ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ. Γκαντέρης Γεώργιος Βιοπαθολόγος Αναπληρωτής Διευθυντής ΓΝΑ «Γ. ΓΕΝΝΗΜΑΤΑΣ»

Μέγεθος: px

Εμφάνιση ξεκινά από τη σελίδα:

Download "ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ. Γκαντέρης Γεώργιος Βιοπαθολόγος Αναπληρωτής Διευθυντής ΓΝΑ «Γ. ΓΕΝΝΗΜΑΤΑΣ»"

Μελίνα Χριστόπουλος
7 χρόνια πριν
Προβολές:

1 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ Γκαντέρης Γεώργιος Βιοπαθολόγος Αναπληρωτής Διευθυντής ΓΝΑ «Γ. ΓΕΝΝΗΜΑΤΑΣ»

GRAM ΘΕΤΙΚΑ ΑΝΑΕΡΟΒΙA Gram θετικά βακτηρίδια σπορογόνα (Clostridium sp) Gram θετικοί αναερόβιοι κόκκοι Peptostreptococcus sp P. anaerobius Parvimonas sp P.

2 GRAM ΘΕΤΙΚΑ ΑΝΑΕΡΟΒΙA Gram θετικά βακτηρίδια σπορογόνα (Clostridium sp) Gram θετικοί αναερόβιοι κόκκοι Peptostreptococcus sp P. anaerobius Parvimonas sp P. micra Finegoldia sp Peptoniphillus sp Anaerococcus sp F. magna Peptocoocus sp P. niger Atopobium sp A. parvula Coprococcus sp, Rominococcus sp Sarcina sp,gallicola, sp Pn. asaccharolyticus, Pn. indolicus, Pn. harei, Pn. lacrimalis, Pn. ivorii An. prevotii,, An. Tetradius,, An. hydrogenalis, An. octavius An. lactolyticus,, An. vaginalis Gallicilo bamesae Gram Gram θετικά βακτηρίδια μη σπορογόνα (Actimomyces sp, Propionibacterium sp, Lactobacillus sp, Bifidobacterium sp, Eubacterium sp )

3 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ Α. Κλινικές πληροφορίες Β. Μακροσκοπική εξέταση Γ. Άμεση μικροσκοπική εξέταση Δ. Ταυτοποίηση (προκαταρκτική & τελική)

4 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ (συνέχεια) Α. ΚΛΙΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ 1. Θέση λοίμωξης 2. Προηγούμενη λήψη αντιβιοτικών 3. Παραγωγή αερίου 4. Δυσοσμία

5 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ B. Μακροσκοπική εξέταση Μαύρα πυώδη ή αιματηρά εξιδρώματα Πιθανόν φθορισμός Κοκκία θείου

6 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ (συνέχεια) Γ. ΑΜΕΣΗ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΚΗ ΕΞΕΤΑΣΗ ΤΟΥ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ Νωπό: Μικροσκόπηση σε σκοτεινό πεδίο για παρατήρηση των σπόρων και της κινητικότητας Χρώση Gram: Θέτει την αρχική υποψία της παρουσίας αναεροβίων βακτηρίων Προσφέρει σημαντική βοήθεια στην αρχική εμπειρική θεραπεία

7 Χλωρίδα εντέρου

9 Lactobacillus sp

10 Θρεπτικά υλικά για αναερόβια Brucella blood agar εμπλουτισμένο με αιμίνη και βιταμίνη Κ1 Phenyl ethyl alcohol blood agar (PEA) kanamycin-vancomycin laked blood agar (KVLB) Bacteroides bile-esculin esculin agar (BBE) Thioglycolate broth εμπλουτισμένο με βιταμίνη K 1 και αιμίνη

11 Δ. Προκαταρκτική ταυτοποίηση αναεροβίων Mορφολογία των αποικιών Xρώση Gram Aπλέςπλές δοκιμασίες Πλήρης ταυτοποίηση Βιοχημικές δοκιμασίες Συστήματα ταυτοποίησης ταυτοποίησης (Rapid ID 32A, BBL Crystal ANR, RapID ANA II ) Δισκία ενζυματικών αντιδράσεων Υγρή-αέρια χρωματογραφία

12 Εξέταση των καλλιεργημάτων Συνήθως πολυμικροβιακή ανάπτυξη με άλλα αναερόβια και αερόβια Ενδείξεις αναεροβίων: 1. Δυσοσμία 2. Περισσότεροι τύποι αποικιών στο αιματούχο αναερόβιο από το σοκολατόχρωμο 3. Ανάπτυξη στο υλικό ΒΒΕ ή στο KVLB 4. Κεραμιδί φθορισμός (μετά έκθεση σε UV φως 366 nm) ή μαύρες αποικίες στο KVLB ή στο αιματούχο αναερόβιο 5. Από κάθε διαφορετικό μορφότυπο αποικίας εκτελείται χρώση Gram, έλεγχος αεροβιώσεως σε σοκολατόχρωμο άγαρ ( h CO %) και απομόνωση σε αιματούχο ανερόβιο με δισκίο metronodazole 6. Ανάπτυξη μόνο στο αιματούχο αναερόβιο σημαίνει αναερόβιο βακτήριο 7. Μερικά αναερόβια αναπτύσσονται σε περιβάλλον CO %

13 ΔΟΚΙΜΑΣΙΕΣ ΓΙΑ ΓΡΗΓΟΡΗ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ Clostridium sp (από καθαρό καλλιέργημα) Χρώση Gram Μορφολογία αποικιών Έλεγχος αεροβίωσης Δίσκοι ειδικής περιεκτικότητας (Vancomycin 5 μg, Kanamycin 1000 μg, Colistin 10 μg) Λιπάση Λεκιθινάση Παραγωγή ινδόλης Αναγωγή νιτρικών δισκία Καταλάση Φθορισμός Παραγωγή ουρεάσης Δοκιμασία παραγωγής σπόρων (alcohol shock) Ανάστροφη CAMP Nagler test

14 Χαρακτηριστικά αποικιών κλωστηριδίων Μεγάλες αποικίες με διπλή ζώνη αιμόλυσης (C. perfringens, C.novyi ) Μεγάλες ριζοειδείς ( Clostridium sp ) Ερπύζουσες αποικίες (C. septicum, C. tetani, C. sordellii, C. sporogenes) Οσμή (στάβλου αλόγων C. difficile) Χρώμα αποικιών

17 C. novyi

18 C. difficile

19 C. septicum

21 ΦΘΟΡΙΣΜΟΣ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΣΠΟΡΟΓΟΝΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΟ ΦΘΟΡΙΣΜΟΣ C. difficile κιτρινοπράσινος C. innocuum κιτρινοπράσινος C. ramosum κόκκινος

22 Μικροσκοπική εικόνα C. perfringens: Gram (+) βακτηρίδια μεγάλα με τετραγωνισμένα άκρα, χωρίς σπόρους C. septicum: Μακρύ, λεπτό, πολύμορφο νηματοειδές με υποτελικούς ωοειδείς σπόρους C. novyi : Mεσαίου μεγέθους με υποτελικούς ωοειδείς σπόρους C. difficile: Μακρύ, λεπτό, με υποτελικούς ωοειδείς σπόρους

23 C. perfringens

24 C. difficile

25 C. difficile

26 C. sporogenes

27 C. novyi

28 C. tetani

29 C. septicum

30 Λεκιθινάση + C. perfringens

31 Λιπάση + C. sporogenes

32 ΒΑΚΤΗΡΙΟ C. perfringens 1 C. Sordellii 1 C. bifermentans C. barati 1 C. limosum C. novyi A C. sporogenes 1 Nagler θετικά ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΛΕΚΙΘΙΝΑΣΗΣ ΛΙΠΑΣΗΣ 1 ΛΕΚΙΘΙΝΑΣΗ ΛΙΠΑΣΗ

33 C. perfringens Ανάστροφη δοκιμασία CAMP

34 Nagler test Αντιτοξίνη C. perfrringens

35 ΠΡΟΚΑΤΑΡΚΤΙΚΗ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΚΛΩΣΤΗΡΙΔΙΩΝ Ινδόλη Νιτρικά Φθορισμός Λεκιθινάση Λιπάση Ουρεάση Τετράγωνα άκρα Διπλή β- αιμόλυση C. perfringens C. bifermentans C. sordellii C. septicum C. sporogenes

36 Προκαταρκτική ταυτοποίηση κλωστηριδίων + Λεκιθινάση - + Λιπάση - + Λιπάση - C. novyi C. bifermenntas C. sordelli C. sporogenes Closridium sp C. barati C. limosum C. perfringens + Ινδόλη - C. bifermenntas C. sordelli + Ουρεάση - C. sordelli C. bifermenntas C. barati C. limosum C. perfringens + C. limosum C. perfringens Ζελατίνη - C. barati

37 Ένζυμα Glutamic acid decarboxylase ΕΝΖΥΜΑΤΙΚΕΣ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΤΙΚΕΣ ΔΟΚΙΜΑΣΙΕΣ Θετικό αποτέλεσμα Βακτήρια amine (μπλε χρώμα) C. sordelii (+) C. bifermentans (-) L-proline aminopeptedas e β-naphythylamine + cinnamaldehyde ( ροζ-πορφυρό χρώμα) C. difficile (+) C. innocuum (-) α-glucosidase μπλε φθορισμός (με UV 360 nm) 4-methylumbelliferone C. septicum (+) C. sporogenes (-) Αλκαλική φωσφατάση 4- nitrophenol Κίτρινο χρώμα An. hydrogenalis (+) An. accacharolyticus (-)

38 RapID ANA II Panel (remel)

39 Σακχαρολυτικά πρωτεολυτικά κλωστηρίδια Λεθινά ση Λιπά ση Ινδόλη Αερόβια ανάπτυξη Ουρία Νιτρικά Κινητικό τητα Θέση σπόρων Εσκουλί νη C. bifermentans ΩΥ + C. Sordelii ΩΥ - C. perfringens Οχι - C. novyi ΩΥ - C. sporogenes ΩΥ + C. cadaveris ΩΥ - C Septicum Π + ΩΥ + C. difficile ΩΤ + C. putrificum Τ -+

40 Σακχαρολυτικά μη πρωτεολυτικά κλωστηρίδια Λεκιθι νάση Λιπ άση Ινδό λη Αερό βια ανάπτυξη Ουρία Νιτρικά Κινητικό τητα Θέση σπόρων Εσκου λίνη C. barati Τελικός ΟΧΙ + C. tertium AN + C. butyricum ΩΤ + C. innocum ΩΤ + C. ramosum Σ, ΩΤ Σπάνιος + C Clostridioform _ + ΩΥ, ΟΧΙ +

41 Μη σακχαρολυτικά μη πρωτεολυτικά κλωστηρίδια Λεκιθινά ση Λιπάση Ινδόλη Αερόβια ανάπτυξη Ουρία Νιτρικά Κινητικό τητα Θέση σπόρων Εσκουλίνη C. tetani - - Π Σ,Τ - C. hastiform _+ + Υ - C. Subterminale ΩΥ, ΟΧΙ -+ C. histoyticum ΩΥ - C. limosum Υ -

42 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΚΟΚΚΩΝ E Δίσκοι SPS A Peptostreptococcus anaerobius Ινδόλη An. prevotii An. terradius + α-γαλακτοσιδάση - Ουρεάση - Micromonas micros <0,6 μm Finegoldia magna > 0,6 μm + Pn. asaccharolyticus An. hydrogenalis Αλκαλική φωσφατάση ήζύμωσηγλυκόζης - - An. prevotii An. tetradius An. hydrogenalis Pn.αsaccharolyticus

43 P. anaerobius

44 Gram θετικά βακτηρίδια μη σπορογόνα A. israeli

45 A. israeli

46 A. odondolyticus

47 Propionibacterium acnes

48 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΜΗ ΣΠΟΡΟΓΟΝΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΔΙΩΝ Βακτήρια Νιτρικά Καταλάση Ινδόλη Εσκουλίνη Ουρεάση Χρώμα αποικιών Ανάπτυξη Actinomyces sp A. israelii Α, Μ A. odontolyticus Α, Μ A. naeslundii Α, Δ A. viscosus Α, Μ A. meyeri Α Propionibacterium sp Α, Μ P. acnes Α, Μ P. granulosum P. anidum Bifidobacterium sp Α, Μ B. dentium Α Lactobacillus sp Α, Μ Eubacterium sp Α E. lentum Α Α: αναερόβια Isenberg 2005 Δ: δυνητικά αναερόβια Μ: μικροαερόφιλα

49 Προκαταρκτική ταυτοποίηση Gram (+) Μη σπορογόνων βακτηριδίων Διφθεροειδή, πολύμορφα ή διακλαδιζό μενα Διφθεροειδή με διακλαδιζόμενα άκρα διφθεροειδή, Πολύμορφα Ήομαλά Κοντά ή μακρυά λεπτά βακτηρίδια Συχνά σε αλυσίδες Καταλάση(+) Καταλάση(-) Eubacterium sp Bifidobabacterium Lactobacillus Propionibacterium sp Actinomyces viscosus Νιτρικά (-) Νιτρικά(+) E. limosum E. lentum Iινδόλη (+) Iινδόλη (-) P. propionicum A Israelii, A.odontolyticus Α. naeslundii, A. meyeri P. acnes Α. Viscosus: Ουρία(+) Νιτρικά (+) Propioniba cteriun sp

50 Ερώτηση 1 η Gram θετικό, σπορογόνο αναερόβιο βακτηρίδιο, (απομονώθηκε από κ/α αποστήματος σε χρήστη ενδοφλεβίων ναρκωτικών ουσιών) με: διπλή ζώνη β- αιμόλυσης λεκιθινάση( ( +) λιπάση (+) είναι: 1. C. perfringens 2. C. sporogenes 3. C. novyi 4. Όλα τα ανωτέρω

51 Ερώτηση 2 η Gram (+) αναερόβιος κόκκος, ευαίσθητος στη Metronidazole με ζώνη αναστολής στο SPS >= 12 mm είναι: 1. Micromonas micros 2. Pertosrteptococcus anaerobius 3. Finegoldia magna 4. Όλα τα ανωτέρω

Σχετικά έγγραφα

ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ. Γκαντέρης Γεώργιος Βιοπαθολόγος Αναπληρωτής Διευθυντής ΓΝΑ «Γ. ΓΕΝΝΗΜΑΤΑΣ»

ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ GRAM ΘΕΤΙΚΩΝ ΑΝΑΕΡΟΒΙΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ Γκαντέρης Γεώργιος Βιοπαθολόγος Αναπληρωτής Διευθυντής ΓΝΑ «Γ. ΓΕΝΝΗΜΑΤΑΣ» GRAM ΘΕΤΙΚΑ ΑΝΑΕΡΟΒΙA Gram θετικά βακτηρίδια σπορογόνα Gram θετικοί αναερόβιοι κόκκοι