Aνίχνευση του στρεπτοκόκκου ομάδας Β σε έγκυες γυναίκες: Καλλιέργεια, ή PCR; Γ. Γερολυμάτος, Σ. Μπάκα, Π. Καρλοβασίτη, Ε. Λογοθέτης, Η. Τσούμα, Γ. Καππαρός, Β. Γεννηματά, Ε. Κουσκούνη Εργαστήριο Βιοπαθολογίας, Αρεταίειο Νοσοκομείο, ΕΚΠΑ, Αθήνα
Εισαγωγή Ο Streptococcus agalactiae, ή στρεπτόκοκκος ομάδας B κατά Lancefield (GBS) έχει αναγνωριστεί ως ένα βασικό αίτιο απειλητικών για τη ζωή νεογνικών λοιμώξεων. Oι έγκυες γυναίκες συχνά αποικίζονται με GBS στο ουρογεννητικό και γαστρεντερικό τους σύστημα, αυξάνοντας την πιθανότητα κάθετης μετάδοσης του μικροβίου στα νεογνά. (CDC, 2010)
Για το λόγο αυτό, το CDC συστήνει έλεγχο των εγκύων γυναικών στην 35η- 37η εβδομάδα της κύησης, ώστε να αναγνωρίζονται όσες είναι αποικισμένες με GBS και να αντιμετωπίζονται με προφυλακτική αντιμικροβιακή αγωγή κατά τη διάρκεια του τοκετού.
Εισαγωγή Ο συστηματικός έλεγχος και η θεραπεία των αποικισμένων από GBS γυναικών έχει επιφέρει σημαντική μείωση των νεογνικών λοιμώξεων. (Poncelet-Jasserand et al, 2013) Παρόλο που η προτιμώμενη μέθοδος απομόνωσης του GBS παραμένει η καλλιέργεια, τελευταία ενθαρρύνεται η χρήση των μοριακών τεχνικών και κυρίως της PCR που είναι μία γρήγορη τεχνική με υψηλότερη ευαισθησία και ειδικότητα. (CDC, 2010 / Konikkara et al, 2014)
Σκοπός Η εκτίμηση της συχνότητας αποικισμού των εγκύων γυναικών κατά την 35η- 37η εβδομάδα της κύησης και η σύγκριση της PCR ως τεχνική ανίχνευσης με τη μέθοδο αναφοράς που είναι η καλλιέργεια.
Υλικό και μέθοδοι Έγινε συλλογή κολπικών και πρωκτικών δειγμάτων από 452 έγκυες γυναίκες, από 22 έως 38 ετών, μεταξύ 35 ης και 37 ης εβδομάδας κύησης. Τα δείγματα καλλιεργήθηκαν αφενός και επεξεργάστηκαν με μεθοδολογία PCR αφετέρου, στοχεύοντας το γονίδιο cfb.
Υλικό και μέθοδοι Υλικό μεταφοράς Stuart και ζωμός Todd-Hewitt, επώαση 36 0 C, 5% CO 2, 24 h. Ανακαλλιέργεια σε αιματούχο άγαρ, επώαση 36 0 C, 5% CO 2, 24 h. Ύποπτες αιμολυτικές και μη-αιμολυτικές αποικίες. Ταυτοποίηση βάσει: Μορφολογίας αποικιών. Gram χρώσης. Δοκιμασίας καταλάσης. Συγκολλητινοαντίδρασης latex με ειδικούς αντιορούς. Αυτοματοποιημένου συστήματος VITEK2.
Υλικό και μέθοδοι Στόχος: Γονίδιο cfb που κωδικοποιεί τον παράγοντα CAMP. Επώαση σε ζωμό Todd-Hewitt, φυγοκέντρηση και ανασύσταση του ιζήματος με TE buffer. DNA extraction. 50 μl μείγματος PCR [20 mm Tris-HCl (ph 8,4), 50 mm KCl, 2,5 mm MgCl 2, 0,4 mm από κάθε νουκλεοτίδιο, 0.4 μm από κάθε εκκινητή και 1 U Platinum Taq polymerase)]. Εκκινητές: Sag 59 και Sag 190. Amplification: 5 min 94ºC, 45 κύκλους των 30s 94ºC, 30s 55ºC, 30s 72ºC, με GeneAmp PCR System 9700. Απεικόνιση με ηλεκτροφόρηση 10 μl σε 2% gel αγαρόζης με 0,4 mg/ml βρωμιούχο αιθίδιο. Δείγμα με 153 amplicons θεωρήθηκε θετικό για GBS. (Ke et al, 2000)
Στατιστική ανάλυση Τα αποτελέσματα της PCR δεν αποκαλύφθηκαν στο τμήμα καλλιεργειών και αντίστροφα. Τα αποτελέσματα της PCR συγκρίθηκαν με τα αποτελέσματα της καλλιέργειας, σαν μέθοδος αναφοράς. Για τη στατιστική επεξεργασία των αποτελεσμάτων χρησιμοποιήθηκε το πακέτο SPSS 22.0 (Chicago, IL, USA). Τιμή p<0,05 θεωρήθηκε στατιστικώς σημαντική.
Αποτελέσματα Δεν παρατηρήθηκαν στατιστικώς σημαντικές διαφορές μεταξύ κολπικών και πρωκτικών δειγμάτων. Όλα τα δείγματα που ανευρέθηκαν θετικά με τη μέθοδο της καλλιέργειας, επιβεβαιώθηκαν ως θετικά με PCR. Δείγμα / Μέθοδος Καλλιέργεια PCR p Κολπικό 83 (18,4 %) 102 (22,6 %) 0,0006 Πρωκτικό 82 (18,1 %) 96 (21,2 %) 0,01 Όλες οι αποικισμένες γυναίκες έλαβαν προφυλακτική αντιμικροβιακή αγωγή κατά τη διάρκεια του τοκετού και δεν καταγράφηκε αποικισμός, ή λοίμωξη νεογνού από GBS στον πληθυσμό που μελετήσαμε.
Συχνότητα GBS αποικισμού ποικίλλει
Συζήτηση Τα αποτελέσματά μας έρχονται σε συμφωνία με τα απότελέσματα προηγούμενων μελετών. (Rallu et al, 2006 / Konikkara et al, 2014) Το ποσοστό αποικισμού από GBS ποικίλλει στην Ευρώπη από 6,5%, έως 36%. (De Tejada et al, 2011 / Khan et al, 2015) Ποικίλοι παράγοντες, όπως η γεωγραφική θέση, η κοινωνικοοικονομική κατάσταση, η ηλικία, γενετικοί παράγοντες, κλπ. ευθύνονται για τα διαφορετικά ποσοστά αποικισμού από GBS στους διάφορους πληθυσμούς. (Valkenburg-van den Berg et al, 2006) Η ικανότητα ανίχνευσης του GBS εξαρτάται από το είδος του δείγματος, τη χρονική στιγμή της συλλογής και την επιλεγμένη μέθοδο. (Konikkara et al, 2014)
Συζήτηση CDC: Kαλλιέργεια, η gold-standard μέθοδος για την ανίχνευση των αποικισμένων από GBS γυναικών. (CDC, 2010) Χρονοβόρα μέθοδος (αποτελέσματα σε 48-72 ώρες) που απαιτεί κατάλληλα εκπαιδευμένο προσωπικό. (De-Paris et al, 2011). Μέλη της φυσιολογικής χλωρίδας του γυναικείου γεννητικού συστήματος μπορούν να αλληλεπιδράσουν με το GBS, αναστέλλοντας την ανάπτυξή του και οδηγώντας σε ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα (De-Paris et al, 2011)
Μοριακές τεχνικές-pcr: Γρήγορη ανίχνευση την ίδια μέρα, ακόμα και στην αίθουσα τοκετού, χρήζουν, όμως, ειδικού εξοπλισμού και εκπαιδευμένου προσωπικού, ενώ δεν προσφέρουν έλεγχο ευαισθησίας στα αντιβιοτικά.
GBS αποικισμός= Παράγοντας κινδύνου Ο αποικισμός της εγκύου: Παροδικός, διαλείπων, ή συνεχής Ερωτηματικά για την καταλληλότητα του ελέγχου την 35 η -37 η εβδoμάδα και όχι στον τοκετό. (El Helali et al, 2009 / Alfa et al, 2010 / Poncelet-Jasserand, 2013) Αποικισμός υφίσταται και <35 η εβδομάδα Πρόωρα νεογνά θα είναι σε κίνδυνο; (Barcaite et al, 2008 / de Tejada, 2011 / Sharmila et al, 2011 / Khan et al, 2015)
Συμπεράσματα Η PCR αποτελεί μια γρήγορη και αποτελεσματική επιλογή για την πρώιμη ανίχνευση του GBS κατά την κύηση και την αποτελεσματική πρόληψη της λοίμωξης του νεογνού. Λόγω υψηλής ευαισθησίας και ειδικότητας, η PCR είναι κατάλληλη για χρήση ακόμα και σε έγκυες που εισάγονται εσπευσμένα στην αίθουσα τοκετού, χωρίς προηγούμενο έλεγχο για GBS.
Ευχαριστώ για την προσοχή σας!