Anti-tTG IgA. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Anti-tTG IgA For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the measurement of IgA antibodies to tissue transglutaminase (ttg) in human serum. Intended as an aid in the diagnosis and treatment of celiac disease. Catalog Numbers: L2KTD2 (200 tests), L2KTD6 (600 tests) Test Code: TTA Color: Dark Gray Summary and Explanation Celiac disease (CD) or gluten-sensitive enteropathy (GSE) is a genetic, inheritable disease that manifests itself as a chronic malabsorptive disorder. It may present itself anytime between infancy and old age. Common symptoms observed in patients displaying celiac disease include weight loss, diarrhea and abdominal pain, although symptoms can be highly variable and elusive. The abnormal mucosal immune response associated with the disease is activated by the interaction of gliadin (a component of gluten) from wheat, barley or rye with the HLA-DQ2 or HLA-DQ8 allelic variants of the human leukocyte molecule. 25 The protein cross-linking enzyme, tissue transglutaminase (ttg) was recently discovered to be the major antigen to which the celiac patient's autoantibodies are directed Once ttg deamidates gliadin, a ttg-gliadin complex forms. This complex stimulates the body s defenses to produce anti-ttg antibodies Additionally, patients with dermatitis herpetiformis (DH) are also glutenintolerant and suffer the same intestinal damage as those afflicted with celiac disease, but may not display any intestinal symptoms. Serological tests for celiac disease also prove valuable in the diagnosis of DH. 26 Proper diagnosis of celiac disease relies heavily on clinical history. Traditionally, serological markers such as anti-gliadin, anti-reticulin and anti-endomysial (EMA) antibodies have been used as first-stage diagnostic aids. More recently, however, assaying for anti-human tissue transglutaminase IgA (anti-ttg IgA) has become the test of first choice, replacing tests for EMA, 17,25,28,30 to which it displays very high sensitivity and specificity in both children and adults 27 and if positive, should be followed up with biopsies of the proximal bowel. Some suspect individuals display a negative result to the anti-ttg IgA assay, as they may have a selective IgA deficiency. 25 Alternative serological determination can be made using an antigliadin IgG assay. Additionally, the monitoring of IgG levels allows physicians to observe the patient s long-term immunoresponse. 2,3,5,6,12 The Anti-tTG IgA kit provides a noninvasive testing methodology to be used in conjunction with other serologic assays to screen for the presence of antibodies associated with celiac disease. 1-13,18-19 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA is a solidphase, sequential chemiluminescent immunoassay. The solid phase, a polystyrene bead, is coated with a tissue transglutaminase (ttg) antigen. The patient specimen and coated bead are added to the Reaction Tube. An alkaline phosphatase-labeled monoclonal murine anti-iga antibody is also added to the Reaction Tube. After the wash and incubation steps, chemiluminescent substrate undergoes hydrolysis in the presence of alkaline phosphatase. IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA is an immunometric assay. The photon output, as measured by the luminometer, is related to the presence of anti-ttg IgA antibodies in the sample. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Time to First Result: 65 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. 2 IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, )

3 Hemolyzed or grossly contaminated samples may give erroneous results. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 5 µl serum. After automatic predilution, 50 µl of diluted sample is used for the immunoassay. Automatic Predilution Factor: 100 Storage: 3 days at 2 8 C, or 6 months (aliquotted) at 20 C. 14 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Anti-tTG IgA Bead Pack (L2TD12) With barcode. 200 beads, coated with recombinant human tissue transglutaminase (ttg) antigen. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KTD2: 1 pack. L2KTD6: 3 packs. Anti-tTG IgA Reagent Wedge (L2TDA2) With barcode ml protein-buffer matrix and 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to a monoclonal murine anti-human IgA antibody in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KTD2: 1 wedge. L2KTD6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Anti-tTG IgA Adjustors (LTDL, LTDH) Two vials (Low and High), 4 ml each, of human serum/buffer matrix, with IgA reactive to ttg, with preservative. (No predilution is required.) Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KTD2: 1 vial. L2KTD6: 2 vials. Anti-tTG IgA Controls (LTDC1, LTDC2, LTDC3) Three vials containing 4 ml each. LTDC1 (Negative Control): human serum/buffer matrix, nonreactive to anti-ttg IgA, with preservative. LTDC2 and LTDC3 (Low Positive and Positive Controls): human serum/buffer matrix, with IgA reactive to ttg, with preservative. (No predilution is required.) Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KTD2: 1 set. L2KTD6: 2 sets. For the current control ranges in U/mL, please refer to the control insert. Aliquot Labels with barcodes are supplied with the kit, for use with the Adjustors and Controls. Before use, place the appropriate Aliquot Labels on test tubes, so the barcodes can be read by the barcode reader on the IMMULITE IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, ) 3

4 Autoantibody Sample Diluent (L2A1Z) For the on-board dilution of patient samples. 50 ml concentrated (ready-touse) protein/buffer matrix. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KTD2: 1 vial. L2KTD6: 4 vials. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2KTD2: 3 labels. L2KTD6: 5 labels. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also Required Distilled or deionized water; test tubes. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: The controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor assay performance. Interpretation of Results The assay's cutoff was determined with positive and negative patient samples by a ROC analysis, with a balanced consideration of sensitivity and specificity. Positive: A result greater than or equal to 4.0 U/mL is considered to be positive, and indicates that tissue transglutaminase IgA antibodies were detected in the sample. Negative: A result less than 4.0 U/mL is considered to be negative, and indicates that tissue transglutaminase IgA antibodies were not detected in the sample. Reports by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA EIA. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Expected Values A total of 193 samples from presumed healthy individuals were analyzed using the IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA procedure. The results from this study suggest a median of 1.91 U/mL and a nonparametric 2.5 th 97.5 th percentile range of < U/mL. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations Immunoglobulin A (IgA) deficiency is commonly encountered when testing for celiac disease using serologic markers and may contribute to a false negative serologic result in biopsy-confirmed celiac patients Anti-tTG IgA test results alone are not diagnostic of gluten-sensitive enteropathies such as celiac disease, and should always be used in conjunction with other clinical findings. In order to avoid unnecessary biopsies, positive results in the absence of clinical evidence should be confirmed by other diagnostic tests. 20 Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic 4 IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, )

5 purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in U/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: U/mL The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; determined in accordance with CLSI EP17-A 29 ): 1.32 U/mL. Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CLSI EP17-A 29 ): 1.85 U/mL. Functional Sensitivity: (concentration with 10% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP17-A 29 and CLSI EP5-A2 31 ): 4.0 U/mL. Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Specificity: To assess potential crossreactivity to other autoantibodies, 29 patient samples with antinuclear and rheumatoid factor antibodies were tested. All were identified as negative for anti-tissue transglutaminase IgA. Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 104 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Method Comparison: The assay was compared to Bindazyme Human Anti- Tissue Transglutaminase IgA on 349 samples. Bindazyme Pos Neg Positive Negative Total Agreement: 93.7% References IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA Relative Sensitivity Relative Specificity 89.5% 95.3% 1) Celiac Disease Testing. Laboratory Bulletin. IBT Reference Laboratory. 2) Mummert E. Celikey the key to celiac disease diagnosis. Elias Journal ) Pruessner HT. Detecting celiac disease in your patients. Am Fam Physician 1998;57(5): ) Schuppan D, Dieterich W, Ehnis T. Immunological method for detecting antibodies directed against tissue transglutaminase (TTG), use of TTG in diagnosis and therapy control, and an oral pharmaceutical agent containing TTG. US Patent US 6,319,726 B1. November 20, ) Arentz-Hassen H, Korner R, Molberg O, Quarsten H, Vader W, Kooy YMC, Lundin KEA, Koning F, Roepstorff P, Sollid LM, McAdam SN. The intestinal T cell response to α-gliadin in adult celiac disease is focused on a single deaminated glutamine targeted by tissue transglutaminase. J Exp Med 2000;191(4): ) Lorenz RG, Stenson WF, Newberry RD. Laboratory diagnosis of gluten sensitive enteropathy. Lab Med Newsletter 2001;7(7):1-4. 7) Recombinant human tissue transglutaminase protein, HIS-tagged. Roboscreen ) Sulkanen S, Halttunen T, Laurila K, Kolho KL, Korponay-Szabo IR, Sarnesto A, Savilahti E, Collin P, Maki M. Tissue transglutaminase autoantibody enzyme-linked immunosorbent assay in detecting celiac disease. Gastroenterology 1998;115: ) Tissue Transglutaminase, HIS-Tag, Human, Recombinant, Spodoptera frugiperda. CB Biosciences Corporate. 10) Fasano A. Tissue transglutaminase: the Holy Grail for the diagnosis of celiac disease, at last? J Pediatr 1999;134: ) Transglutaminase II, cellular/tissue. NeoMarkers. Lab Vision Corporation. 12) Farrell RJ, Kelly CP. Celiac sprue. N Engl J Med 2002;346: ) Lampasona V, et al. Tissue transglutaminase and combined screening for coeliac disease and type-1 diabetes-associated autoantibodies. Lancet 1998 II: ) Tietz NW, editor Clinical guide to laboratory tests 3 rd ed. Philadelphia WB Saunders 1995: ) Brusco G, Izzi L, Corrazza GR. Tissue transglutaminase antibodies for coeliac disease screening. Ital J Gastroenterol Hepatol 1998;30: ) Dietrich W, Laag E, Schopper H, Volta U, Ferguson A, Gillett H, et al. Autoantibodies to tissue transglutaminase as predictors of celiac disease. Gastroenterology 1998;115: ) Schuppan D, Dietrich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO. Identification of IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, ) 5

6 the autoantigen of celiac disease. Ann NY Acad Sci 1998; 859: ) Sulkane S, et al. Tissue transglutaminase autoantibody enzyme linked immunosorbent assay in detecting celiac disease. Gastroenterology 1998;115: ) Sollid LM, Scott H. New tool to predict celiac disease on its way to the clinics. Gastroenterology 1998; 115: ) Martini S, Mengozzi G, Aimo G, Giorda L, Pagni R, Guidetti CS. Comparative evaluation of serologic tests for celiac disease diagnosis and follow-up. Clin Chem 2002;48: ) Kumar V, et al. Celiac disease and immunoglobulin A deficiency: how effective are the serological methods of diagnosis? Clin Diagn Lab Immunol 2002;9: ) Collin P, et al. Selective IgA deficiency and coeliac disease. Scand J Gastroenerol 1992;27: ) Dietrich W, et al. Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease. Nat Med 1997;3: ) Sollid LM, et al. Autoantibodies in coeliac disease: tissue transglutaminase guilt by association. Gut 1997;41: ) National Institutes of Health. Consensus statement on celiac disease. U.S. Department of Health and Human Services 2004; 21:1-22. Also available from se118html.htm (Accessed Sept. 2006) 26) The serologic approach to diagnosing celiac disease. Communiqué-A mayo reference services purblication. Dec. 2001:26: ) Llorente MJ, Sebastian M, Fernandez-Acenero MJ, Prieto G, Villanueva S. IgA antibodies against tissue transglutaminase in the diagnosis of celiac disease: concordance with intestinal biopsy in children and adults. Clin Chem. 2004; 50: ) Gibson, NE, Review:IgA endomyseal and transglutaminase antibodies had high specificity for diagnosis of coliac disease, Evid. Based Med. 2006, 11:25. 29) NCCLS. Protocols for the Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. NCCLS document EP17-A [ISBN ] NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania , USA, ) Rostom A, Dube C, Cranney A, et al. The diagnostic accuracy of serological tests for celiac disease: a systematic review. Gastroenterology 2005; 128:S ) CLSI Protocols for Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline. CLSI document EP5-A2 vol 24. No. 25 (ISBN ) CLSI 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne Pennsylvania USA, Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (U/mL) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Česky IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace IgA protilátek proti tkáňové transglutamináze (ttg) v lidském séru. Určeno jako pomůcka k diagnóze a léčbě celiakie. Katalogové číslo: L2KTD2 (200 stanovení), L2KTD6 (600 stanovení) Kód metody: TTA Barva: Tmavě šedá Shrnutí a vysvětlení Celiakie (CD) nebo glutensenzitivní enteropatie (GSE) je genetická, dědičná choroba, která se projevuje jako chronická porucha vstřebávání. Může se projevit kdykoliv mezi dětstvím a stářím. K obecným příznakům u pacientů trpících celiakií patří úbytek na váze, průjem a bolest břicha, ačkoli příznaky mohou být velmi různé a nesnadno idenfikovatelné. Abnormální mukózní imunitní odpověď organismu, která je spojena s celiakií, je aktivována interakcí gliadinu (součást glutenu) z pšenice, ječmene nebo žita s 6 IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, )

7 HLA-DQ2 nebo HLA-DQ8 s alelickými variantami lidské leukocytární molekuly. 25 Enzym vázající bílkovinu, tkáňová transglutamináza (ttg), byl nedávno objeven jako významný antigen, ke kterému se vážou autoprotilátky pacientů s celiakií Komplex ttg Gliadin se vytvoří, jakmile ttg deaminuje gliadin. Tento komplex stimuluje imunitní systém k tvorbě protilátek proti ttg Navíc, pacienti s herpetiformní dermatitidou (DH) jsou také nesnášenliví vůči lepku a trpí stejnými střevními poruchami jako postižení celiakií, u nich se však nemusí projevovat žádné další střevní příznaky. Sérologické testy na celiakii také významně napomáhají k určení diagnózy DH. 26 Správná diagnóza celiakie velmi závisí na anamnéze. Tradičně se sérologické markery, jako například protilátky proti gliadinu, reticulinu a endomysiu (EMA), používaly k primární diagnostice. Později se ovšem primárním stalo stanovení IgA protilátek proti lidské tkáňové transglutamináze (anti-ttg IgA) a nahradilo test EMA 17,25,28,30 díky své vysoké senzitivitě a specificitě jak pro děti tak i dospělé. 27 Pokud jsou výsledky analýzy pozitivní, měly by být následovány biopsií proximálního střeva. Některé osoby s podezřením na celiakii vykazují negativní výsledek IgA protilátek proti ttg, což je způsobeno nedostatkem selektivních IgA. 25 V tomto případě by mělo být použito stanovení IgG protilátek proti gliadinu jako alternativní serologické stanovení. Dále pak monitorování hodnot IgG umožňuje lékařům sledovat dlouhodobé imunitní odezvy pacienta. 2,3,5,6,12 Stanovení IgA protilátek proti ttg představuje neinvazní testovací metodu používanou spolu s ostatními sérologickými stanoveními, která vyhodnocují přítomnost protilátek spojených s celiakií. 1 13,18 19 Princip Stanovení IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA je sekvenční chemiluminiscenční stanovení v pevné fázi. Pevná fáze, polystyrenová kulička je potažena antigenem tkáňové transglutaminázy (ttg). Do reakční zkumavky s potaženou kuličkou se přidá vzorek pacienta a monoklonální myší protilátka proti IgA navázaná na alkalickou fosfatázu. Po promytí a inkubaci se přidá substrát, který je alkalickou fosfatázou hydrolyzován. Stanovení IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA je imunometrické. Množství fotonů je měřeno luminometrem a je přímo úměrné koncentraci IgA protilátek proti ttg ve vzorku. Inkubační cykly: 2 30 minut. Čas do prvního výsledku: 65 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované nebo značně kontaminované vzorky můžou dávat chybné výsledky. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení AntitTG IgA na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku: 5 μl séra. Po automatickém předředění je 50 µl ředěného vzorku použito pro stanovení. Faktor automatického předředění: 100 Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců (rozdělený na alikvoty) při teplotě 20 C. 14 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, ) 7

8 jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační prostředek byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky uvnitř krabice. Anti-tTG IgA zásobník s kuličkami (L2TD12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených antigenem tkáňové transglutaminázy (ttg). Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KTD2: 1 balení. L2KTD6: 3 balení. Anti-tTG IgA reagencie (L2TDA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml bílkovinné pufrové matrice a 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s myší monoklonální protilátkou proti lidským IgA v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KTD2: 1 nádobka. L2KTD6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Anti-tTG IgA kalibrátory (LTDL, LTDH) Dvě ampulky (s nízkou a vysokou koncentrací), v každé 4 ml lidské sérum/pufrové matrice s IgA reaktivními vůči ttg a s konzervačním prostředkem. Další ředění není potřebné. Skladování: 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při teplotě 20 C. L2KTD2: 1 ampulka. L2KTD6: 2 ampulky. Anti-tTG IgA kontroly (LTDC1, LTDC2, LTDC3) Tři ampulky, každá obsahuje 4 ml. LTDC1 (Negativní kontrola): Lidská sérum/pufrová matrice nereaktivní vůči IgA protilátkám proti ttg, s konzervačním prostředkem. LTDC2 a LTDC3 (mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): Lidská sérum/pufrová matrice s IgA reaktivními vůči ttg, s konzervačním prostředkem. Další ředění není potřebné. Skladování: 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při teplotě 20 C. L2KTD2: 1 sada. L2KTD6: 2 sady. Aktuální hodnoty kontrolního rozmezí v jednotkách U/ml najdete v příbalovém letáku kontroly. Se soupravou se dodávají alikvotní štítky s čárovými kódy pro kalibrátory a kontroly. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku tak, aby zabudovaný snímač analyzátoru IMMULITE 2000 mohl přečíst čárové kódy. Vzorkový diluent (L2A1Z) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků analyzátorem. 50 ml koncentrované (připravené k použití) bílkovinné/pufrové matrice. Skladování: 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při teplotě 20 C. L2KTD2: 1 ampulka. L2KTD6: 4 ampulky. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2KTD2: 3 štítky. L2KTD6: 5 štítků. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 Testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 Uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků 8 IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, )

9 Dále budete potřebovat: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Kontroly dodávané se soupravou by se měly používat pro ověření kvality systému a monitorování stanovení. Vyhodnocení výsledků Mezní hodnoty stanovení byly určeny s ohledem na senzitivitu a specificitu pomocí ROC analýzy na pozitivních a negativních vzorcích pacientů. Pozitivní: Výsledek větší než nebo rovný 4,0 U/ml znamená, že vzorek je pozitivní a ukazuje, že IgA protilátky proti tkáňové transglutamináze se nacházejí ve vzorku Negativní: Výsledek menší než 4,0 U/ml znamená, že vzorek je negativní a ukazuje, že IgA protilátky proti tkáňové transglutamináze se nenacházejí ve vzorku. Laboratorní výsledky nahlášené lékaři by měly obsahovat: "Následující výsledky byly získány pomocí stanovení IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA EIA. Výsledky získané pomocí systémů od jiných výrobců se nesmějí zaměňovat". Očekávané hodnoty 193 vzorků zjevně zdravých jedinců bylo analyzováno pomocí stanovení IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA. Výsledkem této studie je medián 1,91 U/ml a neparametrický 2,2. 97,5. percentil byl v rozmezí < 1,85 6,4 U/ml. Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Při testech na celiakii pomocí sérologických markerů je běžná nízká hladina imunoglobinu A (IgA), což může mít za následek falešně negativní výsledek sérologického stanovení u pacientů s celiakií, která se potvrdila biopsií Výsledky testu Anti-tTG IgA samy o sobě neprokazují glutenovou enteropatii (intolerance na lepek), jako je celiakie. Výsledky testů by se vždy měly porovnávat s dalšími klinickými nálezy. Abychom se vyhnuli zbytečné biopsii, pozitivní výsledky testů, při absenci klinických důkazů, by se měly potvrdit dalšími diagnostickými testy. 20 Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterofilní protilátky: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v U/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření: 1,85 až 200 U/ml. Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost: Limit blanku (nejvyšší hodnota pro vzorek bez stanovované látky, stanoveno v souladu s CLSI EP17-A 29 ): 1,32 U/ml. IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, ) 9

10 Detekční limit (nejnižší zjistitelná koncentrace; v souladu s CLSI EP17-A 29 ): 1,85 U/ml. Funkční citlivost: (koncentrace s variačním koeficientem10%, stanovená v souladu CLSI EP17-A 29 a CLSI EP5- A2 31 ): 4,0 U/ml. Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Precision.) Specificita: 29 vzorků pacientů s antinukleárními a revmatoidními protilátkami bylo vyhodnoceno na potenciální zkříženou reaktivitu s jinými autoprotilátkami. Všechny byly identifikovány jako negativní na IgA protilátky proti tkáňové transglutamináze. Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky stanovení. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 104 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno se stanovením Bindazyme Human Anti-Tissue Transglutaminase IgA u 349 vzorků. Bindazyme Poz Neg Pozitivní Negativní Celková shoda 93,7% IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA Relativní senzitivita Relativní specificita 89,5% 95,3% Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Aντι-tTG IgA Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την μέτρηση των αντισωμάτων ανοσοσφαιρίνης Α (IgA) στον ιστό της τρανσγλουταμινάσης (ttg) στον ανθρώπινο ορό. Προορίζεται σαν βοήθημα στην διάγνωση και την θεραπεία της κοιλιακής νόσου Αριθμοί Καταλόγου: L2KTD2 (200 εξετάσεις), L2KTD6 (600 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: TTA Χρώμα: Σκούρο Γκρι Περίληψη και Επεξήγηση Η κοιλιακή νόσος (CD) ή ευαίσθητη ως προς την γλουτένη εντεροπάθεια (GSE) είναι μια εκ γενετής κληρονομήσιμη νόσος που εκδηλώνεται σαν μια χρόνια διαταραχή. Μπορεί να παρουσιαστεί οποτεδήποτε ανάμεσα στην παιδική και την γεροντική ηλικία. Κοινά συμπτώματα που παρατηρήθηκαν σε ασθενείς στους οποίους εκδηλώθηκε κοιλιακή νόσος περιλαμβάνουν απώλεια βάρους, διάρροια, κοιλιακό άλγος, παρόλο που τα συμπτώματα μπορεί να είναι κυμαινόμενα και παραπλανητικά. Η ανώμαλη απόκριση του βλεννογόνου σε συνδυασμό με την ασθένεια ενεργοποιείται από την αλληλεπίδραση της γλιαδίνης (συστατικού της γλουτένης) από το σιτάρι, το κριθάρι ή της σίκαλης με τα HLA-DQ2 ή HLA-DQ8 αλληλόμορφες παραλλαγές του ανθρώπινου ιστικού μοριίου. 25 Το ένζυμο διασταυρωτής σύνδεσης με την πρωτεΐνη, τρανσγλουταμινάση του ιστού (ttg), ανακαλύφθηκε πρόσφατα ότι είναι το κύριο αντιγόνο στο οποίο κατευθύνονται τα αυτοαντισώματα των ασθενών της κοιλιακής νόσου Μόλις απαμιδωθεί η γλιαδίνη από την ttg, δημιουργείται ένα σύμπλοκο ttgγλιαδίνης. Αυτό το σύμπλοκο ενισχύει την άμυνα του οργανισμού στο να παράγει αντι-ttg αντισώματα Επιπρόσθετα, οι ασθενείς με δερματικό έρπητα (DH) δεν ανέχονται επίσης την γλουτένη και υποφέρουν από τις ίδιες 10 IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, )

11 εντερικές βλάβες όπως εκείνοι που έχουν προσβληθεί από κοιλιακή νόσο, μπορεί όμως να μεν εμφανίσουν εντερικά συμπτώματα. Οι ορολογικές εξετάσεις για κοιλιακή νόσο αποδεικνύονται επίσης πολύτιμες στην διάγνωση DH. 26 Η σωστή διάγνωση της κοιλιακής νόσου βασίζεται κατά πολύ στο κλινικό ιστορικό. Παραδοσιακά, οι ορολογικοί δείκτες όπως η αντι-γλιαδίνη, η αντι-ρετικουλίνη και τα anti-endomysial (EMA) αντισώματα έχουν χρησιμοποιηθεί σαν διαγνωστικά βοηθήματα πρώτου σταδίου. Πιο πρόσφατα, ωστόσο, η ανάλυση του αντιανθρώπινου ιστού τρανσγλουταμινάσης IgA (anti-ttg IgA) έχει γίνει η εξέταση πρώτης επιλογής, η οποία αντικαθιστά τις εξετάσεις για EMA, 17,25,28,30 στην οποία εμφανίζεται υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα σε αμφότερα τα παιδιά και τους ενήλικες 27 και εφόσον είναι θετικές, πρέπει να ακολουθούνται από βιοψίες του εγγύς εντέρου. Σε μερικά άτομα υπάρχει υποψία ότι εμφανίζουν αρνητικό αποτέλεσμα στην ανάλυση αντι-ttg IgA, επειδή μπορεί να έχουν μια εκλεκτική έλλειψη σε IgA deficiency. 25 Ο εναλλακτικός ορολογικός προσδιορισμός μπορεί να γίνει χρησιμοποιώντας μια ανάλυση αντιγλιαδίνης IgG. Επιπρόσθετα, ο έλεγχος των επιπέδων IgG επιτρέπει στους ιατρούς να παρατηρήσουν την μακροχρόνια ανοσοαπόκριση του ασθενούς. 2,3,5,6,12 Το kit Anti-tTG IgA παρέχει μια μη επεκτεταμένη μεθοδολογία εξέτασης για χρήση σε συνδυασμό με άλλες ορολογικές αναλύσεις για τον έλεγχο της παρουσίας αντισωμάτων συνδεδεμένων με κοιλιακή νόσο. 1-13,18-19 Αρχή της Διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA είναι μια στερεής φάσης, αλληλοδιάδοχη, χημειοφωταυγής ανοσοανάλυση. Η στερεή φάση, ένα σφαιρίδιο από πολυστυρένιο, επικαλύπτεται από ένα ιστό αντιγόνου τρανσγλουταμινάσης (ttg). Το δείγμα του ασθενούς και το επικαλυμμένο σφαιρίδιο προστίθενται στο σωλήνα αντίδρασης Ένα μονοκλωνικό αντιγόνο ποντικού αντι-iga επισημασμένο για αλκαλική φωσφατάση προστίθεται επίσης στον σωλήνα της αντίδρασης. Μετά τα βήματα πλύσης και επώασης, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα υπόκειται σε υδρόλυση παρουσία της αλκαλικής φωσφατάσης. Η IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA είναι μια ανοσομετρική ανάλυση. Η εκπομπή φωτονίων, όπως μετράται από το μετρητή φωταύγειας, συσχετίζεται με την παρουσία αντιi-ttg IgA αντισωμάτων στο δείγμα. Κύκλοι επώασης: 2 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά. Συλλογή Δείγματος Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα Τα αιμολυμένα ή πολύ μολυσμένα δείγματα μπορεί να δώσουν λανθασμένα αποτελέσματα. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε πριν την φυγοκέντρηση των δειγμάτων ότι το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Απαιτούμενος Όγκος: 5 µl ορού. Μετά από αυτόματη προαραίωση του δείγματος, 50 µl του προαραιωμένου δείγματος χρησιμοποιούνται για την ανοσοανάλυση. Αυτόματος συντελεστής προαραίωσης: 100 Φύλαξη: 3 ημέρες στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. 14 Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, ) 11

12 Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε την μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (Βλέπε ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιείτε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ένα ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Anti-tTG IgA Συσκευασία σφαιριδίων (L2TD12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με ανασυνδυαζόμενο αντιγόνο τρανσγλουταμινλασης (ttg) ανθρώπινου ορού. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KTD2: 1 συσκευασία. L2KTD6: 3 συσκευασίες. Δοχείο Αντιδραστηρίων Anti-tTG IgA (L2TDA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml μήτρας πρωτεΐνης/ ρυθμιστικού και 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συζευγμένης με μονοκλωνικό αντιανθρώπινο αντίσωμα IgA σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KTD2: 1 δοχείο. L2KTD6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε τον ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές Anti-tTG IgA (LTDL, LTDH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό), έκαστο 4 ml, μήτρας ανθρώπινου ορού/ρυθμιστικού διαλύματος, με IgA που αντιδρά στην ttg, με συντηρητικό. (Δεν απαιτείται προ-αραίωση). Σταθεροί στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένοι) στους 20 C. L2KTD2: 1 φιαλίδιο. L2KTD6: 2 φιαλίδια. Έλεγχοι Anti-tTG IgA (LTDC1, LTDC2, LTDC3) Τρία φιαλίδια που το καθένα περιέχει 4 ml. LTDC1 (Αρνητικός έλεγχος): Μήτρα μη ανθρώπινου ορού/ρυθμιστικού, δίχως αντίδραση με την anti-ttg IgA, με συντηρητικό. LTDC2 και LTDC3 (Χαμηλοί θετικοί και θετικοί έλεγχοι): Μήτρα ανθρώπινου ορού/ρυθμιστικού, με IgA που αντιδρά με την anti-ttg, με συντηρητικό. (Δεν απαιτείται προαραίωση). Σταθερά στους 2 8 C για 30 ημέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KTD2: 1 σετ. L2KTD6: 2 σετ. Για το τρέχον εύρος τιμών των ελέγχων σε U/mL, παρακαλείστε να ανατρέξετε στο ένθετο. Το kit περιλαμβάνει κατάλληλες ετικέτες με ραβδοκώδικα, για χρήση με τους ρυθμιστές και τους ελέγχους Πριν τη χρήση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το IMMULITE Αραιωτικό δείγματος Αυτοαντίσωμα (L2A1Z) Για την αραίωση των δειγμάτων των ασθενών στο μηχάνημα. 50 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση) μήτρας πρωτεΐνης/ρυθμιστικού. Σταθερό στους 2 8 C για 30 ημέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένο) στους 20 C. L2KTD2: 1 φιαλίδιο. L2KTD6: 4 φιαλίδια. Ετικέτες με ραβδοκώδικα παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. L2KTD2: 3 ετικέτες L2KTD6: 5 ετικέτες 12 IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, )

13 Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες εξέτασης μιας χρήσης L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης του δείγματος Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες. Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Οι οροί ελέγχου που παρέχονται με το κιτ θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως υλικό ποιοτικού ελέγχου για την παρακολούθηση της επίδοσης της ανάλυσης. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Η αποκοπή (cutoff) προσδιορίστηκε με βάση θετικά και αρνητικά δείγματα ασθενών από μια ανάλυση ROC με ισορροπημένο συνυπολογισμό της ευαισθησίας και της ειδικότητας. Θετικό: Ένα αποτέλεσμα μεγαλύτερο ή ίσο του 4,0 U/mL θεωρείται ως θετικό και υποδεικνύει ότι αντισώματα ιστού τρανσγλουταμινάσης IgA έχουν εντοπιστεί στο δείγμα. Αρνητικό: Ένα αποτέλεσμα μικρότερο του 4,0 U/mL θεωρείται ως αρνητικό και υποοδεικνύει ότι αντισώματα ιστού τρανσγλουταμινάσης IgA δεν έχουν εντοπιστεί στο δείγμα. Οι αναφορές που λαμβάνει ο κλινικός γιατρός από το εργαστήριο θα πρέπει να περιέχουν την εξής επισήμανση: "Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν με την IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA EIA." Aποτελέσματα εξετάσεων άλλων κατασκευαστών που χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν κατ εναλλαγή." Αναμενόμενες τιμές Με τη μέθοδο IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA αναλύθηκαν δείγματα συνολικά 193 αναφερομένων ως υγιών, ατόμων. Τα αποτελέσματα από αυτή την μελέτη, προτείνουν μια διάμεση τιμή 1,91 U/mL και μη παραμετρικό εύρος 2,5 ου 97,5 ου εκατοστημορίου < 1,85 6,4 U/mL. Θεωρείστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Η έλλειψη σε ανοσοσφαιρίνη A (IgA) παρουσιάζεται συχνά κατά την εξέταση για κοιλιακή νόσο χρησιμοποιώντας ορολογικούς δεόκτες και μπορεί να συμβάλλει σε λανθασμένο αρνητικό ορολογικό αποτέλεσμα σε ασθενείς που έχει επιβεβαιωθεί με βιοψία ότι πάσχουν από κοιλιακή νόσο Τα αποτελέσματα της αντι-ttg IgA εξέταση δεν είναι διαγνωστικά για ευαίσθητες ως προς την γλουτένη εντεροπάθειες όπως η κοιλιακή νόσος και πρέπει να χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με άλλα κλινικά ευρήματα. Για να αποφευχθούν οι μη αναγκαίες βιοψίες, τα θετικά αποτελέσματα απουσία κλινικής απόδειξης πρέπει να επιβεβαιώνεται από άλλα διαγνωστικά τεστ. 20 Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με in vitro ανοσοαναλύσεις. (Βλέπε Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε, να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, ) 13

14 ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε U/mL. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους). Εύρος μέτρησης: 1, U/mL Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική ευαισθησία:όριο του τυφλού δείγματος (η υψηλότερη αναμενόμενη τιμή ενός δείγματος δίχως αναλύτη, η οποία καθορίζεται με την CLSI EP17-A 29 ): 1,32 U/mL. Όριο ανίχνευσης (η χαμηλότερη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση, η οποία καθορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17- A 29 ): 1,85 U/mL. Λειτουργική Ευαισθησία: (συγκέντρωση με συντελεστή διακύμανσης (CV) 10%, ο οποίος καθορίζεται σύμφωνα με τις CLSI EP17-A 29 και CLSI EP5-A2 31 ): 4,0 U/mL. Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλέπε Πίνακα Precision ). Ειδικότητα: Για να εκτιμηθεί η πιθανή διασταυρούμενη αντιδραστικότητα σε άλλα αυτοαντισώματα, εξετάστηκαν 29 δείγματα ασθενών με αντιπυρηνικά αντισώματα καθώς και αντισώματα ρευματοειδούς παράγοντα. Όλα βρέθηκαν αρνητικά για την τρανσγλουταμινάση αντι-ιστού IgA. Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης (συνδεδεμένης και έμμεσης) σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 104 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Σύγκριση της Μεθόδου: Η μέθοδος συγκρίθηκε με την Bindazyme Human Anti-Tissue Transglutaminase IgA σε 349 δείγματα. Bindazyme Θετ. Αρν. Θετικά Αρνητικά Συνολική συμφωνία: 93,7% IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA Σχετική Ευαισθησ ία Σχετική Ειδικότητα 89,5% 95,3% Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Anty-tTG IgA Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia w surowicy ludzkiej przeciwciał IgA specyficznych dla tkankowej transglutaminazy (ttg), pomocny w diagnostyce i leczeniu celiakii. Numery katalogowe: L2KTD2 (200 testów), L2KTD6 (600 testów) Kod testu: TTA Kolor: ciemnoszary Wprowadzenie Celiakia (CD) lub choroba trzewna (glutensensitive enteropathy-gse) jest genetyczną, dziedziczną chorobą objawiającą się chronicznym zaburzeniem wchłaniania pokarmu. Może pojawiać się 14 IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, )

15 niezależnie od wieku: od okresu dziecięcego począwszy do wieku zaawansowanego. Najczęstsze objawy stwierdzane u chorych na celiakię obejmują utratę wagi, biegunkę i bóle brzucha, jednakże objawy mogą być silnie zróżnicowane i nieuchwytne. Patologiczna reakcja odpornościowa zachodząca w błonie śluzowej w związku z chorobą jest aktywowana przez oddziaływanie składnika glutenu - gliadyny pochodzącej z pszenicy, jęczmienia i żyta na cząsteczki ludzkich antygenów zgodności tkankowej na leukocytach (form allelicznych HLA- DQ2 lub HLA-DQ8). 25 Enzym o możliwości krzyżowego wiązania białek, tkankowa transglutaminaza (ttg), została ostatnio uznana z najważniejszy antygen rozpoznawany przez autoprzeciwciała u chorych na celiakię Dezaminowana przez ttg gliadyna, tworzy kompleks z ttg. Kompleks ten stymuluje układ odpornościowy organizmu do produkcji przeciwciał anty-ttg Również chorzy na opryszczkowe zapalenie skóry (dermatitis herpetiformis DH) wykazują nietolerancję na gluten, której towarzyszą uszkodzenia jelit identyczne do zmian stwierdzanych w celiakii, lecz nie zawsze wiążące się z jelitowymi objawami nieżytowymi. W konsekwencji serologiczne testy diagnostyczne w kierunku celiakii okazują się przydatne w diagnostyce DH. 26 Prawidłowa diagnoza celiakii oparta jest zdecydowanie na historii klinicznej. Tradycyjnie jako klasyczne sposoby wstępnej diagnostyki stosowane są oznaczenia serologicznych markerów, takich jak: przeciwciała anty-gliadynowe, anty-retikulinowe i anty-endomyzjalne (EMA). Ostatnio, jednak, oznaczenie przeciwciała IgA specyficznego dla ludzkiej tkankowej transglutaminazy (antyttg IgA) stało się pierwszym testem z wyboru, zastępującym oznaczenia EMA 17,25,28,30 i wykazującym wysoką czułość i specyficzność, tak u dzieci jak i u dorosłych. 27 Dodatni wynik testu powinien być weryfikowany biopsją bliższego odcinka jelita. U niektórych osób z podejrzeniem choroby wyniki testu anty-ttg IgA mogą być ujemne, ze względu na wybiórczy niedobór IgA. 25 Wtedy, alternatywnie może być wykonane serologiczne oznaczenie anty-gliadynowego przeciwciała IgG. Monitorowanie poziomu IgG pozwala lekarzowi dodatkowo oceniać długotrwałą odpowiedź odpornościową badanego. 2,3,5,6,12 Zestaw Anty-tTG IgA stanowi nieinwazyjną metodę badawczą, która powinna być stosowana wraz z innymi testami serologicznymi do badań przesiewowych wykrywających obecność przeciwciał związanych z celiakią. 1-13,18-19 Zasada testu IMMULITE 2000 Anty-tTG IgA jest chemiluminescencyjnym, sekwencyjnym testem immunoenzymetycznym fazy stałej. Fazą stała jest polistyrenowa kulka opłaszczona antygenem tkankowej transglutaminazy (ttg). Próbka badana i opłaszczona kulka dodawane są do probówki reakcyjnej. Do probówki reakcyjnej dodawane jest również mysie przeciwciało monoklonalne anty-iga sprzężone z fosfatazą alkaliczną. Po etapie płukania i inkubacji dochodzi do hydrolizy substratu chemiluminescencyjnego pod wpływem fosfatazy alkalicznej. Test IMMULITE 2000 Anty-tTG IgA jest testem immunometrycznym. Ilość emitowanych fotonów, mierzona przez luminometr, skorelowana jest z obecnością przeciwciał anty-ttg IgA w próbce. Cykle inkubacji: 2 x 30 minut. Czas do pierwszego wyniku: 65 minut. Preparatyka próbek Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Próbki hemolizowane i z silna kontaminacją mogą dawać fałszywe wyniki. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. IMMULITE 2000 Anti-tTG IgA (PIEL2KTD-2 {10}, ) 15