Tuberkulóza - stanovenie latentnej tuberkulózy pomocou testu T-SPOT TB

Μέγεθος: px

Εμφάνιση ξεκινά από τη σελίδα:

Download "Tuberkulóza - stanovenie latentnej tuberkulózy pomocou testu T-SPOT TB"

Λεββαῖος Αντωνοπούλου
7 χρόνια πριν
Προβολές:

1 s.r.o. AdLa Analyticko diagnostické laboratórium a ambulancie s.r.o. Vajanského 1, Prešov Tuberkulóza - stanovenie latentnej tuberkulózy pomocou testu T-SPOT TB Műller Ľ, Jurčo T, Gerlašinská E, Kužmová A.

2 Tuberkulóza (TBC) Chronické infekčné ochorenie spôsobené baktériou Mycobacterium tuberculosis, M. bovis Rod Mycobacterium 50 druhov 1. Obligátne patogénne (tuberkulóza, lepra) 2. Podmienečne patogénne 3. Nepatogénne (súčasť prírodných biotopov) nepohyblivé koky, tyčinky až vlákna 1-10 µm dlhé obligátne aerobné, gram-pozitívne rastú veľmi pomaly generačná doba hod. (M.leprae dní) vyznačujú sa vysokou odolnosťou (acido-alkoholo rezistencia) kyselina mykolová (C60-C90) 2

3 Acidorezistencia Obtiažná farbiteľnosť organickými farbivami a následná odolnosť proti odfarbeniu kyselinami, zásadami, alkoholom Farbenie podľa: Ziehl-Neelsena teplo, karbolfuchsin, acidalkohol, metylénová modrá Kinyona fenol, karbolfuchsin, acidalkohol, metylénová modrá 3

4 Epidemiológia podľa WHO je viac ako 30% populácie infikovaná M. tuberculosis 16 miliónov infikovaných prípadov 8 miliónov nových prípadov každoročne najčastejší výskyt: Juhovýchodná Ázia, sub-saharská Afrika, Východná Európa v USA každoročne nových prípadov zvýšené riziko pre imunokompromitovaných pacientov, hlavne HIV+, alkoholici, narkomani, bezdomovci, jedinci v styku s infikovanými pacientami u pacientov s latentnou tuberkulózou je približne 10%-ná pravdepodobnosť progresie infekcie do aktívneho štádia 4

5 Prenos infekcie: prevažne prostredníctvom kvapôčkovej infekcie, pri hovorení, kýchaní alebo kašľaní, spievaní, otvorená tuberkulóza : prenos vykašliavaným hlienom spútom (tuberkulóza pľúc) žalúdočnou šťavou močom (tuberkulóza močových ciest) stolicou (tuberkulóza čriev) Rozšírenie sa M.tuberculosis do ostatných orgánov 5

6 Infekcia TBC Infekcia primárna tuberkulóza (izolované zápalové ložisko, ktoré sa opúzdri) - rozširovanie mykobaktérií po celom tele (môže trvať niekoľko rokov) - postprimárna tuberkulóza (dôsledkom reaktivácie zápaly v pľúcach, obličkách, kostiach) Tuberkulóza sa stáva nákazlivou, keď zápalové ložisko praskne 6

7 Primárna infekcia V 95 % všetkých prípadov sa baktérie pacienta s otvorenou tuberkulózou dostávajú inhaláciou kvapôčiek obsahujúcich pôvodcu ochorenia do pľúc fagocytóza makrofágmi Zneškodnenie vo vnútri fagocytov Prežívanie mykobaktérií a ich rozmnožovanie Vznik zápalového ložiska, ktoré sa označuje ako primárny afekt Prechod mykobaktérií do najbližšie ležiacich lymfatických uzlín Vznik primárneho komplexu rozpad makrofágu 7

8 v priebehu zápalovej reakcie sa vo väzivovom tkanive mykobaktérie opúzdria a v priebehu 1 roka skôrnatejú skôrnatený primárny komplex je možné dokázať na röntgenovej snímke vo vnútri týchto opúzdrených ložísk však môžu existovať ešte stále životaschopné baktérie tuberkulózy, ktoré sa môžu neskôr reaktivovať (postprimárna tuberkulóza). Schéma granulómu 1.vytvorenie fibrínovej vrstvy okolo granulómu 2.opevnenie lézie 3.kalcifikácia 4.vytvorenie kavity 8

9 Postprimárna tuberkulóza Ak sa ložiská v orgánoch, ktoré vznikli počas rozsevu pôvodcov ochorenia na krvnej ceste, nezahoja, vyvinie sa po rozlične dlhom čase tuberkulóza orgánov. Ložiská pôvodcov ochorenia v centre sa skvapalnia, vzniká dutina naplnená tekutinou, takzvaná kaverna. A vznikne spojenie kaverny s krvnými alebo lymfatickými cievami, prieduškami alebo močovodom, môžu sa baktérie rozšíriť do iných oblastí a opätovne založiť ložiská, alebo sa môžu hlienom alebo močom dostať do okolitého prostredia ( otvorená tuberkulóza ). Ak pľúcne ložisko susedí s krvnými cievami, môžu byť tieto pri jeho rozplývaní poranené, takže dochádza ku krvácaniu z pľúc s krvavým kašľom. Okrem tuberkulózy pľúc (cca. 85 %), existuje aj tuberkulóza obličiek, kostí, kôry nadobličiek, oka a mozgu. 9

10 Diagnostika TBC Symptomatika tuberkulózy je skôr necharakteristická, pričom v 10 % prípadov neexistujú žiadne ťažkosti - chybné diagnózy sú relatívne časté. Prvé príznaky ochorenia na tuberkulózu poskytne anamnéza (ochorenia v rodine alebo v bližšom okolí, oslabený organizmus kvôli iným ochoreniam, momentálne ťažkosti - mierne zvýšené teploty, nočné potenie, strata telesnej hmotnosti, kašeľ, röntgenové snímky. 10

11 Diagnostika TBC Mikroskopicky - farbenie podľa Ziehl-Neelsena (červené tyčinky na modrozelenom pozadí), pri malom počte mykobaktérií je veľmi nespoľahlivá. 11

12 Diagnostika TBC Kultivačne - Löwenstein-Jensenová tuhá pôda (typické kolónie karfiolový vzhľad) - Stonebringov agar (vaječný) - Petragnani agar (vaječný) - Šulová tekutá pôda (zrnitý, hrudkovitý zákal) 12

13 Diagnostika TBC Tuberkulínový test podľa Mantouxa vstrieknutie malého množstva tuberkulínu intradermálne na predlaktie. - sledovanie bunkovej hypersenzitivity oneskoreného typu - u zdravých jedincov bez reakcie - pri pozitívnom výsledku (infikovaní alebo vakcinovaní jedinci) sa o 48 až 72 hodín odčíta priemer vzniknutého začervenania (> 6 mm). Podozrenie na infekciu existuje pri veľmi silnej reakcii na test (napr. veľká zápalová oblasť o priemere viac než 13 mm). Testovanie úspešnosti očkovania - 3 mesiace po ochrannom BCG očkovaní U viac než 90 % zaočkovaných ľudí treba počítať s pozitívnym testom, ktorý sa o 3-5 rokov postupne stáva negatívnym. Ochrana očkovaním dosiahnutá prostredníctvom očkovania BCG však vydrží po celý život. 13

14 Diagnostika TBC PCR detekcia DNA mykobaktérií pomocou špecifických primerov priamy dôkaz DNA živých alebo mŕtvych MTB priamo v odobratej vzorke Duplex - možnosť testovať viac druhov v jednej reakcii V laboratóriu ADLA s.r.o. Mycobacterium ssp. Mycobacterium tuberculosis 14

15 IGRA testy (Interferon-gamma release assays) Uvoľnenie IFN-γ po stimulácii MTB špecifickými antigénmi Stanovenie aktívnej a/alebo latentnej tubekrulózy Krátko trvajúca inkubačná doba (inkubácia s kratšia ako 24 hodín) má za cieľ Aktivácia rýchlo reagujúcich buniek efektorovej povahy na rozdiel od MTB špecifických pamäťových buniek, ktoré sa in vitro aktivujú až po dlhšej dobe tri a viac dní. Pamäťové bunky evidujú aj minulú prítomnosť MTB v organizme (postvakcinačne, či po úspešnej eliminácii MTB). 15

16 Indikačné skupiny pre IGRA vyšetrenie Pacientov pre ktorých je test určený možno rozdeliť na nasledovné rizikové skupiny: Riziko prenosu ochorenia TBC kontakty, imigranti a vojaci pobývajúci v endemických oblastiach, väzni, pracovníci v zdravotníctve Riziko TBC ochorenia pacienti suspektní z TBC ochorenia Riziko progresie alebo reaktivácie ochorenia: imunosupresívna terapia, hematologické ochorenia, HIV infekcia, chronické renálne zlyhanie a dialýza, transplantácia orgánov, diabetes Pacienti na biologickej liečbe anti TNF alfa v oblastiach ako napr. reumatológia, gastroenterológia, dermatológia 16

17 QuantiFERON TB Gold In Tube (Cellestis Limited, Australia) Odber do troch špeciálnych skúmaviek NC, koktail proteínov ESAT-6, CFP-10, TB7.7 (p4) PC Inkubácia hodín Odber plazmy Dôkaz prítomnosti IFN-gama Zostavenie štandardnej krivky Premývanie, inkubácia (konjugát, substrát) Meranie optickej hustoty na ELISA Reader-i Výpočet a interpretácia výsledkov 17

18 T-SPOT.TB (Oxford Immunotec, UK) 96-jamková mikroplatnička (nie je potrebné naplniť platničku) TB-špecifické antigény: Panel A (ESAT-6) Panel B (CFP10) PC polyklonálny aktivátor phytohemaglutinín Konjugát (MoAb proti IFN-gama+ALP) Substrát Odber: plná krv s Li-heparín Transport do laboratória pri izbovej teplote Spracovanie vzorky do 8 hod. po odbere * Využíva ELISPOT techniku (enyzme-linked-immunospot), ktorá stanovuje počet jednotlivých špecificky aktivovaných efektorových T-lymfoctov * - možnosť vyšetrenia po 24 hodinách (T-Cell Extend) 18

19 Intenzita reakcie sa stanovuje na základe syntézy a uvoľňovania IFN-gama produkovaného efektorovými bunkami aktivovanými šp. MTB antigénmi a to priamo (T-SPOT.TB počet buniek), alebo nepriamo (QFTB koncentrácia IFN-gama) 19

20 Princíp T-SPOT.TB testu Odsatie lymfocytov a premytie Centrifugáci a Heparin Li-heparin Počítanie spotov v každej jamke Premývanie, vyvolanie, sušenie mikroplatne Inkubácia cez noc 20

21 Vyhodnotenie výsledku NC Panel A ESAT6 Panel B CFP 10 PC negatívny pozitívny pozitívny pozitívny

22 Sporné výsledky Nestanoviteľný výsledok NC Príčina? Spontánne uvoľňovanie IFN gama, súvisiace s akútnym ochorením, Panel A komorbiditou liekmi Panel B Potreba opätovnej analýzy po mesiaci Ak to nepomôže, nedá sa táto metóda (ani Quantiferon) aplikovať PC

23 Údaje z laboratória ADLA s.r.o. obdobie január 2013 jún 2015 N=2071 pacientov 23

24 Údaje z laboratória ADLA s.r.o. obdobie január 2013 jún 2015 N=2071 pacientov 24

25 Údaje z laboratória ADLA s.r.o. 25

26 Na záver T-SPOT.TB predstavuje: Spoľahlivý test na stanovenie latentnej tuberkulózy Rýchlosť (spracovanie do 8 hod. od odberu) Stačí jedna odberová skúmavka Dôkaz na imunokompetentných bunkách (štandardizovaný počet bb.) Premývanie buniek eliminácia možnej nechcenej aktivácie cytokínmi Výsledok bez čakania (žiadne napĺňanie platničky) Nevýhody: Urýchlený transport do laboratória Transport pri izbovej teplote 26

27 Diagnózu TB ochorenia nie je možné stanoviť len na základe IGRA vyšetrenia! V prípade vyšetrenia LTBI, ktorá je klinicky nemá však nemáme zatiaľ inú komerčne dostupnú alternatívnu voľbu 27

28 Metodické odporúčanie hlavného odborníka MZ SR pre odbor pneumológia a ftizeológia Každý pacient pred začatím biologickej liečby musí byť vyšetrený pneumológom a dispenzarizovaný za účelom vylúčenia latentnej alebo aktívnej tuberkulóznej infekcie. prof. MUDr. Eva Rozborilová, CSc. hlavný odborník MZ SR pre odbor pneumológia a ftizeológia doc. MUDr. Ivan Solovič, CSc. doc. MUDr. Ladislav Chovan, CSc., mim.prof. predseda Slovenskej pneumologickej a ftizeologickej spoločnosti. 28

29 Visual Culture and Public Health Posters U.S. National Library of Medicine losis.html 29

30 Ďakujem za pozornosť. 30

Σχετικά έγγραφα

TBC pľúc najrozšírenejšie infekčné ochorenie u nás a vo svete. Prof. MUDr. Eva Rozborilová, CSc.

TBC pľúc najrozšírenejšie infekčné ochorenie u nás a vo svete Prof. MUDr. Eva Rozborilová, CSc. Hlavný zámer národných programov detekovať a liečiť tuberkulóznu infekciu identifikovať latentnú tuberkulóznu