcaligenes faecalis (odorans) Alcaligenes spp. Bordetella bronchiseptica Brevundimonas diminuta Brevundimonas vesicularis Burkholderia cepacia, σύμπλοκο β Burkholderia pseudomallei Chromobacterium violaceum Chryseobacterium indologenes Chryseobacterium meningosepticum Comamonas testosteroni/terrigena Delftia acidovorans Empedobacter brevis Flavobacterium spp Kingella denitrificans Moraxella spp. Myroides odoratus Ochrobactrum anthropi Oligella urethralis Pasteurella multocida Plesiomonas shigelloidesc Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas alcaligenes Pseudomonas fluorescens Pseudomonas mendocina Προηγούμενες ονομασίες και επιπλέον πληροφορίες Acinetobacter calcoaceticus Aeromonas sobria Aeromonas veronii Alcaligenes denitrificans Achromobacter xylosoxidans, Alcaligenes xylosoxidans Alcaligenes odorans Pseudomonas diminuta Pseudomonas vesicularis Burkholderia cepacia, Pseudomonas cepacia Pseudomonas pseudomallei Flavobacterium indologenes Flavobacterium meningosepticum Pseudomonas testosteroni Comamonas acidovorans, Pseudomonas acidovorans Flavobacterium breve Ενδέχεται να περιλαμβάνει είδη με νέα ονομασία γένους, π.χ. Myroides, Chryseobacterium, Sphingobacterium κ.λπ. d Ενδέχεται να περιλαμβάνει το Psychrobacter phenylpyruvicus (πρώην Moraxella phenylpyruvica) d Flavobacterium odoratum Ομάδα Vd Moraxella urethralis IA

10 ΤΑΞΕΙΣ ΜΙΚΡΟΟΡΓΑΝΙΣΜΩΝ Προηγούμενες ονομασίες και επιπλέον πληροφορίες Pseudomonas oryzihabitans Pseudomonas putida Pseudomonas spp. Pseudomonas stutzeri Ralstonia pickettii Pseudomonas pickettii Rhizobium (Agrobacterium) radiobacter Agrobacterium tumefaciens Shewanella putrefaciens Pseudomonas putrefaciens Sphingobacterium multivorum Flavobacterium multivorum Sphingomonas paucimobilis Pseudomonas paucimobilis Stenotrophomonas maltophilia Pseudomonas maltophilia, Xanthomonas maltophilia Vibrio alginolyticus Vibrio cholerae Vibrio mimicus Vibrio parahaemolyticus Vibrio vulnificus α Το γένος Acinetobacter αποτελείται από 23 γενωμικά είδη (genomospecies). Τα περισσότερα κλινικά, οξειδωτικά της γλυκόζης στελέχη του Acinetobacter είναι το A. baumannii. Τα περισσότερα αιμολυτικά στελέχη είναι το A. haemolyticus και τα περισσότερα αρνητικά στη γλυκόζη, μη αιμολυτικά στελέχη είναι το A. lwoffii. δ β Το Burkholderia cepacia αποτελείται από εννέα γενωμικά είδη. 6 γ Το Plesiomonas shigelloides προσφάτως μεταφέρθηκε στην οικογένεια Enterobacteriaceae, παρότι είναι θετικό στην οξειδάση. 6 δ Για λεπτομέρειες, συμβουλευτείτε τα αντίστοιχα κεφάλαια της αναφοράς 6. ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Abbott, S.L Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Plesiomonas, and other Enterobacteriaceae. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Martinez-Murcia, A.J., S. Beniloch, and M.D. Collins Pylogenetic interrelationships of members of the genera Aeromonas and Plesiomonas as determined by 16S ribosomal RNA sequencing: lack of congruence with results of DNA-DNA hybridizations. Int. J. Syst. Bacteriol. 42: Oberhofer, T.R Use of the API 20 E, Oxi/Ferm, and Minitek systems to identify nonfermentative and oxidase-positive fermentative bacteria: seven years of experience. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 1: Sanyal, S.C Evaluation of a test-kit (Oxi/Ferm system) for identification of vibrios. Zbl. Bakteriol. Hyg. A 251: Koestenblatt, E.K., D.H. Larone, and K.J. Pavletich Comparison of the Oxi/Ferm and N/F systems for identification of infrequently encountered nonfermentative and oxidase-positive fermentatitive bacilli. J. Clin. Microbiol. 15: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BBL Oxi/Ferm Tube II Αρ. κατ σωληνάρια ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: , Fax: Reception_Germany@europe.bd.com IA

11 BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo, BBL, Trypticase and DrySlide are trademarks of Becton, Dickinson and Company. Oxi/Ferm and Enterotube are trademarks of Becton Dickinson GmbH. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection Becton, Dickinson and Company IA