ΑΠΑΝΣΗΔΙ ΣΟ ΓΙΑΓΩΝΙΜΑ ΒΙΟΛΟΓΙΑ Θ.Κ. ΔΞΔΣΑΣΔΑ ΤΛΗ: ΚΔΦΑΛΑΙΑ 1, 2 και 4 ΗΜΔΡΟΜΗΝΙΑ: 23 Νοεμβρίοσ 2014 ΦΡΟΝΣΙΣΗΡΙΟ: ΚΟΡΤΦΑΙΟ. ΘΔΜΑ 1 ο.

Transcript

1 ΑΠΑΝΣΗΔΙ ΣΟ ΓΙΑΓΩΝΙΜΑ ΒΙΟΛΟΓΙΑ Θ.Κ. ΔΞΔΣΑΣΔΑ ΤΛΗ: ΚΔΦΑΛΑΙΑ 1, 2 και 4 ΗΜΔΡΟΜΗΝΙΑ: 23 Νοεμβρίοσ 2014 ΦΡΟΝΣΙΣΗΡΙΟ: ΚΟΡΤΦΑΙΟ ΘΔΜΑ 1 ο 1. Β 2. Γ 3. Γ Δ ΘΔΜΑ 2 ο Α. Η αλαθάιπςε ησλ πεξηνξηζηηθώλ ελδνλνπθιεαζώλ έζεζε ην ζεκέιην γηα ηε δεκηνπξγία ησλ γνληδησκαηηθώλ βηβιηνζεθώλ. Οη πεξηνξηζηηθέο ελδνλνπθιεάζεο παξάγνληαη από βαθηήξηα θαη ν θπζηνινγηθόο ηνπο ξόινο είλαη λα ηα πξνζηαηεύνπλ από ηελ εηζβνιή «μέλνπ» DNA. Οη πεξηνξηζηηθέο ελδνλνπθιεάζεο αλαγλσξίδνπλ εηδηθέο αιιεινπρίεο 4-8 λνπθιενηηδίσλ ζην δίθισλν DNA. Μία από ηηο πεξηνξηζηηθέο ελδνλνπθιεάζεο πνπ ρξεζηκνπνηείηαη επξέσο είλαη ε EcoRI πνπ απνκνλώζεθε από ην βαθηήξην Escherichia coli. Τν έλδπκν απηό όπνηε ζπλαληά ηελ αιιεινπρία: 5 GAATTC3 3 CTTAAG5, ζην γνληδίσκα, θόβεη θάζε αιπζίδα κεηαμύ ηνπ G θαη ηνπ Α (κε θαηεύζπλζε 5 3 ), αθήλνληαο κνλόθισλα άθξα από αδεπγάξσηεο βάζεηο ζηα θνκκέλα άθξα. Τα άθξα απηά κπνξνύλ λα ζρεκαηίζνπλ δεζκνύο πδξνγόλνπ κε ηηο ζπκπιεξσκαηηθέο βάζεηο άιισλ θνκκαηηώλ DNA πνπ έρνπλ θνπεί κε ην ίδην έλδπκν. Η αιιεινπρία: 5 GAATTC3 3 CTTAAG5, ππάξρεη δηάζπαξηε ζηα γνληδηώκαηα ησλ νξγαληζκώλ. Έηζη ην γνληδίσκα ελόο αλώηεξνπ επθαξπσηηθνύ νξγαληζκνύ, όπσο ηνπ βαηξάρνπ, κπνξεί λα θνπεί ζε ρηιηάδεο θνκκάηηα κε ηελ πεξηνξηζηηθή απηή ελδνλνπθιεάζε. Σηε ζπλέρεηα ηα θνκκάηηα απηά ελζσκαηώλνληαη ζε εηδηθνύο θνξείο. Οη πην ραξαθηεξηζηηθνί ηύπνη θνξέσλ είλαη ηα πιαζκίδηα, θαη ην DNA θάγσλ. Τα πιαζκίδηα πνπ ρξεζηκνπνηνύληαη σο θνξείο θισλνπνίεζεο έρνπλ ηε ζπγθεθξηκέλε αιιεινπρία κόλν κία θνξά. Έηζη ηα πιαζκίδηα θόβνληαη από ηελ EcoRI ζε απηή ηε ζέζε θαη δεκηνπξγείηαη γξακκηθό κόξην DNA κε κνλόθισλα άθξα. Τα δύν είδε DNA, ηνπ πιαζκηδίνπ θαη ηνπ βαηξάρνπ, αλακηγλύνληαη θαη, επεηδή έρνπλ ζπκπιεξσκαηηθά άθξα, ελώλνληαη κεηαμύ ηνπο κε ηε κεζνιάβεζε 1

2 ελόο ελδύκνπ, ηεο DNA δεζκάζεο. Όπσο ζπκάζηε ε DNA δεζκάζε θπζηνινγηθά είλαη έλα από ηα έλδπκα ηεο αληηγξαθήο πνπ ζπλδέεη θνκκάηηα ηνπ DNA. Έηζη δεκηνπξγνύληαη αλαζπλδπαζκέλα πιαζκίδηα. Μεξηθά πιαζκίδηα μαλαγίλνληαη θπθιηθά, ρσξίο λα πξνζιάβνπλ DNA ηνπ νξγαληζκνύ. Βαθηήξηα μεληζηέο δέρνληαη ζε κηθξό πνζνζηό πιαζκίδηα, κεξηθά από ηα νπνία είλαη αλαζπλδπαζκέλα. Σπλήζσο ρξεζηκνπνηνύληαη σο μεληζηέο, βαθηήξηα πνπ δελ έρνπλ πιαζκίδηα θαη επνκέλσο είλαη επαίζζεηα ζε αληηβηνηηθά. Γηα λα κπεη έλα πιαζκίδην κέζα ζην βαθηήξην, ηα ηνηρώκαηα ηνπ βαθηεξίνπ γίλνληαη παξνδηθά δηαπεξαηά ζε καθξνκόξηα, κεηά από θαηάιιειε θαηεξγαζία (κεηαζρεκαηηζκόο). Η επηινγή ησλ βαθηεξίσλ πνπ δέρηεθαλ αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην ζηεξίδεηαη ζηελ ηθαλόηεηα αλάπηπμήο ηνπο παξνπζία αληηβηνηηθνύ, επεηδή ην αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην πεξηέρεη έλα γνλίδην πνπ ηνπο πξνζδίδεη αλζεθηηθόηεηα ζην ζπγθεθξηκέλν αληηβηνηηθό. Κάζε βαθηήξην πνπ πξνζέιαβε έλα αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην πνιιαπιαζηάδεηαη θαη δίλεη έλα θιώλν. Η δηαδηθαζία δεκηνπξγίαο θιώλσλ βαθηεξίσλ νλνκάδεηαη κλωνοποίηζη. Τν ζύλνιν ησλ βαθηεξηαθώλ θιώλσλ πεξηέρεη ην ζπλνιηθό DNA ηνπ νξγαληζκνύ δόηε, δειαδή ηνπ βαηξάρνπ, θαη απνηειεί κία γονιδιωμαηική βιβλιοθήκη. Γηα λα γίλεη επηινγή ελόο θιώλνπ πνπ έρεη έλα επηζπκεηό γνλίδην ρξεζηκνπνηνύληαη εηδηθνί αληρλεπηέο, κε κηα δηαδηθαζία πνπ ζα αλαιπζεί παξαθάησ. Η θισλνπνίεζε ζε πιαζκίδηα είλαη ζρεηηθά απιή θαη γη απηό ηα πιαζκίδηα απνηεινύλ ην ζπλεζέζηεξν θνξέα θισλνπνίεζεο γηα νξγαληζκνύο κε κηθξό γνληδίσκα. Έλαο άιινο θνξέαο πνπ ρξεζηκνπνηείηαη επξύηαηα γηαηί κπνξεί λα ελζσκαηώζεη κεγαιύηεξα θνκκάηηα μέλνπ DNA, είλαη ν βαθηεξηνθάγνο ι. ε ζηξαηεγηθή ηεο θισλνπνίεζεο είλαη ε ίδηα κε απηήλ πνπ ρξεζηκνπνηείηαη θαη ζηα πιαζκίδηα. Β. Οη πξσηεΐλεο ηνπ ππξήλα ησλ επθαξπσηηθώλ θπηηάξσλ πνπ γλσξίδνπκε, είλαη νη εμήο: 1 νλ. Ιζηόλεο 2 νλ. Άιιεο πξσηεΐλεο πνπ ζπκκεηέρνπλ ζηε δεκηνπξγία ηνπ ηληδίνπ ρξσκαηίλεο (π.ρ. κε ηζηόλεο) 3 νλ. DNA-Διηθάζε. 4 νλ. Πξηκόζσκα. 5 νλ. DNA-Πνιπκεξάζεο. 6 νλ. Δηδηθά επηδηνξζσηηθά έλδπκα. 7 νλ. DNA-Γεζκάζε 8 νλ. Μεηαγξαθηθνί παξάγνληεο. 9 νλ. RNA-Πνιπκεξάζεο. 10 νλ. Πξσηεΐλεο ησλ κηθξώλ ξηβνλνπθιενπξσηετληθώλ ζσκαηηδίσλ. Πξνζνρή: ππάξρνπλ πνιιέο πξσηεΐλεο κέζα ζηνλ ππξήλα πνπ έρνπλ απνκνλσζεί θαη κειεηεζεί, απιά πεξηνξηδόκαζηε ζε απηέο πνπ αλαθέξνληαη ζην ζρνιηθό βηβιίν ηεο Γ ιπθείνπ. 2

3 Γ. α) Οη Πεξηνρέο ηνπ βαθηεξηαθνύ γνληδηώκαηνο πνπ δε κεηαγξάθνληαη, είλαη νη: 1. Οη πεξηνρέο ηνπ DNA πνπ δελ πεξηέρνπλ θαλέλα γνλίδην. 2. Οη ππνθηλεηέο όισλ ησλ γνληδίσλ. 3. Τα δνκηθά γνλίδηα ησλ νπεξνλίσλ θάησ από ζπγθεθξηκέλεο πεξηβαιινληηθέο ζπλζήθεο γηα ην βαθηήξην. 4. Οη ρεηξηζηέο ησλ νπεξνλίσλ. β) Οη Πεξηνρέο ηνπ βαθηεξηαθνύ γνληδηώκαηνο πνπ κεηαγξάθνληαη, αιιά δε κεηαθξάδνληαη, είλαη νη: 1. Τα γνλίδηα πνπ θσδηθνπνηνύλ ηε ζύλζεζε ησλ trnas θαη ησλ rrnas κνξίσλ. 2. Οη εηδηθέο αιιεινπρίεο ιήμεο ηεο κεηαγξαθήο όισλ ησλ γνληδίσλ. 3. Τα ηκήκαηα ησλ γνληδίσλ πνπ θσδηθνπνηνύλ mrnas κόξηα θαη αληηζηνηρνύλ ζηηο 5 θαη 3 ακεηάθξαζηεο πεξηνρέο ηνπο. 4. Τα ηκήκαηα ησλ γνληδίσλ πνπ θσδηθνπνηνύλ ηα mrnas κόξηα θαη αληηζηνηρνύλ ζηα θσδηθόληα ιήμεο απηώλ ησλ mrnas κνξίσλ. ΘΔΜΑ 3 ο Α. Η ζύλδεζε είλαη παξνδηθή, επεηδή νη δεζκνί πδξνγόλνπ πνπ ζρεκαηίδνληαη κεηαμύ ησλ ζπκπιεξσκαηηθώλ κεηαμύ ηνπο, κνλόθισλσλ άθξσλ από αδεπγάξσηεο βάζεηο, είλαη αζζελείο δεζκνί. Αληίζεηα, εάλ ζην δηάιπκα πξνζηεζεί ην έλδπκν ηεο DNA-Γεζκάζεο, ηόηε ζρεκαηίδνληαη θαη νη ηζρπξνί νκνηνπνιηθνί 3 5 θσζθνδηεζηεξηθνί δεζκνί, κε παξαγσγή ελόο κνξίνπ λεξνύ. Οη δεζκνί απηνί ζρεκαηίδνληαη κεηαμύ ηνπ 3 - άθξνπ ηεο κίαο αιπζίδαο ηνπ πξώηνπ DNA κνξίνπ θαη ηνπ 5 - άθξνπ ηεο κίαο αιπζίδαο ελόο δεύηεξνπ DNA κνξίνπ. Τν ίδην γεγνλόο παξαηεξείηαη θαη ζηε δηαζύλδεζε ησλ δύν απηώλ κνξίσλ ζηηο άιιεο αιπζίδεο ηνπο. Β. Τα έλδπκα πνπ έρνπλ ηελ ηθαλόηεηα λα αλαγλσξίδνπλ εηδηθέο αιιεινπρίεο πάλσ ζε DNAs ή ζε RNAs κόξηα είλαη: 1. Οη DNA-Διηθάζεο πνπ αλαγλσξίδνπλ ηα Σεκεία Έλαξμεο ηεο Αληηγξαθήο (Σ.Δ.Α.), πξνθεηκέλνπ λα πξαγκαηνπνηήζνπλ ηελ ηνπηθή εθηύιημε ηνπ DNA κνξίνπ πνπ πξόθεηηαη λα αληηγξαθεί. 2. Τα Πξηκνζώκαηα, πνπ αλαγλσξίδνπλ ηηο Θέζεηο Έλαξμεο ηεο Αληηγξαθήο, πξνθεηκέλνπ λα ηνπνζεηήζνπλ ηα Πξσηαξρηθά Τκήκαηα ζε απηέο. 3. Τα Δηδηθά Δπηδηνξζσηηθά Έλδπκα πνπ αλαγλσξίδνπλ, ηα ιάζε ηεο αληηγξαθήο πάλσ ζηηο ζπγαηξηθέο αιπζίδεο ηνπ DNA θαη ηα επηδηνξζώλνπλ. 4. Οη DNA-Γεζκάζεο πνπ αλαγλσξίδνπλ ηηο Δγθνπέο, πάλσ ζηηο Θπγαηξηθέο Αιπζίδεο ηνπ DNA θαη ηηο θιείλνπλ. 5. Οη Μεηαγξαθηθνί Παξάγνληεο ησλ RNA-Πνιπκεξαζώλ πνπ αλαγλσξίδνπλ θαη ζπλδένληαη πάλσ ζηνλ ππνθηλεηή ηνπ γνληδίνπ. 6. Τα κηθξά ξηβνλνπθιενπξσηετληθά ζσκαηίδηα, πνπ ζπλδένληαη πάλσ ζηα Δζώληα ησλ γνληδίσλ, πξνθεηκέλνπ λα ηα αθαηξέζνπλ από ηα πξόδξνκα mrnas κόξηα θαη λα ζπξξάςνπλ ηα Δμώληα κεηαμύ ηνπο. 3

4 7. Οη Δηδηθέο Πξσηεΐλεο, ρσξίο ηηο νπνίεο δελ πξαγκαηνπνηείηαη θαλέλα από ηα ηξία (3) ζηάδηα ηεο Μεηάθξαζεο (π.ρ. ν Παξάγνληαο Απειεπζέξσζεο, ν νπνίνο ζπλδέεηαη ζην Κσδηθόλην Λήμεο ηεο Μεηάθξαζεο) 8. Η Αληίζηξνθε Μεηαγξαθάζε πνπ ζπλδέεηαη ζην 3 - άθξν ησλ RNAs κνξίσλ θαη ηα κεηαγξάθεη αληίζηξνθα ζε κία cdna-αιπζίδα. Γ. Σε έλα πξνθαξπσηηθό γνλίδην πνπ θσδηθνπνηεί έλα θαξκαθεπηηθό νιηγνπεπηίδην, ε αιιεινπρία ησλ βάζεώλ ηνπ είλαη ε παξαθάησ: CTTAAGAGTACTCTTCACCTGAAGTGGGGCCCCGAAGCGCGCGTACTTAAG GAATTCTCATGAGAAGTGGACTTCACCCCGGGGCTTCGCGCGCATGAATTC α) Ωο Φνξέα Κισλνπνίεζεο ζα ρξεζηκνπνηήζνπκε ην δεύηεξν πιαζκίδην, επεηδή απηό θέξεη ην ζεκείν θνπήο ηνπ κε ηελ EcoRI, κέζα ζην γνλίδην lacz θαη έηζη ζα είλαη εθηθηή ε απνκόλσζε ησλ κεηαζρεκαηηζκέλσλ βαθηεξίσλ κε αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην (άρξσκα), από ηα κεηαζρεκαηηζκέλα βαθηήξηα κε κε αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην (κπιε). β) Ωο Βαθηήξην-Ξεληζηή ζα ρξεζηκνπνηήζνπκε ην δεύηεξν είδνο, αθνύ ε Πεξηνξηζηηθή Δλδνλνπθιεάζε TaqI δελ θόβεη ζε θαλέλα ζεκείν θαη έηζη δελ θαηαζηξέθεη ην πξνθαξπσηηθό γνλίδην, πνπ εκείο επηζπκνύκε λα θισλνπνηήζνπκε. Αληίζεηα, ε MspI πνπ παξάγεηαη ζην δεύηεξν είδνο Βαθηεξίσλ-Ξεληζηώλ, έρεη έλα (1) ζεκείν θνπήο πάλσ ζην πξνθαξπσηηθό γνλίδην πνπ επηζπκνύκε λα θισλνπνηήζνπκε θαη έηζη ην ηεκαρίδεη θαη άξα ην θαηαζηξέθεη. γ) Τελ ακπηθηιίλε, ώζηε λα ζθνησζνύλ όια ηα Με Μεηαζρεκαηηζκέλα Βαθηήξηα θαη λα επηβηώζνπλ όια ηα Μεηαζρεκαηηζκέλα Βαθηήξηα. δ) Γεκηνπξγία Σρήκαηνο Αλαζπλδπαζκέλνπ Πιαζκηδίνπ, όπσο έρνπκε δείμεη ζε αλάινγεο αζθήζεηο! Τν mrna πνπ πξνθύπηεη είλαη ην: 5...AUG AGA AGU GGA CUU CAC CCC GGG GCU UCG CGC GCA UGA...3 ε) 3 UAC5 / 3 UCU5 / 3 UCA5 / 3 CCU5 / 3 GAA5 / 3 GUG5 / 3 GGG5 / 3 CCC5 / 3 CGA5 / 3 AGC5 / 3 GCG5 / 3 CGU5 ζη) Τν θαξκαθεπηηθό νιηγνπεπηίδην έρεη 12 ακηλνμέα δ) Όια ηα Με Μεηαζρεκαηηζκέλα Βαθηήξηα, παξνπζία ηνπ αληηβηνηηθνύ ηεο ακπηθηιίλεο ζα ζθνησζνύλ. Τα Μεηαζρεκαηηζκέλα Βαθηήξηα κε κε αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην, ζα εθθξάδνπλ ην γνλίδην lacz, ζα παξάγνπλ ην έλδπκν ηεο β-γαιαθηνδηδάζεο, ην νπνίν δηαζπώληαο ηνπο β-γαιαθηνδηδηθνύο δεζκνύο ηνπ ζξεπηηθνύ πιηθνύ, ζα απειεπζεξώλεη κία κπιε ρξσζηηθή, βάθνληαο κπιε ηα Μεηαζρεκαηηζκέλα Βαθηήξηα κε κε αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην. Τα Μεηαζρεκαηηζκέλα Βαθηήξηα κε αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην, δε ζα κπνξνύλ λα εθθξάζνπλ ην γνλίδην lacz, θαη άξα δε ζα παξάγνπλ ην έλδπκν ηεο β-γαιαθηνδηδάζεο. Δπνκέλσο, δε δηαζπώληαη νη β-γαιαθηνδηδηθνί δεζκνί ηνπ ζξεπηηθνύ πιηθνύ, θαη έηζη δελ απειεπζεξώλεηαη ε κπιε ρξσζηηθή, πνπ ζα έβαθε κπιε θαη απηά ηα βαθηήξηα, ηα νπνία πξνθαλώο παξακέλνπλ άρξσκα! 4

5 ΘΔΜΑ 4 ο α) Ν γνληδίνπ = = βάζεις. β) i)ν ώξηκνπ γνληδίνπ = = βάζεηο Όκσο κεηά ηελ ηερλεηή πξνζζήθε ησλ γνπαληλώλ ζηα 5 άθξα ηνπ ώξηκνπ γνληδίνπ θαη επεηδή είλαη γξακκηθό δίθισλν DNA, ζα έρνπκε: Ν ώξηκνπ γνληδίνπ = = βάζεηο θ.δ. = Ν-2 = δεζμοί. ii)ν αλνηγκέλνπ πιαζκηδίνπ = = βάζεηο Όκσο κεηά ηελ ηερλεηή πξνζζήθε ησλ θπηνζηλώλ ζηα 5 άθξα ηνπ αλνηγκέλνπ πιαζκηδίνπ θαη επεηδή ην αλνηγκέλν πιαζκίδην είλαη γξακκηθό δίθισλν DNA, ζα έρνπκε: Ν αλνηγκέλνπ γνληδίνπ = = θ.δ. = Ν-2 = δεζμοί. γ) Ο ζρεδηαζκόο ηνπ αλαζπλδπαζκέλνπ πιαζκηδίνπ, ζα πξέπεη λα γίλεη έρνληαο ππόςε καο ηα παξαθάησ βήκαηα: Αξρηθά, ζρεδηάδνπκε ην αλνηγκέλν πιαζκίδην πνπ ζα έρεη ζηα 5 άθξα ηνπ, νθηώ κνλόθισλεο αδσηνύρεο βάζεηο (κε θαηεύζπλζε αλάγλσζεο από 5 3 ) CCCCAATT Σηε ζπλέρεηα, γξάθνπκε ην ώξηκν γνλίδην ηνπ νπνίνπ ηα 5 άθξα, ζα έρνπλ ηέζζεξεηο κνλόθισλεο αδσηνύρεο βάζεηο (κε θαηεύζπλζε αλάγλσζεο από 5 3 ) GGGG Οη ηέζζεξεηο πξνεμέρνπζεο βάζεηο (GGGG) ηνπ ώξηκνπ γνληδίνπ, δεκηνπξγνύλ δεζκνύο πδξνγόλνπ κε ηηο ζπκπιεξσκαηηθέο βάζεηο CCCC ζηα 5 άθξα ηνπ αλνηγκέλνπ πιαζκηδίνπ. Άξα, ζε θάζε αιπζίδα ηνπ αλαζπλδπαζκέλνπ πιαζκηδίνπ, κεηαμύ ηνπ 3 άθξνπ θάζε αιπζίδαο ηνπ αλνηγκέλνπ πιαζκηδίνπ θαη ηνπ 5 άθξνπ ηνπ ώξηκνπ γνληδίνπ κε ηα ηερλεηά άθξα ησλ ηεζζάξσλ γνπαληλώλ, δεκηνπξγείηαη έλα ράζκα ηνπ DNA, πνπ αθνξά ηελ έιιεηςε αδσηνύρσλ βάζεσλ ζην 3 άθξν θάζε αιπζίδαο ηνπ αλνηγκέλνπ πιαζκηδίνπ, απέλαληη από ηηο βάζεηο (κε θαηεύζπλζε αλάγλσζεο 5 3 ) AATT. ΠΡΟΟΧΗ: Σο σάσμα αςτό τος DNA, θα κλείσει στη σςνέσεια η DNA-pol τος βακτηπίος-ξενιστή, μετά το βακτηπιακό μετασσηματισμό, με τη βοήθεια τηρ DNA-Δεσμάσηρ. δ) Δάλ ππνινγίζνπκε κόλν ηνπο θ.δ. πνπ ζα δεκηνπξγήζεη ε DNA-Γεζκάζε κεηά ηνλ αξρηθό αλαζπλδπαζκό ηνπ πιαζκηδίνπ, δειαδή κόλν θαηά ην θιείζηκν ησλ ραζκάησλ ηνπ DNA θαη ησλ εγθνπώλ ηνπ, ηόηε ζα είλαη μόνο δύο ζημεία, κεηαμύ Τ θαη G ζε θάζε αιπζίδα. Δάλ όκσο ππνινγίζνπκε όηη θαη θαηά ηελ αξρηθή αλάκεημε ηνπ αλνηρηνύ πιαζκηδίνπ κε ην ώξηκν γνλίδην, είραλ δεκηνπξγεζεί δύν θσζθνδηεζηεξηθνί δεζκνί από ηελ DNA- Γεζκάζε, αλάκεζα ζηελ C ηνπ πξνεμέρνληνο 5 άθξνπ ηνπ αλνηγκέλνπ πιαζκηδίνπ θαη ηελ ηειεπηαία βάζε ηνπ 3 άθξνπ ηνπ ώξηκνπ γνληδίνπ, ηόηε ηα ζσνολικά ζημεία δράζης ηης DNA-Γεζμάζης ζηο αναζσνδσαζμένο πλαζμίδιο γίλνληαη ηέζζερα (δύν αξρηθά θαη δύν ζηε ζπλέρεηα κε ην θιείζηκν ησλ ραζκάησλ θαη ησλ εγθνπώλ ηνπ αλαζπλδπαζκέλνπ πιαζκηδίνπ). 5

6 ε) Μ θιεηζηνύ αλαζπλδπαζκέλνπ πιαζκηδίνπ = 600 δ.β. + 4 δ.β. + 4 δ.β δ.β. + 4 δ.β. + 4 δ.β. = δεύγε βάζεσλ ζη) (i) Γηα ην ώξηκν γνλίδην έρνπκε: A=T=86 N γνληδίνπ = 2A + 2G = G G = 514 = C δ.η. 1 = 2Α + 3G = = δεζκνί (ii) Γηα ην ηκήκα ηνπ πιαζκηδίνπ πνπ νη δύν αιπζίδεο ηνπ ζπγθξαηνύληαη κε δεζκνύο πδξνγόλνπ, ηζρύνπλ: A=T=416 N ηκήκαηνο πιαζκηδίνπ κε δεζκνύο πδξνγόλνπ = 2A + 2G = G G = 430 = C 3. δ.η. 2 = 2A + 3G = = δεζκνί (iii) Μεηαμύ ησλ ηεζζάξσλ γνπαληλώλ θαη ησλ ηεζζάξσλ θπηνζηλώλ ησλ ηερλεηώλ άθξσλ δεκηνπξγνύληαη 12 δεζκνί πδξνγόλνπ. Όκσο έρνπκε ζε δύν ζεκεία ηνπ αλαζπλδπαζκέλνπ πιαζκηδίνπ, απηή ηε δεκηνπξγία ησλ 12 δεζκώλ πδξνγόλνπ, δειαδή ζπλνιηθά γηα απηά ηα δύν ζεκεία ηνπ αλαζπλδπαζκέλνπ πιαζκηδίνπ δεκηνπξγνύληαη 2 12= 24 δεζκνί πδξνγόλνπ. (iv) Σην ηέινο, νη βαθηεξηαθέο DNA-pol, ζα επαλαδεκηνπξγήζνπλ 8 λένπο δεζκνύο πδξνγόλνπ ζηα πξνεμέρνληα άθξα ΑΑΤΤ θάζε ράζκαηνο ηνπ DNA. Δπεηδή όκσο απηά ηα ράζκαηα βξίζθνληαη ζε δύν ζεκεία, άξα επαλαδεκηνπξγνύληαη κε απηό ηνλ ηξόπν 2 8 = 16 δεζκνί πδξνγόλνπ. Από ηα (i), (ii), (iii) θαη (iv), πξνθύπηεη όηη νη ζπλνιηθνί δεζκνί πδξνγόλνπ ζην αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην κεηά θαη ην θιείζηκν ησλ δύν ραζκάησλ ηνπ, είλαη: δ.η. ζπλνιηθνί = = δεζκνί πδξνγόλνπ. Καλό διάβαζμα ηώρα για ηο επόμενο διαγώνιζμα!!! 6