ισχυρή ταυτότητα ουδετεροφίλων και διαταραχή γονιδίων αυτοφαγίας

Μέγεθος: px

Εμφάνιση ξεκινά από τη σελίδα:

Download "ισχυρή ταυτότητα ουδετεροφίλων και διαταραχή γονιδίων αυτοφαγίας"

Σωτηρία Σπηλιωτόπουλος
6 χρόνια πριν
Προβολές:

Η Ο ΟΣ REDD1/ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ ΡΥΘΜΙΖΕΙ ΤΗΝ ΑΠΕΛΕΥΘΕΡΩΣΗ ΕΞΩΚΥΤΤΑΡΙΩΝ ΠΑΓΙ ΩΝ ΟΥ ΕΤΕΡΟΦΙΛΩΝ (NETs) ΠΡΟΚΑΛΩΝΤΑΣ ΘΡΟΜΒΟΦΛΕΓΜΟΝΗ ΚΑΙ ΙΝΩΣΗ ΤΩΝ ΟΡΓΑΝΩΝ-ΣΤΟΧΩΝ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΙΚΟΥ ΕΡΥΘΗΜΑΤΩ ΟΥΣ ΛΥΚΟΥ (ΣΕΛ) Ε.

1 Η Ο ΟΣ REDD1/ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ ΡΥΘΜΙΖΕΙ ΤΗΝ ΑΠΕΛΕΥΘΕΡΩΣΗ ΕΞΩΚΥΤΤΑΡΙΩΝ ΠΑΓΙ ΩΝ ΟΥ ΕΤΕΡΟΦΙΛΩΝ (NETs) ΠΡΟΚΑΛΩΝΤΑΣ ΘΡΟΜΒΟΦΛΕΓΜΟΝΗ ΚΑΙ ΙΝΩΣΗ ΤΩΝ ΟΡΓΑΝΩΝ-ΣΤΟΧΩΝ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΙΚΟΥ ΕΡΥΘΗΜΑΤΩ ΟΥΣ ΛΥΚΟΥ (ΣΕΛ) Ε. Φράγκου, Α. Χρυσανθοπούλου, Κ. Καμπάς, Α. Μίτσιος, Σ. Αρελάκη, Η. Αγγελοπούλου, Θ. Αραμπατζιόγλου, Χ. Γακιοπούλου, Γ. Μπερτσιάς, Λ. Δροσοπούλου, Ε. Τσιλιμπάρη, Π. Βεργίνης, Κ. Ρίτης, Δ. Μπούμπας 5/5/2018

2 ΕΙΣΑΓΩΓΗ Οι ασθενείς με ενεργό ΣΕΛ χαρακτηρίζονται από ισχυρή ταυτότητα ουδετεροφίλων και διαταραχή γονιδίων αυτοφαγίας Stagakis et al. Ann Rheum Dis 2011 Nakou et al. Arthr Rheum 2008

3 ΕΙΣΑΓΩΓΗ Αυτοφαγία: ομοιοστατικός καταβολικός μηχανισμός Το κύτταρο διασπά τα συστατικά του σε συνθήκες κυτταρικού στρες Συμμετέχει σε κυτταρικές διεργασίες: κυτταρικός κύκλος, ρύθμιση ενέργειας, ανοσιακή απάντηση Φράγκου και συν. Ελληνική Ρευματολογία 2014

4 ΕΙΣΑΓΩΓΗ Η ιντερλευκίνη-17 (IL-17) είναι μία προ-φλεγμονώδης κυτοκίνη που εμπλέκεται στην παθογένεια του ΣΕΛ και της νεφρίτιδας λύκου Nat. Rev. Drug Disc 2012; 11: 763

5 ΕΙΣΑΓΩΓΗ Ο ιστικός παράγοντας (TF) είναι ο κυριότερος in vivo ενεργοποιητής της πήξης Μέσω άξονα TF-θρομβίνης: καταρράκτης πήξης Μέσω ενεργοποίησης PAR: φλεγμονή Στα ουδετερόφιλα: Ενδοκυττάρια εντόπιση TF Εξωκυττάρια μεταφορά TF με τα NETs Kambas K et al. Front Immunol 2012; 3: 385

6 ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΜΕΛΕΤΗΣ η διερεύνηση του μοριακού μηχανισμού απελευθέρωσης εξωκυττάριων παγίδων ουδετεροφίλων (NETs) και της βλάβης τελικών οργάνων-στόχων (νεφρού και δέρματος) στο ΣΕΛ.

7 ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ A. Απομόνωση ορού και ουδετεροφίλων - μελέτες διέγερσης και αναστολής Άτομα * Υγιείς εθελοντές Ασθενείς με ενεργό ΣΕΛ Ασθενείς με ΣΕΛ υπό υδροξυχλωροκίνη ΣΥΝΟΛΟ ΦΥΛΟ Άνδρες 10 (67%) 1 (4.8%) 0 (0%) Γυναίκες 5 (33%) 20 (95.2%) 11 (100%) ΜΕΣΗ ΗΛΙΚΙΑ (έτη) SELENA-SLEDAI SCORE - >6 <5 * Ασθενείς που ελάμβαναν αντι-αιμοπεταλιακά ή αντιπηκτικά φάρμακα αποκλείστηκαν από τη μελέτη Β. Βιοψίες νεφρού από 10 ασθενείς με υπερπλαστική Νεφρίτιδα Λύκου (τάξη III, IV) Γ. Καλλιέργεια ανθρώπινων ποδοκυττάρων και δερματικών ινοβλαστών

8 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

DAPI DAPI LC3 LC3 LC3 Healthy PMNs (NN) Active SLE PMNs (LN) Treated SLE PMNs (LNtr) B.

9 ΤΑ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΑ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΕΝΕΡΓΟ ΣΕΛ ΕΚΦΡΑΖΟΥΝ ΑΥΞΗΜΕΝΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ΑΥΤΟΦΑΓΙΑΣ A. Συνεστιακή μικροσκόπηση (IF για LC3/DAPI) σε ex vivo PMNs LC3 / DAPI DAPI LC3 / DAPI DAPI LC3 / DAPI DAPI LC3 LC3 LC3 Healthy PMNs (NN) Active SLE PMNs (LN) Treated SLE PMNs (LNtr) B. Ανοσοαποτύπωση για LC3 και p62 σε ex vivo PMNs N=6 N=6 ** LC3-I LC3-II p62 NN LN LNtr GAPDH NN LN LNtr GAPDH * *** *** **

ΤΑ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΑ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΕΝΕΡΓΟ ΣΕΛ ΕΜΦΑΝΙΖΟΥΝ

καλλιέργειας * N=6 Cit-H3 Cit-H3 * NE/ Cit-H3

10 ΤΑ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΑ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΕΝΕΡΓΟ ΣΕΛ ΕΜΦΑΝΙΖΟΥΝ ΑΥΞΗΜΕΝΗ NETΩΣΗ, Η ΟΠΟΙΑ ΕΠΑΓΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΗΝ ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ A. Συνεστιακή μικροσκόπηση (IF για NE/cit-H3/DAPI) NE/ Cit-H3 NE NE/ Cit-H3 NE B. MPO-DNA complex ELISA σε υπερκείμενα καλλιέργειας * N=6 Cit-H3 Cit-H3 * NE/ Cit-H3 Healthy PMNs NE Active SLE PMNs Γ. MPO-DNA complex ELISA στον ορό ** ** N=6 Cit-H3 ** ** Active SLE PMNs + Autophagy Inhibitor

11 Η ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ ΕΠΑΓΕΙ ΤΗ ΜΕΤΑΦΟΡΑ IL-17 ΣΤΑ NETs A. Συνεστιακή μικροσκόπηση (IF για IL-17/DAPI) B. Ανοσοαποτύπωση για IL-17 σε υπερκείμενα καλλιέργειας Active SLE PMNs + Autophagy Inhibitor

Η ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ ΕΠΑΓΕΙ ΤΗ ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΔΡΑΣΤΙΚΟΥ TF ΣΤΑ

Συνεστιακή μικροσκόπηση (IF για TF/DAPI) TF/

12 Η ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ ΕΠΑΓΕΙ ΤΗ ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΔΡΑΣΤΙΚΟΥ TF ΣΤΑ NETs, ΟΔΗΓΩΝΤΑΣ ΣΕ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΘΡΟΜΒΙΝΗΣ A. Συνεστιακή μικροσκόπηση (IF για TF/DAPI) TF/ DAPI DAPI TF/ DAPI DAPI B. Ανοσοαποτύπωση για TF σε υπερκείμενα καλλιέργειας N=6 TF TF TF NN LN LN+AI Healthy PMNs TF/ DAPI DAPI Active SLE PMNs Γ. TAT Complex ELISA σε υπερκείμενα καλλιέργειας ** ** * N=6 TF ** Active SLE PMNs + Autophagy Inhibitor

13 Τα φαινόμενα αποδίδονται σε εσωτερική κυτταρική διαταραχή;

14 Ο ΟΡΟΣ ΤΩΝ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΣΕΛ ΕΠΑΓΕΙ ΤΗΝ ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ ΣΤΑ ΥΓΙΗ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΑ A. Συνεστιακή μικροσκόπηση (IF για LC3/DAPI) σε in vitro PMNs B. Ανοσοαποτύπωση για LC3 και p62 NS LS LS Wortm LC3-I LC3-II GAPDH NS LS LS Wortm p62 GAPDH ** * * * * *

15 Ο ΟΡΟΣ ΤΩΝ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΣΕΛ ΕΠΑΓΕΙ ΤΗΝ ΕΞΑΡΤΩΜΕΝΗ-ΑΠΟ-ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ ΑΠΕΛΕΥΘΕΡΩΣΗ NETs A. Συνεστιακή μικροσκόπηση (IF για NE/citr-H3/DAPI) σε in vitro PMNs MPO/ DAPI DAPI ** ** ** MPO B. MPO-DNA Complex ELISA σε υπερκείμενα καλλιέργειας * ns

16 Ο ΟΡΟΣ ΤΩΝ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΣΕΛ ΟΔΗΓΕΙ ΣΕ ΑΥΤΟΦΑΓΙΑ ΚΑΙ ΑΠΕΛΕΥΘΕΡΩΣΗ ΝΕΤs ΔΙΑΚΟΣΜΗΜΕΝΩΝ ΜΕ IL-17 KAI TF A. Συνεστιακή μικροσκόπηση (IF για TF/DAPI και TF/NE/DAPI) σε in vitro PMNs B. Ανοσοαποτύπωση για TF σε πρωτεΐνες κυττάρων MPO/ DAPI DAPI TF GAPDH NS LS LS Wortm MPO Γ. TAT Complex ELISA σε υπερκείμενα καλλιέργειας * * *

17 Ποιοι παράγοντες στον ορό των ασθενών με ΣΕΛ επάγουν την αυτοφαγία στα ουδετερόφιλα;

18 Ο ΟΡΟΣ ΤΩΝ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΕΝΕΡΓΟ ΣΕΛ ΑΥΞΑΝΕΙ ΤΟ REDD1 ΣΤΑ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΑ Α. qpcr για REDD1 REDD1: Πρωτεΐνη στρες Επάγει αυτοφαγία και ΝΕΤωση στον FMF Skendros P. et al. JACI 2017 HIF-1α: οξυγονο-ευαίσθητος μεταγραφικός F Ανοδικός ρυθμιστής του REDD1 Aποβάλλεται στα ούρα σε LN B. WB για REDD1 ET-1: αγγειοσυσπαστική ουσία, mtor/αυτοφαγία Αυξημένη στον ορό των ασθενών με ΣΕΛ Συσχέτιση με LN και δραστικότητα ΣΕΛ

19 Η ΕΤ-1 KAI Ο HIF-1α ΣΤΟΥΣ ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΜΕ ΣΕΛ ΕΠΑΓΟΥΝ TO REDD1 ΣΤΑ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΑ Α. qpcr για REDD1 Γ. MPO-DNA Complex ELISA σε υπερκείμενα καλλιέργειας B. WB για REDD1 Δ. WB για p62

20 ΕΝΑΠΟΘΕΣΗ ΝΕΤs ΔΙΑΚΟΣΜΗΜΕΝΩΝ ΜΕ TF ΚΑΙ IL-17 ΣΕ ΝΕΦΡΟΥΣ ΚΑΙ ΔΕΡΜΑ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΣΕΛ

21 ΤΑ NETs ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΕΝΕΡΓΟ ΣΕΛ ΤΡΟΠΟΠΟΙΟΥΝ ΤΗ ΜΟΡΦΟΛΟΓΙΑ ΠΟΔΟΚΥΤΤΑΡΩΝ WT-1 vimentin Control NET str Lupus NET str Vimentin WT-1

22 ΤΑ NETs ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΕΝΕΡΓΟ ΣΕΛ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΟΥΝ ΤΟΥΣ ΔΕΡΜΑΤΙΚΟΥΣ ΙΝΟΒΛΑΣΤΕΣ ΣΕ ΜΥΟΪΝΟΒΛΑΣΤΕΣ

23 Η ΑΝΑΣΤΟΛΗ ΤΗΣ ΕΤ-1 Η ΤΟΥ HIF-1α ΣΤΑ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΑ ΚΑΙ ΤΗΣ IL-17 Ή ΤΟΥ TF ΤΩΝ ΝΕΤs ΑΝΑΣΤΕΛΛΟΥΝ ΤΗΝ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΜΕΤΑΝΑΣΤΕΥΣΗ ΤΩΝ ΜΥΟΪΝΟΒΛΑΣΤΩΝ

24 ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ

25 ΤΑ NETs ΕIΝΑΙ ΙΚΡΥΩΜΑΤΑ ΣΥΣΣΩΡΕΥΣΗΣ ΒΙΟΔΡΑΣΤΙΚΩΝ ΜΟΡΙΩΝ (TF KAI IL-17) Τα NETs παραμένουν στα όργανα-στόχους ακόμα και απουσία ακέραιων ουδετεροφίλων στον ιστό Το φλεγμονώδες περιβάλλον του ΣΕΛ (ΕΤ-1 και HIF-1α) ενεργοποιεί την οδό REDD1/αυτοφαγία στα PMNs ü Τα TF- και IL-17-ΝΕΤs αποτελούν ένα σύνδεσμο μεταξύ αυξημένης θρομβοφλεγμονής και ίνωσης στο ΣΕΛ

26 ΜΟΝΤΕΛΟ ΠΟΛΛΑΠΛΩΝ ΧΤΥΠΗΜΑΤΩΝ - ΕΠΑΝΑΤΟΠΟΘΕΤΗΣΗ ΦΑΡΜΑΚΩΝ ΣΤΟ ΣΕΛ Bosentan Hydroxychloroquine Thrombin inhibitors PAR blockers L-ascorbic acid Secukinumab

27 ΕΥΧΑΡΙΣΤΩ

Σχετικά έγγραφα

ΜΟΡΙΑΚΟΙ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΙ ΣΤΗ ΝΕΦΡΙΤΙΔΑ ΤΟΥ ΛΥΚΟΥ: Ο ΡΟΛΟΣ ΤΟΥ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΟΥ Ε.ΦΡΑΓΚΟΥ, Ι. ΜΠΟΛΕΤΗΣ, Δ. ΜΠΟΥΜΠΑΣ 3/5/2018

ΜΟΡΙΑΚΟΙ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΙ ΣΤΗ ΝΕΦΡΙΤΙΔΑ ΤΟΥ ΛΥΚΟΥ: Ο ΡΟΛΟΣ ΤΟΥ ΟΥΔΕΤΕΡΟΦΙΛΟΥ Ε.ΦΡΑΓΚΟΥ, Ι. ΜΠΟΛΕΤΗΣ, Δ. ΜΠΟΥΜΠΑΣ 3/5/2018 ΠΕΡΙΓΡΑΜΜΑ 1. ΕΙΣΑΓΩΓΗ Η ομάδα μας, παθογένεια νεφρίτιδας λύκου 2. TRANSCRIPTOMICS ΣΤΟ