NITRATE TEST. LIOFILCHEM S.r.l. ITALIANO

Transcript

1 ITALIANO DESCRIZIONE NITRATE TEST è un test rapido per evidenziare la riduzione dei nitrati a nitriti da parte dei batteri. Le provette contengono in forma essiccata una miscela proteica e nitrato di potassio, substrato che viene ridotto a nitriti da alcune specie di batteri. Tale reazione viene utilizzata per l identificazione biochimica dei batteri. La riduzione dei nitrati viene evidenziata dall aggiunta dei reagenti, che rilevano la presenza dei nitriti, sulla base della comparsa di una colorazione rosso-arancio nella provetta usata per il test. CONTENUTO DELLE CONFEZIONI Ciascuna confezione contiene: 30 provette con substrato biochimico e proteico 1 flacone di reagente Alfa-naftilamina 1 flacone di reagente Acido sulfanilico 1 foglio istruzioni PRINCIPIO DEL METODO La riduzione dei nitrati a nitriti è una capacità metabolica dei microrganismi che sottraggono l ossigeno dai nitrati per formare nitriti. I nitriti sono incolori e reagiscono con i reagenti acido sulfanilico ed alfa-naftilamina con formazione di un composto rosso. Nella reazione positiva, i microrganismi riducono i nitrati a nitriti e dopo l aggiunta dei reagenti nel mezzo colturale, si sviluppa un colore rosso-arancio. Nella reazione negativa, i microrganismi sono incapaci di ridurre i nitrati a nitriti e pertanto non si sviluppa alcun colore nel mezzo colturale dopo l aggiunta dei due reagenti. In caso di reazione negativa - mancato sviluppo di colorazione rossa-arancio - è necessario aggiungere una piccola quantità di polvere di zinco: lo zinco metallico riduce i nitrati a nitriti. Lo sviluppo di un colore rosso-arancio, dopo la sua aggiunta, indica che erano presenti inizialmente i nitrati che sono stati ridotti a nitriti dallo zinco metallico e non dai batteri (riduzione dei nitrati a nitriti: negativa); l assenza di una colorazione rosso-arancio, dopo l aggiunta dello zinco indica che i nitrati presenti sono stati ridotti dapprima a nitriti e successivamente ad altri composti (riduzione dei nitrati a nitriti: positiva). COMPOSIZIONE Provetta (contenuto) Substrati proteici, nitrato di potassio Reagente Alfa-naftilamina Reagente Acido sulfanilico Alfa-naftilamina Acido acetico Acido sulfanilico Acido acetico RACCOLTA E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Le colonie da sottoporre al test dei nitrati devono essere riprese da un terreno colturale utilizzato per l isolamento dei batteri dal campione in esame. PROCEDURA DEL TEST 1. Prelevare il contenitore dal frigorifero e lasciarlo per alcuni minuti sul banco fino al raggiungimento della temperatura ambiente; 2. Scegliere una colonia ben isolata nel terreno di isolamento; 3. Prelevare una provetta ed aggiungere 0.2 ml di soluzione fisiologica sterile; 4. Prelevare una seconda provetta ed aggiungere 0.2 ml di soluzione fisiologica sterile. Questa provetta non deve essere seminata e sarà utilizzata come controllo negativo; 5. Con un ansa sterile sospendere nel mezzo colturale della prima provetta la colonia batterica in esame; 6. Tappare ed incubare le due provette in termostato a 36±1 C per un minimo di 2 ore fino ad un massimo di 24 ore; 7. Dopo tale periodo aggiungere una goccia di reagente Alfa-naftilamina ed una goccia di reagente Acido sulfanilico, agitare delicatamente ed attendere alcuni secondi; 8. Osservare lo sviluppo di una colorazione rosso-arancio; 9. In caso di reazione negativa aggiungere una piccola quantità di polvere di zinco ed osservare l eventuale sviluppo della colorazione rosso-arancio. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI I microrganismi che riducono i nitrati a nitriti determinano, dopo l aggiunta dei reagenti Alfa-naftilamina e Acido sulfanilico, lo sviluppo di una colorazione rosso-arancio (reazione positiva). I microrganismi che non riducono i nitrati a nitriti non determinano, dopo l aggiunta dei reagenti Alfa-naftilamina e Acido sulfanilico, lo sviluppo della colorazione rossoarancio (reazione negativa). In caso di reazione negativa è necessario confermare o smentire la negatività con l aggiunta alla provetta test ed a quella di controllo di una piccola quantità di polvere di zinco. Qualora, dopo l aggiunta della polvere di zinco, compaia la colorazione rosso-arancio, significa che i nitrati inizialmente presenti sono stati ridotti a nitriti dalla polvere di zinco e non dal microrganismo in analisi (reazione negativa). Se invece, anche dopo l aggiunta della polvere di zinco, la colorazione non si sviluppa, significa che i nitrati presenti sono stati ridotti dapprima a nitriti e successivamente a composti diversi (reazione positiva). La provetta del controllo negativo servirà a confermare i risultati. Il test viene usato per identificare i batteri capaci di ridurre i nitrati a nitriti. Il test è particolarmente utile per differenziare: Le Enterobatteriaceae; Le Listeriae; I batteri gram negativi non appartenenti alle Enterobatteriaceae. CONTROLLO QUALITÀ Ogni lotto di NITRATE TEST viene sottoposto al test per la riduzione dei nitrati utilizzando ceppi batterici di Escherichia coli ATCC per il controllo positivo e Listeria monocytogenes ATCC per il controllo negativo. LIMITI Il test di riduzione dei nitrati a nitriti è di aiuto nell identificazione batterica. Deve tuttavia essere accompagnato da altri test quali la colorazione di Gram, test biochimici e sierologici etc. L aggiunta di una eccessiva quantità di polvere di zinco, potrebbe dare luogo a reazioni falsamente-negative. PRECAUZIONI Il prodotto NITRATE TEST contiene acido acetico alla concentrazione del 30% nella configurazione dei reagenti Alfa-naftilamina e Acido sulfanilico. A tale concentrazione è classificabile come pericoloso ai sensi della legislazione vigente; per il suo impiego si consiglia di consultare la scheda di sicurezza. NITRATE TEST è un dispositivo monouso, da usare solo per uso diagnostico in vitro, è destinato ad un ambito professionale e deve essere usato in laboratorio da operatori adeguatamente addestrati, con metodi approvati di asepsi e di sicurezza nei confronti degli agenti patogeni. CONSERVAZIONE Conservare il NITRATE TEST a 2-8 C nella sua confezione originale che è a protezione della luce. Evitare di conservare vicino a fonti di calore ed evitare eccessive variazioni di temperatura. In queste condizioni il NITRATE TEST è valido fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Non utilizzare oltre questa data. Eliminare se vi sono segni di deterioramento (cambiamenti di colore del contenuto della provetta e dei reagenti). ELIMINAZIONE DEL MATERIALE USATO Dopo l utilizzazione il NITRATE TEST ed il materiale venuto a contatto con il campione devono essere decontaminati e smaltiti in accordo con le tecniche in uso in laboratorio per la decontaminazione e lo smaltimento di materiale potenzialmente infetto. BIBLIOGRAFIA. PRESENTAZIONE Prodotto Ref. Test TABELLA DEI SIMBOLI Dispositivo medico diagnostico in vitro Non riutilizzare Fabbricante Contenuto sufficiente per <n> saggi Limiti di temperatura Numero di catalogo Fragile, maneggiare con cura Utilizzare entro Attenzione, vedere le istruzioni per l uso Codice del lotto

2 ENGLISH DESCRIPTION NITRATE TEST is a rapid test to detect the reduction from nitrate to nitrite by bacteria. The tubes contain a desiccated proteic mixture and potassium nitrate, which is a substratum reduced to nitrite by some bacterial species. Such reaction is used for the biochemical identification of bacteria. The nitrate reduction is evidenced by the addition of reagents which detect the presence of nitrite through the formation of a red-orange colouring in the test tube. CONTENTS OF THE PACKAGES Each package contains: 30 tubes with biochemical and proteic substratum 1 bottle of Alpha-naphthylamine reagent 1 bottle of Sulphanilic acid reagent 1 instruction sheet METHOD PRINCIPLE The nitrate reduction to nitrite is a metabolic capability of microorganisms that subtract oxigen from nitrate to form nitrite. The nitrites are colourless and react with the reagents sulphanilic acid and alpha-naphthylamine with the formation of a red compound. In the positive reaction, microorganisms reduce nitrates to nitrites and after the addition of reagents in the culture medium, a red-orange colour develops. In the negative reaction, microorganisms are unable to reduce nitrates to nitrites and so no colour develops in the culture medium after the addition of the two reagents. In case of negative reaction - no red-orange colour development - it is necessary to add a small quantity of zinc powder: metallic zinc reduces nitrates to nitrites. The red-orange colour development, after its addition, indicates that nitrates were present initially and they were reduced to nitrites by metallic zinc and not by bacteria (nitrates reduction to nitrites: negative); the absence of a red-orange colouring, after the addition of zinc indicates that nitrates have been reduced at first to nitrites and subsequently to other compounds (nitrates reduction to nitrites: positive). COMPOSITION Tube (content) Proteic substrata, potassium nitrate Alpha-naphthylamine reagent Sulphanilic acid reagent Alpha-naphthylamine Acetic acid Sulphanilic acid Acetic acid GATHERING AND KEEPING SAMPLES The colonies to be subjected to the nitrate test must be taken from a culture medium used to isolate the bacteria from the sample under examination. TEST PROCEDURE 1. Take the container from the refrigerator and leave it for a few minutes on the bench until it has reached ambient temperature; 2. Choose a colony that is well isolated in the isolation medium. 3. Take one tube and add 0.2 ml of sterile physiological solution; 4. Take another tube and add 0.2 ml of sterile physiological solution. Do not inoculate this tube and use it as negative control; 5. Suspend the bacterial colony under examination in the culture medium of the first tube through a sterile loop; 6. Put the top to the tubes and incubate them in thermostat at 36±1 C for a minimum of 2 hours till a maximum of 24 hours; 7. After such period add one drop of Alpha-naphthylamine reagent and one drop of Sulphanilic acid reagent, shake gently and await some seconds; 8. Observe the development of a red-orange colouring; 9. In case of negative reaction add a small quantity of zinc powder and observe the eventual development of the red-orange colouring. EVALUATING THE RESULTS The microorganisms that reduce nitrate to nitrite determine, after the addition of Alpha-naphthylamine and Sulphanilic acid reagents, the development of the red-orange colouring (positive reaction). The microorganisms that do not reduce nitrate to nitrite do not determine, after the addition of Alpha-naphthylamine and Sulphanilic acid reagents, the development of the red-orange colouring (negative reaction). In case of negative reaction it is necessary to confirm or disclaim the negativity by the addition of a small quantity of zinc powder to the test tube and to the control tube. If, after the addition of zinc powder, the red-orange colouring develops, it means that the nitrate initially present are reduced to nitrite by the zinc powder and not by the microorganism in examination (negative reaction). Otherwise, if the couloring does not develop even after the addition of zinc powder, it means the nitrate are reduced at first to nitrite and then to different compounds (positive reaction). The negative control tube is used to confirm the results. The test is used to identify the bacterial strains able to reduce nitrate to nitrite. The test is specially useful to distinguish: Enterobacteriaceae; Listeriae; The gram negative bacteria not belonging to Enterobacteriaceae. QUALITY CONTROL Each batch of NITRATE TEST is subjected to the test for the nitrate reduction by the use of bacterial strains of Escherichia coli ATCC for the positive control and Listeria monocytogenes ATCC for the negative control. LIMITS The test of nitrate reduction to nitrite is helpful for the bacterial identification. It has to be followed yet by other tests as the Gram colouring, biochemical and serological tests, etc. The addition of an excessive quantity of zinc powder could result into false negative results. PRECAUTIONS The product NITRATE TEST contains acetic acid at a 30% concentration in the configuration of Alpha-naphthylamine and Sulphanilic acid reagents. In such concentration it is classifiable as hazardous under current legislation; it is recommended that the Safety Data Sheet be consulted on its use. NITRATE TEST is a disposable device, to be used only for diagnostic use in vitro. It is intended for use in a professional environment and must be used in the laboratory by properly trained personnel, using approved asepsis and safety methods for handling pathogenic agents. STORAGE Keep NITRATE TEST at 2-8 C in their original packaging away from light. Keep them away from sources of heat and avoid excessive temperature fluctuations. In these conditions, NITRATE TEST are valid until the expiry date shown on the label. Do not use them beyond that date. Dispose of them if they show signs of deterioration (colour changes in the contents of tube and reagents). ELIMINATING USED MATERIAL After use, NITRATE TEST and the material that has come into contact with the sample must be decontaminated and disposed of in accordance with the laboratory procedures for the decontamination and disposal of potentially infected material. BIBLIOGRAPHY PRESENTATION Product Ref. Test TABLE OF SYMBOLS In Vitro Diagnostic Medical Device Do not reuse Manufacturer Contains sufficient for <n> tests Temperature limitation Catalogue number Fragile, handle with care Use by Caution, consult accompanying documents Batch code

3 FRANÇAIS DESCRIPTION NITRATE TEST est un test rapide pour mettre en évidence la réduction des nitrates en nitrites par les bactéries. Les éprouvettes contiennent, sous une forme séchée, un mélange protéique et du nitrate de potassium, un substrat qui est réduit en nitrites par certaines espèces de bactéries. Cette réaction est utilisée pour l identification biochimique des bactéries. La réduction des nitrates est mise en évidence par l ajout des réactifs, qui révèlent la présence des nitrites, sur la base de l apparition d une coloration rouge-orange dans l éprouvette utilisée pour le test. CONTENU DES EMBALLAGES Chaque emballage contient: 30 éprouvettes avec substrat biochimique et protéique 1 flacon de réactif Alpha-naphtylamine 1 flacon de réactif Acide sulfanilique 1 notice PRINCIPE DE LA MÉTHODE La réduction des nitrates en nitrites est une capacité métabolique des micro-organismes qui utilisent l oxygène des nitrates pour former des nitrites. Les nitrites sont incolores et réagissent avec les réactifs acide sulfanilique et alpha-naphtylamine par la formation d un composé rouge. Dans la réaction positive, les micro-organismes réduisent les nitrates en nitrites et, après avoir ajouté les réactifs dans le milieu de culture, une couleur rouge-orange se développe. Dans la réaction négative, les micro-organismes sont incapables de réduire les nitrates en nitrites et, par conséquent, aucune couleur ne se développe dans le milieu de culture après l ajout des deux réactifs. En cas de réaction négative absence de développement de la coloration rouge-orange il est nécessaire d ajouter une petite quantité de poudre de zinc: le zinc métallique réduit les nitrates en nitrites. Le développement d une couleur rouge-orange, après son ajout, indique qu initialement les nitrates étaient présents et qu ils ont été réduits en nitrites par le zinc métallique et non par les bactéries (réduction des nitrates en nitrites: négative); l absence d une coloration rouge-orange, après avoir ajouté le zinc indique que les nitrates présents ont d abord été réduits en nitrites puis dans d autres composés (réduction des nitrates en nitrites: positive). COMPOSITION Éprouvette (Contenu) Substrats protéiques, nitrate de potassium Réactif Alpha-naphtylamine Réactif Acide sulfanilique Alpha-naphtylamine Acide acétique Acide sulfanilique Acide acétique PRÉLÈVEMENT ET CONSERVATION DES ÉCHANTILLONS Les colonies à soumettre au test des nitrates doivent être prélevées sur un milieu de culture utilisé pour l isolement des bactéries de l échantillon à étudier. PROCÉDURE DU TEST 1. Sortir le contenant du réfrigérateur et le laisser pendant quelques minutes sur le banc de travail afin qu il atteigne la température ambiante; 2. Choisir une colonie bien isolée sur le milieu d isolement; 3. Prendre une éprouvette et ajouter 0.2 ml de solution physiologique stérile; 4. Prendre une deuxième éprouvette et ajouter 0.2 ml de solution physiologique stérile. Cette éprouvette ne doit pas être ensemencée, elle sera utilisée comme contrôle négatif; 5. À l aide d une anse stérile, mettre en suspension dans le milieu de culture de la première éprouvette la colonie bactérienne à étudier; 6. Boucher et incuber les deux éprouvettes dans un thermostat à 36±1 C entre 2 et 24 heures; 7. Après cette période, ajouter une goutte de réactif Alpha-naphtylamine et une goutte de réactif Acide sulfanilique, agiter délicatement et attendre quelques secondes; 8. Observer le développement d une coloration rouge-orange; 9. En cas de réaction négative, ajouter une petite quantité de poudre de zinc et observer le développement éventuel de la coloration rouge-orange. INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS Les micro-organismes qui réduisent les nitrates en nitrites provoquent, après l ajout des réactifs Alpha-naphtylamine et Acide sulfanilique, le développement d une coloration rougeorange (réaction positive). Les micro-organismes qui ne réduisent pas les nitrates en nitrites ne provoquent pas, après l ajout des réactifs Alpha-naphtylamine et Acide sulfanilique, le développement de la coloration rouge-orange (réaction négative). En cas de réaction négative, il est nécessaire de confirmer ou d infirmer la négativité par l ajout dans l éprouvette test et dans celle de contrôle d une petite quantité de poudre de zinc. Si après avoir ajouté la poudre de zinc la coloration rouge-orange apparaît, cela signifie que les nitrates initialement présents ont été réduits en nitrites par la poudre de zinc et non par le micro-organisme à étudier (réaction négative). Si par contre, même après avoir ajouté la poudre de zinc, la coloration ne se développe pas, cela signifie que les nitrates présents ont d abord été réduits en nitrites puis dans différents composés (réaction positive). L éprouvette du contrôle négatif servira à confirmer les résultats. Le test est utilisé pour identifier les bactéries capables de réduire les nitrates en nitrites. Le test est particulièrement utile pour différencier: Les Entérobactéries; Les Listeria; Les bactéries à Gram négatif n appartenant pas aux Entérobactéries. CONTRÔLE QUALITÉ Chaque lot de NITRATE TEST est soumis au test pour la réduction des nitrates en utilisant des souches bactériennes de Escherichia coli ATCC pour le contrôle positif et Listeria monocytogenes ATCC pour le contrôle négatif. LIMITES Le test de réduction des nitrates en nitrites est utile pour l identification bactérienne. Il doit toutefois être accompagné d autres tests comme la coloration de Gram, les tests biochimiques et sérologiques, etc. L ajout d une quantité excessive de poudre de zinc pourrait donner lieu à des réactions faussement négatives. PRÉCAUTIONS Le produit NITRATE TEST contient de l acide acétique à la concentration de 30 % dans la configuration des réactifs Alpha-naphtylamine et Acide sulfanilique. À cette concentration, il est classé comme dangereux aux termes de la législation en vigueur; pour son emploi, il est conseillé de consulter la Fiche de données de sécurité. NITRATE TEST est un dispositif à usage unique, destiné exclusivement à un usage diagnostique in vitro et à un usage professionnel; il doit être utilisé en laboratoire par des opérateurs correctement formés, avec des méthodes approuvées d asepsie et de sécurité à l égard des agents pathogènes. CONSERVATION Conserver NITRATE TEST à 2-8 C dans son emballage d origine qui le protège de la lumière. Ne pas conserver à proximité de sources de chaleur et éviter toute variation excessive de température. Dans ces conditions, NITRATE TEST est valable jusqu à la date limite d utilisation indiquée sur l étiquette. Ne pas utiliser au-delà de cette date. Éliminer en présence de signes de détérioration (changements de couleur du contenu de l éprouvette et des réactifs). ÉLIMINATION DU MATÉRIEL UTILISÉ Après utilisation, NITRATE TEST et le matériel ayant été au contact de l échantillon doivent être décontaminés et éliminés conformément aux techniques utilisées en laboratoire pour la décontamination et l élimination de matériel potentiellement infecté. BIBLIOGRAPHIE PRÉSENTATION Produit Ref. Test TABLEAU DES SYMBOLES Dispositif médical diagnostique in vitro Ne pas réutiliser Fabricant Contenu suffisant pour <n> tests Limites de température Numéro de catalogue Fragile, manipuler avec soin Utiliser avant Attention, voir les instructions pour l utilisation Code du lot

4 ESPAÑOL DESCRIPCIÓN NITRATE TEST es una prueba rápida para evidenciar la reducción de los nitratos a nitritos por parte de las bacterias. Las probetas contienen en forma desecada una mezcla proteica y nitrato potásico, sustrato que algunas especies de bacterias reducen a nitritos. Dicha reacción se utiliza para la identificación bioquímica de las bacterias. La reducción de los nitratos se evidencia añadiendo los reactivos, que detectan la presencia de los nitritos, en la base de la aparición de una coloración rojo-anaranjada en la probeta usada para la prueba. CONTENIDO DE LOS ESTUCHES Cada estuche contiene: 30 probetas con sustrato bioquímico y proteico 1 frasco de reactivo Alfa-naftilamina 1 frasco de reactivo Ácido sulfanílico 1 hoja de instrucciones PRINCIPIO DEL MÉTODO La reducción de los nitratos a nitritos es una capacidad metabólica de los microorganismos que sustraen el oxígeno de los nitratos para formar nitritos. Los nitritos son incoloros y reaccionan con los reactivos ácido sulfanílico y alfa-naftilamina con formación de un compuesto rojo. En la reacción positiva, los microorganismos reducen los nitratos a nitritos y después de añadir los reactivos en el medio de cultivo se desarrolla un color rojo-anaranjado. En la reacción negativa, los microorganismos son incapaces de reducir los nitratos a nitritos y por lo tanto no se desarrolla ningún color en el medio de cultivo después de añadir los dos reactivos. En caso de reacción negativa - falta de desarrollo de coloración rojoanaranjada - es necesario añadir una pequeña cantidad de polvo de cinc: el cinc metálico reduce los nitratos a nitritos. El desarrollo de un color rojo-anaranjado después de añadirlo indica que estaban presentes inicialmente los nitratos que han sido reducidos a nitritos por el cinc metálico y no por las bacterias (reducción de los nitratos a nitritos: negativa); la ausencia de una coloración rojo-anaranjada, después de añadir el cinc indica que los nitratos presentes han sido reducidos primero a nitritos y sucesivamente a otros compuestos (reducción de los nitratos a nitritos: positiva). COMPOSICIÓN Probeta (Contenido) Sustratos proteicos, nitrato potásico Reactivo Alfa-naftilamina Reactivo Ácido sulfanílico Alfa-naftilamina Ácido sulfanílico RECOLECCIÓN Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS Las colonias que hay que someter a la prueba de los nitratos han de recogerse de un medio de cultivo utilizado para el aislamiento de las bacterias de la muestra en examen. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 1. Tome el recipiente del frigorífico y déjelo durante algunos minutos encima de la mesa hasta que alcance la temperatura ambiente; 2. Escoja una colonia bien aislada en el terreno de aislamiento; 3. Tome una probeta y añada 0.2 ml de solución fisiológica estéril; 4. Tome una segunda probeta y añada 0.2 ml de solución fisiológica estéril. Esta probeta no se tiene que sembrar y se utilizará como control negativo; 5. Con un asa estéril suspenda en el medio de cultivo de la primera probeta la colonia bacteriana en examen; 6. Tape e incube las dos probetas en termostato a 36±1 C por un mínimo de 2 horas hasta un máximo de 24 horas; 7. Después de este periodo añada una gota de reactivo Alfa-naftilamina y una gota de reactivo Ácido sulfanílico, agite suavemente y espere unos segundos; 8. Observe el desarrollo de un coloración rojo-anaranjada; 9. En caso de reacción negativa añada una pequeña cantidad de polvo de cinc y observe el eventual desarrollo de la coloración rojo-anaranjada. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Los microorganismos que reducen los nitratos a nitritos determinan, después de añadir los reactivos Alfa-naftilamina y Ácido sulfanílico, el desarrollo de una coloración rojoanaranjada (reacción positiva). Los microorganismos que no reducen los nitratos a nitritos no determinan, después de añadir los reactivos Alfa-naftilamina y Ácido sulfanílico, el desarrollo de la coloración rojo-anaranjada (reacción negativa). En caso de reacción negativa es necesario confirmar o desmentir la negatividad añadiendo a la probeta de prueba y a la de control una pequeña cantidad de polvo de cinc. Si después de añadir el polvo de cinc aparece la coloración rojo-anaranjada significa que los nitratos inicialmente presentes han sido reducidos a nitritos por el polvo de cinc y no por los microorganismos en análisis (reacción negativa). Si en cambio, la coloración no se desarrolla aunque se haya añadido el polvo de cinc significa que los nitratos presentes han sido reducidos primero a nitritos y sucesivamente a compuestos diferentes (reacción positiva). La probeta del control negativo servirá para confirmar los resultados. La prueba se usa para identificar las bacterias capaces de reducir los nitratos a nitritos. La prueba es especialmente útil para diferenciar: Las Enterobacteriaceae; Las Listeriae; Las bacterias gramnegativas no pertenecientes a las Enterobacteriaceae. CONTROL DE CALIDAD Cada lote de NITRATE TEST se somete a la prueba para la reducción de los nitratos utilizando cepas bacterianas de Escherichia coli ATCC para el control positivo y Listeria monocytogenes ATCC para el control negativo. LÍMITES La prueba de reducción de los nitratos a nitritos es una ayuda para la identificación bacteriana. Sin embargo, hay que realizarla con otras otras pruebas como la coloración de Gram, pruebas bioquímicas y serológicas, etc. Si se añade una cantidad de polvo de cinc excesiva se podrían causar reacciones falsamente-negativas. PRECAUCIONES El producto NITRATE TEST contiene ácido acético en la concentración de un 30% en la configuración de los reactivos Alfa-naftilamina y Ácido sulfanílico. En esta concentración es clasificable como peligroso según la legislación vigente; para su empleo se aconseja consultar la ficha de seguridad. NITRATE TEST es un dispositivo desechable, que hay que usar solo para uso diagnóstico in vitro, está destinado a un ámbito profesional y tiene que ser utilizado en laboratorio por operadores adecuadamente formados, con métodos aprobados de asepsia y seguridad con respecto a los agentes patógenos. CONSERVACIÓN Conserve el NITRATE TEST a 2-8 C en su estuche original que protege de la luz. Evite conservarlo cerca de fuentes de calor y evitr excesivas variaciones de temperatura. En estas condiciones el NITRATE TEST mantiene su validez hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilice después de esta fecha. Elimine si hay signos de deterioro (cambios de color del contenido de la probeta y de los reactivos). ELIMINACIÓN DEL MATERIAL USADO Después del uso el NITRATE TEST y el material que ha entrado en contacto con la muestra han de ser decontaminados y eliminados de acuerdo con las técnicas en uso en laboratorio para la descontaminación y la eliminación de material potencialmente infecto. BIBLIOGRAFÍA PRESENTACIÓN Producto Ref. Prueba TABLA DE LOS SÍMBOLOS Dispositivo médico diagnóstico in vitro No reutilizar Fabricante Contenido suficiente para <n> pruebas Límites de temperatura Número de catálogo Frágil, manipular con cuidado Utilizar antes de Atencion, ver instrucciones de uso Código del lote

5 PORTUGUÊS DESCRIÇÃO O NITRATE TEST é um teste rápido para evidenciar a redução dos nitratos em nitritos por parte das bactérias. As provetas contêm em forma exsicada uma mistura proteica e nitrato de potássio, substrato que é reduzido a nitritos por algumas espécies de bactérias. Esta reacção é utilizada para a identificação bioquímica das bactérias. A redução dos nitratos é evidenciada pela adição dos reagentes, que detectam a presença dos nitritos, na base do aparecimento de uma coloração vermelha/cor-de-laranja na proveta utilizada para o teste. CONTEÚDO DAS CONFECÇÕES Cada confecção contém: 30 provetas com substrato bioquímico e proteico 1 frasco de reagente Alfa-naftilamina 1 frasco de reagente Ácido sulfanílico 1 folha de instruções PRINCÍPIO DO MÉTODO A redução dos nitratos em nitritos é uma capacidade metabólica dos microrganismos que subtraem o oxigénio dos nitratos para formar nitritos. Os nitritos são incolores e reagem com os reagentes ácido sulfanílico e alfa-naftilamina com formação de um composto vermelho. Na reacção positiva, os microrganismos reduzem os nitratos em nitritos e depois a adição dos reagentes no meio cultural, se desenvolve uma cor vermelha/cor-de-laranja. Na reacção negativa, os microrganismos são incapazes de reduzir os nitratos em nitritos e portanto, não se desenvolve alguma cor no meio cultural depois da adição dos dois reagentes. Em caso de reacção negativa falta de desenvolvimento de coloração vermelha/cor-de-laranja - é necessário adicionar uma pequena quantidade de pós de zinco: o zinco metálico reduz os nitratos em nitritos. O desenvolvimento de uma cor vermelha/cor-de-laranja, depois da sua adição, indica que eram presentes inicialmente os nitratos que foram reduzidos em nitritos pelo zinco metálico e não pelas bactérias (redução dos nitratos em nitritos: negativa); a ausência de uma coloração vermelha/cor-de-laranja, depois da adição do zinco indica que os nitratos presentes foram reduzidos primeiramente em nitritos e em seguida em outros compostos (redução dos nitratos em nitritos: positiva). COMPOSIÇÃO Proveta (Conteúdo) Substratos proteicos, nitrato de potássio Reagente Alfa-naftilamina Reagente Ácido sulfanílico Alfa-naftilamina Ácido sulfanílico RECOLHIMENTO E CONSERVAÇÃO DAS AMOSTRAS As colónias que devem ser submetidas ao teste dos nitratos devem ser levantadas de um terreno cultural utilizado para o isolamento das bactérias da amostra em exame. PROCEDIMENTO DO TESTE 1. Pegar o recipiente do frigorífico e deixá-lo por alguns minutos sobre a bancada até atingir a temperatura ambiente; 2. Escolher uma colónia bem isolada no terreno de isolamento; 3. Pegar uma proveta e adicionar 0.2 ml de solução fisiológica estéril; 4. Pegar uma segunda proveta e adicionar 0.2 ml de solução fisiológica estéril. Esta proveta não deve ser semeada e será utilizada como controlo negativo; 5. Com uma ansa estéril suspender no meio cultural da primeira proveta a colónia bactérica em exame; 6. Tampar e incubar as duas provetas em termóstato a 36±1 C por um mínimo de 2 horas até a um máximo de 24 horas; 7. Depois deste período adicionar uma gota de reagente Alfa-naftilamina e uma gota de reagente Ácido sulfanílico, agite delicadamente e aguarde alguns segundos; 8. Observar o desenvolvimento de uma coloração vermelha/cor-de-laranja; 9. Em caso de reacção negativa adicione uma pequena quantidade de pós de zinco e observe o eventual desenvolvimento da coloração vermelha/cor-de-laranja. INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS Os microrganismos que reduzem os nitratos em nitritos determinam, depois da adição dos reagentes Alfa-naftilamina e Ácido sulfanílico, o desenvolvimento de uma coloração vermelha/cor-de-laranja (reacção positiva). Os microrganismos que não reduzem os nitratos em nitritos não determinam, depois da adição dos reagentes Alfa-naftilamina e Ácido sulfanílico, o desenvolvimento da coloração vermelha/cor-de-laranja (reacção negativa). Em caso de reacção negativa é necessário confirmar ou desmentir a negatividade com a adição na proveta teste e naquela de controlo de uma pequena quantidade de pós de zinco. Sempre que, depois da adição do pó de zinco, apareça a coloração vermelha/cor-delaranja, significa que os nitratos inicialmente presentes foram reduzidos em nitritos pelo pó de zinco e não pelo microrganismo em análise (reacção negativa). Se, ao contrário, mesmo depois da adição do pó de zinco, a coloração não se desenvolve, significa que os nitratos presentes já foram reduzidos em nitritos e em seguida a compostos diversos (reacção positiva). A proveta do controlo negativo servirá a confirmar os resultados. O teste é utilizado para identificar as bactérias capazes de reduzir os nitratos em nitritos. O teste é particularmente útil para diferenciar: As Enterobacteriaceae; As Listeriae; As bactérias gram-negativas que não pertencem as Enterobacteriaceae. CONTROLO DA QUALIDADE Cada lote de NITRATE TEST é submetido ao teste para a redução dos nitratos utilizando estirpes bactéricas de Escherichia coli ATCC para o controlo positivo e Listeria monocytogenes ATCC para o controlo negativo. LIMITES O teste de redução dos nitratos em nitritos é de ajuda na identificação bactérica. Contudo, deve ser acompanhado por outros testes quais a coloração de Gram, teste bioquímicos e serológicos, etc. A adição de uma excessiva quantidade de pós de zinco pode dar lugar a reacções falsamente negativas. PRECAUÇÕES O produto NITRATE TEST contém ácido acético com uma concentração de 30% na configuração dos reagentes Alfa-naftilamina e Ácido sulfanílico. A esta concentração é classificável como perigoso nos termos da legislação vigente; para o seu uso se aconselha de consultar a ficha de segurança. O NITRATE TEST é um dispositivo mono uso, que deve ser utilizado somente para o uso diagnóstico in vitro, é destinado a um âmbito profissional e deve ser utilizado em laboratório por operadores adequadamente treinados, com métodos aprovados de assepsia e de segurança nos confrontos dos agentes patogénicos. CONSERVAÇÃO Conserve o NITRATE TEST a 2-8 C na sua confecção original que é a protecção da luz. Evite de conservar próximo a fontes de calor e evitar excessivas variações de temperatura. Nestas condições o NITRATE TEST é válido até a data de vencimento indicada na etiqueta. Não utilize além desta data. Elimine caso sejam presentes sinais de deterioração (mudanças de cor do conteúdo da proveta e dos reagentes). ELIMINAÇÃO DO MATERIAL UTILIZADO Depois da utilização, o NITRATE TEST e o material que entrou em contacto com a amostra devem ser descontaminados e eliminados de acordo com as técnicas em uso em laboratório para a descontaminação e a eliminação de material potencialmente infecto. BIBLIOGRAFIA APRESENTAÇÃO Produto Ref. Teste TABELA DOS SÍMBOLOS Dispositivo médico de diagnóstico in vitro Não reutilizar Fabricante Conteúdo suficiente para <n> ensaios Limites de temperatura Número de catálogo Frágil, manusear com cuidado Utilizar dentre de Atenção, ver as instruções para o uso Código do lote

6 ΕΛΛΗΝΙΚΑ ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ Το NITRATE TEST είναι µια γρήγορη εξέταση για την ανάδειξη της αναγωγής των νιτρικών σε νιτρώδη εκ µέρους των βακτηρίων. Οι δοκιµαστικοί σωλήνες περιέχουν σε αποξηραµένη µορφή ένα µείγµα πρωτεϊνών και νιτρικού καλίου, υπόστρωµα που ανάγεται σε νιτρώδη από ορισµένα είδη βακτηρίων. Αυτή η αντίδραση χρησιµοποιείται για την βιοχηµική ταυτοποίηση των βακτηρίων. Η αναγωγή των νιτρικών αναδεικνύεται από την προσθήκη αντιδραστηρίων που επισηµαίνουν την παρουσία νιτρικών µε βάση την εµφάνιση πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού στον δοκιµαστικό σωλήνα που χρησιµοποιείται για την εξέταση. ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΟ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ Κάθε συσκευασία περιέχει: 30 δοκιµαστικούς σωλήνες µε βιοχηµικό και πρωτεϊνικό υπόστρωµα 1 φιαλίδιο του αντιδραστηρίου α-ναφθυλαµίνη 1 φιαλίδιο του αντιδραστηρίου σουλφανιλικό οξύ 1 φυλλάδιο οδηγιών ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ Η αναγωγή των νιτρικών σε νιτρώδη είναι µια µεταβολική ικανότητα των µικροοργανισµών που αφαιρούν οξυγόνο από τα νιτρικά για να σχηµατίσουν νιτρώδη. Τα νιτρικά είναι άχρωµα και αντιδρούν µε τα αντιδραστήρια σουλφανιλικό οξύ και α-ναφθυλαµίνη για τον σχηµατισµό ενός ερυθρού µείγµατος. Στην θετική αντίδραση, οι µικροοργανισµοί ανάγουν τα νιτρικά σε νιτρώδη και µετά από την προσθήκη των αντιδραστηρίων στο µέσο καλλιέργειας αναπτύσσεται ένα πορτοκαλοκόκκινο χρώµα. Στην αρνητική αντίδραση, οι µικροοργανισµοί δεν είναι ικανοί να ανάγουν τα νιτρικά σε νιτρώδη και δεν αναπτύσσεται κανένας χρωµατισµός στο µέσο καλλιέργειας µετά από την προσθήκη των δύο αντιδραστηρίων. Στην περίπτωση αρνητικής αντίδρασης- µη ανάπτυξη πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού- είναι απαραίτητο να προσθέσετε µια µικρή ποσότητα σκόνης ψευδαργύρου: ο µεταλλικός ψευδάργυρος ανάγει τα νιτρικά σε νιτρώδη. Η ανάπτυξη ενός πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού µετά την προσθήκη του δείχνει ότι υπήρχαν αρχικά τα νιτρικά που ανήχθησαν σε νιτρώδη από τον µεταλλικό ψευδάργυρο και όχι από τα βακτήρια (αναγωγή νιτρικών σε νιτρώδη: αρνητική). Η απουσία ενός πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού µετά την προσθήκη του ψευδαργύρου δείχνει ότι τα υπάρχοντα νιτρικά ανήχθησαν από πριν σε νιτρώδη και ακολούθως σε άλλα µείγµατα (αναγωγή νιτρικών σε νιτρώδη: θετική) ΣΥΣΤΑΣΗ (Περιεχόµενο) Δοκιµαστικός σωλήνας Αντιδραστήριο α-ναφθυλαµίνη Αντιδραστήριο σουλφανιλικό οξύ Πρωτεϊνικά υποστρώµατα, νιτρικό κάλιο α-ναφθυλαµίνη Οξεικό οξύ Σουλφανιλικό οξύ Οξεικό οξύ ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΣΥΝΤΗΡΗΣΗ ΤΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Οι αποικίες που θα υποβληθούν σε εξέταση νιτρικών πρέπει να έχουν ληφθεί από υλικό καλλιέργειας που χρησιµοποιήθηκε για την αποµόνωση των βακτηρίων του υπό εξέταση δείγµατος. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ 1. Λάβετε το δοχείο από το ψυγείο και αφήστε το για µερικά λεπτά στον πάγκο εργασίας µέχρι να έρθει σε θερµοκρασία περιβάλλοντος. 2. Επιλέξτε µια καλά αποµονωµένη αποικία στο υλικό αποµόνωσης. 3. Λάβετε έναν δοκιµαστικό σωλήνα και προσθέστε 0.2 ml φυσιολογικού αποστειρωµένου ορού. 4. Λάβετε έναν δεύτερο δοκιµαστικό σωλήνα και προσθέστε 0.2 ml φυσιολογικού αποστειρωµένου ορού. Αυτός ο δοκιµαστικός σωλήνας δεν πρέπει να ενοφθαλµιστεί και θα χρησιµοποιηθεί ως αρνητικός µάρτυρας. 5. Με έναν αποστειρωµένο βρόγχο εναιωρήστε στο µέσο καλλιέργειας του πρώτου δοκιµαστικού σωλήνα την υπό εξέταση βακτηριακή αποικία. 6. Πωµατίστε και επωάστε τους δύο δοκιµαστικούς σωλήνες σε θερµοστάτη στους 36±1 C για τουλάχιστον 2 ώρες έως 24 ώρες το πολύ. 7. Μετά από αυτό το διάστηµα προσθέστε µια σταγόνα του αντιδραστηρίου α-ναφθυλαµίνη και µια σταγόνα του αντιδραστηρίου σουλφανιλικό οξύ, ανακινήστε ελαφρά και περιµένετε µερικά δευτερόλεπτα. 8. Παρατηρήστε την ανάπτυξη πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού. 9. Στην περίπτωση αρνητικής αντίδρασης προσθέστε µια µικρή ποσότητα σκόνης ψευδαργύρου και παρατηρήστε την ενδεχόµενη ανάπτυξη πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού. ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Οι µικροοργανισµοί που ανάγουν τα νιτρικά σε νιτρώδη προκαλούν µετά την προσθήκη των αντιδραστηρίων α-ναφθυλαµίνη και σουλφανιλικό οξύ την ανάπτυξη πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού (θετική αντίδραση). Οι µικροοργανισµοί που δεν ανάγουν τα νιτρικά σε νιτρώδη δεν προκαλούν µετά την προσθήκη των αντιδραστηρίων α- ναφθυλαµίνη και σουλφανιλικό οξύ την ανάπτυξη πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού (αρνητική αντίδραση). Στην περίπτωση αρνητικής αντίδρασης είναι απαραίτητο να επιβεβαιώσετε ή να διαψεύσετε την αρνητικότητα µε προσθήκη στην εξέταση στο δοκιµαστικό σωλήνα και σε εκείνη του µάρτυρα µια µικρή ποσότητα σκόνης ψευδαργύρου. Η εµφάνιση ενός πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού µετά την προσθήκη του ψευδαργύρου σηµαίνει ότι τα αρχικά υπάρχοντα νιτρικά ανήχθησαν σε νιτρώδη από την σκόνη ψευδαργύρου και όχι από τον αναλυόµενο µικροοργανισµό (αρνητική αντίδραση). Αντίθετα, η µη εµφάνιση πορτοκαλοκόκκινου χρωµατισµού ακόµα και µετά την προσθήκη του ψευδαργύρου σηµαίνει ότι τα υπάρχοντα νιτρικά ανήχθησαν αρχικά σε νιτρώδη και ακολούθως σε διαφορετικά µείγµατα (θετική αντίδραση). Ο δοκιµαστικός σωλήνας του αρνητικού µάρτυρα θα χρειαστεί για την επαλήθευση των αποτελεσµάτων. Η εξέταση χρησιµοποιείται για την ταυτοποίηση των βακτηρίων που µπορούν να ανάγουν τα νιτρικά σε νιτρώδη. Η εξέταση είναι ιδιαίτερα χρήσιµη για την διαφοροποίηση: εντεροβακτηριδίων; λιστέριας; αρνητικών κατά Gram βακτηρίων που δεν ανήκουν στα εντεροβακτήρια. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ Κάθε παρτίδα NITRATE TEST υποβάλλεται σε έλεγχο αναγωγής νιτρικών χρησιµοποιώντας βακτηριακά στελέχη Escherichia coli ATCC ως θετικό µάρτυρα και Listeria monocytogenes ATCC ως αρνητικό µάρτυρα. ΟΡΙΑ Η εξέταση αναγωγής νιτρικών σε νιτρώδη βοηθάει στην βακτηριακή ταυτοποίηση. Πρέπει πάντως να συνοδεύεται από άλλες εξετάσεις όπως η χρώση κατά Gram, βιοχηµικές και ορολογικές εξετάσεις κλπ. Η προσθήκη υπερβολικής ποσότητας σκόνης ψευδαργύρου θα µπορούσε να προκαλέσει ψευδώς αρνητικές αντιδράσεις. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Το προϊόν NITRATE TEST περιέχει οξεικό οξύ στην συγκέντρωση του 30% στην διαµόρφωση των αντιδραστηρίων α-ναφθυλαµίνη και σουλφανιλικό οξύ. Σε τέτοια συγκέντρωση κατατάσσεται ως επικίνδυνο υπό το πνεύµα της ισχύουσας νοµοθεσίας. Για τη χρήση του συνιστάται να συµβουλευτείτε το δελτίο ασφαλείας. Το NITRATE TEST είναι ένα ιατροτεχνολογικό βοήθηµα µιας χρήσης, προς χρήση µόνο για διαγνωστική χρήση in vitro. Προορίζεται για χρήση σε επαγγελµατικό περιβάλλον και πρέπει να χρησιµοποιείται σε εργαστήρια µε κατάλληλα εκπαιδευµένους τεχνικούς, µε εγκεκριµένες µεθόδους αντισηψίας και ασφάλειας έναντι των παθογόνων παραγόντων. ΦΥΛΑΞΗ Φυλάσσετε το προϊόν NITRATE TEST στους 2-8 C στην αρχική του συσκευασία που το προστατεύει από το φως. Μην αποθηκεύετε κοντά σε πηγές θερµότητας και αποφύγετε υπερβολικές διακυµάνσεις της θερµοκρασίας. Σε αυτές τις συνθήκες το προϊόν NITRATI TEST διατηρεί την ισχύ του έως την ηµεροµηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα. Μην χρησιµοποιείτε πέρα από αυτή την ηµεροµηνία. Απορρίψτε το αν υπάρχουν σηµεία αλλοίωσης (µεταβολές του χρώµατος του περιεχοµένου του δοκιµαστικού σωλήνα και των αντιδραστηρίων). ΑΠΟΡΡΙΨΗ ΤΟΥ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΜΕΝΟΥ ΥΛΙΚΟΥ Μετά την χρήση, το NITRATE TEST και το υλικό που έχει έρθει σε επαφή µε το δείγµα πρέπει να απολυµανθούν και να απορριφθούν σύµφωνα µε τις ισχύουσες τεχνικές στο εργαστήριο για την απολύµανση και την απόρριψη δυνητικώς µολυνθέντος υλικού. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ ΠΑΡΟΥΣΙΑΣΗ προϊόν Ref. Εξέταση ΠΙΝΑΚΑΣ ΣΥΜΒΟΛΩΝ Ιατρική διαγνωστική συσκευή in vitro Μην το επαναχρησιµοποιείτε Κατασκευαστής Περιεχόµενο επαρκές για <n> δοκίµια Περιορισµοί θερµοκρασίας Αριθµός καταλόγου Εύθραυστο, χειριστείτε προσεκτικά Χρήση έως Προσοχή, δείτε τις οδηγίες χρήσης Κωδικός παρτίδας