LYME IgG-Check-1. Brzi imunohromatografski test za detekciju anti-borelia IgG antitela

Transcript

1 LYME IgG-Check-1 Brzi imunohromatografski test za detekciju anti-borelia IgG antitela I. PRINCIP Lajmska bolest (1) ili borelioza prouzrokovana je spirohetom Borrelia burgdorferi koja se prenosi krpeljom. Zaraženi insekti, inficirani Borrelia burgdorferisenso lato, koji su uglavnom prisutni u Severnoj Americi (Ixodes scapularis ili I.pacificus) i u umerenim zapadnoevropskim oblastima (Ixodes ricinus). Vrsta evropskog krpelja je prenosnik Borrelia burgdorferi, B.afzelli i B.garinii (2). U 30 do 80% slučajeva, osip na koži, Erythema Migrans, prvi je klinički znak infekcije koji se javlja nakon 3 do 10 dana na mestu ujeda insekta. 1 mesec do 3 meseca kasnije, prvi neurološki znaci, glavobolja ili teški poremećaji kao što su mijelitis (3), pojavljuju se čak i u odsustvu Erythema Migrans. Kasnije, kod pacijenata se mogu razviti teške komplikacije kao što su naizmenični napadi artikularnog artritisa kao i miokarditis ili akrodermatitis nekoliko godina nakon primarne infekcije. LYME IgG-Check-1 je brzi kvalitativan skrining test za detekciju humanih antitela IgG klase na evropske vrste Borrelia u serumu, plazmi ili punoj krvi. Metoda koristi jedinstvenu kombinaciju obojenog konjugata anti-humanih imunoglobulina i visoko prečišćenih Borrelia antigena na čvrstoj fazi kako bi se sa visokim stepenom osetljivosti i specifičnosti detektovala anti Borrelia antitela. Dok uzorak protiče kroz apsorbentsku podlogu, obojeni konjugat anti-humanih imunoglobulina vezuje se za humana IgG antitela formirajući antiteloantigen kompleks. Ovaj kompleks se vezuje za specifične antogene u pozitivnoj zoni reakcije pri čemu se formira ružičasto obojena linija. U odsustvu anti Borrelia antitela, nema linije u pozitivnoj zoni reakcije. Reakciona mešavina nastavlja da teče kroz apsorbentsku jedinicu prolazeći kroz pozitivnu zonu reakcije i kontrolnu zonu. Nevezani konjugat vezuje se za reagense u kontrolnoj zoni stvarajući roze obojenu liniju, pokazujući time da reagensi ispravno funkcionišu. II. KOMPONENTE TEST PAKOVANJA LYME IgG-CHECK-1 Svako test pakovanje sadrži sve što je potrebno za izvođenje 20 testova: - LYME IgG-CHECK-1 test jedinica 20 - Plastične pipete za jednokratnu upotrebu 20 - Diluent u bočici sa kapaljkom koji sadrži puferovani NaCl, deterdžent i natrijum azid (NaN3<0.1%) 5 ml - Uputstvo za upotrebu 1 III. ČUVANJE I STABILNOST 1. Sve komponente LYME IgG-CHECK-1 test pakovanja treba čuvati na sobnoj temperaturi (+4 C do +30 C) u zatvorenoj kesici. 2. Ne zamrzavati test pakovanje. 3. Sve komponente test pakovanja stabilne su do isteka roka trajanja naznačenog na etiketi. IV. MERE OPREZA 1. Ovaj test služi samo za in-vitro dijagnostičku i profesionalnu upotrebu. 2. Pre upotrebe testa, pažljivo pročitajte priloženo uputstvo. 3. Ne koristiti nakon isteka roka trajanja naznačenog na deklaraciji. 4. Ne koristiti test ukoliko je zaštitno pakovanje oštećeno. 5. Rukujte svim biološkim uzorcima kao da sadrže infektivne agense. Kada je procedura ispitivanja završena, odložite kao biolo[ki otpad sve uzorke i ostale materijale koji su korišćeni sa ovim testom. 6. Nosite zaštitnu odeću kao što su laboratorijski mantili i rukavice za jednokratnu upotrebu dok testirate uzorke. 7. Nemojte jesti, piti ili pušiti u oblasti gde se rukuje reagensima. 8. Izbegavati bilo kakav kontakt sa rukama i očima ili disajnim putevima prilikom uzimanja uzoraka i ispitivanja. V. SAKUPLJANJE UZORAKA I PRIPREMA Serum, plazma (litijum ili amonijum heparin, EDTA) ili puna krv Uzorak treba uzeti pod standardnim laboratorijskim okolnostima (u aseptičnim uslovima kako bi se izbegla hemoliza). Ukoliko se test izvodi u roku od 48 sati nakon uzimanja uzorka, uzorak treba čuvati u frižideru na temperaturi od +2 C do +8 C. MD m2 c Strana 1/2 Prerađeno 2008/01

2 Ukoliko se testiranje odlaže za više od 48 sati, uzorak treba zamrznuti. zamrznuti uzorak treba u potpunosti otopiti, dobro izmešati i prilagoditi sobnoj temperaturi pre testiranja. Izbegavati ponovno zamrzavanje i otapanje uzorka. U slučaju zamućenja, visoke viskoznosti ili prisustva čestica u uzorku seruma, uzorak treba razblažiti istom količinom zapremine (V/V) pufera za razblaživanje (nije obezbeđen, ali je po zahtevu na raspolaganju) pre testiranja. VI. PROCEDURA TESTA 1) Prilagoditi uzorke i komponente LYME IgG- CHECK-1 testa sobnoj temperaturi pre testiranja. 2) Uklonite reakcionu jedinicu iz zaštitnog omotača tako što ćete ga pocepati po ivicama. 3) Obeležite jedinicu sa nazivom pacijenta ili kontrolnim brojem. 4) Napunite kapaljku za uzorak uzorkom (serum ili plazma) i držeći ga vertikalno, ispustite jednu kapljicu (25μL) u mesto za stavljanje uzorka ( ). Ukoliko se koristi puna krv, dispenzirati dve kapi (50 μl) u mesto za stavljanje uzorka ( ). 5) Dodati tačno 5 ili 6 punih kapi diluenta (200 μl) u mesto za stavljanje uzorka ( ). 6) Očitati rezultate nakon 10 do 15 minuta. NE INTERPRETIRATI REZULTATE NAKON 15 MINUTA. VII. OČITAVANJE REZULTATA TESTA A. Negativan: Pojavljuje se samo jedna obojena linija na kontrolnom delu. B. Pozitivan: Uz kontrolnu liniju, na test prozoru se takođe pojavljuje jasno uočljiva linija. Neubedljiv: Ukoliko se ne pojavi nijedna obojena linija, test je nerešiv. U ovom slučaju, preporučuje se da se test ponovi. VIII. PERFORMANSE a) Unakrsna reaktivnost: LYME IgG-CHECK-1 brzi test dao je negativne rezultate u 100% slučajeva sa pozitivnim kontrolnim serumom za sifilis kalibrisanim prema WHO međunarodnom standardu n b) Senzitivnost i specifičnost Dva panela od naizmenično 9 i 71 uzorka seruma prethodno analiziranih EIA metodama testirano je sa LYME IgG-CHECK-1 testom. Rezultati su saopšteni u tabeli 1. Referentne EIA metode + +/- - Ukupno LYME IgG- CHECK-1 Tabela / Ukupno Performanse su izračunate na osnovu podataka prikazanih u tabeli 1 na sledeći način: Senzitivnost: (44+3) x 100 = 81% (55+3) Specifičnost: 20 x 100 = 91% 22 Sveukupno slaganje: ( ) x 100 = 83% 80 IX. OGRANIČENJA 1. Kao i kod bilo koje dijagnostičke procedure, lekar bi trebalo da potvrdi podatke dobijene korišćenjem ovog testa drugim kliničkim metodama s obzirom da pacijenti koji pate od borelioze mogu predstavljati simptome koji su slični sifilisu. 2. Nivoi antitela se razlikuju u zavisnosti od ispitanih pacijenata. Prevalenca u celokupnoj populaciji je zatvorena od 3 do 5% dok kod izloženih subjekata (šumara, izletnika), antitela mogu biti detektovana u 25 do 30% slučajeva (5). 3. Rani stadijum infekcije može dovesti do lažno negativnih rezultata, zahvaljujući niskoj koncentraciji anti-borrelia antitela IgG klase u uzorcima seruma, plazme ili pune krvi. 4. Pozitivni rezultat ne isključuje prisustvo drugih patogena: unakrsne reakcije sa sifilisom ili ostalim neveneričnim infekcijama treponeme. Unakrsne reakcije se mogu takođe javiti u slučajevima autoimunih oboljenja. X. BIBLIOGRAFIJA MD m2 c Strana 2/3 Prerađeno 2008/01

3 Ovlašćeni distributer: - Ograničenja temperature - Pogledati uputstvo za upotrebu - Ne koristiti ponovo Žarka Zrenjanina 50, Niš, Srbija Tel , , , Fax office@neomedica.rs, web: - In vitro dijagnostička upotreba MD m2 c Strana 3/3 Prerađeno 2008/01

4 LYME IgM-Check-1 Brzi imunohromatografski test za detekciju anti-borelia IgM antitela iz uzoraka pune krvi, plazme ili seruma I. PRINCIP Lajmska bolest (1) ili borelioza prouzrokovana je spirohetom Borrelia burgdorferi koja se prenosi krpeljom. Zaraženi insekti, inficirani Borrelia burgdorferi senso layo, koji su uglavnom prisutni u Severnoj Americi (Ixodes scapularis ili I.pacificus) i u umerenim zapadnoevropskim oblastima (Ixodes ricinus). Vrsta evropskog krpelja je prenosnik Borrelia burgdorferi, B.afzelli i B.garinii (2). U 30 do 80% slučajeva, osip na koži, Erythema Migrans, prvi je klinički znak infekcije koji se javlja nakon 3 do 10 dana na mestu ujeda insekta. 1 mesec do 3 meseca kasnije, prvi neurološki znaci, glavobolja ili teški poremećaji kao što su mijelitis (3), pojavljuju se čak i u odsustvu Erythema Migrans. Kasnije, kod pacijenata se mogu razviti teške komplikacije kao što su naizmenični napadi artikularnog artritisa kao i miokarditis ili akrodermatitis nekoliko godina nakon primarne infekcije. LYME IgG-Check-1 je brzi kvalitativan skrining test za detekciju humanih antitela IgM klase na evropske vrste Borrelia u serumu, plazmi ili punoj krvi. Metoda koristi jedinstvenu kombinaciju obojenog konjugata anti-humanih imunoglobulina i visoko prečišćenih Borrelia antigena na čvrstoj fazi kako bi se sa visokim stepenom osetljivosti i specifičnosti detektovala anti Borrelia antitela. Dok uzorak protiče kroz apsorbentsku podlogu, obojeni konjugat anti-humanih imunoglobulina vezuje se za humana IgM antitela formirajući antitelo-antigen kompleks. Ovaj kompleks se vezuje za specifične antogene u pozitivnoj zoni reakcije pri čemu se formira ružičasto obojena linija. U odsustvu anti Borrelia antitela, nema linije u pozitivnoj zoni reakcije. Reakciona mešavina nastavlja da teče kroz apsorbentsku jedinicu prolazeći kroz pozitivnu zonu reakcije i kontrolnu zonu. Nevezani konjugat vezuje se za reagense u kontrolnoj zoni stvarajući roze obojenu liniju, pokazujući time da reagensi ispravno funkcionišu. II. KOMPONENTE TEST PAKOVANJA LYME IgM-CHECK-1 Svako test pakovanje sadrži sve što je potrebno za izvođenje 20 testova: - LYME IgM-CHECK-1 test jedinica 20 - Plastične pipete za jednokratnu upotrebu 20 - Diluent u bočici sa kapaljkom koji sadrži puferovani NaCl, deterdžent i natrijum azid (NaN3<0.1%) 5 ml - Uputstvo za upotrebu 1 III. ČUVANJE I STABILNOST 1. Sve komponente LYME IgM-CHECK-1 test pakovanja treba čuvati na sobnoj temperaturi (+4 C do +30 C) u zatvorenoj kesici. 2. Ne zamrzavati test pakovanje. 3. Sve komponente test pakovanja stabilne su do isteka roka trajanja naznačenog na etiketi. IV. MERE OPREZA 1. Ovaj test služi samo za in-vitro dijagnostičku i profesionalnu upotrebu. 2. Pre upotrebe testa, pažljivo pročitajte priloženo uputstvo. 3. Ne koristiti nakon isteka roka trajanja naznačenog na deklaraciji. 4. Ne koristiti test ukoliko je zaštitno pakovanje oštećeno. 5. Rukujte svim biološkim uzorcima kao da sadrže infektivne agense. Kada je procedura ispitivanja završena, odložite kao biološki otpad sve uzorke i ostale materijale koji su korišćeni sa ovim testom. 6. Nosite zaštitnu odeću kao što su laboratorijski mantili i rukavice za jednokratnu upotrebu dok testirate uzorke. 7. Nemojte jesti, piti ili pušiti u oblasti gde se rukuje reagensima. 8. Izbegavati bilo kakav kontakt sa rukama i očima ili disajnim putevima prilikom uzimanja uzoraka i ispitivanja. V. SAKUPLJANJE UZORAKA I PRIPREMA Serum, plazma (litijum ili amonijum heparin, EDTA) ili puna krv 1. Uzorak treba uzeti pod standardnim laboratorijskim okolnostima (u aseptičnim uslovima kako bi se izbegla hemoliza). 2. Kada se testiranj izvodi na uzorcima pune krvi, treba koristiti sveže uzorke (< 4 sata). 3. Ukoliko se test izvodi u roku od 48 sati nakon uzimanja uzorka, uzorak treba čuvati u frižideru na temperaturi od +2 C do +8 C. MD m1 c Strana 1/2 Prerađeno 2008/03

5 Ukoliko se testiranje odlaže za više od 48 sati, uzorak treba zamrznuti. Zamrznuti uzorak treba u potpunosti otopiti, dobro izmešati i prilagoditi sobnoj temperaturi pre testiranja. Izbegavati ponovno zamrzavanje i otapanje uzorka. 4. U slučaju zamućenja, visoke viskoznosti ili prisustva čestica u uzorku seruma, uzorak treba razblažiti istom količinom zapremine (V/V) pufera za razblaživanje (nije obezbeđen, ali je po zahtevu na raspolaganju) pre testiranja. VI. PROCEDURA TESTA 1) Prilagoditi uzorke i komponente LYME IgM- CHECK-1 testa sobnoj temperaturi pre testiranja. 2) Uklonite reakcionu jedinicu iz zaštitnog omotača tako što ćete ga pocepati po ivicama. 3) Obeležite jedinicu sa imenom pacijenta ili kontrolnim brojem. 4) Napunite kapaljku za uzorak uzorkom (serum ili plazma) i držeći ga vertikalno, ispustite jednu kapljicu (25μL) u mesto za stavljanje uzorka ( ). Ukoliko se koristi puna krv, dispenzirati dve kapi (50 μl) u mesto za stavljanje uzorka ( ). 5) Dodati tačno 5 ili 6 punih kapi diluenta (200 μl) u mesto za stavljanje uzorka ( ). 6) Očitati rezultate nakon 10 do 15 minuta. NE INTERPRETIRATI REZULTATE NAKON 15 MINUTA. VII. OČITAVANJE REZULTATA TESTA A. Negativan: Pojavljuje se samo jedna obojena linija na kontrolnom delu. B. Pozitivan: Uz kontrolnu liniju, na test prozoru se takođe pojavljuje jasno uočljiva linija. C. Neubedljiv: Ukoliko se ne pojavi nijedna obojena linija, test je nerešiv. U ovom slučaju, preporučuje se da se test ponovi. VIII. PERFORMANSE a) Unakrsna reaktivnost: LYME IgM-CHECK-1 brzi test dao je negativne rezultate u 100% slučajeva sa pozitivnim kontrolnim serumom za sifilis kalibrisanim prema WHO međunarodnom standardu n b) Senzitivnost i specifičnost Dva panela od naizmenično 9 i 30 uzorka seruma prethodno analiziranih EIA metodama testirano je sa LYME IgM-CHECK-1 testom. Rezultati su saopšteni u tabeli 1. LYME IgM- CHECK-1 Referentne EIA metode + +/- - Ukupno / Ukupno Tabela 1. Performanse su izračunate na osnovu podataka prikazanih u tabeli 1 na sledeći način: Senzitivnost: (18+3) x 100 = 91.3% (20+3) Specifičnost: 13 x 100 = 81.3% 16 Sveukupno slaganje: (21+13) x 100 = 87.2% (23+16) IX. OGRANIČENJA 1. Kao i kod bilo koje dijagnostičke procedure, lekar bi trebalo da potvrdi podatke dobijene korišćenjem ovog testa drugim kliničkim metodama s obzirom da pacijenti koji pate od borelioze mogu predstavljati simptome koji su slični sifilisu (4). 2. Nivoi antitela se razlikuju u zavisnosti od ispitanih pacijenata. Prevalenca u celokupnoj populaciji je zatvorena od 3 do 5% dok kod izloženih subjekata (šumara, izletnika), antitela mogu biti detektovana u 25 do 30% slučajeva (5). 3. Rani stadijum infekcije može dovesti do lažno negativnih rezultata, zahvaljujući niskoj koncentraciji anti-borrelia antitela u uzorcima seruma, plazme ili pune krvi. 4. Pozitivni rezultat ne isključuje prisustvo drugih patogena: unakrsne reakcije sa sifilisom ili ostalim neveneričnim infekcijama treponeme. Unakrsne reakcije se mogu takođe javiti u slučajevima autoimunih oboljenja ili infekcija zahvaljujući Herpesviridae (5) za IgM klasu antitela. X. BIBLIOGRAFIJA MD m1 c Strana 2/3 Prerađeno 2008/03

6 Ovlašćeni distributer: - Ograničenja temperature - Pogledati uputstvo za upotrebu - Ne koristiti ponovo Žarka Zrenjanina 50, Niš, Srbija Tel , , , Fax office@neomedica.rs, web: - In vitro dijagnostička upotreba MD m2 c Strana 3/3 Prerađeno 2008/03