Δ Μαιευτική-Γυναικολογική Κλινική, Ιατρικό Τμήμα, Αριςτοτέλειο Πανεπιςτήμιο Θεςςαλονίκησ, Ιπποκράτειο Γεν. Νοςοκομείο Θεςςαλονίκησ 2

Transcript

1 ΤΓΚΡΙΗ ΑΠΟΣΕΛΕΜΑΣΙΚΟΣΗΣΑ ΚΤΣΣΑΡΟΛΟΓΙΑ, HPV DNA TESTING ΚΑΙ ΑΝΙΧΝΕΤΗ ΣΗ HPV ΠΡΩΣΕΙΝΗ Ε7 Ω ΑΡΧΙΚΩΝ ΜΕΘΟΔΩΝ ΠΛΗΘΤΜΙΑΚΟΤ ΕΛΕΓΧΟΤ ΓΙΑ ΣΟΝ ΚΑΡΚΙΝΟ ΣΟΤ ΣΡΑΧΗΛΟΤ ΣΗ ΜΗΣΡΑ. ΑΠΟΣΕΛΕΜΑΣΑ ΣΗ ΜΕΛΕΣΗ PIPAVIR Κίμων Χατηθςταματίου 1, Andreas Kaufmann 2, Pidder Janssen-Duerr 3, Αλκμινθ Σκεντζρθ 4, Ειρινθ Λζκκα 5, Νικόλαοσ Μαγκλαβζρασ 5, Σταματία Αγγελίδου 6, Ευαγγελία Κατςίκθ 6, Oliver Boecher 7, Isabel Koch 7, Achim Schneider 2, Ελευκζριοσ Αγγελισ 8, Θεόδωροσ Μωυςιάδθσ 9, Θεόδωροσ Αγοραςτόσ 1 1 Δ Μαιευτική-Γυναικολογική Κλινική, Ιατρικό Τμήμα, Αριςτοτέλειο Πανεπιςτήμιο Θεςςαλονίκησ, Ιπποκράτειο Γεν. Νοςοκομείο Θεςςαλονίκησ 2 Εργαςτήριο Ογκολογικήσ Ανοςολογίασ, Γυναικολογική Κλινική, Πανεπιςτημιακό Νοςοκομείο Charite Benjamin Franklin, Βερολίνο, Γερμανία 3 Ινςτιτοφτο Ιατροβιολογικών Ερευνών, Πανεπιςτήμιο Innsbruck, Αυςτρία 4 Κυτταρολογικό Εργαςτήριο, Ιπποκράτειο Γεν. Νοςοκομείο Θεςςαλονίκησ 5 Εργαςτήριο Ιατρικήσ Πληροφορικήσ, Ιατρικό Τμήμα, Αριςτοτέλειο Πανεπιςτήμιο Θεςςαλονίκησ 6 Παθολογοανατομικό Εργαςτήριο, Ιπποκράτειο Γεν. Νοςοκομείο Θεςςαλονίκησ 7 Εταιρεία Mikrogen, Μόναχο, Γερμανία 8 Τμήμα Πληροφορικήσ, Σχολή Θετικών Επιςτημών, Αριςτοτέλειο Πανεπιςτήμιο Θεςςαλονίκησ 9 Ινςτιτοφτο Εφαρμοςμένων Βιοεπιςτημών, Εθνικό Κέντρο Ζρευνασ και Τεχνολογικήσ Ανάπτυξησ, Θεςςαλονίκη

2 Χρθματοδότθςθ μελζτθσ PIPAVIR: Η μελζτθ χρθματοδοτικθκε από τθν Ευρωπαϊκι Ζνωςθ (EU 7 th framework programme, FP7-HEALTH )

3 Σκοπόσ H διερεφνθςθ τθσ αποτελεςματικότθτασ Τθσ κυτταρολογίασ Του HPV DNA testing Τθσ ανίχνευςθσ τθσ Ε7 ογκοπρωτεΐνθσ του HPV ωσ αρχικϊν μεκόδων πλθκυςμιακοφ ελζγχου για τθν πρόλθψθ του καρκίνου του τραχιλου τθσ μιτρασ.

4 Υλικό Μζκοδοι (1) Υπο-ανάλυςθ των δεδομζνων τθσ Ευρωπαϊκισ μελζτθσ PIPAVIR για τθν ανίχνευςθ τθσ E7 πρωτεΐνθσ του HPV ςτα πλαίςια τθσ πρόλθψθσ του καρκίνου του τραχιλου τθσ μιτρασ. Σόποσ διεξαγωγισ τθσ μελζτθσ: Θεςςαλονίκθ, Βερολίνο, Μόναχο, Ίνςμπρουκ υμμετζχουςεσ: Γυναίκεσ ετϊν που υποβάλλονται ςε λιψθ κολποτραχθλικοφ επιχρίςματοσ

5 Υλικό Μζκοδοι (2) 1258 γυναίκεσ εξετάςτθκαν μεταξφ Φεβρουαρίου 2013 και Απριλίου Η λιψθ του κολποτραχθλικοφ δείγματοσ ζγινε με: «Cervex Brush», Rovers Medical Devices B.V. Oss, The Netherlands «Cyto Brush», CooperSurgical, Inc. 75 Corporate Drive Trumbull, CT USA

6 Υλικό Μζκοδοι (3) Η κυτταρολογικι εξζταςθ των ςυλλεχκζντων δειγμάτων ζγινε με τθν μζκοδο κυτταρολογίασ υγρισ φάςθσ (ThinPrep, Hologic, Inc, Marlborough, MA, United States)

7 Υλικό Μζκοδοι (4) PCR - HPV Multiplex Genotyping Η τυποποίθςθ του HPV DNA ζγινε ςτο Εργαςτιριο Ογκοανοςολογίασ του Νοςοκομείου Charite του Πανεπιςτθμίου του Βερολίνου (CHARITE-UNIVERSITÄTSMEDIZIN Berlin Hospital, Germany Το ςφςτθμα MPG περιλαμβάνει ζνα ευρφ φάςμα GP5+/GP6+ προαγωγζων τθσ PCR ςε ςυνδυαςμό με ειδικοφσ για τον τφπο ανιχνευτζσ και εμφανίηει υψθλι ευαιςκθςία για τθν ανίχνευςθ πολλαπλϊν τφπων (χαμθλοφ ι υψθλοφ κινδφνου) του HPV.

8 Υλικό Μζκοδοι (5) Ανίχνευςθ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ του HPV με τθν μζκοδο Sandwich ELISA =δοχείο well ELISA = Αντίςωμα που επικαλφπτει το «πθγάδι» τθσ πλακζτασ ELISA και δεςμεφει μθ ειδικά τθν Ε7 =Ε7 πρωτεΐνθ του HPV = Αντίςωμα που δεςμεφει ειδικά τθν Ε7 ςυγκεκριμζνων τφπων του HPV =Αντίςωμα εναντίον του Fc κλάςματοσ των ανκρϊπινων ανοςοςφαιρινϊν =Ζνηυμο ςυνδεδεμζνο με το αντίςωμα εναντίον των ανοςοςφαιρινϊν =Υπόςτρωμα ενηφμου

9 Υλικό Μζκοδοι (5) Ανίχνευςθ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ του HPV με τθν μζκοδο Sandwich ELISA =δοχείο well ELISA = Αντίςωμα που επικαλφπτει το «πθγάδι» τθσ πλακζτασ ELISA και δεςμεφει μθ ειδικά τθν Ε7 =Ε7 πρωτεΐνθ του HPV = Αντίςωμα που δεςμεφει ειδικά τθν Ε7 ςυγκεκριμζνων τφπων του HPV =Αντίςωμα εναντίον του Fc κλάςματοσ των ανκρϊπινων ανοςοςφαιρινϊν =Ζνηυμο ςυνδεδεμζνο με το αντίςωμα εναντίον των ανοςοςφαιρινϊν =Υπόςτρωμα ενηφμου

10 Υλικό Μζκοδοι (5) Ανίχνευςθ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ του HPV με τθν μζκοδο Sandwich ELISA =δοχείο well ELISA = Αντίςωμα που επικαλφπτει το «πθγάδι» τθσ πλακζτασ ELISA και δεςμεφει μθ ειδικά τθν Ε7 =Ε7 πρωτεΐνθ του HPV = Αντίςωμα που δεςμεφει ειδικά τθν Ε7 ςυγκεκριμζνων τφπων του HPV =Αντίςωμα εναντίον του Fc κλάςματοσ των ανκρϊπινων ανοςοςφαιρινϊν =Ζνηυμο ςυνδεδεμζνο με το αντίςωμα εναντίον των ανοςοςφαιρινϊν =Υπόςτρωμα ενηφμου =Ενεργοποιθμζνο υπόςτρωμα ενηφμου. Εκπζμπει ακτινοβολία ανιχνευόμενθ με το φαςματοςκόπιο

11 Υλικό Μζκοδοι (5) τρατθγικζσ ανίχνευςθσ Ε7 Σφςτθμα τριϊν wells well 1: ανίχνευςθ των 16, 18, και 45 E7 well 2: ανίχνευςθ των 39, 51, 56, και 59 E7 well 3: ανίχνευςθ των 16, 31, 33, 35, 52, και 58 E7 Σφςτθμα δφο wells Screening well: ανίχνευςθ 12 hr E7 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, and 59 E7) Well 16, 18, and 45 E7

12 Διάγραμμα ροισ πλθκυςμοφ τθσ μελζτθσ -4 Δείγματα με ανεπαρκζσ PAP test 1258 Κατάλλθλα δείγματα 1254 Δείγματα με κατάλλθλο PAP, HPV test και Ε7 89 Δείγματα με ASCUS ι χειρότερο 1165 Δείγματα με αρνθτικό PAP test 49 HR-HPV κετικά 40 HR-HPV αρνθτικά 223 HR-HPV κετικά 942 HR-HPV αρνθτικά -10 Δείγματα Γυναικϊν που αρνικθκαν κολποςκόπθςθ 38 Αρνθτικζσ βιοψίεσ 83 Βιοψίεσ 302 Κολποςκοπιςεισ E7 κετικά 20 CIN 1 13 CIN 2 25 HR-HPV κετικά 12 CIN 3 13 ASCUS ι χειρότερο

13 Δείκτεσ διαγνωςτικισ ακρίβειασ κυτταρολογίασ, HPV DNA testing και ανίχνευςθσ τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ για τθν ανίχνευςθ CIN2+ Sensitivity Specificity PPV NPV Cytology 13/25 52,0% (31,3-72,2%) 1153/ ,8% (92,3-95,1%) 13/89 14,6% (8,0-23,7%) 1153/ ,0% (98,2-99,5%) HR HPV 25/25 100,0% (86,3-100,0%) 982/ ,1% (77,7-82,3%) 25/269 9,3 (6,1-13,4%) 982/ ,0% (99,6-100,0%) Well1 22/25 88,0% (68,8-97,4%) 652/ ,0 (50,2-55,9%) 22/599 3,7% (2,3-5,5%) 652/665 98,0% (96,7-98,9%) Well2 19/25 76,0% (54,9-90,6%) 732/ ,6% (56,7-62,3%) 19/516 3,7% (2,2-5,7%) 732/738 99,2% (98,2-99,7%) Well3 19/25 76,0% (54,9-90,6%) 877/ ,3% (68,7-73,9%) 19/371 5,1% (3,1-7,9%) 877/883 99,3% (98,5-99,7%) Screening well 23/25 92,0% (74,0-99,0%) 531/ ,2% (40,4-46,0%) 23/721 3,2% (2,0-4,7%) 531/533 99,6% (98,6-99,9%) E7_16_18_45 well 18/25 72,0% (50,6-87,9%) 880/ ,6% (69,0-74,1%) 18/367 4,9% (2,9-7,6%) 880/887 99,2% (98,4-99,7%)

14 Συμπεράςματα Η ευαιςκθςία του HPV DNA test είναι μεγαλφτερθ από εκείνθ τθσ κυτταρολογίασ αλλά και τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ. Η ειδικότθτα του HPV DNA testing είναι μικρότερθ από τθσ κυτταρολογίασ αλλά μεγαλφτερθ από τθσ Ε7 πρωτεΐνθσ. Η αρνθτικι προγνωςτικι αξία είναι άνω του 98% για όλα τα tests θμαντικότερο μζγεκοσ για τον αρχικό προλθπτικό ζλεγχο είναι θ ευαιςκθςία Σο HPV DNA testing είναι θ καλφτερθ μζκοδοσ για αρχικό ζλεγχο εναντίνο του καρκίνου του τραχιλου τθσ μιτρασ Η κετικι προγνωςτικι αξία είναι μεγαλφτερθ για τθν κυτταρολογία. Ωςτόςο χρειάηεται μία μζκοδοσ διαλογισ των HPV κετικών γυναικών ώςτε να αντιςτακμίηεται θ χαμθλι ειδικότθτα του HPV test

15 ... Ευχαριςτώ για τθν προςοχι ςασ.