BD CLED Agar / MacConkey II Agar (Biplate)

Transcript

1 PA Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ ΕΤΟΙΜΑ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ PA Αναθ.: Jan BD CLED Agar / MacConkey II Agar (Biplate) ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖONTAI Το BD CLED Agar / MacConkey II Agar (Biplate) (Άγαρ BD CLED / Άγαρ MacConkey II (διπλό τρυβλίο)) χρησιμοποιείται για τη μικροβιολογική ανάλυση ούρων. Το CLED Agar είναι ένα διαφορικό υλικό καλλιέργειας για χρήση στην απομόνωση και την απαρίθμηση βακτηρίων στα ούρα. Το MacConkey II Agar είναι ένα εκλεκτικό και διαφορικό υλικό για την απομόνωση και διαφοροποίηση Enterobacteriaceae και διαφόρων άλλων κατά Gram αρνητικών ραβδίων από κλινικά και μη κλινικά δείγματα. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. CLED Agar: Το 1960, ο Sandys ανάφερε την ανάπτυξη μιας νέα μεθόδου για την αποτροπή της συρροής του Proteus σε στερεά υλικά με περιορισμό των ηλεκτρολυτών στο υλικό καλλιέργειας και τροποποιήθηκε αργότερα αρκετές φορές για χρήση σε καλλιέργεια ούρων. 1-3 Ονομάστηκε υλικό καλλιέργειας ανεπαρκές σε κυστίνη/λακτόζη/ηλεκτρολύτες (Cystine-Lactose-Electrolyte- Deficient - CLED) και αναφέρθηκε ότι είναι ιδανικό για βακτηριολογία ούρων. Τα θρεπτικά συστατικά στο CLED Agar παρέχονται από πεπτόνες και εκχύλισμα βοείου κρέατος. Η λακτόζη είναι μια πηγή παροχής ενέργειας για μικροοργανισμούς με ικανότητα χρήσης της με ζυμωτικό μηχανισμό. Το κυανό της βρωμοθυμόλης είναι ένας δείκτης του ph για τη διαφοροποίηση των ζυμωτικών της λακτόζης μικροοργανισμών από τους αζυμωτικούς της λακτόζης μικροοργανισμούς. Οι μικροοργανισμοί που ζυμώνουν τη λακτόζη μειώνουν το ph και μεταβάλλουν το χρώμα του υλικού καλλιέργειας από πράσινο σε κίτρινο. Η κυστίνη επιτρέπει την ανάπτυξη "νάνων αποικιών" κολοβακτηριδιόμορφων. 3 Οι πηγές των ηλεκτρολυτών είναι μειωμένες προκειμένου να ελαχιστοποιείται η συρροή των ειδών Proteus. MacConkey II Agar: Μία από τις παλαιότερες συνθέσεις υλικών για τη διαφοροποίηση των Enterobacteriaceae αναπτύχθηκε από τον MacConkey και δημοσιεύτηκε το 1900 και ,5 Η σύνθεση αυτή επινοήθηκε με τη γνώση ότι τα χολικά άλατα κατακρημνίζονται από οξέα και ότι ορισμένοι μικροοργανισμοί ζυμώνουν τη λακτόζη ενώ άλλοι δεν έχουν αυτή την ικανότητα. Αυτό το υλικό καλλιέργειας τροποποιήθηκε αρκετές φορές αργότερα. 6,7 Το άγαρ MacConkey είναι μόνον ελαφρώς εκλεκτικό επειδή η συγκέντρωση των χολικών αλάτων, η οποία αναστέλλει τους κατά Gram θετικούς μικροοργανισμούς, είναι χαμηλή σε σύγκριση με άλλα εντερικά υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία. Αυτό το υλικό καλλιέργειας συνιστάται για χρήση με κλινικά δείγματα που είναι πιθανόν να περιέχουν μεικτή μικροβιακή χλωρίδα, όπως ούρα και πολλά άλλα, επειδή επιτρέπει μια προκαταρκτική ομαδοποίηση των Enterobacteriaceae και άλλων κατά Gram αρνητικών ραβδίων σε ζυμωτικούς της λακτόζης και αζυμωτικούς της λακτόζης μικροοργανισμούς Η σύνθεση του MacConkey II Agar σχεδιάστηκε για τη βελτίωση της αναστολής των ειδών Proteus σμηνουργίας, ώστε να επιτυγχάνεται καλύτερη διαφοροποίηση των ζυμωτικών και αζυμωτικών στη λακτόζη οργανισμών, καθώς και ανώτερη ανάπτυξή τους. Στο MacConkey II Agar, οι πεπτόνες παρέχουν θρεπτικά συστατικά. Το κρυσταλλικό ιώδες αναστέλλει τα κατά Gram θετικά βακτηρίδια, ειδικά τους εντερόκοκκους και τους σταφυλόκοκκους. Η διαφοροποίηση μεταξύ των εντερικών μικροοργανισμών επιτυγχάνεται με το συνδυασμό της λακτόζης και του ουδέτερου ερυθρού δείκτη του ph. Παράγονται άχρωμες ή ρόδινες έως ερυθρές αποικίες ανάλογα με την ικανότητα του απομονωμένου οργανισμού να ζυμώσει τον υδατάνθρακα. Η παρουσία του CLED και MacConkey II Agar σε αυτό το διπλό τρυβλίο επιτρέπει τον καθορισμό της συνολικής μέτρησης και της απομόνωσης των κατά Gram αρνητικών και των κατά Gram θετικών βακτηρίων από δείγματα ούρων.

2 ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ CLED Agar / MacConkey II Agar (Biplate) Σύνθεση* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού CLED Agar PA MacConkey II Agar Παγκρεατικό προϊόν πέψης ζελατίν 4,0 g Παγκρεατικό προϊόν πέψης ζελατίνης 17,0 g Παγκρεατικό προϊόν πέψης καζεΐν 4,0 Παγκρεατικό προϊόν πέψης καζεΐνης 1,5 Εκχύλισμα βοείου κρέατος 3,0 Προϊόν πέψης ζωικού ιστού 1,5 Λακτόζη 10,0 Λακτόζη 10,0 L-κυστίνη 0,128 Χολικά άλατα 1,5 Κυανούν της βρωμοθυμόλης 0,02 Χλωριούχο νάτριο 5,0 Άγαρ 15,0 Ουδέτερο ερυθρό 0,03 ph 7,3 ± 0,2 Κρυσταλλικό ιώδες 0,001 Άγαρ 13,5 ph 7,1 ± 0,2 *Προσαρμοσμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Για in vitro διαγνωστική χρήση. Προορίζεται αποκλειστικά για επαγγελματική χρήση. Μη χρησιμοποιείτε τρυβλία που φέρουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμού, ξηρότητας, ρωγμών ή άλλα ίχνη αλλοίωσης. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι, σε θερμοκρασία μεταξύ 2 και 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες των 10 τρυβλίων για μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 ως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε τα τρυβλία στους 35 ± 2 C σε αερόβιο περιβάλλον. Εξετάστε τα τρυβλία σε 18 έως 24 ώρες για ποσότητα ανάπτυξης, χρώση, μέγεθος αποικιών και αναστολή της σμηνουργίας/εξάπλωσης του Proteus. Στελέχη CLED Agar MacConkey II Agar Escherichia coli Ανάπτυξη, κίτρινες αποικίες, κίτρινο υλικό Ανάπτυξη, ρόδινες αποικίες ATCC Proteus vulgaris ATCC 8427 Enterococcus faecalis ATCC Staphylococcus aureus ATCC Staphylococcus saprophyticus NCTC Ανάπτυξη, άχρωμες έως μπλε αποικίες, αναστολή σμηνουργίας, ήπια εξάπλωση αποδεκτή Ανάπτυξη, άχρωμες έως κίτρινες αποικίες, κίτρινο υλικό Ανάπτυξη, μικρές κίτρινες αποικίες, κίτρινο υλικό Ανάπτυξη, μικρές λευκές έως κιτρινωπές αποικίες, κίτρινο υλικό Ανάπτυξη, άχρωμες έως μπεζ αποικίες, αναστολή σμηνουργίας Μη ενοφθαλμισμένο Πράσινο έως κυανοπράσινο Ανοικτό ρόδινο, ελαφρώς ιριδίζον

3 ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD CLED Agar / MacConkey II Agar ( ιπλά τρυβλία των 90 mm). Μικροβιολογικά ελεγμένα. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων και συλλογή των δειγμάτων Το υλικό χρησιμοποιείται αποκλειστικά για την απαρίθμηση και τη διαφοροποίηση των βακτηρίων στα ούρα. Μπορούν να χρησιμοποιηθούν ούρα μέσης ροής ή καθετήρα ή ούρα που έχουν συλλεχθεί με υπερηβική παρακέντηση της ουροδόχου κύστης (δείτε επίσης ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ). Για τη συλλογή δειγμάτων ούρων εφαρμόζετε άσηπτες τεχνικές. Τα ούρα πρέπει να επιστρώνονται απευθείας στο υλικό μέχρι 2 ώρες μετά τη συλλογή ή πρέπει να διατηρούνται στο ψυγείο (για διάστημα μέχρι 24 ώρες) ώστε να αποφεύγεται η υπερβολική ανάπτυξη των λοιμωδών ή των μολυσματικών παραγόντων πριν τον ενοφθαλμισμό σε αυτό το υλικό ιαδικασία της εξέτασης Συλλέξτε ένα δείγμα μη αραιωμένων, καλά αναμεμειγμένων ούρων χρησιμοποιώντας βαθμονομημένο κρίκο (0,01 ή 0,001 ml) για κάθε ένα από τα δύο υλικά σε αυτό το διπλό τρυβλίο. Βεβαιωθείτε για τη σωστή φόρτωση του κρίκου που περιέχει το δείγμα. Πρώτα, επιστρώστε ένα δείγμα ούρων στο CLED Agar και, στη συνέχεια, το δεύτερο δείγμα στο MacConkey II Agar. Επωάστε τα τρυβλία σε αερόβιο περιβάλλον στους 35 ± 2 C για 24 έως 48 ώρες. Μην επωάζετε σε περιβάλλον εμπλουτισμένο με CO 2! Υπολογισμός και ερμηνεία των αποτελεσμάτων Μετρήστε τον αριθμό των αποικιών (CFU) στο τρυβλίο. Αν χρησιμοποιήθηκε κρίκος 0,01 ml, κάθε αποικία που προκύπτει είναι αντιπροσωπευτική των 100 CFU/mL. Αν χρησιμοποιήθηκε κρίκος 0,001 ml, κάθε αποικία αντιστοιχεί σε 1000 CFU/mL ούρων. 8 Ούρα που λαμβάνονται από το μέσον της ροής ούρησης και μέσω καθετήρα: Οι τρέχουσες κατευθυντήριες γραμμές υποδεικνύουν ότι για έναν μόνο απομονωμένο οργανισμό η πυκνότητα 10 5 CFU/mL υποδεικνύει λοίμωξη, η πυκνότητα <10 5 CFU/mL υποδεικνύει ουρηθρική ή κολπική μόλυνση και για την πυκνότητα από 10 4 έως 10 5 CFU/mL απαιτείται εκ νέου αξιολόγηση με βάση τα κλινικά στοιχεία Ούρα που συλλέγονται με υπερηβική παρακέντηση της ουροδόχου κύστης: Επειδή η ουροδόχος κύστη είναι στείρα σε άτομα που δεν έχουν μολυνθεί, η ανίχνευση CFU υποδεικνύει λοίμωξη. Τα παθογόνα των ούρων συνήθως αποδίδουν υψηλές μετρήσεις έχοντας ομοιόμορφη μορφολογία αποικιών, ενώ τα μολυσματικά βακτηρίδια εμφανίζονται συνήθως σε μικρούς αριθμούς που ποικίλουν στη μορφολογία των αποικιών. Ενώ το CLED Agar επιτρέπει την ανάπτυξη κατά Gram θετικών και κατά Gram αρνητικών βακτηρίων, τα κατά Gram θετικά βακτήρια αναστέλλονται μερικώς έως πλήρως στο MacConkey II Agar. Η ανάπτυξη σε υλικό MacConkey II Agar υποδηλώνει την παρουσία κατά Gram αρνητικών ραβδίων, π.χ. Enterobacteriaceae (όπως E. coli και πολλά άλλα). Τα CLED και MacConkey II Agar επιτρέπουν μόνο τη συμπερασματική διαφοροποίηση των αποικιών σύμφωνα με τη ζύμωση της λακτόζης. Για την πλήρη αναγνώριση και τον καθορισμό της αντιμικροβιακής ευαισθησίας, πρέπει να εκτελεστούν πρόσθετες εξετάσεις PA

4 Η τυπική μορφολογία των αποικιών με BD CLED Agar / MacConkey II Agar (Biplate) είναι η ακόλουθη: Μικροοργανισμοί CLED Agar MacConkey II Agar Escherichia coli Klebsiella, Enterobacter Proteus Pseudomonas aeruginosa Εντερόκοκκοι Staphylococcus aureus Αρνητικοί στην κοαγκουλάση σταφυλόκοκκοι Κίτρινες αποικίες, αδιαφανείς, κίτρινο υλικό Κίτρινες έως γαλαζωπές αποικίες, συχνά βλεννώδεις, κιτρινωπό υλικό ιαφανείς μπλε αποικίες, κυανοπράσινο έως μπλε υλικό Πράσινες αποικίες με τυπικά καλυμμένη επιφάνεια και αδρή περιφέρεια, μπλε υλικό Μικρές κίτρινες αποικίες, κίτρινο υλικό Βαθυκίτρινες αποικίες, ομοιόμορφο χρώμα, κίτρινο υλικό Αχνοκίτρινες αποικίες, πιο αδιαφανείς από τους εντερόκοκκους Ανάπτυξη, ρόδινες αποικίες Βλεννώδεις, ρόδινες αποικίες Ανάπτυξη, άχρωμες έως μπεζ αποικίες, αναστολή σμηνουργίας Ακανόνιστες, άχρωμες έως ρόδινες αποικίες ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Το CLED Agar είναι κατάλληλο για την απομόνωση και την καταμέτρηση πολλών μικροοργανισμών αερόβιας ανάπτυξης, όπως Enterobacteriaceae, Pseudomonas και άλλα αζυμωτικά κατά Gram αρνητικά ραβδία, εντερόκοκκοι, σταφυλόκοκκοι, είδη Candida και πολλοί άλλοι οργανισμοί, από δείγματα ούρων. Οι στρεπτόκοκκοι και άλλοι οργανισμοί που απαιτούν αίμα ή ορό για την ανάπτυξή τους ενδέχεται να ανακτηθούν ανεπαρκώς σε αυτό το υλικό ή ενδέχεται να απαιτούν παρατεταμένη επώαση. Επομένως, εάν αναμένονται τέτοιοι οργανισμοί, τα δείγματα θα πρέπει να καλλιεργηθούν επίσης σε ένα τρυβλίο άγαρ αίματος. Σε αυτό το υλικό δεν αναπτύσσονται ουροποιογεννητικοί παθογόνοι οργανισμοί, όπως Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia, Ureaplasma ή άλλοι απαιτητικοί οργανισμοί. Για τις κατάλληλες τεχνικές ανίχνευσης αυτών των οργανισμών, συμβουλευτείτε τις βιβλιογραφικές αναφορές. 9,10,12 Παρότι μπορεί να εκτελεστεί απευθείας σε αυτό το υλικό διαφοροποίηση σύμφωνα με τη ζύμωση λακτόζης και ορισμένες διαγνωστικές εξετάσεις, για πλήρη ταυτοποίηση απαιτούνται βιοχημικές και, εάν υποδεικνύεται, ανοσολογικές εξετάσεις, με χρήση καθαρών καλλιεργειών Το MacConkey II Agar είναι ένα από τα τυπικά υλικά που χρησιμοποιούνται για πρωτογενή επίστρωση σε τρυβλία κλινικών δειγμάτων και διαφόρων μη κλινικών υλικών. Στο συγκεκριμένο υλικό καλλιέργειας, θα αναπτυχθούν όλοι οι μικροοργανισμοί της οικογένειας Enterobacteriaceae και διάφορα άλλα αρνητικά κατά Gram ραβδία, π.χ. τα Pseudomonas και τα σχετικά γένη. Σε αυτό το υλικό μπορεί να αναπτυχθούν αζυμωτικά, εάν παρουσιάζουν ανθεκτικότητα στα εκλεκτικά συστατικά. Συμβουλευτείτε τα αντίστοιχα κεφάλαια στις βιβλιογραφικές αναφορές πριν χρησιμοποιήσετε το υλικό για συγκεκριμένους οργανισμούς. 8,10 Έχει αναφερθεί ότι ορισμένοι μικροοργανισμοί Enterobacteriaceae και Pseudomonas aeruginosa αναστέλλονται με το άγαρ MacConkey, όταν επωάζονται σε περιβάλλον εμπλουτισμένο με CO Παρότι ορισμένες διαγνωστικές εξετάσεις είναι δυνατό να εκτελεστούν απευθείας σε αυτό το υλικό καλλιέργειας, για πλήρη ταυτοποίηση απαιτούνται βιοχημικές και, εάν υποδεικνύεται, ανοσολογικές εξετάσεις, με χρήση καθαρών καλλιεργειών. Συμβουλευτείτε τις κατάλληλες βιβλιογραφικές αναφορές. 8,10,12 PA

5 ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Sandys, G.H A new method of preventing swarming of Proteus sp. with a description of a new medium suitable for use in routine laboratory practice. J. Med. Lab. Technol. 17: Mackey, J.P., and G.H. Sandys Laboratory diagnosis of infection of the urinary tract in general practice by means of a dip-inoculum transport medium. Br. Med. J. 2: Mackey, J.P., and G.H. Sandys Diagnosis of urinary infections. Br. Med. J. 1: MacConkey, A.T Note on a new medium for the growth and differentiation of the Bacillus coli communis and the Bacillus typhi abdominalis. The Lancet, Part II: MacConkey, A Lactose-fermenting bacteria in faeces. J. Hyg. 5: Levine, M., and H.W. Schoenlein A compilation of culture media for the cultivation of microorganisms. The Williams & Wilkins Company, Baltimore. 7. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria, vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 8. Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Gatermann, S., et al Harnwegsinfektionen. In: Mauch, H, et al. (ed.). MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologischen Diagnostik, vol. 2. Fischer Verlag, Stuttgart, Jena. 10. Gallien, R Mikrobiologische Diagnostik in der ärztlichen Praxis ein Leitfaden. Fischer Verlag, Stuttgart. 11. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Mazura-Reetz, G., T.R. Neblett, and J.M. Galperin MacConkey agar: CO2 vs. ambient incubation, abstr. C 179, p Abstr. 79th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ ΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ CLED Agar / MacConkey II Agar (Biplate) Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 120 τρυβλία Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com Το ATCC είναι εμπορικό σήμα της American Type Culture Collection Το BD, το λογότυπο BD και όλα τα άλλα εμπορικά σήματα αποτελούν ιδιοκτησία της Becton, Dickinson and Company BD είτε την ενότητα "References" στο αγγλικό κείμενο. Rx Only Τεχνική Εξυπηρέτηση και Υποστήριξη της BD: Επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. PA