Free PSA. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Free PSA For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Free PSA English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of free, uncomplexed prostate-specific antigen (PSA), i.e. PSA not bound to 1 -antichymotrypsin or other binding proteins, in serum. Catalog Number: L2KPF2 (200 tests) Test Code: fps Color: Light Gray The concentration of free PSA in a given specimen determined with different assays can vary due to the differences in assay methods and reagent specificity. The results reported by the laboratory to the physician must include the identity of the assay used. Values obtained with different PSA assays can not be used interchangably. Before changing assays, the laboratory must confirm the baseline values for patients being serially monitored. Summary and Explanation Since the inception of prostate-specific antigen (PSA) measurements by immunoassay, it has been observed that several distinct immunoreactive species could be isolated from the serum of prostate cancer (PCa) patients after molecular sieve chromatography. 1 PSA has been shown to form stable complexes with two of the major extracellular protease inhibitors in blood, 1 -antichymotrypsin (ACT) and 2 -macroglobulin (AMG). 4 In prostate cancer patients, PSA complexed with ACT (PSA-ACT) is typically the major form in circulation: for about 50% of these patients, PSA-ACT accounts for 85% of the total PSA present. Some 12 15% of prostate cancer patients, on the other hand, present with free (that is, uncomplexed) PSA as the predominant form. 2 Biochemical studies of PSA isolated from seminal plasma show that approximately 35% is free, being enzymatically inactive and unreactive with protease inhibitors. 3 According to current hypotheses, this form of the molecule represents either an inactive zymogen of PSA or a nicked or enzymatically inactive form. Complex formation with ACT results in exposure of a limited number of the antigenic epitopes of PSA, whereas complex formation with AMG encapsulates the antigenic epitopes of PSA. Differences in recognition of these multiple forms of PSA by reagent antibodies have contributed to discrepancies between commercial PSA assays. 4 Immunometric assays have now been designed to selectively characterize all the molecular forms of PSA in circulation: some detect just PSA-ACT, others just free PSA, and some are considered to be assays for total PSA, detecting PSA epitopes available both on free (uncomplexed) PSA and on PSA complexed to serine protease inhibitors. Using assays such as these, free PSA was found to comprise a significantly (p ) smaller fraction of the total PSA concentration in patients with untreated PCa than in patients with benign prostatic hypertrophy (BPH). 2 A substantial body of literature indicates the benefit of combining free and total PSA in the form of a ratio, facilitating discrimination between PCa and BPH. These determinations must be made using assays developed by the same manufacturer. 14,15 The free-to-total ratio (% free PSA) is typically expressed as a percent: 100 free PSA / total PSA, with both measured in ng/ml. The % free PSA is, on average, lower in PCa than in BPH and has been commonly used as an aid in PCa diagnosis when the total PSA concentration falls in the gray zone, that is, between 4 and 10 ng/ml While a lower cutoff might result in fewer false-positive results, a higher cutoff is less likely to miss actual instances of PCa. The % free PSA has also been investigated in the wider total PSA concentration range of 2.0 to 20 ng/ml. 15,17,18,20 2 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

3 The optimal % free PSA cutoff depends on other factors as well, one of which is the prostate and/or transition zone volume measured by transrectal ultrasound (TRUS). 21,22 Age is another factor: while both free and total PSA rise with advancing age, the % free PSA decreases. 23 More complex approaches employing artificial neural networks (ANNs) take these parameters and others into account, e.g., the results of a digital rectal exam (DRE). Using an ANN can significantly increase discrimination between BPH and PCa. 24 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Free PSA is a solid-phase, sequential chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-psa antibody specific for free (uncomplexed) PSA. The patient sample is incubated with the bead during the first cycle at which time free PSA in the sample binds to the free PSA-specific monoclonal antibody-coated bead. Unbound serum is then removed by a centrifugal wash. Alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to a goat anti-psa polyclonal antibody in the reagent is introduced in the second cycle and binds to free PSA on the bead to form an antibody-sandwich complex. Unbound enzyme conjugate is then removed by a centrifugal wash. Finally, chemiluminescent substrate is added to the bead and signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes Time to first result: 65 minutes Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Free PSA has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 25 µl serum Storage: 24 hours at 2 8 C or for longer at 20 C. 5 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use only. CAUTION! POTENTIAL BIOHAZARD Contains human source material. Each donation of human blood or blood component was tested by FDA-approved methods for the presence of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and type 2 (HIV-2) as well as for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibody to hepatitis C virus (HCV). The test results were negative (not repeatedly reactive). No test offers complete assurance that these or other infectious agents are absent; this material should be handled using good laboratory practices and universal precautions CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 3

4 H302 + H312, H412 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312, P501 Warning! Harmful if swallowed or in contact with skin. Harmful to aquatic life with long lasting effects. Wear protective gloves/ protective clothing/eye protection/face protection. Avoid release to the environment. IF SWALLOWED: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. IF ON SKIN: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: sodium azide; Free PSA Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. The barcode labels are needed for the assay. Free PSA Bead Pack (L2PF12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-psa antibody specific for free (uncomplexed) PSA. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KPF2: 1 pack Free PSA Reagent Wedge (L2PFA2) With barcodes.11.5 ml of a protein buffer matrix, with preservative; 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal goat anti-psa antibody specific for PSA in a buffer containing human serum, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KPF2: 1 wedge Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Free PSA Adjustors (LPFL, LPFH) Two vials (Low and High) of lyophilized free PSA in a buffer solution, with preservative. Reconstitute each vial with 3.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 30 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KPF2: 1 set Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) For the on-board dilution of patient samples. One vial, concentrated (ready-to-use), nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Storage: 30 days (after opening) at 2 8 C or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2M2Z: 3 labels L2M2Z4: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps 4 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

5 Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks Quality Control Samples: Follow government regulations or accreditation requirements for quality control frequency. Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of free PSA. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme. Expected Values Based on its relationship to IMMULITE Free PSA (see Method Comparison), the assay can be expected to have essentially the same reference ranges. A reference range study for IMMULITE Free PSA was performed using serum samples from adult volunteers, including men ranging from approximately 20 to 70 years of age (central 95%: years, median: 40 years). The subjects were in apparent good health, based on a questionnaire. Blood samples were collected in France, Germany, the Netherlands and Portugal. Results were generated by an independent laboratory in the Netherlands using IMMULITE kits. (The samples were collected in plain glass tubes without anticoagulants, gel barriers, or clot-promoting additives, and assayed in singlicate.) Medians and 95th percentiles are tabulated below. Percentiles were determined nonparametrically. Group Median 95%ile Units n Males ng/ml 425 Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations Serum PSA concentrations should not be interpreted as absolute evidence for the presence or absence of malignant disease. 9 Prediction of malignant prostatic disease recurrence should be based on a complete clinical evaluation of the patient, which may also include serial serum PSA determinations. Samples should be obtained before biopsy, prostatectomy or prostatic massage. 10 PSA expression may be altered due to hormonal therapy for prostate cancer. Consequently, a low PSA result following a prostatic cancer treatment which includes hormonal therapy may not adequately reflect the presence of residual or recurrent disease. 13 The accuracy of free PSA assays cannot be evaluated by determining the recovery of free PSA spiked into serum samples, because the formation of complexes between free PSA and the PSA-binding proteins present in normal sera ( 1 -antichymotrypsin and 2 -macroglobulin) will generally cause erroneously low recoveries. Some individuals have antibodies to mouse protein which can cause interference in immunoassays that employ antibodies derived from mice. Specimens from patients who have received preparations of mouse monoclonal antibodies for diagnosis or therapy, in particular, may contain human anti-mouse antibodies (HAMA). These specimens may show erroneous results in such assays. 6-8 Therefore, IMMULITE 2000 Free PSA results should be used only in conjunction with results from some other diagnostic procedure and information available from the clinical evaluation of the patient. IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 5

6 Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 0.07 to 25 ng/ml (WHO NIBSC 1 st IS 96/668) Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; calculated as the value lying two standard deviations above that of the lowest calibration): 0.02 ng/ml Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CLSI EP17-A 25 ): 0.07 ng/ml Functional Sensitivity: (concentration with 20% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP17-A 25 ): 0.07 ng/ml High-dose Hook Effect: None up to 15,118 ng/ml Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Specificity: IMMULITE 2000 Free PSA is highly specific for prostate-specific antigen, with a particularly low crossreactivity to other naturally occurring compounds that might be present in patient samples. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of packed red blood cells in concentrations up to 30 µl/ml has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 15 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. All samples were assayed by the IMMULITE 2000 Free PSA procedure. By linear regression: (Heparin) = 1.04 (Serum) 0.19 ng/ml r = (EDTA) = 1.03 (Serum) 0.19 ng/ml r = (SST) = 1.08 (Plain Tubes) 0.28 ng/ml r = 0.99 Means: 37 ng/ml (Heparin) 37 ng/ml (EDTA) 38 ng/ml (SST) 36 ng/ml (Serum) Method Comparison: The assay was compared to IMMULITE Free PSA on 184 samples. (Concentration range: approximately 0.07 to 25 ng/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.04 (IML) 0.08 ng/ml r = Means: 2.37 ng/ml (IMMULITE 2000) 2.35 ng/ml (IMMULITE) References 1) Chu TM, et al. Circulating antibody to prostate antigen in patients with prostatic cancer. Ann NY Acad Sci 1983;417: ) Lilja H, et al. Prostate-specific antigen in serum occurs predominantly in complex with 1 - antichymotrypsin. Clin Chem 1991;37: IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

7 3) Christensson A, Laurell CB, Lilja H. Enzymatic activity of prostate-specific antigen and its reactions with extrecellular serine protease inhibitors. Eur J Biochem 1990;1994: ) Zhou AM, et al. Multiple forms of prostate-specific antigen in serum: differences in immunorecognition by monoclonal and polyclonal assays. Clin Chem 1993;39: ) Jacobs DS, Grady HD, editors. Laboratory Test Handbook. 4th ed. Hudson (Cleveland): Lexi-Comp Inc., 1996; ) Primus FJ, et al. "Sandwich"-type immunoassay of carcinoembryonic antigen in patients receiving murine antibody for diagnosis and therapy. Clin Chem 1988;34: ) Hansen HJ, et al. Solving the problem of antibody interference in commercial "sandwich"- type immunoassay of carcinoembryonic antigen. Clin Chem 1989;35: ) Schroff RJ, et al. Human anti-murine immunoglobulin responses in patients receiving monoclonal antibody therapy. Cancer Res 1985;45: ) Kuriyama M, et al. Quantitation of prostatespecific antigen in serum by a sensitive enyzme immunoassay. Cancer Res 1980;40: ) Stamey TA, Yang N, et al. Prostate specific antigen as a serum marker for adenocarcinoma of the prostate. N Engl J Med 1987;317: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, ) Sensabaugh GF, Crim D. Isolation and characterization of a semen-specific protein from human seminal plasma: a potential new marker for semen identification. J Forensic Sci 1978;23: ) Morgan WR et al. Prostate specific antigen values after radical retropubic prostatectomy for adenocarcinoma of the prostate: impact of adjuvant treatment (hormonal and radiation). J Urol 1991;145: ) Wolff JM, Stocker G, Borchers H, Haubeck H, Greiling H, Jakse G. Critical aspects related to the interpretation of the free-to-total PSAratio. Anticancer Res 1999;19: ) Patel D, White PA, Milford Ward A. A comparison of six commercial assays for total and free prostate specific antigen (PSA): the predictive value of the ratio of free to total PSA. BJU Int 2000;85: ) Correale M, Pagliarulo A, Donatuti G, Sturda F, Capobianco AM, Stigliani V, et al. Preliminary clinical evaluation of free/total PSA ratio by the IMMULITE system. Int J Biol Markers 1996;11: ) Wymenga LF, Duisterwinkel FJ, Groenier K, Visser-van Brummen P, Marrink J, Mensink HJ. Clinical implications of free-to-total immunoreactive prostate-specific antigen ratios. Scand J Urol Nephrol 2000;34: ) McArdle PA, Pollock MA, Wallace AM, McMillan DC, Crooks JE, Underwood MA. Comparison of total, complexed and free prostate-specific antigens and their ratios in the detection of prostate cancer in a non-screened population. Ann Clin Biochem 2004;41: ) Martinez-Pineiro L, Garcia Mediero JM, Gonzalez Gancedo P, Tabernero A, Lozano D, et al. Probability of prostate cancer as a function of the percentage of free prostatespecific antigen in patients with a non-suspicious rectal examination and total prostate-specific antigen of 4-10 ng/ml. World J Urol 2004;22: ) Wesseling S, Stephan C, Semjonow A, Lein M, Brux B, Sinha P, et al. Determination of non-alpha1-antichymotrypsincomplexed prostate-specific antigen as an indirect measurement of free prostate-specific antigen: analytical performance and diagnostic accuracy. Clin Chem 2003;49: ) Stephan C, Lein M, Jung K, Schnorr D, Loening SA. The influence of prostate volume on the ratio of free to total prostate specific antigen in serum of patients with prostate carcinoma and benign prostate hyperplasia. Cancer 1997 Jan;79: ) Stamey TA, Yemoto CE. Examination of the 3 molecular forms of serum prostate specific antigen for distinguishing negative from positive biopsy: relationship to transition zone volume. J Urol 2000;163: ) Wolff JM, Borchers H, Rohde D, Jakse G. Age related changes of free and total prostate specific antigen in serum. Anticancer Res 1999;19: ) Stephan C, Cammann H, Semjonow A, Diamandis EP, Wymenga LF, Lein M, et al. Multicenter evaluation of an artificial neural network to increase the prostate cancer detection rate and reduce unnecessary biopsies. Clin Chem 2002;48: ) CLSI. Protocols for the Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI document EP17-A Vol 24 (No 34). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania , USA, ) Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR, 1988;37:377 82, ) Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS Document M29-A3. 28) Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 7

8 Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 Wewnątrz serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Specificity Compound 1 Amount Added 2 reactivity 3 Percent Cross- AFP 10,000 ng/ml ND CEA 100 ng/ml ND Ferritin 10,000 ng/ml ND HCG 100,000 miu/ml ND Lactalbumin 10,000,000 ng/ml ND PAP 1000 ng/ml ND Prolactin 200 ng/ml ND ND: not detectable 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % ιασταυρ.αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 % reaktywności Krzyżowej, 4 ND: Nieoznaczlne. Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 1 in % 2 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 3 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 4 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 5 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 6 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 4 v 4. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 4 στα 4. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 4 w 4. 8 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

9 Method Comparison IMMULITE 2000 Free PSA IMMULITE/IMMULITE 1000 Free PSA, ng/ml (IML 2000) = 1.04 (IML) 0.08 ng/ml r = English. Free PSA. Česky. Volný PSA. Ελληνικά. Ελεύθερο PSA. Polski. PSA Wolny. Česky IMMULITE 2000 Volný PSA Použití : Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace volného, nekomplexovaného antigenu prostaty (PSA), tj. PSA nenavázaného na 1 -antichymotrypsin nebo jiný vazný protein, v séru. Katalogové číslo : L2KPF2 (200 stanovení) Kód metody : fps Barva : Světle šedá Koncentrace PSA v určitém vzorku stanovené různými metodami se mohou lišit s ohledem na rozdíly v použité metodě stanovení a specificity reagencií. Výsledky stanovení, které laboratoř posílá lékaři, musí zahrnovat označení použitého testu. Výsledky získané pomocí rozličných metod stanovení PSA se nesmí zaměňovat. Před změnou metody musí laboratoř provést konfirmaci počátečních hodnot pravidelně sledovaných pacientů. Shrnutí a vysvětlení Od počátků měření prostatického antigenu (PSA) pomocí imunochemické reakce se zjistilo, že ze séra pacientů s karcinomem prostaty bylo po molekulové síťové chromatografii izolováno několik rozdílných imunoreaktivních látek. 1 Ukázalo se, že PSA tvoří stabilní komplexy se dvěma z hlavních mimobuněčných proteázových inhibitorů v krvi, 1 -antichymotrypsinem (ACT) a 2 -makroglobulinem (AMG). 4 U pacientů s rakovinou prostaty představuje PSA v komplexu s ACT (PSA-ACT) typicky hlavní formu v oběhu : asi u 50 % těchto pacientů představuje PSA-ACT komplex 85 % celkového přítomného PSA. Na druhé straně, asi u % pacientů s rakovinou prostaty je převažující formou volný PSA, tedy PSA nevázaný v komplexu. 2 Biochemický výzkum PSA izolovaného ze semenné plazmy ukázal, že přibližně 35 % PSA je volného, enzymaticky neaktivního a nereagujícího s proteázovými inhibitory. 3 Podle současných hypotéz, tato forma molekuly je buď neaktivním zymogenem PSA nebo vroubenou neboli enzymaticky neaktivní formou. Tvorba komplexů s ACT má za následek odkryv omezeného množství antigenních epitopů PSA, zatímco tvorba komplexů s AMG antigenní epitopy PSA obaluje. Rozdíly při rozlišování těchto složených forem PSA protilátkami v reagenciích jsou jednou z příčin rozdílů mezi jednotlivými komerčně dostupnými metodami stanovení PSA. 4 Testy využívající imunochemickou reakci jsou dnes navrženy tak, aby selektivně označily všechny molekulární formy PSA v oběhu : některé odhalí pouze PSA-ACT a jiné jen volný PSA. Některé slouží ke zjištění celkového PSA, když umí zjistit PSA epitopy jak na volném PSA, tak na PSA tvořícím komplex se serinovými proteázovými inhibitory. Při použití takových testů se zjistilo, že podíl volného PSA u pacientů s neléčeným karcinomem prostaty je významně menší (p 0,0001), než u pacientů s nezhoubnou hypertrofií prostaty (BPH). 2 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 9

10 V literatuře se většinou uvádí jako výhodná kombinace volného a celkového PSA ve formě poměru, který umožňuje rozlišení mezi PCa a BPH. Tyto hodnoty se musí vypočítat ze stanovení dodaných stejným výrobcem. 14,15 Poměr volný-celkový (% volného PSA) se vyjadřuje v procentech : 100 volný PSA / celkový PSA, kdy obě hodnoty jsou stanoveny v ng/ml. Výsledná % volného PSA jsou často nižší v PCa než v BPH a obvykle se používají jako pomocné stanovení při diagnóze PCa, nachází-li se koncentrace celkového PSA v šedé zóně, což je mezi 4 a 10 ng/ml Zatímco stanovením nižší hodnoty cut-off je možné dosáhnout menšího počtu falešně pozitivních výsledků, při vyšší hodnotě cut-off se snižuje pravděpodobnost, že se nezjistí aktuální stav PCa. Stanovení % volného PSA se provádělo také v širším rozsahu koncentrace PSA od 2,0 do 20 ng/ml. 15,17,18,20 Optimální cut-off % volného PSA závisí na dalších faktorech. Jedním z nich je prostata a/nebo velikost přechodové zóny měřené pomocí transrektálního ultrazvuku (TRUS). 21,22 Dalším faktorem je věk : zatímco volný a celkový PSA rostou s věkem, % obsah volného PSA klesá. 23 Tyto a jiné parametry, např. výsledky digitálního rektálního vyšetření (DRE), jsou zohledněny v komplexnějších přístupech používajících umělé neuronové sítě (ANN). Použití ANN může výrazně zvýšit rozlišení mezi BPH a PCa. 24 Princip Stanovení Volný PSA na analyzátorech IMMULITE 2000 je sekvenční chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena myší monoklonální protilátkou proti PSA specifickou pro volný (nekomplexovaný) PSA. V prvním cyklu je s kuličkou inkubován pacientský vzorek. Volný PSA ze vzorku se naváže na specifickou monoklonální protilátku pro volný PSA na kuličce. Nenavázané sérum je odstraněno centrifugačním mytím. Ve druhém cyklu je přidána alkalická fosfatáza (z telecího střeva) konjugovaná s kozí polyklonální protilátkou proti-psa a naváže se na volný PSA na kuličce za vzniku sendvičového komplexu. Nenavázaný enzymový konjugát je odstraněn centrifugačním mytím. Na závěr je přidán chemiluminiscenční substrát ke kuličce a vzniklý signál odpovídá množství navázaného enzymu. Inkubační cykly : 2 30 minut Čas do prvního výsledku : 65 minut Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře ; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugací vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Volný PSA na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Podrobné informace o testovaných zkumavkách najdete v části Alternativní. Potřebný objem vzorku : 25 μl séra Skladování : 24 hodin při 2 8 C déle při 20 C. 5 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. 10 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

11 POZOR! POTENCIÁLNÍ BIOHAZARD Obsahuje materiál lidského původu. Každé darování krve nebo jejích složek bylo testováno metodami schválenými FDA na přítomnost protilátek proti viru lidské imunodeficience typu 1 (HIV-1) a typu 2 (HIV-2) a také na povrchový antigen viru hepatitidy B (HBsAg) a protilátky proti viru hepatitidy C (HCV). Výsledky testu byly negativní (opakovaně nereaktivní). Žádný test však není absolutní zárukou nepřítomnosti uvedených nebo jiných infekčních zárodků; s materiálem proto zacházejte podle zásad správné laboratorní praxe a dbejte obecných bezpečnostních opatření UPOZORNĚNÍ : Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. H302 + H312, H412 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312, P501 Výstraha! Zdraví škodlivý při požití a při styku s kůží. Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ochranné brýle/obličejový štít. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. PŘI POŽITÍ: Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. PŘI STYKU S KŮŽÍ: Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje: azid sodný; Volný PSA kalibrátory Reagencie : Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 0,1 g/dl. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminescenční substrát : Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda : Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovými kódy. Volný PSA zásobník s kuličkami (L2PF12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti-psa specifickou pro volný (nekomplexovaný) PSA. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KPF2 : 1 balení Volný PSA reagencie (L2PFA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml proteinové pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální kozí protilátkou proti-psa specifickou pro PSA v pufru s obsahem lidského séra, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KPF2 : 1 nádobka Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Volný PSA kalibrátory (LPFL, LPFH) Dvě ampulky s nízkou a vysokou koncentrací lyofilizovaného volného PSA v pufrovém roztoku, s konzervačním prostředkem. K rekonstituci každé ampule použijte 3,0 ml destilované nebo deionizované vody. Promíchejte jemnými krouživými pohyby nebo převracením až IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 11

12 do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Stabilní při teplotě 2 8 C 30 dní po rekonstituci nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KPF2 : 1 sada Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Multidiluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Určeno k automatickému ředění vzorků pacientů analyzátorem. Jedna ampulka koncentrované (připravené k použití) nehumánní bílkovino/pufrové matrice s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C 30 dnů po otevření nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2M2Z : 25 ml L2M2Z4 : 55 ml Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2M2Z : 3 štítky L2M2Z4 : 5 štítků L2SUBM : Chemiluminescenční Substrát L2PWSM : Promývací Roztok L2KPM : Čistící Roztok Na Jehly LRXT : Reakční Zkumavky (na jedno použití) L2ZT : 250 Testovací Zkumavky Na Diluent Vzorků ( mm) L2ZC : 250 Uzávěru Na Testovací Zkumavky Na Diluent Vzorků Dále potřebujete Destilovanou nebo deionizovanou vodu ; testovací zkumavky, kontroly Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy : přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi : 2 týdny Vzorky ke kontrole kvality : Pokud jde o četnost kontroly kvality, je třeba řídit se platnými předpisy a akreditačními požadavky. Použijte kontrolní vzorky nebo směsný vzorek s alespoň dvěma koncentracemi volného PSA (nízkou a vysokou). Společnost Siemens Healthcare Diagnostics doporučuje používat obchodně dostupné materiály kontroly kvality o přinejmenším dvou koncentracích vysoké a nízké. Vyhovující funkčnosti se dosahuje, pokud zjištěné hodnoty analytu leží uvnitř přijatelného kontrolního rozmezí analyzátoru nebo uvnitř rozmezí stanoveného příslušným interním systémem kontroly kvality dané laboratoře. Očekávané hodnoty Na základě příbuznosti se stanovením Volný PSA na analyzátoru IMMULITE (viz Srovnání metody) je možné očekávat, že toto stanovení bude mít prakticky stejná referenční rozmezí. Stanovení referenčního rozmezí Volný PSA bylo provedeno na vzorcích séra dospělých dobrovolných dárců včetně mužů od přibližně 20 do 70 roků věku (středních 95 % : roků, medián : 40 roků). Zdravotní stav těchto osoby byl podle vyplněných dotazníků dobrý. Vzorky krve byly odebrány ve Francii, v Německu, Holandsku a Portugalsku. Výsledky zajistila nezávislá laboratoř v Holandsku za použití analyzátoru a souprav IMMULITE. (Vzorky byly odebrány do obyčejných skleněných zkumavek bez antikoagulantů, gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost. Stanovovalo se vždy po jednom vzorku.) Mediány a 95. percentily se nachází v následující tabulce. Percentily byly určeny neparametricky. Skupina Medián 95. percentil Jednotky n Muži 0,14 0,42 ng/ml 425 Tyto hodnoty považujte pouze za orientrační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. 12 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

13 Omezení Koncentrace PSA v séru by neměla být považována za absolutní důkaz přítomnosti nebo absence zhoubného onemocnění. 9 Prognóza recidivy zhoubného onemocnění prostaty by se měla zakládat na úplném klinickém hodnocení pacienta, které může rovněž zahrnovat opakované stanovení PSA v séru. Vzorky je třeba odebírat před biopsií, prostatektomií nebo prostatickou masáži. 10 Koncentrace PSA se může měnit následkem hormonální léčby karcinomu prostaty. Proto tedy nízká hladina PSA po léčbě karcinomu prostaty, která zahrnuje i hormonální terapii, nemusí správně odrážet přítomnost reziduálního onemocnění nebo recidivy. 13 Přesnost stanovení volného PSA se nedá ohodnotit stanovením zpětné výtěžnosti volného PSA přidaného do vzorku séra, protože tvorba komplexů mezi volným PSA a protein vaznými PSA, které se nachází v normálním séru ( 1 -antichymotrypsin a 2 -makroglobulin), zpravidla zapříčiní nesprávně nízkou zpětnou výtěžnost. Někteří jedinci mají protilátky proti myšímu proteinu, což může ovlivnit imunologické stanovení využívající protilátky získané z myší. Jedná se zejména o vzorky od pacientů, kteří užívali přípravky s myšími monoklonálními protilátkami při diagnóze nebo léčbě. Tyto vzorky můžou obsahovat lidské protimyší protilátky (HAMA) a výsledky stanovení těchto vzorků můžou vykázat chybné výsledky. 6-8 Proto je výsledky stanovení Volný PSA na analyzátorech IMMULITE 2000 možné interpretovat pouze v souvislosti s výsledky jiných diagnostických metod a inormací poskytnutých klinickým hodnocením pacienta. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno ; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, anamnézou pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových separátorů nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření : 0,07 25 ng/ml (WHO NIBSC 1 st IS 96/668) Analytická citlivost : Limit blanku (nejvyšší hodnota očekávaná u vzorku bez analytu ; vypočítává se jako hodnota dvou směrodatných odchylek nad nejnižší kalibraci) : 0,02 ng/ml Detekční limit (nejnižší detekovatelná hodnota ; zjištěna v souladu s CLSI EP17-A 25 ) : 0,07 ng/ml Funkční citlivost : (Koncentrace s variačním koeficientem 20 %, zjištěna v souladu s CLSI EP17-A 25 ) : 0,07 ng/ml High-dose Hook Effect : Do ng/ml žádný Přesnost : Vzorky byly opakovaně stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, celkem 40 cyklů a 80 replikátů. (Viz tabulka "Přesnost".) Linearita : Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Linearita".) Specificita : Stanovení Volný PSA na analyzátorech IMMULITE 2000 je silně specifické pro antigen prostaty se zvláště nízkou zkříženou reaktivitou pro ostatní přirozeně se vyskytující sloučeniny a chemoterapeutické prostředky, které se můžou se objevit ve vzorcích pacientů. (Viz tabulka "Specificita".) Bilirubin : Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 13

14 Hemolýza : Přítomnost červených krvinek oddělených od plazmy v koncentracích do 30 µl/ml nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie : Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku : K určení vlivu použití alternativních typů vzorků pro toto stanovení jsme odebrali krev 15 dobrovolníkům do obyčejných, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Vzorky jsme následně stanovili metodou Volný PSA na analyzátorech IMMULITE Podle lineární regrese: (Heparin) = 1,04 (Sérum) 0,19 ng/ml r = 0,997 (EDTA) = 1,03 (Sérum) 0,19 ng/ml r = 0,998 (SST) = 1,08 (Obyčejné Zkumavky) 0,28 ng/ml r = 0,99 Střední Hodnoty : 37 ng/ml (Heparin) 37 ng/ml (EDTA) 38 ng/ml (SST) 36 ng/ml (Sérum) Srovnání metody : Stanovení bylo porovnáno se stanovením Volný PSA na analyzátoru IMMULITE na 184 vzorcích. (Koncentrační rozsah : přibližně 0,07 do 25 ng/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 1,04 (IML) 0,08 ng/ml r = 0,998 Střední Hodnoty : 2,37 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,35 ng/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Ελεύθερο PSA Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση του ελεύθερου προστατικού ειδικού αντιγόνου (PSA), δηλαδή του PSA που δεν είναι συνδεδεμένο με την 1 -αντιχυμοθρυψίνη ή με άλλες πρωτεΐνες δεσμεύσεως, στον ορό. Αριθμός Καταλόγου: L2KPF2 (200 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: fps Χρώμα: Ανοικτό Γκρι Η συγκέντρωση του ελεύθερου PSA σε ένα δεδομένο δείγμα που προσδιορίζεται με διαφορετικές μεθόδους μπορεί να διαφέρει εξαιτίας των διαφορών των αναλυτικών μεθόδων και της ακρίβειας των αντιδραστηρίων. Τα αποτελέσματα που αναφέρονται από το εργαστήριο στο γιατρό πρέπει να περιλαμβάνουν και το ποια μέθοδος χρησιμοποιήθηκε. Οι τιμές που αποκτώνται με διαφορετικές αναλύσεις PSA δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται κατ εναλλαγήν. Πριν αλλάξει μεθοδολογίες, το εργαστήριο πρέπει να επιβεβαιώσει τις βασικές τιμές για τους ασθενείς που ελέγχονται συνεχώς. Περίληψη και Επεξήγηση Μετά την έναρξη των μετρήσεων με ανοσοανάλυση του προστατικού ειδικού αντιγόνου (PSA), έχει παρατηρηθεί ότι αρκετά ευδιάκριτα ανοσοαντιδραστικά είδη μπορούν να απομονωθούν στον ορό των ασθενών με καρκίνο του προστάτη (PCa) μετά από χρωματογραφία μοριακής διήθησης (molecular sieve chromatography). 1 Το PSA σχηματίζει σταθερά συμπλέγματα με δύο από τους μεγαλύτερους εξωκυτταρικούς αναστολείς πρωτεάσης στο αίμα, 1 -αντιχυμοθρυψίνη (ACT) και 2 -μακροσφαιρίνη (AMG). 4 Στους ασθενείς με καρκίνο του προστάτη, το PSA σε σύμπλεγμα με την ACT (PSA-ACT) αποτελούν την κύρια μορφή 14 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

15 στην κυκλοφορία: για περίπου 50% των ασθενών, η PSA-ACT εξηγεί για το 85% της συνολικής παρουσίας PSA. Από την άλλη πλευρά, περίπου 12 15% των ασθενών με καρκίνο του προστάτη φαίνεται να εμφανίζουν ελεύθερο (δηλαδή μη συμπλεγμένο) PSA ως την κυρίαρχη μορφή. 2 Οι βιοχημικές μελέτες του PSA σε απομονωμένο πλάσμα σπέρματος έδειξαν ότι περίπου το 35% είναι ελεύθερο, ενζυματικά ανενεργό και δεν αντιδρά με τους αναστολείς πρωτεάσης. 3 Σύμφωνα με σύγχρονες υποθέσεις, αυτή η μοριακή μορφή αναπαριστά είτε ένα ανενεργό προένζυμο PSA ή μια πρωτεολυμένη (nicked) ή ενζυματικά ανενεργή μορφή. Σύνθετος (Complex) σχηματισμός με αποτελέσματα ACT αποκαλύπτει περιορισμένο αριθμό αντιγονικών καθοριστών PSA, ενώ σύνθετοι σχηματισμοί με AMG περιβάλουν τους αντιγονικούς καθοριστές του PSA. ιαφοροποιήσεις στην αναγνώριση των πολλαπλών μορφών της με αντισώματα αντιδραστηρίου έχουν συντελέσει στις ασυμφωνίες μεταξύ των εμπορικών PSA αναλύσεων. 4 Οι ανοσομετρικές αναλύσεις έχουν σχεδιαστεί έτσι ώστε επιλεκτικά να χαρακτηρίζουν όλες τις μοριακές μορφές του PSA στην κυκλοφορία: κάποιες ανιχνεύουν μόνο PSA-ACT, άλλες μόνο το ελεύθερο PSA, και άλλες θεωρούνται αναλύσεις ολικού PSA, ανιχνεύοντας αντιγονικούς καθοριστές PSA διαθέσιμες και στο ελεύθερο (μη συμπλεγμένο) PSA και στο συμπλεγμένο PSA σε αναστολείς πρωτεάσης σερίνης (serine protease inhibitors). Χρησιμοποιώντας αναλύσεις όπως οι παραπάνω, το ελεύθερο PSA βρέθηκε να αποτελείται από ένα σημαντικά μικρότερο κλάσμα (p 0,0001) σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη που δεν ακολουθούν θεραπευτική αγωγή παρά σε ασθενείς με καλοήθη προστατική υπερτροφία (BPH). 2 Μεγάλο μέρος της βιβλιογραφίας τονίζει το όφελος της σύνδεσης ελεύθερου και ολικού PSA σε μορφή κλάσματος, γιατί διευκολύνει την διάκριση μεταξύ καρκίνου του προστάτη (PCa) και καλοήθους προστατικής υπερτροφίας BPH. Αυτοί οι καθορισμοί πρέπει να γίνουν με αναλύσεις του ιδίου κατασκευαστή. 14,15 Η αναλογία ελεύθερου προς-ολικού (% ελεύθερου PSA) εκφράζεται χαρακτηριστικά ως εκατοστιαία αναλογία: 100 ελεύθερου PSA / ολικού PSA, και οι δύο μετρήσιμες σε ng/ml. Το % ελεύθερου PSA είναι κατά μέσο όρο χαμηλότερο στην PCa από ότι στην BPH και έχει ευρέως χρησιμοποιηθεί σαν βοήθεια στην διάγνωση της PCa όπου η συγκέντρωση του ολικού PSA είναι μέσα στην γκρίζα ζώνη ( gray zone ) δηλαδή μεταξύ 4 και 10 ng/ml Ενώ ένα χαμηλότερο cutoff μπορεί να οδηγήσει σε λιγότερα ψευδώς θετικά αποτελέσματα ένα υψηλότερο cutoff είναι λιγότερο πιθανό να αστοχήσει στην ανάδειξη πραγματικών περιστατικών PCa. Το % ελεύθερο PSA έχει επίσης ερευνηθεί σε μεγαλύτερες συγκεντρώσεις ολικού PSA της τάξης 2,0 με 20 ng/ml. 15,17,18,20 Το βέλτιστο cutoff % ελεύθερου PSA εξαρτάται επίσης από άλλους παράγοντες, όπως ο όγκος του προστάτη και/ή της περιβάλλουσας περιοχής όπως μετριέται από το διορθικό υπερηχογράφημα (TRUS). 21,22 Η ηλικία είναι ένας άλλος παράγοντας: ενώ και το ελεύθερο και το ολικό PSA αυξάνονται με την αύξηση της ηλικίας, το % ελεύθερου PSA μειώνεται. 23 Οι πιο σύνθετες προσεγγίσεις που χρησιμοποιούν ANNs (τεχνητά νευρωνικά δίκτυα) συνυπολογίζουν αυτές τις παραμέτρους και άλλες π.χ. τα αποτελέσματα της πρωκτικής εξέτασης (DRE). Η χρησιμοποίηση ANN μπορεί να βοηθήσει σημαντικά στην διάκριση μεταξύ καρκίνου του προστάτη (PCa) και καλοήθους προστατικής υπερτροφίας BPH. 24 Αρχή της Ανάλυσης Η IMMULITE 2000 Ελεύθερο PSA is είναι μια ξηρής φάσης, αλληλοδιάδοχη, χημειοφωταυγής, ανοσομετρική ανάλυση. Η ξηρή φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού anti-psa. Το δείγμα του ασθενή επωάζεται μαζί με το σφαιρίδιο κατά την διάρκεια του πρώτου κύκλου και το PSA του δείγματος προσκολλάται στο μονοκλωνικό επικαλυμμένο με αντίσωμα σφαιρίδιο. Ο αδέσμευτος ορός απομακρύνεται με φυγόκεντρη πλύση. Το αντιδραστήριο περιλαμβάνει αλκαλική φωσφατάση (βόειο έντερο) συνδεδεμένη με πολυκλωνικό αντίσωμα κατσίκας anti-psa ειδικό για PSA που εισάγεται στον δεύτερο κύκλο και δεσμεύει την PSA IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 15

16 στο σφαιρίδιο ώστε να σχηματιστεί ένα σύμπλεγμα αντισώματος-sandwich. Το ελεύθερο από χημικό δεσμό ενζυμικό παράγωγο απομακρύνεται με φυγόκεντρη πλύση. Τελικά, προστίθεται το χημειοφωταυγές υπόστρωμα στο σφαιρίδιο και παράγεται σήμα σε αναλογία με το ενωμένο ένζυμο. Κύκλοι Επώασης: 2 30 λεπτά Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά Συλλογή είγματος Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα πρόσθετα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Ελεύθερο PSA δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 25 µl ορού Φύλαξη: 24 ώρες στους 2 8 C ή για μεγαλύτερη αποθήκευση στους 20 C. 5 Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ! ΥΝΗΤΙΚΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟΣ ΚΙΝ ΥΝΟΣ Περιέχει υλικό ανθρώπινης προέλευσης. Κάθε δωρεά ανθρώπινου αίματος ή συστατικού αίματος ελέγχθηκε με μεθόδους εγκεκριμένες από τον FDA για την ύπαρξη αντισωμάτων ενάντια στους ιούς της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου τύπου 1 (HIV-1) και τύπου 2 (HIV-2), καθώς και για επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β (HBsAg) και για αντισώματα ενάντια στον ιό της ηπατίτιδας C (HCV). Τα αποτελέσματα των εξετάσεων ήταν αρνητικά (όχι επανειλημμένα αντιδραστικά). Επειδή καμία εξέταση δεν παρέχει πλήρη διασφάλιση για την απουσία αυτών ή άλλων μολυσματικών παραγόντων, ο χειρισμός αυτού του υλικού θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις ορθές εργαστηριακές πρακτικές και γενικές προφυλάξεις ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. 16 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

17 H302 + H312, H412 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312, P501 Προειδοποίηση! Επιβλαβές σε περίπτωση κατάποσης ή σε επαφή με το δέρμα. Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/πρόσωπο. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΚΑΤΑΠΟΣΗΣ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΕΡΜΑ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: αζίδιο νατρίου; Ρυθμιστές Ελεύθερου PSA Αντιδραστήρια: Φύλαξη στους 2 8 C. Υπόκεινται στην ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για τα επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας B και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl, έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών μεταλλικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. εν πρέπει να μολυνθεί. ( ες ένθετο.) Νερό: Χρήση απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Υλικά που διατίθενται Τα υλικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες(με barcode) στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων ελεύθερου PSA (L2PF12) Με barcode. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με μονοκλωνικά αντι-psa αντισώματα ποντικού ειδικά για ελεύθερη PSA. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KPF2: 1 συσκευασία οχείο αντιδραστηρίου Ελεύθερου PSA (L2PFA2) Με barcode. 11,5 ml μήτρας ρυθμιστικού διαλύματος πρωτεΐνης, με συντηρητικό. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (έντερο μόσχου) συζευγμένη σε πολυκλωνικό αντι-psa αντίσωμα κατσίκας ειδικό για PSA σε ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει ανθρωπινό ορό, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KPF2: 1 δοχείο Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές Ελεύθερου PSA (LPFL, LPFH) ύο δοχεία (χαμηλό και υψηλό), λυοφιλοποιημένου ελεύθερου PSA σε ρυθμιστικό διάλυμα μήτρα, με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλίδιου με 3,0 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Ανακινήστε με απαλές κινήσεις ή με αναστροφή μέχρι το λυοφιλοποιημένο υλικό να διαλυθεί πλήρως. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά την ανασύσταση ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KPF2: 1 σετ Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από το κατάλληλο σύστημα. IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 17

18 Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά Πολυ-αραιωτικό 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Για την on-board αραίωση δειγμάτων. Ένα φιαλίδιο που περιέχει συμπυκνωμένη (έτοιμη για χρήση), μήτρα μη ανθρώπινης πρωτεΐνης/ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Αποθήκευση: 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Ετικέτες με barcode παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικό σωλήνα mm, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. L2M2Z: 3 ετικέτες L2M2Z4: 5 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος Απαιτούνται επίσης απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, έλεγχοι ιαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες είγματα ποιοτικού ελέγχου: Εφαρμόστε τους κρατικούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης για τη συχνότητα του ποιοτικού ελέγχου. Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου ή απλά δείγματα τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) ελεύθερου PSA. Η Siemens Healthcare Diagnostics συνιστά τη χρήση εμπορικά διαθέσιμων υλικών ελέγχου ποιότητας με τουλάχιστον 2 επίπεδα (χαμηλό και υψηλό). Ένα ικανοποιητικό επίπεδο απόδοσης επιτυγχάνεται όταν οι τιμές που προκύπτουν βρίσκονται εντός του αποδεκτού εύρους των υλικών ελέγχου για τον αναλυτή ή εντός ενός καθορισμένου εύρους που καθορίστηκε με βάση ένα κατάλληλο πλαίσιο εσωτερικού εργαστηριακού ποιοτικού ελέγχου. Αναμενόμενες τιμές Βασιζόμενη στην σχέση με την IMMULITE Ελεύθερου PSA (βλ. Σύγκριση Μεθόδων), Η ανάλυση IMMULITE 2000 PSA αναμένεται να έχει τις ίδιες τιμές αναφοράς. Οι τιμές αναφοράς διαμορφώθηκαν μετά από μια μελέτη με IMMULITE Ελεύθερου PSA σε δείγματα ορού εθελοντών αντρών, η οποία συμπεριέλαβε άνδρες ηλικίας ετών (κεντρικό εύρος 95%: ετών, ενδιάμεση τιμή: 40 ετών). Οι εθελοντές φαινομενικά έχουν καλή υγεία, όπως πιστοποιείται από ένα ερωτηματολόγιο. είγματα αίματος συλλέχθηκαν στην Γαλλία,Γερμανία, στις Κάτω Χώρες, και στην Πορτογαλία. Τα αποτελέσματα παρήχθησαν από ένα ανεξάρτητο εργαστήριο στις Κάτω Χώρες χρησιμοποιώντας IMMULITE kits. (Τα δείγματα συλλέχθηκαν σε απλούς γυάλινους σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών, τζελ, ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβου, και αναλύθηκαν εις απλούν.) Οι ενδιάμεσες τιμές και το 95% των αντίστοιχων υποομάδων φαίνονται στον παρακάτω πίνακα. Η εκατοστιαία αναλογία καθορίστηκε μη παραμετρικά. Ομάδα Ενδιάμεσ η τιμή 95%ile Μονάδες n Άνδρες 0,14 0,42 ng/ml 425 Τα εργαστήρια πρέπει να θεωρούν αυτά στα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Συνιστάται κάθε εργαστήριο να έχει τις δικές του τιμές αναφοράς. 18 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

19 Περιορισμοί Οι συγκεντρώσεις του PSA στον ορό δεν θα πρέπει να εκτιμώνται σαν απόλυτη απόδειξη για την παρουσία ή την απουσία κακοήθους ασθένειας. 9 Πρόβλεψη επανεμφάνισης κακοήθους ασθένειας του προστάτη θα πρέπει να βασίζεται σε πλήρη κλινική εκτίμηση του ασθενούς, η οποία επίσης μπορεί να περιλαμβάνει συνεχείς προσδιορισμούς του PSA στον ορό. Τα δείγματα θα πρέπει να παίρνονται πριν τη βιοψία, προστατεκτομή ή μάλαξη του προστάτη. 10 Η έκφραση του PSA μπορεί να μεταβληθεί εξαιτίας ορμονικής θεραπείας για καρκίνο του προστάτη. Συνεπώς, ένα χαμηλό αποτέλεσμα PSA σε άτομα που ακολουθούν μια ορμονική θεραπεία μπορεί να μην αντικατοπτρίζει επακριβώς την παρουσία υπολειπόμενης ασθένειας ή ασθένειας που επανεμφανίστηκε. 13 Η ακρίβεια της ανάλυσης ελεύθερου PSA δεν μπορεί να εκτιμηθεί με τον καθορισμό της ανάκτησης του ελεύθερου PSA που έχει εμπλουτίσει τα δείγματα ορου, γιατί ο σχηματισμός συμπλεγμάτων μεταξύ του ελεύθερου PSA και των PSA πρωτεϊνών δεσμεύσεως που υπάρχουν στον φυσιολογικό ορό ( 1 -αντιχυμοθρυψίνη και 2 -μακροσφαιρίνη) προκαλεί γενικά εσφαλμένα χαμηλές ανακτήσεις. Κάποια άτομα έχουν αντισώματα στην πρωτεΐνη του ποντικού, πράγμα που μπορεί να επηρεάσει τις ανοσομεθόδους που περιλαμβάνουν αντισώματα που προέρχονται από ποντίκια. Ιδιαίτερα, δείγματα από ασθενείς που έχουν υποστεί προετοιμασία μονοκλωνικών αντισωμάτων ποντικού για διάγνωση ή θεραπεία μπορεί να περιέχουν ανθρώπινα αντι-αντισώματα για τα αντίστοιχα του ποντικού (HAMA). Αυτά τα δείγματα μπορεί να δείξουν εσφαλμένα αποτελέσματα σε τέτοιες μεθόδους Για αυτό το λόγο, τα αποτελέσματα θα πρέπει να χειρίζονται με προσοχή για τέτοιους ασθενείς. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε εργαστηριακές μεθόδους ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] είγματα ασθενών που, σαν ρουτίνα, εκτίθενται σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε, να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Οι παρακάτω πίνακες και τα γραφήματα περιέχουν δεδομένα αντιπροσωπευτικά της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Εύρος μέτρησης: 0,07 25 ng/ml (WHO NIBSC 1 st IS 96/668) Αναλυτική ευαισθησία: Όριο του τυφλού δείγματος (η υψηλότερη αναμενόμενη τιμή ενός δείγματος δίχως αναλύτη, η οποία υπολογίζεται ως η τιμή που βρίσκεται δύο τυπικές αποκλίσεις πάνω από την τιμή της χαμηλότερης βαθμονόμησης): 0,02 ng/ml Όριο ανίχνευσης (η χαμηλότερη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση, η οποία καθορίζεταιμε την CLSI EP17-A 25 ): 0,07 ng/ml Λειτουργική ευαισθησία: (συγκέντρωση με συντελεστή διακύμανσης (Σ..) 20%, που καθορίζεται κατά CLSI EP17-A 25 ): 0,07 ng/ml Επίδραση υψηλής δόσης φαινομένου Hook: Καμιά μέχρι ng/ml Ακρίβεια: Τα δείγματα υφίσταντο αναλύσεις εις διπλούν σε διάστημα 20 ημερών, δύο τρεξίματα την ημέρα, σε σύνολο 40 τρεξιμάτων και 80 επαναλήψεων. (Βλ. Πίνακα Precision.) IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 19

20 Γραμμικότητα: Ελέγχθηκαν δείγματα με διάφορες αραιώσεις (Βλ. Πίνακα Linearity για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Η ανάλυση IMMULITE 2000 Ελεύθερου PSA παρουσιάζει υψηλή ειδικότητα για το προστατικό ειδικό αντιγόνο, με μια ιδιαίτερα χαμηλή διασταυρούμενη αντίδραση σε άλλα φυσικά συστατικά που μπορεί να υπάρχουν στα δείγματα των ασθενών. (Βλ. Πίνακα Specificity.) Χολερυθρίνη: Παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Παρουσία ερυθρών κυττάρων σε συγκεντρώσεις μέχρι 30 µl/ml δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3000 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης. ( ες Πίνακα Lipemia.) Εναλλακτικοί Τύποι είγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 15 εθελοντές σε απλούς ηπαρινισμένους EDTA and Becton Dickinson SST δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν σύμφωνα με την διαδικασία IMMULITE 2000 Ελεύθερου PSA. Η εξίσωση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (Ηπαρίνη) = 1,04 (Ορός) 0,19 ng/ml r = 0,997 (EDTA) = 1,03 (Ορός) 0,19 ng/ml r = 0,998 (SST) = 1,08 (Απλοί σωλήνες) 0,28 ng/ml r = 0,99 Μέσοι όροι: 37 ng/ml (Ηπαρίνη) 37 ng/ml (EDTA) 38 ng/ml (SST) 36 ng/ml (Ορός) Σύγκριση μεθόδου: Η εξέταση συγκρίθηκε με την ανάλυση IMMULITE Ελεύθερου PSA σε 184 δείγματα. (Εύρος συγκεντρώσεων: περίπου 0,07 ως 25 ng/ml. Βλ. Σχετικά γραφικά.) Η εξίσωση γραμμικής παλινδρόμησης είναι: (IML 2000) = 1,04 (IML) 0,08 ng/ml r = 0,998 Μέσοι όροι: 2,37 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,35 ng/ml (IMMULITE) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 PSA Wolny Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczania w surowicy poziomu wolnego (nieskompleksowanego) specyficzego antygenu sterczowego prostaty - PSA, czyli antygenu nie związanego z α 1 -antychymotrypsyną i z innymi białkami wiążącymi. Numer katalogowy: L2KPF2 (200 testów) Kod testu: fps Kolor: Jasno szary Stężenia wolnego PSA w danej próbce określane różnymi metodami mogą się różnić na skutek różnic metod i specyficzności odczynników. Wynik wydawany lekarzowi musi podawać nazwę metody. Wartości wolnego PSA uzyskane przy użyciu różnych metod nie mogą być stosowane zamiennie. Przed wprowadzeniem nowej metody laboratorium powinno ustalić wartości odniesienia dla pacjentów poddanych długotrwałemu monitorowaniu. Wprowadzenie Z wprowadzeniem immunoenzymatycznych metod oznaczania specyficznego antygenu prostaty (PSA) zaobserwowano, że z surowicy chorych na raka prostat (PCa) można wyizolować metodą sączenia molekularnego szereg składników o różnej immunoraktywności. 1 Wykazano, że PSA tworzy stabilne kompleksy z dwoma 20 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

21 głównymi zewnątrzkomórkowymi inhibitorami proteaz we krwi, α 1 -antychymotrypsyną (ACT) i α 2 -makroglobuliną (AMG). 4 U chorych na raka prostaty główną formą krążącą jest PSA związany z ACT (PSA-ACT): u około 50% chorych PSA-ACT stanowi 85% całości obecnego PSA. Z drugiej strony u 12 15% chorych na raka prostaty forma wolnego PSA (to znaczy nieskompleksowanego) jest dominująca. 2 Biochemiczne badania PSA wyizolowanego z płynu nasiennego wykazały, że około 35% antygenu występuje w postaci wolnej, enzymatycznie nieaktywnej i nie oddziałującej z inhibitorami proteaz. Według obecnych hipotez taka forma cząsteczki jest albo nieaktywnym proenzymem PSA, albo formą rozszczepioną, względnie nieaktywną enzymatycznie postacią antygenu prostaty. W wyniku utworzenia kompleksu PSA z ACT następuje ograniczenie ilości dostępnych determinant antygenowych PSA, natomiast w przypadku kompleksów z AMG następuje całkowite zasłonięcie epitopów antygenu. Różnice w rozpoznawaniu antygenowo złożonych form PSA przez przeciwciała stanowiące odczynniki zestawów przyczyniają się do rozbieżności wyników dostępnych na rynku testów dla PSA. 4 Obecnie testy immunoenzymatyczne pozwalają na wybiórcze oznaczania wszystkich postaci PSA występujące w krążeniu: jedne oznaczają wyłącznie PSA-ACT, inne jedynie wolny PSA, jeszcze inne są przeznaczone do oznaczania całkowitego PSA, wykrywając zarówno epitopy na wolnym PSA (nieskompleksowanym) jak i na PSA związanym z inhibitorami proteaz serynowych. Przy użyciu powyższych testów wykazano, że wolny PSA stanowi znacząco (p < 0,0001) mniejszą frakcję PSA całkowitego u chorych na nie leczonego raka prostaty niż u chorych z łagodnym przerostem prostaty (BPH). 2 Szerokie piśmiennictwo wskazuje na zasadność przedstawiania ilości wolnego i całkowitego PSA w postaci stosunku liczbowego, którego wielkość ułatwia różnicowanie PCa i łagodnego przerostu. Oba testy muszą pochodzić od tego samego producenta. 14,15 Liczbowy stosunek PSA wolnego do PSA całkowitego (% wolnego PSA) zwykle obliczany jest z zależności 100xPSA wolny/psa całkowity, przy czym stężenia obu wyrażone są w ng/ml. Zwykle % PSA wolnego jest niższy w PCa niż w BPH i jego wielkość jest powszechnie uważana za przydatną w diagnostyce PCa, gdy stężenie PSA całkowitego plasuje się w szarej strefie tj. pomiędzy 4 i 10 ng/ml W przypadku niższej z obu wartości granicznych zdarzać się mogą nieliczne wyniki fałszywie dodatnie, natomiast w pobliżu wyższej wartość predyktywna dla zależności dla PCa jest silniejsza. % PSA wolnego bywa również określany dla szerszego zakresu PSA całkowitego: 2 do 20 ng/ml. 15,17,18,20 Optymalna wartość graniczna % PSA wolnego zależy również od innych czynników, z których jednym jest objętość prostaty lub /i strefy obwodowej określana na drodze sonografii doodbytniczej (TRUS). 21,22 Kolejna zależność wiąże się z wiekiem: o ile poziom obu, PSA wolnego i całkowitego, wzrastają z wiekiem, to wartość % PSA wolnego spada. 23 Bardziej rozwinięte podejście opiera się na sieciach neuronowych (ANNs) uwzględniających % PSA wolnego w kontekście innych parametrów, na przykład badania palpacyjnego per rectum (DRE). Zastosowanie sieci istotnie poprawiło różnicowanie BPH i Pca. 24 Zasada testu Test IMMULITE 2000 PSA Wolny jest immunometrycznym, sekwencyjnym testem chemiluminescencyjnym fazy stałej. Faza stała (kulka) opłaszczona jest mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-psa, specyficznym dla wolnego (nieskompleksowanego) PSA. W pierwszym etapie badana próbka inkubowana jest z kulką, dzięki czemu PSA wolny obecny w próbce wiąże się pokrywającymi kulkę specyficznymi dla niego przeciwciałami monoklonalnymi. Niezwiązana surowica usuwana jest przez wirowanie i płukanie. W drugim etapie dodawany jest odczynnik zawierający alkaliczną fosfatazę (izolowaną z jelit cieląt) sprzężoną z poliklonalnym, kozim, przeciwciałem anty-psa. Koniugat wiążą IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 21

22 się z PSA wolnym na kulce tworząc kompleks kanapkę. Niezwiązany koniugat usuwany jest przez wirowanie i płukanie. W ostatnim etapie do kulki dodawany jest substrat chemiluminescencyjny, a wygenerowany sygnał jest proporcjonalny do enzymu związanego z kulką. Czas inkubacji: 2 30 minut Czas do pierwszego wyniku: 65 minut Preparatyka próbek Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 PSA Wolny nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 25 µl surowicy Przechowywanie materiału: 24 godzin w 2 8 C lub dłużej w 20 C. 5 Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA! POTENCJALNE ZAGROŻENIE BIOLOGICZNE Zawiera materiał pochodzenia ludzkiego. Każdą porcję ludzkiej krwi lub składnika krwi pochodzącą od dawców przetestowano metodami zaaprobowanymi przez FDA na obecność przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi nabytego niedoboru odporności typu 1 (HIV-1) i typu 2 (HIV-2), antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby typu B (HBsAg) i przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (HCV). Wyniki tych badań były ujemne (nie wykazały powtarzalnej reaktywności). Jednak żadne badanie nie gwarantuje całkowitej pewności, że te lub inne czynniki chorobotwórcze nie są obecne w materiale; z tym materiałem należy postępować zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej i stosować uniwersalne środki ostrożności PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. H302 + H312, H412 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312, P501 Ostrzeżenie! Działa szkodliwie po połknięciu lub w kontakcie ze skórą. Działa szkodliwie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Stosować rękawice ochronne/odzież ochronną/ ochronę oczu/ochronę twarzy. Unikać uwolnienia do środowiska. W PRZYPADKU POŁKNIĘCIA: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: azydek sodu; PSA wolny Kalibratory zestawu 22 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

23 Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl dodawany jest jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. PSA wolny Pojemnik z Kulkami (L2PF12) Oznakowany kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych mysim przeciwciałem monoklonalnym specyficznym w stosunku do wolnego (nieskompleksowanego) PSA. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KPF2: 1 opakowanie Wolny PSA Klin Odczynnikowy (L2PFA2) Z kodem kreskowym. 11,5 ml matrycy buforowanego białka, z konserwantem; 11,5 ml alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z kozim przeciwciałem poliklonalnym anty-psa w buforowanym roztworze surowicy ludzkiej, z konserwantem. Stabilny 2 8 C do daty ważności. L2KPF2: 1 klin Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina PSA wolny Kalibratory zestawu (LPFL, LPFH) Dwie fiolki (niski i wysoki) zawierające liofilizat wolnego PSA w buforowanym roztworze, z konserwantem. Zawartość każdej fiolki rekonstytuować 3,0 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Mieszać przez delikatne wytrząsanie i obracanie do momentu pełnego rozpuszczenia zawartości. Po rekonstytucji stabilne 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetowć). L2KPF2: 1 zestaw Przed wykonaniem kalibracji umocować na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Elementy zestawu dostarczane oddzielnie Multidiluent- 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Do automatycznego rozcieńczania wysokich próbek. Jedna fiolka koncentrowanej, gotowej do użycia, buforowanej matrycy białka zwierzęcego, z konserwantem. Po otwarciu stabilny 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Wraz z rozcieńczalnikiem dostarczane są nalepki z kodami kreskowymi. Nalepkę umieścić na probówce ( mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2M2Z: 3 nalepki L2M2Z4: 5 nalepek L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący L2RXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik Ponadto niezbędne Woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 23

24 systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie Próbki kontrolne: Przestrzegać przepisów państwowych i wymogów kontrolnych w zakresie częstotliwości kontroli jakości. Stosować kontrole lub pule surowic, co najmniej o niskim i wysokim poziomie wolnego PSA. Siemens Healthcare Diagnostics zaleca stosowanie dostępnych w handlu próbek kontroli jakości o co najmniej 2 poziomach (niskim i wysokim). Uznaje się, że test przebiega prawidłowo, gdy uzyskane wartości analitu plasują się w przyjętym dla Kontroli zakresie dla danego analizatora lub w zakresie opracowanym w ramach wewnątrzlaboratoryjnego systemu zapewnienia jakości. Oczekiwane wartości Opierając się na podobieństwie z testem IMMULITE PSA Wolny (patrz: Porównanie metod) można oczekiwać, że zakresy wartości referencyjnych dla obu testów będą identyczne. Zakresy referencyjny dla testu IMMULITE PSA Wolny opracowano w grupie ochotników w wieku od około 20 do 70 lat (środkowe 95%: lat, mediana: 40 lat). Stan zdrowia ochotników oceniono jajko dobry na podstawie ankiety. Badani pochodzili z Francji, Niemiec, Holandii i Portugalii. Wyniki zostały opracowane przez niezależne laboratorium w Holandii w oparciu o zastawy IMMULITE. (Krew pobierano do szklanych probówek bez antykoagulantu, bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie, oznaczenia dokonywano pojedynczo.) Mediany i górne 95% dla odpowiednich grup przedstawiono w tabeli poniżej. Wartości centyli wyliczono nieparametrycznie. Grupa Mediana 95%ile Jednostka n Mężczyźni 0,14 0,42 ng/ml 425 Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Oznaczenie poziomu wolnego PSA w surowicy nie może być traktowane jako jednoznaczny dowód na obecność lub brak choroby nowotworowej. 9 Wnioskowanie o nawrocie choroby nowotworowej gruczołu prostaty powinno się opierać na kompletnej klinicznej ocenie pacjenta, która może między innymi uwzględniać seryjne oznaczenia poziomu wolnego PSA w surowicy. Próbki do badania powinny być pobrane przed biopsją, prostatektomią lub masażem prostaty. 10 Ekspresja PSA może ulegać zmianie w terapii hormonalnej raka prostaty. W związku z tym, niskie stężenia PSA w trakcie leczenia mogą nie być adekwatne dla oceny obecności 13 szczątkowego nowotworu lub wznowy. Dokładność oznaczenia wolnego PSA nie może być oceniana w teście odzysku, w którym wzbogaca się surowicę ludzką wolnym PSA, ponieważ tworzenie się kompleksów pomiędzy wolnym PSA i białkami wiążącymi PSA (α 1 -antychymotrypsyna i α 2 -makroglobulina) na ogół wpływa na błędne zaniżenie wyników. Niektórzy pacjenci posiadają przeciwciała przeciw białku mysiemu, mogące zafałszowywać wyniki oznaczeń immunotestów, w których mysie przeciwciała zastosowane zostały jako odczynniki. Szczególnie próbki pochodzące od chorych otrzymujących w celach diagnostycznych lub terapeutycznych preparaty zawierające mysie przeciwciała monoklonalne, mogą zawierać ludzkie przeciwciała anty-mysie (HAMA) obciążające błędem oznaczenia w takich próbkach. 6,8 Dlatego wyniki IMMULITE 2000 PSA Wolny mogą być interpretowane jedynie łącznie z wynikami innych procedur diagnostycznych i informacjami uzyskanymi w wyniku klinicznej oceny badanego. 24 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

25 Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin Chem 1988:34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i na wykresach. Wyniki podano w ng/ml. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek surowicy pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Zakres raportowania: 0,07 25 ng/ml (WHO NIBSC 1 st IS 96/668) Czułość analityczna: Zakres ślepej próby (najwyższa oczekiwana wartość dla próbki bez substancji oznaczanej; obliczona jako wartość przypadająca o dwa odchylenia standardowe powyżej najniższej kalibracji): 0,02 ng/ml Granica wykrywalności: (najniższe oznaczane stężenie; określone zgodnie z CLSI EP17-A 25 ): 0,07 ng/ml Czułość funkcjonalna: (stężenie z 20% współczynnikiem zmienności (CV) określone zgodnie z CLSI EP17-A 25 ): 0,07 ng/ml Efekt wysokiej dawki Hook Effect: Nie występuje do stężenia ng/ml Precyzja: Próbki testowano przez okres 20 dni w duplikatach, dwa razy dziennie, co dało w sumie 40 serii i 80 powtórzeń (patrz: tabela Precyzja). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom (patrz: tabela Liniowość). Specyficzność: Test IMMULITE 2000 PSA Wolny jest wysoce specyficzny w stosunku do PSA, z wyjątkowo niską reaktywnościa krzyżową z innymi naturalnymi składnikami surowicy (patrz: tabela Specyficzność). Bilirubina: Obecność bilirubiny w stężeniu do 200 mg/l nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Hemoliza: Obecność krwinek czerwonych w stężeniu do 30 μl/ml nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów w ilości do 3000 mg/dl nie ma wpływu na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Rodzaje pobieranego materiału: Wpływ rodzaju próbki na oznaczenie określano w próbkach krwi pobieranych od 15 wolontariuszy do probówek systemu Vacutainer: zwykłych, z heparyną, z EDTA oraz pobówek z barierą żelową (SST) Becton Dickinson. Próbki oznaczano testem IMMULITE 2000 PSA Wolny. Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (Heparyna) = 1,04 (Surowica) 0,19 ng/ml r = 0,997 (EDTA) = 1,03 (Surowica) 0,19 ng/ml r = 0,998 (SST) = 1,08 (Zwykłe probówki) 0,28 ng/ml r = 0,99 Średnie: 37 ng/ml (Heparyna) 37 ng/ml (EDTA) 38 ng/ml (SST) 36 ng/ml (Surowica) Porównanie metod: Test porównywano z zestawem IMMULITE PSA Wolny w grupie 184 próbek. (Zakres stężeń od około 0,07 do 25 ng/ml. Wykres.) Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 1,04 (IML) 0,08 ng/ml r = 0,998 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 25

26 Średnie: 2,37 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,35 ng/ml (IMMULITE) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KPF 7 {26} Changes in this Edition: cc#eu22513: 1) Under Warnings and Precautions, added biohazard symbol and potential biohazard statement, caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 2) Under References, added citations from the potential biohazard statement. 3) Changed Origin: UK to Made in: UK. 4) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 5) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej 26 IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, )

27 Symbol Definition En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! υνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie Symbol Definition En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Health Hazard Cz: Zdravotní riziko El: Κίνδυνος για την υγεία Pl: Zagrożenie dla zdrowia En: Exclamation Mark Cz: Vykřičník El: Θαυμαστικό Pl: Wykrzyknik En: Corrosion Cz: Koroze El: ιάβρωση Pl: Działanie żrące En: Skull and Crossbones Cz: Lebka se zkříženými hnáty El: Νεκροκεφαλή με διασταυρούμενα οστά Pl: Czaszka i skrzyżowane piszczele En: Environment Cz: Prostředí El: Περιβάλλον Pl: Środowisko En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: ιατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym BEAD PACK En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami LOT En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii TEST UNIT En: Test Unit Cz: Testovací Jednotky El: Μονάδες ανάλυσης Pl: Jednostki testowe IMMULITE 2000 Free PSA (PIEL2KPF-7 {26}, ) 27