NOVA Gel TM Sm/RNP T Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση

Transcript

1 NOVA Gel TM Sm/RNP T Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση Σκοπό Χρήση Το NOVA Gel TM Sm/RNP είναι μία δοκιμασία διπλής διαχύσεως για την τιτλοποίηση και τον ημι-ποσοτικό προσδιορισμό των αυτοαντισωμάτων Sm/RNP, πυρηνικό αντιγόνο (ΕΝΑ) στον ανθρώπινο ορό. Η παρουσία των αντισωμάτων Sm/RNP μπορεί να χρησιμοποιηθεί από κοινού με άλλες ορολογικές εξετάσεις και κλινικά ευρήματα για να βοηθήσουν στην διάγνωση Συστηματικού Ερυθηματώδους Λύκου (SLE) και άλλες ασθένειες του συνδετικού ιστού. Επεξήγηση της μεθόδου Ο όρος «Anti-nuclear antibodies» (ΑΝΑ) (αντιπυρηνικά αντισώματα) περιγράφει μια ποικιλία αυτοαντισωμάτων που αντιδρούν με συστατικά κυτταρικών πυρήνων που περιλαμβανομένων των DNA, RNA και διάφορες πρωτεϊνες και ριβοπυρηνοπρωτείνες 1. Αυτά τα αντισώματα απαντώνται με υψηλή συχνότητα σε ασθένειες του συνδετικού ιστού ή ρευματικές ασθένειες, ειδικά το SLE. Κατ ουσίαν όλοι οι ασθενείς με SLE είναι θετικοί στο ΑΝΑ. Αυτή η διαγνωστική ευαισθησία έχει οδηγήσει στην ενσωμάτωση των εξετάσεων για ΑΝΑ απο την υπο-επιτροπή Αρθρίτιδας και Ρευματισμών το 1982 για τα επαναληπτικά κριτήρια του συστηματικού ερυθηματώδoυς λύκου (SLE). 2 Ενώ οι εξετάσεις ΑΝΑ είναι ένα εξαιρετικός ομαδικός έλεγχος για το SLE (ένα αρνητικό αποτέλεσμα στην ουσία εξαιρεί το ενεργό SLE 3 ) δεν είναι με κανένα τρόπο ειδική δοκιμασία. Η πρακτική στην διάγνωση και τον χειρισμό των ασθενειών του συνδετικού ιστού είναι να συνδυάζεται ο ομαδικός έλεγχος για ΑΝΑ με περισσότερες ειδικές εξετάσεις όπως το dsdna και\ή το ΕΝΑ. Οι νεότερες ΕΝΑ εξετάσεις γίνονται ιδιαίτερα σημαντικές αφού παρέχουν και διαγνωστικές και προγνωστικές πληροφορίες. Τα αντισώματα έναντι του αντιγόνου Sm είναι πολύ ειδικά για το ΣΕΛ και θεωρούνται αντισώματα δείκτες, όπως συμβαίνει με τα αντισώματα έναντι του dsdna (δίκλωνου dsdna). Τα αντισώματα έναντι του Sm έχουν συμπεριληφθεί στα κριτήρια της επιτροπής για την Αρθρίτιδα και τον Ρευματισμό για την ταξινόμηση του ΣΕΛ. 2 Τα αυτοαντισώματα έναντι του RNP βρίσκονται σε πάσχοντες από ΣΕΛ και επίσης από άλλα νοσήματα του συνδετικού ιστού. 1,2,4 Τα αυτοαντισώματα έναντι του RNP συσχετίζονται με σχετικά καλοήθη πορεία του νοσήματος με μικρότερη συχνότητα εμφάνισης νεφρικού νοσήματος, ενώ οι ασθενείς με αντίσωμα Sm παρουσιάζουν μεγαλύτερη συχνότητα εμφάνισης νεφρικού νοσήματος και εμπλοκής του κεντρικού νευρικού συστήματος. 5-7 ΑΡΧΗ ΜΕΘΟΔΟΥ Αρχές της διαδικασίας Η δοκιμασία διπλής διάχυσης που περιγράφεται από τον Ouchterlony 8, επιτρέπει σε ένα διάλυμα αντιγόνου να διαχυθεί παθητικά μέσα από ένα υπόστρωμα ζελέ κατευθείαν προς το δείγμα του ασθενή και\ή στον πρότυπο ορό που περιέχει αντισώματα. Ειδικά μορφοποιημένες πλάκες με υπόστρωμα από ζελέ χρησιμεύουν ως θέσεις από τις οποίες το διάλυμα του αντιγόνου και το διάλυμα του αντισώματος διαχέονται το ένα στο άλλο. Στο σημείο της ισότητας αντιγόνου-αντισώματος, μια ορατή γραμμή ιζηματίνης σχηματίζεται μέσα στο ζελέ. Η ανοσολογική κατάσταση ενός ασθενή μπορεί τότε να καθοριστεί με τήν παρατήρηση του τύπου των συνορευόντων γραμμών ιζηματίνης που σχηματίστηκαν μέσα στο ζελέ από ένα δείγμα πρότυπου ορού γνωστής ειδικότητας και ενός άγνωστου ορού ασθενή. Η τεχνική της διπλής διαχύσεως μπορεί να χρησιμοποιηθεί με προετοιμασία κεκαθαρμένου Sm/RNP, ένα γνωστό δείγμα πρότυπου ορού αυτοαντισώματος Sm ή RNP και έναν ορό ασθενή, για τον οποίο υπάρχουν υποψίες ότι περιέχει αυτοαντισώματα Sm και/ή RNP, για να δείξει την ανοσολογική σχέση η μή. Η επιβεβαίωση της δράσης του αυτοαντισώματος Sm και/ή RNP στον ορό του ασθενή,πιστοποιείται εάν η γραμμή ιζηματίνης συγχωνεύεται χαρακτηριστικά με τη γραμμη που σχηματίστηκε από το δείγμα του γνωστού πρότυπου ορού. Σε συγκεκριμένες περιπτώσεις είναι επιθυμητός ο ημι-ποσοτικός καθορισμός της ποσότητας του αντισώματος Sm και/ή RNP στον ορό του ασθενή. Σε αυτές τις περιπτώσεις η πλάκα του NOVA Gel T μπορεί να χρησιμεύσει στην ανάλυση με διαδοχικές αραιώσεις του δείγματος. Η υψηλότερη αραίωση η οποία 1

2 σχηματίζει μια γραμμή ιζηματίνης μπορεί τότε να αναφερθεί ως ο τίτλος του αντισώματος Sm και/ή RNP για τον ασθενή.σωστές διαδικασίες διπλής διάχυσης σε διάφορες συγκεντρώσεις αντιγόνου-αντισώματος με σκοπό να αποφευχθεί υπερβολή αντιγόνου ή αντισώματος. Λανθασμένος ή παραπλανητικός σχηματισμός γραμμής ιζηματίνης μπορεί να προκληθεί από την υπερβολή του αντιγόνου ή αντισώματος. Για να αποφευχθεί αυτό, θα πρέπει να αναλύονται αραιώσεις του ορού του ασθενή σε δοκιμασία με την ίδια προετοιμασία του αντιγόνου. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί με σύμπραξη ενώ τιτλοποιείται το δείγμα του ασθενή στην πλάκα NOVA Gel T. Αντιδραστήρια 1. Πλάκες με ζελέ NOVA Gel T με 7 πηγαδάκια η καθεμιά, που περιέχουν σταθεροποιητές και 0.09% αζωτούχο νάτριο ml αντιγόνο Sm/RNP(από γαστροκνημία θύμωνος αδένος) που έχει διαλυθεί σε ρυθμιστικό διάλυμα, το οποίο περιέχει σταθεροποιητές και 0.09% αζωτούχο νάτριο ml Sm ανθρώπινος πρότυπος ορός, που περιέχει αυτοαντισώματα Sm/RNPσε ρυθμιστικό διάλυμα, το οποίο περιέχει 0.09% αζωτούχο νάτριο ml RNP ανθρώπινος πρότυπος ορός, που περιέχει αυτοαντισώματα Sm/RNPσε ρυθμιστικό διάλυμα, το οποίο περιέχει 0.09% αζωτούχο νάτριο. Προειδοποίησεις 1. Όλα τα ανθρώπινα υλικά που χρησιμοποιήθηκαν στην προετοιμασία των πρότυπων ορών για αυτό το προϊόν έχουν εξεταστεί και βρέθηκαν αρνητικά για αντισώματα HIV, HbsAg και HCV από εγκεκριμένες μεθόδους FDA. Ωστόσο, καμιά δοκιμασμένη μέθοδος δεν μπορεί να προσφέρει απόλυτη ασφάλεια ότι οι HIV, HBV, HCV ή άλλοι μολυσματικοί παράγοντες είναι απόντες. Για αυτό το λόγο, ο πρότυπου ορού Sm και RNP θα πρέπει να μεταχειρίζεται με τον ίδιο τρόπο όπως ένα πιθανό μολυσματικό προϊόν Το Αζωτούχο Νάτριο χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Το Αζωτούχο Νάτριο είναι δηλητήριο και μπορεί να είναι τοξικό εάν καταπωθεί ή απορροφηθεί από το δέρμα ή τα μάτια. Το Αζωτούχο Νάτριο μπορεί να αντιδράσει με σωληνώσεις από μόλυβδο ή χαλκό και να σχηματίσει πιθανά εκρηκτικά αζωτούχα μέταλλα. Να ξεπλύνετε τους νεροχύτες, εάν χρησιμοποιούνται για απόρριψη αντιδραστηρίων, με μεγάλες ποσότητες νερού για να εμποδίσετε το άζωτο να συσσωρευτεί σιγά-σιγά. 3. Να χρησιμοποιείτε τον κατάλληλο προσωπικό προστατευτικό εξοπλισμό ενώ δουλεύετε με τα παρεχόμενα αντιδραστήρια. 4. Χυμένα αντιδραστήρια πρέπει να καθαρίζονται αμέσως. Να προσέχετε όλους τους ενίοτε ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς περιβαντολογικούς κανόνες όταν πετάτε τα απόβλητα. Προφυλάξεις 1. Αυτό το προϊόν είναι για διαγνωστική χρήση In Vitro. 2. Η υποκατάσταση των συστατικών με άλλα από αυτά που παρέχονται σε αυτή τη συσκευασία μπορεί να οδηγήσουν σε αντιφατικά αποτελέσματα. 3. Συνιστάται ότι το αποστειρωμένο αποσταγμένο ή διιονισμένο νερό να χρησιμοποιείται για ανασύσταση του αντιγόνου. 4. Μια ποικιλία από παράγοντες επηρεάζουν την διαδικασία της ανάλυσης. Αυτοί περιλαμβάνουν την αρχική θερμοκρασία των αντιδραστηρίων, την παρεμπόδιση να επιπλέουν τα αντιδραστήρια ή τα δείγματα των ασθενών στις πλάκες και την ποιότητα του νερού που χρησιμοποιείται για να ενυδατώσει το αντιγόνο. Απαιτείται μεγάλη προσοχή στην περιεκτικότητα για να επιτευχθούν ακριβή και επαναλαμβανόμενα αποτελέσματα. 5. Συνιστάται αυστηρή προσκόλληση στο πρωτόκολλο. Συνθήκες Φύλαξης Να φυλάτε όλα τα κιτ στους 2-8 ο C. Μην τα καταψύχετε. Τα αντιδραστήρια είναι σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης όταν φυλάσσονται και μεταχειρίζονται όπως πρέπει. Μόλις ενυδατωθεί το αντιγόνο είναι σταθερό για 2 εβδομάδες στους 2-8 ο C. Εάν επιθυμείτε, μπορείτε να ετοιμάσετε 100μL αντιγόνου και να το φυλάξετε στους -70 ο C. Το αντιγόνο που είναι αποθηκευμένο με αυτό τον τρόπο είναι σταθερό για ένα χρόνο τουλάχιστον. 2

3 Συλλογή Δειγμάτων Αυτή η διαδικασία θα πρέπει να γίνει με δείγμα ορού. Προσθήκη αζώτου ή άλλων συντηρητικών στα εξεταζόμενα δείγματα μπορεί να επηρεάσει τα αποτελέσματα. Δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται μικροβιακά μολυσμένα δείγματα, δείγματα που έχουν υποστεί αλλαγές θερμοκρασίας, ή δείγματα που περιέχουν ορατά σωματίδια. Θα πρέπει να αποφεύγονται αιμολυτικά ή λιπεμικά δείγματα ορού. Σε συνέχεια της συλλογής, ο ορός πρέπει να χωρίζεται από το πήγμα. Το NCCLS Document Η18-Α2 συνιστά τις ακόλουθες συνθήκες φύλαξης για τα δείγματα: 1) Φυλάξτε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου όχι περισσότερο από 8 ώρες. 2) Εάν η διαδικασία δεν ολοκληρωθεί μέσα σε 8 ώρες, καταψύξτε το δείγμα στους 2-8 ο C. 3) Εάν η διαδικασία δεν ολοκληρωθεί μέσα σε 48 ώρες, ή απαιτείται η αποστολή του δείγματος, καταψύξτε στους 20 ο C ή χαμηλότερα. Τα κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να ανακατευτούν καλά μετά την τήξη και πριν την εξέταση. Διαδικασία Υλικά που παρέχονται 8 πλάκες NOVA Gel τιτλοποιημένες T ml Sm/RNP αντιγόνο, πρός ανασύσταση ml Sm Πρότυπος όρός ml RNP Πρότυπος όρός Επιπλέον Υλικά που Χρειάζονται Αλλά Δεν Παρέχονται Μικροπιπέτες για μεταφορά όγκου μl Ρύγχη μικροπιπετών 0.85% Χλωριούχο Νάτριο Αποσταγμένο ή διιονισμένο νερό (αποστειρωμένο) Πηγή φωτός ή κουτί παρατήρησης με ζελέ Μέθοδος 1. Ανασύσταση του αντιγόνου Ανοίξτε προσεκτικά μια φιάλη αντιγόνου και προσθέστε 0.4 ml αποσταγμένου ή διιονισμένου νερού στο αντιγόνο. Συνιστάται αυστηρά αποστειρωμένο αποσταγμένο ή διιονισμένο νερό για την καλύτερη εκτέλεση του προϊόντος. Αφήστε το ενυδατωμένο αντιγόνο να μείνει για 5 λεπτά, μετά στροβιλίστε για να ανακατευτεί διεξοδικά πριν τη χρήση. 2. Διανομή στην πλάκα Ετοιμάστε διαδοχικές αραιώσεις του δείγματος σε 0.85% χλωριούχο νάτριο(saline). Γεμίστε τις πλάκες με αντιγόνο (περίπου 80μL), πρότυπο ορό (περίπου 80μL), και διαλύματα από δείγμα ασθενή (περίπου 80μL) όπως φαίνεται. Δεν είναι κρίσιμες οι ακριβείς ποσότητες διανομής. Ωστόσο ΜΗΝ ΥΠΕΡΧΕΙΛΙΖΕΤΕ ΤΙΣ ΠΛΑΚΕΣ. Ο πρότυπος ορός μπορεί να διανεμιθεί απευθείας από τα πλαστικά μπουκαλάκια ή τις μικροπιπέτες. Εάν χρησιμοποιήσετε πιεζόμενα μπουκάλια, τοποθετείστε την μύτη μέσα στο πηγαδάκι και σιγά-σιγά πιέστε μέχρις ότου το επίπεδο του πρότυπου ορου πλησιάσει την κορυφή του πηγαδιού. Σκεπάστε την πλάκα αμέσως μετά το γέμισμα. 3. Επώαση Αφήστε την καλυμμένη πλάκα για επώαση σε θερμοκρασία δωματίου πάνω σε μια σταθερή, επίπεδη επιφάνεια για 24 ώρες. Εξετάστε την πλάκα και παρατηρείστε αν δημιουργούνται γραμμές ιζηματίνης ανάμεσα στο δείγμα του ασθενή και στο αντιγόνο. Εξετάστε την σχέση αυτής της γραμμής με τη 3

4 γραμμή ιζηματίνης οποιουδήποτε πρότυπου ορου. Εξετάστε την πλάκα ξανά στις 48 ώρες για να ελέγξετε αν έχουν δημιουργηθεί άλλες νέες γραμμές πριν την τελική ερμηνεία των αποτελεσμάτων. Έλεγχος Ποιότητας Ο πρότυπος ορός Sm και/ή RNP θα πρέπει να εφαρμόζεται σε κάθε πλάκα για να εξασφαλιστεί ότι όλα τα αντιδραστήρια και οι διαδικασίες έχουν γίνει σωστά. Πρόσθετοι κατάλληλοι οροί ελέγχου μπορούν να ανασυσταθούν διαιρώντας σε υποπολλαπλάσια δείγμα ανθρώπινου ορού πολλαπλών δοτών και αποθηκεύοντας σε θερμοκρασία < -70 C. Για να είναι τα αποτελέσματα των εξετάσεων έγκυρα, πρέπει να φαίνεται μια γραμμή ιζηματίνης ανάμεσα στο Sm και/ή RNP και Sm/RNP αντιγόνο. Ερμηνεία των Αποτελεσμάτων Για καλύτερη παρατήρηση των γραμμών ιζηματίνης, συνιστάται η παρακάτω διαδικασία: 1. Βγάλτε το καπάκι τη πλάκας. 2. Κρατείστε την πλάκα σε τέτοια θέση που να ελαχιστοποιεί τον αντικατοπτρισμό της επιφάνειας του ζελέ. 3. Φωτίστε την πλάκα από το πλάι (π.χ. παράλληλα στην επιφάνεια του ζελέ). Σημείωση: Να είστε βέβαιος ότι η πηγή φωτός προστατεύεται από την άμεση άποψη. 4. Οι γραμμές ιζηματίνης φαίνονται καλύτερα όταν κάνουν αντίθεση με ένα μαύρο φόντο και τις βλέπετε υπό γωνία. 5. Ένας μεγεθυντικός φακός μπορεί να βοηθήσει στην παρακολούθηση των ελαφρά ορατών γραμμών ή στον εντοπισμό των μη-αναγνωρίσιμων δειγμάτων. Αρνητική Αντίδραση. Ένα δείγμα θεωρείται αρνητικό εάν δεν σχηματίζεται ορατή γραμμή ιζηματίνης ανάμεσα στα πηγαδάκια του ασθενή και στο πηγαδάκι του αντιγόνου μετά από 48 ώρες. Ερμηνεία της Ακρίβειας. Στην διπλή διάχυση, η ακρίβεια καθορίζεται σημειώνοντας τη σχέση των γραμμών ιζηματίνης του δείγματος με τις γνωστές γραμμές του πρότυπου ορού. Οι παρακάτω δυνατότητες μπορεί να συμβούν με το τεστ του NOVA Gel TM Sm/RNP: Fig. 1: Μη αναγνωρίσιμο Fig. 2: Sm : Αναγνωρίσιμο Η γραμμή ιζηματίνης ασθενούς διασταυρώνεται ή δείχνει μη ταυτότητα τόσο με τον ορό ελέγχου Sm όσο και με τον RNP. Αυτό υποδεικνύει ότι ο ασθενής αντιδρά με ένα αντιγόνο ENA διαφορετικό από Sm ή RNP. Η γραμμή ιζηματίνης ασθενούς συγχωνεύεται ή δείχνει ταυτότητα με τη γραμμή ελέγχου Sm. Σε αυτήν την περίπτωση, ο ασθενής έχει αυτοαντισώματα σε Sm. Ο τίτλος του δείγματος είναι ισοδύναμος με το αντίστροφο της υψηλότερης αραίωσης η οποία δημιουργεί μια γραμμή ιζηματίνης με το αντιγόνο. Στην περίπτωση αυτή, ο ασθενείς μπορεί να θεωρηθεί ότι έχει αντίσωμα σε Sm και τίτλο 8. 4

5 Fig. 3: RNP Αναγνωρίσιμο Fig. 4: Sm ή RNP Αναγνωρίσιμο Η γραμμή ιζηματίνης ασθενούς συγχωνεύεται ή δείχνει ταυτότητα με τη γραμμή ελέγχου RNP. Στην περίπτωση αυτή, ο ασθενής μπορεί να θεωρηθεί ότι έχει αντίσωμα σε RNP και τίτλο 4. Σημειώστε την αιχμή με τον ορό ελέγχου Sm. Αυτό είναι μη-ταυτότητας για Sm. Δείχνει μερική ταυτότητα με το τμήμα RNP του ορού ελέγχου Sm. Ο ασθενής έχει 2 γραμμές ιζηματίνης. Η μία από τις γραμμές δείχνει ταυτότητα με Sm και η άλλη με RNP. Αυτός ο ασθενής μπορεί να θεωρηθεί ότι έχει αντισώματα τόσο σε Sm όσο και σε RNP με τίτλο Sm 2 και τίτλο RNP 4. Όρια της Διαδικασίας 1. Παρόλο που δεν είναι πιθανό με αυτή τη δοκιμασία, λόγω της διαδοχικής αραίωσης του δείγματος, υπάρχει μια πιθανότητα να δημιουργηθούν προζώνες. Οι προζώνες δημιουργούνται όταν υπάρχει μια περίσσια ποσότητα από αυτοαντισώματα ασθενή σχετικά με το αντιγόνο προκαλώντας έτσι το σχηματιστισμό γραμμής ιζηματίνης στο πηγαδάκι του αντιγόνου. Σε αυτές τις περιπτώσεις συνιστάται η επανεξέταση των πιθανών θετικών δειγμάτων σε υψηλότερες αραιώσεις σε αλατούχο διάλυμα, για να αποτραπεί μια ψευδής αρνητική ερμηνεία του τεστ. 2. Εάν χρησιμοποιηθεί μη-αποστειρωμένο ή μολυσμένο νερό για να ενυδατωθεί το αντιγόνο, τότε το αντιγόνο μπορεί να υποστεί άμεσο ή βαθμιαίο υποβιβασμό. Σε αυτή την περίπτωση μπορεί ως αποτέλεσμα να είναι μια πολύ λεπτή γραμμή ιζηματίνης ή και απουσία γραμμή. 3. Ο ορός ελέγχου Sm Control δεν είναι μονοειδικός και μπορεί να περιέχει ορισμένα RNP. Ο ορός ελέγχου Sm θα δείξει μερική ταυτότητα με έναν ασθενή ή ορό ελέγχου RNP. 4. Είναι δυνατό να παρατηρηθεί μια αιχμή που δείχνει προς την κοιλότητα ορού ελέγχου RNP με έναν ορό ο οποίος δείχνει ταυτότητα με τον ορό ελέγχου Sm. Αυτό μπορεί να υποδηλώνει την παρουσία αντισωμάτων RNP στον ορό ασθενούς αντι-sm. 5. Τα αποτελέσματα αυτής της δοκιμασίαςθα πρέπει να χρησιμοποιηθούν σε συνδυασμό με κλινικά ευρήματα και άλλες ορολογικές εξετάσεις. 6. Τα χαρακτηριστικά της διαδικασίας ισχύουν για ορό. Αναμενόμενες Τιμές Το τεστ διπλής διαχύσεως NOVA Gel TM Sm/RNP χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει ποικίλους ασθενείς με ασθένεια των συνδετικών ιστών, καθώς επίσης και 200 τυχαίους αιμοδότες. Τα αποτελέσματα φαίνονται παρακάτω: Ομάδα Ασθενών Αριθμός Αριθμός Θετικών με το τεστ NOVA Gel ΤΜ ENA Θετικά Sm Θετικά RNP Συστηματικού Ερυθηματώδους Λύκου Φαρμακοεπαγώμενος Λύκος ρευματοειδούς αρθρίτιδας σκληροδέρματος Δερματομυοσίτιδα Σύνδρομο του Sjogen Κανονικοί

6 Βιβλιογραφία 1. Tan E. Autoantibodies to nuclear antigens (ANA): Their immunobiology and medicine. Advances in Immunology 33: , Tan E, et al. The 1982 Revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus. Arthritis and Rheumatism 25: , Casalo SP, Friou GJ, Myers LL. Significance of antibody to DNA in systemic lupus erythematosus. Arthritis and Rheumatism 7: , Reichlin M, Maddison PJ. Soluble tissue autoantigens which precipitate with sera of patients with connective tissue diseases. In Immunopathology of the Skin, 2nd ed. (EH Beutner, TP Chorzelski, SF Bean, eds) John Wiley and Sons, NY, pp , Reichlin M, Mattioli M. Correlation of a precipitin reaction to an RNA protein antigen and a low prevalence of nephritis in patients with systemic lupus erythematosus. New England Journal of Medicine 286: , Barada FA, Andrews BS, Davis JS, Taylor RP. Antibodies to Sm in patients with systemic lupus erythematosus. Arthritis and Rheumatism 24: , Winn DM, Wolfe JF, Lindberg DA, Fristoe FH, Kingsland L, Sharp GC. Identification of a clinical subset of systemic lupus erythematosus by antibodies to the Sm antigen. Arthritis and Rheumatism 22: , Ouchterlony O: Diffusion-in-gel methods for immunological analysis. Prog Allergy 5:1, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 1999 Fourth Edition (HHS Pub. # (CDC) ). Κατασκευαστής: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Aντιπροσωπευτικός: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: Technical Service December 2007 Revision GRC11 6