Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA Αναθ.: April 2013

Transcript

1 PA Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA Αναθ.: April 2013 Glucose Agar Gentamicin and Penicillin and Streptomycin ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το Glucose Agar χρησιμοποιείται για την απομόνωση και καλλιέργεια μυκήτων (ζυμομύκητες, ευρωτομύκητες και δερματόφυτα) από κλινικά δείγματα. Τα Agar with, Gentamicin and και BD Sabouraud Penicillin and Streptomycin είναι εκλεκτικά υλικά για την απομόνωση μυκήτων από κλινικά δείγματα. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Το άγαρ γλυκόζης Sabouraud είναι ένα υλικό γενικής χρήσεως που επινοήθηκε αρχικά για την καλλιέργεια δερματόφυτων. 1,2 Σήμερα χρησιμοποιείται για την απομόνωση και καλλιέργεια όλων των μυκήτων. 3-5 Οι πεπτόνες στο Άγαρ Γλυκόζης Sabouraud είναι πηγές αζωτούχων παραγόντων ανάπτυξης. Η γλυκόζη αποτελεί πηγή ενέργειας για την ανάπτυξη μικροοργανισμών. Η υψηλή συγκέντρωση γλυκόζης προσφέρει ένα πλεονέκτημα για την ανάπτυξη των (οσμωτικά σταθερών) μυκήτων ενώ η υψηλή συγκέντρωση ζάχαρης δεν είναι ανεκτή από τα περισσότερα βακτηρίδια. Επιπλέον, το χαμηλό ph είναι ιδανικό για μύκητες, αλλά δεν ισχύει το ίδιο για πολλά βακτηρίδια. 3 Το Άγαρ Γλυκόζης Sabouraud είναι μόνο ελαφρώς εκλεκτικό στα βακτηρίδια. Τα, Gentamicin and, και Penicillin and Streptomycin είναι εκλεκτικά υλικά που βασίζονται στο Άγαρ Γλυκόζης Sabouraud. Έχουν προστεθεί εκλεκτικοί παράγοντες για την αναστολή βακτηριδίων. Η χλωραμφαινικόλη είναι ένα αντιβιοτικό ευρέως φάσματος που αναστέλλει μεγάλο εύρος gram αρνητικών και gram θετικών βακτηριδίων αλλά ενδέχεται να έχει ανασταλτική επίδραση σε αρκετούς παθογόνους μύκητες. 4 Τα αντιμικροβιακά όπως η πενικιλλίνη, η γενταμυκίνη και η στρεπτομυκίνη ή ένας συνδυασμός αυτών, έχει δειχθεί ότι είναι αποτελεσματικά στην αναστολή βακτηριδίων χωρίς να επηρεάζεται η ανάπτυξη μυκήτων. 2-5 Τα υλικά αυτά χρησιμοποιούνται για την απομόνωση μυκήτων από κλινικά δείγματα ή υλικά για τα οποία υπάρχει υποψία ότι περιέχουν βακτηριακούς μολυσματικούς παράγοντες. Το Άγαρ Γλυκόζης Sabouraud είναι ένα από τα υλικά που χρησιμοποιείται στις εξετάσεις μικροβιακού ορίου (Microbial Limit Tests) στο USP και EP. 6,12 ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ Συνθέσεις: δείτε τον Πίνακα 1 ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τα τρυβλία εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την

2 υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες 5 ή 10 τρυβλίων επί μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. Πίνακας 1: ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ Συνθέσεις* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού Όνομα προϊόντος Glucose Agar Penicillin and Streptomycin Gentamicin and Agar with Συστατικά Παγκρεατικό 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g αφομοίωμα της καζεΐνης Πεπτικό αφομοίωμα 5,0 5,0 5,0 5,0 ζωϊκού ιστού Γλυκόζη 40,0 40,0 40,0 40,0 Άγαρ 15,0 15,0 15,0 15,0 Πενικιλλίνη G IU - - Στρεπτομυκίνη - 0,06 g - - Γενταμυκίνη - - 0,04 - Χλωραμφαινικόλη - - 0,4 0,4 ph ph 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). είτε την υποσημείωση σχετικά με την επώαση. Όνομα προϊόντος Glucose Agar Penicillin and Gentamicin and Streptomycin Στελέχη εξέτασης **Candida albicans ATCC **Saccharomyce s cerevisiae DSM 1333 ** Aspergillus brasiliensis ATCC16404 ** Penicillium roquefortii ATCC 9295 ***Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 *Staphylococcus aureus ATCC Απουσία αναστολής Πλήρης αναστολή *Escherichia coli Απουσία ATCC αναστολής Πλήρης αναστολή Μη Ανοικτό πορτοκαλί ενοφθαλμισμένο Επώαση: *48 h C / **</= 5 days, C, αερόβια PA

3 ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά Glucose Agar,, Gentamicin and, ή Penicillin and Streptomycin, όλα παρέχονται σε τρυβλία Stacker των 90 mm. Μικροβιολογικά ελεγμένα. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Τα προϊόντα που περιγράφονται σε αυτό το έγγραφο είναι υλικά απομόνωσης για μύκητες και μπορούν να χρησιμοποιηθούν (εναλλακτικά ή σε συνδυασμό δύο υλικών από τα παραπάνω) για όλα τα κλινικά δείγματα (δείτε επίσης ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ). Τα υλικά χρησιμοποιούνται επίσης σε πολλούς κλάδους βιομηχανικής μικροβιολογίας και στην παρακολούθηση υγιεινής. ιαδικασία της εξέτασης Επιστρώστε το δείγμα αμέσως μόλις πραγματοποιηθεί η παραλαβή του στο εργαστήριο. Το τρυβλίο επίστρωσης χρησιμοποιείται κυρίως για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών από δείγματα που περιέχουν ανάμεικτη χλωρίδα. Εναλλακτικά, εάν καλλιεργείται υλικό απευθείας από επίχρισμα, κυλήστε το στυλεό σε μια μικρή περιοχή της επιφάνειας στο άκρο και μετά επιστρώστε από αυτή την ενοφθαλμισμένη περιοχή. Εάν το δείγμα αποτελείται από δερματικά ψήγματα, τρίχες ή νύχια, τοποθετήστε το υλικό στο κέντρο της επιφάνειας του υλικού. Εάν είναι δυνατόν, τα μεγαλύτερα σωματίδια θα πρέπει να συμπιεστούν στην επιφάνεια με στείρα λαβίδα για να γίνει επαφή με το υλικό. Για την ανίχνευση δερματόφυτων, θα πρέπει να συμπεριληφθεί επίσης BD Dermatophyte Agar ή BD Mycosel Agar. Εάν χρησιμοποιείται, Agar with Gentamicin and, και Penicillin and Streptomycin θα πρέπει να συμπεριληφθεί επίσης ένα τρυβλίο Glucose Agar. Τελικά, θα πρέπει επίσης να ενοφθαλμιστεί ένα μη εκλεκτικό υλικό όπως BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood ώστε να παράσχει ένδειξη άλλων βακτηριακών παθογόνων που μπορεί να υπάρχουν στο δείγμα. Εάν το υλικό χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ζυμομυκήτων (π.χ., είδη Candida) σε κλινικά δείγματα, επωάστε για 48 ώρες στους 30 έως 35 C. Εάν υπάρχει υποψία νηματοειδών μυκήτων, συμπεριλαμβανομένων δερματόφυτων, επωάστε για διάστημα μέχρι μια εβδομάδα στους 25 έως 30 C. Τα δερματόφυτα απαιτούν ενίοτε 3 ή περισσότερες εβδομάδες για να παράξουν ανάπτυξη. Εάν το υλικό χρησιμοποιείται για την παρακολούθηση υγιεινής, επωάστε για διάστημα μέχρι 7 ημέρες στους 20 έως 25 C. Εάν η επώαση είναι μεγαλύτερη από 3 ημέρες, θα πρέπει να παράσχετε την κατάλληλη υγρασία. Τα τρυβλία μπορούν να σφραγίζονται με αυτοκόλλητη πλαστική ταινία για να αποφεύγεται η αποξήρανση. Για λεπτομέρειες σχετικά με τη θερμοκρασία ανάπτυξης και την επώαση, συμβουλευτείτε τις αναφορές. 5,7-10 Αποτελέσματα Μετά από επαρκή επώαση, οι πλάκες μπορεί να εμφανίζουν απομονωμένες αποικίες σε γραμμωτές περιοχές και πλήρες ταπήτιο σε περιοχές έντονου ενοφθαλμισμού. Εξετάστε τα τρυβλία για αποικίες μυκήτων που εμφανίζουν τυπικό χρώμα και μορφολογία. Θα πρέπει να εκτελούνται βιοχημικές εξετάσεις και μικροσκοπικές και ορολογικές διαδικασίες για την επιβεβαίωση των ευρημάτων. 6-9 Επειδή είναι μεγάλος ο αριθμός παθογόνων μυκήτων, δεν δίνονται σε αυτό το έγγραφο 2,3, 5-9 λεπτομέρειες σχετικά με την εμφάνισή τους. Συμβουλευτείτε τις αναφορές. PA

4 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Τα υλικά που περιγράφονται σε αυτό το έγγραφο είναι τυπικά υλικά για την απομόνωση και καλλιέργεια μυκήτων από κλινικά και μη κλινικά δείγματα κάθε τύπου Λόγω του μεγάλου εύρους θερμοκρασίας ανάπτυξης των μυκήτων, μπορεί να είναι απαραίτητος ο ενοφθαλμισμός αρκετών τρυβλίων του ίδιου υλικού και η επώασή τους σε διαφορετικές θερμοκρασίες. Συμβουλευτείτε την ενότητα ιαδικασία της Εξέτασης και τις κατάλληλες 5, 7-10 αναφορές. Επειδή το Glucose Agar είναι μόνο ασθενώς εκλεκτικό, αναπτύσσονται βακτηρίδια στο υλικό, ιδιαίτερα μετά από παρατεταμένη περίοδο επώασης. Εάν υπάρχει υποψία βακτηριακής μόλυνσης των δειγμάτων, υλικών ή των περιοχών που ερευνώνται, πρέπει να χρησιμοποιηθεί υλικό με μεγαλύτερη εκλεκτικότητα, π.χ.,, Gentamicin and, ή BD Sabouraud Penicillin and Streptomycin για την καλλιέργεια του δείγματος. Τα Nocardia και Actinomyces είναι νηματοειδή βακτήρια (όχι μύκητες!) και, συνεπώς δεν αναπτύσσονται σε όλα τα υλικά Sabouraud που περιέχουν βακτηριακούς αναστολείς. ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Sabouraud, R Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: Council of Europe, European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ ΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ Glucose Agar Αρ. κατ Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 120 τρυβλία Αρ. κατ PA

5 Gentamicin and Αρ. κατ Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 120 τρυβλία Penicillin and Streptomycin Αρ. κατ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD: Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA