ΜΟΡΙΑΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΟΥ ΜΜΚΠ. Δημήτρης Χατζημπούγιας MD, MSc, PhD Παθολογοανατόμος

Transcript

1 ΜΟΡΙΑΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΟΥ ΜΜΚΠ Δημήτρης Χατζημπούγιας MD, MSc, PhD Παθολογοανατόμος

2

3 2017: Το σημερινό πλαίσιο στον Καρκίνο του Πνεύμονα NCCN Guidelines for NSCLC 5 updates from January 2016 to January 2017 Μόνο 17.7% όλων των ασθενών με ΚΠ είναι εν ζωή 5 χρόνια μετά την διάγνωση Μεγάλη πρόοδος σε screening, ελάχιστα επεμβατικά τεχνικές, RT, SART, στοχεύουσες θεραπείες, ανοσοθεραπείες Οι περισσότεροι ασθενείς διαγιγνώσκονται με προχωρημένου σταδίου ΚΠ

4

5 ΙΑΤΡΙΚΗ ΑΚΡΙΒΕΙΑΣ Υπάρχει test/ουσία: Προβλέπει την αποτελεσματικότητα & τοξικότητα Προσδιορίσει/ξεχωρίσει ασθενείς που θα ωφεληθούν περισσότερο από δαπανηρές και πιθανά τοξικές θεραπείες;?

6

7

8

9

10 Τι είναι ο Βιοδείκτης; Αντικειμενική μέτρηση Δείκτης: Φυσιολογικών βιολογικών λειτουργιών Παθολογικών λειτουργιών Φαρμακολογικής απάντησης σε θεραπευτικές παρεμβάσεις

11 Ανοσογονικότητα του Όγκου Suzanne L. Topalian, Janis M. Taube, et al.mechanism-driven biomarkers to guide immune checkpoint blockade in cancer therapy. Nat Rev Cancer May ; 16(5): doi: /nrc

12 Classification of 1. Biomarkers Diagnostic Do I have cancer? 2. Prognostic (natural biological potential) Will I die from cancer? KRAS mutation- poor survival 3. Predictive (therapy response) Which therapy is most suitable for my type of cancer? ALK fusion oncogene, ROS1 gene rearrangements, EGFR mutations 4. Therapy monitoring (effectiveness) Do I benefit from my cancer treatment? gr

13 Γενετικοί Βιοδείκτες Σχετίζονται με στοχεύουσα θεραπεία Oncogene-targeted inhibitors 1. EGFR active mutations (TKI) 2. ALK rearrangements / ROS1 rearrangement (ALK inhibitors) 3. KRAS, BRAF mutations 4. c-met amplification 5. HER2 gr

14 Βιοδείκτες σχετιζόμενοι με Anti- PD-L1 (Dako) CPI Autostainer Link platform (Aligent Technologia/Dako) Περιλαμβάνει θετικά και αρνητικά controls Kit 50 test 10/2015 FDA έγκριση ως Companion diagnostic test για Pembrolizumab σε ασθενείς με προχωρημένο ΜΜΚΠ ως θεραπεία πρώτης γραμμής 50% και δεύτερης γραμμής >1%. gr 22C3 pharmdx ΦΟΡΜΑ ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗΣ Γενικές πληροφορίες Αποτέλεσμα θετικού μάρτυρα: θετικό/αρνητικό Αποτέλεσμα αρνητικού μάρτυρα: θετικό/αρνητικό Παρουσία τουλάχιστον 100 ζώντων νεοπλασματικών κυττάρων: ναι/όχι Ποσοστό θετικών νεοπλασματικών κυττάρων (Tumor Proportion Scor-TPS):. PD-L1 έκφραση Καμία..< 1%. Χαμηλή 1% - 49% Υψηλή 50%-100% Προαιρετικές πληροφορίες Παρουσία/ποσοτικοποίηση ανοσοκυττάρων σχετιζόμενων με τον όγκο Άλλες πληροφορίες προς τον κλινικό ιατρό

15 Βιοδείκτες σχετιζόμενοι με CPI Νεοπλασματικά κύτταρα PD-L1 SP263 gr Durvalumab (Stewart 2015, Garon 2015 >25%TC) Συμφωνία με το PD-L pharmdx και συσχετίστηκε με το Νivolumab (Scheel 2016, Hirsh %, 5%, 10% TC δεύτερη γραμμή θεραπείας) Pembrolizumab (5/2017) 1% δεύτερη γραμμή θεραπείας 50% πρώτη γραμμή θεραπείας Antonia 2016 πολυκεντρική φάσης Ιb : υπάρχει όφελος της θεραπείας ανεξάρτητα με την έκφραση του PD-L1

16 gr

17 Pathologist needs a high quality specimen gr

18 ΑΚΡΙΒΕΣΤΕΡΗ ΔΥΝΑΤΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ FNAB - BIOPSY Μοριακή διαγνωστική ΕΞΑΤΟΜΙΚΕΥΜΕΝΗ ΘΕΡΑΠΕΙΑ Ανοσοϊστοχημεία IHC

19 Tips and Techniques for Maximizing Small Biopsy and Cytology Specimens for Molecular and Ancillary Testing: The University of Colorado Experience. Do More With Less. Arch Pathol Lab Med Vol 140, November 2016

20 Στρατηγική Διαχείριση του Υλικού ΠΡΙΝ ΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΜΟΝΟ ΦΟΡΜΟΛΗ 10% 30 μετά τη λήψη δείγματος ΣΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ Μονιμοποίηση 6-48 hrs Χειρουργικό παρασκεύασμα: λήψη τομών/5mm Κύβο παραφίνης: touch n go προσέγγιση 20 άβαφες τομές σε πλακίδια (IHCμοριακή) Ώστε Αποφυγή επαναχ/ποίησης Κ.Π Σωστές συνθήκες Αποθήκευσης -**Suh J, Rekhtman N, Ladanyi M, Riely GJ, Travis WD. Testing of new IASLC/ATS/ERS criteria for diagnosis of lung adenocarcinoma (AD) in small biopsies: minimize immunohistochemistry (IHC) to maximize tissue for molecular studies. Mod Pathol. 2011;24(1S):424A. - Travis WD, Rekhtman N. Pathological diagnosis and classification of lung cancer in small biopsies and cytology: strategic management of tissue for molecular testing. Semin Respir Crit Care Med. 2011;32(1): Rossi G, Papotti M, Barbareschi M, Graziano P, Pelosi G. Morphology and a limited number of immunohistochemical markers may efficiently subtype nonsmall- cell lung cancer. J Clin Oncol. 2009;27(28):e Rekhtman N, Ang DC, Sima CS, Travis WD, Moreira AL. Immunohistochemical algorithm for differentiation of lung adenocarcinoma and squamous cell carcinoma based on large series of whole-tissue sections with validation in small specimens. Mod Pathol. 2011;24(10):

21 Παθολογοανατόμος/ Ιστοτεχνολόγος ΜΙ ΚΡ Ο ΔΙ ΑΤ Ο Μ Η

22 Μοριακός βιολόγος/γενετιστή

23 PATHOLOGY REPORT NOWADAYS SPECIMEN LEFT UPPER LOBE BRONCHIAL BIOPSY MACROSCOPIC DESCRIPTION Fragments of white tissue measuring up to 4mm MICROSCOPY This bronchial mucosa and submucosa are infiltrated by poorly differentiated non-small cell carcinoma. The growth pattern is squamoid, but desmosomes and keratin are not evident. Occasional cells contain vacuoles, possibly mucin. Immunochemistry reveals expression of cytokeratins of class 7 as well as of TTF-1. There is no expression of p63. Conclusion: These features support a diagnosis of adenocarcinoma. gr PREDICTIVE PROFILING EGFR GENE MUTATIONS Epidermal growth factor (EGFR) mutation analysis has been performed to determine suitability of this patient s non-small cell lung cancer (NSCLC) for treatment with tyrosine kinase inhibitors (TKIs). Analysis was done using RT-PCR (Scorpions/ARMS methodology, Qiagen Therascreen EGFR kit). The Therascreen kit detects the following 29 somatic mutations: Exon 18: G719X The kit detects, but does not distinguish between, any from the following 3 mutations; G719A (c.21567g>a p.g719a) G719S (c. 2155G>S p.g719s) G719C (c.2155g>c p.g719c) Exon 19: deletions The kit detects, but does not distinguish between, any from a total of 19 deletions; Exon 20: T790M Exon 20: S768I Exon 20 : Insertions The kit detects, but does not distinguish between, any from the following 3 mutations; c.2307_2308ins9 p.v769_d770insasv c.2319_2320inscac p.h773_v774insh c.2319_2311insggt p.d770_n771insg Exon 21: L858R (c. 2573T>G p.l858r) Exon 21: L861Q (c.2582t>a p.l861q) Test sensitivity The limit of sensitivity is stated to be 1% mutated EGFR alleles in a wild-type background ALK GENE REARRANGEMENT Immunochemistry using the Ventana system and Roche D5F3 antibody has been performed to detect the ALK fusion protein. Result: STRONG, GRANULAR EXPRESSION OF THE PROTEIN IS DETECTED. Conclusion: Such expression correlates with rearrangement of the ALK gene and indicates that this patient is likely to respond to TKIs active against NSCLCs with this genetic abnormality PD-L1 EXPRESSION Conclusion Expression of PD-L1 has been sought by immunochemistry using the Dako 22C3 antibody as a guide to the likely sensitivity of the tumour to pembrolizumab. Expression of PD-L1 on cell membranes is as follows: Neoplastic cells: overall expression 60% (strong 30%; moderate 30% Immune cells: overall expression 10% (weak 10%) This patient is unlikely to respond to TKIs active against NSCLCs with sensitising mutations in the EGFR gene. Any remaining DNA from this patient s sample will be stored in the laboratory archives. In terms of guiding the use of pembrolizumab, this specimen should be considered POSITIVE for PD-L1 expression Results NO MUTATIONS IN THE EGFR GENE HAVE BEEN DETECTED Conclusion:

24

25 ΔΙΑΡΚΗΣ ΑΝΕΜΠΟΔΙΣΤΗ ΕΠΙΚΟΙΝΩΝΙΑ ΧΕΙΡΟΥΡΓΟΣ ΠΝΕΥΜΟΝΟΛΟΓΟΣ ΑΚΤΙΝΟΛΟΓΟΣ ΟΓΚΟΛΟΓΟΣ ΠΑΘΟΛΟΓΟΑΝΑΤΟΜΟΣ Συσχετισμός κλινικών & απεικονιστικών ευρυμάτων ΜΕ ΤΑ ιστοπαθολογικάμορφολογικά ευρήματα ΔΗΜΙΟΥΡΓΙΑ ΟΓΚΟΛΟΓΙΚΟΥ ΔΙΕΠΙΣΤΗΜΟΝΙΚΟΥ ΣΥΜΒΟΥΛΙΟΥ ΣΕ ΤΟΠΙΚΟ ΕΠΙΠΕΔΟ

26 ISO ACCREDITED LABORATORY NO FALSE POSITIVE STANDARD STAINING PROTOCOL EXTERNAL QUALITY CONTROL The UK NEQAS ICC & ISH, monitors UK participants for poor performance, and reports persistent underperformers to the National Quality Assurance Advisory Panel, which makes the final decision on whether a laboratory may continue to perform clinical IHC testing. NO FALSE NEGATIVE ANNUAL BASIS PD-L1 testing for lung cancer in the UK: recognizing the challenges for implementation. Histopathology 2016, 69, DOI: /his

27 Got Lungs? You re at RISK. Period. Know the Facts.