BD BBL Enterotube II

Transcript

1 Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ BBL Enterotube II IA Αναθ.: Jan BD BBL Enterotube II ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το BBL Enterotube II είναι ένα έτοιµο για χρήση σύστηµα ταυτοποίησης βακτηριδίων της οικογένειας Enterobacteriaceae και µιας ποικιλίας άλλων αρνητικών στην οξειδάση, Gram-αρνητικών ραβδίων. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική µέθοδος. Τα βακτηρίδια της οικογένειας Enterobacteriaceae διαδραµατίζουν ένα σηµαντικό ρόλο ως λοιµώδεις παράγοντες. Αυτή η οµάδα βακτηριδίων χρησιµοποιεί υδατάνθρακες κυρίως µε ζύµωση και µε οξείδωση. Είναι θετικά στην καταλάση και σχεδόν όλα είναι αρνητικά στην οξειδάση. [Προσφάτως, έχει προταθεί η συµπερίληψη του Plesiomonas shigelloides στην οικογένεια Enterobacteriaceae µε βάση τον προσδιορισµό αλληλουχίας του rrna 16S και επειδή περιέχει το εντεροβακτηριδιακό κοινό αντιγόνο. 1,2 Παλαιότερα, αυτός ο µικροοργανισµός, ο οποίος είναι θετικός στην οξειδάση, συµπεριελαµβανόταν στην οικογένεια Vibrionaceae]. Η ταυτοποίηση των Enterobacteriaceae βασίζεται σε βιοχηµικές αντιδράσεις, όπως περιγράφεται από τους Ewing και Farmer. Για λεπτοµέρειες, συµβουλευτείτε τις αναφορές Ενώ κατά τα τελευταία έτη έχει περιγραφεί µια τεράστια ποικιλία γενών και ειδών, οι µικροοργανισµοί που αποµονώνονται από κλινικά δείγµατα ανήκουν σε 20 έως 25 είδη, τα οποία είναι ευρέως γνωστά επί πολλά έτη. 1 Το BBL Enterotube II είναι ένα αυτοδύναµο, διαµερισµατοποιηµένο πλαστικό σωληνάριο που περιέχει δώδεκα διαφορετικά υλικά καλλιέργειας, τα οποία επιτρέπουν τον προσδιορισµό 15 βιοχηµικών αντιδράσεων (γλυκόζης, παραγωγής αερίου από γλυκόζη, αποκαρβοξυλάσης της γλυκίνης, αποκαρβοξυλάσης της ορνιθίνης, H 2 S, ινδόλης, αδονιτόλης, λακτόζης, αραβινόζης, σορβιτόλης, Voges- Proskauer, δουλσιτόλης, απαµινάσης της φαινυλαλανίνης, ουρίας και κιτρικού). Το σύρµα ενοφθαλµισµού που εσωκλείεται στη συσκευασία επιτρέπει τον ενοφθαλµισµό όλων των διαµερισµάτων σε ένα µόνο βήµα από µία ή λίγες µεµονωµένες αποικίες ενός αποµονωµένου στελέχους. Ο συνδυασµός αντιδράσεων που προκύπτει, σε συνδυασµό µε τον οδηγό ερµηνείας (βιβλίο κωδικών), επιτρέπει την ταυτοποίηση των κλινικώς σηµαντικών Enterobacteriaceae. Ο οδηγός ερµηνείας (βιβλίο κωδικών) για το BBL Enterotube II δηµιουργήθηκε µε χρήση των εκατοστιαίων δεδοµένων, τα οποία περιλαµβάνονται στις αναφορές για τις βιοχηµικές εξετάσεις που εκτελούνται µε το BBL Enterotube II Ο πίνακας αποτελεσµάτων και το διάγραµµα χρωµατικών αντιδράσεων επιτρέπουν έναν ταχύ έλεγχο των θετικών αντιδράσεων που επιτυγχάνονται µε το BBL Enterotube II. Οι επιλεγµένοι θετικοί αριθµοί αθροίζονται και ο σύνθετος αριθµός κατόπιν εντοπίζεται στον οδηγό ερµηνείας για την ταυτοποίηση των µικροοργανισµών. Όπου παρατίθενται δύο ή περισσότεροι µικροοργανισµοί, παρέχονται επίσης οι εξετάσεις επιβεβαίωσης που απαιτούνται για περαιτέρω ταυτοποίησή τους. Το ακόλουθο διάγραµµα ροής παρουσιάζει τον τρόπο χρήσης της εξέτασης οξειδάσης για τη διαφοροποίηση των µελών της οικογένειας Enterobacteriaceae από αζυµωτικά, θετικά ή αρνητικά στην οξειδάση, καθώς και από ζυµωτικά, θετικά στην οξειδάση Gram αρνητικά βακτηρίδια και όταν χρησιµοποιούνται σωληνάρια BBL Enterotube II ή BBL Oxi/Ferm Tube II: IA

2 Καθαρή καλλιέργεια σε µη εκλεκτικό υλικό καλλιέργειας Εξέταση οξειδάσης θετική αρνητική Ενοφθαλµίστε το BBL Oxi/Ferm Tube II Ενοφθαλµίστε το BBL Enterotube II Αναερόβια γλυκόζης Γλυκόζης Θετική Αρνητική Θετική Αρνητική* Achromobacter spp., Enterobacteriaceae Acinetobacter spp., Alcaligenes spp., Bordetella Stenotrophomonas bronchiseptica, Moraxella maltophilia κ.λπ. spp., Pasteurella spp. κ.λπ. Aeromonas spp., Plesiomonas shigelloides, Vibrio spp. * Τα είδη αυτά είναι δυνατό να ταυτοποιηθούν µε το σύστηµα BBL Enterotube II, αλλά η χρήση του BBL Oxi/Ferm Tube II ενδέχεται να είναι απαραίτητη για επιβεβαίωση. ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ BBL Enterotube II Υποστρώµατα, άλλα δραστικά συστατικά και χρώση των µη ενοφθαλµισµένων υλικών καλλιέργειας: Υλικό καλλιέργειας 1 (Γλυκόζη): Γλυκόζη (20,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε ερυθρό της κρεζόλης ως δείκτη του ph. Το υλικό καλλιέργειας καλύπτεται µε κηρό για την παροχή αναερόβιων συνθηκών και για να επιτρέπεται η ανίχνευση του σχηµατισµού αερίου. Μη ενοφθαλµισµένο: ερυθρό. Υλικό καλλιέργειας 2 (Λυσίνη): Λυσίνη (10,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε µωβ της βρωµοκρεζόλης ως δείκτη του ph. Το υλικό καλλιέργειας καλύπτεται µε κηρό για την παροχή αναερόβιων συνθηκών. Μη ενοφθαλµισµένο: κίτρινο. Υλικό καλλιέργειας 3 (Ορνιθίνη): Ορνιθίνη (10,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε µωβ της βρωµοκρεζόλης ως δείκτη του ph. Το υλικό καλλιέργειας καλύπτεται µε κηρό για την παροχή αναερόβιων συνθηκών. Μη ενοφθαλµισµένο: κίτρινο. Υλικό καλλιέργειας 4 (H 2 S/Ινδόλη): Θειοθειικό νάτριο (4,7 g/l), κιτρικό σιδηρο(ιιι)αµµώνιο (0,6 g/l) και θρυπτοφάνη (1,2 g/l) σε κατάλληλο υλικό βάσης. Μη ενοφθαλµισµένο: Μπεζ έως ανοικτό πορτοκαλί. Υλικό καλλιέργειας 5 (Αδονιτόλη): Αδονιτόλη (20,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε ερυθρό της κρεζόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλµισµένο: ερυθρό. Υλικό καλλιέργειας 6 (Λακτόζη): Λακτόζη (20,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε ερυθρό της κρεζόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλµισµένο: ερυθρό. Υλικό καλλιέργειας 7 (Αραβινόζη): Αραβινόζη (20,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε ερυθρό της κρεζόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλµισµένο: ερυθρό. Υλικό καλλιέργειας 8 (Σορβιτόλη): Σορβιτόλη (20,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε ερυθρό της κρεζόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλµισµένο: ερυθρό. Υλικό καλλιέργειας 9 (Voges-Proskauer): Γλυκόζη (20,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης. Μη ενοφθαλµισµένο: άχρωµο έως ανοικτό πορτοκαλί. Υλικό καλλιέργειας 10 ( ουλσιτόλη/pa): ουλσιτόλη (20,0 g/l), φαινυλαλανίνη (7,0 g/l) και κιτρικό σιδηρο(ιιι)αµµώνιο (0,5 g/l) που περιέχονται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε κυανό της βρωµοθυµόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλµισµένο: πράσινο. Υλικό καλλιέργειας 11 (Ουρία): Ουρία (20,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε ερυθρό της φαινόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλµισµένο: Μπεζ έως ανοικτό πορτοκαλί. Υλικό καλλιέργειας 12 (Κιτρικό): Κιτρικό νάτριο (2,0 g/l) που περιέχεται σε κατάλληλο υλικό βάσης, µε κυανό της βρωµοθυµόλης ως δείκτη του ph. Μη ενοφθαλµισµένο: πράσινο. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελµατική χρήση µόνον. Μη χρησιµοποιείτε τα σωληνάρια εάν παρουσιάζουν ενδείξεις µικροβιακής µόλυνσης, αποχρωµατισµό, αποκόλληση του κηρού από τα αντίστοιχα υλικά καλλιέργειας, ξηρότητα, ρωγµές ή άλλα σηµεία αλλοίωσης. Οποιαδήποτε από τις ακόλουθες συνθήκες ενδέχεται να επηρεάσει την ορθότητα του BBL Enterotube II: αφυδάτωση ή υγροποίηση, αποκόλληση του κηρού από τις επιφάνειες των υλικών καλλιέργειας, οποιαδήποτε µεταβολή των χρωµάτων των υλικών καλλιέργειας από εκείνα που υποδεικνύονται στην παράγραφο Μην ενοφθαλµισµένο στην ενότητα ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ και οποιαδήποτε ένδειξη ανάπτυξης στις επιφάνειες των υλικών καλλιέργειας. Οι ακόλουθες προφυλάξεις αφορούν τα επιµέρους διαµερίσµατα που υποδεικνύονται: IA

3 Γλυκόζη: Η επίστρωση κηρού στο διαµέρισµα αυτό παράγει το βαθµό αναεροβίωσης που είναι απαραίτητος, έτσι ώστε να επιτρέπεται µόνον η αληθής αντίδραση ζύµωσης που είναι χαρακτηριστική όλων των Enterobacteriaceae. Εάν το υλικό αυτό παραµένει ερυθρό µετά τον ενοφθαλµισµό και την επώαση, το στέλεχος δεν ανήκει στην οικογένεια Enterobacteriaceae. Παραδείγµατα αρνητικών στην οξειδάση µη-enterobacteriaceae που δε ζυµώνουν τη γλυκόζη σε αναερόβιες συνθήκες στο BBL Enterotube II είναι τα αρνητικά στη γλυκόζη είδη Acinetobacter. Παρότι οι µικροοργανισµοί αυτοί είναι δυνατό να διαφοροποιηθούν από τους Enterobacteriaceae µε σωληνάρια BBL Enterotube II (στον οδηγό ερµηνείας, χρησιµοποιήστε τη βάση δεδοµένων για τα αρνητικά στην οξειδάση αζυµωτικά βακτηρίδια), είναι δυνατό να απαιτείται χρήση των σωληναρίων BBL Oxi/Ferm Tube II για την περαιτέρω ταυτοποίησή τους. Φαινυλαλανίνη (PA): Το υλικό καλλιέργειας ενδέχεται να εµφανίσει βαθύτερη απόχρωση του πράσινου µετά την επώαση. Αυτό πρέπει να θεωρείται αρνητικό αποτέλεσµα. Προειδοποίηση: Κατά την προετοιµασία και το χειρισµό ινδόλης και αντιδραστηρίων VP, να τηρείτε τις κατάλληλες οδηγίες χειρισµού και τις κατάλληλες φράσεις Κίνδυνος και Ασφάλεια. Συµβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά µε τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισµού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιµοποιηµένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε το BBL Enterotube II στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στο αρχικό κουτί, έως τη στιγµή της χρήσης. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρµανση. Τα σωληνάρια είναι δυνατό να ενοφθαλµιστούν έως την ηµεροµηνία λήξης και να επωαστούν στους συνιστώµενους χρόνους επώασης. Τα σωληνάρια από ανοιγµένες συσκευασίες είναι δυνατό να χρησιµοποιηθούν έως την ηµεροµηνία λήξης. Τα ανοιγµένα σωληνάρια θα πρέπει να χρησιµοποιούνται αµέσως. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλµίστε το BBL Enterotube II µε τα στελέχη που αναφέρονται παρακάτω. Για τον ενοφθαλµισµό, την επώαση και την ανάγνωση, προχωρήστε όπως περιγράφεται στην ενότητα ιαδικασία της εξέτασης. ΜΙΚΡΟΟΡΓΑΝΙΣΜΟΙ Γλυκόζη Αέριο Λυσίνη Ορνιθίνη H2S Ινδόλη Αδονιτόλη Λακτόζη Αραβινόζη Σορβιτόλη VP ουλσιτόλη Φαινυλαλανίνη Ουρία Κιτρικό Αποδεκτοί βιοκωδικοί Proteus mirabilis / / + +/ /- ATCC Proteus vulgaris +/(+) +/ / ATCC 6380 Providencia alcalifaciens ATCC / / / + +/ /+ Serratia marcescens / / + +/ / ATCC / Escherichia coli + +/ / ATCC Klebsiella / / pneumoniae + +/ / / ATCC Pseudomonas aeruginosa / /(+) + * ATCC * Το P. aeruginosa είναι θετικό στην οξειδάση και, εποµένως, δε συµπεριλαµβάνεται στις βάσεις δεδοµένων του BBL Enterotube II. Ωστόσο, το στέλεχος αυτό είναι χρήσιµο ως µικροοργανισµός ελέγχου για την ανίχνευση αρνητικών αντιδράσεων στα διαµερίσµατα αντίδρασης γλυκόζης και παραγωγής αερίου. += θετικό, = αρνητικό, (+) ασθενώς θετικό, +/- = θετικό ή (σπανίως) αρνητικό, +/(+) = θετικό ή (σπανίως) ασθενώς θετικό, -/+= αρνητικό ή (σπανίως) θετικό. ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ Παρεχόµενα υλικά BBL Enterotube II. Μικροβιολογικά ελεγµένο. Πίνακας αποτελεσµάτων και διάγραµµα χρωµατικών αντιδράσεων για το BBL Enterotube II. IA

4 Υλικά που δεν παρέχονται Οδηγός ερµηνείας για το BBL Enterotube II (βιβλίο κωδικών), αρ. εγγράφου CM CE, ο οποίος διαιρείται σε τρεις βάσεις δεδοµένων: (1) Αρνητικά στην οξειδάση, αζυµωτικά βακτηρίδια, (2) Enterobacteriaceae µέθοδος χωρίς VP και (3) Enterobacteriaceae µέθοδος µε VP. Αντιδραστήριο ινδόλης Kovacs (Indole Dropper Reagent, 50 φύσιγγες, αρ. κατ ) και αντιδραστήρια Voges-Proskauer (Voges-Proskauer A Dropper Reagent, 50 φύσιγγες, αρ. κατ , Voges-Proskauer B Dropper Reagent, αρ. κατ ). Τα αντιδραστήρια διατίθενται από την BD. Υλικά και αντιδραστήρια για την εκτέλεση των συµπληρωµατικών εξετάσεων, όπως αναφέρονται στον οδηγό ερµηνείας του BBL Enterotube II. Σύστηµα ταυτοποίησης BBL Oxi/Ferm II (αρ. κατ ) για την ταυτοποίηση των µη- Enterobacteriaceae. Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισµός, όπως περιγράφεται. Το αντιδραστήριο Kovacs είναι δυνατό να παρασκευαστεί στο εργαστήριο ως εξής Αµυλική ή ισοαµυλική αλκοόλη 75 ml π-διµεθυλαµινοβενζαλδεΰδη 5 g Υδροχλωρικό οξύ, συµπυκνωµένο 25 ml ιαλύστε την π-διµεθυλαµινοβενζαλδεΰδη (το χρώµα του αντιδραστηρίου πρέπει να είναι ανοικτό κίτρινο) στην αλκοόλη και κατόπιν προσθέστε αργά το οξύ. Το παρασκευασµένο αντιδραστήριο πρέπει να έχει ανοικτό κίτρινο χρώµα και να φυλάσσεται σε καστανή φιάλη στη συντήρηση του ψυγείου για µέγιστη σταθερότητα. Τυχόν αντιδραστήριο που έχει σκούρο καστανό χρώµα δεν πρέπει να χρησιµοποιείται. Τα αντιδραστήρια Voges-Proskauer είναι δυνατό να παρασκευάζονται ως εξής: ιάλυµα α-ναφθόλης 5% α-ναφθόλη 5 g Αιθανόλη (αιθυλική αλκοόλη), 100 ml απόλυτη ιάλυµα υδροξειδίου του καλίου 20% Νερό Υδροξείδιο του καλίου (σφαιρίδια) Κρεατίνη 100 ml 20 g 300 mg Μετά την παρασκευή, τα αντιδραστήρια Voges-Proskauer είναι σταθερά σε ερµητικά κλειστές φιάλες επί δύο εβδοµάδες στους 2 έως 8 C, στο σκοτάδι. Τύποι δειγµάτων Το BBL Enterotube II είναι ένα σύστηµα βιοχηµικής ταυτοποίησης και δεν πρέπει να χρησιµοποιείται απευθείας µε κλινικά δείγµατα. Χρησιµοποιείτε αποµονωµένα στελέχη από κατάλληλα υλικά καλλιέργειας (δείτε την ενότητα ιαδικασία της εξέτασης). Το BBL Enterotube II είναι δυνατό να χρησιµοποιηθεί για την ταυτοποίηση αερόβιων, προαιρετικά αναερόβιων Gram αρνητικών ραβδίων (Enterobacteriaceae) που αποµονώνονται από οποιοδήποτε δείγµα. ιαδικασία της εξέτασης Για τον ενοφθαλµισµό του BBL Enterotube II, είναι δυνατό να χρησιµοποιηθεί υλικό ανάπτυξης από άγαρ MacConkey (MAC), ηωσίνης-κυανού του µεθυλενίου (EMB), Salmonella Shigella (SS) ή Hektoen Enteric (HE) ή από µη εκλεκτικά υλικά καλλιέργειας αιµατούχου άγαρ. Η καλλιέργεια που χρησιµοποιείται για τον ενοφθαλµισµό πρέπει να είναι ηλικίας τουλάχιστον 18 ωρών, αλλά γενικά όχι µεγαλύτερης από 48 ώρες. Βεβαιωθείτε ότι το αποµονωµένο στέλεχος που θα ταυτοποιηθεί µε το BBL Enterotube II είναι µια καθαρή καλλιέργεια ενός Gram αρνητικού ραβδίου. Το BBL Enterotube II πρέπει να χρησιµοποιείται µε αρνητικά στην οξειδάση αποµονωµένα στελέχη, επειδή για την ταυτοποίηση των θετικών στην οξειδάση µικροοργανισµών (µη-enterobacteriaceae) απαιτείται η χρήση του BBL Oxi/Ferm Tube II. 1. Ετοιµάστε ένα φύλλο από τον πίνακα κωδικοποίησης για το αποµονωµένο στέλεχος, σηµειώνοντας το όνοµα του ασθενούς, τον αριθµό του δείγµατος και την ηµεροµηνία. Σηµείωση: Ο χρήστης είναι δυνατό να αποφασίσει εάν θα χρησιµοποιηθεί η βάση δεδοµένων µε ή χωρίς VP. Ανάλογα µε την απόφαση αυτή, χρησιµοποιήστε την εµπρός ή την πίσω πλευρά του πίνακα κωδικοποίησης. Εάν επιλεγεί η βάση δεδοµένων χωρίς VP, ενδέχεται να είναι απαραίτητο να εκτελεστεί η αντίδραση VP ως συµπληρωµατική εξέταση για επιλεγµένους µικροοργανισµούς. IA

5 2. Πάρετε ένα σωληνάριο BBL Enterotube II και σηµειώστε το όνοµα του ασθενούς, τον αριθµό δείγµατος και την ηµεροµηνία στην ετικέτα. 3. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια. Το άκρο του σύρµατος ενοφθαλµισµού βρίσκεται κάτω από το λευκό καπάκι. Μην αποστειρώσετε σε γυµνή φλόγα το σύρµα. 4. Επιλέξτε µια καλά αποµονωµένη αποικία απευθείας µε το άκρο του σύρµατος ενοφθαλµισµού BBL Enterotube II (Εικόνα 1). Στο άκρο και στο πλευρό του σύρµατος πρέπει να φαίνεται µια ορατή ποσότητα ενοφθαλµίσµατος. Αποφύγετε την επαφή του άγαρ µε το σύρµα. Χρησιµοποιήστε ένα ή περισσότερα σωληνάρια BBL Enterotube II για τη συλλογή επιπλέον αποικιών, σύµφωνα µε την εµπειρία σας. 5. Ενοφθαλµίστε το BBL Enterotube II περιστρέφοντας πρώτα το σύρµα, κατόπιν αποσύροντας το σύρµα µέσω και των δώδεκα διαµερισµάτων µε περιστροφική κίνηση (Εικόνα 2). 6. Επανεισαγάγετε το σύρµα (χωρίς αποστείρωση) στο BBL Enterotube II, µε περιστροφική κίνηση µέσω και των 12 διαµερισµάτων, έως ότου η εγκοπή στο σύρµα ευθυγραµµιστεί µε το άνοιγµα του σωληναρίου (Εικόνα 3). Το άκρο του σύρµατος πρέπει να διακρίνεται στο διαµέρισµα αντίδρασης κιτρικού. Σπάστε το σύρµα στην εγκοπή λυγίζοντάς το. Το τµήµα του σύρµατος που αποµένει στο σωληνάριο διατηρεί τις αναερόβιες συνθήκες που είναι απαραίτητες για την αληθή ζύµωση της γλυκόζης, την παραγωγή αερίου και την αποκαρβοξυλίωση της λυσίνης και της ορνιθίνης. 7. Με το αποσπασµένο τµήµα του σύρµατος, διανοίξτε οπές µέσω του λεπτού φύλλου που καλύπτει τις εισόδους αέρα των τελευταίων οκτώ διαµερισµάτων αντιδράσεων (αδονιτόλης, λακτόζης, αραβινόζης, σορβιτόλης, Voges-Proskauer, δουλσιτόλης/pa, ουρίας και κιτρικού) προκειµένου να υποστηριχθεί η αερόβια ανάπτυξη στα διαµερίσµατα αυτά (Εικόνα 4). Επανατοποθετήστε και τα δύο καπάκια. 8. Επωάστε στους 35 ή 37 C επί 18 έως 24 ώρες, µε το BBL Enterotube II να κείτεται στην επίπεδη επιφάνειά του ή σε όρθια θέση. Αφήστε ένα κενό για την κυκλοφορία του αέρα µεταξύ των επωαζόµενων σωληναρίων. 9. Ερµηνεύστε και καταγράψτε όλες τις αντιδράσεις, µε εξαίρεση τις εξετάσεις ινδόλης και Voges- Proskauer. (Για πλήρεις οδηγίες σχετικά µε τον τρόπο ανάγνωσης των αποτελεσµάτων του BBL Enterotube II, δείτε την ενότητα Αποτελέσµατα.) Η ανάγνωση όλων των άλλων εξετάσεων πρέπει να γίνεται πριν από την εκτέλεση των εξετάσεων ινδόλης και Voges-Proskauer, επειδή τα αντιδραστήρια που προστίθενται για τις εξετάσεις αυτές ενδέχεται να µεταβάλλουν το υπόλοιπο των αντιδράσεων του BBL Enterotube II. Προσθήκη αντιδραστηρίου ινδόλης και Voges-Proskauer: 1. Τοποθετήστε το BBL Enterotube II οριζόντια στον πάγκο ή κάθετα σε βάση στήριξης µε το διαµέρισµα αντίδρασης γλυκόζης στραµµένο προς τα κάτω. Χρησιµοποιώντας µία βελόνα ή το αποσπασµένο άκρο ενός σύρµατος ενοφθαλµισµού BBL Enterotube II ή µέσω τήξης µε χρήση ενός θερµού σύρµατος ενοφθαλµισµού, πραγµατοποιήστε διάτρηση ή διάνοιξη µίας οπής διαµέτρου 3 4 mm µε τη µέθοδο της τήξης στην πλαστική µεµβράνη που βρίσκεται πάνω από τα διαµερίσµατα αντίδρασης Ινδόλης/H 2 S και VP. 2. Για την εκτέλεση της εξέτασης ινδόλης: Προσθέστε 3-4 σταγόνες αντιδραστηρίου Kovacs (αρ. κατ ή παρασκευασµένο στο εργαστήριο, δείτε την ενότητα Υλικά που δεν παρέχονται) στο διαµέρισµα αντίδρασης H 2 S/ινδόλης και προσθέστε το αντιδραστήριο µέσα στο διαµέρισµα. Αφήστε το αντιδραστήριο να έλθει σε επαφή µε την επιφάνεια του υλικού καλλιέργειας. Τυχόν θετική εξέταση υποδηλώνεται από την εµφάνιση ερυθρού χρώµατος στο προστεθέν αντιδραστήριο εντός 10 δευτερολέπτων. 3. Για την εκτέλεση της εξέτασης Voges-Proskauer: Η εξέταση αυτή είναι υποχρεωτική εάν επιλεγεί η βάση δεδοµένων µε VP. Ενδέχεται επίσης να είναι απαραίτητη η εκτέλεση της εξέτασης αυτής, εάν χρειάζεται ως εξέταση επιβεβαίωσης όταν χρησιµοποιείται η βάση δεδοµένων χωρίς VP. Κατά τη χρήση παρασκευασµένων στο εργαστήριο αντιδραστηρίων (δείτε την ενότητα Υλικά που δεν παρέχονται), προσθέστε δύο σταγόνες διαλύµατος υδροξειδίου του καλίου 20% που περιέχει κρεατίνη 0,3% και τρεις σταγόνες α-ναφθόλης 5% σε απόλυτη αιθυλική αλκοόλη. Τυχόν θετική εξέταση υποδηλώνεται από την εµφάνιση ερυθρού χρώµατος εντός 20 λεπτών. Μην περιµένετε περισσότερο από 20 λεπτά πριν διαβάσετε τα αποτελέσµατα! Κατά τη χρήση Dropper Reagent, προσθέστε 3 έως 5 σταγόνες αντιδραστηρίου Voges-Proskauer A (αρ. κατ ) και 1 έως 2 σταγόνες αντιδραστηρίου Voges-Proskauer B (αρ. κατ ). Τυχόν θετική αντίδραση υποδηλώνεται από την εµφάνιση σκούρου ερυθρού χρώµατος εντός 5 έως 15 λεπτών. Τυχόν χάλκινος ή καστανωπός αποχρωµατισµός θεωρείται αρνητική αντίδραση. Μην περιµένετε περισσότερο από 15 λεπτά πριν διαβάσετε τα αποτελέσµατα! IA

6 Αποτελέσµατα Για την ταυτοποίηση του αποµονωµένου στελέχους, ακολουθήστε τις οδηγίες που δίνονται παρακάτω. Στον πίνακα 1 παρέχονται πληροφορίες σχετικά µε την εµφάνιση των θετικών και των αρνητικών αντιδράσεων 1. Σηµείωση: Εάν δεν παρατηρείται χρωµατική µεταβολή ή εµφανίζεται πορτοκαλί χρώµα στο διαµέρισµα αντίδρασης γλυκόζης και διαπιστωθεί εµφανής ανάπτυξη µε χρωµατικές µεταβολές σε άλλα διαµερίσµατα, ο µικροοργανισµός δεν είναι µέλος της οικογένειας Enterobacteriaceae. ( είτε την ενότητα ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ). 1. Μετά από 18 έως 24 ώρες επώασης, ερµηνεύστε όλες τις αντιδράσεις. Με εξαίρεση τις εξετάσεις ινδόλης και VP, παρατηρήστε τις αντιδράσεις µε διαδοχικό τρόπο, µε σύγκριση των χρωµάτων των υλικών καλλιέργειας στο σωληνάριο µετά την επώαση, µε εκείνα που δίνονται στο χρωµατικό σχήµα στο εξώφυλλο του πίνακα κωδικοποίησης και (τελικά) µε ένα µη ενοφθαλµισµένο BBL Enterotube II, το οποίο πρέπει να φθάσει πρώτα σε θερµοκρασία δωµατίου (Εικόνα 5). Όλες οι αντιδράσεις που πρέπει να είναι θετικές, ενδέχεται να είναι ίσης, µεγαλύτερης ή µικρότερης έντασης από τα χρώµατα που υποδεικνύονται στον πίνακα χρωµατικών αντιδράσεων. 2. Υποδείξτε κάθε θετικό αποτέλεσµα εξέτασης σηµειώνοντας µε κύκλο τον αριθµό που εµφανίζεται κάτω από το κατάλληλο διαµέρισµα στον πίνακα αποτελεσµάτων (Εικόνα 6). 3. Τέλος, εκτελέστε τις εξετάσεις ινδόλης και VP. Εάν είναι θετικές, σηµειώστε µε κύκλο τους κατάλληλους αριθµούς στο φύλλο που ετοιµάσατε. Η εξέταση VP είναι υποχρεωτική µόνον εάν χρησιµοποιείται η βάση δεδοµένων µε VP. 4. Προσθέστε τους αριθµούς σε κύκλο στο τµήµα µε τις αγκύλες και σηµειώστε το άθροισµα στο χώρο που παρέχεται κάτω από το βέλος (Εικόνα 6). 5. Εντοπίστε τον πενταψήφιο αριθµό στον οδηγό ερµηνείας (βιβλίο κωδικού) και βρείτε την(ις) καλύτερη(ες) δυνατή(ές) απάντηση(εις) στη στήλη µε τίτλο Τιµή ID. Βεβαιωθείτε ότι χρησιµοποιείτε τη σωστή βάση δεδοµένων [(1) Αρνητικά στην οξειδάση αζυµωτικά βακτηρίδια, (2) Enterobacteriaceae µέθοδος χωρίς VP και (3) Enterobacteriaceae µέθοδος µε VP]. Στο παράδειγµα που δίνεται στην Εικόνα 6, επιτυγχάνεται η ταυτοποίηση ως Klebsiella pneumoniae. Εικόνα 1 Εικόνα 2 Εικόνα 3 Εικόνα 4 Εικόνα 5 IA

7 (A) (B) Εικόνα 6: Πίνακας αποτελεσµάτων του BBL Enterotube II (A= βάση δεδοµένων µε VP, B= βάση δεδοµένων χωρίς VP) Πίνακας 1: Εµφάνιση αρνητικών και θετικών αντιδράσεων µε το BBL Enterotube II ΑΝΤΙ ΡΑΣΕΙΣ ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΙΣ Αντιδραστή ρια Αρνητική Θετική ΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 1 Γλυκόζη ερυθρό (έως πορτοκαλί) κίτρινο (έως χρυσό) Γλυκόζη (GLU): Τα τελικά προϊόντα της βακτηριδιακής ζύµωσης της γλυκόζης είναι είτε οξύ είτε οξύ και αέριο. Η µετατόπιση του ph λόγω της παραγωγής οξέος υποδηλώνεται από τη µεταβολή του χρώµατος του δείκτη στο υλικό καλλιέργειας από ερυθρό (αλκαλικό) σε κίτρινο (όξινο). Οποιοσδήποτε βαθµός κίτρινου χρώµατος πρέπει να ερµηνεύεται ως θετική αντίδραση, ενώ η εµφάνιση πορτοκαλί χρώµατος πρέπει να Παραγωγή αερίου χωρίς αποκόλλησ η κηρού αποκόλλησ η κηρού θεωρείται αρνητική. Παραγωγή αερίου (GAS): Αυτή γίνεται εµφανής από τον οριστικό και τον πλήρη διαχωρισµό της επίστρωσης κηρού από την επιφάνεια του υλικού καλλιέργειας γλυκόζης, αλλά όχι από φυσαλίδες στο υλικό καλλιέργειας. Επειδή ποικίλλει η ποσότητα του αερίου που παράγεται από διαφορετικά βακτηρίδια, θα ποικίλει επίσης η απόσταση διαχωρισµού µεταξύ του υλικού καλλιέργειας και της επίστρωσης, ανάλογα µε το στέλεχος που εξετάζεται. ΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 2 Λυσίνη κίτρινο µωβ Αποκαρβοξυλάση της λυσίνης (LYS): Η βακτηριδιακή αποκαρβοξυλίωση της λυσίνης, η οποία έχει ως αποτέλεσµα το σχηµατισµό του αλκαλικού τελικού προϊόντος πτωµαΐνη, υποδηλώνεται από µεταβολή του χρώµατος του δείκτη στο υλικό καλλιέργειας από αχνό κίτρινο (όξινο) σε µωβ (αλκαλικό). Εάν δε λάβει χώρα αποκαρβοξυλίωση της λυσίνης, το υλικό καλλιέργειας παραµένει κίτρινο. IA

8 Αντιδραστή ρια ΑΝΤΙ ΡΑΣΕΙΣ Αρνητική Θετική ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΙΣ ΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 3 Ορνιθίνη κίτρινο µωβ Αποκαρβοξυλάση της ορνιθίνης (ORN): Η αποκαρβοξυλίωση της ορνιθίνης, η οποία έχει ως αποτέλεσµα το σχηµατισµό του αλκαλικού τελικού προϊόντος πουτρεσκίνη, υποδηλώνεται από µεταβολή του χρώµατος του δείκτη στο υλικό καλλιέργειας από αχνό κίτρινο (όξινο) σε µωβ (αλκαλικό). Εάν δε λάβει χώρα αποκαρβοξυλίωση της ορνιθίνης, το υλικό καλλιέργειας παραµένει κίτρινο. ΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 4 H 2S Σχηµατισµός ινδόλης Αδονιτόλη, λακτόζη, αραβινόζη, σορβιτόλη Voges- Proskauer µπεζ έως ανοικτό πορτοκαλί µαύρο Παραγωγή υδροθείου (H 2S): Το υδρόθειο παράγεται από βακτηρίδια που έχουν την ικανότητα αναγωγής ενώσεων που περιέχουν θείο, όπως οι πεπτόνες και το θειοθειικό νάτριο που υπάρχει στο υλικό καλλιέργειας. Το υδρόθειο αντιδρά µε τα άλατα σιδήρου που υπάρχουν επίσης στο υλικό καλλιέργειας για το σχηµατισµό ενός µαύρου ιζήµατος θειούχου σιδήρου (ΙΙΙ), συνήθως κατά µήκος της γραµµής ενοφθαλµισµού. Μερικά στελέχη Providencia ενδέχεται να παράγουν µια διάχυτη καστανή χρώση σε αυτό το υλικό καλλιέργειας, ωστόσο, αυτό δεν πρέπει να συγχέεται µε την αληθή παραγωγή H 2S, όπως υποδηλώνεται από την παρουσία µαύρου χρώµατος. Σηµείωση: Το µαύρο ίζηµα ενδέχεται να αποχρωµατιστεί ή να αναστραφεί σε αρνητικό εάν η ανάγνωση του BBL Enterotube II γίνει µετά από 24 ώρες επώασης. άχρωµο ροζ-ερυθρό Σχηµατισµός ινδόλης (IND): Η παραγωγή ινδόλης λόγω µεταβολισµού της θρυπτοφάνης από το βακτηριδιακό ένζυµο θρυπτοφανάση ανιχνεύεται µε την εµφάνιση ροζ έως ερυθρού χρώµατος µετά την προσθήκη του αντιδραστηρίου ινδόλης Kovacs, το οποίο προστίθεται στο διαµέρισµα µετά από 18 έως 24 ώρες επώασης του σωληναρίου (δείτε την ενότητα ιαδικασία της εξέτασης). ΙΑΜΕΡΙΣΜΑΤΑ 5,6,7,8 ερυθρό (έως πορτοκαλί) άχρωµο έως ανοικτό πορτοκαλί κίτρινο (έως χρυσό) κόκκινο ουλσιτόλη πράσινο κίτρινο (έως χρυσό) PA οποιαδήποτε απόχρωση του πράσινου µαύροκαπνόχροο γκρι Αδονιτόλη (ADON), λακτόζη (LAC), αραβινόζη (ARAB), σορβιτόλη (SORB): Η βακτηριδιακή ζύµωση της αδονιτόλης, της λακτόζης, της αραβινόζης και της σορβιτόλης, που έχει ως αποτέλεσµα το σχηµατισµό όξινων τελικών προϊόντων, υποδηλώνεται από τη µεταβολή του χρώµατος του δείκτη που υπάρχει στο υλικό καλλιέργειας από ερυθρό (αλκαλικό) σε κίτρινο (όξινο). Οποιαδήποτε ένδειξη κίτρινου χρώµατος πρέπει να ερµηνεύεται ως θετική αντίδραση, ενώ η εµφάνιση πορτοκαλί χρώµατος πρέπει να θεωρείται αρνητική. ΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 9 Voges-Proskauer (VP): Η ακετυλοµεθυλοκαρβινόλη (ακετοΐνη) είναι ένα ενδιάµεσο προϊόν της παραγωγής βουτυλενογλυκόλης από τη ζύµωση της γλυκόζης. Η παραγωγή της ακετοΐνης ανιχνεύεται µε την προσθήκη αντιδραστηρίων VP µετά την επώαση (δείτε την ενότητα ιαδικασία της εξέτασης). Η παρουσία ακετοΐνης υποδηλώνεται από την εµφάνιση ερυθρού χρώµατος εντός 5 έως 20 λεπτών. ΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 10 ουλσιτόλη (DUL): Η βακτηριδιακή ζύµωση της δουλσιτόλης, η οποία έχει ως αποτέλεσµα το σχηµατισµό όξινων τελικών προϊόντων, υποδηλώνεται από µεταβολή του χρώµατος του δείκτη που υπάρχει στο υλικό καλλιέργειας από πράσινο (αλκαλικό) σε κίτρινο ή αχνό κίτρινο (όξινο). Απαµινάση της φαινυλαλανίνης (PA): Με την εξέταση αυτή ανιχνεύεται ο σχηµατισµός πυροσταφυλικού οξέος από την απαµίνωση της φαινυλαλανίνης. Το πυροσταφυλικό οξύ που σχηµατίζεται αντιδρά µε το άλας σιδήρου (ΙΙΙ) που υπάρχει στο υλικό καλλιέργειας για την παραγωγή ενός χαρακτηριστικού µαύρου έως καπνόχροου γκρι χρώµατος. ε χρειάζεται η προσθήκη χλωριούχου σιδήρου (ΙΙΙ) επειδή το υλικό καλλιέργειας περιέχει ήδη άλας σιδήρου. IA

9 ΑΝΤΙ ΡΑΣΕΙΣ Αντιδραστή ρια Αρνητική Θετική Ουρία µπεζ έως ανοικτό πορτοκαλί ανοικτό ροζ έως ροζ ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΙΣ ΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 11 Ουρία (UREA): Η ουρεάση, ένα ένζυµο που διαθέτουν διάφοροι µικροοργανισµοί, υδρολύει την ουρία σε αµµωνία προκαλώντας µετατόπιση του χρώµατος του δείκτη στο υλικό καλλιέργειας από κίτρινο (όξινο) σε ερυθρό-µωβ (αλκαλικό). Η εξέταση ουρεάσης είναι ισχυρώς θετική για τα είδη Proteus και ενδέχεται να καταστεί εµφανής αρκετά ενωρίς, σε 4 έως 6 ώρες µετά την επώαση. Είναι ασθενώς θετική (ανοικτό ροζ χρώµα) µετά από 18 έως 24 ώρες επώασης για τα είδη Klebsiella και Enterobacter. ΙΑΜΕΡΙΣΜΑ 12 Κιτρικό πράσινο κυανό Κιτρικό (CIT): Με την εξέταση αυτή ανιχνεύονται εκείνοι οι µικροοργανισµοί που διαθέτουν την ικανότητα κατανάλωσης κιτρικών, µε τη µορφή των µετά νατρίου αλάτων του κιτρικού οξέος, ως τη µοναδική πηγή άνθρακα. Οι µικροοργανισµοί που διαθέτουν την ικανότητα κατανάλωσης κιτρικών παράγουν αλκαλικούς µεταβολίτες, οι οποίοι µεταβάλλουν το χρώµα του δείκτη από πράσινο (όξινο) σε βαθύ κυανό (αλκαλικό). Οποιοσδήποτε βαθµός κυανού χρώµατος πρέπει να θεωρείται θετικό αποτέλεσµα. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ορισµένοι µικροοργανισµοί δεν εµφανίζουν πάντοτε την ιδανική ισχυρή θετική χρωµατική µεταβολή. Τυχόν ανοικτότερες αποχρώσεις του ιδίου βασικού χρώµατος πρέπει να θεωρούνται επίσης θετικές. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Το BBL Enterotube II έχει σχεδιαστεί ειδικά για την ταυτοποίηση των Gram αρνητικών ραβδίων, τα οποία είναι αρνητικά στην οξειδάση, και πρέπει να χρησιµοποιείται µόνο για τη διαφοροποίηση των µελών της οικογένειας Enterobacteriaceae. Με το σύστηµα αυτό, είναι δυνατόν επίσης να ταυτοποιηθεί ένας περιορισµένος αριθµός αρνητικών στην οξειδάση, αζυµωτικών βακτηριδίων, αλλά για τους µικροοργανισµούς αυτούς συνιστάται η χρήση του BBL Oxi/Ferm Tube II. Χαρακτηριστικά απόδοσης Το BBL Enterotube II έχει αξιολογηθεί σε διάφορες εξωτερικές µελέτες. Με βάση τα δηµοσιευµένα δεδοµένα, υποδεικνύεται ορθότητα ταυτοποίησης 87 έως 99% Αναπαραγωγιµότητα: Εξετάστηκαν συνολικά δέκα µικροοργανισµοί εις διπλούν σε διάστηµα τριών ηµερών, από τρία ανεξάρτητα εργαστήρια µε χρήση του BBL Enterotube II. Τρεις (30%) από τους µικροοργανισµούς εµφάνισαν πανοµοιότυπους βιοκωδικούς µε κάθε επαναλαµβανόµενη µέτρηση σε καθένα από τα εργαστήρια που εξετάστηκαν. Πέντε (50%) από τους µικροοργανισµούς εµφάνισαν ελαφρές διακυµάνσεις στους βιοκωδικούς, αλλά έδωσαν πανοµοιότυπες ταυτοποιήσεις µικροοργανισµών µε κάθε επαναλαµβανόµενη µέτρηση. ύο (20%) από τους µικροοργανισµούς εµφάνισαν ελαφριές διακυµάνσεις στους βιοκωδικούς µε πανοµοιότυπη ταυτοποίηση µε δύο από τις 18 επαναλαµβανόµενες µετρήσεις για αυτούς τους µικροοργανισµούς να έχουν ως αποτέλεσµα µη ταυτοποιήσιµους βιοκωδικούς. Σε όλες τις επαναλαµβανόµενες µετρήσεις, η συµφωνία στην ταυτοποίηση ήταν 98,9%. Σε άλλη µελέτη, αναλύθηκαν 247 προηγουµένως ταυτοποιηθέντων στελεχών (συµπεριλαµβανοµένων γνωστών καλλιεργειών του ATCC) µε χρήση του συστήµατος ταυτοποίησης BBL Enterotube II. Κατά τον αρχικό ενοφθαλµισµό, εννέα µικροοργανισµοί εµφάνισαν ασύµφωνα βιοχηµικά αποτελέσµατα. Κατά τον επανενοφθαλµισµό, οκτώ από αυτά τα ασύµφωνα αποτελέσµατα επιλύθηκαν. Σε πέντε περιπτώσεις, το αποτέλεσµα που επιλύθηκε ήταν ισοδύναµο µε το αρχικό αποτέλεσµα της µεθόδου αναφοράς. Σε τρεις περιπτώσεις, η εξέταση που επιλύθηκε ήταν ισοδύναµη µε το αρχικό αποτέλεσµα του BBL Enterotube II. Σε µία περίπτωση, το αποτέλεσµα που επιλύθηκε ήταν διαφορετικό από οποιοδήποτε αρχικό αποτέλεσµα. Το ασύµφωνο αποτέλεσµα της βιοχηµικής εξέτασης επιλύθηκε µε χρήση µιας τρίτης µεθόδου, η οποία έδωσε παρόµοιο αποτέλεσµα µε το BBL Enterotube II. Τα δείγµατα της µελέτης συνοψίζονται στον πίνακα 2. Στον πίνακα αυτό παρέχεται µια λίστα των γενών, των ειδών, του αριθµού στελεχών που εξετάστηκαν και το ποσοστό των µικροοργανισµών που δίνουν θετικές βιοχηµικές αντιδράσεις. Περιορισµοί της διαδικασίας Το BBL Enterotube II έχει σχεδιαστεί για τις τάξεις που παρέχονται. Τάξεις διαφορετικές από εκείνες που παρατίθενται στον πίνακα 3 δεν προορίζονται για χρήση στο σύστηµα αυτό. Οι βιοκωδικοί του BBL Enterotube II δεν είναι δυνατό να χρησιµοποιηθούν για τον προσδιορισµό της φαινοτυπικής ταυτότητας µεταξύ αποµονωµένων στελεχών από τα ίδια ή διαφορετικά δείγµατα. IA

10 Τα βιοχηµικά αποτελέσµατα που λαµβάνονται µε το BBL Enterotube II ενδέχεται να διαφέρουν από άλλες µεθόδους και δηµοσιευµένο υλικό. Για την επιβεβαίωση των Salmonella και Shigella spp. απαιτούνται ορολογικές εξετάσεις. Αποµονωµένα στελέχη των µικροοργανισµών αυτών πρέπει να αποστέλλονται σε κατάλληλα εργαστήρια αναφοράς για πλήρη προσδιορισµό του ορότυπου και επιδηµιολογική παρακολούθηση. Η ταυτοποίηση των Gram αρνητικών βακτηριδίων πρέπει να γίνεται λαµβάνοντας υπόψη τα επιπλέον χαρακτηριστικά, όπως την πηγή του δείγµατος, το ιστορικό του ασθενούς, την αποικιακή και τη µικροσκοπική µορφολογία, την ορολογία και τις µορφολογίες ευαισθησίας σε αντιµικροβιακούς παράγοντες. Η ταυτοποίηση σπάνιων αποµονωµένων στελεχών πρέπει να επαναλαµβάνεται ή να εκτελούνται επιπλέον εξετάσεις για την επαλήθευση της ταυτοποίησης τέτοιων µικροοργανισµών. Μερικά στελέχη µικροοργανισµών ενδέχεται να εµφανίζουν ατυπικές βιοχηµικές αντιδράσεις λόγω ασυνήθων θρεπτικών απαιτήσεων ή µεταλλάξεων και η ταυτοποίησή τους ενδέχεται να είναι δυσχερής. Μερικοί µικροοργανισµοί ενδέχεται να χρειάζονται περισσότερο από 24 ώρες επώασης για σωστή ταυτοποίηση. Παρότι έχει προταθεί πρόσφατα να συµπεριληφθεί το Plesiomonas shigelloides στην οικογένεια Enterobacteriaceae, το είδος αυτό δε συµπεριλαµβάνεται στις βάσεις δεδοµένων του BBL Enterotube II. 1,2 Αντίθετα, ο µικροοργανισµός αυτός πρέπει να εξετάζεται µε χρήση του συστήµατος και της βάσης δεδοµένων του BBL Oxi/Ferm Tube II. Πίνακας 2: Αποτελέσµατα της αξιολόγησης απόδοσης Μικροοργανισµοί Αρ. εξετασθέντων GLU GAS LYS ORN H2S IND ADO LAC ARA SOR DUL PA URE CIT ACINETOBACTER A. anitratus A. Iwoffii* BURKHOLDERIA B. cepacia CEDECEA C. davisae C. lapagei* CITROBACTER C. amalonaticus C. freundii ESCHERICHIA E. coli ΕΝΤΕΡΙΚΕΣ ΟΜΑ ΕΣ Εντερική οµάδα 60* ENTEROBACTER E. aerogenes E. amnigenus bio E. cloacae EWINGELLA E. americana HAFNIA H. alvei* KLEBSIELLA K. oxytoca* K. ozaenae K. pneumoniae KLUYVERA K. ascorbata* MORGANELLA M. morganii PROTEUS P. mirabilis* IA

11 Πίνακας 2: Αποτελέσµατα της αξιολόγησης απόδοσης (συνέχεια) Μικροοργανισµοί Αρ. εξετασθέντων GLU GAS LYS ORN H2S IND ADO LAC ARA SOR DUL PA URE CIT PROVIDENCIA P. rettgeri* P. stuartii* SALMONELLA Salmonella, είδος Salmonella (ariz) IIIa SERRATIA S. liquefaciens S. marcescens* S. plymuthica SHIGELLA Shigella, οροοµάδες A,B,C S. sonnei YERSINIA Y. enterocolitica Y. frederiksenii Y. ruckeri * Ένας µικροοργανισµός από την οµάδα αυτή προήλθε από την American Type Culture Collection. Πίνακας 3: Τάξεις της οικογένειας Enterobacteriaceae που συµπεριλήφθησαν στις βάσεις δεδοµένων του BBL Enterotube II Buttiauxella agrestis Hafnia alvei Salmonella serotype Pullorum Cedecea davisae Hafnia alvei biogroup 1 Salmonella (arizonae) IIIa Cedecea lapagei Klebsiella pneumoniae Salmonella (diarizonae) IIIb Cedecea neteri Klebsiella oxytoca Serratia marcescens Cedecea species 3 Raoultella (Klebsiella) ornithinolytica Serratia marcescens biogroup 1 (group 47) Cedecea species 5 Klebsiella ozaenae Serratia liquefaciens Citrobacter freundii Klebsiella rhinoscleromatis Serratia rubidaea Citrobacter koseri (diversus) Kluyvera ascorbata Serratia odorifera biogroup 1 Citrobacter amalonaticus Kluyvera cryocrescens Serratia odorifera biogroup 2 Citrobacter farmeri Leclercia adecarboxylata Serratia plymuthica Edwardsiella tarda Leminorella sp. Serratia ficaria Edwardsiella tarda biogroup 1 Moellerella wisconsensis Serratia fonticola Edwardsiella hoshinae Morganella morganii Shigella serogroups A, B, C Edwardsiella ictaluri Morganella morganii biogroup 1 Shigella sonnei Enterobacter aerogenes Obesumbacterium proteus biogroup 2 Tatumella ptyseos Enterobacter asburiae Pantoea agglomerans (Enterobacter Yersinia enterocolitica agglomerans complex) Enterobacter cloacae Proteus mirabilis Yersinia frederiksenii Enterobacter gergoviae Proteus vulgaris Yersinia intermedia Enterobacter sakazakii Proteus penneri Yersinia kristensenii Enterobacter cancerogenus (taylorae) Proteus myxofaciens Yersinia pestis Enterobacter amnigenus biogroup 1 Providencia rettgeri Yersinia pseudotuberculosis Enterobacter amnigenus biogroup 2 Providencia stuartii Yersinia ruckeri Escherichia coli Providencia alcalifaciens Yokenella regensburgeri Escherichia coli (AD), inactive Providencia rustiganii Enteric group 58 Escherichia fergusonii Salmonella species Enteric group 59 Escherichia hermanii Salmonella serotype Typhi Enteric group 60 Escherichia vulneris Salmonella serotype Choleraesuis Escherichia blattae Salmonella serotype Paratyphi A Ewingella americana Salmonella serotype Gallinarum ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Farmer, J.J. III Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. IA

12 2. Abbott, S.L Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Plesiomonas, and other Enterobacteriaceae. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Farmer, J.J, III., et al Biochemical identification of new species and biogroups of Enterobacteriaceae isolated from clinical specimens. J. Clin. Microbiol. 21: Ewing, W.H Differentation of Enterobacteriaceae by biochemical reactions, U.S. Department of Health, Education and Welfare, Public Health Service, National Center for Disease Control. 5. Ewing, W.H Biochemical characterization of Citrobacter freundii and Citrobacter diversus. U.S. Dept. of Health, Education and Welfare, Public Health Service, National Center for Disease Control. 6. Ewing, W.H., and M.A. Fife Enterobacter agglomerans and the Herbicola-Lathyri bacteria. U.S. Dept. of Health, Education and Welfare, Public Health Service, National Center for Disease Control. 7. Darland, G., and B.R. Davis Biochemical and serological characterization of hydrogen sulfide producing variants of Escherichia coli. U.S. Dept. of Health, Education and Welfare, Public Health Service, National Center for Disease Control. 8. Ewing, W.H Isolation and identification of Salmonella and Shigella. U.S. Dept. of Health, Education and Welfare, Public Health Service, National Center for Disease Control. 9. Ewing, W.H., B.R. Davis, and M.A. Five Biochemical characterization of Serratia liquefaciens and Serratia rubidaea. U.S. Dept. of Health, Education and Welfare, Public Health Service, National Center for Disease Control. 10. Brenner, D.J., et al Taxonomic and nomenclature changes in Enterobacteriaceae. U.S. Dept. of Health, Education and Welfare, Public Health Service, National Center for Disease Control.:, Oct Ewing, W.H Edwards and Ewing s identification of Enterobacteriaceae. Elsevier Science Publishing Co., New York, N.Y. 12. Holmes, B Comparative evaluation of the Roche Cobas IDA and Enterotube II systems for identifying members of the family Enterobacteriaceae. J. Clin. Microbiol. 27: Mastroeni, P. et al Comparison of six systems for the identification of Enterobacteriaceae. G. Batteriol. Virol. Immunol. 76: Chiaradia, V. et al Comparative evaluation of 3 miniaturized systems (API 20E, Enterotube II, Sensititre AP60) commonly used in clinical microbiology laboratories. Quad. Sclavo Diagn. 19: [in Italian]. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ ΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BBL Enterotube II Αρ. κατ σωληνάρια ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες παρακαλούµε επικοινωνήστε µε τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: , Fax: Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo and BBL are trademarks of Becton, Dickinson and Company. Enterotube and Oxi/Ferm are trademarks of Becton Dickinson GmbH. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection Becton, Dickinson and Company IA