Progesterone. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Progesterone For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Progesterone English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of progesterone in serum, as an aid in the diagnosis and treatment of disorders of the ovaries or placenta. Catalog Numbers: L2KPW2 (200 tests), L2KPW6 (600 tests) Test Code: PRG Color: Light Green Summary and Explanation Progesterone is a steroid hormone which plays an important role in the preparation for and maintenance of pregnancy. It is synthesized from cholesterol via pregnenolone then rapidly metabolized to pregnanediol, for the most part, in the liver. 1,8,12 The ovary and placenta are the major production sites; but a small amount is also synthesized by the adrenal cortex in both men and women. Circulating progesterone levels, which are characteristically low during the follicular phase, increase sharply during the luteal phase of menstrual cycles, reaching a maximum some 5 to 10 days after the midcycle LH peak. 11 Unless pregnancy occurs, a steep decline to follicular levels sets in about 4 days before the next menstrual period. This pattern constitutes the rationale behind the well-established use of serum progesterone measurements as a simple and reliable method for ovulation detection. 2,3,15 There is growing literature on luteal phase defects. 4,7,10,16,17 Daily progesterone levels are considered the most accurate means for documenting a defective luteal phase. 4,7 However, some investigators have found that three samples or even a single sample 13,17 (if well timed) can provide valuable information on the adequacy of the luteal phase. Measurements of serum progesterone have also been used to check the effectiveness of ovulation induction, 15 to monitor progesterone replacement therapy 15 and to detect and evaluate patients at risk for abortion during the early weeks of pregnancy. 5,6,14 On the other hand, although progesterone levels increase throughout pregnancy, they are not considered a suitable means for monitoring fetal well-being during the third trimester. 8 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Progesterone is a solid-phase, competitive chemiluminescent enzyme immunoassay. Incubation Cycles: 1 30 minutes Specimen Collection Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufactures may yield differing values, depending on tube materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Progesterone has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. EDTA: Because EDTA would have a significant effect on results, it should not be used as an anticoagulant. Gel Barrier Tubes: Time-dependent decreases in progesterone levels have been reported when serum samples are collected and stored in gel barrier tubes. 19,20,21 2 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

3 Lipemia: Gross lipemia has been shown to cause a decrease in the apparent progesterone concentration. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Volume Required: 25 µl serum Storage: 7 days at 2 8 C, or 3 months at 20 C. 18 Dilution of High Samples: All samples expected to have levels above the assay's calibration range should be diluted on-board. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Progesterone Bead Pack (L2PW12) With barcode. 200 beads, coated with polyclonal rabbit anti-progesterone. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KPW2: 1 pack L2KPW6: 3 packs Progesterone Reagent Wedge (L2PWA2) With barcode. 21 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to progesterone, in buffer, dispensed equally into chambers A and B. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KPW2: 1 wedge L2KPW6: 3 wedges Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Progesterone Adjustors (LPWL, LPWH) Two vials (Low and High), 3 ml each, of progesterone in processed human serum, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KPW2: 1 set L2KPW6: 2 sets Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Multi-Diluent 1 (L2M1Z) For the on-board dilution of high samples. One vial of concentrated (ready-to-use) processed, normal human serum, containing undetectable to low levels of progesterone, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M1Z: 25 ml Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2M1Z: 3 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 3

4 Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks Quality Control Samples: Follow government regulations or accreditation requirements for quality control frequency. Use controls or serum pools with at least two levels (low and high) of progesterone. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme. Expected Values A multi-national study involving women in apparent good health (age: years), who volunteered to have blood samples drawn, on a daily basis, throughout one complete ovulatory cycle, 23 yielded the following results. Progesterone, ng/ml Ovulatory Cycles n* Median Central 95% Follicular Phase 27 (382) 0.47 ND 1.13 Midfollicular 27 (186) 0.43 ND 0.98 Days 5 to 11 Midcycle 27 (27) Luteal Phase 27 (323) Midluteal, Days 7 to 8 of Luteal Phase 27 (54) *Number of subjects (total number of results) Progesterone, nmol/l Ovulatory Cycles n* Median Central 95% Follicular Phase 27 (382) 1.5 ND 3.6 Midfollicular 27 (186) 1.4 ND 3.1 Days 5 to 11 Midcycle 27 (27) Luteal Phase 27 (323) Midluteal, Days 7 to 8 of Luteal Phase 27 (54) *Number of subjects (total number of results) See Menstrual Cycle Graph (see Tables and Graphs). Another study yielded the following results. Mass Units (ng/ml) Median Absolute Range n Males: Females: Follicular Phase Luteal Phase Post-menopausal 0.36 ND Oral Contraceptives Pregnant Females: First Trimester Second Trimester Third Trimester ND: not detectable Absolute S.I. Units (nmol/l) Median Range n Males: Females: Follicular Phase Luteal Phase Post-menopausal 1.1 ND Oral Contraceptives Pregnant Females: First Trimester Second Trimester Third Trimester ND: not detectable In pregnancy, the general tendency is for values to increase. There is considerable interpersonal variation in progesterone values, particularly in groups associated 4 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

5 with elevated levels. (Note that measurement of progesterone levels is generally considered unsuitable for monitoring fetal well-being in the later weeks of pregnancy. 8 ) A cross-sectional study of pediatric fertility values at a wellness clinic in the southwestern United States yielded the following results. Progesterone, ng/ml Group Age (yr) n Median Central 95% Females Cord ND 1.4 Males Cord ND ND 1.3 Combined Cord ND ND 1.3 ND: not detectable Progesterone, nmol/l Group Age (yr) n Median Central 95% Females Cord ND 4.5 Males Cord ND ND 4.1 Combined Cord ND ND 4.1 ND: not detectable Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitation Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed as ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: ng/ml 3.18 nmol/l Calibration Range: 0.2 to 40 ng/ml (0.6 to 127 nmol/l) The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: 0.1 ng/ml (0.3 nmol/l) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions (See Linearity table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1-to-19 with three progesterone solutions (25, 100 and 200 ng/ml) were assayed. (See Recovery table for representative data.) Specificity: The assay is highly specific for progesterone (See Specificity table.) IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 5

6 Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 512 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides interferes with the assay, causing a depression of values. (See Lipemia table.) Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 19 volunteers into plain glass and plastic serum tubes. (Serum Plastic) = 1.03 (Serum Glass) 0.06 ng/ml r = Means: 11.2 ng/ml (Serum Glass) 11.5 ng/ml (Serum Plastic) In another study, blood was collected from 20 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer glass tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of progesterone, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 Progesterone procedure. (Heparin) = 0.84 (Serum) ng/ml r = (EDTA) = 2.21 (Serum) ng/ml r = (SST) = 1.04 (Plain Tubes) ng/ml r = Means: 9.6 ng/ml (Serum) 8.5 ng/ml (Heparin) 21.2 ng/ml (EDTA) 10.2 ng/ml (SST) Method Comparison 1: The assay was compared to Coat-A-Count Progesterone on 162 patient samples. (Concentration range: approximately 0.2 to 40 ng/ml. See "Method Comparison 1" graph.) By linear regression: (IML 2000) = 0.71 (CAC) ng/ml r = Means: 8.2 ng/ml (IMMULITE 2000) 11.1 ng/ml (Coat-A-Count) Method Comparison 2: The IMMULITE 2000 Progesterone (L2KPW) was also compared to IMMULITE/IMMULITE 1000 Progesterone kit (LKPG) on 182 patient samples. (Concentration range: approximately 0.2 to 20 ng/ml. See "Method Comparison 2" graph.) By linear regression: (IML 2000 L2KPW) = 0.79 (IML LKPG) ng/ml r = Means: 5.9 ng/ml (IMMULITE 2000 L2KPW) 5.5 ng/ml (IMMULITE LKPG) References 1) Aufrere MB, Benson H. Progesterone: an overview and recent advances. J Pharm Sci 1976; 65: ) Bauman J. Basal body temperature: unreliable method of ovulation detection. Fertil Steril 1981; 36: ) Brown JB. Timing of ovulation. Med J Austral 1977; ii: ) Gautray JP, et al. Clinical investigation of the menstrual cycle: clinical, endometrial and endocrine aspects of luteal defect. Fertil Steril 1981; 35: ) Hensleigh PA, Fainstat T. Corpus luteum dysfunction: serum progesterone levels in diagnosis and assessment of therapy for recurrent and threatened abortion. Fertil Steril 1979; 32: ) Hernandez Horta JL, et al. Direct evidence of luteal insufficiency in women with habitual abortion. Obstet Gynecol 1977; 49: ) Jones G. Luteal phase defects. In: Behrman SJ, Kistner RW, editors. Progress in infertility. Boston: Little & Brown, 2nd Edition, 1975: ) Klopper A, Fuchs F. Progestagens. In: Fuchs F, Klopper A, editors. Endocrinology of pregnancy. Hagerstown: Harper & Row, 1977: ) Lehmann F, Bettendorf G. The endocrine shift from a normal cycle to anovulation. In: Insler V, Bettendorf G, editors. Advances in diagnosis and treatment of infertility. Amsterdam: Elsevier/North Holland, 1981: ) March CM. Luteal phase defects. In: Mishell DR, Davajan V, editors. Reproductive endocrinology, infertility and contraception. Philadelphia: F.A. Davis, 1979: ) March CM, Goebelsmann U, Nakamura RM and Mishell DR. Roles of estradiol and progesterone in eliciting the midcycle luteinizing hormone and follicle-stimulating hormone surges. J Clin Endocrinol Metab 1979; 49: ) Progesterone (Rochester: Bioeducational Publications, 1981). A BIO-ED slide/seminar educational program. 13) Radwanska E, et al. Plasma progesterone and oestradiol estimations in the diagnosis and treatment of luteal insufficiency in menstruating infertile women. Acta Eur Fertil 1976; 7: ) Radwanska E, et al. Plasma progesterone levels in normal and abnormal early human pregnancy. Fertil Steril 1978; 30: ) Radwanska E, et al. Single midluteal progesterone assay in the management of 6 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

7 ovulatory infertility. J Reprod Med 1981; 26: ) Sheehan KL, Casper RF, Yen SSC. Luteal phase defects induced by an agonist of luteinizing hormone-releasing factor: a model for fertility control. Science 1982; 215: ) Wentz A. Pathophysiology of luteal phase inadequacy. In: Tozzini RI, Reeves G and Pineda RL, editors. Endocrine physiopathology of the ovary. Amsterdam: Elsevier/North Holland, 1980, ) Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 2nd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, ) Hilborn S, Krahn J. Effect of time of exposure to gel-barrier tubes on results for progesterone and some other endocrine tests. Clin Chem 1987; 33: ) Reimers TJ, et al. Effect of storage times and temperature on T3, T4, LH, prolactin, insulin, cortisol, and progesterone concentrations in blood samples from cows. J Anim Sci 1983; 57: ) Smith RL. Effect of serum-separating gels on progesterone assays. Clin Chem 1985; 31: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, ) Vankrieken L. IMMULITE reproductive hormone assays: multicenter reference range data. Los Angeles: Diagnostic Products Corporation, Document No. ZB157-D. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci testu, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσοι όροι, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 2 in % 1 in % 6 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 7

8 Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B ^ C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Specificity Compound 1 Amount Added 2 (ng/ml) Apparent 3 ng/ml % Cross reactivity 4 Androstenedione % Corticosterone % Cortisol 50, % Danazol 10,000 ND ND 11-Deoxycorticosterone % 11-Deoxycortisol 250 ND ND Estradiol 10,000 ND ND 17 -Hydroxyprogesterone % Medroxyprogesterone 10, % Pregnenolone % Testosterone % ND: Not detectable 5 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 Zjevná koncentrace, 4 % Zkřížená reaktivita, 5 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 Εμφανής συγκέντρωση, 4 % Διασταυρ.Αντίδραση, 5 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 Ilość stwierdzona, 4 % reaktywności Krzyżowej, 5 Nieoznaczlne. 8 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

9 nmol/l Lipemia Triglycerides Added mg/dl 1 Observed 2 Expected 3 %O/E % % % % % % % % % % % % Česky. 1 Přidané, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Προστέθηκαν, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Dodane trójglicerydy, 2 Zmierzone, 3 Oczekiwane (O), 4 %Z/O. Method Comparison 1 IMMULITE 2000 Progesterone Coat-A-Count Progesterone, ng/ml Method Comparison 2 IMMULITE/IMMULITE 1000 Progesterone (LKPG) IMMULITE 2000 Progesterone (L2KPW), ng/ml (IML 2000 L2KPW) = 0.79 (IML LKPG) ng/ml r = English. Progesterone Česky. Progesteron. Ελληνικά. Προγεστερόνη. Polski. Progesteron Menstrual Cycle Plot ng/ml Progesterone IMMULITE Progesterone (LKPG) Cycle Day: Normalized to LH Peak English. Progesterone 1, Cycle Day: Normalized to LH Peak 2 Česky. 1 Progesteron, 2 Den cyklu: Vztaženo k maximální hodnotě LH. Ελληνικά. 1 Προγεστερόνη, 1 Προγεστερόνη, 2 Μέρα του Κύκλου: Ομαλοποιημένη στην κορυφή της καμπύλης του LH (Peak). Polski. 1 Progesteron, 2 Dzień cyklu: Odniesiony do piku LH. (IML 2000) = 0.71 (CAC) ng/ml r = IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 9

10 Česky IMMULITE 2000 Progesteron Použití : Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace progesteronu v séru, jakožto pomůcky v diagnostice a léčbě poruch vaječníků nebo placenty. Katalogové Číslo : L2KPW2 (200 stanovení), L2KPW6 (600 stanovení) Kód metody : PRG Barva : Světle Zelená Shrnutí a vysvětlení Progesteron je steroidní hormon, který hraje významnou roli při přípravě a udržení těhotenství. Je syntetizován z cholesterolu přes pregnenolon, pak je z větší části v játrech rychle metabolizován na pregnandiol. 1,8,12 Tvoří se zejména ve vaječnících a placentě, malé množství se ale syntetizuje kůrou nadledvinek u mužů i žen. Periodicky se měnící hladina progesteronu je typicky nízká během folikulární fáze, prudce se zvyšuje během luteální fáze menstruačního cyklu a maxima dosahuje 5 10 dnů po maximu koncentrace LH. 11 Pokud nedojde k otěhotnění, hladina progesteronu prudce klesá na úroveň folikulární fáze asi 4 dny před začátkem nového menstruačního cyklu. Tento cyklus tvoří princip zavedeného měření progesteronu v séru, které představuje jednoduchou a spolehlivou metodu ke zjištění ovulace. 2,3,15 Množství literatury o poruchách luteální fáze roste. 4,7,10,16,17 Denní hladiny progesteronu jsou považovány za nejpřesnější důkaz poruch luteální fáze. 4,7 Někteří badatelé ale zjistili, že tři, nebo dokonce i jeden vzorek 13,17 (pokud je správně načasován) může poskytnout cenné informace o přiměřenosti luteální fáze. Stanovení progesteronu v séru se rovněž používá ke kontrole účinnosti indukce ovulace, 15 monitorování terapie progesteronem 15 a ke zjištění rizika potratu v časných fázích těhotenství. 5,6,14 Na druhou stranu, i když se koncentrace progesteronu během těhotenství zvyšuje, nepovažuje se za vyhovující způsob zjištění ohrožení plodu ve třetím trimestru. 8 Princip stanovení Stanovení progesteronu na analyzátorech IMMULITE 2000 představuje konkurenční enzymovou chemiluminiscenční imunochemickou reakci v pevné fázi. Inkubační cykly : 1 30 minut Odebírání vzorků Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře ; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugací vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážení vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení progesteronu na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. EDTA : Protože EDTA by podstatně ovlivnila výsledky stanovení, nepoužívejte ji jako antikoagulant. Zkumavky s gelovým separátorem : Při odběru a skladování séra ve zkumavkách s gelovým separátorem se udává pokles koncentrace progesteronu v čase. 19,20,21 Lipémie : Rozsáhlá lipémie způsobila pokles zdánlivé koncentrace progesteronu. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Potřebný objem vzorku : 25 µl séra Skladování : 7 dnů při 2 8 C, nebo 3 měsíce při 20 C IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

11 Ředění koncentrovaných vzorků : Všechny vzorky, jejichž koncentrace by mohla být mimo kalibrační rozmezí, je třeba naředit. Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie : Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfylis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 0,1 g/dl. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminescenční substrát : Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda : Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky na vnitřní krabici. Progesteron zásobník s kuličkami (L2PW12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených polyklonálním králičím anti-progesteronem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KPW2 : 1 balení L2KPW6 : 3 balení Progesteron reagencie (L2PWA2) Opatřeno čárovým kódem. 21 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s progesteronem v pufru, rovnoměrně rozdělené do komor A a B. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KPW2 : 1 nádobka L2KPW6 : 3 nádobky Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii ; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Progesteron kalibrátory (LPWL, LPWH) Dvě ampulky (s nízkou a vysoko koncentrací) progesteronu ve zpracovaném lidském séru, každá 3 ml, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělený na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KPW2 : 1 sada L2KPW6 : 2 sady Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Multidiluent 1 (L2M1Z) Určeno k automatickému ředění koncentrovaných vzorků pacientů analyzátorem. Jedna ampulka koncentrovaného (připraveného k použití) zpracovaného standardního lidského séra s nezjistitelným až nízkým obsahem progesteronu, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělený na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2M1Z : 25 ml Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2M1Z : 3 štítky L2SUBM : Chemiluminescenční substrát L2PWSM : Promývací roztok L2KPM : Čistící roztok na jehly LRXT : Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT : 250 Testovací zkumavky na diluent vzorků ( mm) L2ZC : 250 Uzávěru na testovací zkumavky na diluent vzorků Dále potřebujete Destilovanou nebo deionizovanou vodu ; testovací zkumavky, kontroly IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 11

12 Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy : přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi : 2 týdny Vzorky ke kontrole kvality : Pokud jde o četnost kontroly kvality, je třeba řídit se platnými předpisy a akreditačními požadavky. Použijte kontrolní vzorky nebo směsný vzorek a alespoň dvěma koncentracemi progesteronu (nízkou a vysokou). Společnost Siemens Healthcare Diagnostics doporučuje používat obchodně dostupné materiály kontroly kvality o přinejmenším dvou koncentracích vysoké a nízké. Vyhovující funkčnosti se dosahuje, pokud zjištěné hodnoty analytu leží uvnitř přijatelného kontrolního rozmezí analyzátoru nebo uvnitř rozmezí stanoveného příslušným interním systémem kontroly kvality dané laboratoře. Očekávané hodnoty Mnohonárodnostní výzkum zahrnující zdravé ženy ve věku roků, které denně během jednoho celého ovulačního cyklu poskytly vzorky krve 23 přinesl následující výsledky. Progesteron, ng/ml Ovulační cyklus n* Medián Středních 95% Folikulární fáze 27 (382) 0,47 ND 1,13 Polovina luteální fáze dny 5 až (186) 0,43 ND 0,98 Polovina cyklu 27 (27) 1,06 0,48 1,72 Luteální fáze 27 (323) 8,9 0,95 21 Polovina folikulární fáze dny 7 až 8 luteální fáze 27 (54) 13,1 6,0 24 *Počet osob (celkový počet výsledků) Progesteron, nmol/l Ovulační cyklus n* Medián Středních 95% Folikulární fáze 27 (382) 1,5 ND 3,6 Polovina luteální fáze dny 5 až (186) 1,4 ND 3,1 Polovina cyklu 27 (27) 3,4 1,5 5,5 Luteální fáze 27 (323) 28 3,0 68 Polovina folikulární fáze dny 7 až 8 luteální fáze 27 (54) * Počet osob (celkový počet výsledků) Viz graf menstruačního cyklu (v části Tabulky a grafy). Další výzkum přinesl následující výsledky. Jednotky hmotnosti (ng/ml) Medián Úplné rozmezí n Muži : 0,52 0,27 0,90 63 Ženy : Folikulární fáze 0,67 0,33 1,2 29 Luteální fáze 4,8 0,72 17,8 29 Po menopauze 0,36 ND 1,0 34 Orální antikoncepce 0,70 0,34 0,92 19 Těhotné ženy : První trimestr 22,2 9,3 33,2 28 Druhý trimestr 35,4 29,5 50,0 10 Třetí trimestr , ND : nezjistitelné S.I. jednotky Úplné (nmol/l) Medián rozmezí n Muži : 1,7 0,86 2,9 63 Ženy : Folikulární fáze 2,1 1,0 3,8 29 Luteální fáze 15,3 2,3 56,6 29 Po menopauze 1,1 ND 3,2 34 Orální antikoncepce 2,2 1,1 2,9 19 Těhotné ženy : První trimestr 70,6 29, Druhý trimestr , Třetí trimestr ND : nezjistitelné 12 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

13 V těhotenství vidíme obecný trend zvyšování množství progesteronu. Existují značné výkyvy hodnot koncentrace progesteronu při srovnání jednotlivých osob, zvláště pak ve skupinách, které se vyznačují zvýšenou hladinou progesteronu. (Všimněte si, že měření koncentrace progesteronu se všeobecně nepovažuje za vyhovující způsob zjištění ohrožení plodu v posledních týdnech těhotenství. 8 ) Průřezová studie hodnot plodnosti na klinice dobrého zdraví na jihozápadě USA, v rámci které byl progesteron stanoven na analyzátoru IMMULITE přinesla následující výsledky : Skupina Ženy Muži Ženy i muži Progesteron, ng/ml Věk (roky) n Medián Pupečník ová krev Středních 95% ,1 0,4 24 1,2 0, , ,8 0,2 1,6 1, ,4 ND 1,4 Pupečník ová krev ,1 0,4 33 1,5 0,3 14 0, ,8 ND 2 1, ,4 ND 1,3 Pupečník ová krev ND : nezjistitelné ,1 0,4 57 1,5 0, , ,8 ND 2 1, ,4 ND 1,3 Skupina Ženy Muži Ženy i muži Věk (roky) Pupečník ová krev Progesteron, nmol/l n Medián Středních 95% ,1 0,4 24 3,8 0,8 54 0, ,5 0,6 5,1 1, ,3 ND 4,5 Pupečník ová krev ,1 0,4 33 4,8 1,0 45 0, ,5 ND 6,4 1, ,3 ND 4,1 Pupečník ová krev ND : nezjistitelné ,1 0,4 57 4,8 0,8 54 0, ,5 ND 6,4 1, ,3 ND 4,1 Tyto hodnoty považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno ; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, anamnézou pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 13

14 bez gelových separátorů nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor : ng/ml 3,18 nmol/l Kalibrační rozsah : 0,2 do 40 ng/ml (0,6 do 127 nmol/l) Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost : 0,1 ng/ml (0,3 nmol/l) Přesnost : Vzorky byly opakovaně stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, celkem 40 cyklů a 80 replikátů. (Viz tabulka "Přesnost".) Linearita : Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Linearita".) Zpětná výtěžnost : Bylo provedeno stanovení vzorků s přídavkem tří roztoků (25, 100 a 200 ng/ml) v poměru 1 : 19. (Reprezentativní údaje najdete v tabulce "Zpětná výtěžnost".) Specificita : Stanovení je silně specifické na progesteron (Viz tabulka "Specificita".) Bilirubin : Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza : Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 512 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie : Přítomnost triglyceridů ruší stanovení, způsobuje pokles hodnot. (Viz tabulka "Lipémie".) Alternativní typ vzorku : Účinek alternativních typů vzorku jsme zhodnotili pomocí odběrů krve od 19 dobrovolníků do obyčejných skleněných a plastových zkumavek na sérum. (Sérum Plast) = 1,03 (Sérum Sklo) 0,06 ng/ml r = 0,997 Střední hodnoty : 11,2 ng/ml (Sérum Sklo) 11,5 ng/ml (Sérum Plast) V dalším zkoumání jsme odebrali krev 20 dobrovolníkům do obyčejných, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson (SST) vacutainer skleněných zkumavek. Abychom získali hodnoty v rámci kalibračního rozsahu tohoto stanovení, přidali jsme do úměrných objemů odpovídajících vzorků progesteron různých koncentrací. Vzorky jsme následně stanovili metodou progesteron na analyzátorech IMMULITE (Heparin) = 0,84 (Sérum) + 0,4 ng/ml r = 0,974 (EDTA) = 2,21 (Sérum) + 4,8 ng/ml r = 0,893 (SST) = 1,04 (Prázdné zkumavky) + 0,02 ng/ml r = 0,987 Střední hodnoty : 9,6 ng/ml (Sérum) 8,5 ng/ml (Heparin) 21,2 ng/ml (EDTA) 10,2 ng/ml (SST) Srovnání metody 1 : Stanovení bylo porovnáno se stanovením Coat-A-Count Progesteron na 162 vzorcích pacientů. (Koncentrační rozsah : přibližně 0,2 do 40 ng/ml. Viz graf "Srovnání metody 1".) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 0,71 (CAC) + 0,33 ng/ml r = 0,979 Střední Hodnoty : 8,2 ng/ml (IMMULITE 2000) 11,1 ng/ml (Coat-A-Count) Srovnání metody 2 : Metoda stanovení Progesteron na analyzátorech IMMULITE 2000 (L2KPW) byla rovněž porovnána s testem Progesteron na analyzátoru IMMULITE/IMMULITE 1000 Progesteron kit (LKPG) na 182 vzorcích pacientů. (Koncentrační rozsah : přibližně 0,2 do 20 ng/ml. Viz graf Srovnání metody 2.) Podle lineární regrese : (IML 2000 L2KPW) = 0,79 (IML LKPG) + 0,82 ng/ml r = 0,969 Střední Hodnoty : 5,9 ng/ml (IMMULITE 2000 L2KPW) 5,5 ng/ml (IMMULITE LKPG) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485: IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

15 Ελληνικά Προγεστερόνη Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση της προγεστερόνης στον ορό, ως βοήθημα στην διάγνωση και θεραπεία ανωμαλιών στις ωοθήκες και στον πλακούντα. Αριθμοί καταλόγου: L2KPW2 (200 τεστ), L2KPW6 (600 τεστ) Κωδικός: PRG Χρώμα: Απαλό Πράσινο Περίληψη και εξήγηση Η προγεστερόνη είναι μία στεροειδής ορμόνη που παίζει σημαντικό ρόλο στην προετοιμασία και διατήρηση της εγκυμοσύνης. Συντίθεται από χοληστερίνη διαμέσου της pregnenolone μετά γρήγορα μεταβολίζεται σε πρεγνανδιόλη, κυρίως στο συκώτι. 1,8,12 Η προγεστερόνη παράγεται κυρίως στην ωοθήκη και στον πλακούντα,αλλά ένα μικρό μέρος της ορμόνης συντίθεται επίσης από τον φλοιό των επινεφριδίων και στους άνδρες και στις γυναίκες. Τα επίπεδα της κυκλοφορούσας προγεστερόνης, που είναι χαρακτηριστικά χαμηλά κατά την θυλακώδη φάση, αυξάνονται απότομα κατά την ωχρινική φάση του κύκλου της έμμηνου ρήσης, φτάνοντας στα ανώτατα όρια 5 ή 10 μέρες μετά την ανώτατη τιμή της LH στα μέσα του κύκλου. 11 Εκτός από την περίπτωση εγκυμοσύνης, μία κάθετη πτώση της ορμόνης στα επίπεδα της θυλακώδης φάσης παρατηρείται περίπου 4 μέρες πριν την επόμενη εμμηνο ρύση. Σε αυτή τη λειτουργία της ορμόνης βασίζεται η καθιερωμένη χρήση της μέτρησης προγεστερόνης του ορού ως μία απλή και έμπιστη μέθοδος για την ανίχνευση της ωορρηξίας. 2,3,15 Υπάρχει όλο και περισσότερη βιβλιογραφία για τις ανωμαλίες της ωχρινικής φάσης. 4,7,10,16,17 Μέτρηση των καθημερινών επιπέδων της προγεστερόνης θεωρείται ο πιο αξιόπιστος τρόπος για καταγραφή των ανωμαλιών της ωχρινικής φάσης. 4,7 Παρόλαυτα, κάποιοι ερευνητές έχουν βρει ότι τρία δείγματα η ακόμα και ένα δείγμα 13,17 (αν έχουν συλλεχθεί την κατάλληλη ώρα) μπορεί να δώσουν πολύτιμες πληροφορίες σχετικά με την επάρκεια της ωχρινικής φάσης. Μετρήσεις της προγεστερόνης ορού έχουν ακόμα χρησιμοποιθεί για τον έλεγχο της αποτελεσματικότητας της επαγωγής της ωορηξίας, 15 ώστε να παρακολουθηθεί η θεραπεία υποκατάστασης με προγεστερόνη 15 και την ανίχνευση και την εκτίμηση του κινδύνου για αποβολή στις πρώτες εβδομάδες της εγκυμοσύνης. 5,6,14 Όμως, αν και τα επίπεδα της προγεστερόνης αυξάνονται κατά την διάρκεια της εγκυμοσύνης, η αύξηση αυτή δεν πρέπει να θεωρείται ως μια κατάλληλη ένδειξη για την παρακολούθηση της υγείας του εμβρύου κατά το τρίτο τρίμηνο της εγκυμοσύνης. 8 Αρχή της διαδικασίας H IMMULITE 2000 Προγεστερόνη είναι μια ξηρής φάσης ανταγωνιστική, χημειοφωταυγής, ενζυμική, ανοσοανάλυση. Κύκλοι Επώασης: 1 30 λεπτά Συλλογή δείγματος Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Προγεστερόνη δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 15

16 περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. EDTA: Επειδή το EDTA μπορεί να έχει σημαντική επίδραση στα αποτελέσματα, δεν πρέπει να χρησιμοποιείται ως αντιπηκτικό. Τζελ σωληνάρια: Χρονικά εξαρτώμενες πτώσεις στα επίπεδα της προγεστερόνης έχουν καταγραφεί όταν δείγματα ορού έχουν συλλεχθεί και αποθηκευθεί σε σωληνάρια τζελ. 19,20,21 Λιπιδαιμία: Υψηλή λιπιδαιμία έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί μείωση στην φανερή συγκέντρωση της προγεστερόνης. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Απαιτούμενος όγκος: 25 µl ορός Αποθήκευση: 7 μέρες στους 2 8 C, ή 3 μήνες στους 20 C. 18 Αραίωση Υψηλών δειγμάτων: Όλα τα δείγματα των οποίων τα επίπεδα είναι πάνω από το εύρος καμπύλης της ανάλυσης, πρέπει να αραιώνονται. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για διαγνωστική in vitro χρήση Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για τα επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας B και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl, σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρησιμοποιείτε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα υλικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Προγεστερόνη σε Συσκευασία σφαιριδίων (Bead Pack) (L2PW12) Με γραμμογράφηση (barcode). 200 σφαιρίδια καλυμμένες με μονοκλωνικά αντί-προγεστερόνης αντισώματα κουνελιού. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KPW2: 1 πακέτο L2KPW6: 3 πακέτα Δοχείο Αντιδραστηρίων Προγεστερόνης (Reagent Wedge) (L2PWA2) Με γραμμογράφηση. 21 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε προγεστερόνη, σε ρυθμιστικό διάλυμα (με συντηρητικό), διανεμημένη ισότιμα στους θαλάμους Α και Β. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία L2KPW2: 1 δοχείο L2KPW6: 3 δοχεία Πριν την χρήση, αφαιρέστε την διαφανή ταινία προσέχοντας να μην καταστραφεί το πλαστικό κάλυμμα ή η γραμμογράφηση. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές Προγεστερόνης (Adjustors) (LPWL, LPWH) Δύο φιαλίδια (Low and High)- 3 ml το καθένα- προγεστερόνης σε επεξεργασμένο ανθρώπινο ορό, με συντηρητικό. Φυλάσσεται στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα. Για μακροβιότερη αποθήκευση, διαχωρίστε και καταψύξτε: σταθερά στους 20 C για 6 μήνες. L2KPW2: 1 σετ L2KPW6: 2 σετ Χωριστές γραμμογραφημένες ετικέτες προμηθεύονται με το κιτ, για χρήση με τους Ρυθμιστές. Πριν την χρήση, κολλήστε τις κατάλληλες ετικέτες στα δοκιμαστικά σωληνάρια έτσι ώστε η γραμμογράφηση να μπορεί να αναγνωστεί. 16 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

17 Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά Πολυαραιωτικό 1 (L2M1Z) Για την αραίωση των υψηλών δειγμάτων. Ένα φιαλίδιο συμπυκνωμένου (έτοιμου για χρήση), κανονικού ανθρωπίνου ορού, που περιλαμβάνει προγεστερόνη σε μη ανιχνεύσιμα επίπεδα με συντηρητικό. Διατηρείται για 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή για 6 μήνες (διαχωρισμένο) στους 20 C. L2M1Z: 25 ml Χωριστές γραμμογραφημένες ετικέτες προμηθεύονται με το κιτ, για χρήση με το Αραιωτικό. Πριν την χρήση τοποθετείστε την κατάλληλη ετικέτα σε ένα σωληνάριο mm, ούτως ώστε η ετικέτα να μπορεί να διαβαστεί. L2M1Z: 3 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες εξέτασης μιας χρήσης L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης του δείγματος Χρειάζονται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δείγματα ελέγχου ποιότητας, γυάλινα σωληνάρια Διαδικασία της εξέτασης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Προτεινόμενο χρονικό επαναρύθμισης της καμπύλης: 2 εβδομάδες Δείγματα ελέγχου ποιότητας: Εφαρμόστε τους κρατικούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης για τη συχνότητα του ποιοτικού ελέγχου. Χρησιμοποιείτε δείγματα ελέγχου ποιότητας ή ορού σε δύο τουλάχιστον επίπεδα(χαμηλό και υψηλό) συγκέντρωσης της προγεστερόνης. Η Siemens Healthcare Diagnostics συνιστά τη χρήση εμπορικά διαθέσιμων υλικών ελέγχου ποιότητας με τουλάχιστον 2 επίπεδα (χαμηλό και υψηλό). Ένα ικανοποιητικό επίπεδο απόδοσης επιτυγχάνεται όταν οι τιμές που προκύπτουν βρίσκονται εντός του αποδεκτού εύρους των υλικών ελέγχου για τον αναλυτή ή εντός ενός καθορισμένου εύρους που καθορίστηκε με βάση ένα κατάλληλο πλαίσιο εσωτερικού εργαστηριακού ποιοτικού ελέγχου. Αναμενόμενες τιμές Μία διεθνική μελέτη σε γυναίκες με καλή υγεία (ηλικία χρονών) που προσφέρθηκαν να δίνουν αίμα σε καθημερινή βάση, ακολουθώντας έναν πλήρη κύκλο ωορρηξίας, 23 έδωσε τα παρακάτω αποτελέσματα. Κύκλοι ωορρηξίας n* Θυλακοειδής φάση Μέσοθυλακοειδή Μέρες 5 με 11 Προγεστερόνη, ng/ml Ενδιάμε ση τιμή Κεντρική τιμή 95% 27 (382) 0,47 ND 1,13 27 (186) 0,43 ND 0,98 Μέσο του 27 (27) 1,06 0,48 1,72 κύκλου Ωχρινική φάση 27 (323) 8,9 0,95 21 Μέσο-ωχρινική, Μέρες 7 με 8 της ωχρινικής φάσης 27 (54) 13,1 6,0 24 * Αριθμός υποκειμένων (ολικός αριθμός των αποτελεσμάτων) Κύκλοι ωορρηξίας n* Θυλακοειδής φάση Μέσοθυλακοειδή Μέρες 5 με 11 Προγεστερόνη, nmol/l Ενδιάμε ση τιμή Κεντρική τιμή 95% 27 (382) 1,5 ND 3,6 27 (186) 1,4 ND 3,1 Μέσο του 27 (27) 3,4 1,5 5,5 κύκλου Ωχρινική φάση 27 (323) 28 3,0 68 Μέσο-ωχρινική, Μέρες 7 με 8 της ωχρινικής φάσης 27 (54) * Αριθμός υποκειμένων (ολικός αριθμός των αποτελεσμάτων) IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 17

18 Δες Menstrual Cycle Γράφημα (δες Πίνακες και Γραφήματα). Μία άλλη μελέτη έδειξε τα παρακάτω αποτελέσματα. Μονάδες μάζας (ng/ml) Ενδιάμε ση τιμή Απόλυτο εύρος n Άντρες: 0,52 0,27 0,90 63 Γυναίκες: Θυλακοειδής φάση 0,67 0,33 1,2 29 Ωχρινική φάση 4,8 0,72 17,8 29 Εμμηνόπαυση 0,36 ND 1,0 34 Αντισυλληπτικά 0,70 0,34 0,92 19 Έγκυες: Πρώτο τρίμηνο 22,2 9,3 33,2 28 Δεύτερο τρίμηνο 35,4 29,5 50,0 10 Τρίτο τρίμηνο , ND: Μη ανιχνέυσιμη S.I. Μονάδες (nmol/l) Ενδιάμεσ η τιμή Απόλυτο Εύρος n Άντρες: 1,7 0,86 2,9 63 Γυναίκες: Θυλακοειδής φάση 2,1 1,0 3,8 29 Ωχρινική φάση 15,3 2,3 56,6 29 Εμμηνόπαυση 1,1 ND 3,2 34 Αντισυλληπτικά 2,2 1,1 2,9 19 Έγκυες: Πρώτο τρίμηνο 70,6 29, Δεύτερο τρίμηνο , Τρίτο τρίμηνο ND: Μη ανιχνεύσιμη Κατά την διάρκεια της εγκυμοσύνης οι τιμές συνήθως τείνουν να αυξάνονται. Υπάρχει μία αξιοσημείωτη ποικιλία στις τιμές της προγεστερόνης, ιδιαίτερα σε ομάδες σχετιζόμενες με ανεβασμένα επίπεδα. (Να σημειωθεί ότι η μέτρηση των επιπέδων της προγεστερόνης θεωρείται ακατάλληλος δείκτης για την παρακολούθηση της υγείας του εμβρύου τις τελευταίες εβδομάδες της εγκυμοσύνης. 8 ) Μία διατμηματική μελέτη τιμών γονιμότητας σε παιδιά σε μία κλινική τύπου wellness των νοτιοδυτικών ΗΠΑ έδειξε τα παρακάτω αποτελέσματα. Προγεστερόνη, ng/ml Ηλικία Ενδιάμε Κεντρική Ομάδα (χρ.) n ση τιμή τιμή 95% Γυναίκες Λώρος ,1 0,4 24 1,2 0, , ,8 0,2 1,6 1, ,4 ND 1,4 Άνδρες Λώρος ,1 0,4 33 1,5 0,3 14 0, ,8 ND 2 1, ,4 ND 1,3 Μεικτά Λώρος ND: Μη ανιχνεύσιμη 0,1 0,4 57 1,5 0, , ,8 ND 2 1, ,4 ND 1,3 Προγεστερόνη, nmol/l Ηλικία Ενδιάμε Κεντρική τιμή Ομάδα (χρ.) n ση τιμή 95% Γυναίκες Λώρος ,1 0,4 24 3,8 0,8 54 0, ,5 0,6 5,1 1, ,3 ND 4,5 Άνδρες Λώρος ,1 0,4 33 4,8 1,0 45 0, ,5 ND 6,4 1, ,3 ND 4,1 Μεικτά Λώρος ND: Μη ανιχνεύσιμη 0,1 0,4 57 4,8 0,8 54 0, ,5 ND 6,4 1, ,3 ND 4,1 Τα εργαστήρια πρέπει να θεωρούν αυτά στα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Συνιστάται κάθε εργαστήριο να έχει τις δικές του τιμές αναφοράς για την διαγνωστική εκτίμηση των αποτελεσμάτων των ασθενών. Περιορισμοί Τα ετεροφυλικά αντισώματα που περιέχονται στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιλαμβάνονται στα συστατικά της εξέτασης έχοντας ως αποτέλεσμα την παρεμβολή τους στις ανοσομετρικές εξετάσεις in vitro. [Βλ. Boscato LM, Stuart 18 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

19 MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Δείγματα από ανθρώπους που εκτίθενται συχνά σε ζώα ή σε προϊόντα ορού ζώων μπορεί να έχουν τέτοια παρεμβολή και ως εκ τούτου λανθασμένο αποτέλεσμα. Τα αντιδραστήρια σχεδιάστηκαν έτσι ώστε να ελαχιστοποιείται αυτός ο κίνδυνος; παρόλα αυτά ενδεχόμενες αλληλεπιδράσεις μεταξύ κάποιων σπάνιων ορών και των συστατικών της εξέτασης μπορεί να συμβούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα αυτής της εξέτασης πρέπει πάντοτε να συνδυάζονται με την κλινική εξέταση, το ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Δείτε παρακάτω τους πίνακες και τα γραφικά που αναπαριστούν την απόδοση της εξέτασης. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός της περίπτωσης που αυτό αναφέρεται, όλα τα αποτελέσματα προέρχονται από δείγματα που συλλέχθηκαν σε σωληνάρια δίχως gel ή συμπληρώματα επιτάχυνσης της πήξης.) Παράγοντας μετατροπής: ng/ml 3,18 nmol/l Εύρος καμπύλης: 0,2 40 ng/ml (0,6 127 nmol/l) Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική ευαισθησία: 0,1 ng/ml (0,3 nmol/l) Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ). Γραμμικότητα: Ελέγχθηκαν δείγματα με διάφορες αραιώσεις. (Βλ. Πίνακα Linearity.) Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα προγεστερόνης (25, 100 και 200 ng/ml) και αναλύθηκαν. (Βλ. Πίνακα Recovery για τα αντιπροσωπευτικά δείγματα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα είναι εξαιρετικά ειδικό για προγεστερόνη. (Βλ. Πίνακα Specificity.) Χολερυθρίνη: Παρουσία χολερυθρίνης (conjugated και unconjugated) σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης. Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 512 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων επηρεάζει την εξέταση και προκαλεί μία καταστολή των τιμών. (Βλ. πίνακα Lipemia.) Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 19 εθελοντές σε απλούς γυάλινους και πλαστικούς σωλήνες ορού. (Ορού Πλαστικός ) = 1,03 (Ορού Γυάλινος) 0,06 ng/ml r = 0,997 Μέσοι Όροι: 11,2 ng/ml (Ορού Γυάλινος) 11,5 ng/ml (Ορού Πλαστικός) Σε μία άλλη μελέτη, συλλέχθηκε αίμα από 20 εθελοντές σε απλούς ηπαρινισμένους EDTA and Becton Dickinson SST δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες. Ίσες ποσότητες των αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν με διάφορες ποσότητες προγεστερόνης, ώστε να ληφθούν τιμές καθόλο το εύρος καμπύλης της εξέτασης, και μετά εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία της IMMULITE 2000 Προγεστερόνης. (Ηπαρίνη) = 0,84 (Ορός) + 0,4 ng/ml r = 0,974 (EDTA) = 2,21 (Ορός) + 4,8 ng/ml r = 0,893 (SST) = 1,04 (Απλοί σωλήνες) + 0,02 ng/ml r = 0,987 Μέσοι όροι: 9,6 ng/ml (Ορός) 8,5 ng/ml (Ηπαρίνη) 21,2 ng/ml (EDTA) 10,2 ng/ml (SST) Σύγκριση μεθόδου 1: Η εξέταση συγκρίθηκε με την Coat-A-Count Προγεστερόνη σε δείγματα 162 ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 0,2 με 40 ng/ml. Βλ. Method Comparison 1 απεικόνιση.) Με γραμμική παλινδρόμηση: (IML 2000) = 0,71 (CAC) + 0,33 ng/ml r = 0,979 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 19

20 Μέσοι όροι: 8,2 ng/ml (IMMULITE 2000) 11,1 ng/ml (Coat-A-Count) Σύγκριση μεθόδου 2: The IMMULITE 2000 Προγεστερόνη (L2KPW) συγκρίθηκε επίσης με το IMMULITE/IMMULITE 1000 Προγεστερόνη kit (LKPG) σε δείγματα 182 ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 0,2 με 20 ng/ml. Βλ. Method Comparison 2 απεικόνιση.) Με γραμμική παλινδρόμηση: (IML 2000 L2KPW) = 0,79 (IML LKPG) + 0,82 ng/ml r = 0,969 Μέσοι όροι: 5,9 ng/ml (IMMULITE 2000 L2KPW) 5,5 ng/ml (IMMULITE LKPG) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE Progesteron Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia poziomu progesteronu w surowicy, przydatny w diagnozowaniu i leczeniu zaburzeń pracy jajników i łożyska. Numery katalogowe: L2KPW2 (200 testów), L2KPW6 (600 testów) Kod testu: PRO Kolor: Jasnozielony Wprowadzenie Progesteron jest steroidowym hormonem odgrywającym ważną rolę w tworzeniu warunków umożliwiających ciążę i jej utrzymanie. Syntetyzowany jest z cholesterolu via pregnenolon, który metabolizowany jest szybko do pregnanediolu, głównie w wątrobie. 1,8,12 Głównymi miejscami produkującymi progesteron są jajniki i łożysko, ale niewielkie ilości tego hormonu syntetyzowane są także w korze nadnerczy zarówno u mężczyzn jak i u kobiet. Stężenie krążącego progesteronu, charakterystycznie niskie w czasie fazy folikularnej, gwałtownie narasta w fazie lutealnej cyklu osiągając maksymalny poziom w 5 do 10 dni po maksimum wydzielania LH. 11 Jeśli nie dojdzie do zapłodnienia stężenie progesteronu szybko opada do wartości wyjściowej dla fazy folikularnej na około 4 dni przed następnym cyklem. Dzięki temu schematowi pomiar stężenia progesteronu jest wykorzystywany w celu łatwego i niezawodnego stwierdzenie zajścia owulacji. 2,3,15 Istnieje obszerna literatura na temat zaburzeń fazy lutealnej. 4,7,10,16,17 Codzienne oznaczania progesteronu są traktowane jako najbardziej wiarygodne oznaczenia dokumentujące nieprawidłowości fazy lutealnej. 4,7 Istnieje opinia, że oznaczenie progesteronu w trzech próbkach lub nawet jednej, 13,17 lecz w odpowiednio dobranym czasie, wystarczy do uzyskania informacji o prawidłowości fazy lutealnej. Pomiary stężenia progesteronu są również wykorzystywane do oceny efektu indukcji owulacji, 15 do monitorowania terapii zastępczej progesteronem, 15 a także w wykrywaniu i ocenie ryzyka poronienia we wczesnych tygodniach ciąży. 5,6,14 Mimo, że poziom progesteronu wzrasta w czasie ciąży, nie należy wykorzystywać go do oceny stanu płodu w trzecim trymestrze ciąży. 8 Zasada Testu Immunoenzymatyczny test kompetycyjny. Czas inkubacji: 1 30 minut Preparatyka Próbek Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę 20 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

21 fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Na wynik oznaczenia może wpływać rodzaj probówek do których pobierana jest krew. Istotne znaczenia mają: producent i tworzywo oraz obecność lub brak bariery żelowej lub innego środka ułatwiającego oddzielenie surowicy, obecność aktywatorów skrzepu oraz brak/obecność antykoagulantów. Wpływ wszystkich wymienionych czynników na wynik testu IMMULITE 2000 Progesteron nie jest znany. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Rodzaje pobieranego materiału. EDTA: Ze względu na duży wpływ na wyniki EDTA nie powinien być stosowany jako antykoagulant. Probówki z barierą żelową: Zaobserwowano spadek stężenia progesteronu w czasie, w przypadku pobierania i przetrzymywania krwi w probówkach z barierą żelową. 19,20,21 Lipemia: Silna lipemia powoduje spadek wykazywanego stężenia progesteronu. Zalecane jest ultrawirowanie próbek lipemicznych. Wymagana objętość próbki: 25 µl surowicy Przechowywanie materiału: 7 dni w 2 8 C lub 3 miesiące w 20 C. 18 Rozcieńczanie próbek wysokich: Próbki z poziomem progesteronu wykraczającym poza zakres krzywej kalibracyjnej powinny być rozcieńczane automatycznie. Ostrzeżenia I Warunki Wstępne Test diagnostyczny in vitro. Odczynniki: Przechowywać w temp. 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Niektóre składniki zestawu mogą zawierać azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl, użyty jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy Zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Progesteron - Pojemnik z Kulkami (L2PW12) Oznakowany kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych króliczym przeciwciałem poliklonalnym anty-progesteron. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KPW2: 1 opakowanie L2KPW6: 3 opakowania Progesteron - Klin z Odczynnikiem (L2PWA2) Oznakowany kodem kreskowym. 21 ml alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z progesteronem w buforowanym roztworze, rozdzielonej równo do dwóch komór (A i B). Stabilny w temp. 2 8 C do daty ważności. L2KPW2: 1klin L2KPW6: 3 kliny Nie uszkadzając kodu kreskowego klina zerwij taśmę zabezpieczającą w okresie transportu przesuwne zamknięcie komór z odczynnikiem. Usuń tymczasowe foliowe uszczelnienie komór i wsuń zamknięcie komór na prowadnice w pokrywie klina. Progesteron - Kalibratory Zestawu (LPWL, LPWH) Dwie fiolki (kalibrator niski i wysoki) zawierające po 3 ml progesteronu w spreparowanej surowicy ludzkiej, z konserwantem. Stabilne przez 30 dni w temp. 2 8 C (po otwarciu) lub 6 miesięcy w temp. 20 C (rozpipetowane). L2KPW2: 1 zestaw L2KPW6: 2 zestawy IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 21

22 Przed przystąpieniem do kalibracji umocuj na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Materiały Dostarczane Oddzielnie Rozcieńczalnik próbek - Multidiluent 1 (L2M1Z) Do automatycznego rozcieńczania wysokich próbek. Jedna fiolka skoncentrowanej, gotowej do użycia, spreparowanej surowicy ludzkiej zawierającej progesteron w stężeniach nieoznaczalnych lub niskich, z konserwantem. Stabilny w temp. 2 8 C przez 30 dni (po otwarciu) lub 6 miesięcy w temp. 20 C (rozpipetowany). L2M1Z: 25 ml Nalepki z odpowiednimi kodami kreskowymi są dostarczane wraz z rozcieńczalnikiem. Nalepkę umieścić na probówce ( mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2M1Z: 3 nalepki L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący L2RXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek ( mm) L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik Ponadto niezbędne woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole Procedura Oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie Próbki kontrolne: Przestrzegać przepisów państwowych i wymogów kontrolnych w zakresie częstotliwości kontroli jakości. Stosować kontrole lub pule surowic co najmniej o niskim i wysokim poziomie progesteronu. Siemens Healthcare Diagnostics zaleca stosowanie dostępnych w handlu próbek kontroli jakości o co najmniej 2 poziomach (niskim i wysokim). Uznaje się, że test przebiega prawidłowo, gdy uzyskane wartości analitu plasują się w przyjętym dla Kontroli zakresie dla danego analizatora lub w zakresie opracowanym w ramach wewnątrzlaboratoryjnego systemu zapewnienia jakości. Oczekiwane wartości Wartości referencyjne opracowano przy użyciu testu IMMULITE Progesteron w oparciu o badania międzynarodowe. Badaniami objęto zdrowe kobiety w wieku lat, którym pobierano krew codziennie w czasie jednego pełnego cyklu owulacyjnego. 23 Progesteron, ng/ml Faza cyklu n* Mediana Środkowe 95% Folikularna 27 (382) 0,47 ND 1,13 Dni 5-11 fazy 27 (186) 0,43 ND 0,98 folikularnej Środek cyklu 27 (27) 1,06 0,48 1,72 Lutealna 27 (323) 8,9 0,95 21 Dni 7-8 fazy lutealnej 27 (54) 13,1 6,0 24 *liczba badanych (całkowita liczba wyników) ND wartość nieoznaczalna Progesteron, nmol/l Faza cyklu n* Mediana Środkowe 95% Folikularna 27 (382) 1,5 ND 3,6 Dni 5-11 fazy 27 (186) 1,4 ND 3,1 folikularnej Środek cyklu 27 (27) 3,4 1,5 5,5 Lutealna 27 (323) 28 3,0 68 Dni 7-8 fazy lutealnej 27 (54) *liczba badanych (całkowita liczba wyników) 22 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

23 Porównaj Wykres Cyklu Mentruacyjnego (patrz rozdział Tables and Graphs). Inne badania przy użyciu testu dały następujące wyniki. Jednostki masy Całkowity (ng/ml) Mediana zakres n Mężczyźni 0,52 0,27 0,90 63 Kobiety: Faza folikularna 0,67 0,33 1,2 29 Faza lutealna 4,8 0,72 17,8 29 Okres postmenopauzalny Doustne środki antykoncepcyjne Kobiety ciężarne: 0,36 ND 1,0 34 0,70 0,34 0,92 19 I Trymestr 22,2 9,3 33,2 28 II Trymestr 35,4 29,5 50,0 10 III Trymestr , ND: wartość nieoznaczalna Jednostki S.I. Całkowity (nmol/l) Mediana zakres n Mężczyźni 1,7 0,86 2,9 63 Kobiety: Faza folikularna 2,1 1,0 3,8 29 Faza lutealna 15,3 2,3 56,6 29 Okres postmenopauzalny Doustne środki antykoncepcyjne Kobiety ciężarne: 1,1 ND 3,2 34 2,2 1,1 2,9 19 I Trymestr 70,6 29, II Trymestr , III Trymestr ND: wartość nieoznaczalna W czasie ciąży występuje ogólna tendencja do wzrostu wartości stężeń progesteronu. Istnieją znaczne osobnicze różnice w poziomach tego hormonu, szczególnie w grupach o podwyższonym stężeniu progesteronu. (Należy pamiętać o nieprzydatności oznaczania progesteronu w monitorowaniu stanu płodu w późnym okresie ciąży. 8 ) Badania przesiewowe hormonów płciowych u dzieci prowadzono przy użyciu testu w Stanach Zjednoczonych. Wyniki przedstawiono poniżej w tabelach. Wiek Grupa (lata) Dziewczęta Krew pępowinowa Chłopcy Grupa mieszana Progesteron, ng/ml n Mediana Środkowe 95% ,1 0,4 24 1,2 0, , ,8 0,2 1,6 1, ,4 ND 1,4 Krew pępowinowa ,1 0,4 33 1,5 0,3 14 0, ,8 ND 2 1, ,4 ND 1,3 Krew pępowinowa ,1 0,4 57 1,5 0, , ,8 ND 2 1, ,4 ND 1,3 ND: wartość nieoznaczalna Wiek Grupa (lata) Dziewczęta Krew pępowinowa Chłopcy Grupa mieszana Progesteron, nmol/l n Mediana Środkowe 95% ,1 0,4 24 3,8 0,8 54 0, ,5 0,6 5,1 1, ,3 ND 4,5 Krew pępowinowa ,1 0,4 33 4,8 1,0 45 0, ,5 ND 6,4 1, ,3 ND 4,1 Krew pępowinowa ,1 0,4 57 4,8 0,8 54 0, ,5 ND 6,4 1, ,3 ND 4,1 ND: wartość nieoznaczalna Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 23

24 [Porównaj: Boscato LM, Stuart MC: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin Chem 1988:34:27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry Testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach. Wyniki podano w ng/ml. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek surowicy pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Faktor przeliczenia: ng/ml 3,18 nmol/l Zakres kalibracji: 0,2 do 40 ng/ml (0,6 do 127 nmol/l) Test wykazuje zgodność pomiarową z wewnętrznymi standardami wytwarzania dzięki zastosowaniu kwalifikowanych materiałów i metod pomiaru. Czułość analityczna: 0,1 ng/ml (0,3 nmol/l) Precyzja: Próbki testowano przez okres 20 dni w duplikatach, dwa razy dziennie, co dało w sumie 40 serii i 80 powtórzeń (patrz: tabela precyzji). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom (patrz: tabela Linearity). Odzysk: Badano próbki wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 roztworami progesteronu o stężeniach kolejno: 25, 100 i 200 ng/ml (patrz: tabela Recovery). Specyficzność: Przeciwciało jest wysoce specyficzne w stosunku do progesteronu (patrz: tabela Specificity). Bilirubina: Obecność bilirubiny związanej lub wolnej w stężeniu do 200 mg/l nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 512 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów wpływa na wynik obniżając wartości (patrz: tabela Lipemia). Rodzaje pobieranego materiału: W celu określenia wpływu sposobu pobrania materiału na wynik oznaczenia krew od 19 ochotników pobierano do czystych probówek szklanych i czystych probówek plastikowych (Surowica Plastik) = 1,03 (Surowica Szkło) 0,06 ng/ml r = 0,997 Średnie: 11,2 ng/ml (Surowica Szkło) 11,5 ng/ml (Surowica Plastik) W innych badaniach krew od 20 ochotników pobierano do: czystych probówek szklanych, z heparyną, z EDTA oraz z barierą żelową (SST). Wszystkie probówki wyprodukowała firma Beton Dickinson. Jednakowe objętości porównywanych próbek wzbogacano różnymi stężeniami progesteronu dla uzyskania wartości rozłożonych w całym zakresie liniowości testu i oznaczano testem IMMULITE 2000 Progesteron. (Heparyna) = 0,84 (Surowica) + 0,4 ng/ml r = 0,974 (EDTA) = 2,21 (Surowica) + 4,8 ng/ml r = 0,893 (SST) = 1,04 (Czysta Probówka) + 0,02 ng/ml r = 0,987 Średnie: 9,6 ng/ml (Surowica) 8,5 ng/ml (Heparyna) 21,2 ng/ml (EDTA) 10,2 ng/ml (SST) 24 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )

25 Porównanie metod 1: Wyniki porównano z wynikami uzyskanymi przy zastosowaniu testu Coat-A-Count Progesteron w grupie 162 próbek. (Zakres stężeń od około 0,2 do 40 ng/ml. Patrz wykres Metod Comparison 1.) Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,71 (CAC) + 0,33 ng/ml r = 0,979 Średnie: 8,2 ng/ml (IMMULITE 2000) 11,1 ng/ml (Coat-A-Count) Porównanie metod 2: IMMULITE 2000 Progesteron (L2KPW) porównywano także z IMMULITE/IMMULITE 1000 Progesteron (LKPG) w grupie 182 próbek (zakres stężeń od ok. 0,2 do 20 ng/ml. Patrz wykres Metod Comparison 2.) Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000 L2KPW) = 0,79 (IML LKPG) + 0,82 ng/ml r = 0,969 Średnie: 5,9 ng/ml (IMMULITE 2000 L2KPW) 5,5 ng/ml (IMMULITE LKPG) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE and Coat-A-Count are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Origin: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KPW 9 {21} Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej Changes in this Edition: cc#eu22134: Under Method Comparison 1, revised the number of patient samples from 163 to 162. IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, ) 25

26 Symbol Definition En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! Δυνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie Symbol Definition En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) BEAD PACK En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Harmful Cz: Škodlivé El: Επιβλαβές Pl: Szkodliwy lub drażniący En: Corrosive Cz: Korozivní El: Διαβρωτικό Pl: Żrący En: Toxic Cz: Toxické El: Τοξικό Pl: Toksyczny En: Dangerous for the environment Cz: Nebezpečné pro životní prostředí El: Επικίνδυνο για το περιβάλλον Pl: Niebezpieczny dla środowiska En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami LOT En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: Διατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii TEST UNIT REAG WEDGE REAG WEDGE A REAG WEDGE B REAG WEDGE D En: Test Unit Cz: Testovací Jednotky El: Μονάδες ανάλυσης Pl: Jednostki testowe En: Reagent Wedge Cz: Reagencie El: Δοχείο Αντιδραστηρίων Pl: Klin odczynnikowy 26 IMMULITE 2000 Progesterone (PIEL2KPW-9 {21}, )