Gastrin. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Gastrin For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Gastrin English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of gastrin in serum, as an aid in the diagnosis and treatment of patients with disorders associated with abnormal gastrin production. Catalog Numbers: L2KGA2 (200 tests) Test Code: GAS Color: Light Green Summary and Explanation Gastrin is a major gastrointestinal hormone. It serves to stimulate gastric acid secretion and exists in a number of molecular forms, differing from one another in the length of the polypeptide backbone and in derivatizations of individual amino acids. 10 The three principal forms G-17, G-34 and G-14 are named for the number of amino acids which they contain. Immunoassays for gastrin play an essential role in the identification of Zollinger-Ellison tumors (gastrinomas). These tumors are typically, but not invariably, associated with elevated gastrin levels, gastric acid hypersecretion and peptic ulcer disease. In fasting subjects, gastrin normally circulates at levels of less than 100 pg/ml, with some day-to-day variability. (A survey of the literature indicates that the upper reference limit is to a considerable extent method-dependent, being as high as 200 or 300 pg/ml for some RIA systems. 18 ) Fasting gastrin levels in patients with Zollinger-Ellison syndrome are typically very high, well above the reference range for healthy individuals. Elevated values are also encountered in other conditions. Where gastric acid secretion is impaired, for example in pernicious anemia, gastrin levels are characteristically (and appropriately) increased. Hypergastrinemia and hypersecretion of gastric acid are also encountered in the absence of pancreatic or duodenal tumors. Thus, hypergastrinemia without gastrinoma may be found in pyloric obstruction with antrum distension, after vagotomy, in the "retained antrum" syndrome, and in some patients with ordinary peptic ulcer disease. Since roughly half of all patients with Zollinger-Ellison tumors have fasting gastrin levels less than 500 pg/ml, the range for gastrinoma overlaps significantly with the range for other forms of hypergastrinemia. A confirmation procedure is therefore often necessary. This usually involves analysis of gastrin levels following secretin injection, calcium infusion or a test meal. The literature suggests that the secretin test is the most reliable of these follow-up procedures. 1,6,9 The molecular heterogeneity of gastrin has important implications for the design of gastrin immunoassays. Since some gastrinomas secrete only G-17, and others secrete only G-34, it is advantageous to use antibodies that will recognize multiple forms. Use of an overly specific immunoassay carries the risk of missing a tumor. 4,11,19 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Gastrin is a chemiluminescent, enzyme-labeled immunometric assay based on a ligand-labeled murine monoclonal capture antibody specific for gastrin and separation by anti-ligand-coated solid phase. The patient sample along with the ligand-labeled anti-gastrin monoclonal antibody, an alkaline phosphataseconjugated rabbit polyclonal anti-gastrin antibody and an alkaline phosphataseconjugated murine monoclonal anti-gastrin antibody are simultaneously incubated in the presence of the immobilized antiligand bead in a Reaction Tube. During the-60 minute incubation, gastrin molecules in the sample form antibody sandwich complexes which, in turn, bind to anti-ligand on the solid phase. Unbound conjugate is then removed by a centrifugal wash, after which luminogenic substrate is added and the Reaction Tube is incubated for a further five minutes. 2 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

3 The chemiluminescent substrate, a phosphate ester of adamantyl dioxetane, undergoes hydrolysis in the presence of alkaline phosphatase to yield an unstable intermediate. The continuous production of this intermediate results in the sustained emission of light. The bound complex and thus also the photon output, as measured by the luminometer is proportional to the concentration of gastrin in the sample. Incubation Cycles: 1 60 minutes Specimen Collection For basal serum gastrin levels, the patient must be fasting overnight, preferably 12 hours or more. Collect blood by venipuncture 16 into plain tubes (without anticoagulant) noting the time of collection and separate the serum from the cells in a refrigerated centrifuge as soon as possible. Aliquot and freeze without delay. 17 EDTA plasma should not be used in the IMMULITE 2000 Gastrin procedure. Lipemic, icteric or grossly contaminated samples may give erroneous results. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Gastrin has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 50 µl serum Storage: Stable 4 hours at 2 8 C, or 30 days aliquotted at 20 C in a freezer that does not self-defrost. 20 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. CAUTION! POTENTIAL BIOHAZARD Contains human source material. Each donation of human blood or blood component was tested by FDA-approved methods for the presence of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and type 2 (HIV-2) as well as for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibody to hepatitis C virus (HCV). The test results were negative (not repeatedly reactive). No test offers complete assurance that these or other infectious agents are absent; this material should be handled using good laboratory practices and universal precautions CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. H412 P273, P501 Harmful to aquatic life with long lasting effects. Avoid release to the environment. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: 2-methyl-2Hisothiazol-3-one; Gastrin Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 3

4 Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Gastrin Bead Pack (L2GA12) With barcode. 200 beads, coated with anti-ligand derived from streptavidin. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KGA2: 1 pack Gastrin Reagent Wedge (L2GAA2) With barcode ml ligand-labeled anti-gastrin murine monoclonal antibody, alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to murine monoclonal anti-gastrin antibody, and alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to rabbit polyclonal anti-gastrin, in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KGA2: 1 wedge Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Gastrin Adjustors (LGAL, LGAH) Two sets of vials (Two Low and Two High) of lyophilized synthetic human gastrin G-17 in a buffer matrix. Reconstitute each vial by adding 2,0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion. Stable after reconstitution for 30 days (aliquotted) at 20 C in a freezer that does not self-defrost. L2KGA2: 2 sets Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) For on-board dilution of high samples. One vial, concentrated (ready-to-use), nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2M2Z: 3 labels L2M2Z4: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also available LGACM: Bi-level Gastrin Control Module Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of gastrin. Expected Values A reference range study was performed in which 143 fasting samples 49 from laboratory volunteers in good health and 94 presumed normal specimens from a large reference laboratory in the United States were assayed by the IMMULITE 2000 Gastrin procedure. This study yielded a median value of 32 pg/ml and a range, corresponding to the nonparametric central 95% of the observations, of 13 to 115 pg/ml for fasting samples from healthy adults. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. 4 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

5 Limitation Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in pg/ml. The assay has been standardized against the Medical Research Council's Research Standard A for gastrin II, porcine [NIBSC 66/138]. (Unless otherwise specified, all results were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factors: pg/ml pmol/l pg/ml 1 mu/l [NIBSC 66/138] Calibration Range: up to 1000 pg/ml [NIBSC 66/138] Analytical Sensitivity: 5 pg/ml High-dose Hook Effect: None up to 226,000 pg/ml of gastrin G-17 Type I (nonsulfated) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 10 days, four runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. Because of the molecular heterogeneity of gastrin, the linearity of this assay does not demonstrate traditional characteristics of dilutional parallelism. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with two sets of three gastrin solutions (325 pg/ml, 600 pg/ml and 1100 pg/ml) were assayed. One set contained three G-17 Type II (sulfated) solutions, and the other set contained three G-17 Type I (nonsulfated) solutions. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody recognizes predominantly G-17 with lesser recognition of G-34 and mini-gastrin. (See "Specificity" table.) Bilirubin: May interfere with the assay, causing degradation of values at levels above 50 mg/l. (See "Bilirubin" table). Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 550 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. (See "Hemolysis" table.) Lipemia: Interferes with the assay, causing degradation of values at levels above 1000 mg/dl. (See "Lipemia" table.) Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 30 volunteers into plain glass and plastic serum, plastic sodium heparinized and EDTA tubes and plastic gel barrier tubes (SST ). All tubes were from Becton Dickinson. In six sets of the matched samples, equal volumes were spiked with various concentrations of gastrin, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 Gastrin procedure. EDTA is not suitable for use. EDTA plasma can average up to 50% lower values than plain serum. (Serum glass) = 1.03 (Serum plastic) 0.06 pg/ml r = (Na Heparin plastic) = (Serum plastic) pg/ml r = (SST plastic) = (Serum plastic) pg/ml r = Means: 128 pg/ml (Plain Serum plastic) 132 pg/ml (Plain Serum glass) 128 pg/ml (Na Heparin plastic) 129 pg/ml (SST plastic) IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 5

6 Method Comparison: The assay was compared to a commercially available RIA assay for gastrin (Kit A) on 100 samples from apparently healthy volunteers. (Concentration range: approximately pg/ml. See graph.) By linear regression: (IMMULITE 2000) = 1.04 (Kit A) 24.7 pg/ml r = Means: 57.0 pg/ml (IMMULITE 2000) 78.3 pg/ml (Kit A) References 1) Clain JE. Diagnosis and management of gastrinoma (Zollinger-Ellison syndrome). Mayo Clinic Proceedings 1982;57: ) Fiddian- Green RG, Hypergastrinemia what does it mean? In: Thompson NW and Vinik AI, editors. Endocrine Surgery Update. New York: Grune & Stratton, 1983: ) Friesen SR and Tomita T. Pseudo-Zollinger-Ellison syndrome: hypergastrinemia, hyperchlorhydria without tumor. Annals of Surgery 1981;194: ) Hesser and Kao PC. Comparison of two assays for serum gastrin (abstract). Clinical Chemistry 1983;29: ) Jensen RT, et al. NIH Conference. Zollinger-Ellison syndrome: current concepts and management. Ann Intern Med 1983;98: ) Malagelada J-R, et al. Laboratory diagnosis of gastrinoma. Mayo Clinic Proceedings 1982;57:211-8, ) Malagelada J-R, et al. Medical and surgical options in the management of patients with gastrinoma. Gastroenterology 1983;84: See also ibid: ) McCarthy DM. Zollinger-Ellison syndrome. Annual Review of Medicine 1982;33: ) McGuigan JE and Wolfe MM. Secretin injection test in the diagnosis of gastrinoma. Gastroenterology 1980;79: ) Rehfeld JF. Four basic characteristics of the gastrin-cholecystokinin system. American Journal of Physiology 1981;240:G ) Rehfeld JF, et al. Misuse of gastrin radioimmunoassay kits. Lancet Aug;ii: ) Romanus ME, et al. Comparison of four provocative tests for the diagnosis of gastrinoma. Annals of Surgery 1983;5: ) Stage JG and Stadil F. The clinical diagnosis of the Zollinger-Ellison syndrome. Scandinavian Journal of Gastroenterology 1979;53 Suppl 14: ) Walsh JH and Lam SK. Physiology and pathology of gastrin. Clinics in Gastroenterology 1980 Sept;9(3): ) Zollinger RM, Ellison EC, et al. Primary peptic ulcerations of the jejunum associated with islet cell tumors. Annals of Surgery 1980;192: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, ) Burtis CA, Ashwood ER, Tietz textbook of clinical chemistry. Philadelphia: Saunders, 1994: ) Lindstedt G, et al. Analytical and clinical evaluation of a radioimmunoassay for gastrin. Clin Chem 1985;31,1: ) Goetze JP, Rehfeld JF, Impact of assay epitope specificity in gastrinoma diagnosis, Clinical Chemistry, 2003;49,2: ) Jacobs DS, et al., Laboratory test handbook. Cleveland: Lexi-Comp, 1996: ) Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR, 1988;37:377 82, ) Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS Document M29-A3. 23) Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (pg/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. 6 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

7 Linearity (pg/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Recovery (pg/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A G-17 II % B G-17 II % C G-17 II % A G-17 I % B G-17 I % C G-17 I % A G-17 II % B G-17 II % C G-17 II % A G-17 I % B G-17 I % C G-17 I % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 ιάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Specificity Compound 1 pg/ml Added 2 Apparent Conc. 3 % Crossreactivity 4 Mini-Gastrin % Gastrin G-17 Type II (sulfated) Gastrin G-17 Type II (sulfated) Gastrin G-17 Type II (sulfated) Gastrin G-34 Type I (nonsulfated) Gastrin G-34 Type I (nonsulfated) Gastrin G-34 Type I (nonsulfated) Gastrin G-34 Type II (sulfated) Gastrin G-34 Type II (sulfated) Gastrin G-34 Type II (sulfated) Gastrin 1-13 Type I (nonsulfated) % % % % % % 50 < % % 1000 ND ND Gastrin 1-13 Type I (nonsulfated) 10,000 ND ND Pentagastrin 10,000 ND ND Pentagastrin 1000 ND ND Pentagastrin 500 ND ND Cholecystokinin (sulfated) CCK 1000 ND ND Cholecystokinin (nonsulfated) 1000 ND ND Cholecystokinin CCK % Cholecystokinin CCK ND ND Caerulein 10,000 ND ND Caerulein 1000 ND ND Caerulein 500 ND ND Caerulein % ND: not detectable 5 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 7

8 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 Zjevná koncentrace, 4 % Zkřížená reaktivita, 5 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 Εμφανής συγκέντρωση, 4 % ιασταυρ.αντίδραση, 5 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 Zmierzona, 4 % reaktywności Krzyżowej, 5 ND: Nieoznaczlne. Bilirubin Unspiked 3 50 mg/l Unconjugated 1 Conjugated mg/l 200 mg/l 50 mg/l 100 mg/l 200 mg/l Česky. 1 Nekonjugovaný, 2 Konjugovaný, 3 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Αδέσμευτη (έμμεση), 2 εσμευμένη (άμεση), 3 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Niezwiązana, 2 Związana, 3 Wyjściowa. Hemolysis Unspiked mg/dl 314 mg/dl 550 mg/dl Česky. 1 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Wyjściowa. Lipemia Sample 1 Triglycerides Added mg/dl 2 Observed 3 Expected 4 %O/E % % % % % % % % Sample 1 Triglycerides Added mg/dl 2 Observed 3 Expected 4 %O/E % % % % % % % % % % % % Česky. 1 Vzorek, 2 Přidané triglyceridy, 3 Naměřená, 4 Očekávaná, 5 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 είγμα, 2 Προστιθέμενα τριγλυκερίδια, 3 Παρατηρούμενη (O), 4 Αναμενόμενη (E), 5 % O/E. Polski. 1 Próbka, 2 Dodane trójglicerydy, 3 Zmierzone (Z), 4 Oczekiwane (O), 5 %Z/O. Method Comparison IMMULITE 2000 Gastrin Kit A, pg/ml (IMMULITE 2000) = 1.04 (Kit A) 24.7 pg/ml r = English. Gastrin Česky. Gastrin. Ελληνικά. Γαστρίνη. Polski. Gastryna. 8 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

9 Česky IMMULITE 2000 Gastrin Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace gastrinu v séru, jakožto pomůcky při diagnostice a léčbě pacientů s poruchami spojenými s abnormální tvorbou gastrinu. Katalogové číslo: L2KGA2 (200 stanovení) Kód metody: GAS Barva: Světle zelená Shrnutí a vysvětlení Gastrin je nejvýznamnější gastrointestinální hormon. Stimuluje kyselou žaludeční sekreci a vyskytuje se v různých molekulových formách, které se navzájem liší délkou polypeptidového řetězce a obsazením některými aminokyselinami. 10 Tři základní formy jsou G-17, G-34 a G-14 přičemž číslo v názvu udává počet obsažených aminokyselin. Stanovení gastrinu hraje významnou roli při identifikaci gastrinomů (Zollinger- Ellisonova syndromu). Typicky, ne však vždy, jsou tyto tumory spojeny se zvýšenou koncentrací gastrinu, hypersekrecí žaludeční kyseliny a peptickým vředem. Nalačno gastrin cirkuluje v množství menším než 100 pg/ml a den ode dne se může trochu měnit. (V literatuře se udává silná závislost horní hranice referenčního rozmezí na zvolené metodě stanovení, a může dosáhnout až 200 nebo 300 pg/ml u některých RIA systémů. 18 ) Hladina gastrinu nalačno u pacientů s Zollinger- Ellisonovým syndromem je typicky velmi vysoká, hodně nad referenčním rozmezím zdravých osob. Zvýšené množství gastrinu se vyskytuje i u jiných stavů. Při poruše kyselé žaludeční sekrece, například při zhoubné anémii, je množství gastrinu charakteristicky (a náležitě) zvýšené. Hypergastrinémie a hypersekrece žaludeční kyseliny se také objevují při neexistenci tumoru slinivky břišní či dvanáctníku. Hypergastrinémie bez gastrinomu se proto objevuje při ucpání vrátníku s distenzí dutiny, po vagotomii, při syndromu "retained antrum" a u některých pacientů s obyčejným peptickým vředem. Protože zhruba polovina všech pacientů s Zollinger-Ellisonovým tumorem má hladinu gastrinu nalačno nižší než 500 pg/ml, rozmezí pro gastrinom se do velké míry překrývá s rozmezím pro jiné formy hypergastrinémie. Často je tudíž nutná ověřovací procedura. Obyčejně se jedná o analýzu koncentrace gastrinu po injekci sekretinu, podání infuze kalcia nebo po požití jídla. Podle literatury představuje nejspolehlivější způsob doplňkového vyšetření právě sekretinový test. 1,6,9 Molekulární heterogenita gastrinu má důležité důsledky při navrhování imunologického stanovení gastrinu. Protože některé gastronomy vylučují pouze G-17 a jiné pouze G-34, je výhodné použít protilátky, které rozpoznají rozličné formy. Použití příliš specializovaného stanovení nese s sebou riziko, že tumor bude přehlédnut. 4,11,19 Princip Stanovení Gastrin na analyzátorech IMMULITE 2000 je chemiluminiscenční enzymem značená imunochemická reakce založená na ligandem značené monoklonální myší protilátce specifické vůči gastrinu a separaci pomocí antiligandu na pevné fázi. Vzorek pacienta se společně s ligandem značenou monoklonální protilátkou proti ganstrinu, králičí polyklonální protilátkou proti gastrinu konjugovanou s alkalickou fosfatázou a monoklonální myší protilátkou proti gastrinu konjugovanou s alkalickou fosfatázou společně s kuličkou s imobilizovaným antiligandem inkubuje v reakční zkumavce. Během 60-ti minutové inkubace utvoří molekuly gastrinu ve vzorku vrstvené komplexy, které se postupně, vážou na antiligand v pevné fázi. Nenavázaný konjugát se následně odstraní odstředivým promýváním, potom se přidá luminogenický substrát a reakční zkumavka se ponechá v inkubátoru na dalších pět minut. Chemiluminiscenční substrát, fosforečný ester adamantyl dioxetanu, v přítomnosti alkalické fosfatázy hydrolyzuje za vzniku nestabilního meziproduktu. Plynulá tvorba tohoto meziproduktu má za následek IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 9

10 trvalou emisi světla. Navázaný komplex a tudíž i intenzita záření, která se měří luminometrem je přímo úměrná koncentraci gastrinu ve vzorku. Inkubační cykly: 1 60 minut Odebírání vzorků Pro určení bazálních hodnot gastrinu v séru nesmí pacient celou noc jíst, v ideálním případě 12 hodin i více. Krev odeberte venepunkcí 16 do obyčejných zkumavek (bez přípravků proti srážlivosti), poznamenejte si čas odběru a sérum oddělte od buněk v chlazené centrifuze hned jak je to jen možné. Rozpipetujte na alikvotní části a neprodleně zmrazte. 17 Použití EDTA plazmy při stanovení Gastrin na analyzátorech IMMULITE 2000 se nedoporučuje. Lipemické, žloutenkové nebo značně kontaminované vzorky můžou způsobovat chybné výsledky. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Gastrin na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 50 μl séra Skladování: Stabilní 4 hodiny při teplotě 2 8 C nebo 30 dní rozdělené na alikvotní části při teplotě 20 C v mrazáku, který se sám neodmrazuje. 20 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. POZOR! POTENCIÁLNÍ BIOHAZARD Obsahuje materiál lidského původu. Každé darování krve nebo jejích složek bylo testováno metodami schválenými FDA na přítomnost protilátek proti viru lidské imunodeficience typu 1 (HIV-1) a typu 2 (HIV-2) a také na povrchový antigen viru hepatitidy B (HBsAg) a protilátky proti viru hepatitidy C (HCV). Výsledky testu byly negativní (opakovaně nereaktivní). Žádný test však není absolutní zárukou nepřítomnosti uvedených nebo jiných infekčních zárodků; s materiálem proto zacházejte podle zásad správné laboratorní praxe a dbejte obecných bezpečnostních opatření UPOZORNĚNÍ: Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. H412 P273, P501 Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje: 2-methyl- 2H-isothiazol-3-jedna; Gastrin kalibrátory Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. 10 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

11 Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. Gastrin zásobník s kuličkami (L2GA12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených anti-ligandem odvozeným od streptavidinu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KGA2: 1 balení Gastrin reagencie (L2GAA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml ligandem značené monoklonální myší protilátky proti gastrinu, alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti gastrinu a alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s králičí polyklonální protilátkou proti gastrinu, v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KGA2: 1 nádobka Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Gastrin kalibrátory (LGAL, LGAH) Dvě sady po ampulky s 2 vysokou a 2 nízkou koncentrací lyofilizovaného syntetického lidského gastrinu G-17 v pufrované matrici. Každou ampulku rekonstituujte přidáním 2,0 ml destilované nebo deionizované vody. Míchejte jemným kroužením nebo překlápěním. Stabilní rozdělené na alikvotní části 30 dní po rekonstituci při teplotě 20 C v mrazáku, který se sám neodmrazuje. L2KGA2: 2 sady Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Multi diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků analyzátorem. Lahvička koncentrované (připravené k použití) nehumánní protein/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Skladování: 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při teplotě 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2M2Z: 3 štítky L2M2Z4: 5 štítků L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků Také dodáváme LGACM: Dvojúrovňový kontrolní modul Gastrin Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) gastrinu. IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 11

12 Očekávané hodnoty Studie referenčního rozmezí byla provedena na 143 vzorcích odebraných nalačno 49 od dobrovolníků s dobrým zdravím a 94 pravděpodobně normálních vzorků od velké referenční laboratoře v USA. Tyto vzorky byly vyšetřeny na analyzátorech IMMULITE 2000 pomocí metody Gastrin. Studie přinesla hodnotu mediánu 32 pg/ml a rozmezí odpovídající neparametrickým středním 95% případů 13 až 115 pg/ml pro vzorky odebrané nalačno od dospělých jedinců. Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all imunologickým stanovením. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v pg/ml. Uvedená metoda stanovení byla standardizována dle Medical Research Council's Research Standard A pro gastrin II, prasečí [NIBSC 66/138]. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér a přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor: pg/ml 0,47664 pmol/l pg/ml 1 mu/l [NIBSC 66/138] Kalibrační rozsah: Do 1000 pg/ml [NIBSC 66/138] Analytická citlivost: 5 pg/ml High-dose Hook Effect: Do pg/ml gastrinu G-17 typ I (nesulfátový) žádný Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 10 dní, čtyři testy za den, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění.z důvodu molekulární heterogenity gastrinu nevykazuje linearita tohoto stanovení tradiční charakteristiky podobnosti při zřeďování. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearita.) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem dvou sad po třech roztocích gastrinu (325 pg/ml, 600 pg/ml a 1100 pg/ml) v poměru 1:19. Jedna sada obsahovala tři roztoky G-17 typ II (sulfátové) a druhá sada obsahovala tři roztoky G-17 typ I (nesulfátové). (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Zpětná výtěžnost.) Specificita: Protilátka rozeznává zejména G-17 a slaběji rozeznává G-34 a minigastrin. (Viz tabulka Specificita.) Bilirubin: Může se stanovením interferovat a způsobit znehodnocení hodnot vyšších než 50 mg/l. (Viz tabulka Bilirubin.) Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 550 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. (Viz tabulka Hemolýza.) Lipémie: Interferuje se stanovením a způsobuje pokles hodnot při koncentraci nad 1000 mg/dl. (Viz tabulka Lipémie.) Alternativní typ vzorku: K určení vlivu alternativního typy vzorku jsme metodou Gastrin na analyzátorech IMMULITE 2000 stanovili vzorky od 30 dobrovolníků odebrané do skleněných a plastových sérových, plastových s heparinem sodným a EDTA zkumavek a plastových zkumavek s gelovou bariérou (SST). Všechny zkumavky byly od firmy Becton Dickinson. Do úměrných objemů šesti sad 12 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

13 odpovídajících vzorků byly přidány roztoky s různou koncentrací gastrinu, abychom získali hodnoty napříč celým kalibračním rozsahem stanovení. Použití EDTA není vhodné. EDTA plazma může způsobit až o 50% nižší výsledky než obyčejné sérum. (Sérum sklo) = 1,03 (Sérum plast) 0,06 pg/ml r = 0,999 (Na Heparin plast) = 0,995 (Sérum plast) + 0,43 pg/ml r = 0,999 (SST plast) = 0,978 (Sérum plast) + 4,0 pg/ml r = 0,999 Střední hodnoty: 128 pg/ml (obyčejné sérum plast) 132 pg/ml (obyčejné sérum sklo) 128 pg/ml (Na Heparin plast) 129 pg/ml (SST plast) Srovnání metody: Stanovení bylo rovněž porovnáno s komerčně dostupným RIA imunologickým testem gastrinu (Kit A) na 100 vzorcích od zjevně zdravých dobrovolníků. (Koncentrační rozsah: přibližně pg/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese: (IMMULITE 2000) = 1,04 (Kit A) 24,7 pg/ml r = 0,926 Střední hodnoty: 57,0 pg/ml (IMMULITE 2000) 78,3 pg/ml (Kit A) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Γαστρίνη Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της γαστρίνης στον ορό, ως βοήθημα στην διάγνωση και θεραπεία ασθενών με διαταραχές που συνδέονται με μη φυσιολογική παραγωγή γαστρίνης. Αριθμοί καταλόγου: L2KGA2 (200 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: GAS Χρώμα: Ανοικτό πράσινο Περίληψη και επεξήγηση Η γαστρίνη είναι μια από τις κύριες γαστρεντερικές ορμόνες. ιεγείρει την έκκριση γαστρικού οξέος και υπάρχει σε πολλές μοριακές μορφές, οι οποίες διαφέρουν μεταξύ τους ως προς το μήκος του σκελετού πολυπεπτιδίων και στην παραγωγοποίηση των μεμονωμένων αμινοξέων. 10 Οι τρεις κύριες μορφές της G-17, G-34 και G-14 παίρνουν το όνομά τους από τον αριθμό των αμινοξέων που περιέχουν. Οι ανοσοαναλύσεις της γαστρίνης παίζουν σημαντικό ρόλο στον εντοπισμό των όγκων Zollinger-Ellison (γαστρινώματα). Αυτοί οι όγκοι συνδέονται κατά κανόνα, αν και όχι απαραίτητα, με αυξημένα επίπεδα γαστρίνης, υπερέκκριση γαστρικού οξέος και πεπτικό έλκος. Στα άτομα που νηστεύουν, η γαστρίνη κυκλοφορεί συνήθως σε ποσότητες άνω των 100 pg/ml, οι οποίες παρουσιάζουν διακύμανση από μέρα σε μέρα. (Από την έρευνα στη βιβλιογραφία προκύπτει το συμπέρασμα ότι το ανώτατο όριο αναφοράς εξαρτάται σε σημαντικό βαθμό από τη χρησιμοποιούμενη μέθοδο, και μπορεί να ανέρχεται σε 200 ή 300 pg/ml για ορισμένα συστήματα RIA. 18 ) Τα επίπεδα σε κατάσταση νηστείας σε ασθενείς με σύνδρομο Zollinger-Ellison είναι κατά κανόνα πολύ υψηλά και υπερβαίνουν κατά πολύ το εύρος αναφοράς για τα υγιή άτομα. Αυξημένες τιμές συναντώνται και σε άλλες παθήσεις. Εκεί όπου παρατηρείται μειωμένη έκκριση γαστρικού οξέος, για παράδειγμα στην κακοήθη αναιμία, τα επίπεδα της γαστρίνης εμφανίζονται χαρακτηριστικά (και αντίστοιχα) αυξημένα. Η υπεργαστριναιμία και η υπερβολική έκκριση γαστρικού οξέος συναντώνται επίσης σε περιπτώσεις απουσίας όγκων του παγκρέατος ή του δωδεκαδακτύλου. Έτσι, η υπεργαστριναιμία απουσία γαστρινώματος μπορεί να συνυπάρχει με απόφραξη της πυλωρού και διάταση του άντρου, έπειτα από βαγοτομή, σύνδρομο "διατηρημένου άντρου", ενώ παρατηρείται σε ορισμένους ασθενείς με κοινό πεπτικό έλκος. IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 13

14 Επειδή περίπου οι μισοί ασθενείς με όγκους Zollinger-Ellison παρουσιάζουν επίπεδα γαστρίνης σε κατάσταση νηστείας χαμηλότερα των 500 pg/ml, το εύρος σε γαστρινώματα αλληλοεπικαλύπτεται σε σημαντικό βαθμό με το εύρος που ισχύει για άλλες μορφές υπεργαστριναιμίας. Συνεπώς, συχνά είναι απαραίτητη μια διαδικασία επιβεβαίωσης. Αυτό περιλαμβάνει συνήθως την ανάλυση των επιπέδων γαστρίνης έπειτα από ένεση εκκριματίνης, έγχυση ασβεστίου ή δοκιμαστικό γεύμα. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, οι εξετάσεις εκκριματίνης είναι οι πιο αξιόπιστες μεταξύ αυτών των συνοδευτικών διαδικασιών. 1,6,9 Η μοριακή ετερογένεια της γαστρίνης επηρεάζει σημαντικά το σχεδιασμό των ανοσοαναλύσεων γαστρίνης. Καθώς ορισμένα γαστρινώματα εκκρίνουν μόνον G-17, ενώ άλλα μόνον G-34, καλό είναι να χρησιμοποιούνται αντισώματα, τα οποία αναγνωρίζουν περισσότερες μορφές. Η χρήση υπερβολικά περιορισμένης ειδικότητας ανοσοναλύσεων ενέχει τον κίνδυνο μη αναγνώρισης του όγκου. 4,11,19 Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Γαστρίνη είναι μια χημειοφωταυγής ενζυμική ανοσομετρική ανάλυση με βάση ένα μονοκλωνικό αντίσωμα γαστρίνης από ποντικό που λειτουργεί ως ligand, με διαχωρισμό ξηρής φάσης με επικάλυψη anti-ligand. Το δείγμα του ασθενούς μαζί με το ligand-σημασμένο μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-γαστρίνης, ένα πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-γαστρίνης από κουνέλι συνδεδεμένο με αλκαλική φωσφατάση, καθώς και με ένα μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-γαστρίνης από ποντικό συνδεδεμένο με αλκαλική φωσφατάση, επωάζονται ταυτόχρονα παρουσία του ακινητοποιημένου anti-ligand σφαιριδίου σε έναν σωλήνα αντίδρασης. Κατά τα 60 λεπτα της επώασης, τα μόρια γαστρίνης στο δείγμα σχηματίζουν συμπλέγματα sandwich αντισώματος, τα οποία με τη σειρά τους ενώνονται με το anti-ligand κατά την ξηρή φάση. Έπειτα, το δεσμευμένο υλικό αφαιρείται με φυγόκεντρη πλύση, προστίθεται φωτογόνο υπόστρωμα και, τέλος, ο σωλήνας αντίδρασης επωάζεται για πέντε ακόμη λεπτά. Το χημειοφωταυγές υπόστρωμα, ένας φωσφορικός εστέρας adamantyl dioxetane, υποβάλλεται σε υδρόλυση παρουσία αλκαλικής φωσφατάσης, ώστε να παραχθεί ένα ασταθές ενδιάμεσο. Η συνεχής παραγωγή αυτού του ενδιάμεσου προκαλεί ανάσχεση της εκπομπής φωτός. Το δευσμευμένο σύμπλεγμα και, συνεπώς, η παραγωγή φωτονίων, όπως μετρώνται με το μετρητή φωταύγειας είναι ανάλογο με τη συγκέντρωση γαστρίνης στο δείγμα. Κύκλοι επώασης: 1 60 λεπτά Συλλογή δειγμάτων Για τη μέτρηση των επιπέδων γαστρίνης στα βασεόφιλα κύτταρα του ορού, επιβάλεται νηστεία από το βράδυ της προηγουμένης, κατά προτίμηση επί τουλάχιστον 12 ώρες. Συλλογή αίματος με φλεβοκέντηση 16 σε απλούς σωλήνες (χωρίς αντιπηκτικά), σημειώνοντας την ώρα συλλογής και διαχωρισμό του ορού από τα κύτταρα σε κατεψυγμένη συσκευή φυγοκέντρισης το συντομότερο δυνατό. ιαχωρίστε και καταψύξτε χωρίς καθυστέρηση. 17 Σωληνάρια EDTA δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται στην διαδικασία ανάλυσης με την ανάλυση IMMULITE 2000 Γαστρίνη. Λιπιδαιμικα ή πολύ μολυσμένα δείγματα με ίκτερο μπορεί να δώσουν λανθασμένα αποτελέσματα. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. 14 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

15 Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Γαστρίνη δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 50 µl ορού Φύλαξη: Σταθερό επί 4 ώρες στους 2 8 C ή διαχωρισμένο επί 30 ημέρες στους 20 C σε καταψύκτη χωρίς αυτόματη απόψυξη. 20 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ! ΥΝΗΤΙΚΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟΣ ΚΙΝ ΥΝΟΣ Περιέχει υλικό ανθρώπινης προέλευσης. Κάθε δωρεά ανθρώπινου αίματος ή συστατικού αίματος ελέγχθηκε με μεθόδους εγκεκριμένες από τον FDA για την ύπαρξη αντισωμάτων ενάντια στους ιούς της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου τύπου 1 (HIV-1) και τύπου 2 (HIV-2), καθώς και για επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β (HBsAg) και για αντισώματα ενάντια στον ιό της ηπατίτιδας C (HCV). Τα αποτελέσματα των εξετάσεων ήταν αρνητικά (όχι επανειλημμένα αντιδραστικά). Επειδή καμία εξέταση δεν παρέχει πλήρη διασφάλιση για την απουσία αυτών ή άλλων μολυσματικών παραγόντων, ο χειρισμός αυτού του υλικού θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις ορθές εργαστηριακές πρακτικές και γενικές προφυλάξεις ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. H412 P273, P501 Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: 2-μεθυλ- 2H-ισοθειαζολ-3-όνη, Ρυθμιστές γαστρίνης Αντιδραστήρια: ιατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων γαστρίνης (L2GA12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια με επικάλυψη anti-ligand από στρεπταβιδίνη. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KGA2: 1 συσκευασία οχείο αντιδραστηρίου γαστρίνης (L2GAA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml ligandσημασμένο μονοκλωνικό αντίσωμα αντιγαστρίνης ποντικού, αλκαλική φωσφατάση (βόειο έντερο) συνδεδεμένη με μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-γαστρίνης ποντικού και αλκαλική φωσφατάση (βόειο έντερο) συνδεδεμένη με πολυκλονικό αντίσωμα αντι-γαστρίνης κουνελιού σε ρυθμιστικό. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KGA2: 1 δοχείο IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 15

16 Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές γαστρίνης (LGAL, LGAH) 2 σετ των φιαλίδια (2 χαμηλό και 2 υψηλό) λυοφιλοποιημένης συνθετικής ανθρώπινης γαστρίνης G-17 σε μήτρα ρυθμιστικού διαλύματος. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου με 2,0 ml απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Αναμείξτε με απαλές κινήσεις ή αναστροφή. Σταθερό μετά την ανασύσταση επί 30 ημέρες (διαχωρισμένο) στους 20 C σε καταψύκτη χωρίς αυτόματη απόψυξη. L2KGA2: 2 σετ Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά Πολύ-αραιωτικό 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Για την αραίωση επί του αναλυτή υψηλών δειγμάτων. Ένα φιαλίδιο, συμπυκνωμένο (έτοιμο για χρήση) σε μη ανθρώπινη μήτρα πρωτεΐνης/ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Αποθήκευση: 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. L2M2Z: 3 ετικέτες L2M2Z4: 5 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος (16 x 100 mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος Επίσης διατίθενται LGACM: Μονάδα ελέγχου γαστρίνης δύο επιπέδων Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. ιαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες είγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιείτε δείγματα ποιοτικού ελέγχου σε δύο τουλάχιστον επίπεδα (χαμηλό και υψηλό) γαστρίνης. Αναμενόμενες τιμές Πραγματοποιήθηκε μελέτη εύρους αναφοράς, όπου αναλύθηκαν με τη μέθοδο IMMULITE 2000 Γαστρίνη 143 άτομα υπό νηστεία 49 εθελοντές εργαστηρίου με καλή υγεία και 94 φαινομενικά φυσιολογικά δείγματα ενός μεγάλου εργαστηρίου αναφοράς των Η.Π.Α. Από τη μελέτη προέκυψε μια ενδιάμεση τιμή 32 pg/ml και ένα εύρος που αντιστοιχεί στο μη παραμετροποιημένο μέσο 95% των παρατηρήσεων με τιμές 13 έως 115 pg/ml για τα δείγματα νηστείας υγιών ενηλίκων. Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να έχει τις δικές του τιμές αναφοράς. 16 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

17 Περιορισμός Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] είγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε pg/ml. Η ανάλυση τυποποιήθηκε με βάση το Ερευνητικό πρότυπο Α του Συμβουλίου Ιατρικών Ερευνών για τη Γαστρίνη ΙΙ, χοίρεια [NIBSC 66/138]. (Εκτός αν σημειώνεται διαφορετικά, όλα τα αποτελέσματα προέρχονται από δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Παράγοντες μετατροπής: pg/ml 0,47664 pmol/l pg/ml 1 mu/l [NIBSC 66/138] Εύρος καμπύλης: έως 1000 pg/ml [NIBSC 66/138] Αναλυτική ευαισθησία: 5 pg/ml High-dose επίδραση φαινομένου Hook: Καμία έως τα pg/ml γαστρίνης G-17 τύπου I (μη σουλφονική) Ακρίβεια: Για 10 μέρες κάποια δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν, τέσσερις φορές ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα "Precision".) Γραμμικότητα: Τα δείγματα αναλύθηκαν σε διαφορετικά διαλύματα. Λόγω της μοριακής ετερογένειας της γαστρίνης, η γραμμικότητα της εξέτασης δεν εμφανίζει τα τυπικά χαρακτηριστικά του παραλληλισμού των διαλυμάτων. (Βλ. Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα). Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 έως 19) εμπλουτίστηκαν με δύο σετ τριών διαλυμάτων γαστρίνης (325 pg/ml, 600 pg/ml και 1100 pg/ml) και αναλύθηκαν. Το ένα σετ περιείχε τρία διαλύματα G-17 Τύπου II (σουλφονικά), ενώ το άλλο σε τπεριείχε τρία διαλύματα G-17 Τύπου I (μη σουλφονικά). (Βλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα αναγνωρίζει κατά κύριο λόγο την G-17 και λιγότερο την G-34 και τη μίνι-γαστρίνη. (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Μπορεί να επηρεάσει την ανάλυση και προκαλεί μείωση των τιμών σε επίπεδα άνω των 50 mg/l. (Βλ. Πίνακα "Bilirubin".) Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 550 mg/dl δεν έχει επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. (Βλ. πίνακα "Hemolysis".) Λιπιδαιμία: Επηρεάζει την ανάλυση και προκαλεί μείωση των τιμών άνω των 1000 mg/dl. (Βλ. πίνακα Lipemia ). Εναλλακτικός τύπος δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 30 εθελοντές σε απλούς γυάλινους και πλαστικούς, πλαστικούς ηπαρινισμένους, EDTA και SST δοκιμαστικούς σωλήνες ορού. Όλοι οι σωλήνες ήταν από την Becton Dickinson. Από τα έξι σετ των αντιστοιχισμένων δειγμάτων, ίσοι όγκοι εμπλουτίστηκαν με διάφορες ποσότητες γαστρίνης, ώστε να ληφθούν τιμές καθόλο το εύρος βαθμονόμησης της καμπύλης της ανάλυσης, και στη συνέχεια εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία του IMMULITE 2000 Γαστρίνης. Το EDTA δεν είναι κατάλληλο για χρήση. Το πλάσμα EDTA δίνει κατά κατά μέσο όρο 50% χαμηλότερες τιμές από τον απλό ορό. IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 17

18 (Ορού γυάλινοι) = 1,03 (Ορού πλαστικοί) 0,06 pg/ml r = 0,999 (Na ηπαρίνης πλαστικοί) = 0,995 (ορού πλαστικοί) + 0,43 pg/ml r = 0,999 (SST πλαστικοί) = 0,978 (ορού πλαστικοί) + 4,0 pg/ml r = 0,999 Μέσοι όροι: 128 pg/ml (Απλοί ορού πλαστικοί) 132 pg/ml (Απλοί ορού γυάλινοι) 128 pg/ml (Na ηπαρίνης πλαστικοί) 129 pg/ml (SST πλαστικοί) Σύγκριση της μεθόδου: Η ανάλυση συγκρίθηκε με μια διαθέσιμη στο εμπόριο ανοσοραδιομετρική ανάλυση RIA σε 100 δείγματα φαινομενικά υγιών εθελοντών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου pg/ml. ες γράφ.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IMMULITE 2000) = 1,04 (Κιτ A) 24,7 pg/ml r = 0,926 Μέσοι όροι: 57,0 pg/ml (IMMULITE 2000) 78,3 pg/ml (Kιτ A) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Gastryna Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do ilościowego oznaczenia poziomu gastryny w surowicy, przydatny w diagnozowaniu i leczeniu zaburzeń związanych z nieprawidłową produkcją gastryny. Numery katalogowe: L2KGA2 (200 testów) Kod testu: GAS Kolor: Jasno zielony Wprowadzenie Gastryna jest głównym hormonem żołądkowo jelitowym. Stymuluje sekrecję kwasu żołądkowego i występuje w licznych formach cząsteczkowych różniących się od siebie długością szkieletu polipeptydowego pojedynczych aminokwasów. 10 Trzy najważniejsze formy: G-17, G-34 i G-14 zawdzięczają nazwy ilości wchodzących w ich skład aminokwasów. Immunoenzymatyczne metody oznaczania gastryny odgrywają podstawową rolę w rozpoznawaniu nowotworów Zollinger- Ellison (gastrinoma). Typowo nowotwory te, lecz nie bez wyjątków, wiążą się z podniesionym poziomem gastryny, zwiększonym wydzielaniem kwasu żołądkowego i wrzodami trawiennymi. Na czczo poziom gastryny krążącej nie przekracza 100 pg/ml wykazując pewną zmienność w kolejnych dniach. Przegląd piśmiennictwa wykazuje, że górny zakres referencyjny jest w znacznym stopniu zależny od metody osiągając 200 lub 300 pg/ml w niektórych testach RIA. 18 Poziom gastryny na czczo u osób z zespołem Zollinger-Ellison jest zwykle bardzo wysoki, znacznie wyższy niż zakres dla osób zdrowych. Podniesiony poziom gastryny towarzyszy również innym okolicznościom. W przypadku upośledzenia sekrecji kwasu żołądkowego, na przykład w anemii złośliwej, poziom gastryny jest charakterystycznie (i odpowiednio) podniesiony. Podniesienie gastryny we krwi i nadmierne wydzielanie kwasu żołądkowego jest także spotykane przy nieobecności nowotworów trzustki i dwunastnicy. I tak podniesiony poziom gastryny we krwi bez gastrinoma może występować w niedrożności odźwiernika z rozdęciem jamy odźwiernika, po wagotomii, w zespole zatrzymania odźwiernika i u niektórych osób z klasyczną chorobą wrzodową. Poziom gastryny na czczo u blisko połowy chorych na nowotwór Zollinger-Ellison jest mniejszy niż 500 pg/ml nakładając się istotnie na zakres stężeń występujący w hipergastrynemii innego pochodzenia. Konieczne więc jest stosowanie metod potwierdzających, polegających na oznaczeniach gastryny po podaniu sekretyny, infuzji wapnia lub po posiłku. 18 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

19 Zgodnie z piśmiennictwem najbardziej wiarygodne potwierdzenie uzyskuje się w teście sekretynowym. 1,6,9 Heterogenność cząsteczek gastryny ma istotne znaczenie w opracowywaniu immunotestów dla jej oznaczania. Niektóre rodzaje gastrinoma wydzielają wyłącznie G-17, inne G-34. Należy więc stosować przeciwciała rozpoznające wiele form. Stosowanie testów nadspecyficznych niesie ryzyko przeoczenia nowotworu. 4,11,19 Zasada testu IMMULITE 2000 Gastryna jest chemiluminescencyjnym immunoenzymatycznym testem kanapkowym wykorzystującym specyficzne w stosunku do gastryny, sprzężone z ligandem, mysie przeciwciało monoklonalne (anty-gastryna) jako przeciwciało wyłapujące i sprzężony z fazą stałą antyligand w fazie separacji. Próbka badana inkubowana jest w probówce reakcyjnej w obecności kulki opłaszczonej anty-ligandem równocześnie ze sprzężonym z ligandem monoklonalnym przeciwciałem anty-gastryna, sprzężonym z fosfatazą alkaliczną króliczym przeciwciałem poliklonalnym anty-gastryna oraz sprzężonym z fosfatazą alkaliczną mysim przeciwciałem monoklonalnym antygastryna. W trakcie 60 minutowej inkubacji z wytrząsaniem cząsteczki gastryny z próbki tworzą kompleks, który następnie wiązany jest przez anty-ligand z fazą stałą. Niezwiązany kompleks oddzielany jest na drodze płukania i wirowania, po czym dodawany jest substrat luminescencyjny inkubowany z kulką przez kolejne 5 minut. Chemiluminescencyjny substrat: ester fosforanowy adamantylu dioxetanu ulega hydrolizie w obecności fosfatazy alkalicznej do nietrwałych form przejściowych. Ciągłe powstawanie nietrwałych pośredników podtrzymuje emisję światła. Wielkość kompleksu i tym samym nasilenie emisji światła mierzonego przez luminometr jest proporcjonalna do ilości gastryny w próbce. Czas inkubacji: 1 60 minut Preparatyka próbek Podstawowy poziom gastryny oznaczany jest w próbce pobranej na czczo, optymalnie po 12 godzinnym lub dłuższym okresie głodzenia. Próbkę pobierać do probówki 16 bez antykoagulantu notując czas pobrania. Surowicę oddzielać od skrzepu możliwie jak najszybciej stosując wirówkę z chłodzeniem. Surowice porcjować i natychmiast zamrażać. 17 Osocze EDTA nie powinno być stosowane w teście IMMULITE 2000 Gastryna. Próbki lipemiczne, żółtaczkowe lub wysoce zanieczyszczone mogą dawaćfałszywe wyniki. Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Stosowane przy pobieraniu krwi probówki różnych producentów mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotny jest materiał i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 Gastryna nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 50 µl surowicy Przechowywanie: Stabilne 4 godziny w 2 8 C, lub 30 dni zamrożone w 20 C w zamrażarce bez opcji automatycznego rozmrażania. 20 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 19

20 Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA! POTENCJALNE ZAGROŻENIE BIOLOGICZNE Zawiera materiał pochodzenia ludzkiego. Każdą porcję ludzkiej krwi lub składnika krwi pochodzącą od dawców przetestowano metodami zaaprobowanymi przez FDA na obecność przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi nabytego niedoboru odporności typu 1 (HIV-1) i typu 2 (HIV-2), antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby typu B (HBsAg) i przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (HCV). Wyniki tych badań były ujemne (nie wykazały powtarzalnej reaktywności). Jednak żadne badanie nie gwarantuje całkowitej pewności, że te lub inne czynniki chorobotwórcze nie są obecne w materiale; z tym materiałem należy postępować zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej i stosować uniwersalne środki ostrożności PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. H412 P273, P501 Działa szkodliwie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Unikać uwolnienia do środowiska. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: 2-metylo- 2H-izotiazolino-3-on; Gastryna Kalibratory Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy Zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Gastryna Pojemnik z Kulkami (L2GA12) Z kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych anty-ligandem pochodnym streptawidiny. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KGA2: 1 pojemnik Gastryna Klin odczynnikowy (L2GAA2) Z kodem kreskowym. 11,5 ml mysiego przeciwciała monoklonalnego anty-gastryna związanego z ligandem, alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) związanej z mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-gastryna i alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) związanej z króliczym przeciwciałem poliklonalnym anty-gastryna w buforze. Stabilny w 2 8 C do daty ważności. L2KGA2: 1 klin Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelkę komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. Gastryna Kalibratory (LGAL, LGAH) Dwie zestawy po fiolki (kalibrator dwie niski i dwie wysoki), zawierające liofilizat, syntetycznej ludzkiej gastryny G-17 w matrycy buforu. Zawartość każdej fiolki rekonstytuować 2,0 ml wody destylowanej. Mieszać przez delikatne wytrząsanie i obracanie do momentu pełnego rozpuszczenia zawartości. Po rekonstytucji stabilne 30 dni (rozpipetowane) w 20 C w zamrażarce bez opcji samoczynnego rozmrażania. L2KGA2: 2 zestawy Przed przystąpieniem do kalibracji umocuj na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. 20 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

21 Materiały dostarczane oddzielnie Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Do automatycznego rozcieńczania próbek moczu. Jedna fiolka skoncentrowanej, gotowej do użycia, buforowanej, białkowej matrycy zwierzęcej z konserwantem. Po otwarciu stabilny przez 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Nalepki z odpowiednimi kodami kreskowymi są dostarczane wraz z rozcieńczalnikiem. Nalepkę umieścić na probówce ( mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2M2Z: 3 nalepki L2M2Z4: 5 nalepek L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik Ponadto niezbędne LGACM: Dwupoziomowy zestaw kontrolny dla gastryny Ponadto niezbędne Woda destylowana lub dejonizowana, probówki testowe, kontrole Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie Próbki kontrolne: Stosować kontrole firmy lub pule surowic, co najmniej o niskim i wysokim poziomie gastryny. Oczekiwane wartości Badania referencyjne zestawem IMMULITE 2000 Gastryna przeprowadzono w grupie 143 próbek pobranych na czczo 49 próbek pochodziło od ewidentnie zdrowych ochotników z laboratorium, 94 od prawdopodobnie zdrowych osób z wielkiego, referencyjnego, laboratorium z terenu USA. Mediana wyniosła 32 pg/ml, a zakres odpowiadający nieparametrycznym, środkowym 95% wyników plasował się pomiędzy 13 i 115 pg/ml dla próbek pobranych na czczo od zdrowych osób Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin. Chem. 1988: 34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 21

22 Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i rysunkach. Wyniki wyrażano w in pg/ml. Test standaryzowano wobec Badawczego Standardu A Rady Badań Medycznych gastryny II, świńskiej [NIBSC 66/138]. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Przeliczniki: pg/ml 0,47664 pmol/l pg/ml 1 mu/l [NIBSC 66/138] Zakres kalibracji: do 1000 pg/ml [NIBSC 66/138] Czułość analityczna: 5 pg/ml Efekt wysokiej dawki: Nie występuje do stężenia pg/ml gastryny G-17 Typu I (niesiarczanowa) Precyzja: Próbki testowano przez okres 20 dni w duplikatach, dwa razy dziennie, co dało w sumie 40 serii i 80 powtórzeń. (Patrz: Tabela Precyzja.) Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom. Ze względu na heterogenność cząsteczki gastryny, test liniowości nie wykazywał typowej zależności oczekiwanej w testach rozcieńczeniowych. (Patrz: Tabela Liniowość.) Odzysk: Oznaczano próbki wzbogacane dwoma zestawami trzech stężeń gastryny w stosunku objętościowym 1 do 19, kolejno: 325 pg/ml, 600 pg/ml i 1100 pg/ml. Jeden zestaw obejmował trzy roztwory G-17 Typu II (siarczanowej), drugi zestaw obejmował trzy roztwory G-17 Typu I (niesiarczanowej). (Patrz: Tabela Odzysk.) Specyficzność: Przeciwciało rozpoznaje głównie G-17, w mniejszym stopniu G-34 i mini gastrynę. (Patrz: Tabela Specyficzność.) Bilirubina: Może wpływać na oznaczenie powodując zaniżenie wyników przy stężeniach przekraczających 50 mg/l. (Patrz: Tabela Bilirubina.) Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 550 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. (Patrz: Tabela Hemoliza.) Lipemia: Wpływa na oznaczenie powodując obniżenie wyników przy stężeniach przekraczających 1000 mg/dl. (Patrz: Tabela Lipemia.) Wpływ materiału na oznaczenie: W celu określenia wpływu sposobu pobrania materiału na wynik oznaczenia krew od 30 ochotników pobierano do: czystych probówek szklanych i plastikowych, probówek z heparyną, z EDTA i z barierą żelową (SST). Wszystkie probówki wyprodukowała firma Becton-Dickinson. Sześć zestawów porównywanych próbek wzbogacano jednakowymi objętościami różnych stężeń gastryny tak, by uzyskać wartości pokrywające zakres liniowości testu. Wszystkie próbki oznaczano w teście IMMULITE 2000 Gastryna. EDTA nie nadaje się do oznaczenia. Wartości otrzymywane w osoczu EDTA były do 50% niższe niż w surowicy. (Sur. szkło) = 1,03 (Sur, plastik) 0,06 pg/ml r = 0,999 (Hepar. Na plastik) = 0,995 (Sur, plastik) + 0,43 pg/ml r = 0,999 (SST plastik) = 0,978 (Sur, plastik) + 4,0 pg/ml r = 0,999 Średnie: 128 pg/ml (Surowica plastik) 132 pg/ml (Surowica szkło) 128 pg/ml (Na Heparyna plastik) 129 pg/ml (SST plastik) Porównanie metod: Test porównywano z dostępnym na rynku testem dla gastryny RIA (Kit A) w grupie 100 próbek od ewidentnie zdrowych ochotników. (Zakres stężeń od około 10 do 305 pg/ml. Patrz wykres.) Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IMMULITE 2000) = 1,04 (Kit A) 24,7 pg/ml r = 0,926 Średnie: 57,0 pg/ml (IMMULITE 2000) 78,3 pg/ml (Kit A) 22 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )

23 Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KGA 3 {16} Changes in this Edition: cc#eu22651: 1) Under Warnings and Precautions, added biohazard symbol and potential biohazard statement, caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 2) Under References, added citations from the potential biohazard statement. 3) Changed Origin: UK to Made in: UK. 4) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 5) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! υνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, ) 23

24 Symbol Definition En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie Symbol Definition En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Health Hazard Cz: Zdravotní riziko El: Κίνδυνος για την υγεία Pl: Zagrożenie dla zdrowia En: Exclamation Mark Cz: Vykřičník El: Θαυμαστικό Pl: Wykrzyknik En: Corrosion Cz: Koroze El: ιάβρωση Pl: Działanie żrące En: Skull and Crossbones Cz: Lebka se zkříženými hnáty El: Νεκροκεφαλή με διασταυρούμενα οστά Pl: Czaszka i skrzyżowane piszczele En: Environment Cz: Prostředí El: Περιβάλλον Pl: Środowisko En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: ιατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym BEAD PACK En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami LOT En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii TEST UNIT En: Test Unit Cz: Testovací Jednotky El: Μονάδες ανάλυσης Pl: Jednostki testowe En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów REAG WEDGE REAG WEDGE A REAG WEDGE B REAG WEDGE D En: Reagent Wedge Cz: Reagencie El: οχείο Αντιδραστηρίων Pl: Klin odczynnikowy En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) ADJUSTOR En: Adjustor Cz: Kalibrátor El: Ρυθμιστής Pl: Kalibrator 24 IMMULITE 2000 Gastrin (PIEL2KGA-3 {16}, )