Monoclonal Mouse Anti-Human Tyrosinase Clone T311. Κωδικός M3623. Προοριζόµενη χρήση Για In Vitro διαγνωστική χρήση.

Transcript

1 Monoclonal Mouse Anti-Human Tyrosinase Clone T311 Κωδικός M3623 Προοριζόµενη χρήση Για In Vitro διαγνωστική χρήση. Το αντίσωµα αυτό προορίζεται για εργαστηριακή χρήση στον ποιοτικό προσδιορισµό µε κοινό µικροσκόπιο των κυττάρων που εκφράζουν τυροσινάση σε φυσιολογικούς και νεοπλαστικούς ιστούς χρησιµοποιώντας µεθόδους ανοσοϊστοχηµικής (IHC) εξέτασης. Τα θετικά αποτελέσµατα βοηθούν στην ταξινόµηση των µελανώµατος. 1,2 Η κλινική ερµηνεία οποιασδήποτε θετικής χρώσης ή της απουσίας αυτής θα πρέπει να συµπληρώνεται από µορφολογικές και ιστολογικές µελέτες µε κατάλληλα υλικά ελέγχου. Οι αξιολογήσεις θα πρέπει να ερµηνεύονται στο πλαίσιο του κλινικού ιστορικού του ασθενή καθώς και άλλων διαγνωστικών εξετάσεων από αρµόδιο άτοµο. Συνώνυµο T311, EC Περίληψη και επεξήγηση Η τυροσινάση είναι ένα γλυκοένζυµο µε χαλκό που συµµετέχει στην παραγωγή των χρωστικών µελανίνης, µεταξύ των οποίων η ευµελανίνη και η φαιοµελανίνη. 1,3 Στη διαδικασία αυτή, η τυροσινάση καταλύει την υδροξυλίωση της L-τυροσίνης σε L-ντόπα και την οξείδωση της L- ντόπα σε L-ντοπακινόνη. 1,3 Η τυροσινάση, ως δείκτης της µελανοκυτταρικής γενεαλογίας, εντοπίζεται στα µελανοκύτταρα που απαντώνται στους δερµατικούς και επιδερµικούς συνδέσµους του φυσιολογικού δέρµατος, δεν ανιχνεύεται όµως σε άλλα φυσιολογικά κύτταρα. 2 Μελανοκύτταρα περιέχουν και τα χρωµατισµένα µέρη των οφθαλµών, όπως ο χοριοειδής χιτώνας και η ίριδα. Έκφραση της τυροσινάσης απαντάται και στις µελανοκυτταρικές αλλοιώσεις, µεταξύ των οποίων καλοήθεις σπίλοι και η πλειοψηφία των µεταστατικών κακοηθών µελανωµάτων, όχι όµως σε όγκους µη µελανοκυτταρικού τύπου. 2,4,5 Επιπλέον, η τυροσινάση µπορεί να αναγνωριστεί από τα αυτόλογα κυτταροτοξικά Τ κύτταρα ασθενών που πάσχουν από µελάνωµα και γι αυτό τα πεπτίδια της τυροσινάσης χρησιµοποιούνται σε εµβόλια κατά του µελανώµατος. 6,7 Ανατρέξτε στις Γενικές οδηγίες για την ανοσοϊστοχηµική χρώση της Dako ή στις οδηγίες του συστήµατος ανίχνευσης των διαδικασιών IHC για: 1) την Αρχή της διαδικασίας, 2) τα Υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται, 3) την Αποθήκευση, 4) την Προετοιµασία δειγµάτων, 5) τη ιαδικασία χρώσης, 6) τον Ποιοτικό έλεγχο, 7) την Αντιµετώπιση προβληµάτων, 8) την Ερµηνεία της χρώσης, 9) τους Γενικούς περιορισµούς. Αντιδραστήριο που παρέχεται Κωδικός M3623 Το µονοκλωνικό αντίσωµα ποντικού παρέχεται σε υγρή µορφή ως υπερκείµενο ιστοκαλλιέργειας σε Tris-HCl 0,05 mol/l µε ph 7,2 και νατραζίδιο 0,015 mol/l. Το συγκεκριµένο προϊόν περιέχει σταθεροποιητική πρωτεΐνη. Κλώνος: T311 1 Ισότυπος: IgG 2a, κ Συγκέντρωση lgg ποντικού σε mg/l: Βλ. ετικέτα στο φιαλίδιο. Το M3623 µπορεί να χρησιµοποιηθεί σε αραίωση 1:100, κατά την εκτέλεση IHC που χρησιµοποιεί το σύστηµα ανίχνευσης EnVision+. Τα παρόντα ισχύουν µόνο ως κατευθυντήριες οδηγίες. Οι βέλτιστες συγκεντρώσεις αντισώµατος ενδέχεται να ποικίλουν ανάλογα µε το δείγµα και τη µέθοδο προετοιµασίας και πρέπει να καθορίζονται ξεχωριστά για κάθε εργαστήριο. Ανοσογόνο Καθαρισµένο πρωτεϊνικό µόριο ανασυνδυασµένης µη γλυκοζυλιωµένης τυροσινάσης, αποτελούµενο από 452 από τα συνολικά 511 αµινοξέα του ώριµου πρωτεϊνικού µορίου της ανθρώπινης τυροσινάσης. 1 Ειδικότητα Η ανοσοστύπωση πραγµατοποιήθηκε χρησιµοποιώντας L-κύτταρα µεταµολυσµένα µε το γονίδιο της τυροσινάσης καθώς και σε τέσσερις κυτταρικές σειρές που εκφράζουν το mrna της τυροσινάσης: SK-MEL-13, SK-MEL-19, SK-MEL-30 και SK-MEL Σε συµφωνία µε προηγούµενες αναφορές, ο κλώνος Τ311 αναγνώρισε στα ανοσοστυπώµατα και των πέντε κυτταρικών σειρών ένα σµήνος πρωτεϊνών που κυµαίνονταν από kd. 1 Σε στυπώµατα από κυτταρικές σειρές που παρουσίαζαν ισχυρή αντίδραση (SK-MEL-19), χρωµατίστηκε και µια επιπλέον ζώνη 55 kd. 1 Επιπλέον, τα ανοσοστυπώµατα µη µεταµολυσµένων L-κυττάρων και τριών κυτταρικών σειρών που δεν εξέφραζαν το mrna της τυροσινάσης (MZ2- MEL3.1, SK-MEL-187 και MZ2-MEL2.2), υπήρξαν αρνητικά µε τον κλώνο T Επίσης σε δοκιµασίες ανοσοφθορισµού και ανοσοστύπωσης µε τον κλώνο Τ311, απουσία αντίδρασης εµφάνιζαν και L-κύτταρα που είχαν µεταµολυνθεί µε τη συγγενική µε την τυροσινάση πρωτεΐνη 1, TRP-1(gp75), ένδειξη ότι το αντίσωµα αυτό δεν παρουσιάζει διασταυρούµενη αντίδραση µε την πρωτεΐνη τη συνδεόµενη µε το µελανόσωµα, TRP-1(gp75). 1 Υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται Ανατρέξτε στις Γενικές οδηγίες για την ανοσοϊστοχηµική χρώση της Dako ή/και στις οδηγίες του συστήµατος ανίχνευσης. Συνιστώµενο αραιωτικό για διαδικασίες IHC: Antibody Diluent (κωδικός S0809) Ο ακόλουθος αρνητικός µάρτυρας συνιστάται για διαδικασίες IHC: Mouse IgG 2a (κωδικός X0943) ( ) GR_001 σελ. 1/5

2 Προφυλάξεις 1. Για επαγγελµατίες χρήστες. 2. Το προϊόν αυτό περιέχει νατραζίδιο (NaN 3), µια ιδιαίτερα τοξική χηµική ουσία σε καθαρή µορφή. Σε συγκεντρώσεις του προϊόντος, αν και δεν έχει ταξινοµηθεί ως επικίνδυνο, η συσσώρευση NaN 3 ενδέχεται να αντιδράσει µε µολύβδινες ή χάλκινες υδραυλικές σωληνώσεις και να δηµιουργήσει ιδιαίτερα εκρηκτικά µεταλλικά αζίδια. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε µε άφθονο νερό για να αποτρέψετε τη συσσώρευση µεταλλικών αζιδίων στις σωληνώσεις. 3. Όπως ισχύει για κάθε προϊόν βιολογικής προέλευσης, πρέπει να εφαρµόζονται οι πρέπουσες διαδικασίες χειρισµού. 4. Πρέπει να φοράτε κατάλληλο εξοπλισµό προσωπικής προστασίας για να αποφύγετε την επαφή µε τα µάτια και το δέρµα. 5. Όσα αντιδραστήρια δεν χρησιµοποιηθούν, πρέπει να απορρίπτονται σύµφωνα µε τους τοπικούς, κρατικούς και οµοσπονδιακούς κανονισµούς. Αποθήκευση Αποθηκεύστε σε θερµοκρασία 2 8 C. Μην το χρησιµοποιείτε µετά την ηµεροµηνία λήξης που αναγράφεται στο φιαλίδιο. Αν τα αντιδραστήρια φυλάσσονται σε διαφορετικές συνθήκες από εκείνες που προδιαγράφονται, ο χρήστης πρέπει να επαληθεύσει τις συνθήκες. εν υπάρχουν εµφανή σηµάδια που να υποδεικνύουν έλλειψη σταθερότητας του προϊόντος αυτού. Για το λόγο αυτό, οι θετικοί και αρνητικοί µάρτυρες πρέπει να εξετάζονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών. Αν παρατηρηθεί µη αναµενόµενη χρώση, που δεν µπορεί να εξηγηθεί από την ποικιλία των εργαστηριακών διαδικασιών και υπάρχουν υποψίες για πρόβληµα στο αντίσωµα, επικοινωνήστε µε το Τµήµα Τεχνικής Υποστήριξης της Dako. Προετοιµασία δειγµάτων Τοµές σε παραφίνη Το αντι-τυροσινάση µπορεί να χρησιµοποιηθεί σε τοµές ιστού µονιµοποιηµένες σε φορµαλίνη και έγκλειστες σε παραφίνη. εν συνιστάται η εκ των προτέρων κατεργασία του ιστού µε πρωτεολυτικά ένζυµα. Οι αποπαραφινωµένες τοµές ιστών πρέπει να υποβάλλονται σε θερµική κατεργασία πριν από τη διαδικασία χρώσης IHC. Η θερµικά επαγόµενη ανάκτηση επιτόπων (HIER) περιλαµβάνει βύθιση των τοµών ιστού σε προθερµασµένο ρυθµιστικό διάλυµα και διατήρηση της θερµότητας σε υδατόλουτρο (95 99 C). Εναλλακτικές πηγές θερµότητας µπορούν να χρησιµοποιηθούν για το HIER µετά από αξιολόγηση έναντι της προτεινόµενης διαδικασίας. Χρησιµοποιήστε πρωτόκολλο θέρµανσης 40 λεπτών για HIER σε θερµοκρασία C. Μετά τη θερµική κατεργασία, αφήστε το δοχείο µε το ρυθµιστικό διάλυµα και τις αντικειµενοφόρους πλάκες να κρυώσουν επί 20 λεπτά σε θερµοκρασία δωµατίου. Ξεπλύνετε καλά µε ρυθµιστικό διάλυµα ή απιονισµένο νερό µετά τη HIER. Για καλύτερη προσκόλληση των τοµών ιστού στις υάλινες αντικειµενοφόρους πλάκες, συνιστάται η χρήση Silanized Slides (κωδικός S3003). Συνιστάται το Target Retrieval Solution ph 9.0 (κωδικός S2368) ή το 10x Concentrate (κωδικός S2367). Κρυοστατικές τοµές και κυτταρικά επιχρίσµατα Η αντι-τυροσινάση µπορεί να χρησιµοποιηθεί για τη σήµανση κρυοστατικών τοµών µονιµοποιηµένων σε ακετόνη ή µονιµοποιηµένων κυτταρικών επιχρισµάτων. ιαδικασία χρώσης Ακολουθήστε τη διαδικασία για το σύστηµα ανίχνευσης που επιλέξατε. Ερµηνεία χρώσης Το πρότυπο κυτταρικής χρώσης για την αντι-τυροσινάση είναι κυτταροπλασµατικό ή/και περιπυρηνικό. Χαρακτηριστικά απόδοσης Φυσιολογικοί ιστοί 2 Μια σειρά 33 φυσιολογικών ιστών εξετάστηκε ανοσοϊστοχηµικά µε τον κλώνο Τ311 του αντι-τυροσινάσης και από αυτούς µόνο το δέρµα υπήρξε θετικό. 2 Στο φυσιολογικό δέρµα, τα µελανοκύτταρα υπήρξαν ανοσοδραστικά, ενώ τα κερατινοκύτταρα της βασικής στοιβάδας του δέρµατος παρέµειναν αρνητικά. 1,2 Τύπος ιστού Στοιχεία ιστών µε θετική χρώση Σκωληκοειδής απόφυση 0 Μαστός 0 Οισοφάγος 0 Νεφρός 0 Ήπαρ 0 Προστάτης 0 Ουροδόχος κύστη 0 Σιελογόνος αδένας 0 Σπλήνας 0 Αµυγδαλή 0 Επινεφρίδια 0 Μυελός των οστών 0 Λεµφαδένας 0 Παχύ έντερο 0 Καρδιά 0 Πνεύµονες 0 Πάγκρεας 0 Περιφερειακό νεύρο 0 Σκελετικός µυς 0 έρµα µελανοκύτταρα Χοληφόρος κύστη 0 Λεπτό έντερο 0 Στόµαχος 0 ( ) GR_001 σελ. 2/5

3 Όρχεις 0 Σπερµατική χορδή 0 Θύµος 0 Θυρεοειδής αδένας 0 Παραθυρεοειδής αδένας 0 Ωοθήκη 0 Φαλλοπιανός αγωγός 0 Πλακούντας 0 Μήτρα 0 Κόλπος 0 Παθολογικοί ιστοί 2 Ο κλώνος Τ311 εξετάστηκε σε καλοήθεις και κακοήθεις µελανοκυτταρικές αλλοιώσεις και βρέθηκε ότι χρωµατίζει την πλειοψηφία των εξεταζόµενων καλοηθών σπίλων και µελανωµάτων. Μειωµένη ανοσοδραστικότητα της τυροσινάσης παρατηρήθηκε σε µελανώµατα των δεσµοπλαστικών και ατρακτοειδών κυτταρικών τύπων. 1,2,4,5 Η ειδικότητα του αντι-τυροσινάσης στις µελανοκυτταρικές αλλοιώσεις διαπιστώθηκε µε την ανοσοχρώση περισσοτέρων από 70 διαφορετικών όγκων µη µελανοκυτταρικού τύπου, χωρίς να εµφανίσουν καµία ανοσοδραστικότητα, ένδειξη ότι η έκφραση της τυροσινάσης περιορίζεται στα κύτταρα της µελανοκυτταρικής γενεαλογίας. 2 Τύπος ιστού (Πλήθος που εξετάστηκε) Όγκοι µε θετική χρώση Μεταστατικό κακόηθες µελάνωµα (70) 63/70 Μεταστατικό κακόηθες µελάνωµα 0/5 δεσµοπλαστικών/ατρακτοειδών κυττάρων (5) Πρωτογενές κακόηθες µελάνωµα (9) 8/9 Πρωτογενές κακόηθες µελάνωµα δεσµοπλαστικού τύπου (8) 1/8 Πρωτογενές κακόηθες µελάνωµα ατρακτοειδούς κυτταρικού 0/2 τύπου (2) Πρωτογενές κακόηθες µελάνωµα µε χαρακτηριστικά 1/1 ατρακτοειδούς κυττάρου (1) Καλοήθης σπίλος (20) 20/20 Όγκος χοριοειδικού βόλου (4) 0/4 Αιµαγγειοπερικύτωµα (4) 0/4 Μονήρης ινώδης όγκος (4) 0/4 Σβάννωµα (4) 0/4 Νευροΐνωµα (4) 0/4 Κακοήθης όγκος του περιβλήµατος του περιφερικού νεύρου (4) 0/4 Επιθηλιακό σάρκωµα (4) 0/4 Αρθρικό σάρκωµα (4) 0/4 Προεξέχον δερµατοϊνοσάρκωµα (4) 0/4 Κακόηθες ινώδες ιστιοκυττάρωµα (4) 0/4 Αδενοκαρκίνωµα του πνεύµονα (4) Ασθενής εστιασµένη αντιδραστικότητα εντός µουκίνης 1/4 Αδενοκαρκίνωµα του στοµάχου (4) 0/4 Αδενοκαρκίνωµα του παχέος εντέρου (4) Ασθενής εστιασµένη αντιδραστικότητα µε µουκίνη 1/4 Αδενοκαρκίνωµα του παγκρέατος (4) 0/4 Αδενοκαρκίνωµα του ενδοµητρίου (4) 0/4 Αδενοκαρκίνωµα ωοθηκών (ορώδες-θηλωµατικό) (4) 0/4 Αδενοκαρκίνωµα ωοθηκών (ενδοµητρικό) (4) 0/4 Αδενοκαρκίνωµα ωοθηκών (βλεννογόνου) (4) 0/4 Αδενοκαρκίνωµα προστάτη (4) 0/4 Καρκίνωµα θυρεοειδούς (θυλακώδους τύπου) (4) 0/4 Καρκίνωµα θυρεοειδούς (θηλωµατικού τύπου) (4) 0/4 Καρκίνωµα θυρεοειδούς (του κυτταρικού τύπου Hurthle) (4) 0/4 Καρκίνωµα θυρεοειδούς (αναπλαστικού τύπου) (4) 0/4 Καρκίνωµα θυρεοειδούς (µυελικού τύπου) (4) 0/4 Καρκίνωµα παραθυρεοειδούς (4) 0/4 Κυτταρικοί όγκοι νησίδων (4) 0/4 Αδένωµα υπόφυσης (4) 0/4 Φλοιοεπινεφριδιακό αδένωµα (4) 0/4 Φλοιοεπινεφριδιακό καρκίνωµα (4) 0/4 Όγκοι κοκκιοκυττάρων (4) 0/4 Όγκος κυττάρων του Leydig (όρχεις) (4) 0/4 Όγκος των κυττάρων Sertoli-Leydig (όρχεις) (4) 0/4 Αγγειοσάρκωµα (4) 0/4 Όγκος γιγαντοκυττάρου µαλακού ιστού (4) 0/4 ( ) GR_001 σελ. 3/5

4 Παθολογικοί ιστοί 2 (συνεχίζεται) Καλοήθης µικτός όγκος (παρωτίδα) (4) 0/4 Φαιοχρωµοκύτωµα (3) 0/3 Λειοµύωµα, µήτρα (4) 0/4 Λειοµυοσάρκωµα, µήτρα (4) 0/4 Λειοµυοσάρκωµα, µαλακός ιστός (4) 0/4 Όγκος του γαστρεντερικού στρώµατος (GIST) (4) 0/4 Σάρκωµα του µαλακού µέρους των κυψελίδων (4) 0/4 Ινωµάτωση (4) 0/4 Χόρδωµα (4) 0/4 Χονδροσάρκωµα (4) 0/4 Οστεοσάρκωµα (4) 0/4 Θυλακωµατικό λέµφωµα (4) 0/4 Λέµφωµα µεγαλοκυττάρου (4) 0/4 Λέµφωµα περιφερικού Τ κυττάρου (4) 0/4 Αναπλαστικό λέµφωµα µεγαλοκυττάρου (4) 0/4 Λέµφωµα του Burkitt (4) 0/4 Επικρατές λεµφοκυτταρικό M. Hodgkin (4) 0/4 Οζιδιακή σκλήρωση M. Hodgkin (4) 0/4 Γαστρικό λέµφωµα τύπου MALT (4) 0/4 Πλασµακύτωµα/µυέλωµα (4) 0/4 Λευχαιµία τριχωτών κυττάρων (4) 0/4 Εµβρυϊκό ραβδοµυοσάρκωµα (4) 0/4 Κυψελιδικό ραβδοµυοσάρκωµα (4) 0/4 Σάρκωµα/PNET του Ewing (4) 0/4 εσµοπλαστικός κυτταρικός όγκος µικροσφαιρικού τύπου (4) 0/4 Λεµφοβλαστικό λέµφωµα (4) 0/4 Ραβδοειδής όγκος (4) 0/4 Νευροβλάστωµα (4) 0/4 Οστεοσάρκωµα (4) 0/4 Όγκος του Wilms (4) 0/4 Ηπατοβλάστωµα (4) 0/4 Καρκίνωµα των πόρων του µαστικού αδένα (4) 0/4 Καρκίνωµα των λοβών του µαστικού αδένα (4) 0/4 Καρκίνωµα µεταβατικών κυττάρων (4) 0/4 Καρκίνωµα των πλακωδών κυττάρων του πνεύµονα (4) 0/4 Καρκίνωµα πλακωδών κυττάρων της κεφαλής και του αυχένα (4) 0/4 Καρκίνωµα των πλακωδών κυττάρων του τραχήλου της µήτρας (4) 0/4 Ηπατοκυτταρικό καρκίνωµα (4) 0/4 Μεσοθηλίωµα (4) 0/4 Καρκίνωµα σιελογόνων αδένων (4) 0/4 Βιβλιογραφία 1. Chen YT, Stockert E, Tsang S, Coplan KA, Old LJ. Immunophenotyping of melanomas for tyrosinase: implications for vaccine development. Proc Natl Acad Sci USA 1995;92(18): Jungbluth AA, Iversen K, Coplan K, Kolb D, Stockert E, Chen YT, Old LJ, Busam K. T311-an anti-tyrosinase monoclonal antibody for the detection of melanocytic lesions in paraffin embedded tissues. Pathol Res Pract 2000;196(4): Garcia-Borron JC, Solano F. Molecular anatomy of tyrosinase and its related proteins: beyond the histidine-bound metal catalytic center. Pigment Cell Res 2002;15(3): Clarkson KS, Sturdgess IC, Molyneux AJ. The usefulness of tyrosinase in the immunohistochemical assessment of melanocytic lesions: a comparison of the novel T311 antibody (anti-tyrosinase) with S-100, HMB45, and A103 (anti-melan-a). J Clin Pathol 2001;54(3): Hofbauer GF, Kamarashev J, Geertsen R, Boni R, Dummer R. Tyrosinase immunoreactivity in formalin-fixed, paraffin-embedded primary and metastatic melanoma: frequency and distribution. J Cutan Pathol 1998;25(4): Slingluff CL Jr, Petroni GR, Yamshchikov GV, Barnd DL, Eastham S, Galavotti H, Patterson JW, Deacon DH, Hibbitts S, Teates D, Neese PY, Grosh WW, Chianese-Bullock KA, Woodson EM, Wiernasz CJ, Merrill P, Gibson J, Ross M, Engelhard VH. Clinical and immunologic results of a randomized phase II trial of vaccination using four melanoma peptides either administered in granulocytemacrophage colony-stimulating factor in adjuvant or pulsed on dendritic cells. J Clin Oncol 2003;21(21): Zajac P, Oertli D, Marti W, Adamina M, Bolli M, Guller U, Noppen C, Padovan E, Schultz-Thater E, Heberer M, Spagnoli G. Phase I/II clinical trial of a nonreplicative vaccinia virus expressing multiple HLA-A0201-restricted tumor-associated epitopes and costimulatory molecules in metastatic melanoma patients. Hum Gene Ther 2003;14(16): ( ) GR_001 σελ. 4/5

5 Edition 06/07 ( ) GR_001 σελ. 5/5