Γεωπονικό Πανεπιστήµιο Αθηνών Τµήµα Επιστήµης και Τεχνολογίας Τροφίµων Εργαστήριο Ποιοτικού Ελέγχου και Υγιεινής Τροφίµων Προσδιορισµός Ποσοστών Ανάκτησης Πέντε Οργανοφωσφορικών Φυτοφαρµάκων σε Έτοιµα Γεύµατα Παιδικών Τροφών Χαµηλής Λιποπεριεκτικότητας Γεωργακόπουλος Π., Νικολακοπούλου Ε., Ματαράγκας Μ., Αθανασόπουλος Π., ροσινός Ε.Χ. και Σκανδάµης Π. Θεσσαλονίκη 2008
Εισαγωγή (1) Βρεφική ιατροφή & ΟΡs Τι προκαλούν; βραχυπρόθεσµη ασθένεια (π.χ. αλλεργία) µακροπρόθεσµη ζηµιά στον εγκέφαλο & Ν.Σ. χρόνια τοξικότητα εµφάνιση διάφορων µορφών καρκίνου δυσλειτουργία του Α.Σ. MRLs : ανώτατη συγκέντρωση µιας ουσίας σε ένα τρόφιµο Οδηγία 99/39/EC 0,01 ppm Οδηγία 2003/13/EC 0,01 ppm
Εισαγωγή (2) Πολύ-υπολειµµατικές µέθοδοι - QuEChERS Σύγχρονη MRM: : ταχεία, απλή, σχετικά φθηνή µε ακρίβεια, ευαισθησία και εκλεκτικότητα QuEChERS: Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe σε φρούτα και λαχανικά (Anastassiades et al., 2003) Σε ποικίλα υποστρώµατα: γάλα, αυγά, ελιές, παιδικές τροφές (0.05-2.8% λίπους) (Lehotay( et al., 2005 Leandro et al., 2005)
Αντικείµενο Σκοπός εν έχει διευκρινισθεί επακριβώς η ποσότητα προσροφητών (π.χ. C 18 ) για αποτελεσµατικό καθαρισµό των εκχυλισµάτων Ικανότητα προσδιορισµού υπολειµµάτων 5 OPs σε παιδικές τροφές λιποπεριεκτικότητας 3.2-4.4% µε διαφορετικές ποσότητες C 18 (200/300 mg)
Υλικά και Μέθοδοι(1) α. Υποστρώµατα 3.2% λίπος 4.4% λίπος
Υλικά και Μέθοδοι(2) OPs diazinon β. ραστικές ουσίες ΟΜΗ logk ow 3.3 w.s (mg/l) 40 chlorpyrifos 4.69 1.4 fenitrothion 3.43 30 methidathion 2.2 200 dimethoate 0.7 24000
Υλικά και Μέθοδοι(3) γ. Προετοιµασία Εκχυλισµάτων Ζύγιση 10 ± 0,1g υποστρώµατος Φόρτιση υποστρώµατος Προσθήκη 10 ml ACN Φυγοκέντριση για 5 (4500 στροφές/min min) 4 g MgSO 4 & 1 g NaCl
Υλικά και Μέθοδοι(3) γ. Προετοιµασία Εκχυλισµάτων 1 ml υπερκείµενο eppendorf µε 50mg PSA, 150mg Mg 2 SO 4 & 200 ή 300 mg C 18 Ανασύσταση Εξάτµιση µέχρι ξηρού (40 ºC) º Φυγοκέντριση για 2 (5000 στροφές/min min)
Όργανο Ανάλυσης Υλικά και Μέθοδοι(4) δ. Χρωµατογραφική Ανάλυση GC-NPD (300 o C) Εισαγωγέας Στήλη διαχωρισµού Προ-στήλη Φέρον αέριο split/splitless (260 o C) Rtx -5ms 30m x 0.32mm i.d. x 0.25 µm df Rtx 5m x 0.32mm id He (8 ml/min) Πρόγραµµα κλιβάνου Temperature ( o C) 300 200 100 0 0 1 5 25 27 45 Time (min)
Υλικά και Μέθοδοι(5) ε. Στατιστική Ανάλυση R(%)=100* Εµβαδόν Κορυφής στο Εκχύλισµα (n=3) Εµβαδόν Κορυφής στο Πρότυπο RSD(%)=100* SD (3 ανεξάρτητες επαναλήψεις) Μέσος Όρος ANOVA General linear model Tuckey s method (επίπεδο σηµαντικότητας 95%)
Αποτελέσµατα Συζήτηση (1) Έλεγχος Απόκρισης NPD Γραµµική απόκριση στο εύρος 0.01-0.5mg/kg 0.5mg/kg (R 2 >0.99) 200000 180000 160000 Area 140000 120000 100000 80000 60000 40000 20000 0 y = 385781x - 145,99 R 2 = 0,9997 y = 80650x + 411,47 R 2 = 0,9932 y = 74922x - 60,134 R 2 = 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 C (mg/kg) diazinon fenitrothion chlorpyrifos
Αποτελέσµατα Συζήτηση (2) Εµβαδά κορυφών συνεκχυλισµάτων σε «τυφλά εκχυλίσµατα» στην π.τ. µε µοσχάρι 2500 2000 Area 1500 1000 500 0 19,8 22 24 24,4 24,6 tr (min) 300mg 200mg 300300 mg C 18 «καθαρά» χρωµατογραφήµατα
Αποτελέσµατα Συζήτηση (3) Ποσοστά Ανάκτησης (R%)( στην π.τ. µε κοτόπουλο % Ποσοστό Ανάκτησης 140 120 100 80 60 40 20 0 diazinon fenitrothion chlorpyrifos methidathion dimethoate 140 120 100 80 60 40 20 0 diazinon fenitrothion chlorpyrifos methidathion dimethoate 300 mg C 18 200 mg C 18 Ποσοστά ανάκτησης και Σχετικές Τυπικές Αποκλίσεις (RSDs %) των δραστικών ουσιών στους συνδυασµούς υποστρωµάτων ποσότητας C 18 0.2 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.05 mg/kg και 0.01 mg/kg
140 120 100 80 60 40 20 0 Αποτελέσµατα Συζήτηση (4) Ποσοστά Ανάκτησης (R%) ( στην π.τ. µε µοσχάρι 140 120 100 80 60 40 20 0 diazinon fenitrothion chlorpyrifos methidathion dimethoate diazinon fenitrothion chlorpyrifos methidathion dimethoate 300 mg C 18 200 mg C 18 0.2 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.05 mg/kg και 0.01 mg/kg Ποσοστό Ανάκτησης (%)
Αποτελέσµατα Συζήτηση (5) Ποσοστά Ανάκτησης (R%)( στο επιδόρπιο γιαούρτης Ποσοστό Ανάκτησης (%) 160 140 120 100 80 60 40 20 0 160 140 120 100 80 60 40 20 0 diazinon fenitrothion chlorpyrifos methidathion dimethoate diazinon fenitrothion chlorpyrifos methidathion dimethoate ραστικές ουσίες 300 mg C 18 200 mg C 18 0.2 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.05 mg/kg και 0.01 mg/kg
Αποτελέσµατα Συζήτηση (6) Που οφείλεται αυτή η συµπεριφορά; 1. Πολικότητα & Λιποδιαλυτότητα Dimethoate: : πολικό και µη- λιποδιαλυτό Chlorpyrifos: µη-πολικό και λιποδιαλυτό >R% <R% 2. Επίπεδο φόρτισης min επίπεδο φόρτισης > R% 3. Υπόστρωµα γιαούρτι ( µη-πτητικές ουσίες) R% & συνεκχυλίσµατα
Συµπεράσµατα Η µέθοδος ανάλυσης έδωσε ικανοποιητικά αποτελέσµατα στα γεύµατα παιδικών τροφών χαµηλής λιποπεριεκτικότητας. Οι διαφορές στα ποσοστά ανάκτησης και τον αριθµό των συνεκχυλισµάτων στα δείγµατα µε διαφορετική ποσότητα C 18 υποδηλώνουν την αναγκαιότητα περαιτέρω έρευνας στον προσδιορισµό της άριστης ποσότητας για τη µείωση των διαφορών αυτών.
Μελλοντική Έρευνα Η εφαρµογή διαφορετικών ποσοτήτων C 18 (100-300 300mg) σε υποστρώµατα παιδικών τροφών λιποπεριεκτικότητας 2.0% έδειξε ότι ποσότητες 180-210 210mg είναι κατάλληλες για min συνεκχυλίσµατα και R(%)=70-110%.
ΕΥΧΑΡΙΣΤΩ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΡΟΣΟΧΗ ΣΑΣ!