QUANTA Plex TM SLE Profile Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

Transcript

1 QUANTA Plex TM SLE Profile Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός Σκοπό Χρήση Το QUANTA Plex SLE Profile 8 είναι μια ανοσολογική ανάλυση φθορισμού για την ημι-ποσοτική ανίχνευση των αυτοαντισωμάτων Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, Ribosome P και Chromatin σε ανθρώπινο ορό. Η παρουσία αυτών των αντισωμάτων μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με κλινικά ευρήματα κι άλλες εργαστηριακές εξετάσεις, συνδράμοντας στη διάγνωση της αυτοάνοσου αγγειίτιδας, συστηματικός ερυθηματώδης λύκος (ΣΕΛ) και σχετιζόμενες νόσοι του συνδετικού ιστού, σύνδρομο του Sjögren, σκληροδερμία και πολυμυοσίτιδα. Περιληψη Και Αρχη Μεθοδου Αντιπυρηνικά αυτοαντισώματα (ANA) απαντώνται σε ένα ευρύ φάσμα νόσων του συνδετικού ιστού. Η δοκιμασία για ANA σε κύτταρα HEp-2 ή μια ANA ELISA χρησιμεύει ως μια ευαίσθητη ανάλυση διαλογής. 1 Παρά το γεγονός ότι η δοκιμασία ANA αποτελεί μια άριστη δοκιμασία διαλογής για συστηματικό ερυθηματώδη λύκο (ΣΕΛ), δεδομένου ότι ένα αρνητικό αποτέλεσμα αποκλείει με βεβαιότητα τον ενεργό ΣΕΛ 2, δεν αποτελεί ειδική δοκιμασία. Η δοκιμασία παρακολούθησης διενεργείται τυπικά σε ορούς οι οποίοι δίνουν θετικά αποτελέσματα ANA. Εννέα από τα συχνότερα αυτοαντισώματα αντιδρούν ειδικά με αυτοαντισώματα Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, ριβοσώματος P και χρωματίνης. Αυτοαντισώματα σε αυτά τα αυτοαντιγόνα μπορούν να συνεισφέρουν σημαντικές διαγνωστικές και προγνωστικές πληροφορίες, κατά την αξιολόγηση ασθενών με υποψία μιας ποικιλίας νόσων του συνδετικού ιστού, όπως ΣΕΛ 2, σύνδρομο του Sjögren 3, σκληροδερμία 4 και πολυμυοσίτιδα 5. Αυτοαντισώματα σε Sm, RNP, SS-A 52, SS-A 60, ριβόσωμα P και χρωματίνη απαντώνται σε ασθενείς με ΣΕΛ 1,6,7, αντι-ss-a 52, SS- A 60 και SS-B απαντώνται σε άτομα με σύνδρομο του Sjögren 3,8, αντι-scl-70 και SS-A 52 σε ασθενείς με σκληροδερμία 4,9, και αντι-jo-1 και SS-A 52 σε ασθενείς με πολυμυοσίτιδα. 5,8,9 Μια ποικιλία μεθόδων, συμπεριλαμβανομένων των ELISA, διπλής διάχυσης Ouchterlony, Western blot και θετικής συγκόλλησης, χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση αντισωμάτων σε Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, ριβόσωμα P και χρωματίνη. Η τεχνική ανοσοπροσδιορισμού φθορισμού (FIA) η οποία χρησιμοποιείται από το QUANTA Plex SLE Profile 8 είναι αντικειμενική, ημι-ποσοτική και μπορεί να χρησιμοποιηθεί εύκολα για την ταυτόχρονη δοκιμασία ενός μεγάλου αριθμού ασθενών. Ημι-ποσοτικά αποτελέσματα λαμβάνονται για κάθε αντιδραστικότητα αυτοαντισώματος. Αρχη Μεθοδου Αμιγές Sm, RNP, SS-B, Scl-70, SS-A 60 και χρωματίνη από θύμο μόσχου, ανασυνδυασμένο Jo-1 και SS-A 52, και συνθετικό πεπτίδιο 23 αμινοξέων από την ακολουθία ριβοσώματος P δεσμεύονται το καθένα σε διαφορετικούς, χρωματισμένους με φθορισμό κόμβους. Αναφέρθηκε ότι αυτοαντισώματα τόσο σε SS-A 60 όσο και σε SS-A 52 είναι διαγνωστικά σημαντικά. 8,9 Οι εννέα διαφορετικοί επικαλυμμένοι με αντιγόνο κόμβοι, καθώς και ένας αντι-igg κόμβος ελέγχου, αναμιγνύονται μαζί και τοποθετούνται στα πηγαδάκια μιας μικροπλάκας υπό συνθήκες οι οποίες διατηρούν τα αντιγόνα στην αντιδραστική τους κατάσταση. Προαραιωμένα διαλύματα ελέγχου και αραιωμένοι οροί ασθενών προστίθενται σε ξεχωριστά μικροπηγαδάκια, επιτρέποντας σε οποιαδήποτε παρόντα αυτοαντισώματα Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, ριβοσώματος P και χρωματίνης να δεσμευτούν στο ακινητοποιημένο αντιγόνο. Στη συνέχεια, μια αντιανθρώπινη IgG συζευγμένη σε ένα φθορίζοντα ανιχνευτή προστίθεται σε κάθε μικροπηγαδάκι. Μια δεύτερη επώαση επιτρέπει στο φθορίζον σύζευγμα αντι-ανθρώπινης IgG να συνδεθεί σε οποιαδήποτε αυτοαντισώματα του ασθενούς έχουν προσαρτηθεί στο αντιγόνο των κόμβων. Τα δείγματα στη συνέχεια μετρώνται στον αναλυτή ροής Luminex 100 ή 200. Αυτό το αναλυτής ροής μπορεί να διακρίνει το χρώμα του κάθε κόμβου από τα άλλα, καθώς και να μετρά την ένταση φθορισμού του συζεύγματος σε κάθε κόμβο. 10 Η ένταση φθορισμού του συζεύγματος είναι ανάλογη με την ποσότητα της σεσημασμένης αντι-ανθρώπινης IgG που είναι δεσμευμένη στα αυτοαντισώματα του ασθενούς στον κόμβο. Τα αυτοαντισώματα μπορούν να προσδιοριστούν ημι-ποσοτικά, συγκρίνοντας την ένταση φθορισμού του δείγματος του ασθενούς με τον φθορισμό του αντίστοιχου διαλύματος βαθμονόμησης. Ο επικαλυμμένος με αντι-igg κόμβος ελέγχου συμπεριλαμβάνεται σε κάθε μικροπηγαδάκι, διασφαλίζοντας την ανίχνευση τυχόν ψευδών αρνητικών αποτελεσμάτων λόγω λειτουργικών σφαλμάτων. Αντιδραστηρια 1. Πλάκα μικροκοιλοτήτων πολυστυρενίου, 12 ταινίες (1 x 8) μικροκοιλοτήτων με θήκη, που περιέχουν κόμβους 10 διαφορετικών χρωμάτων. Καθένας από τους χρωματισμένους κόμβους είναι επικαλυμμένος με ένα διαφορετικό καθαρό αντιγόνο (Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, Ribosome P, Chromatin και έναν ορό ελέγχου αντι IgG), σε αλουμινένια συσκευασία που περιέχει αφυγραντικά μέσα. 2. QUANTA Plex Negative Control, 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος που περιέχει συντηρητικό και ανθρώπινο ορό με μη ανθρώπινα αντισώματα IgG στα Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, Ribosome P και Chromatin αντιγόνα στο SLE Profile 8, προαραιωμένος, έτοιμος προς χρήση, 1.2mL 3. SLE Profile 8 Calibrator, 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος που περιέχει συντηρητικό και αντισώματα ανθρώπινου ορού στα αντιγόνα Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, Ribosome P και Chromatin, προαραιωμένο, έτοιμος προς χρήση, 1.2mL 4. SLE Profile 8 Positive Control, 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος που περιέχει συντηρητικό και αντισώματα ανθρώπινου ορού στα αντιγόνα Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, 1

2 Ribosome P και Chromatin, προαραιωμένο, έτοιμος προς χρήση 1.2mL 5. HRP αραιωτικό δείγματος, 1 φιαλίδιο - χρώματος ροζ, που περιέχει αλατούχο διάλυμα με ρυθμιστικό Tris, Tween 20, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικά, 50mL 6. Σύζευγμα IgG σεσημασμένο με φθορισμό (κατσίκας), αντιανθρώπινη IgG (fc ειδική), 1 φιαλίδιο χρώματος κεχριμπαρί - λυοφιλοποιημένη σκόνη, που περιέχει ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικά. Ανατρέξτε στο τμήμα Μεθόδων για οδηγίες ανασύστασης. 7. QUANTA Plex Conjugate Diluent, 1 φιαλίδιο - χρώματος ροζ, που περιέχει ρυθμιστικό διάλυμα, στεθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικά, 7mL Προσοχή 1. Το προϊόν αυτό περιέχει μια χημική ουσία (0.02% chloramphenicol) που θεωρείται καρκινογενή. 2. Όλα τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας των μαρτύρων αυτού του προϊόντος έχουν ελεγχθεί και είναι αρνητικά για αντισώματα έναντι HIV, HBsAg, HCV όπως ορίζεται από τους κανονισμούς του FDA. Καμία μέθοδος πάντως δεν είναι σε θέση να αποκλείσει την παντελή απουσία μολυσματικών παραγόντων όπως και για HIV, HBV, HCV. Γι αυτό και όλοι οι ανθρώπινης προέλευσης μάρτυρες θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως δυνητικά μολυσματικά υλικά Το αζίδιο του νατρίου χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Όταν απορρίπτονται τα αντιδραστήρια να ρίχνεται μεγάλη ποσότητα νερού έτσι ώστε να αποφεύγεται η συσσώρευση κατάλοιπων στις υδραυλικές εγκαταστάσεις. Το αζίδιο του νατρίου είναι δηλητήριο και μπορεί να είναι τοξικό σε περίπτωση κατάποσης. 4. Να χρησιμοποιείτε τον κατάλληλο προστατευτικό εξοπλισμό όταν δουλεύετε με τα αντιδραστήρια. 5. Να ακολουθούνται όλοι οι κανονισμοί και νόμιμες διαδικασίες για την απόρριψη των αποβλήτων. Ειδικα Μετρα 1. Αυτό το προϊόν είναι για διαγνωστική χρήση In Vitro. 2. Η προσθήκη αζιδίου ή άλλων συντηρητικών στα δείγματα ορού μπορεί να επηρεάσουν τα αποτελέσματα. 3. Η προσαρμογή αυτής της ανάλυσης για χρήση με ορισμένους αυτόματους επεξεργαστές υγρού δείγματος κατέδειξε ότι δίνει ισοδύναμα αποτελέσματα με εκείνα που λαμβάνονται με χρήση της χειροκίνητης διαδικασίας. Αποτελεί ευθύνη του κάθε εργαστηρίου να αξιολογεί ότι η αυτόματη διαδικασία δίνει αποτελέσματα δοκιμασίας εντός των αποδεκτών ορίων. 4. Η απόδοση της ανάλυσης επηρεάζεται από μια ποικιλία παραγόντων. Αυτοί συμπεριλαμβάνουν τη θερμοκρασία εκκίνησης των αντιδραστηρίων, τη θερμοκρασία του περιβάλλοντος, την ακρίβεια και επαναληψιμότητα της τεχνικής χορήγησης με πιπέττα, την επαναληψιμότητα της τεχνικής ανάμιξης, το αναλυτή ροής Luminex 100 ή 200 που χρησιμοποιείται για τη μέτρηση των αποτελεσμάτων και τη διάρκεια των χρόνων επώασης κατά την ανάλυση. Η προσοχή στη συνάφεια είναι σημαντική για την ακρίβεια και επαναληψιμότητα των αποτελεσμάτων. 5. Συνιστάται η ακριβής τήρηση του πρωτοκόλλου. 6. Ανεπαρκής συντήρηση της μικροπλάκας(κλείσιμο της αχρησιμοποίητης πλάκας) μπορεί να προκαλέσει αποδομή του συνδεδεμένου αντιγόνου και αποτελέσματα χαμηλής ακρίβειας. 7. Είναι δυνατό να παρατηρηθεί μη αποδεκτά χαμηλός φθορισμός μετά από πολλαπλές χρήσεις από ένα μεμονωμένο φιαλίδιο φθορίζοντος συζεύγματος κατά τη διάρκεια ενός χρονικού διαστήματος. Για να αποφευχθεί αυτό, είναι σημαντικό να τηρούνται όλες οι συνιστώμενες διαδικασίες χειρισμού φθορίζοντος συζεύγματος. 8. Η χημική μόλυνση του φθορίζοντος συζεύγματος μπορεί να προέρχεται από τον ακατάλληλο καθαρισμό ή ξέπλυμα του εξοπλισμού ή των οργάνων. Κατάλοιπα από συνήθη εργαστηριακά χημικά, όπως φορμαλίνη, λευκαντικό, αιθανόλη ή απορρυπαντικό προκαλούν υποβάθμιση του φθορίζοντος συζεύγματος με την πάροδο του χρόνου. Ξεπλένετε τελείως όλον τον εξοπλισμό ή τα όργανα με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό μετά τη χρήση χημικών καθαριστικών/απολυμαντικών. Αποθήκευση 1. Αποθηκεύσατε τα αντιδραστήρια στους 2-8 ο C. Να μήν παγώνουν. Είναι σταθερά για χρήση μέχρι τη λήξη τους εάν αποθηκεύονται συμφωνα με τις οδηγίες. 2. Οι μη χρησιμοποιούμενες σειρές επικαλυμένων με αντιγόνο πηγαδιών πρέπει να ασφαλίζονται στην αλουμινένια συσκευασία τους,η οποία περιέχει απορροφητικό υγρασίας, και να φυλάσονται στούς 2-8 ο C. Δείγματα Η διαδικασία μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο με δείγματα ορού. Η προσθήκη αζιδίου η άλλων συντηριτικών στο υποό έλεγχο δείγμα μπορεί να επιρεάσει τα αποτελέσματα.μικροβιακή μόλυνση, θέρμανση η δείγματα περιέχοντα ορατά ξένα στοιχεία δέν πρέπει να χρησιμοποιούνται. Αιμολυθέντα η λιπαιμικά δείγματα η ορός πρέπει να μην χρησιμοποιηθεί. Μετά τη συλλογή του δείγματος, ο ορός θα πρέπει να διαχωρίζεται άμεσα από το ολικό αίμα. CLSI (στο παρελθόν NCCLS) Document H18-A3 προτείνει τις παρακάτω συνθήκες συντήρησης και αποθήκευσης των δειγμάτων: Τα δείγματα πρέπει να διατηρούνται σε θερμοκρασία δωματίου όχι περισσότερο από 8 ώρες. Σε περίπτωση που η δοκιμασία δεν πραγματοποιηθεί άμεσα, τότε τα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν σε θερμοκρασία συντήρησης (2 8 ο C ) μέχρι 48 ώρες. Για μεγαλύτερο διάστημα, τα δείγματα θα πρέπει να καταψυχθούν στους 20 ο C. 2

3 Διαδικασία Υλικά που παρέχονται 1 SLE Profile 8 μικροπλάκα (12-1x8 πηγαδάκια) (σφραγισμένο ροζ στο χρώμα) με βάση 1 1.2mL αραιωμένος QUANTA Plex Negative Control (έτοιμος προς χρήση) 1 1.2mL αραιωμένος SLE Profile 8 Calibrator, (έτοιμος προς χρήση) 1 1.2mL αραιωμένος SLE Profile 8 Positive Control, (έτοιμος προς χρήση) 1 50mL HRP Sample Diluent Διάλυμα αραίωσης 1 Φιαλίδιο λυοφιλοποιημένου φθορίζοντος συζεύγματος (κατσίκας), αντιανθρώπινη IgG 1 QUANTA Plex Conjugate Diluent 7mL Αντιδραστήρια και εξοπλισμός που δεν συμπεριλαμβάνονται Υγρό Ελύτρου για συσκευή ανάλυσης ροής Luminex 100 ή 200 Μικροπιπέτες ρυθμιζόμενου όγκου 5 και 500 μl 8κάναλη πιπέτα ρυθμιζόμενου όγκου Δοκιμαστικοί σωλήνες για αραιώσεις δειγμάτων ασθενών, όγκος 1 έως 4mL Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό Συσκευή ανάλυσης ροής Luminex 100 ή 200 Ηλεκτρονική πιπέττα 8 καναλιών για την παροχή 5, 45 και 50µL ή αυτόματη συσκευή πιπεττών/αραιωτής Χρήση του Συσκευή ανάλυσης ροής Luminex 100 ή Βλ. το εγχειρίδιο χρήσης που παρέχεται με το Luminex για λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τη λειτουργία του συσκευή ανάλυσης ροής Luminex 100 ή 200 και την έκδοση Luminex Integrated System (IS) ή την έκδοση λογισμικού 2.0 ή ανώτερος. Για πρόσθετες πληροφορίες και για πληροφορίες αντιμετώπισης προβλημάτων με την ανάλυση, επικοινωνήστε με την υπηρεσία τεχνικής υποστήριξης της INOVA Diagnostics, Inc. στη διεύθυνση ή στον αριθμό τηλεφώνου που παρέχεται στην τελευταία σελίδα του ένθετου οδηγιών. Συνοπτικές οδηγίες λειτουργίας για το συσκευή ανάλυσης ροής Luminex 100 ή 200 παρέχονται παρακάτω. 2. Βαθμονομείτε το Luminex χρησιμοποιώντας τους κόμβους πρότυπου ορού που διατίθενται από τη Luminex Corporation τουλάχιστον μία φορά το μήνα και επαληθεύετε ότι η βαθμονόμηση ήταν επιτυχής. Επίσης, βαθμονομείτε το Luminex εάν η διαφορά θερμοκρασίας βαθμονόμησης είναι μεγαλύτερη από 3 βαθμούς, εάν οι οροί ελέγχου ανάλυσης βρίσκονται εκτός εύρους ή όπως απαιτείται. 3. Το Luminex χρειάζεται 30 λεπτά για να προθερμανθεί μετά την ενεργοποίησή του. Όταν η περίοδος προθέρμανσης ολοκληρωθεί, εκτελέστε τις συνιστώμενες από τον κατασκευαστή λειτουργίες προετοιμασίας, έκπλυσης με αλκοόλη και πλύσης. 4. Λογισμικό χρήσης της δημοσίευσης IS, φορτώστε το πρότυπο "QP SLE Profile 8" και διασφαλίστε ότι όλες οι πληροφορίες παρτίδας είναι σωστές. Εάν είναι απαραίτητο, ενημερώστε τις πληροφορίες παρτίδας. Ρυθμίστε τις παραμέτρους ως εξής. Τα χρώματα κόμβων είναι SS-A 60 = 17, SS-A 52 = 19, SS-B = 7, Sm = 8, RNP = 9, Scl-70 = 11, Jo-1 = 12, Ribosomal-P = 13, Chromatin = 14, control anti-igg = 42. Τα συμβάντα ανά κόμβο είναι σε 50, το μέγεθος δείγματος σε 50μL, το ρυθμό ροής σε 60μL/λεπτό (γρήγορο) και την πύλη σε περίπου 7500 έως Οι διάμεσες τιμές χρησιμοποιούνται για τη Διάμεση ένταση φθορισμού (Median Fluorescent Intensity MFI). 5. Εισάγετε τα ονόματα δείγματος είτε χειροκίνητα και είτε κάνοντας κλικ στο "Load Pa List". 6. Φορτώστε την πλάκα στην πλατφόρμα XY του Luminex Εκκινήστε το Luminex κάνοντας κλικ στο κουμπί "Start Plate" ή Start. 8. Όταν ολοκληρώσετε τις εργασίες σας για την ημέρα, εκτελέστε τις λειτουργίες υγιεινής και μουσκέματος πριν απενεργοποιήσετε το όργανο. Μεθοδολογια: Πριν ξεκινήσετε 1. Για πληροφορίες προγραμματισμού για αυτόματο εξοπλισμό, επικοινωνήστε με τις υπηρεσίες τεχνικής υποστήριξης της INOVA Diagnostics, Inc. 2. Ενεργοποιήστε το συσκευή ανάλυσης ροής Luminex 100 ή 200, διασφαλίστε ότι έχει προθερμανθεί και εκτελέστε όλες τις λειτουργίες ημερήσιας συντήρησης όπως περιγράφηκαν παραπάνω. Εάν είναι απαραίτητο, βαθμονομήστε το όργανο και επαληθεύστε ότι η βαθμονόμηση ήταν επιτυχής. 3. Φέρτε όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα ασθενών σε θερμοκρασία δωματίου (20-26 o C) και αναμίξτε τα καλά. 4. Εάν το φθορίζον σύζευγμα αντι-ανθρώπινης IgG δεν έχει ανασυσταθεί, προσθέστε 6mL QUANTA Plex Conjugate Diluent φιαλίδιο χρώματος κεχριμπαρί που περιέχει τη λυοφιλοποιημένη σκόνη και στοβιλίστε το δοχείο για περίπου 30 δευτερόλεπτα για να διαλύσετε το περιεχόμενο. Το ανασυσταθέν φθορίζον σύζευγμα είναι σταθερό για 3 μήνες σε θερμοκρασία 2-8 C. Μην καταψύχετε. 5. Βεβαιωθείτε ότι ο περιέκτης υγρού ελύτρου στη συσκευή Luminex είναι γεμάτος με Υγρό Ελύτρου που διατίθεται από την Luminex Corporation. 6. Προετοιμάστε μια αραίωση 1:101 κάθε δείγματος ασθενούς προσθέτοντας 5µL από κάθε ορό σε 500µL αραιωτικού δείγματος HRP, και στη συνέχεια περιδινίστε για να αναμίξετε τελείως το διάλυμα. Τα αραιωμένα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται εντός 8 ωρών από την ανασύσταση. ΜΗΝ ΑΡΑΙΩΝΕΤΕ τον QUANTA Plex Negative Control, SLE Profile 8 Calibrator and Positive Control. 7. Ο προσδιορισμός της παρουσίας ή απουσίας αντισωμάτων σε Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, ριβοσώματος P και χρωματίνης, με χρήση αυθαίρετων μονάδων, απαιτεί ένα μικροπηγαδάκι για το αρνητικό και θετικό διάλυμα ελέγχου QUANTA Plex Negative και Positive Control, δύο μικροπηγαδάκια για το διάλυμα βαθμονόμησης SLE Profile 8 Calibrator και ένα μικροπηγαδάκι για κάθε δείγμα ασθενούς. Συνιστάται τα δείγματα να αναλύονται ένα-ένα χωριστά. 3

4 Διαδικασία 1. Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να έλθουν σε θερμοκρασία δωματίου (20-26 C) πριν την έναρξη της ανάλυσης. Τοποθετήστε τον απαιτούμενο αριθμό μικροκοιλοτήτων/ταινιών στη θήκη. Επιστρέψτε αμέσως τις μη χρησιμοποιημένες ταινίες στο σάκο που περιέχει τα αφυγραντικά μέσα και σφραγίστε καλά για να ελαχιστοποιήσετε την έκθεση σε υδρατμούς και φως. 2. Προσθέστε 45µL Αραιωτικού Δείγματος HRP σε κάθε μικροπηγαδάκι που θα περιέχει δείγμα ασθενούς. Μην προσθέσετε Αραιωτικό Δείγματος HRP στα πρώτα τέσσερα μικροπηγαδάκια, διότι θα περιέχουν το Αρνητικό Διάλυμα Ελέγχου QUANTA Plex, το Διάλυμα Βαθμονόμησης SLE Profile 8 (εις διπλούν) και το Θετικό Διάλυμα Ελέγχου SLE Profile 8. Μην προσθέτετε τα αραιωμένα δείγματα ασθενών στις μικροκοιλότητες αυτή τη στιγμή. 3. Τηρήστε μία από τις παρακάτω χρονικές ακολουθίες κατά την πρόσθεση ορών ελέγχου, δειγμάτων και συζεύγματος στις μικροκοιλότητες. Επειδή τα δείγματα διαβάζονται διαδοχικά με ρυθμό περίπου 1 δείγματος ανά 19 δευτερόλεπτα (ή μία ταινία 8 κοιλοτήτων ανά περίπου 2½ λεπτά) από το Luminex, τα δείγματα ασθενών και επίσης το σύζευγμα πρέπει να προστίθενται στις μικροκοιλότητες με αυτόν το ρυθμό, ώστε να ελαχιστοποιείται η διακύμανση της ανάλυσης από εμπρός προς τα πίσω. Εάν οι οροί ελέγχου, τα δείγματα ή το σύζευγμα προστίθενται το καθένα ξεχωριστά, καθυστερήστε κάθε πρόσθεση των παραπάνω στην επόμενη μικροκοιλότητα κατά 19 δευτερόλεπτα. Εάν οι οροί ελέγχου, τα δείγματα ή το σύζευγμα προστίθενται 8 κάθε φορά σε μια ταινία, καθυστερήστε κάθε πρόσθεση οποιουδήποτε από αυτά στην επόμενη ταινία κατά 2 ½ λεπτά. Καθένα από αυτά τα χρονικά σχήματα χρειάζεται περίπου 30 λεπτά για την πρόσθεση των δειγμάτων και στις 12 ταινίες μιας ολόκληρης πλάκας και ελαχιστοποιεί τη διακύμανση της ανάλυσης από εμπρός προς τα πίσω. 4. Περιδινίστε και στη συνέχεια προσθέστε 50μL από καθένα από τα εξής: Το προαραιωμένο Αρνητικό Διάλυμα Ελέγχου QUANTA Plex στο πρώτο μικροπηγαδάκι, το Διάλυμα Βαθμονόμησης SLE Profile 8 στο δεύτερο και τρίτο μικροπηγαδάκι και το Θετικό Διάλυμα Ελέγχου SLE Profile 8 στο τέταρτο μικροπηγαδάκι. Κατά τη χειροκίνητη πρόσθεση δειγμάτων και ανάμιξη κόμβων, πρέπει να χρησιμοποιείται ηλεκτρονική πιπέττα. Χρησιμοποιήστε μία από τις χρονικές ακολουθίες για την πρόσθεση των ορών ελέγχου που περιγράφεται στο βήμα 3. Ανακινήστε έντονα με πιπέττα τουλάχιστον 30μL του QUANTA Plex Negative Control, SLE Profile 8 Calibrator και Positive Control πάνω-κάτω τέσσερις φορές για να αναμίξετε τους κόμβους και τους ορούς ελέγχου σε κάθε μικροκοιλότητα. Η περίοδος επώασης των 30 λεπτών αρχίζει μετά την πρόσθεση του QUANTA Plex Negative Control στην πρώτη μικροκοιλότητα. 5. Αμέσως συνεχίστε την ανάλυση προσθέτοντας 5μL αραιωμένου ορού ασθενούς στις κατάλληλες μικροκοιλότητες (σημειώστε: αυτό δίνει 1:1010 τελική αραίωση του ορού ασθενούς). Διατηρήστε την ίδια χρονική ακολουθία που χρησιμοποιήθηκε στο βήμα 4. Αναμίξτε το αραιωμένο δείγμα ασθενούς και το αραιωτικό δείγματος στην μικροκοιλότητα ανακινώντας έντονα με πιπέττα τουλάχιστον 30μL του περιεχομένου της μικροκοιλότητας πάνω-κάτω τέσσερις φορές. Προσθέστε 50 μl του προαραιωμένου ANCA Profile χαμηλού θετικού στην κατάλληλη μικροκοιλότητα μετά την πρόσθεση του τελευταίου δείγματος ασθενούς και αναμίξτε όπως παραπάνω. Συνεχίστε να χρονομετράτε την επώαση για 30 λεπτά από το χρόνο της πρόσθεσης του QUANTA Plex Negative Control. Τοποθετήστε τις ταινίες μικροκοιλοτήτων σε θερμοκρασία δωματίου, σε επίπεδη επιφάνεια και μακριά από άμεσο ηλιακό φως για το υπόλοιπο της περιόδου επώασης. 6. Στο τέλος της πρώτης περιόδου επώασης, προσθέστε 50μL του φθορίζοντος συζεύγματος σε κάθε μικροκοιλότητα και ανακινήστε με πιπέττα τουλάχιστον 60μL του περιεχομένου της μικροκοιλότητας πάνω-κάτω τέσσερις φορές. Διατηρήστε την ίδια χρονική ακολουθία για την πρόσθεση του συζεύγματος που χρησιμοποιήθηκε στα βήματα 4 και 5. Το σύζευγμα πρέπει να αφαιρείται από τη φιάλη υπό τυπικές ασηπτικές συνθήκες και ακολουθώντας καλές εργαστηριακές τεχνικές. Αφαιρείτε από τη φιάλη μόνο την ποσότητα συζεύγματος που είναι απαραίτητη για την ανάλυση. ΓΙΑ ΝΑ ΑΠΟΦΥΓΕΤΕ ΤΗΝ ΠΙΘΑΝΟΤΗΤΑ ΜΙΚΡΟΒΙΑΚΗΣ Ή/ΚΑΙ ΧΗΜΙΚΗΣ ΜΟΛΥΝΣΗΣ, ΠΟΤΕ ΜΗΝ ΕΠΙΣΤΡΕΦΕΤΕ ΜΗ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΜΕΝΟ ΣΥΖΕΥΓΜΑ ΣΤΗ ΦΙΑΛΗ. Επωάστε τις ταινίες μικροκοιλοτήτων για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, σε επίπεδη επιφάνεια και μακριά από άμεσο ηλιακό φως. Ο χρόνος επώασης αρχίζει μετά από την πρώτη πρόσθεση συζεύγματος. 7. Εντός μίας ώρας από την ολοκλήρωση της επώασης φθορίζοντος συζεύγματος διάρκειας 30 λεπτών, διαβάστε την πλάκα SLE Profile 8 στο Luminex, όπως περιγράφεται στο παραπάνω τμήμα Χρήση του Συσκευή ανάλυσης ροής Luminex ή 200. Ποιοτικός έλεγχος 1. Το SLE Profile 8 Calibrator και Positive Control και QUANTA Plex Negative Control πρέπει να εκτελούνται με κάθε παρτίδα δειγμάτων, ώστε να διασφαλίζεται ότι όλα τα αντιδραστήρια και οι διαδικασίες έχουν λειτουργήσει σωστά. 2. Σημειώστε ότι επειδή το SLE Profile 8 Calibrator και Positive Control και QUANTA Plex Negative Control είναι προαραιωμένα, δεν επηρεάζουν τις διαδικαστικές μεθόδους που σχετίζονται με τις αραιώσεις των δειγμάτων. 3. Μπορεί να απαιτείται η ανάλυση πρόσθετων ορών ελέγχου, σύμφωνα με τις οδηγίες ή τις απαιτήσεις των τοπικών ή/και εθνικών διατάξεων ή των οργανισμών διαπίστευσης. Πρόσθετοι κατάλληλοι οροί ελέγχου μπορούν να ανασυσταθούν διαιρώντας σε υποπολλαπλάσια δείγμα ανθρώπινου ορού πολλαπλών δοτών και αποθηκεύοντάς το σε θερμοκρασία < -20 C. 4. Για να θεωρούνται έγκυρα τα αποτελέσματα της δοκιμασίας, πρέπει να τηρούνται όλα τα κριτήρια που παρατίθενται παρακάτω. Σε περίπτωση μη τήρησης κάποιου από αυτά, η δοκιμασία πρέπει να 4

5 θεωρηθεί άκυρη και η ανάλυση να επαναληφθεί. Η τιμή σε Luminex Units (LU) του διακριβωτής για κάθε αντιγόνο αναγράφεται στην ετικέτα του κουτιού για το συγκεκριμένο κιτ. Ανατρέξτε στον τύπο στο τμήμα Υπολογισμός των αποτελεσμάτων, για να καθορίσετε τις LU του QUANTA Plex Negative Control και του υψηλού SLE Profile 8 θετικού ορού ελέγχου. α. Η τιμή του προαραιωμένου αρνητικού διαλύματος ελέγχου QUANTA Plex Negative Control πρέπει να είναι <20LU σε καθένα από τα 9 αντιγόνα και μεταξύ 10 και 50 LU στον κόμβο αντι- IgG. β. Η τιμή του θετικού διαλύματος ελέγχου SLE Profile 8 Positive Control πρέπει να είναι > 100 και < 300 LU στα αντιγόνα Sm, RNP, SS-A 60, SS-B Scl-70, Jo-1, Ribo-P και χρωματίνης και πρέπει να είναι > 50 και < 250 στο αντιγόνο SS-A 52. Το θετικό διάλυμα ελέγχου SLE Profile 8 Positive Control πρέπει να είναι μεταξύ 10 και 50 LU στον κόμβο αντι-igg. γ. Ο κόμβος ελέγχου αντι-igg σκοπό έχει να διασφαλίσει την ανίχνευση τυχόν ψευδών αρνητικών αποτελεσμάτων ασθενούς λόγω λειτουργικών σφαλμάτων. Υπάρχει η πιθανότητα να μην προστέθηκε δείγμα ασθενούς ή/και σύζευγμα στο πηγαδάκι δείγματος ασθενούς, εάν ο κόμβος αντι-igg του δείγματος ασθενούς είναι κάτω των 3.0 LU και είναι αρνητικός στους άλλους κόμβους. Σε αυτήν την περίπτωση, πρέπει να επαναληφθεί η δοκιμασία του ασθενούς, για να επιβεβαιωθεί το αρνητικό αποτέλεσμα. δ. Ο χρήστης πρέπει να ανατρέξει στο CLSI (στο παρελθόν NCCLS) Document C24-A3 για πρόσθετες οδηγίες σχετικά με τις κατάλληλες πρακτικές ελέγχου ποιότητας. 5. Ο QUANTA Plex Negative Control, SLE Profile 8 Calibrator and Positive Control προορίζονται για την ανίχνευση της περίπτωσης σημαντικής αστοχίας του αντιδραστηρίου. 6. Εάν το επιθυμείτε, μπορεί να αναλυθεί ένα πηγαδάκι με αραιωτικό δείγματος αλλά όχι ορό, για να επιβεβαιωθεί ότι ο κόμβος ελέγχου αντι-igg θα ανιχνεύσει ένα πηγαδάκι χωρίς ορό. Αυτό το ελεύθερο ορού διάλυμα ελέγχου πρέπει να είναι < 3.0 LU στον αντι-igg κόμβος ελέγχου και αρνητικό σε όλους τους άλλους κόμβους. Υπολογισμός Αποτελεσμάτων Πρώτα προσδιορίζονται οι τιμές MFI για όλους τους ορούς ελέγχου και τα δείγματα ασθενούς για κάθε αντιγόνο. Η αντιδραστικότητα σε LU ενός δεδομένου δείγματος για κάθε τύπο αντιγόνου μπορεί στη συνέχεια να υπολογιστεί μέσω του ακόλουθου τύπου: Διαιρέστε το MFI του δείγματος δια το MFI του SLE Profile 8 Calibrator για το συγκεκριμένο αντιγόνο και πολλαπλασιάστε το αποτέλεσμα επί τον αριθμό LU που έχει εκχωρηθεί στο SLE Profile 8 Calibrator γι αυτό το αντιγόνο. Η τιμή LUs του SLE Profile 8 Calibrator για κάθε αντιγόνο αναγράφεται στην ετικέτα του κουτιού για τη συγκεκριμένη παρτίδα κιτ. Το ακόλουθο παράδειγμα προορίζεται για τον προσδιορισμό της αντιδραστικότητας αντι-sm. Χρησιμοποιήστε την ισοδύναμη σύνθεση για κάθε ένας από άλλο αντιγόνα. MFI δείγματος για Sm Τιμή δείγματος (σε LU) = x τιμή Sm Calibrator (σε LU) MFI Sm Calibrator Το δείγμα μπορεί στη συνέχεια να ταξινομηθεί σύμφωνα με τον παρακάτω πίνακα. LU Αρνητικό <20 Ασθενές θετικό Μέτριο θετικό Ισχυρό θετικό >100 Η αντιδραστικότητα σχετίζεται με την ποσότητα αυτοαντισώματος που είναι παρούσα στον κόμβο με μη γραμμικό τρόπο. Ενώ αυξήσεις και μειώσεις στις συγκεντρώσεις αντισώματος ασθενούς αντικατοπτρίζονται σε αντίστοιχη αύξηση ή μείωση στη δραστηριότητα φθορισμού, η μεταβολή δεν είναι ανάλογη (δηλ. ένας διπλασιασμός της συγκέντρωσης αντισώματος δε διπλασιάζει την αντιδραστικότητα). Επιπρόσθετα, η ποσότητα ολικής IgG στον ορό του ασθενούς επηρεάζει το μετρούμενο MFI. Εάν απαιτείται ακριβέστερη ποσοτικοποίηση του αυτοαντισώματος του ασθενούς, το δείγμα πρέπει να αναλύεται με ποσοτική δοκιμασία. Ερμηνεία των Αποτελεσμάτων Το FIA είναι πολύ ευαίσθητο στην τεχνική και είναι ικανό να ανιχνεύει μικρές διαφορές σε πληθυσμούς ασθενών. Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώσει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών με βάση τις δικές του τεχνικές, ορούς ελέγχου, εξοπλισμό και πληθυσμό ασθενών σύμφωνα με τις εσωτερικές καθιερωμένες διαδικασίες του εργαστηρίου. Συνιστάται τα αποτελέσματα που δίνονται από το εργαστήριο να περιλαμβάνουν τη δήλωση: Τα ακόλουθα αποτελέσματα ελήφθησαν με χρήση του INOVA QUANTA Plex TM SLE Profile 8. Τιμές που λαμβάνονται με μεθόδους ανάλυσης διαφορετικών κατασκευαστών ενδέχεται να μην μπορούν να χρησιμοποιηθούν εναλλακτικά. Το μέγεθος των αναφερόμενων επιπέδων αυτοαντισώματος IgG δεν μπορεί πάντοτε να συσχετίζεται με έναν τίτλο τελικού σημείου. Όρια της Διαδικασίας 1. Η παρουσία άνοσων συμπλόκων ή άλλων συσσωρευμάτων ανοσοσφαιρίνης στο δείγμα του ασθενούς μπορεί να προκαλέσει αυξημένο επίπεδο μη ειδικής δέσμευσης και να παράγει ψευδή θετικά στη συγκεκριμένη ανάλυση. 2. Δεν συστηματικός ερυθηματώδης λύκος (ΣΕΛ), σύνδρομο του Sjögren, σκληροδερμία ή πολυμυοσίτιδα αγγειίτιδας θετικό αποτέλεσμα για αυτοαντισώματα Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, Ribosome P or Chromatin. 5

6 3. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης πρέπει να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τα κλινικά ευρήματα και άλλες οροδιαγνωστικές δοκιμασίες. 4. H ατελής ανάμειξη των ορών ελέγχου ή/και των αραιωμένων δειγμάτων ορού με τους διατηρημένους κόμβους στην πλάκα μπορεί να δώσει υψηλότερες τιμές %C.V. από εκείνες που απαντώνται τυπικά σε αναλύσεις ELISA. 5. Μετά από την περίοδο επώασης μισής ώρας με το φθορίζον σύζευγμα, υπάρχει μια περίπου 10% περαιτέρω αύξηση στο φθορισμό για κάθε πρόσθετη μισή ώρα χρόνου επώασης. 6. Τα χαρακτηριστικά απόδοσης αυτής της ανάλυσης δεν έχουν τεκμηριωθεί για μήτρες διαφορετικές από ορό. 7. Η μη τήρηση ακρίβειας των χρόνων πρόσθεσης του αντιδραστηρίου μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την αυξημένη διακύμανση της ανάλυσης από εμπρός προς τα πίσω. Αναμενόμενες τιμές Η ικανότητα της δοκιμασίας QUANTA Plex TM SLE Profile 8 να ανιχνεύει αντισώματα Sm, RNP, SS-A 60, SS-A 52, SS-B, Scl-70, Jo-1, Ribosome P και Chromatin αξιολογήθηκε σε σύγκριση με εμπορικά διαθέσιμες δοκιμασίες ELISA και Luminex από την INOVA Diagnostics, Inc. Τα αποτελέσματα των δοκιμασιών ELISA και καθεμίας από τις δοκιμασίες QUANTA Plex ENA Profile 6 και κάθε ένα από QUANTA Plex SLE Profile 8 καθορίστηκαν ως θετικά εάν το δείγμα του ασθενούς ήταν 20 μονάδες ή υψηλότερο και αρνητικά εάν ήταν χαμηλότερο από 20 μονάδες. Εύρος φυσιολογικών τιμών Εκτελέστηκαν 485 δείγμα από υγιείς αιμοδότες με την εξέταση QUANTA Plex SLE Profile 8. Στον παρακάτω πίνακα περιλαμβάνεται για κάθε αντιγόνο το ποσοστό εκείνων των δειγμάτων που ήταν αρνητικά, ο μέσος όρος και η τυπική απόκλιση (SD) αυτής της ομάδας, η υψηλότερη τιμή στην ομάδα, και ο αριθμός των τυπικών αποκλίσεων πάνω από το μέσο όρο που χρησιμοποιήθηκε για το όριο αποκοπής μεταξύ αρνητικού και θετικού. Αντιγόνο % Αρνητικός Μέσος όρος Επίσημη Υψηλότερη # από το SD επάνω μέσο όρο LU απόκλιση αξία από το Sm * RNP SS-A * 226^ 4.3 SS-A * 213^ 3.9 SSB Scl Jo Ribosome P Chromatin ^ 3.1 *Ασθενείς με LU άνω των 100 μονάδων δεν συμπεριλήφθηκαν στον υπολογισμό της τυπικής απόκλισης. ^ Αυτά τα αποτελέσματα προήλθαν από τον ίδιο ασθενή. Σύγκριση μεταξύ αναλύσεων SLE Profile 8, ENA Profile 6 και ELISAS n=437 SS-A^ ENA Profile 6 n=437 SS-A^ ENA Profile 6 SS-A 52 SS-A 60 SLE Profile 8 Αρνητικός * SLE Profile 8 Αρνητικός * 92.0% το ίδιο πράγμα 93.1% το ίδιο πράγμα Θετικός 0 76 Θετικός 0 81 ^ Αυτό το SS-A περιέχει και το SS-A 52 και το SS-A 60 ^ Αυτό το SS-A περιέχει και το SS-A 52 και το SS-A 60 *29 αυτοί ήταν θετικά από το SS-A 60 Luminex *24 αυτοί ήταν θετικά από το SS-A 52 Luminex n=437 SS-A^ ENA Profile 6 n=437 SS-B ENA Profile 6 SS-A 52 or 60 SS-B SLE Profile 8 Αρνητικός 326 6* SLE Profile 8 Αρνητικός 406 1* 98.6% το ίδιο 99.8% το ίδιο πράγμα Θετικός πράγμα Θετικός 0 30 * Αυτό είναι αρνητικό κοντά ^ Αυτό το SS-A περιέχει και το SS-A 52 και το SS-A 60 ELISA *4 θετικό κοντά SS-A^ ELISA n=437 Sm ENA Profile 6 n=437 RNP ENA Profile 6 Sm RNP SLE Profile 8 Αρνητικός 361 1* SLE Profile 8 Αρνητικός 341 4* 95.0% το ίδιο 98.6% το ίδιο πράγμα Θετικός 21** 54 πράγμα Θετικός 2** 90 * Αρνητικός κοντά ELISA; **12 θετικό κοντά ELISA *3 θετικό κοντά ELISA; **0 θετικό κοντά ELISA 6

7 n=437 Scl-70 ENA Profile 6 n=437 Jo-1 ENA Profile 6 Jo-1 Αρνητικός * SLE Profile % το ίδιο Αρνητικός 412 5* πράγμα Θετικός 0 20 Scl-70 SLE Profile % το ίδιο πράγμα Θετικός 3** 51 *8 θετικό κοντά ELISA; **0 θετικό κοντά ELISA * 0 ήταν θετικός κοντά ELISA n=412 Ribosome P ELISA n=412 Chromatin ELISA Ribosome P Chromatin SLE Profile 8 Αρνητικός SLE Profile 8 Αρνητικός % το ίδιο 92.2% το ίδιο πράγμα Θετικός 2 19 πράγμα Θετικός 6 67 Θετικό και αρνητικό ποσοστό συμφωνίας Prof 6 - Prof 6 + θετικό Αρνητικός Σύνολο N = 437 Και οι δύο - Και οι δύο + Prof 8 + Prof 8- Συμφωνία Συμφωνία Συμφωνία SS-A* % 100% 98.6% SS-B % 100% 99.8% Sm % 95% 95.0% RNP % 99% 98.6% Scl % 99% 95.9% Jo % 100% 98.9% N = 412 Ribo P** % 99% 97.6% Chrom** % 98% 92.2% * Χάντρα SS-A έναντι στις χάντρες SS-A 52 και SS-A 60; ** έναντι ELISA Ακρίβεια και επαναληψιμότητα Διακύμανση μεταξύ των αναλύσεων και εντός της ανάλυσης. Για τον προσδιορισμό της δια-αναλυτικής διακύμανσης αναλύθηκαν αρκετά δείγματα σε 6 εξετάσεις που εκτελέστηκαν σε διαφορετικές ημέρες. Η διακύμανση σε 2 διαφορετικά δείγματα για κάθε ειδικότητα εξέτασης αναφέρεται στον παρακάτω πίνακα. Για τον προσδιορισμό της ενδο-αναλυτικής διακύμανσης, αναλύθηκαν αρκετά δείγματα 10 φορές το κάθε ένα σε μια ανάλυση. Η διακύμανση σε τρία διαφορετικά δείγματα για κάθε ειδικότητα εξέτασης αναφέρεται στον παρακάτω πίνακα. Διακύμανση μεταξύ των αναλύσεων Διακύμανση εντός της ανάλυσης AΑντιγόνο Μέση τιμή LU Αντιγόνο Μέση τιμή LU Αντιγόνο Μέση τιμή LU Sm 64 6% Sm 61 9% Sm 38 5% Sm 38 2% RNP 74 5% RNP 64 10% RNP 33 9% RNP 27 11% SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-B 127 7% SS-B 149 2% SS-B 83 6% SS-B 76 3% Scl % Scl % Scl % Scl % Jo % Jo % Jo % Jo % Ribo-P 73 7% Ribo-P 65 10% Ribo-P 98 9% Ribo-P 105 4% Chromatin 65 11% Chromatin 61 7% Chromatin 84 8% Chromatin 80 6% 7

8 Βιβλιογραφία 1. von Mühlen CA and Tan E: Autoantibodies in the Diagnosis of Systemic Rheumatic Diseases. Seminars in Arthritis and Rheumatism 24: , Tan EM, et al.: The 1982 Revised Criteria for the Classification of Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis and Rheumatism 25: , Jonsson R, Haga HJ and Gordon TP: Current concepts on diagnosis, autoantibodies and therapy in Sjögren's syndrome. Scand J Rheumatol 29: , Giordano M, Valentini IG, Migliaresi S, et al: Different antibody patterns and different prognoses in patients with scleroderma and various extent of skin sclerosis. J Rheumatol 13: , Arnett, J, et al.: The Jo-1 antibody system in myositis: relationships to clinical features and HLA. J Rheumatol 8: 925, Bonfa E, et al.: Association between lupus psychosis and anti-ribosome P protein antibodies. N Engl J Med 317: 265, Burlingame RW and Cervera R: Anti-chromatin (anti-nucleosome) autoantibodies. Autoimmunity Reviews 1: , McCauliffe DP, Wang L, Satoh M, Reeves WH and Small D: Recombinant 52 kda Ro(SSA) ELISA detects autoantibodies in Sjögren's syndrome sera that go undetected by conventional serologic assays. J Rheumatol 24: , Frank MB, V McCubbin, E Trieu, Y Wu, DA Isenberg, IN Targoff: The association of anti-ro52 autoantibodies with myositis and scleroderma autoantibodies. J Autoimmun 12: , Martins TB, Burlingame R, von Mühlen CA, et al: Evaluation of multiplexed fluorescent microsphere immunoassay for detection of autoantibodies to nuclear antigens. Clin Diagn Lab Immunol 11: , Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institutes of Health, 5 th edition, CLSI (NCCLS). Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens; Approved Guideline-Third Edition. CLSI Document H18-A3, Vol. 24(38), National Committee for Clinical Laboratory Standards. Feb Statistical quality control: Principles and definitions; Approved Guideline- 3 rd edition C24-A3, Vol. 26, No. 25. Κατασκευαστής: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Aντιπροσωπευτικός: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: Technical Service July 2007 Revision GRC2 8