ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΝΕΩΝ ΑΥΤΟΑΝΤΙΓΟΝΩΝ ΣΤΟΧΩΝ ΤΗΣ ΝΟΣΟΕΙΔΙΚΗΣ ΑΝΟΣΙΑΚΗΣ ΑΠΟΚΡΙΣΗΣ ΜΕ ΜΕΘΟΔΟΥΣ ΑΝΟΣΟΑΠΟΤΥΠΩΣΗΣ ΚΑΙ MALDI-TOF ΑΝΑΛΥΣΗΣ

Transcript

1 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΝΕΩΝ ΑΥΤΟΑΝΤΙΓΟΝΩΝ ΣΤΟΧΩΝ ΤΗΣ ΝΟΣΟΕΙΔΙΚΗΣ ΑΝΟΣΙΑΚΗΣ ΑΠΟΚΡΙΣΗΣ ΜΕ ΜΕΘΟΔΟΥΣ ΑΝΟΣΟΑΠΟΤΥΠΩΣΗΣ ΚΑΙ MALDI-TOF ΑΝΑΛΥΣΗΣ Μαρία Μυτιληναίου

2 ΑΥΤΟΑΝΟΣΑ ΝΟΣΗΜΑΤΑ Ανοσιακή απόκριση έναντι στοιχείων του οργανισμού

3 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΑΥΤΟΑΝΟΣΑ ΝΟΣΗΜΑΤΑ ΤΟΥ ΗΠΑΤΟΣ ΠΡΩΤΟΠΑΘΗΣ ΧΟΛΙΚΗ ΚΙΡΡΩΣΗ ΑΥΤΟΑΝΟΣΗ ΗΠΑΤΙΤΙΔΑ

4 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΠΡΩΤΟΠΑΘΗΣ ΧΟΛΙΚΗ ΚΙΡΡΩΣΗ (ΠΧΚ) PDC-E2 (Pyruvate dehydrogenase complex) BCOADC-E2 (branched chain 2-oxo acid dehydrogenase complex ) OGDC-E2 (2-oxoglutarate dehydrogenase complex ) BCOADC- E2 (branched chain 2-oxo acid dehydrogenase complex ) PDC-E2 BCOADC-E2 OGDC-E2

5 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΧΡΟΝΙΑ ΝΟΣΗΜΑΤΑ ΤΟΥ ΗΠΑΤΟΣ ΑΔΙΕΥΚΡΙΝΙΣΤΗΣ ΑΙΤΙΟΛΟΓΙΑΣ ΠΡΩΤΟΠΑΘΗΣ ΣΚΛΗΡΥΝΤΙΚΗ ΧΟΛΑΓΓΕΙΙΤΙΔΑ ΑΤΡΗΣΙΑ ΧΟΛΗΦΟΡΩΝ

6 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΑΤΡΗΣΙΑ ΧΟΛΗΦΟΡΩΝ: ΥΦΙΣΤΑΜΕΝΗ ΓΝΩΣΗ Προσβάλει κυρίως νεογνά Ιδιοπαθής αποφρακτική χολαγγειοπάθεια Συχνότερη ένδειξη ηπατικής μεταμόσχευσης στη παιδική ηλικία Συχνότερη χειρουργικά αντιμετωπίσιμη ηπατική νόσος της παιδικής ηλικίας

7 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΕΣ ΑΙΧΜΗΣ 1D και 2D Immunoblot Maldi-Tof Analysis Mass Spectometry-Proteomics

8 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΥΛΙΚΑ-ΒΙΟΛΟΓΙΚΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΜΕ ΑΥΤΟΑΝΟΣΑ Η ΜΗ ΑΥΤΟΑΝΟΣΑ ΝΟΣΗΜΑΤΑ ΗΠΑΤΟΣ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ΑΝΘΡΩΠΕΙΟΥ ΗΠΑΤΟΣ-ΕΙΔΙΚΑ ΚΑΤΕΡΓΑΣΜΕΝΟ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΑ ΑΝΤΙΓΟΝΑ

9 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΜΟΝΤΕΛΟ ΝΟΣΟΥ: ΑΤΡΗΣΙΑ ΧΟΛΗΦΟΡΩΝ In house Immunoblot 70 kda 60 kda 50 kda 40 kda Sera from 12/26 BA reacted with a 48kDa antigen present in human liver

10 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΜΟΝΤΕΛΟ ΝΟΣΟΥ: ΑΤΡΗΣΙΑ ΧΟΛΗΦΟΡΩΝ 1 sections 2 sections sections 4 sections

11 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Α.Μ Μ.Α Α ΜΟΝΑΔΑ Κ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΜΟΝΤΕΛΟ ΝΟΣΟΥ: ΑΤΡΗΣΙΑ ΧΟΛΗΦΟΡΩΝ

12 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΜΟΝΤΕΛΟ ΝΟΣΟΥ: ΑΤΡΗΣΙΑ ΧΟΛΗΦΟΡΩΝ 50 kda 40 kda

13 ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΜΟΝΑΔΑ: Κ.Α.Μ.Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ: Δ. Π. ΜΠΟΓΔΑΝΟΣ ΜΟΝΤΕΛΟ ΝΟΣΟΥ: ΑΤΡΗΣΙΑ ΧΟΛΗΦΟΡΩΝ 70 kda 60 kda 50 kda 40 kda Polyclonal anti-human α- enolase

14 Area Under the Curve Mean+5SD Specificity 92.1%

15 AΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΧΟΛΙΚΗ ΑΤΡΗΣΙΑ 80 ΑΣΘΕΝΕΙΣ Optical density (OD, 450 nm) In house ELISA Ανασυνδυασμένο αντιγόνο: α- enolase BA : 51% παρουσίασαν αντιδραστικότητα κατά της α-enolase ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ;

16 ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΧΟΛΙΚΗ ΑΤΡΗΣΙΑ 80 ΑΣΘΕΝΕΙΣ n=304 δείγματα Μάρτυρες n=293 δείγματα - A1 AT Defeciency (A1ATD) - Progressive intrahepatic cholestasis (PFIC) - Alagille syndrome (AGS) - Giant cell hepatitis (GCH) - Autoimmune hepatitis type 1 (AIH-1) - Autoimmune hepatitis type 2 (AIH-2) - Autoimmune sclerosing cholangitis (ASC) - Healthy controls (HC) 29 pts 31 pts 29 pts 16 pts 41 pts 33 pts 15 pts 19

17 BA : 51% p = Μάρτυρες: : 6%

18 ΠΕΡΑΙΤΕΡΩ ΠΑΘΟΓΕΝΕΤΙΚΕΣ ΣΥΣΧΕΤΙΣΕΙΣ ΚΛΙΝΙΚΕΣ anti-α enolase (+) anti-α enolase (- ) p Bilirubin (median, min-max) 121 (2-382) 11 (2-348) ΙΣΤΟΠΑΘΟΛΟΓΙΚΕΣ γ-gt (median, min-max) 540 ( ) AST (median, min-max) 148 (45-452) 263 (6-1936) 120 (25-559) ENO1 ENO1

19 ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΟ ΜΟΝΤΕΛΟ ΝΟΣΟΥ

20 ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Η χολική ατρησία χαρακτηρίζεται από αντιδραστικότητα έναντι της α-enolase Ο ρόλος της ατιδραστικότητας αυτής στην παθογένεια της νόσου παραμένει άγνωστος

21 ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ Παρόμοιες μεθοδοι και τεχνολογίες αιχμής, μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την ανακάλυψη νέων αυτοαντιγόνων

22 Dr Dimitrios P Bogdanos Professor Diego Vergani ΕΥΧΑΡΙΣΤΙΕΣ KCL Proteomics Unit, Institute of Psychiatry Professor Giorgina Mieli-Vergani Dr Tassos Grammatikopoulos Dr Dan Smyk Dr Andrew Weston Professor Georgios Dalekos Dr Eirini Rigopoulou Dr Elias Spyrou Dr Francesca Meda Dr Yun Ma Dr Maria-Serena Longhi Dr Yoh Zen Professor Mark Davenport Dr Hussain Munter Dr Ourania Romanidou