BD CHROMagar Orientation Medium

Transcript

1 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΠΛΑΚΕΣ PA Αναθ.: Sep 2011 BD CHROMagar Orientation Medium ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το BD CHROMagar Orientation Medium είναι ένα μη εκλεκτικό υλικό για την απομόνωση, την άμεση ταυτοποίηση, τη διαφοροποίηση και την απαρίθμηση παθογόνων της ουροφόρας οδού. Το BD CHROMagar Orientation Medium επιτρέπει τη διαφοροποίηση και την ταυτοποίηση της Escherichia coli και των ειδών του γένους Enterococcus χωρίς εξέταση επιβεβαίωσης. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Η Escherichia coli, οι εντερόκοκκοι, καθώς και οι ομάδες Klebsiella-Enterobacter-Serratia και Proteus-Morganella-Providencia, είναι οι πλέον συχνοί μικροοργανισμοί που προκαλούν λοιμώξεις της ουροφόρας οδού (Urinary Tract Infections = UTI). Το 60 έως 70% των UTI προκαλούνται από την E. coli σε καθαρή καλλιέργεια ή σε συνδυασμό με εντερόκοκκους. Ο Staphylococcus saprophyticus και ο Streptococcus agalactiae απαντώνται, παρότι λιγότερο συχνά, σε UTI σε γυναίκες. Λόγω των διαφορετικών ευαισθησιών σε αντιμικροβιακές ουσίες των παραγόντων που ενέχονται, για την αποτελεσματική αντιμικροβιακή θεραπεία είναι απαραίτητη η ταυτοποίηση των ειδών τους με συστοιχίες βιοχημικών εξετάσεων. Αυτή είναι μία από τις πλέον χρονοβόρες εργασίες σε ένα εργαστήριο που υποβάλλει σε επεξεργασία δείγματα ούρων. Τα είδη ή οι ομάδες μικροοργανισμών που απομονώνονται πλέον συχνά παράγουν χαρακτηριστικά ένζυμα. Έτσι, είναι δυνατό να ταυτοποιηθούν οι μικροοργανισμοί αυτοί ως προς το επίπεδο κάθε είδους, με περιορισμένο αριθμό εξετάσεων ζύμωσης ή χρήσης υποστρώματος. 1,2 Μερικοί από τους μικροοργανισμούς που ενέχονται παράγουν ένζυμα για το μεταβολισμό είτε της λακτόζης είτε των γλυκοζιτών είτε και των δύο, ενώ άλλοι δεν παράγουν κανένα από τα ένζυμα αυτά. Για παράδειγμα, η E. coli παράγει ένζυμα του μεταβολισμού της λακτόζης, αλλά είναι αρνητική στη β-γλυκοζιδάση. Άλλα μέλη της οικογένειας Enterobacteriaceae είναι θετικά στη β-γλυκοζιδάση, αλλά δεν περιέχουν ένζυμα που είναι απαραίτητα για τη ζύμωση της λακτόζης, ενώ άλλα ενδέχεται να περιέχουν και τους δύο τύπους ενζύμων ή κανέναν από αυτούς. Οι β-γλυκοζιδάσες απαντώνται επίσης σε Gram θετικούς κόκκους, όπως ο Enterococcus spp. και ο Streptococcus agalactiae. Η απαμινάση της θρυπτοφάνης (TDA) είναι ένα ένζυμο που απαντάται χαρακτηριστικά στην ομάδα μικροοργανισμών Proteus-Morganella- Providencia. Σε αξιολογήσεις απόδοσης, έχει καταδειχθεί ότι το BD CHROMagar Orientation Medium είναι ανώτερο από τα διαφορικά υλικά που χρησιμοποιούνται συνήθως για την απομόνωση, τη διαφοροποίηση και την καταμέτρηση παθογόνων που προκαλούν UTI, όπως το άγαρ CLED ή ένας συνδυασμός αιματούχου άγαρ και άγαρ MacConkey. 3-5 Το BD CHROMagar Orientation Medium επιτρέπει την ταυτοποίηση της E. coli και των εντερόκοκκων απευθείας πάνω στην πλάκα απομόνωσης. Επιπλέον, είναι δυνατή η συμπερασματική ταυτοποίηση των περισσότερων στελεχών του Staphylococcus saprophyticus και του S. agalactiae, καθώς και των ομάδων Klebsiella-Enterobacter-Serratia (=KES) και Proteus-Morganella-Providencia (=PMP), μέσω του χρωματισμού των αποικιών και του υλικού καλλιέργειας. Επειδή το BD CHROMagar Orientation Medium είναι μη εκλεκτικό, αναπτύσσονται και άλλα παθογόνα που προκαλούν UTI, αλλά για την ταυτοποίησή τους χρειάζονται βιοχημικές εξετάσεις. Το CHROMagar Orientation Medium αναπτύχθηκε από τον A. Rambach και πωλείται από την BD κατόπιν συμφωνίας χορήγησης αδείας από την CHROMagar, Παρίσι, Γαλλία. PA

2 Στο BD CHROMagar Orientation Medium, τα θρεπτικά συστατικά παρέχονται από ειδικά επιλεγμένες πεπτόνες. Το μείγμα χρωμογόνων αποτελείται από τεχνητά υποστρώματα (χρωμογόνα), τα οποία απελευθερώνουν διαφορετικού χρώματος ενώσεις κατά την αποδόμηση από ειδικά μικροβιακά ένζυμα, γεγονός που διασφαλίζει την άμεση διαφοροποίηση ορισμένων ειδών ή την ανίχνευση ορισμένων ομάδων μικροοργανισμών, με μόνον έναν ελάχιστο αριθμό εξετάσεων επιβεβαίωσης. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ BD CHROMagar Orientation Medium Σύνθεση* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού Χρωμοπεπτόνη 16,1 g Μείγμα χρωμογόνων 1,3 Άγαρ 15,0 ph 6,9 ± 0,2 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τις πλάκες εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες 5 ή 10 τρυβλίων επί μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε τις πλάκες σε ανεστραμμένη θέση στους 35 έως 37 C σε αερόβιες συνθήκες επί 20 έως 24 ώρες. Στελέχη Αποτελέσματα ανάπτυξης Escherichia coli Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, αποικίες μεσαίου μεγέθους έως ATCC μεγάλες, με χρώμα σκούρο τριανταφυλλί έως ροζ, διαφανής Enterobacter cloacae Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, αποικίες μεσαίου μεγέθους, με ATCC Proteus mirabilis ATCC Enterococcus faecalis ATCC Streptococcus agalactiae ATCC Staphylococcus aureus ATCC Staphylococcus saprophyticus ATCC (=NCTC 10516) Μη ενοφθαλμισμένο χρώμα βαθύ κυανό, με ή χωρίς ιώδεις δακτυλίους Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, αποικίες μεσαίου μεγέθους, υπόλευκες έως μπεζ, οι οποίες περιβάλλονται από πορτοκαλί έως καστανό δακτύλιο. Σε περιοχές πυκνής ανάπτυξης, το υλικό είναι δυνατό να είναι αμιγές πορτοκαλί έως καστανό. Η συρροή αναστέλλεται μερικώς έως πλήρως. Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, μικρές αποικίες, με χρώμα κυανοπράσινο έως κυανό Ανάπτυξη μέτρια έως καλή, αποικίες μικροσκοπικές έως μικρές, με χρώμα ανοικτό κυανοπράσινο έως ανοικτό κυανό, με ή χωρίς δακτυλίους Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, αποικίες μεσαίου μεγέθους έως μικρές, με το φυσικό τους χρώμα (λευκό έως κρεμ) Ανάπτυξη μέτρια έως καλή, αποικίες μικρές, αδιαφανείς, με χρώμα ανοικτό ροζ έως τριανταφυλλί Άχρωμο έως πολύ ανοικτό πορτοκαλί, διαφανής PA

3 ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD CHROMagar Orientation Medium (πλάκες Stacker 90 mm). Μικροβιολογικά ελεγμένο. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Το υλικό αυτό χρησιμοποιείται αποκλειστικά για την απαρίθμηση και τη διαφοροποίηση βακτηριδίων στα ούρα. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν ούρα που λαμβάνονται από το μέσον της ροής ούρησης ή μέσω καθετήρα ή ούρα που συλλέγονται με υπερηβική παρακέντηση της ουροδόχου κύστης (δείτε επίσης την ενότητα ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ). Για τη συλλογή δειγμάτων ούρων εφαρμόζετε άσηπτες τεχνικές. Τα ούρα πρέπει να επιστρώνονται γραμμωτά απευθείας πάνω στο υλικό (το πολύ μετά από 2 ώρες μετά τη συλλογή τους) ή να διατηρούνται στη συντήρηση του ψυγείου (το πολύ επί 24 ώρες) για την αποφυγή της υπερβολικής ανάπτυξης των λοιμωδών παραγόντων ή των μολυσματικών ουσιών πριν από τον ενοφθαλμισμό του υλικού αυτού. Διαδικασία της εξέτασης Η χρήση βαθμονομημένων κρίκων ή η εφαρμογή άλλων τεχνικών που εφαρμόζονται συνήθως για την επίστρωση των δειγμάτων ούρων είναι υποχρεωτική για τη λήψη απομονωμένων αποικιών, με τα τυπικά χρώματα και σχήματά τους. Συλλέξτε ένα δείγμα των μη αραιωμένων, καλά αναμεμειγμένων ούρων με χρήση βαθμονομημένου κρίκου (0,01 ή 0,001 ml). Βεβαιωθείτε για τη σωστή πλήρωση του κρίκου με το δείγμα. Ενοφθαλμίστε το δείγμα έως το μέσο της πλάκας με μια μόνο γραμμωτή επίστρωση από την οποία εκτελείται επιπλέον εξάπλωση του ενοφθαλμίσματος. 6,7 Επωάστε τις ενοφθαλμισμένες πλάκες σε ανεστραμμένη θέση στους 35 έως 37 C σε αερόβιες συνθήκες επί 20 έως 24 ώρες. Αποφεύγετε την έκθεση στο φως κατά τη διάρκεια της επώασης διότι αυτό ενδέχεται να καταστρέψει τα χρωμογόνα. Η έκθεση στο φως επιτρέπεται μόνον αφού αναπτυχθούν τα χρώματα των αποικιών. Αποτελέσματα Μετά την επώαση, οι πλάκες θα πρέπει να εμφανίζουν απομονωμένες αποικίες στις περιοχές όπου το ενοφθάλμισμα αραιώθηκε κατάλληλα. Για την ταυτοποίηση ή τη διαφοροποίηση, καθώς και ως κατευθυντήρια οδηγία για επιπλέον εξετάσεις επιβεβαίωσης, θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ο Πίνακας 1 και το Σχήμα 1. Για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων, είναι δυνατό να εφαρμοστεί χρώση Gram και μικροσκοπία. Πίνακας 1 Κατευθυντήριες οδηγίες για την ταυτοποίηση με βάση τα διάφορα χρώματα των αποικιών PA

4 Μικροοργανισμός Εμφάνιση στο BD CHROMagar Orientation Medium E. coli α Μεσαίου μεγέθους έως μεγάλες, με χρώμα σκούρο τριανταφυλλί έως ροζ, διαφανείς αποικίες με ή χωρίς δακτυλίους στο περιβάλλον υλικό Ομάδα KES β Μεσαίου μεγέθους αποικίες, με χρώμα κυανό έως σκούρο κυανό, με ή χωρίς ιώδεις δακτυλίους Ομάδα PMP γ Υπόλευκες έως μπεζ αποικίες που περιβάλλονται από καστανούς δακτυλίους δ Enterococcus Μικρές κυανοπράσινες αποικίες S. agalactiae Ανοικτές κυανοπράσινες έως κυανές, μικροσκοπικές έως μικρές αποικίες με ή χωρίς δακτυλίους S. saprophyticus (τα Μικρές αδιαφανείς αποικίες με περισσότερα στελέχη) χρώμα ανοικτό ροζ έως τριανταφυλλί, με ή χωρίς Άλλοι (συμπεριλαμβανομένων των ζυμομυκήτων) Για τις υποσημειώσεις α-η, δείτε το σχήμα 1 δακτυλίους Φυσική (κρεμ) χρώση Εξετάσεις επιβεβαίωσης (Απαραίτητες για περαιτέρω διαφοροποίηση) BBL CRYSTAL E/NF για διαφοροποίηση μεταξύ των γενών Ινδόλη, H 2 S ε, ODC στ, BBL CRYSTAL E/NF για διαφοροποίηση μεταξύ των γενών PYR ζ Δίσκος νοβοβιοκίνης 5 µg η Κατάλληλες βιοχημικές ή ορολογικές εξετάσεις ταυτοποίησης Εξετάσεις επιβεβαίωσης Εκτελέστε τις εξετάσεις επιβεβαίωσης όπως απαιτείται (Πίνακας 1, Σχήμα 1). Μην εφαρμόζετε οποιοδήποτε αντιδραστήριο ανίχνευσης απευθείας πάνω στις αποικίες στο BD CHROMagar Orientation Medium. Αντίθετα, οι εξετάσεις θα πρέπει να εκτελούνται πάνω σε διηθητικό χαρτί με υλικό ανάπτυξης από αντίστοιχες αποικίες. Για αποικίες της E. coli που έχουν χρώμα σκούρο τριανταφυλλί έως ροζ, αλλά είναι μικροσκοπικές έως μικρού μεγέθους, μη χρησιμοποιείτε το αντιδραστήριο ινδόλης Kovacs, επειδή το χρώμα των αποικιών τους ενδέχεται να παρεμβληθεί στο κόκκινο χρώμα μιας θετικής εξέτασης ινδόλης. Αντίθετα, χρησιμοποιείτε το αντιδραστήριο ινδόλης διμεθυλαμινοκινναμαλδεΰδης (DMACA) (πράσινο = θετικό). Εάν εφαρμόζονται άλλες εξετάσεις επιβεβαίωσης ή χρησιμοποιούνται άλλα συστήματα βιοχημικής ταυτοποίησης, πρέπει να ακολουθείτε τις οδηγίες που συνοδεύουν αυτές τις εξετάσεις ή αυτά τα συστήματα. Εκτελέστε εξέταση επιβεβαίωσης για τα είδη της οικογένειας Enterococcus μόνον εάν απαιτείται καθορισμός του είδους πέρα από το επίπεδο του γένους. Σχήμα 1: Κατευθυντήριες οδηγίες για την απόδοση των εξετάσεων ταυτοποίησης σε επιλεγμένους μικροοργανισμούς Εμφάνιση αποικιών Μικρές, τριανταφυλλί, αδιαφανείς δίσκος νοβοβιοκίνης 5 µg ευαίσθητος ανθεκτικός S. intermedius, S. simulans S. saprophyticus, S. xylosus BBL CRYSTAL GP για διαφοροποίηση μεταξύ των γενών Άχρωμες έως μπεζ αποικίες, πορτοκαλίκαστανό υλικό Ομάδα PMP Εξέταση ινδόλης DMACA θ πράσινη (θετικό) θετικό για H 2 S ε αρνητικό για H 2 S ε άχρωμη έως P. vulgaris Providencia spp., Morganella spp. PA

5 τριανταφυλλί (αρνητικό) θετικό για ODC στ P. mirabilis στ αρνητικό για ODC P. penneri α Δείτε την ενότητα Περιορισμοί της διαδικασίας β KES = Ομάδα Klebsiella-Enterobacter-Serratia γ PMP = Ομάδα Proteus-Morganella-Providencia δ Το πορτοκαλί έως καστανό χρώμα οφείλεται στη θετική απαμινάση της θρυπτοφάνης (TDA) που είναι κοινή σε όλους τους μικροοργανισμούς της ομάδας PMP. Περίπου το 50% των στελεχών του P. vulgaris σχηματίζουν κυανές αποικίες πάνω σε υλικό καλλιέργειας με χρώμα πορτοκαλί έως καστανό. ε Συμβατική εξέταση υδρόθειου. στ Συμβατική εξέταση αποκαρβοξυλάσης της ορνιθίνης. ζ Εξέταση πυρογλουταμικού για αρυλαμιδάση του πυρρολιδονυλίου. η Ενοφθαλμίστε απλώνοντας το απομονωμένο στέλεχος πάνω σε μια πλάκα άγαρ Mueller Hinton II. Τοποθετήστε ένα δίσκο νοβοβιοκίνης (5 µg) πάνω στην ενοφθαλμισμένη πλάκα. Επωάστε επί 18 έως 24 ώρες στους 35 έως 37 C και προσδιορίστε το μέγεθος ζώνης αναστολής. (ανθεκτικός: 16 mm, ευαίσθητος: > 16 mm). θ DMACA= Αντιδραστήριο διμεθυλαμινοκινναμαλδεΰδης για παραγωγή ινδόλης. Εφαρμόστε το αντιδραστήριο πάνω σε διηθητικό χαρτί και τρίψτε μία αποικία μέσα στην περιοχή που περιέχει αντιδραστήριο πάνω στο διηθητικό χαρτί. Περιμένετε επί sec. Η εμφάνιση πράσινου χρώματος είναι ενδεικτική της παραγωγής ινδόλης (κόκκινο ή άχρωμο = αρνητικό). Υπολογισμός και ερμηνεία των αποτελεσμάτων 6,7 Καταμετρήστε τον αριθμό των αποικιών (CFU) πάνω στην πλάκα. Εάν χρησιμοποιήθηκε κρίκος 0,01 ml, κάθε αποικία που προκύπτει είναι αντιπροσωπευτική των 100 CFU/ml. Εάν χρησιμοποιήθηκε κρίκος 0,001 ml, κάθε αποικία αντιστοιχεί σε 1000 CFU/ml ούρων. 7 Ούρα που λαμβάνονται από το μέσον της ροής ούρησης ή μέσω καθετήρα: Οι τρέχουσες κατευθυντήριες οδηγίες υποδεικνύουν ότι για ένα μόνον απομονωμένο στέλεχος, πυκνότητα 10 5 CFU/ml υποδηλώνει λοίμωξη, < 10 5 CFU/ml υποδηλώνει ουρηθρική ή κολπική μόλυνση, ενώ πυκνότητα μεταξύ 10 4 έως 10 5 CFU/ml χρειάζεται να επαναξιολογηθεί με βάση τις κλινικές πληροφορίες. 7 Τα μολυσματικά βακτηρίδια συνήθως εμφανίζονται σε χαμηλούς αριθμούς, οι οποίοι ποικίλλουν στη μορφολογία των αποικιών. Ούρα που συλλέγονται με υπερηβική παρακέντηση της ουροδόχου κύστης: Επειδή η ουροδόχος κύστη είναι στείρα σε μη μολυσμένα άτομα, τυχόν ανίχνευση CFU υποδηλώνει λοίμωξη. Τα παθογόνα της ουροφόρας οδού συνήθως αποδίδουν υψηλές μετρήσεις που έχουν ομοιόμορφη μορφολογία και χρώμα αποικιών στο υλικό αυτό. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το BD CHROMagar Orientation Medium είναι ένα χρωμογόνο υλικό για την άμεση ταυτοποίηση, τη διαφοροποίηση και την απαρίθμηση των κοινών παθογόνων της ουροφόρας οδού. Το υλικό είναι κατάλληλο για την απομόνωση πολλών μικροοργανισμών που αναπτύσσονται σε αερόβιες συνθήκες, όπως οι Enterobacteriaceae, οι Pseudomonas και άλλα αζυμωτικά Gram αρνητικά ραβδία, εντερόκοκκοι, σταφυλόκοκκοι και πολλοί άλλοι μικροοργανισμοί, από δείγματα ούρων. Σε αξιολογήσεις απόδοσης έχει καταδειχθεί ότι το BD CHROMagar Orientation Medium υπερτερεί έναντι άλλων διαφορικών υλικών, τα οποία χρησιμοποιούνται στην απομόνωση, τη διαφοροποίηση και την απαρίθμηση των παθογόνων που προκαλούν UTI, όπως το άγαρ CLED ή ένας συνδυασμός αιματούχου άγαρ και άγαρ MacConkey. 3-5 Το BD CHROMagar Orientation Medium επιτρέπει τη διαφοροποίηση και την ταυτοποίηση της E. coli και των εντερόκοκκων χωρίς εξέταση επιβεβαίωσης, με βάση τα κριτήρια για την ταυτοποίηση που έχουν καθιερωθεί από το πρότυπο M35-A της CLSI, Abbreviated Identification of Bacteria and Yeast; Approved Guideline. 8 Η συμπερασματική ταυτοποίηση του S. saprophyticus, του S. Agalactiae, καθώς και των ομάδων Klebsiella-Enterobacter-Serratia (KES) και Proteus-Morganella-Providencia (PMP), είναι δυνατή μέσω της μορφολογίας των αποικιών, της χρώσης και του αποχρωματισμού του υλικού. PA

6 Επειδή οι περισσότερες από τις συνήθεις λοιμώξεις της ουροφόρας οδού προκαλούνται από την E. coli ή/και τους εντερόκοκκους, η χρήση του υλικού αυτού μειώνει σημαντικά το φόρτο εργασίας και το χρόνο ενοφθαλμισμού και ανάγνωσης στα συστήματα ταυτοποίησης, τα οποία είναι απαραίτητα όταν χρησιμοποιούνται συμβατικά υλικά. Αποτελέσματα απόδοσης 4,9,10 Η μικροβιολογική απόδοση του BD CHROMagar Orientation Medium και ενός χρωμογόνου υλικού από τον ανταγωνισμό συγκρίθηκαν με εκείνη του άγαρ Columbia με αίμα προβάτου 5% και άγαρ MacConkey χωρίς κρυσταλλικό ιώδες για την απαρίθμηση και τη συμπερασματική ταυτοποίηση των βακτηριδίων, τα οποία είναι υπεύθυνα για λοιμώξεις της ουροφόρας οδού. 4 Από ένα σύνολο 658 κλινικών δειγμάτων ούρων, 118 δείγματα δεν εμφάνισαν καμία αύξηση, 402 δείγματα εμφάνισαν αύξηση με αριθμό κυττάρων 10 5 CFU/ml και 138 δείγματα εμφάνισαν αύξηση με αριθμό κυττάρων < 10 5 CFU/ml. Από τα δείγματα με αριθμούς κυττάρων 10 5 CFU/ml, τα 163 ήταν καθαρές καλλιέργειες και τα 239 ήταν μεικτές καλλιέργειες. Ελήφθησαν συνολικά 266 απομονωμένα στελέχη της Escherichia coli και στα δύο χρωμογόνα υλικά καλλιέργειας, 260 απομονώθηκαν σε αιματούχο άγαρ και 248 απομονώθηκαν σε άγαρ MacConkey. Ένα στέλεχος (0,4%) δεν εμφάνισε το αναμενόμενο ροζ χρώμα στο BD CHROMagar Orientation Medium και 23 στελέχη (8,7%) δεν εμφάνισαν το αναμενόμενο ροζ χρώμα στο υλικό από τον ανταγωνισμό. Οι εντερόκοκκοι (BD CHROMagar Orientation Medium, n = 266 / υλικό από τον ανταγωνισμό, n = 265) σχημάτισαν μικρές κυανοπράσινες αποικίες και στα δύο χρωμογόνα υλικά. Πενήντα από τις μεικτές καλλιέργειες περιείχαν εντερόκοκκους που ανιχνεύτηκαν μόνον στα χρωμογόνα υλικά. Οι ομάδες Klebsiella- Enterobacter-Serratia (KES) και Proteus-Morganella-Providencia (PMP) ήταν δυνατό να ταυτοποιηθούν και στα δύο χρωμογόνα υλικά. Από τα 66 απομονωμένα στελέχη της ομάδας KES, τα 63 αναπτύχθηκαν με το αναμενόμενο χρώμα στο BD CHROMagar Orientation Medium και τα 58 από τα 64 απομονωμένα στελέχη αναπτύχθηκαν με το αναμενόμενο χρώμα στο υλικό από τον ανταγωνισμό. Οι άλλοι μικροοργανισμοί χρειάστηκαν περαιτέρω εξετάσεις ταυτοποίησης. Σε μια δεύτερη αξιολόγηση απόδοσης με συνολικά 421 κλινικά δείγματα ούρων, 286 από τα οποία εμφάνισαν ανάπτυξη βακτηριδίων ή ζυμομυκήτων, το BD CHROMagar Orientation Medium συγκρίθηκε με το BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood. 9 Στο χρωμογόνο υλικό ελήφθησαν 483 απομονωμένα στελέχη, ενώ στο υλικό αιματούχου άγαρ απομονώθηκαν 447 στελέχη. Τα στελέχη ταυτοποιήθηκαν βιοχημικά. Από τα στελέχη της E. coli, το 95% ταυτοποιήθηκε σωστά από το χρώμα τριανταφυλλί έως ροζ των αποικιών τους, ενώ τα υπόλοιπα στελέχη της E. coli δεν εμφάνισαν χρώση. Όλα τα απομονωμένα στελέχη του Enterococcus spp. εμφάνισαν το τυπικό κυανό έως κυανοπράσινο χρώμα των αποικιών. Τα απομονωμένα στελέχη του Streptococcus agalactiae σχημάτισαν μικροσκοπικές αποικίες κυανού έως κυανοπράσινου χρώματος και διαφοροποιήθηκαν από τους εντερόκοκκους με αρνητική εξέταση PYR. Όλα τα απομονωμένα στελέχη του Staphylococcus saprophyticus και του S. simulans σχημάτισαν μικρές τριανταφυλλί, αδιαφανείς αποικίες, διαφοροποιήθηκαν με εξέταση νοβοβιοκίνης και ταυτοποιήθηκαν ως προς το επίπεδο κάθε είδους με βιοχημικές εξετάσεις. Σε μια τυφλή εσωτερική μελέτη, η οποία περιελάμβανε την εξέταση πάνω από 900 βακτηριδιακών στελεχών που ενοφθαλμίστηκαν σε ούρα, η ευαισθησία και η ειδικότητα του BD CHROMagar Orientation Medium στην ταυτοποίηση της E. coli, με βάση το χρώμα και τη μορφολογία των αποικιών μόνον, ήταν 97% και 99%, αντίστοιχα. Για το Enterococcus, η ευαισθησία και η ειδικότητα της ταυτοποίησης ήταν 99% και 97%, αντίστοιχα (δείτε τον πίνακα). 10 Μικροοργανισμός Ευαισθησία % (95% διάστημα εμπιστοσύνης) E. coli 277/286 96,9% (94,1 98,6%) Enterococcus 319/324 98,5% (96,4 99,5%) PA Ειδικότητα % (95% διάστημα εμπιστοσύνης) 638/645 98,9% (97,8 99,6%) 603/622 97% (95,3 98,2%)

7 Περιορισμοί της διαδικασίας Επειδή το υλικό αυτό είναι μη εκλεκτικό, αναπτύσσονται και άλλα παθογόνα που προκαλούν UTI. Αποικίες που εμφανίζουν το φυσικό τους χρώμα και δεν αντιδρούν με τα χρωμογόνα υποστρώματα στο BD CHROMagar Orientation Medium πρέπει να διαφοροποιούνται περαιτέρω με κατάλληλες βιοχημικές ή ορολογικές εξετάσεις. Συμβουλευτείτε τις αναφορές. 1,2 Οι αποικίες της E. coli που έχουν χρώμα σκούρο τριανταφυλλί έως ροζ, αλλά είναι μικροσκοπικές έως μικρές σε μέγεθος, απαιτούν επιπλέον εξετάσεις επιβεβαίωσης, όπως η εξέταση σημειακής ινδόλης (αντιδραστήριο ινδόλης DMACA). Τα Gram αρνητικά ραβδία, με εξαίρεση εκείνα που ανήκουν στην ομάδα KES, ενδέχεται να σχηματίσουν μεγάλες κυανές αποικίες στο BD CHROMagar Orientation Medium και έτσι απαιτούν επιπλέον βιοχημικές εξετάσεις για την ταυτοποίησή τους. 11 Σε πολύ σπάνιες περιπτώσεις, στα ούρα ενδέχεται να υπάρχει το Listeria monocytogenes ή άλλα είδη του γένους Listeria (π.χ. μετά από άμβλωση που οφείλεται στους παράγοντες αυτούς). Τα είδη του γένους Listeria σχηματίζουν μικρές κυανές έως κυανοπράσινες αποικίες που είναι αρνητικές στην εξέταση PYR, μιμούμενα το Streptococcus agalactiae. Επομένως, ενδέχεται να είναι χρήσιμη η παρασκευή χρώσης Gram για όλα τα στελέχη που σχηματίζουν μικροσκοπικές έως μικρές, κυανές έως κυανοπράσινες αποικίες στο υλικό αυτό, οι οποίες είναι αρνητικές στην εξέταση PYR. Η παρουσία Gram θετικών ραβδίων ενδέχεται να είναι ενδεικτική για είδη του γένους Listeria, αλλά για την επιβεβαίωση της ταυτοποίησής τους είναι απαραίτητες επιπλέον βιοχημικές εξετάσεις. Πολύ σπανίως, απομονωμένα στελέχη του Aeromonas hydrophila ενδέχεται να σχηματίσουν τριανταφυλλί έως ροζ αποικίες. Είναι δυνατό να διαφοροποιηθούν από την E. coli με εξέταση οξειδάσης (Aeromonas = θετική, E. coli = αρνητική). Περιστασιακά, αρνητικοί στην κοαγκουλάση σταφυλόκοκκοι εκτός του S. saprophyticus, π.χ. S. simulans, S. xylosus και S. intermedius, σχηματίζουν μικρές τριανταφυλλί, αδιαφανείς αποικίες. Επομένως, σε αυτά τα απομονωμένα στελέχη είναι απαραίτητη η εκτέλεση επιπλέον εξετάσεων (δείτε το σχήμα 1). Το BD CHROMagar Orientation Medium δεν υποστηρίζει την ανάπτυξη απαιτητικών μικροοργανισμών όπως οι Neisseria, Haemophilus ή Mycoplasma spp. Η χρήση του υλικού αυτού για μη κλινικά ή κλινικά δείγματα εκτός των ούρων δεν έχει τεκμηριωθεί. Πριν από τη χρήση του BD CHROMagar Orientation Medium για πρώτη φορά, συνιστούμε την εξάσκηση στην τυπική εμφάνιση των αποικιών με καθορισμένα στελέχη, π.χ. με τα στελέχη που αναφέρονται στην ενότητα ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ. ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Isenberg, H.D. (ed.) Clinical Microbiology Procedures Handbook, vol. 1. American Society for Microbiology. Washington, DC. 2. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott s diagnostic microbiology, 10 th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 3. Merlino, J., S. Siarakas, G. J. Robertson, G. R. Funnell, T. Gottlieb, and R. Bradbury Evaluation of CHROMagar Orientation for differentiation and presumptive identification of gram-negative bacilli and Enterococcus species. J. Clin. Microbiol. 34: Hengstler, K.A., R. Hammann, and A.-M. Fahr Evaluation of BBL CHROMagar Orientation medium for detection and presumptive identification of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol. 35: Samra, Z., M. Heifetz, J. Talmor, E. Bain, and J. Bahar Evaluation of use of a new chromogenic agar in detection of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol. 36: Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Forbes, B.A., and P.A. Granato. Processing specimens for bacteria In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PA

8 8. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS). Approved Guideline M35. Abbreviated identification of bacteria and yeast, CLSI, Wayne, PA.Search for latest version at 9. Data on file. BD Diagnostic Systems Europe, Heidelberg, Germany. 10. Data on file. BD Diagnostic Systems, Sparks, MD, USA. 11. Abbott, S.L Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Plesiomonas, and other Enterobacteriaceae. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD CHROMagar Orientation Medium Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε πλάκες, 20 πλάκες Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε πλάκες, 120 πλάκες ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD PA