Unconjugated Estriol. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Unconjugated Estriol For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of unconjugated (free) estriol in serum, as an aid in monitoring fetal maturity and well-being in the context of high-risk and poorly dated pregnancies. Catalog Numbers: L2KUE32 (200 tests), L2KUE36 (600 tests), L2KUE33M (3000 tests) Test Code: UE3 Color: Light Blue Summary and Explanation Most of the estriol circulating or excreted during the third trimester of pregnancy is the joint product of fetus and placenta, originating from a precursor synthesized in the fetus by the adrenal glands, and transformed by the fetal liver and the placenta into estriol. On traversing the placenta, this is rapidly metabolized, primarily in the maternal liver, to conjugated forms: the estriol sulfates and glucuronides. As a result, "free" estriol, the unconjugated form, accounts for barely nine percent of the total estriol in circulation; the estriol sulfates, which are relatively long-lived, account for roughly half. Urinary estriol consists entirely of conjugated forms since only free estriol enters the maternal circulation while only the conjugated forms are excreted. Normally, as the fetus develops, estriol production increases, resulting in a nearly three-fold rise in circulating estriol levels during the final trimester, and a corresponding increase in urinary levels. There is typically a surge at about the 36th week. According to the literature, free and total estriol concentrations reach approximately 15 and 250 ng/ml at term, while the urinary output climbs to approximately 45 mg/day. After 40 weeks, estriol levels gradually subside, declining by roughly 12 percent per week. 9 There is considerable patient-to-patient variability: the reference range for a given gestational age may encompass estriol levels from 50 to 200 percent of the median for that age. Hence the pattern generated by serial determinations is ordinarily of greater significance than the results of isolated measurements. Persistently low or rapidly falling estriol levels suggest fetal distress. However, because estriol concentrations are subject to diurnal and episodic variation, it is common practice to refer serum measurements to a baseline, defined for the patient as either the average or the highest of her three most recent estriol results. A drop of 40 percent or more relative to this baseline is likely to be significant. In combination with other techniques for fetal surveillance, serial determinations have been used in the management of pregnancies complicated by diabetes, 7,9 hypertension, prolonged gestation and uncertain dates. These clinical applications have been recently reviewed. 7,9,10,14 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol is a solid phase, enzyme-labeled chemiluminescent competitive immunoassay. The solid phase (bead) is coated with polyclonal rabbit anti-estriol antibody. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to estriol. The patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, unconjugated estriol in the sample competes with enzyme-conjugated estriol in the reagent for a limited number of antibody binding sites on the bead. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 1 30 minutes Time to First Result: 35 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. 2 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, )

3 Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. High patient samples can be manually diluted with an appropriate diluent. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 40 µl serum. Storage: 7 days at 2 8 C or 6 months (aliquotted) at 20 C. It is important that all samples drawn for serial monitoring of a patient's unconjugated estriol level be measured using the same assay system, and that all be subjected to the same storage conditions. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Unconjugated Estriol Bead Pack (L2UE312) With barcode. 200 beads, coated with polyclonal rabbit anti-estriol antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KUE32: 1 pack. L2KUE36: 3 packs. L2KUE33M: 15 packs. Unconjugated Estriol Reagent Wedge (L2UE3A2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to estriol in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KUE32: 1 wedge. L2KUE36: 3 wedges. L2KUE33M: 15 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Unconjugated Estriol Adjustors (LUE3L, LUE3H) Two vials (Low and High), 4 ml each, of unconjugated estriol in a processed human serum matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C L2KUE32: 1 set. L2KUE36: 2 sets. L2KUE33M: 3 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) Tri-level, multi-constituent Lyphochek Maternal Serum Control available from Bio-Rad. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, ) 3

4 Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control: To monitor system performance and chart trends, as a minimum requirement, quality control materials with at least two levels (low and high) of unconjugated estriol should be assayed on each day that samples are analyzed. Quality control samples should also be assayed when performing adjustment. Treat all quality control samples the same as patient samples. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme. Expected Values A reference range study was performed using the IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol assay (L2KUE3) on a cross-section of 199 third-trimester serum (SST) samples, with gestational ages fairly evenly distributed from 27 to 40 weeks. Tabulated below, in both mass and molar units, are the medians and central 95% ranges for each gestational week, estimated by a global nonparametric method. The statistics show, as expected, a clear trend towards higher values as a function of gestational age. Gestational Week n Median Unconjugated Estriol, ng/ml Central 95% Range > > > > > > > > > > > > >12 Gestational Week n Median Unconjugated Estriol, nmol/l Central 95% Range > > > >42 16 > >42 19 > >42 23 > >42 25 > >42 26 >42 Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic 4 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, )

5 antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay s performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: ng/ml nmol/l Reportable Range: ng/ml ( nmol/l). The assay calibration was determined based on the measurement of unconjugated estriol in pregnancy serum (SST) samples by a gas chromatographymass spectroscopy method (GC-MS) (see Method Comparison 1). Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; determined in accordance with CLSI EP17-A 26 ): 0.01 ng/ml (0.04 nmol/l). Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CLSI EP17-A 26 ): 0.04 ng/ml (0.14 nmol/l). Functional Sensitivity: (concentration with 20% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP5-A2 27 ): 0.15 ng/ml (0.52 nmol/l). Precision: Samples were assayed in duplicate in 40 runs for a total of 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Serum (SST) samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with 3 unconjugated estriol solutions (12.5, 25 and 50 ng/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for unconjugated estriol. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 500 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Method Comparison 1: The IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol assay was compared to GC-MS on 58 pregnancy serum (SST) samples. (Concentration range: approximately 0.4 to 11 ng/ml; see graph 1.) By Weighted Deming regression: (IML 2000) = 0.98 (GC-MS) ng/ml r = Means: 3.3 ng/ml (IMMULITE 2000) 3.2 ng/ml (GC-MS) Method Comparison 2: The IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol assay was compared to an Access Unconjugated Estriol assay, commercially available from Beckman Coulter, on 150 pregnancy serum (SST) samples. (Concentration range: approximately 0.07 to 9.79 ng/ml; see graph 2.) By Weighted Deming regression: (IML 2000) = 1.01 (Beckman) 0.01 ng/ml r = Means: 2.7 ng/ml (IMMULITE 2000) 2.6 ng/ml (Beckman) References 1) Alexander S, et al. Renal clearance of estriol and its conjugates in normal and abnormal pregnancies. J Clin Endocrinol Metabol 1979;49: ) Bagger PV, Jacobsson K, Gullberg B. Early prediction of individual total estriol curves in pregnancy. Acta Obstet Gynecol Scand 1981;60: ) Bashore RA, Westlake JR. Plasma unconjugated estriol IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, ) 5

6 values in high risk pregnancy. Amer J Obstet Gynecol 1977;128: ) Buster JE. Clinical applications of steroid assay tests of fetal-placental function. In: Abraham GE, editor. Radioassay systems in clinical endocrinology. New York: Marcel Dekker, 1981; ) Buster JE, et al. Subhourly variability of circulating third trimester maternal steroid concentrations as a source of sampling error. J Clin Endocrinol Metabol 1978;46: ) Buster JE, et al. Time trend analysis of unconjugated estriol concentrations in thirdtrimester pregnancy. Obstet Gynecol 1980;56: ) Buster JE, Freeman AG, Hobel CJ. An algorithm for determining gestational age from unconjugated estriol levels. Obstet Gynecol 1980;56: ) Chard T. Normality and abnormality. In: Klopper A, editor. Plasma hormone levels in evaluation of fetal wellbeing. Edinburgh: Churchill Livingstone, 1976; ) Distler W, et al. Estriol in pregnancy. V: Unconjugated and total plasma estriol in the management of pregnant diabetic patients. Amer J Obstet Gynecol 1978;130: ) Gauthier RJ, Griego BD, Goebelsmann U. Estriol in pregnancy. VII: Unconjugated plasma estriol in prolonged gestation. Amer J Obstet Gynecol 1981;139: ) Gibbons JM, Nagle M. Assessing fetal health when the mother is diabetic. Contemp Obstet Gynecol 1980;15: ) Goebelsmann U. The uses of oestriol as a monitoring tool. Clin Obstet Gynecol 1979 Aug;6(2): ) Katagiri H, et al. Estriol in pregnancy. IV: Normal concentrations, diurnal and/or episodic variations, and day-to-day changes of unconjugated and total estriol in late pregnancy plasma. Amer J Obstet Gynecol 1976;124: ) Klopper A. Criteria for the selection of steroid assays in the assessment of fetoplacental function. In: Klopper A, editor. Plasma hormone levels in evaluation of fetal wellbeing. Edinburgh: Churchill Livingstone, 1976; ) Klopper A. Choice of hormone assay in the assessment of fetoplacental function. In: Fuchs F, Klopper A, editors. Endocrinology of pregnancy. 2nd Edition. Hagerstown, Md: Harper and Row, 1977; ) Klopper A. Criteria for the selection of assays in the assessment of fetoplacental function. In: Abraham GE, editor. Radioassay systems in clinical endocrinology. New York: Marcel Dekker, 1981; ) Peterson L, Kundu N. Endocrine assessment of high risk pregnancies. Obstet Gynecol Ann 1980;9: ) Scommegna A, Bieniarz J. Integrated use of physical and endocrine parameters in perinatal medicine. In: Klopper A, editor. The human placenta. New York: Academic Press, 1980; ) Tulchinsky D. Use of biochemical indices in the management of high risk obstetric patients. Clin Perinatol 1980 Sep; 7(2): ) Tulchinsky D. The role of maternal and fetal hormones in pregnancy. Contemp Obstet Gynecol 1981 Jun;17(6): ) Vorherr H. Placental insufficiency in relation to post-term pregnancy and fetal postmaturity. Amer J Obstet Gynecol 1975;123: ) Whipple MJ, et al. Estriol in pregnancy. VI: Experience with unconjugated plasma estriol assays and antepartum fetal heart rate testing in diabetic pregnancies. Amer J Obstet Gynecol 1979;135: ) DiCandio JM. Urinary estriols and total serum estriol: a correlation study. Lab Med 1978;9: ) Goebelsmann U, et al. Estriol in pregnancy. Amer J Obstet Gynecol 1973;115: ) Townsley JD, et al. Circadian rhythms of serum and urinary estrogens in pregnancy. J Clin Endocrinol Metabol 1973;36: ) CLSI. Protocols for the Dtermination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI document EP17-A Vol. 24 (No. 34). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania , USA, ) Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline-Second Edition. CLSI document EP5- A2. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania , USA, Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. 6 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, )

7 Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, ) 7

8 Specificity 50 ND ND % % 1 ND ND Compound ng/ml ng/ml 3 reactivity 4 1 Added 2 Apparent % Cross Estriol-3-Sulfate 10 ND ND % Estriol-3βglucuronide 10 ND ND Estriol-16βglucuronide Estriol-17βglucuronide 5 ND ND 25 ND ND % Estradiol % % Estrone 10 ND ND % Estrone-βglucuronide 1 ND ND 10 ND ND 50 ND ND Estrone-3-Sulfate 1 ND ND 10 ND ND 50 ND ND 16-Epiestriol % % % 17-Epiestriol 1 ND ND 10 ND ND % Cortisol 50 ND ND 500 ND ND 11-Deoxycortisol 50 ND ND 1,000 ND ND 5α-Dihydro testosterone 1 ND ND 10 ND ND 50 ND ND Progesterone 50 ND ND 500 ND ND Testosterone 5 ND ND 50 ND ND ND: not detectable. 5 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 Zjevná koncentrace, 4 % Zkřížená reaktivita, 5 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 Εμφανής συγκέντρωση, 4 % Διασταυρ.Αντίδραση, 5 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 Zmierzona, 4 % reaktywności Krzyżowej, 5 ND: Nieoznaczlne. Method Comparison 1 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol, ng/ml Unconjugated Estriol by GC-MS, ng/ml (IML 2000) = 0.98 (GC-MS) ng/ml r = Method Comparison 2 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol, ng/ml Beckman Unconjugated Estriol, ng/ml (IML 2000) = 1.01 (Beckman) 0.01 ng/ml r = English. Unconjugated Estriol. Česky. Nekonjugovaný estriol. Ελληνικά. Ασύζευκτη Οιστριόλη. Polski. Estriol wolny. Česky IMMULITE 2000 Nekonjugovaný estriol Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 pro kvantitativní stanovení koncentrace nekonjugovaného (volného) estriolu v séru, jakožto pomůcky při monitorování zralosti a prospívání plodu u vysoce 8 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, )

9 rizikových těhotenství a při nesprávně určeném stupni těhotenství. Katalogové číslo: L2KUE32 (200 stanovení), L2KUE36 (600 stanovení), L2KUE33M (3000 stanovení) Kód metody: UE3 Barva: světle modrá Shrnutí a vysvětlení Většina estriolu cirkulujícího nebo vyloučeného během třetího trimestru těhotenství pochází z plodu a placenty. Vzniká z prekursoru syntetizovaného nadledvinkami plodu. V játrech plodu a v placentě se mění na estriol. Při průchodu placentou je rychle metabolizován, zejména v játrech matky, na konjugované formy: sulfáty estriolu a glukuronidy. Následkem toho představuje "volný" estriol, jeho nekonjugovaná forma, stěží 9 procent celkového estriolu v cirkulaci, přičemž sulfáty estradiolu, které mají relativně dlouhou životnost, tvoří zhruba polovinu. Estriol se v moči nachází pouze v konjugované formě, protože do cirkulace se dostává jenom volný estriol a jeho konjugované formy jsou vylučovány. Za normálních okolností se tvorba estriolu s postupným vývojem plodu zvyšuje, následkem čeho se koncentrace v cirkulaci během třetího trimestru zvýší až trojnásobně. Odpovídající je i nárůst množství estriolu v moči. K typickému prudkému nárůstu dochází asi v 36. týdnu těhotenství. Podle literatury dosáhnou koncentrace volného a celkového estriolu v tomto období přibližně 15 a 250 ng/ml, zatímco množství estriolu v moči se vyšplhá na zhruba 45 mg/den. Po 40. týdnu začne množství estriolu postupně klesat a to týdně asi o 12%. 9 Hodnoty naměřené u jednotlivých pacientů se značně liší. Referenční rozmezí pro určitý stupeň těhotenství může zahrnovat koncentrace estriolu od 50 do 200 procent hodnoty mediánu pro daný stupeň. Proto má určitý vzorec vygenerovaný sériovým měřením obvykle větší význam než výsledky izolovaných měření. Opakovaně nízké nebo prudce klesající množství koncentrace estriolu svědčí o stavu ohrožení plodu. Protože ale koncentrace estriolu se může občas vychýlit a mění se i v průběhu dne, je běžnou praxí vztahovat sérové koncentrace estriolu k základní úrovni, která je pro pacienta definována buď jako průměr nebo nejvyšší hodnota ze tří posledních měření estriolu. Významný může být pokles koncentrace vůči této základní úrovni o 40 a více procent. V kombinaci s ostatními metodami sledování plodu se sériová měření používají v péči o těhotenství komplikovaná diabetem, 7,9 hypertenzí, při přenášení a nejasném stupni těhotenství. Tyto klinické aplikace byly nedávno přehodnoceny. 7,9,10,14 Princip Metoda IMMULITE 2000 Nekonjugovaný estriol je enzymem značené chemiluminiscenční konkurenční stanovení v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena polyklonální králičí protilátkou proti estriolu. Kapalná fáze obsahuje alkalickou fosfatázu (z telecího střeva) konjugovanou s estriolem. Pacientský vzorek a reagencie se inkubují společně s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. V této fázi nekonjugovaný estriol ve vzorku soupeří s enzymem značeným estriolem v reagencii o omezený počet vazebných míst na kuličce. Nenavázaný pacientský vzorek a enzymový konjugát se poté odstraní centrifugačním mytím. Nakonec se do reakční zkumavky s kuličkou přidá substrát a generovaný signál je úměrný množství navázaného enzymu. Inkubační cykly: 1 30 minut Čas do prvního výsledku: 35 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Pro některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, ) 9

10 Koncentrované vzorky pacientů je třeba ručně naředit vhodným diluentem. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Nekonjugovaný estriol na analyzátoru IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku: 40 µl séra. Skladování: 7 dní při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců (rozdělený na alikvoty) při teplotě 20 C. Je důležité, aby vzorky odebrané pro sériová vyšetření hladiny nekonjugovaného estriolu u pacientů byly stanoveny za použití stejného systému stanovení a skladovány ve stejných podmínkách. Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. Nekonjugovaný estriol zásobník s kuličkami (L2UE312) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených polyklonální králičí protilátkou proti estriolu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KUE32: 1 balení. L2KUE36: 3 balení. L2KUE33M: 15 balení. Nekonjugovaný estriol reagencie (L2UE3A2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s estriolem v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KUE32: 1 nádobka. L2KUE36: 3 nádobky. L2KUE33M: 15 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Nekonjugovaný estriol kalibrátory (LUE3L, LUE3H) Dvě ampulky, po 4 ml, s vysokou a nízkou koncentrací nekonjugovaného estriolu v upravené lidské sérové matrici, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části. při 20 C. L2KUE32: 1 sada. L2KUE36: 2 sady. L2KUE33M: 3 sady. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) Trojúrovňová multivalentní sérová kontrola Lyphochek firmy Bio-Rad. 10 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, )

11 Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu, testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Kontrola kvality: Pro monitorování stanovení a posunů hodnot, jako minimální požadavek kontroly kvality, používejte kontrolní materiály alespoň na dvou hladinách koncentrace (nízká a vysoká) nekonjugovaného estriolu každý den, kdy se měří pacientské vzorky. Změřte kontrolní vzorky vždy i po adjustaci. S kontrolními vzorky nakládejte jako se vzorky pacientů. Firma Siemens Healthcare Diagnostics doporučuje použití komerčně dostupných kontrolních materiálů na nejméně dvou hladinách (nízká a vysoká). Výsledek měření kontroly se považuje za uspokojivý, pokud je v předepsaném rozmezí nebo v rozmezí stanoveném v rámci kontrolního systému laboratoře. Očekávané hodnoty Byla provedena referenční studie s použitím stanovení IMMULITE 2000 Nekonjugovaný estriol (L2KUE3) na 199 vzorcích v třetím trimestru (SST) ve stádiu týdne těhotenství (rozloženo rovnoměrně). V tabulce jsou uvedeny, jak pro hmotnostní tak pro molární jednotky, mediány a střední 95. percentily pro každý týden těhotenství, odhadnuté globální neparametrickou metodou. Podle očekávání, uvedené hodnoty vykazují jasný vzrůstající trend se zvyšujícím se stupněm těhotenství. Týden těhotenství n Medián Nekonjugovaný estriol, ng/ml Střední 95% rozmezí ,1 2,3 6, ,2 2,3 7, ,5 2,3 7, ,9 2,4 8, ,5 2,6 9, ,2 2,8 11, ,2 3,0 > ,4 3,3 > ,2 3,9 > >12 4,7 > >12 5,6 > >12 6,6 > >12 7,3 > >12 7,6 >12 Týden těhotenství n Medián Nekonjugovaný estriol, nmol/l Střední 95% rozmezí > > > >42 16 > >42 19 > >42 23 > >42 25 > >42 26 >42 Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, ) 11

12 Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor: ng/ml 3,467 nmol/l Rozsah měření: 0,07 12 ng/ml (0,24 42 nmol/l). Kalibrace stanovení byla provedena na základě měření nekonjugovaného estriolu ve vzorcích těhotenského séra (SST) metodou plynové chromatografiehmotnostní spektroskopie (GC-MS) (viz Srovnání metody 1). Analytická citlivost: Limit blanku (nejvyšší hodnota očekávaná pro vzorek bez analytu stanovená v souladu s CLSI EP17-A 26 ): 0,01 ng/ml (0,04 nmol/l). Limit detekce (nejnižší detekovatelná koncentrace; stanovená v souladu s CLSI EP17-A 26 ): 0,04 ng/ml (0,14 nmol/l). Funkční citlivost: (koncentrace s 20% variačním koeficientem (CV) stanovená v souladu s CLSI EP5-A2 27 ): 0,15 ng/ml (0,52 nmol/l). Přesnost: Vzorky byly stanoveny v duplikátu po 40 měřeních, celkem 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Linearita: Vzorky séra (SST) byly stanoveny při různém ředění. (Reprezentativní výsledky viz tabulka "Linearita".) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků nekonjugovaného estriolu (12,5, 25 a 50 ng/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Zpětná výtěžnost.) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči nekonjugovanému estriolu. (Viz tabulka "Specificita".) Bilirubin: Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 500 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Srovnání metody 1: Stanovení IMMULITE 2000 Nekonjugovaný estriol bylo porovnáno se stanovením GC-MS na 58 vzorcích těhotenského séra (SST). (Rozsah koncentrace: přibližně 0,4 až 11 ng/ml; viz graf 1.) Pomocí vážené Demingovy regrese: (IML 2000) = 0,98 (GC-MS) + 0,02 ng/ml r = 0,980 Střední hodnoty: 3,3 ng/ml (IMMULITE 2000) 3,2 ng/ml (GC-MS) Srovnání metody 2: Stanovení IMMULITE 2000 Nekonjugovaný estriol bylo porovnáno se stanovením Access Nekonjugovaný estriol, komerčně dostupnou metodou firmy Beckman Coulter, na 150 vzorcích těhotenského séra (SST). (Rozsah koncentrace: přibližně 0,07 až 9,79 ng/ml; viz graf 2.) Pomocí vážené Demingovy regrese: (IML 2000) = 1,01 (Beckman) 0,01 ng/ml r = 0,954 Střední hodnoty: 2,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,6 ng/ml (Beckman) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, )

13 Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Ασύζευκτη Οιστριόλη Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της ασύζευκτης (ελεύθερης) οιστριόλης στον ορό, ως βοήθημα στην εκτίμηση της ωριμότητας και της καλής κατάστασης του εμβρύου σε κυήσεις υψηλού κινδύνου και σε περιπτώσεις αμφιβολίας για το χρόνο σύλληψης. Αριθμός καταλόγου: L2KUE32 (200 εξετάσεις), L2KUE36 (600 εξετάσεις), L2KUE33M (3000 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: UE3 Χρώμα: Ανοικτό μπλε Περίληψη και επεξήγηση Το μεγαλύτερο μέρος της οιστριόλης που κυκλοφορεί ή εκκρίνεται κατά το τρίτο τρίμηνο της κύησης παράγεται από κοινού από το έμβρυο και τον πλακούντα, συντίθεται από μια πρόδρομη ουσία των επινεφριδίων του εμβρύου και μετατρέπεται στο ήπαρ του εμβρύου και στον πλακούντα σε οιστριόλη. Κατά τη διαδρομή μέσα από τον πλακούντα, μεταβολίζεται ταχέως, κυρίως στο ήπαρ της μητέρας, σε συζευγμένες μορφές: τη θειική οιστριόλη και τα γλυκουρονίδια. Ως αποτέλεσμα των παραπάνω, η "ελεύθερη" οιστριόλη, δηλαδή η ασύζευκτη μορφή, συναντάται στην κυκλοφορία σε ποσοστό κάτω του εννέα τοις εκατό. Η θειική οιστριόλη, η οποία έχει σχετικά μεγάλο χρόνο ζωής, είναι λιγότερη από το μισό. Η οιστριόλη των ούρων αποτελείται αποκλειστικά από συζευγμένες μορφές, καθώς μόνον η ελεύθερη οιστριόλη εισέρχεται στην κυκλοφορία της μητέρας, ενώ οι συζευγμένες μορφές αποβάλλονται. Φυσιολογικά, η παραγωγή οιστριόλης αυξάνεται καθώς το έμβρυο αναπτύσσεται, και καταλήγει σε τριπλάσιες κυκλοφορούσες ποσότητες κατά το τρίτο τρίμηνο με αντίστοιχη αύξηση στα επίπεδα που συναντώνται στα ούρα. Συνήθως παρατηρείται μια αυξομείωση κατά την 36 η εβδομάδα. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, οι συγκεντρώσεις ελεύθερης και ολικής οιστριόλης ανέρχονται περίπου σε 15 και 250 ng/ml, ενώ η αποβολή από τα ούρα φθάνει σε περίπου 45 mg/ημέρα. Έπειτα από την 40 η εβδομάδα τα επίπεδα οιστριόλης μειώνονται σταδιακά, υποχωρώντας κατά περίπου 12 τοις εκατό ανά εβδομάδα. 9 Η απόκλιση μεταξύ των ασθενών είναι μεγάλη: το εύρος αναφοράς για ένα δεδομένο χρόνο κύησης μπορεί να περιλαμβάνει επίπεδα οιστριόλης από 50 έως 200 τοις εκατό της ενδιάμεσης τιμής για το συγκεκριμένο χρόνο. Συνεπώς, το μοτίβο των καθορισμών σειράς είναι συνήθως μεγαλύτερης σημασίας από τα αποτελέσματα των μεμονωμένων μετρήσεων. Τα επίμονα χαμηλά ή ταχέως πτωτικά επίπεδα οιστριόλης υποδηλώνουν καταπόνηση του εμβρύου. Ωστόσο, επειδή οι συγκεντρώσεις οιστριόλης καθορίζονται από ημερήσιες διακυμάνσεις και επεισοδιακές αυξομειώσεις, είναι κοινή πρακτική η αναφορά των σειριακών μετρήσεων σε μια τιμή βάσης, η οποία ορίζεται για την ασθενή είτε ως ο μέσος όρος είτε ως το υψηλότερο από τα τρία τελευταία αποτελέσματα. Μια μείωση 40 τοις εκατό ή περισσότερο ως προς τη γραμμή βάσης ενδέχεται να είναι σημαντική. Σε συνδυασμό με άλλες τεχνικές παρακολούθησης του εμβρύου, οι σειριακοί καθορισμοί έχουν χρησιμοποιηθεί στην αντιμετώπιση της εγκυμοσύνης με επιπλοκές λόγω διαβήτη, 7,9 υπέρτασης, παρατεταμένης κύησης και αβεβαιότητας για το χρόνο σύλληψης. Αυτές οι κλινικές εφαρμογές έχουν αναθεωρηθεί πρόσφατα. 7,9,10,14 Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Ασύζευκτη Οιστριόλη είναι μία στερεάς φάσης, ενζυμικά σημασμένη ανταγωνιστική χημειοφωταυγής ανοσοεξέταση. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αντίοιστριόλης. Η υγρή φάση αποτελείται από αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε οιστριόλη. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, ) 13

14 Το δείγμα του ασθενούς και το αντιδραστήριο επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Σε αυτό το διάστημα, η ασύζευκτη οιστριόλη στο δείγμα ανταγωνίζεται με τη συνδεδεμένη στο ένζυμο ασύζευκτη οιστριόλη στο αντιδραστήριο για ένα περιορισμένο αριθμό θέσεων πρόσδεσης του αντισώματος στο σφαιρίδιο. Το μη προσδεδεμένο δείγμα του ασθενούς και συνδεδεμένο ένζυμο απομακρύνονται στη συνέχεια με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας προστίθεται στο σωληνάριο αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το συνδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 1 30 λεπτά Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 35 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Τα υψηλά δείγματα ασθενών θα πρέπει να αραιώνονται μη αυτόματα με το κατάλληλο αραιωτικό. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Ασύζευκτη Οιστριόλη δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Απαιτούμενος όγκος: 40 µl ορού. Φύλαξη: 7 μέρες στους 2 8 C, ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. Τα δείγματα ασθενών υπό τακτική παρακολούθηση ως προς τα επίπεδα ασύζευκτης οιστριόλης θα πρέπει να μετρώνται πάντα με την ίδια μέθοδο και με τις ίδιες συνθήκες φύλαξης. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων ασύζευκτης οιστριόλης (L2UE312) Με γραμμογράφηση. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αντί-οιστριόλης. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KUE32: 1 συσκευασία. L2KUE36: 3 συσκευασίες. L2KUE33M: 15 συσκευασίες. 14 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, )

15 Δοχείο αντιδραστηρίου ασύζευκτης οιστριόλης (L2UE3A2) Με γραμμογράφηση. 11,5 ml αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε οιστριόλη σε ρυθμιστικό διάλυμα. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KUE32: 1 δοχείο. L2KUE36: 3 δοχεία. L2KUE33M: 15 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές ασύζευκτης οιστριόλης (LUE3L, LUE3H) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό), έκαστο 4,0 ml, ασύζευκτης οιστριόλης σε μήτρα επεξεργασμένου ανθρώπινου ορού, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KUE32: 1 σετ. L2KUE36: 2 σετ. L2KUE33M: 3 σετ. Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το κιτ) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του κιτ που παρέχονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Κιτ καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωληνάρια αντίδρασης (μιας χρήσεως) Τριών επιπέδων, πολυπαραμετρικοί οροί ελέγχου Lyphochek Maternal Serum Control διαθέσιμοι από τη Bio-Rad. Απαιτούνται επίσης: Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δείγματα ελέγχου ποιότητας, γυάλινα σωληνάρια. Διαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες. Ποιοτικός έλεγχος: Για την παρακολούθηση της επίδοσης του συστήματος και την καταγραφή των τάσεων, σαν ελάχιστη απαίτηση, πρέπει να αναλύονται υλικά ποιοτικού ελέγχου για την ασύζευκτη οιστριόλη τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και ψηλό) για κάθε ημέρα που εκετελούνται δείγματα. Τα δείγματα ποιοτικού ελέγχου πρέπει επίσης να αναλύονται όταν γίνεται ρύθμιση της εξέτασης. Χειριστήτε όλα τα δείγματα ποιοτικού ελέγχου ακριβώς όπως τα δείγματα ασθενών. Η Siemens Healthcare Diagnostics συνιστά τη χρήση εμπορικά διαθέσιμων υλικών ποιοτικού ελέγχου τουλάχιστον 2 επιπέδων (χαμηλό και ψηλό). Ένα ικανοποιητικό επίπεδο επίδοσης επιτυγχάνεται όταν οι τιμές που προκύπτουν βρίσκονται εντός του αποδεκτού εύρους των ορών ελέγχου για τον αναλυτή ή εντός ενός καθορισμένου εύρους που καθορίστηκε με βάση ένα κατάλληλο πλαίσιο εσωτερικού εργαστηριακού ποιοτικού ελέγχου. Αναμενόμενες τιμές Πραγαματοποιήθηκε μία μελέτη εύρους αναφοράς με χρήση της εξέτασης IMMULITE 2000 Ασύζευκτη Οιστριόλη (L2KUE3) σε ένα σύνολο 199 δειγμάτων ορού τρίτου τριμήνου (SST), με χρόνο κύησης ισοκατανεμημένο μεταξύ 27 και 40 εβδομάδων. Στον παρακάτω πίνακα αναφέρονται, με βάση τη μάζα και τις μοριακές μονάδες, οι ενδιάμεσες τιμές και το κεντρικό εύρος 95% για κάθε εβδομάδα της κύησης, υπολογιζόμενες με μία γενική μη παραμετρική μέθοδο. Τα στατιστικά στοιχεία δείχνουν, όπως αναμενόταν, μία σαφή τάση αύξηση των τιμών ανάλογα με την εβδομάδα κύησης. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, ) 15

16 Εβδομάδα κύησης n Ενδ. τιμή Ασύζευκτη οιστριόλη, ng/ml Κεντρικό εύρος 95% ,1 2,3 6, ,2 2,3 7, ,5 2,3 7, ,9 2,4 8, ,5 2,6 9, ,2 2,8 11, ,2 3,0 > ,4 3,3 > ,2 3,9 > >12 4,7 > >12 5,6 > >12 6,6 > >12 7,3 > >12 7,6 >12 Εβδομάδα κύησης n Ενδ. τιμή Ασύζευκτη οιστριόλη, nmol/l Κεντρικό εύρος 95% > > > >42 16 > >42 19 > >42 23 > >42 25 > >42 26 >42 Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να έχει τις δικές του τιμές αναφοράς. Περιορισμοί Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, μπορεί να εμφανιστούν πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Χαρακτηριστικά απόδοσης Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωληνάρια χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Παράγοντας μετατροπής: ng/ml 3,467 nmol/l Εύρος μέτρησης: 0,07 12 ng/ml (0,24 42 nmol/l). Η βαθμονόμηση της εξέτασης καθορίστηκε με βάση τη μέτρηση της ασύζευκτης οιστριόλης σε δείγματα ορών εγκύων (SST) με μέθοδο αέριας χρωματογραφίας-φασματοσκοπίας μάζας (GC-MS) (Βλ. Σύγκριση μεθόδου 1). Αναλυτική Ευαισθησία: Όριο του τυφλού (η υψηλότερη αναμενόμενη τιμή για δείγμα χωρίς αναλύτη που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17-A 26 ): 0,01 ng/ml (0,04 nmol/l). Όριο της ανίχνευσης (χαμηλότερη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17-A 26 ): 0,04 ng/ml (0,14 nmol/l). Λειτουργική Ευαισθησία: (συγκέντρωση με 20% συντελεστή διασποράς (CV) που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI 16 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, )

17 EP5-A2 27 ): 0,15 ng/ml (0,52 nmol/l). Ακρίβεια: Δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν για 40 κύκλους μέτρησης για ένα σύνολο 80 επαναλήψεων. (Βλ. πίνακα Precision.) Γραμμικότητα: Δείγματα ορού (SST) αναλύθηκαν σε διάφορες αραιώσεις. (Βλ. πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ανάκτηση: Τα δείγματα 1 έως 19 εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα ασύζευκτης οιστριόλης (12,5, 25 και 50 ng/ml) και αναλύθηκαν. (Βλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα παρουσιάζει υψηλή ειδικότητα στην ασύζευκτη οιστριόλη. (Βλ. πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της εξέτασης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 500 mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της εξέτασης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της εξέτασης. Σύγκριση Μεθόδου 1: Η εξέταση IMMULITE 2000 Ασύζευκτη Οιστριόλη συγκρίθηκε με τη GC-MS σε 58 δείγματα ορού εγκύων (SST). (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 0,4 έως 11 ng/ml. Βλ. γράφημα 1.) Με παλινδρόμηση Weighted Deming: (IML 2000) = 0,98 (GC-MS) + 0,02 ng/ml r = 0,980 Μέσοι όροι: 3,3 ng/ml (IMMULITE 2000) 3,2 ng/ml (GC-MS) Σύγκριση Μεθόδου 2: Η εξέταση IMMULITE 2000 Ασύζευκτη Οιστριόλη συγκρίθηκε με την εξέταση Access Unconjugated Estriol, εμπορικά διαθέσιμη από τη Beckman Coulter, σε 150 δείγματα ορού εγκύων (SST). (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 0,07 έως 9,79 ng/ml. Βλ. γράφημα 2.) Με παλινδρόμηση Weighted Deming: (IML 2000) = 1,01 (Beckman) 0,01 ng/ml r = 0,954 Μέσοι όροι: 2,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,6 ng/ml (Beckman) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Estriol wolny Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro przeznaczony dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczania nieskoniugowanego (wolnego) estriolu w surowicy.test znajduje zastosowanie w monitorowaniu dojrzałości płodu, a także prawidłowości jego rozwoju w przypadku ciąż wysokiego ryzyka i o nieokreślonym stopniu zaawansowania. Numery katalogowe: L2KUE32 (200 testów), L2KUE36 (600 testów), L2KUE33M (3000 testów) Kod testu: UE3 Kolor: Jasnoniebieski Wprowadzenie Większość estriolu krążącego i wydzielanego w trzecim trymestrze ciąży jest produktem płodu i łożyska. Jego prekursor jest syntetyzowany w gruczołach nadnerczowych płodu, a następnie przekształcany w estriol przez wątrobę płodu i łożysko. Po przejściu przez łożysko estriol jest natychmiast metabolizowany, przede wszystkim w wątrobie matki, do form związanych: siarczanów i glukuronidów estriolu. W wyniku tych przemian estriol wolny stanowi zaledwie 9% estriolu całkowitego w krążeniu; natomiast siarczany estriolu, posiadające długi okres przetrwania, stanowią około połowy jego stężenia. Do moczu dostaje się wyłącznie estriol związany, ponieważ do krążenia matki wchodzi wyłącznie estriol wolny, a wydalane są jedynie formy związane. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIEL2KUE3-1 {3}, ) 17