Η ΕΡΓΩΔΗ ΑΝΑΠΝΟΗ ΕΠΑΓΕΙ ΣΗΝ ΕΚΦΡΑΗ ΣΩΝ ΜΕΣΑΛΛΟΠΡΩΣΕΪΝΑΩΝ -9 ΚΑΙ -12 ΣΟΝ ΠΝΕΤΜΟΝΑ.

Transcript

1 Πανεπιστήμιο Αθηνών 21 ου Πανελλήνιο Πνευμονολογικό υνζδριο Η ΕΡΓΩΔΗ ΑΝΑΠΝΟΗ ΕΠΑΓΕΙ ΣΗΝ ΕΚΦΡΑΗ ΣΩΝ ΜΕΣΑΛΛΟΠΡΩΣΕΪΝΑΩΝ -9 ΚΑΙ -12 ΣΟΝ ΠΝΕΤΜΟΝΑ. Σουμπανάκησ Δημήτρησ Πνευμονολογικό Σμήμα, Α Κλινική Εντατικήσ Θεραπείασ, Θεραπευτήριο «ο Ευαγγελιςμόσ»

2 Η εργϊδησ αναπνοή... Άσθμα, 300 εθαηοκκύρηα αζζελείς παγθοζκίφς The Burden of Asthma, Global Initiative for Asthma, 2011 Χ.Α.Π., ηρίηε πηο ζστλή αηηία ζαλάηοσ ηο 2020 The Burden of COPD, Global Initiative for Chronic Obstructive Pulmonary Disease 2011 Ζντονη φςπαςη Ειςπνευςτικϊν Μυϊν Τψηλζσ Αρνητικζσ Ενδοθωρακικζσ Πιζςεισ

3 Μεταλλοπρωτεϊνάςεσ... Αυξημζνα επίπεδα ςε αποφρακτικζσ νόςουσ του αναπνευςτικοφ (ΜΜP-9 και ΜΜP-12) Matrix Metalloproteinases in Lung: Multiple, Multifarious and Multifaceted, Physiol Rev, 2007 Protease Antiprotease Imbalance, COPD, NEJM, 2000 Σο μηχανικό ερζθιςμα αυξάνει την ζκφραςη των MMPs ςε κυτταρικοφσ πληθυςμοφσ του πνεφμονα Hasaneen et al, FASEB, 2005

4 κοπόσ Η μελζτη τησ ζκφραςησ των MMP-9 και -12 ςτον πνεφμονα ζε πειραματικό μοντζλο εργϊδουσ αναπνοήσ

5 Μεθοδολογία Μοληέιο Εηζπλοής Μέζα Από Αληίζηαζε (Inspiratory Resistive Loading Model - RB) Vassilakopoulos T et al, AJRCCM, 2004, Toumpanakis D et al, AJRCCM, 2010 Θεισθοί Wistar Επίκσες (8-12 εβδοκάδφλ, g) Αλαηζζεηοποίεζε, ηρατεηοζηοκία, ασζόρκεηε αλαπλοή κέζα από βαιβίδα εηζπλοής εθπλοής Μέηρεζε κεγίζηες εηζπλεσζηηθής πίεζες (Pi,max) θαη προζζήθε αληίζηαζες ζηελ εηζπλεσζηηθή οδό ώζηε Pi / Pi,max = 0.5. Παροτή 100% Ο 2 Ζώα ποσ εηζέπλεαλ ειεύζερα 100% Ο 2 ρξεζηκνπνηνύληαη σο κάξηπξεο (control) 3 θαη 6 ώρες RB Γεμηόο Πλεύκνλαο: Βξνγρνθπςειηδηθό Έθπιπκα [νιηθόο αξηζκόο θπηηάξσλ ππνπιεζπζκνί, πξσηετληθά επίπεδα θιεγκνλσδώλ θπηηαξνθηλώλ (ELISA)], ΜΜP-9 επίπεδα (δπκνγξαθία) Αξηζηεξόο Πλεύκνλαο: Ηζηνινγηθή αλαδήηεζε πλεπκνληθήο βιάβεο, Έθθξαζε ΜΜP-9, MMP-12 (αλνζντζηνρεκεία) Αποκόλφζε θσζηοιογηθώλ θσυειηδηθώλ καθροθάγφλ Επώαζε κε βρογτοθσυειηδηθό Έθπισκα από δώα ποσ σπεβιήζεζαλ ζε εργώδε αλαπλοή ΜΜP-9 επίπεδα ζηο σπερθείκελο ηες θσηηαροθαιιηέργεηας (δσκογραθία)

6 Αποτελζςματα

7 Differential Cell Count in BAL fluid (*10^4/mL) IL-6 in BAL fluid (pg/ml) Total Lung Injury Score IL-1β in BAL fluid (pg/ml) Ζ εξγώδεο αλαπλνή επάγεη πλεπκνληθή θιεγκνλή θαη βιάβε *, # * * ctr 3hrs RB 6hrs RB ctr 3hrs RB 6hrs RB * ctr 3hrs RB 6hrs RB * *, # macrophages neutrophils ctr 3hrs RB 6hrs RB * p <0.05 to control, # p<0.05 to 3hrs RB, n=5 per group

8 MMP-9 gelatinolytic activity of lung tissue samples (a.u.) Ζ εξγώδεο αλαπλνή απμάλεη ηα επίπεδα ηεο MMP-9 ζηνλ πλεύκνλα Επκνγξαθία Αλνζντζηνρεκεία ctr 3hrs RB 6hrs RB MMP-9 92 kda 6hrs RB *, # x400 ctr 3hrs RB 6hrs RB Representative figure of gelatin zymography of lung tissue samples following 3 and 6hrs of RB. White bands denote gelatinolytic activity. * p <0.05 to control, # p<0.05 to 3hrs RB, n=6 per group Representative figure of MMP-9 immunohistochemistry following 6 hrs of RB. MMP-9 is mainly located at alveolar macrophages and alveolar epithelial cells to a lesser degree *IHC also revealed increased MMP-9 at 3hrs after RB.

9 Απμεκέλα επίπεδα MMP-12 ζηνλ πλεύκνλα κεηά από εξγώδε αλαπλνή control 3hrs IRB x400 x400 6hrs IRB x400 Representative figures of MMP-12 immunohistochemistry. Brown denotes the presence of MMP-12. MMP12 is mainly located at alveolar macrophages and to a lesser degree at alveolar epithelial cells both after 3 and 6 hrs of IRB

10 MMP-9 gelatinolytic activity (a.u.) Τν βξνγρνθπςειηδηθό έθπιπκα από δώα πνπ ππεβιήζεζαλ ζε εξγώδε αλαπλνή επάγεη ηελ έθθξαζε ηεο MMP-9 από θπζηνινγηθά θπςειηδηθά καθξνθάγα Culture medium plus 5% of BAL fluid 10^5 alveolar macrophages plus 5% of BAL fluid ctr 3hrs RB 6hrs RB ctr 3hrs RB 6hrs RB MMP-9 92 kda *, # Representative figure of gelatin zymograpgy of cell culture supernatants (three experiments) * p<0.05 to ctr, 3hrsRB # p<0.05 to culture medium + BAL 6hrs RB ctr 3hrs RB 6hrs RB ctr 3hrs RB 6hrs RB Culture medium plus 5% of BAL fluid 10^5 alveolar macrophages Plus 5% of BAL fluid

11 Σπκπέξαζκα Ζ εξγώδεο αλαπλνή κε ηελ κνξθή απμεκέλσλ εηζπλεπζηηθώλ αληηζηάζεσλ επάγεη ηελ έθθξαζε ησλ MΜP-9 θαη -12 ζηνλ πλεύκνλα, ζε πξνεγνπκέλσο πγηείο επίκπεο

12 Πνευμονολογικό Σμήμα, Α Κλινική Εντατικήσ Θεραπείασ, Νοςοκομείο «ο Ευαγγελιςμόσ» Πανεπιστήμιο Αθηνών Ίδρυμα Θώραξ Όλγα Νούσσια Ιωάννα Σιγάλα Τατιάνα Μιχαηλίδου Βασιλική Καραβάνα Σπλεξγάηεο Θενράξεο Σηακάηηνο Δξγαζηήξην Παζνινγηθήο Αλαηνκηθήο, Παλεπηζηήκην Αζελώλ Θεόδσξνο Βαζηιαθόπνπινο Δπραξηζηώ...