Δίσκοι ελέγχου ευαισθησίας BD Sensi-Disc

Transcript

1 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ BD SENSI-DISCS SD-BD.06 Αναθ.: Νοε 2016 Δίσκοι ελέγχου ευαισθησίας BD Sensi-Disc ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΟΝΤΑΙ Οι δίσκοι ελέγχου ευαισθησίας Sensi-Disc χρησιμοποιούνται για ημιποσοτικό in vitro έλεγχο ευαισθησίας με τη μέθοδο διάχυσης με δίσκους άγαρ κοινών, ταχέως αναπτυσσόμενων και ορισμένων απαιτητικών βακτηριακών παθογόνων. Αυτά περιλαμβάνουν τα Enterobacteriaceae, Staphylococcus spp., Pseudomonas spp., Acinetobacter spp., Enterococcus spp., Vibrio cholerae και, με τροποποιημένες διαδικασίες, τα Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus pneumoniae και άλλους στρεπτόκοκκους. Οι δίσκοι ελέγχου ευαισθησίας Sensi-Disc, οι οποίοι φορτώνονται με βακιτρακίνη, ολεανδομυκίνη, νοβοβιοκίνη και πολυμυξίνη Β, δεν χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας ή την αντοχής απομονωθέντων στελεχών για θεραπευτικό σκοπό, αλλά για την απομόνωση ή/και τη διαφοροποίηση των βακτηριακών στελεχών. Οι δίσκοι Sensi-Discs που φορτώνονται με μετρονιδαζόλη έχουν χρησιμοποιηθεί για τον έλεγχο απομονωθέντων στελεχών από αυστηρά αναερόβιους μικροοργανισμούς για ευαισθησία στη μετρονιδαζόλη με τη μέθοδο αραίωσης με δίσκους ζωμού. Συμβουλευτείτε τις υποσημειώσεις στον Πίνακα 1. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Οι μέθοδοι διάχυσης σε άγαρ που χρησιμοποιούν αφυδατωμένους διηθητικούς χάρτινους δίσκους, διαποτισμένους με ειδικές συγκεντρώσεις αντιμικροβιακών παραγόντων, αναπτύχθηκαν τη δεκαετία του Προκειμένου να εξαλειφθεί ή να ελαχιστοποιηθεί η μεταβλητότητα στην εξέταση αυτή, οι Bauer et al. ανέπτυξαν μια τυποποιημένη διαδικασία, στην οποία επιλέχθηκε άγαρ Mueller Hinton ως το μέσο της εξέτασης. 1,2 Δίσκοι που περιέχουν ευρεία ποικιλία αντιμικροβιακών παραγόντων εφαρμόζονται στην επιφάνεια των τρυβλίων άγαρ Mueller Hinton (ή άγαρ Haemophilus Test Medium για το H. influenzae, άγαρ GC II με IsoVitaleX για το N. gonorrhoeae ή άγαρ Mueller Hinton με 5% αίμα προβάτου για το S. pneumoniae, β-αιμολυτικούς και πρασινίζοντες στρεπτόκοκκους), τα οποία έχουν ενοφθαλμιστεί με καθαρές καλλιέργειες κλινικών απομονωμένων στελεχών. Μετά την επώαση, τα τρυβλία εξετάζονται και οι ζώνες αναστολής που περιβάλλουν τους δίσκους μετρούνται και συγκρίνονται με καθιερωμένα εύρη μεγέθους ζώνης για μεμονωμένους αντιμικροβιακούς παράγοντες προκειμένου να προσδιοριστεί ο(οι) παράγοντας(εις) που είναι πλέον κατάλληλος(οι) για χρήση σε αντιμικροβιακή θεραπεία. Διάφορες κανονιστικές υπηρεσίες και οργανισμοί σύνταξης προτύπων δημοσίευσαν τυποποιημένες διαδικασίες αναφοράς που βασίζονται στη μέθοδο Bauer-Kirby. Μεταξύ των παλαιότερων και των πλέον ευρέως αποδεκτών από αυτές τις τυποποιημένες διαδικασίες ήταν εκείνες που δημοσιεύονται από την Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων των Η.Π.Α. (FDA) 3 και τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας (Π.Ο.Υ.). 4,5 Η διαδικασία υιοθετήθηκε ως συναινετικό πρότυπο από το Clinical and Laboratory Standards Institute [CLSI, πρώην National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)] και ενημερώνεται περιοδικά. 6,7 Για τυχόν τρέχουσες συστάσεις, θα πρέπει να συμβουλεύεστε τα πλέον πρόσφατα έγγραφα του CLSI. SD-BD.06 Σελίδα 1

2 ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Οι δίσκοι Sensi-Disc έχουν μέγεθος 6 mm και παρασκευάζονται με διαπότιση απορροφητικού χαρτιού υψηλής ποιότητας με επακριβώς προσδιορισμένες ποσότητες αντιβιοτικών ή άλλων χημειοθεραπευτικών παραγόντων. Οι δίσκοι φέρουν σαφείς σημάνσεις και στις δύο πλευρές τους με γράμματα και αριθμούς που καθορίζουν την περιεκτικότητα στον εκάστοτε παράγοντα και φάρμακο. (Δείτε τον πίνακα που παραθέτει τις συγκεντρώσεις των αντιδραστικών συστατικών). Η περιεκτικότητα του φαρμάκου στους δίσκους προσδιορίζεται με τις μεθόδους που έχουν καθιερωθεί από τον FDA ή με μεθόδους παρόμοιες ή συγκρίσιμες με εκείνες που δημοσιεύονται στο Ομοσπονδιακό μητρώο των Η.Π.Α. (United States Federal Register). 3 Τα Sensi-Disc παρέχονται σε φύσιγγες που περιέχουν 50 δίσκους έκαστη. Ο τελευταίος δίσκος σε κάθε φύσιγγα φέρει την ένδειξη X και περιέχει το φάρμακο σύμφωνα με την κωδικοποίηση. Οι φύσιγγες προορίζονται για χρήση σε διανεμητές BBL Sensi- Disc. Μεταξύ αυτών περιλαμβάνεται ένας διανεμητής μονού δίσκου, ένας διανεμητής 8 θέσεων για τρυβλία Petri τύπου 90 mm, διανεμητές αυτοσυμπίεσης 6 και 8 θέσεων για τρυβλία τύπου 90 mm και ένας διανεμητής αυτοσυμπίεσης 12 θέσεων για τρυβλία τύπου 150 mm. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Προορίζεται αποκλειστικά για επαγγελματική χρήση. Ακολουθείτε την ενότητα ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΕΣ. Η απόδοση των δίσκων εξαρτάται όχι μόνο από την ισχύ των δίσκων, αλλά και από τη χρήση του σωστού ενοφθαλμίσματος και καλλιεργειών ελέγχου, λειτουργικών προεξετασμένων τρυβλίων, την εφαρμογή της σωστής θερμοκρασίας φύλαξης, καθώς και από άλλους παράγοντες. Εφαρμόζετε άσηπτες τεχνικές και καθιερωμένες προφυλάξεις έναντι μικροβιολογικών κινδύνων καθ' όλη την πορεία όλων των διαδικασιών. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις άσηπτες διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ 1. Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τους δίσκους στους C. Εάν το ψυγείο του εργαστηρίου ανοίγεται και κλείνεται συχνά με αποτέλεσμα να μη διατηρείται κατάλληλη θερμοκρασία, τοποθετήστε σε αυτό ποσότητα επαρκή μόνο για χρήση που καλύπτει τις ανάγκες μίας εβδομάδας. Μερικοί δίσκοι (π.χ. β-λακτάμες) θα πρέπει να διατηρούνται κατά προτίμηση κατεψυγμένοι στους -20 C. 2. Αφήστε τα δοχεία να έλθουν σε θερμοκρασία δωματίου πριν από το άνοιγμα. Επιστρέφετε τους μη χρησιμοποιημένους δίσκους στο ψυγείο μετά την ολοκλήρωση της εφαρμογής των δίσκων. 3. Χρησιμοποιείτε τους παλαιότερους δίσκους πρώτα. 4. Απορρίπτετε τους δίσκους μετά το πέρας της ημερομηνίας λήξης τους. Επίσης, φύσιγγες από τις οποίες αφαιρούνται δίσκοι συχνά κατά τη διάρκεια μιας εβδομάδας και δίσκοι που έχουν παραμείνει έξω για ολόκληρη τη νύχτα στο εργαστήριο θα πρέπει να απορρίπτονται, διαφορετικά οι δίσκοι θα πρέπει να εξετάζονται ως προς την αποδεκτή απόδοσή τους πριν συνεχιστεί η χρήση τους. 5. Εάν οι δίσκοι σχηματίζουν εσφαλμένες ζώνες με τους συνιστώμενους μικροοργανισμούς ελέγχου, θα πρέπει να ελέγχεται ολόκληρη η διαδικασία. Το εσφαλμένο μέγεθος ζώνης ενδέχεται να οφείλεται στο δίσκο, τον ενοφθαλμισμό, την παρασκευή ή το βάθος του μέσου, ή σε άλλους παράγοντες. Η ημερομηνία λήξης ισχύει μόνο για δίσκους σε άθικτα δοχεία, τα οποία φυλάσσονται σύμφωνα με τις οδηγίες. Οι δίσκοι από ανοιχτά δοχεία που φυλάσσονται όπως υποδεικνύεται παραπάνω, μπορούν να χρησιμοποιηθούν εφόσον τηρούνται τα σωστά μεγέθη ζώνης με τα κατάλληλα στελέχη ελέγχου. SD-BD.06 Σελίδα 2

3 ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ 6 Τα αντιμικροβιακά δισκία θα πρέπει να εξετάζονται τουλάχιστον δύο φορές την εβδομάδα για τη διασφάλιση της σωστής απόδοσης. Τα E. coli ATCC 25922, S. aureus ATCC 25923, P. aeruginosa ATCC 27853, H. influenzae ATCC 49247, H. influenzae ATCC 49766, N. gonorrhoeae ATCC 49226, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC (στέλεχος που παράγει ß -λακταμάση), E. faecalis ATCC πρέπει να χρησιμοποιούνται για να υποδεικνύεται η ορθή απόδοση ολόκληρης της διαδικασίας. Το E. faecalis ATCC (ή 33186) συνιστάται επίσης για την αξιολόγηση των νέων παρτίδων άγαρ Mueller Hinton για χαμηλό περιεχόμενο σε θυμίνη και θυμιδίνη. Βλ. την ενότητα ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ - Διαδικασία της εξέτασης για την παρασκευή, τον ενοφθαλμισμό, την επώαση και την ανάγνωση. Συμβουλευτείτε το πρότυπο CLSI Standard M2 (M100) ή τα εθνικά πρότυπα για τα αναμενόμενα μεγέθη ζώνης των στελεχών ποιοτικού ελέγχου. 6,7 ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενο υλικό Δίσκοι ελέγχου ευαισθησίας Sensi-Disc σύμφωνα με την επισήμανση. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται Βοηθητικά μέσα καλλιέργειας, αντιδραστήρια, μικροοργανισμοί ποιοτικού ελέγχου και εργαστηριακός εξοπλισμός που απαιτείται για την εκτέλεση του ελέγχου ευαισθησίας με διάχυση με δίσκο με την τυποποιημένη διαδικασία. Παρασκευάστε ένα πρότυπο θολερότητας 0,5 McFarland με προσθήκη 0,5 ml 0,048 M BaCl 2 [1,175% (wt/vol) BaCl 2 x 2 H 2O] σε 99,5 ml 0,18 M [0,36 N] H 2SO 4 [1% (vol/vol)]. Επαληθεύστε με χρήση φασματοφωτόμετρου με οδό φωτός 1 cm και αντίστοιχη κυψελίδα. Η απορρόφηση στα 625 nm θα πρέπει να είναι 0,08 0,10. Τύποι δειγμάτων Τα δείγματα δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται συνήθως σε αυτή την εξέταση. Αντίθετα, πρέπει να χρησιμοποιούνται καθαρές καλλιέργειες. Δείτε την ενότητα ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ - Διαδικασία της εξέτασης, η οποία περιλαμβάνει την παρασκευή του ενοφθαλμίσματος. Εάν είναι δυνατό, οι καλλιέργειες θα πρέπει να προέρχονται από δείγματα που λαμβάνονται από ασθενείς πριν από την έναρξη αντιμικροβιακής θεραπείας. Διαδικασία της εξέτασης 1. Παρασκευή ενοφθαλμίσματος με καλλιέργειες εξέτασης και ελέγχου α. Πραγματοποιήστε χρώση Gram. Χρησιμοποιείτε μόνο καθαρές καλλιέργειες. β. Επιλέξτε τρεις έως πέντε παρόμοιες αποικίες και μεταφέρετε με βελόνα ή κρίκο ενοφθαλμισμού σε 4 5 ml κατάλληλου ζωμού όπως ο ζωμός σόγιας Trypticase (ή ζωμό Mueller Hinton για απαιτητικούς μικροοργανισμούς). γ. Άμεση μέθοδος εναιωρήματος αποικιών: Παρασκευάστε άμεσο εναιώρημα αποικιών σε ζωμό ή αλατούχο διάλυμα, οι οποίες επιλέγονται από ένα τρυβλίο άγαρ που έχει επωαστεί κατά τη διάρκεια της νύχτας (θα πρέπει να χρησιμοποιείται ένα μη εκλεκτικό μέσο όπως αιματούχο άγαρ ή σοκολατούχο άγαρ για το H. influenzae και το N. gonorrhoeae). δ. Αραιώστε, εάν απαιτείται, για να επιτύχετε θολερότητα ισοδύναμη με το πρότυπο θολερότητας 0,5 McFarland. Για αραιωτικό, χρησιμοποιείτε στείρο ζωμό ή αλατούχο διάλυμα. Εναλλακτικά, τυποποιήστε το ενοφθάλμισμα φωτομετρικά. Για τη διευκόλυνση της προσαρμογής του ενοφθαλμίσματος των ταχέως αναπτυσσόμενων μικροοργανισμών, μπορεί να χρησιμοποιηθεί το σύστημα ενοφθαλμίσματος Prompt (ογκομετρική συσκευή παρασκευής ενοφθαλμίσματος). 8 Δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται ως ενοφθάλμισμα ολονύκτιες καλλιέργειες ζωμού. SD-BD.06 Σελίδα 3

4 2. Ενοφθαλμισμός ε. Εντός 15 λεπτών, εμβαπτίστε μια στείρα βαμβακερή μπατονέτα στο κατάλληλα προσαρμοσμένο ενοφθάλμισμα και περιστρέψτε την σταθερά μερικές φορές στο άνω εσωτερικό τοίχωμα του σωληναρίου, έτσι ώστε να εξωθήσετε την περίσσεια υγρού. στ. Επιστρώστε σε κάθετες γραμμές ολόκληρη την επιφάνεια άγαρ ενός τρυβλίου άγαρ Mueller Hinton (ή άλλου κατάλληλου άγαρ) τρεις φορές, στρέφοντας το τρυβλίο κατά 60 μεταξύ των γραμμωτών επιστρώσεων για την επίτευξη ομοιόμορφου ενοφθαλμίσματος. ζ. Το καπάκι μπορεί να αφεθεί μισάνοιχτο επί 3 5 λεπτά, αλλά όχι περισσότερο από 15 λεπτά, έτσι ώστε να επιτραπεί η απορρόφηση τυχόν επιφανειακής υγρασίας πριν από την εφαρμογή των διαποτισμένων με φάρμακο δίσκων. 3. Επιλέξτε τους κατάλληλους δίσκους (όπως συνιστάται στην αναφορά 7, Πίνακες 1 και 1A του M100-SI3 [M2]). 4. Εφαρμόστε τους δίσκους με τη βοήθεια διανεμητή BBL Sensi-Disc, λαμβάνοντας άσηπτες προφυλάξεις. Εναποθέστε τους δίσκους έτσι ώστε τα κέντρα να απέχουν μεταξύ τους τουλάχιστον 24 mm. Προτιμάται η εναπόθεση των δίσκων πενικιλλίνης και κεφαλοσπορίνης με τρόπο ώστε να μην απέχουν μεταξύ τους λιγότερο από 10 mm από την άκρη του τρυβλίου Petri και τα κέντρα τους να απέχουν μεταξύ τους τουλάχιστον 30 mm. Αποφεύγετε την τοποθέτηση τέτοιων δίσκων τον ένα δίπλα στον άλλον. Με τα H. influenzae, N. gonorrhoeae και S. pneumoniae, μη χρησιμοποιείτε περισσότερους από εννέα δίσκους ανά τρυβλίο των 150 mm ή τέσσερις δίσκους ανά τρυβλίο των 90 mm. Εάν έχουν τοποθετηθεί δίσκοι στο άγαρ με διανεμητές διαφορετικούς από τους διανεμητές αυτοσυμπίεσης, πιέστε τους προς τα κάτω με στείρα βελόνα ή λαβίδα, έτσι ώστε να έλθουν σε επαφή με την επιφάνεια. 5. Εντός 15 λεπτών, τοποθετήστε τα τρυβλία με την πλευρά του άγαρ προς τα πάνω σε θάλαμο επώασης 35 C. Οι Haemophilus spp., N. gonorrhoeae, S. pneumoniae και άλλοι στρεπτόκοκκοι θα πρέπει να επωάζονται σε αερόβια ατμόσφαιρα εμπλουτισμένη με 5% CO2. 6. Εξετάστε τα τρυβλία μετά από ώρες επώασης (20 24 ώρες για τους N. gonorrhoeae, S. pneumoniae και άλλους στρεπτόκοκκους). Συνιστάται επώαση επί ένα ολόκληρο 24ωρο για το Staphylococcus spp. για την ανίχνευση σταφυλόκοκκων ανθεκτικών στη μεθικιλλίνη/ναφκιλλίνη/οξακιλλίνη και για το Enterococcus spp. για αντοχή στη βανκομυκίνη. Οι διάμετροι των ζωνών πλήρους αναστολής μετρούνται, όπως προσδιορίζεται με αδρή οπτική επιθεώρηση. Οι ζώνες μετρούνται με ακρίβεια χιλιοστού. Για περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με τη μέτρηση των ζωνών αναστολής, συμβουλευτείτε τις βιβλιογραφικές αναφορές. 6 Εάν αναπτύσσονται μόνον απομονωμένες αποικίες, το ενοφθάλμισμα είναι πάρα πολύ αραιό και η εξέταση θα πρέπει να επαναλαμβάνεται. Οι ζώνες γύρω από δίσκους που περιέχουν διαφορετικά φάρμακα δεν είναι συγκρίσιμες για το σκοπό της σύγκρισης της δραστικότητας των φαρμάκων. Αποτελέσματα 6,7 Τα συνιστώμενα ερμηνευτικά κριτήρια βασίζονται σε συνήθη δοσολογικά σχήματα και οδούς χορήγησης στις Η.Π.Α. Εν τέλει, θα πρέπει να συμβουλεύεστε τα τοπικά πρότυπα. Συγκρίνετε τις καταγεγραμμένες διαμέτρους ζώνης με εκείνες του προτύπου CLSI Standard M2 (M100) ή των εθνικών προτύπων. Αποτελέσματα με έναν ειδικό μικροοργανισμό είναι δυνατό να αναφέρονται ως ανθεκτικά, ενδιάμεσα ή ευαίσθητα. Για ορισμένους συνδυασμούς μικροοργανισμών/αντιμικροβιακών η απουσία ανθεκτικών στελεχών αποκλείει τον ορισμό οποιωνδήποτε κατηγοριών αποτελεσμάτων εκτός των "ευαίσθητων". Για στελέχη που αποδίδουν αποτελέσματα που υποδηλώνουν "μη ευαίσθητη" κατηγορία, τα αποτελέσματα της εξέτασης ταυτοποίησης και ευαισθησίας του μικροοργανισμού σε αντιμικροβιακά θα πρέπει να επιβεβαιώνονται. Εάν είναι απαραίτητο, μια μέθοδος αραίωσης συνήθως θα είναι η πλέον κατάλληλη μέθοδος εξέτασης αναφοράς, η οποία ενδέχεται να απαιτεί υποβολή του μικροοργανισμού σε εργαστήριο αναφοράς. 7 SD-BD.06 Σελίδα 4

5 Η ευαισθησία του Pseudomonas aeruginosa που απομονώνεται από ασθενείς με κυστική ίνωση είναι δυνατό να προσδιοριστεί με αξιοπιστία με τη μέθοδο δίσκου, αλλά ενδέχεται να χρειαστεί παρατεταμένη επώαση έως 24 ώρες, προτού αναφερθεί ως ευαίσθητο. Οι εντερόκοκκοι ενδέχεται να είναι ανθεκτικοί στην πενικιλλίνη και την αμπικιλλίνη λόγω της παραγωγής πενικιλλινοδεσμευτικών πρωτεϊνών (PBP) χαμηλής συγγένειας ή της παραγωγής β-λακταμάσης. Η εξέταση διάχυσης με δίσκο είναι δυνατό να ανιχνεύσει με ακρίβεια απομονωμένα στελέχη με τροποποιημένες PBP, αλλά δε θα ανιχνεύσει με αξιοπιστία στελέχη που παράγουν β-λακταμάση. Τα στελέχη αυτά ανιχνεύονται καλύτερα με την άμεση εξέταση β-λακταμάσης, 6 π.χ. με δίσκους νιτροσεφίνης Cefinase ή με χρωμογόνους δίσκους κεφαλοσπορίνης. Για το Enterococcus spp., οι κεφαλοσπορίνες, οι αμινογλυκοσίδες (εκτός από εξέταση ανίχνευσης ανθεκτικότητας υψηλού επιπέδου), η κλινδαμυκίνη και η τριμεθοπρίμη/σουλφαμεθοξαζόλη ενδέχεται να εμφανίζονται δραστικά in vitro αλλά δεν είναι αποτελεσματικά κλινικώς και τα απομονωμένα στελέχη δεν πρέπει να αναφέρονται ως ευαίσθητα. Οι β-λακταμάσες εκτεταμένου φάσματος (ESBL) είναι ένζυμα που παράγονται από gram-αρνητικούς βάκιλλους που εμφανίζονται με μετάλλαξη σε γονίδια για συνήθεις πλασμιδιακά μεσολαβούμενες β- λακταμάσες. Στελέχη των Klebsiella spp. και E. coli που παράγουν ESBL ενδέχεται να είναι κλινικώς ανθεκτικά στη θεραπεία με πενικιλλίνες, κεφαλοσπορίνες ή αζτρεονάμη, παρά την εμφανή in vitro ευαισθησία σε μερικούς από τους παράγοντες αυτούς. Μερικά από τα στελέχη αυτά θα εμφανίσουν ζώνες αναστολής κάτω από τον φυσιολογικό ευαίσθητο πληθυσμό, αλλά πάνω από τα τυπικά σημεία μετάπτωσης (breakpoint) για ορισμένες κεφαλοσπορίνες εκτεταμένου φάσματος ή την αζτρεονάμη. Τέτοια στελέχη θα πρέπει να υποβάλλονται σε εξέταση ανίχνευσης για δυνητική παραγωγή ESBL με χρήση των σημείων μετάπτωσης ανίχνευσης ESBL πριν από την αναφορά αποτελεσμάτων για πενικιλλίνες, κεφαλοσπορίνες εκτεταμένου φάσματος ή αζτρεονάμη. Άλλα στελέχη ενδέχεται να εμφανίζουν ενδιάμεσο ή ανθεκτικό αποτέλεσμα εξέτασης με τυπικά σημεία μετάπτωσης σε έναν ή περισσότερους από τους παράγοντες αυτούς. Σε όλα τα στελέχη με ESBL οι διάμετροι των ζωνών για μία ή περισσότερες από τις κεφαλοσπορίνες εκτεταμένου φάσματος ή την αζτρεονάμη θα πρέπει να αυξάνονται παρουσία του κλαβουλανικού οξέος, όπως προσδιορίζεται σε εξέταση επιβεβαίωσης φαινοτύπου. Για όλα τα επιβεβαιωμένα στελέχη που παράγουν ESBL, η ερμηνεία της εξέτασης θα πρέπει να τα αναφέρει ως ανθεκτικά για όλες τις πενικιλλίνες, κεφαλοσπορίνες και την αζτρεονάμη. Η απόφαση για την πραγματοποίηση εξετάσεων ανίχνευσης ESBL σε όλα τα απομονωμένα στελέχη από ούρα θα πρέπει να λαμβάνεται από το εκάστοτε ίδρυμα, λαμβάνοντας υπόψη τα θέματα του επιπολασμού, της θεραπείας και του ελέγχου των λοιμώξεων. 7 Για αναγνώριση των ανθεκτικών στη μεθικιλλίνη σταφυλόκοκκων, η εξέταση με δίσκο οξακιλλίνης είναι πιο πιθανό να ανιχνεύσει την ανθεκτικότητα από ό,τι η χρήση δίσκων μεθικιλλίνης ή ναφκιλλίνης. Επομένως, ο δίσκος οξακιλλίνης 1 µg θα πρέπει να χρησιμοποιείται για την εξέταση για την ανθεκτικότητα στη μεθικιλλίνη/οξακιλλίνη. Οποιαδήποτε ζώνη που περιβάλλει το δίσκο οξακιλλίνης θα πρέπει να επιθεωρείται προσεκτικά με χρήση εκπεμπόμενου φωτός για μικρές αποικίες ή λεπτή μεμβράνη ανάπτυξης εντός της ζώνης αναστολής μετά από επώαση επί ένα ολόκληρο 24ωρο. Οι ανθεκτικοί στη μεθικιλλίνη σταφυλόκοκκοι είναι συχνά ανθεκτικοί σε πολλαπλές τάξεις αντιμικροβιακών παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων των αμινογλυκοσιδών, μακρολιδίων, κλινδαμυκίνης, φαινικολών, κινολονών, σουλφοναμιδών και τετρακυκλίνης. Η παρατήρηση πολλαπλής ανθεκτικότητας θα πρέπει να αποτελεί ένδειξη της πιθανότητας ανθεκτικότητας στη μεθικιλλίνη. Ωστόσο, στελέχη του ανθεκτικού στη μεθικιλλίνη S. aureus που δεν εκδηλώνουν αντοχή σε άλλες τάξεις αντιμικροβιακών παραγόντων έχουν απομονωθεί τόσο από ενδονοσοκομειακούς όσο και από εξωνοσοκομειακούς ασθενείς. Εάν υπάρχει αμφιβολία για το αποτέλεσμα εξέτασης διάχυσης σε δίσκο με πιθανό ανθεκτικό στη μεθικιλλίνη Staphylococcus spp., πραγματοποιήστε επιπλέον εξετάσεις επιβεβαίωσης, όπως περιγράφεται στο έγγραφο CLSI M7. 9 Ο ανθεκτικός στη μεθικιλλίνη/οξακιλλίνη S. aureus (MRSA) και οι αρνητικοί στην πηκτάση σταφυλόκοκκοι (MRS) θα πρέπει να αναφέρονται ως ανθεκτικοί (ή να μην αναφέρονται καθόλου) σε όλες τις πενικιλλίνες, κεφέμες, καρμπαπενέμες και άλλες β-λακτάμες, όπως αμοξυκιλλίνη/κλαβουλανικό οξύ, αμπικιλλίνη/σουλμπακτάμη, τικαρκιλλίνη/κλαβουλανικό οξύ, πιπερακιλλίνη/ταζομπακτάμη και ιμιπενέμη, ανεξάρτητα από τα αποτελέσματα in vitro εξετάσεων με εκείνους τους παράγοντες. Αυτό συμβαίνει επειδή οι περισσότερες περιπτώσεις τεκμηριωμένων SD-BD.06 Σελίδα 5

6 λοιμώξεων που οφείλονται σε ανθεκτικούς στη μεθικιλλίνη σταφυλόκοκκους έχουν ανταποκριθεί ελάχιστα σε θεραπεία με β-λακτάμες, και χρειάζεται ακόμα να παρουσιαστούν πειστικά κλινικά δεδομένα, τα οποία να τεκμηριώνουν την κλινική αποτελεσματικότητα αυτών των παραγόντων. 6 Απομονωμένα στελέχη σταφυλόκοκκων που αποδεικνύεται ότι φέρουν το γονίδιο meca ή το προϊόν PBP 2a, το προϊόν του γονιδίου meca, θα πρέπει να αναφέρονται ως ανθεκτικά στην οξακιλλίνη. Ερμηνευτικά κριτήρια για αρνητικούς στην πηκτάση σταφυλόκοκκους συσχετίζονται με την παρουσία ή την απουσία του γονιδίου που κωδικοποιεί την ανθεκτικότητα στη μεθικιλλίνη (meca) για το S. epidermidis. Αυτά τα ερμηνευτικά κριτήρια ενδέχεται να χαρακτηρίσουν εσφαλμένα ως ανθεκτικούς άλλους αρνητικούς στην πηκτάση σταφυλόκοκκους, π.χ. S. lugdunensis ή S. saprophyticus. Για σοβαρές λοιμώξεις με αρνητικούς στην πηκτάση σταφυλόκοκκους εκτός από το S. epidermidis, ενδέχεται να είναι κατάλληλη εξέταση για το meca ή την πρωτεΐνη που εκφράζεται από το meca, την πενικιλλινοδεσμευτική πρωτεΐνη 2a (PBP 2a, επίσης γνωστή ως PBP 2 ) για στελέχη που έχουν διαμέτρους ζώνης στο εύρος ενδιάμεσων ή ανθεκτικών αποτελεσμάτων. Απομονωμένα στελέχη που δεν αποδεικνύεται ότι φέρουν το meca ούτε ότι παράγουν το PBP 2a θα πρέπει να αναφέρονται ως ευαίσθητα στην οξακιλλίνη. Έχει αναφερθεί ότι ο έλεγχος ευαισθησίας με δίσκους δεν αποτελεί ακριβή μέθοδο για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας στη μεθικιλλίνη (οξακιλλίνη) για αρνητικούς στην πηκτάση σταφυλόκοκκους (δηλ. S. saprophyticus). 10 Δεν συνιστάται εξέταση ρουτίνας των απομονωμένων στελεχών του S. saprophyticus από ούρα, επειδή οι λοιμώξεις ανταποκρίνονται σε συγκεντρώσεις που επιτυγχάνονται σε ούρα αντιμικροβιακών παραγόντων που χρησιμοποιούνται συνήθως για τη θεραπεία οξειών, μη επιπλεγμένων λοιμώξεων της ουροφόρου οδού (π.χ. νιτροφουραντοΐνη, τριμεθοπρίμη/σουλφαμεθοξαζόλη ή μια φθοριοκινολόνη). Μια ταχεία εξέταση β-λακταμάσης (π.χ. με χρήση δίσκων Cefinase ) ενδέχεται να αποδώσει κλινικώς σημαντικές πληροφορίες νωρίτερα από ό,τι τα αποτελέσματα μιας εξέτασης διάχυσης σε δίσκο με Haemophilus spp., N. gonorrhoeae και Moraxella catarrhalis. Είναι η μόνη αξιόπιστη εξέταση για την ανίχνευση του Enterococcus spp. που παράγει β-λακταμάση. Μια θετική εξέταση β-λακταμάσης προβλέπει ανθεκτικότητα στην πενικιλλίνη, αμπικιλλίνη και αμοξυκιλλίνη μεταξύ των Haemophilus spp., N. gonorrhoeae και M. catarrhalis και ανθεκτικότητα στην πενικιλλίνη, συμπεριλαμβανομένων των ακυλαμινο-, καρβοξυ- και ουρεϊδο-πενικιλλινών μεταξύ των σταφυλόκοκκων και των εντερόκοκκων. Μια αρνητική εξέταση β-λακταμάσης δεν αποκλείει την ανθεκτικότητα λόγω άλλων μηχανισμών. Μην εξετάζετε μέλη της οικογένειας Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp. και άλλους αερόβιους gram-αρνητικούς βάκιλλους, επειδή τα αποτελέσματα ενδέχεται να μην είναι προγνωστικά της ευαισθησίας στις β-λακτάμες που χρησιμοποιούνται πλέον συχνά για θεραπεία. Η ακριβής ανίχνευση της β-λακταμάσης στους σταφυλόκοκκους ενδέχεται να απαιτεί επαγωγή του ενζύμου και επώαση μιας εξέτασης με βάση τη νιτροσεφίνη για έως 1 ώρα. Η επαγωγή είναι δυνατό να επιτευχθεί εύκολα με εξέταση της ανάπτυξης από το περιθώριο της ζώνης που περιβάλλει μια εξέταση δίσκου οξακιλλίνης. Πρέπει να δίνεται προσοχή για να διασφαλιστούν ακριβή αποτελέσματα, συμπεριλαμβάνοντας την εξέταση γνωστών στελεχών θετικού και αρνητικού ελέγχου κατά τη χρονική στιγμή εξέτασης των κλινικών απομονωμένων στελεχών. 6 Η εξέταση ευαισθησίας των πενικιλλινών και άλλων β-λακταμών που έχουν εγκριθεί από την Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων των Η.Π.Α. για την αντιμετώπιση των στρεπτόκοκκων των ομάδων A και B δεν είναι απαραίτητη για κλινικούς σκοπούς και δε χρειάζεται να γίνεται τακτικά, επειδή όπως και με τη βανκομυκίνη, δεν έχουν αναγνωριστεί ανθεκτικά στελέχη. Ωστόσο, μερικά στελέχη του S. agalactiae ενδέχεται να δώσουν ενδιάμεσα αποτελέσματα για την πενικιλλίνη. Οι εξετάσεις διάχυσης σε δίσκο με αμπικιλλίνη, πενικιλλίνη και ριφαμπίνη για το Neisseria meningitidis είναι μη αξιόπιστες. Για τους μικροοργανισμούς αυτούς θα πρέπει να εκτελούνται εξετάσεις ελάχιστης ανασταλτικής συγκέντρωσης (MIC). 7 SD-BD.06 Σελίδα 6

7 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η εξέταση όπως περιγράφεται στο παρόν ισχύει κυρίως σε ταχέως αναπτυσσόμενα αερόβια παθογόνα. Απαιτητικά βακτήρια, εκτός από τα H. influenzae, N. gonorrhoeae, S. pneumoniae και άλλους στρεπτόκοκκους, θα πρέπει να εξετάζονται με μέθοδο αραίωσης. 9 Η εξέταση αναερόβιων μικροοργανισμών απαιτεί ειδικές διαδικασίες. 11 Για τα Campylobacter, Corynebacterium και Bacillus spp., τα δεδομένα σχετικά με την αξιοπιστία της εξέτασης διάχυσης άγαρ δεν επαρκούν προκειμένου να συνιστάται αυτή η μέθοδος. Οι κατατάξεις Ανθεκτικό, Ενδιάμεσο και Ευαίσθητο διαφέρουν μόνο κατά ένα χιλιοστόμετρο, το οποίο βρίσκεται εντός του φυσιολογικού εργαστηριακού σφάλματος. Μερικές καλλιέργειες ενδέχεται να δώσουν οριακή ζώνη που μεταβάλλεται από ημέρα σε ημέρα ή από εργαστήριο σε εργαστήριο. Τέτοιου είδους καλλιέργειες είναι σχετικά ασυνήθεις. Για την ανίχνευση της ανθεκτικότητας των πνευμονιόκοκκων και των εντερόκοκκων, πρέπει να τηρείτε αυστηρά τις μεθόδους που συνιστώνται στο έγγραφο CLSI. 6 Ενδέχεται να χρησιμοποιούνται την τρέχουσα χρονική στιγμή αντιμικροβιακοί παράγοντες διαφορετικοί από εκείνους που αναφέρονται στα πρότυπα. Εξετάσεις ευαισθησίας που χρησιμοποιούν τους παράγοντες αυτούς θα πρέπει να ερμηνεύονται με βάση την παρουσία ή την απουσία οριστικής ζώνης αναστολής και θα πρέπει να θεωρούνται αποκλειστικά ως ποιοτικές, έως ότου καθιερωθούν ερμηνευτικές ζώνες. Όλες οι διάμετροι των ζωνών θα πρέπει να καταγράφονται. Η εξέταση επιβεβαίωσης ESBL είναι έγκυρη μόνον όταν χρησιμοποιούνται και οι τέσσερις δίσκοι ταυτόχρονα (κεφοταξίμη, κεφοταξίμη/κλαβουλανικό οξύ, κεφταζιντίμη, κεφταζιντίμη/κλαβουλανικό οξύ). Το CLSI δε συνιστά τη μεμονωμένη χρήση των δίσκων αυτών. 6,7 Η μέθοδος ενοφθαλμισμού, η ερμηνεία και τα όρια των μεγεθών των ζωνών που δίνονται στα 6, 12 πρότυπα CLSI ενδέχεται να διαφέρουν από τα εθνικά πρότυπα. Sensi-Disc Vancomycin (254858) - ΣΗΜΑΝΤΙΚΗ ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η ικανότητα ανίχνευσης του ανθεκτικού στη βανκομυκίνη Staphylococcus aureus (VRSA) με το παρόν προϊόν δεν είναι γνωστή. Κατά τη διενέργεια ελέγχου ευαισθησίας σε απομονωμένα στελέχη S. aureus, ιδιαίτερα του ανθεκτικού στη μεθικιλλίνη S. aureus (MRSA), θα πρέπει να χρησιμοποιούνται επιπρόσθετες μέθοδοι εξέτασης, σύμφωνα με τις συστάσεις του Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Στις δοκιμές αυτές περιλαμβάνονται μη αυτοματοποιημένες μέθοδοι MIC (π.χ., μικροαραίωση ζωμού ή αραίωση με άγαρ) και μια εξέταση ανίχνευσης με άγαρ βανκομυκίνης (Brain Heart Infusion Agar με 6 µg/ml βανκομυκίνης). Για την ανίχνευση του VRSA με αυτές τις μεθόδους, απαιτείται επώαση για 24 ώρες. Για περισσότερες πληροφορίες, ανατρέξτε στην διαδικτυακή τοποθεσία του CDC. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45: Ryan, K.J., F.D. Schoenknecht, and W.M.M. Kirby Disc sensitivity testing. Hospital Practice 5: Federal Register Rules and regulations. Antibiotic susceptibility discs. Fed. Regist. 37: Erratum, 38:2756, Ericsson, H.M., and J.C. Sherris Antibiotic sensitivity testing. Report of an international collaborative study. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B. Suppl. 217: World Health Organization Expert Committee on Biological Standardization Technical report series 610. W.H.O., Geneva. 6. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved standard M2-A10. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 10th ed. CLSI, Wayne, Pa., USA 7. Clinical and Laboratory Standards Institute M100-S22 (M2). Disk Diffusion Supplemental Tables, CLSI, Wayne Pa., USA 8. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17: SD-BD.06 Σελίδα 7

8 9. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved standard M7-A8. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically, 8th ed. CLSI, Wayne, Pa., USA 10. York, M.K., L. Gibbs, F. Chehab, and G.F. Brooks Comparison of PCR detection of meca with standard susceptibility testing methods to determine methicillin resistance in coagulasenegative staphylococci. J. Clin. Microbiol. 34: Clinical and Laboratory Standards Institute Approved standard M11-A7. Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria, 7th ed. CLSI, Wayne, Pa., USA 12. Jorgensen, J.H., and J.D. Turnidge Susceptibility test methods: dilution and disk diffusion methods. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Bannerman, T.L Staphylococcus, Micrococcus, and other catalase-positive cocci that grow aerobically. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 14. Kilian, M Haemophilus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 15. Mannheim, W. et al.: Pasteurellaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (ed. F. Burkhardt). Thieme Verlag, Stuttgart Chapin, K., and G.V. Doern Selective media for recovery of Haemophilus influenzae from species contaminated with upper respiratory tract microbial flora. J. Clin. Microbiol. 17: Wilkins; T.D., and T. Thiel Modified broth-disk method for testing the antibiotic susceptibility of anaerobic bacteria. Antimicrob. Agents Chemother. 3: Zabransky, R.J., et al Predicting the susceptibility of anaerobes to cefoperazone, cefotaxime, and cefoxitin with the thioglycollate broth-disk procedure. J. Clin. Microbiol. 24: SD-BD.06 Σελίδα 8

9 ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD Sensi-Discs Συσκευασία σε γυάλινα σωληνάρια (με πώμα που περιέχει αφυγραντικό), 1 φύσιγγα ανά σωληνάριο. Μονάδα πώλησης: 10 σωληνάρια. Βλ. τον Πίνακα 1 για τους διαθέσιμους αριθμούς καταλόγου και προϊόντα. ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. Prompt is a trademark of 3M. All other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD SD-BD.06 Σελίδα 9

10 Πίνακας 1: Προϊόντα BD Sensi-Disc που είναι διαθέσιμα σε γυάλινα σωληνάρια ΑΝΑΦ Περιγραφή ΑΜΙΚΑΣΙΝΗ AN ΑΜΟΞΥΚΙΛΛΙΝΗ AMX ΑΜΟΞΥΚΙΛΛΙΝΗ + ΚΛΑΒΟΥΛΑΝΙΚΟ ΟΞΥ (AUGMENTAN) AMC ΑΜΠΙΚΙΛΛΙΝΗ AM ΒΑΚΙΤΡΑΚΙΝΗ B-10 * ΚΕΦΑΚΛΟΡΗ CEC ΚΕΦΑΔΡΟΞΙΛΗ CFR ΚΕΦΑΖΟΛΙΝΗ CZ ΚΕΦΕΠΙΜΗ FEP ΚΕΦΟΤΑΞΙΜΗ CTX ΚΕΦΟΤΙΑΜΗ CFT ΚΕΦΟΞΙΤΙΝΗ FOX ΚΕΦΣΟΥΛΟΝΤΙΝΗ CFS ΚΕΦΤΑΖΙΔΙΜΗ CAZ ΚΕΦΤΡΙΑΞΟΝΗ CRO ΚΕΦΟΥΡΟΞΙΜΗ CXM ΚΕΦΑΛΕΞΙΝΗ CN ΚΕΦΑΛΟΘΙΝΗ CF ΧΛΩΡΑΜΦΑΙΝΙΚΟΛΗ C ΚΙΠΡΟΦΛΟΞΑΣΙΝΗ CIP ΚΛΙΝΔΑΜΥΚΙΝΗ CC ΚΛΙΝΔΑΜΥΚΙΝΗ CC ΚΟΛΙΣΤΙΝΗ CL ΔΟΞΥΚΥΚΛΙΝΗ D ΕΡΥΘΡΟΜΥΚΙΝΗ E ΦΩΣΦΟΜΥΚΙΝΗ + ΓΛΥΚΟΖΗ-6- ΦΩΣΦΟΡΙΚΟ FF ΦΟΥΣΙΔΙΚΟ ΟΞΥ FA ΓΕΝΤΑΜΥΚΙΝΗ GM ΙΜΙΠΕΝΕΜΗ IPM ΚΑΝΑΜΥΚΙΝΗ K ΛΙΝΚΟΜΥΚΙΝΗ L ΜΕΡΟΠΕΝΕΜΗ MEM ΜΕΤΡΟΝΙΔΑΖΟΛΗ MET-80** ΜΕΖΛΟΚΙΛΛΙΝΗ MZ ΝΑΛΙΔΙΞΙΚΟ ΟΞΥ NA ΝΕΟΜΥΚΙΝΗ N ΝΕΤΙΛΜΥΚΙΝΗ NET ΝΙΤΡΟΦΟΥΡΑΝΟΪΝΗ FM ΝΟΡΦΛΟΞΑΣΙΝΗ NOR ΝΟΒΟΒΙΟΚΙΝΗ NB-5 * ΟΦΛΟΞΑΣΙΝΗ OFX-10 ΑΝΑΦ Περιγραφή ΟΦΛΟΞΑΣΙΝΗ OFX ΟΛΕΑΝΔΟΜΥΚΙΝΗ OL-15 * ΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗ OX ΟΞΑΚΙΛΛΙΝΗ OX ΠΕΝΙΚΙΛΛΙΝΗ G P-10 SD-BD.06 Σελίδα ΠΙΠΕΜΙΔΙΚΟ ΟΞΥ PI ΠΙΠΕΡΑΚΙΛΛΙΝΗ PIP ΠΙΠΕΡΑΚΙΛΛΙΝΗ PIP ΠΟΛΥΜΥΞΙΝΗ B PB-300* ΣΟΥΛΜΠΑΚΤΑΜΗ + ΚΕΦΟΠΕΡΑΖΟΝΗ SCP ΣΟΥΛΦΑΜΕΘΟΞΑΖΟΛΗ + ΤΡΙΜΕΘΟΠΡΙΜΗ SXT ΤΕΤΡΑΚΥΚΛΙΝΗ TE ΤΟΜΠΡΑΜΥΚΙΝΗ NN ΤΟΜΠΡΑΜΥΚΙΝΗ NN ΤΡΙΜΕΘΟΠΡΙΜΗ TMP ΒΑΝΚΟΜΥΚΙΝΗ VA-30

11 Υποσημειώσεις στον Πίνακα 1: *Αυτοί οι δίσκοι Sensi-Discs χρησιμοποιούνται σε μια ποικιλία διαδικασιών απομόνωσης και ταυτοποίησης. Δεν χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο ευαισθησίας απομονωθέντων στελεχών για θεραπευτικούς σκοπούς ΒΑΚΙΤΡΑΚΙΝΗ B-10 και ΟΛΕΑΝΔΟΜΥΚΙΝΗ OL-15: Αυτοί οι δίσκοι χρησιμοποιούνται για την απομόνωση του Haemophilus influenzae σε μη εκλεκτικά μέσα. Μετά τον ενοφθαλμισμό του τρυβλίου απομόνωσης, π.χ. BD Chocolate Agar (άγαρ GC II με IsoVitaleX) ή BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), τοποθετήστε έναν δίσκο βακιτρακίνης ή ολεανδομυκίνης στην περιοχή της πρώτης γραμμωτής επίστρωσης. Μετά τον ενοφθαλμισμό, το Haemophilus influenzae μπορεί να απομονωθεί από την περιοχή της ζώνης αναστολής επειδή είναι ανθεκτικό στη βακιτρακίνη και στην ολεανδομυκίνη, ενώ η περισσότερη φυσιολογική χλωρίδα θα ανασταλεί από αυτά τα αντιμικροβιακά ΝΟΒΟΒΙΟΚΙΝΗ NB-5 Αυτός ο δίσκος χρησιμοποιείται για τη διαφοροποίηση των σταφυλοκόκκων σε είδη που είναι ευαίσθητα και ανθεκτικά στη νοβοβιοκίνη: Πραγματοποιήστε εξέταση διάχυσης σε άγαρ Mueller Hinton II και επωάστε για 18 έως 24 ώρες. Ανθεκτικό: <16 mm. Ευαίσθητο: 16 mm. Τα Staphylococcus saprophyticus, S. cohnii, S. xylosus και μια ποικιλία άλλων ειδών είναι ανθεκτικά, ενώ τα S. aureus, S. epidermidis, S. schleiferi και μια ποικίλα άλλων ειδών είναι ευαίσθητα ΠΟΛΥΜΥΞΙΝΗ B PB-300 Αυτός ο δίσκος χρησιμοποιείται για τη διαφοροποίηση των σταφυλοκόκκων σε είδη που είναι ευαίσθητα και ανθεκτικά στην πολυμυξίνη (ίδια μέθοδος με τη νοβοβιοκίνη). Ανθεκτικό: <10 mm. Ευαίσθητο: 10 mm. Τα S. aureus, S. epidermidis, S. hyicus και S. chromogenes είναι ανθεκτικά. 16 Ο δίσκος χρησιμοποιείται επίσης σε μια ποικιλία άλλων διαδικασιών ταυτοποίησης ΜΕΤΡΟΝΙΔΑΖΟΛΗ MET-80 **Αυτό ο δίσκος έχει χρησιμοποιηθεί για τον έλεγχο απομονωθέντων στελεχών από αυστηρά αναερόβιους μικροοργανισμούς (π.χ., Bacteroides spp.) για αντοχή στη μετρονιδαζόλη με τη μέθοδο έκλουσης με δίσκους ζωμού. 17,18 Πρέπει να τονιστεί ότι η συγκεκριμένη μέθοδος δεν συνιστάται πλέον από το CLSI. 11 Επίσης, οι αυστηρά αναερόβιοι μικροοργανισμοί δεν πρέπει να εξετάζονται με τη μέθοδο διάχυσης με δίσκους. SD-BD.06 Σελίδα 11