Folic Acid. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Folic Acid For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Folic Acid English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of folic acid in serum, heparinized plasma or ascorbic acid-treated whole blood, as an aid in clinical diagnosis and treatment of anemia. Catalog Number: L2KFO2 (200 tests), L2KFO6 (600 tests) Test Code: FOL Color: Orange Summary and Explanation Folic acid (folate) and vitamin B12 are nutrients essential to hematopoiesis. 1 Megaloblastic anemia is almost always due to lack of one of these two vitamins. 1 Circulating folate levels are usually normal or elevated in vitamin B12 deficiency, but red cell folate levels are frequently low in this condition. 2 Folate deficiency is commonly encountered as a result of dietary deficiency (as in alcoholism) or increased demand for this vitamin (as in pregnancy). 1,3 Unlike vitamin B12, folate is a heat-labile vitamin susceptible to loss by prolonged cooking. Accordingly, the prevalence of folate deficiency exhibits major demographic variations, apparently reflecting differences in dietary and culinary habits. 4 Circulating folate levels, being strongly influenced by recent intake, are unreliable as an index to tissue stores. 2,5,6 Thus, folate levels measured in serum or plasma may be normal in the face of folate deficiency. Conversely, circulating levels may be low long before tissue stores have been exhausted. 2,6 Accordingly, it is important to measure red cell folate levels whenever serum or plasma levels are measured. 5,7,8 Principle of the Procedure Competitive immunoassay. The IMMULITE 2000 performs a 2-cycle, on-board sample treatment of patient serum, plasma or ascorbic acid-treated whole blood (for measuring red cell folate). Sample, along with ligand-labeled folic acid, is first treated with dithiothreitol (DTT), in a reaction tube containing no bead, and then with sodium hydroxide/potassium cyanide (NaOH/KCN), in a second treatment cycle. The treated sample is transferred to a second reaction tube containing a murine anti-folate binding protein antibody-coated polystyrene bead and folate binding protein (FBP). During a 30-minute incubation, folic acid released from binding proteins in the patient sample competes with ligand-labeled folic acid for binding with FBP. The bead is washed and alkaline phosphatase labeled anti-ligand is added. During the final 30-minute incubation, the alkaline phosphatase labeled anti-ligand binds to the ligand-labeled folate that was bound to the bead during the first incubation. The unbound enzyme conjugate is removed by centrifugal wash. Substrate is added and the procedure continues as described for typical immunoassays in the Operator's Manual. Incubation Cycles: 4 30 minutes. 2 test positions per assay: 1 sample treatment cup; 1 immunoreaction cup. Cycles 1 and 2: Alkaline denaturation of endogenous binding proteins. Cycles 3 and 4: Protein binding and Immunoreaction. Folic Acid/Vitamin B12 Panel: To achieve maximum assay throughput, patient samples for folic acid and vitamin B12 should be run alternately, beginning with a folic acid sample. See Operator's Manual on creating a panel. 2 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

3 Specimen Collection Patient must be in a fasting state. 10 For whole blood and red cell folic acid determinations, use fresh heparinized or EDTA whole blood. The patient's hematocrit must be known in order to translate whole blood into red cell folic acid results, which are expressed as nanograms per milliliter (ng/ml) of packed red blood cells. Moreover, to calculate the red cell folic acid result exactly, the patient's serum folic acid level must also be known. EDTA plasma should not be used as a sample type. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed serum samples are inappropriate for analysis. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Folic Acid has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Whole Blood (Red Cell Folic Acid) Volume Required: 100 µl fresh heparinized or EDTA whole blood (for preparation of hemolysates). Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. CAUTION! POTENTIAL BIOHAZARD Contains human source material. Each donation of human blood or blood component was tested by FDA-approved methods for the presence of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and type 2 (HIV-2) as well as for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibody to hepatitis C virus (HCV). The test results were negative (not repeatedly reactive). No test offers complete assurance that these or other infectious agents are absent; this material should be handled using good laboratory practices and universal precautions CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. Serum or Heparinized Plasma Volume Required: 50 µl serum or plasma Storage: 8 hours at 2 8 C, or 6 8 weeks at 20 C. 12 Avoid excessive exposure to direct light. IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 3

4 H314, H412 P280, P304 + P340 + P310, P301 + P310 + P331, P303 + P361 + P353 + P310, P305 + P310, P273, P501 Danger! Causes severe skin burns and eye damage. Harmful to aquatic life with long lasting effects. Wear protective gloves/ protective clothing/eye protection/face protection. IF INHALED: Remove victim to fresh air and keep at rest in a position comfortable for breathing. Immediately call a POISON CENTER or doctor/physician. IF SWALLOWED: Immediately call a POISON CENTER or doctor/ physician. Do NOT induce vomiting. IF ON SKIN (or hair): Remove/Take off immediately all contaminated clothing. Rinse skin with water/ shower. Immediately call a POISON CENTER or doctor/physician. IF IN EYES: Immediately call a POISON CENTER or doctor/physician. Avoid release to the environment. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: sodium hydroxide; Folic Acid A Reagent Wedge Contains: 2-methyl-2Hisothiazol-3-one; Folic Acid Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chloramphenicol, at concentrations less than 0.1 g/dl has been added as a preservative. Chloramphenicol is known to cause cancer; this disclosure is required by the state of California. NaOH/KCN: Solution contains cyanide. Avoid all bodily contact. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Folic Acid Bead Pack (L2FO12) With barcode. 200 beads, coated with murine monoclonal anti-folic acid binding protein. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KFO2: 1 pack L2KFO6: 3 packs Folic Acid A Reagent Wedge (L2FOA2) With barcodes. Wedges (labeled A ), each containing 15 ml dithiothreitol (DTT) in buffer, 18.1 ml ligand-labeled folic acid in buffer, and 15 ml NaOH/KCN (NHCN) in buffer, with preservative. Prior to opening, stable at 2 8 C until expiration date. After opening, stable at 2 8 C for 30 days. L2KFO2: 3 wedges L2KFO6: 6 wedges Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Folic Acid D Reagent Wedge (L2FOD2) With barcodes. Wedges (labeled D ) containing 11.5 ml folate binding protein in buffer; 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to anti-ligand in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KFO2: 1 wedge L2KFO6: 3 wedges Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Folic Acid Adjustors (LFOL, LFOH) Two vials (Low and High) of lyophilized folic acid in a human protein-based matrix, with preservative. Reconstitute each vial with 3.0 ml sterile distilled water, and mix by gentle inversion. Stable at 2 8 C for 30 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KFO2: 2 sets L2KFO6: 2 sets 4 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

5 Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Vitamin B12/Folic Acid Sample Diluent (L2FVZ) For on-board dilution of high serum samples. 25 ml of concentrated (ready-to-use), vitamin B12/folic acid-free human protein-based matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2FVZ: 3 labels Ascorbic Acid: available lyophilized from Siemens Healthcare Diagnostics (part number: ). Required only for whole blood and red cell folic acid determinations. Stable at 2 8 C unopened until expiration date on the vial. A 0.5% solution must be prepared fresh, immediately before use. Reconstitute each Ascorbic Acid vial with 30 ml distilled or deionized water. Let the reconstituted mixture stand at room temperature (15 28 C) for about 15 minutes until fully dissolved, then transfer the vial contents to a separate container and add another 30 ml of distilled water. (Sodium ascorbate is not a suitable alternative.) L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Both Reagent Wedge A (L2FOA2) and Reagent Wedge D (L2FOD2) must be loaded onto the instrument prior to assay. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks Quality Control Samples: Follow government regulations or accreditation requirements for quality control frequency. Use controls or serum pools with at least two levels (low and high) of folic acid. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme. Whole Blood and Red Cell Folic Acid Determination Preparation of Hemolysates: Collect the whole blood sample and determine the hematocrit. Lyse the cells in the sample by preparing a 1-in-26 dilution of the sample (fully suspended) in freshly prepared 0.5% ascorbic acid solution (i.e., mix 40 µl of whole blood with 1000 µl of 0.5% ascorbic acid). Do not use sodium ascorbate. 9 Vortex and let stand for 180 minutes at room temperature (15 28 C) in the dark. 10 Storage of Hemolysates: 3 hours at 2 8 C, or 2 weeks at 20 C. 10,11 Avoid excessive exposure to direct light. Following the incubation period, place the treated patient sample onto a sample rack. When ordering Folic Acid for hemolysates, you must order the test as a manual dilution ( 26, to account for the ascorbic acid treatment). See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for Dilution of samples and Manual Dilutions. IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 5

6 Calculations Whole Blood Results Whole blood folic acid results will be displayed with a manual dilution factor applied by entering 26 into the Manual Dilution button located in the WORKLIST menu. (Note: The IMMULITE 2000 accounts for the manual 1-in-26 dilution made with ascorbic acid.) Red Cell Results For an approximate measure of the packed red cell folic acid, in ng/ml, multiply the whole blood folic acid concentration (R) by 100/H, where H is the hematocrit in percent: Red Cell Folic Acid R (100 / H) Strictly speaking, the serum folic acid contribution should be subtracted from the whole blood folic acid concentration before multiplying by 100/H. Using the patient's serum folic acid level S, the exact equation is: Red Cell Folic Acid = (R [S (100 H) / 100]) (100 / H) The term in the square brackets is, however, in most cases so small compared to the term R that it may be justifiably neglected. Expected Values Because folic acid levels are strongly influenced by diet and dietary supplementation, population-based reference limits can show marked demographic differences. In the United States, for example, fortification of enriched grain products, as required by the Food and Drug Administration since 1996, has led to an estimated doubling of the mean plasma folate level among subjects not using vitamin supplements, 13 and a decrease in the prevalence of low folate levels, i.e. levels below 3 ng/ml (7 nmol/l). 13 Fortification programs can be expected to have a similar impact on whole blood and red cell folate levels, which are better measures of tissue stores. Based on its relationship to IMMULITE Folic Acid (see Method Comparison), the assay can be expected to have the same reference limits. Note: the reference range study on which the IMMULITE Folic Acid limits are based was performed in the US prior to the FDA fortification requirements. The reference range for whole blood folic acid was determined using 122 apparently healthy subjects in a fasting state. Serum Folic Acid Whole Blood Folic Acid 3 17 ng/ml (6 39 nmol/l) ng/ml ( nmol/l) Laboratories should establish the appropriateness of adopting these reference ranges. Limitations The folate binding protein employed in the Reagent Wedge crossreacts to some extent with the "anti-folate" drug methotrexate (MTX), a compound used in the chemotherapy of cancer. (See "Specificity" section.) Since high-dose infusions of methotrexate may result in circulating levels of 45,000 ng/ml initially and levels in the order of 2000 ng/ml 48 hours later, the kit should not be used for folic acid measurements on patients currently receiving the drug. Moreover, great caution must be exercised when interpreting folic acid levels on patients who have recently undergone therapy with methotrexate or any other drug with a similar structure. Folic acid results near the lower limit of normal should be interpreted with caution. 10 Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. 6 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

7 Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: ng/ml nmol/l Reportable Range: 1 24 ng/ml ( nmol/l) The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: 0.8 ng/ml (1.8 nmol/l) Intraassay Precision: Statistics were calculated for samples from the results of 20 replicates in a single run. (See "Intraassay Precision" table.) Interassay Precision: Statistics were calculated for samples assayed in 12 different runs. (See "Interassay Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three folic acid solutions (20, 70 and 180 ng/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for folic acid. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Hemolyzed samples are unsuitable for serum folate determinations. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 5000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 9 volunteers into plain, heparinized and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. By linear regression: (Heparin) = 1.05 (Serum) 0.36 ng/ml r = (SST) = 0.98 (Plain Tubes) 0.06 ng/ml r = Means: 16 ng/ml (Serum) 16 ng/ml (Heparin) 15 ng/ml (SST) Method Comparison (Serum): The assay was compared to IMMULITE Folic Acid on 156 serum samples. (Concentration range: approximately 1.8 to 20 ng/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 0.96 (IML) 0.54 ng/ml r = Means: 8.3 ng/ml (IMMULITE 2000) 9.2 ng/ml (IMMULITE) References 1) Herbert V. The nutritional anemias. Hosp Pract 1980 Mar;15(3):65-83, ) Lindenbaum J. Status of laboratory testing in the diagnosis of megaloblastic anemia. Blood 1983;61: ) Colman N. The radioisotopic investigation of anemia. Ligand Quarterly 1981 Fall;4(3): ) Grasbeck R. Biochemistry and clinical chemistry of vitamin B12 transport and the related diseases. Clin Biochem 1984;17: ) Cooper BA. Folic Acid: its metabolism and utilization. Clin Biochem 1984;17: ) McNeely MDD. Folic Acid assay. In: Kaplan LA, Pesce AJ, editors. Clinical Chemistry. St. Louis: CV Mosby, 1984: ) Allen RH. Clinical role and current status of serum cobalamin (vitamin B12) assays. Ligand Quarterly 1981 Fall;4(3):37-44,67. 8) Chen I-W, et al. B12. In: Kaplan LA, Pesce AJ, editors. Clinical Chemistry. St. Louis: CV Mosby, 1984: ) Netteland B, Bakke OM. Inadequate sample preparation as a source of error in determination of erythrocyte folate by competitive binding radioassay. Clin Chem 1977;23: ) Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 2nd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1994: ) Kubasik NP, Graham M, Sine HE. Storage and stability of folate and vitamin B-12 in plasma and blood samples. Clinica Chimica Acta 1979;95: ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995: ) Jacques PF, Selhub J, Bostom AG, et al. The effect of folic acid fortification on plasma folate and total homocysteine concentrations. New Engl J Med 1999;340: ) Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR, 1988;37:377 82, ) Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 7

8 Institute; NCCLS Document M29-A3. 16) Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Intraassay Precision (ng/ml) Mean 1 SD 2 CV % % % Česky. 1 Střední hodnota, 2 Směrodatná odchylka, 3 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Μέσος όρος, 2 SD, 3 CV. Polski. 1 Średnia, 2 SD, 3 CV. Interassay Precision (ng/ml) Mean 1 SD 2 CV % % % Česky. 1 Střední hodnota, 2 Směrodatná odchylka, 3 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Μέσος όρος, 2 SD, 3 CV. Polski. 1 Średnia, 2 SD, 3 CV. Method Comparison (Serum) IMMULITE 2000 Folic Acid IMMULITE Folic Acid, ng/ml (IML 2000) = 0.96 (IML) 0.54 ng/ml r = English. Folic Acid. Česky. Kyselina listová. Ελληνικά. Φυλλικό οξύ. Polski. Kwas foliowy. Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in < in in % 2 in % 1 in 8 <1.00 < in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 2 in % 1 in % 6 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Specificity (ng/ml) Compound 1 ng/ml % Cross Added 2 reactivity 3 Methotrexate % Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % Διασταυρ.Αντίδραση. Polski. 1 Składnik, 2 Składnik dodany, 3 % Reaktywności 8 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

9 krzyżowej. Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Česky IMMULITE 2000 Kyselina Listová Použití : Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace kyseliny listové v séru, heparinizované plazmě nebo v plné krvi upravené kyselinou askorbovou, jakožto pomůcky při diagnostice a léčbě anémie. Katalogové číslo : L2KFO2 (200 stanovení), L2KFO6 (600 stanovení) Kód metody : FOL Barva : Oranžová Shrnutí a vysvětlení Kyselina listová (folát) a vitamín B12 jsou živiny nepostradatelné pro hematopoézu. 1 Příčinou megaloblastické anémie je téměř vždy nedostatek jednoho z těchto vitamínů. 1 Při nedostatku vitamínu B12 je hladina folátu v cirkulaci obyčejně normální nebo zvýšená ale množství folátu v červených krvinkách je v takovém případě obyčejně nízké. 2 K nedostatku folátu běžně dochází při nedostatku jeho přísunu potravou (např. alkoholizmus) nebo při zvýšené poptávce po tomto vitamínu (např. v těhotenství). 1,3 Na rozdíl od vitamínu B12 je folát termolabilním vitamínem, který se ničí dlouhým vařením. Proto je výskyt nedostatku folátu na různých místech světa značně odlišný a podle všeho odráží rozdíly ve stravovacích a kulinářských návycích. 4 Množství folátu v cirkulaci je silně ovlivněno nedávným příjmem tohoto vitamínu, proto je jeho stanovení ro zjištění jeho zásoby v organizmu nevhodné. 2,5,6 Takže i při nedostatku folátu může být jeho koncentrace v séru nebo plazmě na normální úrovni. A naopak, množství folátu v cirkulaci může být nízké už dávno před vyčerpáním zásob z tkání. 2,6 Z tohoto důvodu je důležité vždy při jeho stanovení v séru nebo plazmě změřit množství folátu v červených krvinkách. 5,7,8 Princip stanovení Konkurenční imunochemická reakce. Analyzátor IMMULITE 2000 vykonává automatickou úpravu vzorků séra, plazmy nebo plné krve upravené kyselinou askorbovou (pro měření folátu v červených krvinkách) ve dvou cyklech. Vzorek společně s ligandem značenou kyselinou listovou je nejdřív upraven pomocí dithiotreitolu (DTT) v reakční zkumavce bez kuličky a pak ve druhém cyklu s hydroxidem sodným/ kyanidem draselným (NaOH/KCN). Upravený vzorek je pak přesunut do druhé reakční zkumavky obsahující polystyrénovou kuličku potaženou myší protilátkou proti folát vazebnému proteinu a folát vazebný protein (FBP). Během 30-minutové inkubace kyselina listová uvolněná z vazebných proteinů ve vzorku soutěží s ligandem značenou kyselinou listovou o navázání na FBP. Po vymytí kuličky se přidá alkalická fosfatáza značená antiligandem. Během poslední 30 minutové inkubace se alkalická fosfatáza značená antiligandem naváže na folát značený ligandem, který byl navázaný na kuličku během první inkubace. IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 9

10 Nenavázaný enzymový konjugát se odstraní odstředivým promýváním. Přidá se substrát a postup pokračuje jako typická imunochemická reakce, jak je posáno v manuálu k analyzátoru. Inkubační cykly : 4 30 minut. 2 pozice na jeden test: 1 reakční zkumavka pro úpravu vzorku, 1 reakční zkumavka pro imunochemickou reakci. Cykly 1 a 2 : Alkalická denaturace endogenních vazebných proteinů. Cykly 3 a 4 : Vazba proteinu a imunochemická reakce. Panel Kyselina Listová/Vitamin B12 : K dosažení maximálního výkonu stanovení by se vzorky kyseliny listové a vitamínu B12 měly střídat, přičemž začít je třeba se stanovením kyseliny listové. Postup vytvoření panelu najdete v manuálu. Odebírání vzorků Pacient musí být nalačno. 10 Při stanovení kyseliny listové v plné krvi nebo v červených krvinkách použijte čerstvou heparinizovanou nebo EDTA plnou krev. Aby se výsledky naměřené v plné krvi daly přepočítat do výsledků pro červené krvinky,které se udávají v nanogramech na mililitr (ng/ml) červených krvinek oddělených od plazmy, je třeba znát pacientův hematokrit. Navíc, k výpočtu přesného množství folátu v červených krvinkách je rovněž nutné znát hladinu folátu v séru pacienta. EDTA plazmu jako typ vzorku nepoužívejte. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky séra jsou pro analýzu nevhodné. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Kyselina Listová na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Sérum nebo heparinizovaná plazma Potřebný objem vzorku : 50 μl séra nebo plazmy Skladování : 8 hodin při teplotě 2 8 C nebo 6 8 týdnů při teplotě 20 C. 12 Zamezte nadměrnému vystavení vzorků přímému světlu. Plná krev (Kyselina listová v červených krvinkách) Potřebný objem vzorku : 100 μl čerstvé heparinizované nebo EDTA plné krve (pro přípravu hemolyzátů). Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. POZOR! POTENCIÁLNÍ BIOHAZARD Obsahuje materiál lidského původu. Každé darování krve nebo jejích složek bylo testováno metodami schválenými FDA na přítomnost protilátek proti viru lidské imunodeficience typu 1 (HIV-1) a typu 2 (HIV-2) a také na povrchový antigen viru hepatitidy B (HBsAg) a protilátky proti viru hepatitidy C (HCV). Výsledky testu byly negativní (opakovaně nereaktivní). Žádný test však není absolutní zárukou nepřítomnosti uvedených nebo jiných infekčních zárodků ; s materiálem proto zacházejte podle zásad správné laboratorní praxe a dbejte obecných bezpečnostních opatření UPOZORNĚNÍ : Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. 10 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

11 H314, H412 P280, P304 + P340 + P310, P301 + P310 + P331, P303 + P361 + P353 + P310, P305 + P310, P273, P501 Nebezpečí! Způsobuje těžké poleptání kůže a poškození očí. Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ ochranné brýle/obličejový štít. PŘI VDECHNUTÍ : Přeneste postiženého na čerstvý vzduch a ponechte jej v klidu v poloze usnadňující dýchání. Okamžitě volejte TOXIKO- LOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. PŘI POŽITÍ : Okamžitě volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘE- DISKO nebo lékaře. NEVYVOLÁVEJTE zvracení. PŘI STYKU S KŮŽÍ (nebo s vlasy): Veškeré kontaminované části oděvu okamžitě svlékněte. Opláchněte kůži vodou/osprchujte. Okamžitě volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. PŘI ZASAŽENÍ OČÍ : Okamžitě volejte TOXIKO- LOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje : hydroxid sodný; Kyselina Listová A reagencie Obsahuje : 2-methyl-2Hisothiazol-3-jedna; Kyselina Listová kalibrátory Reagencie : Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 0,1 g/dl. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Jako konzervační látka byl přidán chloramfenikol v koncentracích menších než 0,1 g/dl. Chloramfenikol je znám jako potenciální příčina rakoviny, toto zveřejnění je vyžadováno státem Kalifornie. NaOH/KCN : Roztok obsahuje kyanid. Vyvarujte se jakéhokoliv fyzického kontaktu. Chemiluminiscenční substrát : Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda : Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky na vnitřní krabici. Kyselina Listová zásobník s kuličkami (L2FO12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených myší monoklonální protilátkou proti folát vazebnému proteinu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KFO2 : 1 balení L2KFO6 : 3 balení Kyselina Listová A reagencie (L2FOA2) Opatřeno čárovými kódy. Nádobky (označené "A"), každá s obsahem 15 ml dithiotreitolu (DTT) v pufru, 18,1 ml ligandem značené kyseliny listové v pufru a 15 ml NaOH/KCN (NHCN) v pufru, s konzervačním prostředkem. Před otevřením stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. Po otevření stabilní 30 dní při teplotě 2 8 C. L2KFO2 : 3 nádobky L2KFO6 : 6 nádobek Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Kyselina Listová D reagencie (L2FOD2) Opatřeno čárovými kódy. Nádobky (označené D ) s obsahem 11,5 ml folát vazebného proteinu v pufru, 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 11

12 konjugované s antiligandem v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KFO2 : 1 nádobka L2KFO6 : 3 nádobky Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii ; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Kyselina Listová kalibrátory (LFOL, LFOH) Dvě ampulky s vysokou a nízkou koncentrací lyofilizované kyseliny listové v matrici na bázi lidského proteinu, s konzervačním prostředkem. Každou ampulku rekonstituujte přidáním 3,0 ml sterilní destilované vody a promíchejte jemným překlápěním. Stabilní 30 dní po rekonstituci při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při teplotě 20 C. L2KFO2 : 2 sady L2KFO6 : 2 sady Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Vitamin B12/Kyselina listová diluent vzorků (L2FVZ) Pro přístrojové ředění koncentrovaných vzorků séra. 25 ml koncentrované (připravené k použití) matrice na bázi lidského proteinu bez vitaminu B12/kyseliny listové, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2FVZ : 3 štítky Kyselina askorbová: lze objednat lyofilizovanou od Siemens Healthcare Diagnostics (katalogové číslo : ). Používá se pouze pro stanovení kyseliny listové v plné krvi a v červených krvinkách. Je stabilní při teplotě 2 8 C před otevřením až do dne použitelnosti uvedeného na lahvičce. Bezprostředně před použitím je nutné připravit čerstvý 0,5% roztok. Rekonstituci každé lahvičky kyseliny askorbové provádějte v 30 ml destilované nebo deionizované vody. Rekonstituovanou směs ponechte stát při pokojové teplotě (15 28 C) přibližně 15 minut až do úplného rozpuštění, poté přeneste obsah lahvičky do jiného zásobníku a přidejte dalších 30 ml destilované vody. (Askorbát sodný není vhodnou alternativou.) L2SUBM : Chemiluminiscenční Substrát L2PWSM : Promývací Roztok L2KPM : Čistící Roztok Na Jehly LRXT : Reakční Zkumavky (na jedno použití) L2ZT : 250 Testovacích Zkumavek Na Diluent Vzorků ( mm) L2ZC : 250 Uzávěrů Na Testovací zkumavky na diluent vzorků Dále potřebujete Destilovanou nebo deionizovanou vodu ; testovací zkumavky, kontroly Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy : přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Reagencii A (L2FOA2) a reagencii D (L2FOD2) je nutné založit do analyzátoru před stanovením. Doporučený interval mezi adjustacemi : 4 týdny Vzorky ke kontrole kvality : Pokud jde o četnost kontroly kvality, je třeba řídit se platnými předpisy a akreditačními požadavky. Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) kyseliny listové. Společnost Siemens Healthcare Diagnostics doporučuje používat obchodně dostupné materiály kontroly kvality o přinejmenším dvou koncentracích vysoké a nízké. Vyhovující funkčnosti se dosahuje, pokud zjištěné hodnoty analytu leží uvnitř přijatelného kontrolního rozmezí analyzátoru nebo uvnitř rozmezí 12 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

13 stanoveného příslušným interním systémem kontroly kvality dané laboratoře. Stanovení kyseliny listové v plné krvi a v červených krvinkách Příprava hemolyzátu : Odeberte vzorek plné krve a stanovte hematokrit. Krev nařeďte v poměru 1:26 (plně suspendovaný roztok) čerstvým roztokem 0,5% kyseliny askorbové (např. smíchejte 40 μl plné krve a 1000 μl 0,5% kyseliny askorbové). Nepoužívejte askorbát sodný. 9 Promíchejte a nechte stát 180 minut v temnu při pokojové teplotě (15 28 C). 10 Skladování hemolyzátů : 3 hodiny při teplotě 2 8 C nebo 2 týdny při 20 C. 10,11 Vzorky chraňte před přímým světlem. Po uplynutí inkubační doby dejte upravené vzorky do vzorkového držáku. Při zadávání kyseliny listové pro hemolyzáty musíte test zadat s manuálním ředěním ( 26, pro zohlednění úpravy kyselinou askorbovou). Informace o ředění vzorků a ručním ředění najdete v manuálu k analyzátorům IMMULITE Výpočty Výsledky z plné krve Výsledky kyseliny listové z plné krve budou zobrazovány s ředícím faktorem 26 pro manuální ředění. Tlačítko manuální ředění (Manual Dilution) v menu WORKLIST. (Poznámka : Analyzátor IMMULITE 2000 počítá s manuálním ředěním 1 : 26 pomocí kyseliny askorbové.) Výsledky v červených krvinkách Přibližné množství folátu v červených krvinkách oddělených od plazmy, v ng/ml, dostanete vynásobením koncentrace folátu v plné krvi (R) výrazem 100/H, kde H je hematokrit v procentech : Kyselina listová v červených krvinkách R (100 / H) Přesněji řečeno, část folátu v séru by se měla odečíst od koncentrace folátu v plné krvi před násobením výrazem 100/H. Když použijeme S jako množství kyseliny listové v sérovém vzorku, dostaneme přesnou rovnici : Kyselina listová v červených krvinkách = (R [S (100 H) / 100]) (100 / H) Výraz v hranatých závorkách je ale ve srovnání s výrazem R tak malý, že ho můžeme zanedbat. Očekávané hodnoty Protože množství kyseliny listové silně závisí na stravě a přísunu potravy, můžeme u referenčních rozmezí pro různé skupiny obyvatelstva zaznamenat demografické rozdíly. Například ve Spojených státech vedlo obohacování obilných výrobků vitaminy (jak od roku 1996 nařizovala Food and Drug Administration ) odhadem k zdvojnásobení střední hodnoty folátu v plazmě u jedinců, kteří nepoužívají vitaminové doplňky 13 a k poklesu výskytu nízké hladiny kyseliny listové, tedy pod 3 ng/ml (7 nmol/l). 13 Obohacování stravy o vitaminy má pravděpodobně stejný vliv na koncentraci folátu v plné krvi a červených krvinkách, což jsou lepší ukazatele pro určení zásob folátu v tkáních. Na základě příbuznosti s testem Kyselina Listová na analyzátoru IMMULITE (viz Srovnání metody) je možné u tohoto stanovení očekávat stejná referenční rozmezí. Poznámka : výzkum referenčního rozmezí, na základě kterého byly určeny hranice pro stanovení Kyselina Listová na analyzátoru IMMULITE, se uskutečnil v USA ještě před povinným obohacováním stravy dle požadavků FDA. Stanovení referenčního rozmezí pro kyselinu listovou v plné krvi se provádělona 122 zjevně zdravých dobrovolnících na lačno. Kyselina listová v séru Kyselina listová v plné krvi 3 17 ng/ml (6 39 nmol/l) ng/ml ( nmol/l) Laboratoře by tato referenční rozmezí měla přejímat s výhradami. Omezení Folát vazebný protein použitý v reagencii vykazuje v jisté míře zkříženou reaktivitu s "proti folátovou" látkou metotrexátem (MTX), sloučeninou používanou v rakovinové chemoterapii. (Viz část "Specificita".) Protože vysoké dávky IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 13

14 metotrexátu infúzí mohou mít za následek hladiny v cirkulaci ng/ml po aplikaci a řádově 2000 ng/ml za 48 hodin, souprava pro stanovení kyseliny listové se nemá používat u pacientů, kteří současně dostávají tento lék. Při interpretaci výsledků stanovení folátu u pacientů, kteří nedávno dostávali metotrexát nebo jinou látku podobné struktury, je rovněž třeba dbát mimořádné opatrnosti. Hodnoty folátu pohybující se kolem spodní hranice normálního rozmezí je nutné interpretovat s opatrností. 10 Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all imunologickým stanovením. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno ; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor : ng/ml 2,266 nmol/l Kalibrační rozsah : 1 24 ng/ml (2,3 54 nmol/l) Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost : 0,8 ng/ml (1,8 nmol/l) Přesnost v rámci stanovení : Statistické údaje pro vzorky byly vypočítány z výsledků 20 replikátů v jediném testu. (Viz tabulka "Intraassay Precision".) Přesnost mezi stanoveními : Statistické údaje byly vypočítány pro vzorky stanovené ve 12 různých testech. (Viz tabulka "Interassay Precision".) Linearita : Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Linearity".) Zpětná výtěžnost : Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků kyseliny listové (20, 70 a 180 ng/ml) v poměru 1 : 19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Recovery".) Specificita : Protilátka je silně specifická vůči kyselině listové. (Viz tabulka "Specificity".) Bilirubin : Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza : Hemolyzované vzorky jsou pro stanovení folátu v séru nevhodné. Lipémie : Přítomnost lipémie v koncentracích do 5000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku : Vzorky od 9 dobrovolníků byly odebrány do obyčejných, heparinizovaných a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Podle lineární regrese : (Heparin) = 1,05 (Sérum) 0,36 ng/ml r = 0,996 (SST) = 0,98 (obyčejné zkumavky) 0,06 ng/ml r = 0,997 Střední hodnoty : 16 ng/ml (Sérum) 16 ng/ml (Heparin) 15 ng/ml (SST) Srovnání metody (Sérum) : Stanovení bylo porovnáno s testem Kyselina listová na analyzátoru IMMULITE na 156 vzorcích séra. (Koncentrační rozsah : přibližně 1,8 až 20 ng/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 0,96 (IML) 0,54 ng/ml r = 0, IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

15 Střední hodnoty : 8,3 ng/ml (IMMULITE 2000) 9,2 ng/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Φυλλικό Οξύ Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση του φυλλικού οξέος στον ορό, στο ηπαρινισμένο πλάσμα ή στο επεξεργασμένο με ασκορβικό οξύ ολικό αίμα, ως βοήθημα στην κλινική διάγνωση και θεραπεία της αναιμίας. Αριθμός καταλόγου: L2KFO2 (200 αναλύσεις), L2KFO6 (600 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: FOL Χρώμα: Πορτοκαλί Περίληψη και Επεξήγηση Το φυλλικό οξύ (folate) και η βιταμίνη B12 είναι θρεπτικές ουσίες απαραίτητες για την αιματοποίηση. 1 Η μεγαλοβλαστική αναιμία οφείλεται σχεδόν εξ ολοκλήρου στην απουσία μίας εκ των δύο βιταμινών. 1 Τα επίπεδα του φυλλικού οξέος (folate) στην κυκλοφορία είναι συνήθως κανονικά ή αυξημένα όταν υπάρχει έλλειψη της βιταμίνης B12, αλλά τα επίπεδα του φυλλικού οξέος στα ερυθροκύτταρα είναι συχνά χαμηλά σε αυτή την περίπτωση. 2 Η έλλειψη φυλλικού οξέος συναντάται κυρίως ως αποτέλεσμα διαιτητικών ελλείψεων (όπως στον αλκοολισμό) και όταν υπάρχει αυξημένη ανάγκη για την βιταμίνη (όπως στην εγκυμοσύνη). 1,3 Σε αντίθεση με τη βιταμίνη B12, το φυλλικό οξύ είναι μια βιταμίνη που μεταβάλλεται με τη ζέστη και είναι ευαίσθητη και μπορεί να καταστραφεί με το παρατεταμένο μαγείρεμα. Συνεπώς, η εξάπλωση της έλλειψης φυλλικού οξέος δείχνει μεγάλες δημογραφικές διαφοροποιήσεις και προφανώς αντανακλά τις διαφορές στις διαιτητικές και μαγειρικές συνήθειες. 4 Τα επίπεδα του φυλλικού οξέος στην κυκλοφορία επηρεάζονται ιδιαίτερα από πρόσφατη πρόσληψη της βιταμίνης και για αυτό δεν αποτελούν έγκυρο δείκτη των αποθεμάτων της βιταμίνης στους ιστούς. 2,5,6 Γι αυτό τα επίπεδα του φυλλικού οξέος στον ορό ή στο πλάσμα μπορεί να είναι κανονικά ενώ υπάρχει έλλειψη του φυλλικού οξέος. Αντιστρόφως, τα επίπεδα στην κυκλοφορία μπορεί να είναι χαμηλά προτού εξαντληθούν τα αποθέματα στους ιστούς. 2,6 Κατά συνέπεια, είναι σημαντικό να μετράμε τα επίπεδα του φυλλικού οξέος στα ερυθρά αιμοσφαίρια κάθε φορά που μετρώνται τα επίπεδα στο πλάσμα ή στον ορό. 5,7,8 Αρχή της διαδικασίας Ανταγωνιστική ανοσοεξέταση. Το IMMULITE 2000 εκτελεί μία 2-κύκλων επεξεργασία του δείγματος του ορού του ασθενή, του πλάσματος ή του ολικού αίματος επεξεργασμένου με ασκορβικό οξύ (για την μέτρηση του φυλλικού οξέος των ερυθροκυττάρων). Το δείγμα, μαζί με το ligand-σεσημασμένο φυλλικό οξύ, πρώτα επεξεργάζεται με DTT, σε ένα σωληνάριο αντίδρασης που δεν περιέχει σφαιρίδιο, και μετά με υδροξείδιο του νατρίου/κυανιούχο κάλιο (NaOH/KCN), σε ένα δεύτερο κύκλο επεξεργασίας. Το επεξεργασμένο δείγμα μεταφέρεται σε ένα άλλο σωληνάριο αντίδρασης που περιέχει ένα σφαιρίδιο πολυστυρενίου επικαλυμένο με αντίσωμα αντί-φυλλικού οξέος πρωτεϊνης από ποντικό και μια πρωτεϊνης δεσμεύσεως φυλλικού οξέος (FBP). Κατά τα 30 λεπτά της επώασης, το φυλλικό οξύ που απελευθερώνεται από τις πρωτείνες δέσμευσης στο δείγμα του ασθενή ανταγωνίζεται το ligand-σεσημασμένο φυλλικό οξύ για την πρόσδεση με την FBP. Το σφαιρίδιο ξεπλένεται και προστίθεται.anti-ligand σημασμένη αλκαλική φωσφατάση Κατά την διάρκεια της τελικής επώασης που διαρκεί 30 λεπτά, η σημασμένη anti-ligand αλκαλική φωσφατάση ενώνεται με το ligand-σημασμένο φυλλικό οξύ το οποίο ήταν προσδεμένο στο σφαιρίδιο κατά την πρώτη επώαση. Το ελεύθερο από χημικό δεσμό ενζυμικό παράγωγο απομακρύνεται με φυγόκεντρη πλύση. Προστίθεται υπόστρωμα και η διαδικασία συνεχίζει IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 15

16 όπως περιγράφεται σχετικά με τις συνήθεις ανοσοεξετάσεις στο εγχειρίδιο χρήσης (Operator s Manual). Κύκλοι επώασης: 4 30 λεπτά. 2 θέσεις αναλύσεων για κάθε εξέταση: 1 δοχείο επεξεργασίας δείγματος; 1 δοχείο ανοσοαντίδρασης. Κύκλοι 1 και 2: Αλκαλική μετουσίωση των ενδογενών πρωτεϊνών δέσμευσης. Κύκλοι 3 και 4: Δέσμευση Πρωτεΐνης και ανοσοαντίδραση. Ομάδα Φυλλικού οξέος/βιταμίνης B12: Για να επιτευχθεί μέγιστο έργο ανάλυσης, το «τρέξιμο» των δειγμάτων για φυλλικό οξύ και βιταμίνη B12 πρέπει να γίνεται εναλλάξ, ξεκινώντας με ένα δείγμα φυλλικού οξέος. Δες το Εγχειρίδιο χρήσης (Operator's Manual) που αφορά την δημιουργία μιας ομάδας. Συλλογή δείγματος Ο ασθενής πρέπει να βρίσκεται σε κατάσταση νηστείας. 10 Για καθορισμούς του φυλλικού οξέος στο ολικό αίμα και στα ερυθροκύτταρα, να χρησιμοποιείται πρόσφατα ηπαρινισμένο ή EDTA ολικό αίμα. Ο αιματοκρίτης του ασθενή πρέπει να είναι γνωστός ώστε να μεταφραστούν τα αποτελέσματα του φυλλικού οξέος του ολικού αίματος σε συγκέντρωση στα ερυθροκύτταρα, η οποία εκφράζεται σε νανογραμμάρια ανα χιλιοστόλιτρο (ng/ml) των πακεταρισμένων ερυθροκυττάρων. Επιπλέον, για την ακριβή μέτρηση των αποτελεσμάτων φυλλικού οξέος ερυθροκυττάρων, πρέπει να είναι γνωστό το επίπεδο του φυλλικού οξέος στον ορό του ασθενή. Το πλάσμα EDTA δεν πρέπει να χρησιμοποιείται ως τύπος δείγματος. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα ορού είναι ακατάλληλα για την ανάλυση. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η εξέταση Φυλλικού οξέος με IMMULITE 2000 δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Ορός ή Ηπαρινισμένο Πλάσμα Απαιτούμενος όγκος: 50 µl ορού ή πλάσματος Αποθήκευση: 8 ώρες στους 2 8 C, ή 6 8 εβδομάδες στους 20 C. 12 Να αποφεύγεται η υπερβολική έκθεση σε άμεσο φως. Ολικό αίμα (Φυλλικό οξύ ερυθροκυττάρων) Απαιτούμενος όγκος: 100 µl νωπό ηπαρινισμένο ή EDTA ολικό αίμα (για προετοιμασία αιμολύματος). 16 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

17 Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ! ΔΥΝΗΤΙΚΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟΣ ΚΙΝΔΥΝΟΣ Περιέχει υλικό ανθρώπινης προέλευσης. Κάθε δωρεά ανθρώπινου αίματος ή συστατικού αίματος ελέγχθηκε με μεθόδους εγκεκριμένες από τον FDA για την ύπαρξη αντισωμάτων ενάντια στους ιούς της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου τύπου 1 (HIV-1) και τύπου 2 (HIV-2), καθώς και για επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β (HBsAg) και για αντισώματα ενάντια στον ιό της ηπατίτιδας C (HCV). Τα αποτελέσματα των εξετάσεων ήταν αρνητικά (όχι επανειλημμένα αντιδραστικά). Επειδή καμία εξέταση δεν παρέχει πλήρη διασφάλιση για την απουσία αυτών ή άλλων μολυσματικών παραγόντων, ο χειρισμός αυτού του υλικού θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις ορθές εργαστηριακές πρακτικές και γενικές προφυλάξεις ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. H314, H412 P280, P304 + P340 + P310, P301 + P310 + P331, P303 + P361 + P353 + P310, P305 + P310, P273, P501 Κίνδυνος! Προκαλεί σοβαρά δερματικά εγκαύματα και οφθαλμικές βλάβες. Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/πρόσωπο. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΙΣΠΝΟΗΣ: Μεταφέρετε τον παθόντα στον καθαρό αέρα και αφήστε τον να ξεκουραστεί σε στάση που διευκολύνει την αναπνοή. Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΚΑΤΑΠΟΣΗΣ: Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό. ΜΗΝ προκαλέσετε εμετό. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ (ή με τα μαλλιά): Αφαιρέστε αμέσως όλα τα μολυσμένα ενδύματα Ξεπλύνετε το δέρμα με νερό/στο ντους. Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΑ ΜΑΤΙΑ: Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: υδροξείδιο του νατρίου, Δοχείο αντιδραστηρίου Φυλλικού Οξέος A Περιέχει: 2-μεθυλ-2Hισοθειαζολ-3-όνη, Ρυθμιστές Φυλλικού Οξέος Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Υπόκεινται στην ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για τα IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 17

18 επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας B και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl, έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά βούληση, ξεπλύντε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανόν εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Η χλωραμφαινικόλη, σε συγκεντρώσεις μικρότερες του 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Είναι γνωστό ότι η χλωραμφαινικόλη προκαλεί καρκίνο. Η γνωστοποίηση αυτής της πληροφορίας απαιτείται από την πολιτεία της Καλιφόρνια. NaOH/KCN: Το διάλυμα περιέχει κυανιούχο άλας. Να αποφεύγεται κάθε επαφή με το δέρμα. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Δεν πρέπει να μολυνθεί και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες Νερό: Χρήση απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων Φυλλικού οξέος (L2FO12) Με barcode. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με μονοκλωνική αντι-φυλλικού οξέος πρωτεΐνη δεσμεύσεως από ποντικό. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KFO2: 1 συσκευασία L2KFO6: 3 συσκευασίες Δοχείο αντιδραστηρίου Φυλλικού Οξέος A (L2FOA2) Με barcodes. Δοχεία (με ετικέτα "A"), το καθένα περιέχει 15 ml dithiothreitol (DTT) σε ρυθμιστικό διάλυμα, 18,1 ml ligandσημασμένο φυλλικό οξύ σε ρυθμιστικό διάλυμα και 15 ml NaOH/KCN (NHCN) σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Πριν το άνοιγμα, διατηρείται σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. Μετά το άνοιγμα, σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες. L2KFO2: 3 δοχεία L2KFO6: 6 δοχεία Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Δοχείο αντιδραστηρίου φυλλικού οξέος D (L2FOD2) Με barcodes. Δοχεία (με ετικέτα D ) που περιέχουν 11,5 ml φυλλικού οξέος πρωτεϊνης δεσμεύσεως σε ρυθμιστικό διάλυμα; 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συνδεδεμένης με anti-ligand σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KFO2: 1 δοχείο L2KFO6: 3 δοχεία Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές Φυλλικού Οξέος (LFOL, LFOH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) λυοφιλοποιημένου Φυλλικού Οξέος σε μήτρα ανθρώπινης πρωτεϊνης, με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου με 3,0 ml αποστειρωμένου απεσταγμένου νερού και ανακινήστε με απαλή αναστροφή. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά την ανασύσταση ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KFO2: 2 σετ L2KFO6: 2 σετ Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά Αραιωτικό δείγματος Βιταμίνης B12/Φυλλικού οξέος (L2FVZ) Για την αραίωση δειγμάτων ορού υψηλής συγκέντρωσης στον αναλυτή. 25 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση), μήτρας ανθρώπινης πρωτεΐνης βιταμίνης B12/φυλλικού οξέος, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα, ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. 18 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

19 Ετικέτες με barcode παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα mm, έτσι ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. L2FVZ: 3 ετικέτες Ασκορβικό οξύ: διατίθεται λυοφιλοποιημένο από τη Siemens Healthcare Diagnostics (αριθμός καταλόγου: ). Απαιτείται μόνο για μετρήσεις του φυλλικού οξέος του ολικού αίματος και των ερυθροκυττάρων. Σταθερό στους 2 8 C χωρίς να ανοιχτεί έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στο φιαλίδιο. Το διάλυμα 0,5% πρέπει να παρασκευάζεται φρέσκο, αμέσως πριν από τη χρήση. Πραγματοποιήστε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου ασκορβικού οξέος με 30 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Αφήστε το ανασυσταθέν μείγμα να παραμείνει σε θερμοκρασία δωματίου (15 28 C) για περίπου 15 λεπτά μέχρι να διαλυθεί εντελώς και κατόπιν μεταφέρετε το περιεχόμενο του φιαλιδίου σε ξεχωριστό δοχείο και προσθέστε ακόμη 30 ml απεσταγμένου νερού. (Το ασκορβικό νάτριο δεν είναι κατάλληλο εναλλακτικό υλικό.) L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για διάλυση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες διάλυσης δείγματος Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Και το Δοχείο αντιδραστηρίου A (L2FOA2) και το Δοχείο Αντιδραστηρίου D (L2FOD2) πρέπει να τοποθετηθούν στο όργανο πριν την ανάλυση. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Εφαρμόστε τους κρατικούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης για τη συχνότητα του ποιοτικού ελέγχου. Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου ή δείγματα ορού τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) φυλλικού οξέος Η Siemens Healthcare Diagnostics συνιστά τη χρήση εμπορικά διαθέσιμων υλικών ελέγχου ποιότητας με τουλάχιστον 2 επίπεδα (χαμηλό και υψηλό). Ένα ικανοποιητικό επίπεδο απόδοσης επιτυγχάνεται όταν οι τιμές που προκύπτουν βρίσκονται εντός του αποδεκτού εύρους των υλικών ελέγχου για τον αναλυτή ή εντός ενός καθορισμένου εύρους που καθορίστηκε με βάση ένα κατάλληλο πλαίσιο εσωτερικού εργαστηριακού ποιοτικού ελέγχου. Υπολογιμός Φυλλικού Οξέως Ολικού Αίματος και Ερυθρών Αιμοσφαιρίων Προετοιμασία του αιμολύματος: Συγκεντρώστε δείγμα ολικού αίματος και προσδιορίστε τον αιματοκρίτη. Διαλύστε τα κύτταρα στο διάλυμα προετοιμάζοντας μια 1-προς-26 αραίωση του δείγματος (fully suspended) σε πρόσφατα ετοιμασμένο διάλυμα ασκορβικού οξέος 0,5% (i.e., αναμείξτε 40 µl ολικού αίματος με 1000 µl 0,5% ασκορβικού οξέος). Να μην χρησιμοποιείται ασκορβικό νάτριο (sodium ascorbate). 9 Ανακινήστε στο vortex και αφήστε το να σταθεί για 180 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (15 28 C) στο σκοτάδι. 10 Αποθήκευση του Αιμολύματος: 3 ώρες στους 2 8 C, ή 2 εβδομάδες στους 20 C. 10,11 Να αποφεύγεται η υπερβολική έκθεση σε άμεσο φως. Μετά την περίοδο επώασης, τοποθετήστε το προετοιμασμένο δείγμα σε ένα στατώ δειγμάτων. Όταν ζητάτε Φυλλικό οξύ σε αιμόλυμα, πρέπει να το ζητάτε ώς αραιωμένο με τα χέρια ( 26, για τον IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 19

20 υπολογισμό της προετοιμασίας ασκορβικού οξέως). Αναφερθείτε στο εγχειρίδιο λειτουργίας του IMMULITE 2000 που αφορά τις αραιώσεις των δειγμάτων και τις αραιώσεις με τα χέρια. Υπολογισμοί Αποτελέσματα ολικού αίματος Για τα αποτελέσματα του φυλλικού οξέος στο ολικό αίμα εφαρμόζεται ένας συντελεστής αραίωσης εισάγοντας το 26 στο πλήκτρο Αραίωσης με τα Χέρια το οποίο βρίκεται στο μενού της ΛΙΣΤΑΣ ΕΡΓΑΣΙΩΝ (WORKLIST). (Σημειώστε: Το IMMULITE 2000 υπολογίζει και την αραίωση με τα χέρια 1 σε 26 που έγινε με ασκορβικό οξύ.) Αποτελέσματα ερυθροκυττάρων Για μια κατά προσέγγισιν μέτρηση του πακεταρισμένου φυλλικού οξέος στα ερυθροκύτταρα, σε ng/ml, πολλαπλασιάστε την συγκέντρωση (R) του φυλλικού οξέος του ολικού αίματος με 100/H, όπου H είναι ο αιματοκρίτης εκφρασμένος σε εκατοστιαία αναλογία: Φυλλικό Οξύ στα ερυθροκύτταρα R (100 / H) Μιλώντας με ακρίβεια, η συμβολή του φυλλικού οξέος στον ορό πρέπει να αφαιρεθεί από την συγκέντρωση του φυλλικού οξέος στο ολικό αίμα πριν τον πολλαπλασιασμό με το κλάσμα 100/H. Χρησιμοποιώντας το επίπεδο του φυλλικού οξέος στον ορό S, η ακριβής εξίσωση είναι: Φυλλικό οξύ ερυθροκυττάρων = (R [S (100 H) / 100]) (100 / H) Ο όρος στις αγκύλες είναι, όμως, στις περισσότερες περιπτώσεις πολύ μικρός συγκρινόμενος με τον παράγοντα R και γι αυτό μπορεί δικαιολογημένα να παραμεληθεί. Αναμενόμενες τιμές Επειδή οι τιμές του φυλλικού οξέος επηρεάζονται ιδιαίτερα από την διατροφή και από διατροφικά συμπληρώματα, τα όρια αναφοράς που βασίζονται στον πληθυσμό μπορεί να δείχνουν και δημογραφικές διαφορές. Στις Ηνωμένες Πολιτείες, για παράδειγμα, η ενίσχυση των εμπλουτισμένων σιτηρών, όπως απαιτείται από τον Οργανισμό Τροφίμων και Φαρμάκων από το 1996, οδήγησε σε έναν εκτιμώμενο διπλασιασμό του μέσου όρου των επιπέδων του φυλλικού οξέος στο πλάσμα ανάμεσα σε άτομα που δεν χρησιμοποιούν συμπληρώματα βιταμινών, 13 και μια μείωση της εξάπλωσης των χαμηλών επιπέδων φυλλικού οξέος, δηλαδή επιπέδων κάτω από 3 ng/ml (7 nmol/l). 13 Τα ενισχυτικά προγράμματα αναμένεται να έχουν παρόμοιο αντίκτυπο και στα επίπεδα του φυλλικού οξέος στο ολικό αίμα και στα ερυθροκύτταρα, που αποτελούν καλύτερες μετρήσιμες ποσότητες των αποθεμάτων στους ιστούς. Βασιζόμενη στην σχέση με την ανάλυση Φυλλικού Οξέος με IMMULITE (βλ. Σύγκριση Μεθόδων), η ανάλυση αναμένεται να έχει τα ίδια όρια αναφοράς. Σημειώστε ότι η μελέτη των τιμών αναφοράς στην οποία βασίζεται ο καθορισμός των ορίων για την ανάλυση IMMULITE Φυλλικό οξύ εκτελέστηκε στις Ηνωμένες Πολιτείες πριν την εφαρμογή των FDA ενισχυτικών μέτρων. Το εύρος αναφοράς για φυλλικό οξύ σε ολικό αίμα υπολογίστηκε βασιζόμενο σε 122 εμφανώς υγιή νηστικά υποκείμενα. Φυλλικό Οξύ ορού Φυλλικό Οξύ ολικού αίματος 3 17 ng/ml (6 39 nmol/l) ng/ml ( nmol/l) Τα εργαστήρια πρέπει να καθιερώσουν την καταλληλότητα τους σχετικά με την υιοθέτηση αυτών των τιμών αναφοράς. Περιορισμοί Η πρωτεΐνη δεσμεύσεως φυλλικού οξέος που χρησιμοποιείται στο Δοχείο Αντιδραστηρίου διαντιδρά σε κάποιο βαθμό με το «αντί-φυλλικό οξύ» φάρμακο methotrexate (MTX), μια ένωση που χρησιμοποιείται στην χημειοθεραπεία κατά του καρκίνου. (Δες ενότητα "Specificity".) Επειδή υψηλές δόσεις χορήγησης methotrexate μπορεί να οδηγήσουν αρχικά σε επίπεδα κυκλοφορίας της τάξεως των ng/ml και μετά από 48 ώρες σε επίπεδα της τάξεως των 2000 ng/ml, το κιτ δεν πρέπει να χρησιμοποιείται ως μέτρηση του φυλλικού οξέος σε ασθενείς στους οποίους χορηγείται το φάρμακο. Επιπλέον, ιδιαίτερη προσοχή πρέπει να δοθεί όταν ερμηνεύονται αποτελέσματα των 20 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

21 επιπέδων φυλλικού οξέος ασθενών που είχαν πρόσφατα υποβληθεί σε θεραπεία με methotrexate ή με άλλο φάρμακο παρόμοιας δομής. Τα αποτελέσματα φυλλικού οξέος κοντά στο κατώτερο όριο των κανονικών τιμών πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. 10 Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε εργαστηριακές μεθόδους ανοσοανίχνευσης. [Bλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Δείγματα ασθενών που, σαν ρουτίνα, εκτίθενται σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε, να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Παράγοντας μετατροπής: ng/ml 2,266 nmol/l Εύρος αναφοράς: 1 24 ng/ml (2,3 54 nmol/l) Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική Ευαισθησία: 0,8 ng/ml (1,8 nmol/l) Ενδομεθοδική Ακρίβεια: Στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν για έξι δείγματα από τα αποτελέσματα 20 επαναλήψεων σε ένα μονό τρέξιμο. (Bλ. Πίνακα "Intraassay Precision".) Διαμεθοδική Ακρίβεια: Στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν για δείγματα σε 12 διαφορετικά τρεξίματα. (Bλ. Πίνακα "Interassay Precision".) Γραμμικότητα: Τα δείγματα υφίσταντο αναλύσεις σε διαφορετικές αραιώσεις. (Bλ. Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ανάκτηση: Τα δείγματα εμπλουτίστηκαν 1 με 19 τρία διαλύματα φυλλικού οξέος (20, 70 και 180 ng/ml). (Bλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή ειδικότητα για το φυλλικό οξύ. (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Αιμολυμένα δείγματα είναι ακατάλληλα για προσδιορισμούς του φυλλικού οξέος στον ορό. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 5000 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για την εκτίμηση της επίδρασης των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα 9 εθελοντών σε απλούς, ηπαρινισμένους και Becton Dickinson SST δοκιμαστικούς σωλήνες (vacutainer). Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (Ηπαρίνη) = 1,05 (ορός) 0,36 ng/ml r = 0,996 (SST) = 0,98 (Απλοί σωλήνες) 0,06 ng/ml r = 0,997 Μέσοι όροι: 16 ng/ml (Ορός) 16 ng/ml (Ηπαρίνη) 15 ng/ml (SST) IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 21

22 Σύγκριση της Μεθόδου (Ορός): Η ανάλυση συγκρίθηκε με την ανάλυση IMMULITE Φυλλικό οξύ σε 156 δείγματα ορού. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 1,8 με 20 ng/ml. Δες γράφ.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,96 (IML) 0,54 ng/ml r = 0,983 Μέσοι όροι: 8,3 ng/ml (IMMULITE 2000) 9,2 ng/ml (IMMULITE) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Kwas foliowy Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczania poziomu kwasu foliowego w surowicy, osoczu heparynowym lub pełnej krwi z kwasem askorbinowym, przydatny do diagnozowania i leczenia chorych z anemią. Numer Katalogowy: L2KFO2 (200 testów), L2KFO6 (600 tesów) Kod testu: FOL Kolor: Pomarańczowy Wprowadzenie Kwas foliowy (folian) oraz witamina B12 są istotnymi składnikami odżywczymi hematopoezy. 1 Przyczynami anemii megaloblastycznej są prawie zawsze niedobory jednej z tych witamin. 1 Przy niedoborze witaminy B12 poziomy folianu w krążeniu są zazwyczaj prawidłowe lub podniesione, ale stężenie folianu w erytrocytach jest często niskie. 2 Niedobory folianu są często wynikiem braków żywieniowych (np. w alkoholizmie) lub zwiększonego zapotrzebowania (np. w ciąży). 1,3 W przeciwieństwie do witaminy B12 kwas foliowy nie jest odporny na temperaturę i tracony jest w czasie długiego gotowania. W związku z tym zapobieganie niedoborom folianu jest zależne od różnic demograficznych, co ma związek z przyzwyczajeniami kulinarnymi i dietetycznymi. 4 Poziomy krążącego kwasu foliowego nie są odpowiednim wskaźnikiem magazynów tkankowych, ponieważ zależą silnie od podaży. 2,5,6 W związku z tym stężenie kwasu foliowego w surowicy lub osoczu może być na poziomie prawidłowym przy równoczesnym niedoborze folianu. I odwrotnie, krążący folian może być niski na długo przed wyczerpaniem się zapasów tkankowych. 2,6 W związku z tym należy równocześnie z pomiarem kwasu foliowego w surowicy czy też osoczu dokonywać oznaczenia folianu w krwinkach czerwonych. 5,7,8 Zasada testu Test kompetycyjny. Próbka w postaci surowicy, osocza lub pełnej krwi z kwasem askorbinowym (do pomiaru folianu w czerwonych krwinkach) przechodzi 2 cykle w aparacie IMMULITE W pierwszym etapie próbka razem z kwasem foliowym związanym z ligandem jest traktowana ditiotreitolem (DTT) w kubeczku reakcyjnym bez kulki. W drugim etapie dodawany jest wodorotlenek sodu/cyjanek potasu (NaOH/KCN). Mieszanina reakcyjna przenoszona jest do drugiego kubeczka zawierającego kulkę opłaszczoną mysim przeciwciałem skierowanym przeciw białku wiążącemu kwas foliowy i białko wiążące kwas foliowy (FBP). Podczas 30-minutowej inkubacji kwas foliowy uwolniony z białek surowicy badanej współzawodniczy o miejsca wiążące na FBP z kwasem foliowym związanym z ligandem. Następnie kulka jest przemywana i dodawana jest do niej fosfataza alkaliczna związana z anty-ligandem. W trakcie ostatniej 30-minutowej inkubacji fosfataza alkaliczna związana z anty-ligandem wiąże się z folianem związanym z ligandem przyłączonym do kulki podczas pierwszej inkubacji. Nie związany sprzężony enzym jest usuwany poprzez odwirowywanie. Dodawany jest substrat, a końcowy proces oznaczania zachodzi według schematu opisanego w Podręczniku Operatora. 22 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

23 Czas inkubacji: 4 30 minut. 2 pozycje na próbkę: jedena na preparatykę próbki badanej, jedena immunoreakcję. Cykle 1 i 2: Alkaliczna denaturacja białek wiążących folian. Cykle 3 i 4: Wiązanie białka i immunoreakcja. Panel Kwas Foliowy/Witamina B12: Aby maksymalnie wykorzystać próbkę, w której ma być oznaczony kwas foliowy i witamina B12 parametry te powinny być badane kolejno, zaczynając od kwasu foliowego. Tworzenie paneli badań opisano w Podręczniku Operatora. Preparatyka próbek Badany musi być na czczo. 10 W celu oznaczenia kwasu foliowego w pełnej krwi lub w erytrocytach należy używać materiału pobranego na heparynę lub EDTA. W celu wyliczenia ilości kwasu foliowego w erytrocytach (wyrażonego w nanogramach na mililitr upakowanych krwinek czerwonych ng/ml) należy znać hematokryt krwi badanej. Ponadto, w celu dokładnego wyliczenia, powinien być określony poziom kwasy foliowego w surowicy u badanej osoby. Osocze pobrane na EDTA nie powinno być używane jako materiał badany. Zalecane jest ultrawirowanie próbek lipemicznych. Surowica zhemolizowana nie jest odpowiednim materiałem do badania. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 Kwas Foliowy nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ materiału na oznaczenie. Surowica lub osocze heparynowe Wymagana objętość próbki: 50 µl surowicy lub osocza Przechowywanie materiału: 8 godzin w 2 8 C lub 6 8 tygodni w 20 C. 12 Unikać nadmiernego wystawiania na bezpośrednie światło słoneczne. Pełna krew (kwas foliowy z erytrocytów) Wymagana objętość próbki: 100 µl świeżej krwi pobranej na heparynę lub pełnej krwi EDTA (do przygotowania hemolizatu). Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA! POTENCJALNE ZAGROŻENIE BIOLOGICZNE Zawiera materiał pochodzenia ludzkiego. Każdą porcję ludzkiej krwi lub składnika krwi pochodzącą od dawców przetestowano metodami zaaprobowanymi przez FDA na obecność przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi nabytego niedoboru odporności typu 1 (HIV-1) i typu 2 (HIV-2), antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby typu B (HBsAg) i przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (HCV). Wyniki tych badań były ujemne (nie wykazały powtarzalnej reaktywności). Jednak żadne badanie nie gwarantuje całkowitej pewności, że te lub inne czynniki chorobotwórcze nie są obecne w materiale; z tym materiałem należy postępować zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej i stosować uniwersalne środki ostrożności PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 23

24 H314, H412 P280, P304 + P340 + P310, P301 + P310 + P331, P303 + P361 + P353 + P310, P305 + P310, P273, P501 Niebezpieczeństwo! Powoduje poważne oparzenia skóry oraz uszkodzenia oczu. Działa szkodliwie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Stosować rękawice ochronne/odzież ochronną/ ochronę oczu/ochronę twarzy. W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO DRÓG ODDECHOWYCH: Wyprowadzić lub wynieść poszkodowanego na świeże powietrze i zapewnić warunki do odpoczynku w pozycji umożliwiającej swobodne oddychanie. Natychmiast skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub lekarzem. W PRZYPADKU POŁKNIĘCIA: Natychmiast skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub lekarzem. NIE wywoływać wymiotów. W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ (lub z włosami): Natychmiast usunąć/zdjąć całą zanieczyszczoną odzież. Spłukać skórę pod strumieniem wody/ prysznicem. Natychmiast skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub lekarzem. W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO OCZU: Natychmiast skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub lekarzem. Unikać uwolnienia do środowiska. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: wodorotlenek sodu; Kwas foliowy Klin Odczynnikowy A Zawiera: 2-metylo-2Hizotiazolino-3-on; Kwas foliowy Kalibratory Odczynniki: Przechowywać w temp. 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Niektóre składniki zestawu mogą zawierać azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl, użyty jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Chloramphenicol, o sugerowanym działaniu rakotwórczym, w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl dodawany jest jako konserwant. Powyższe stwierdzenie wiąże się z przepisami stanu jest Kalifornia. NaOH/KCN: Roztwór zawiera cyjanek. Unikać kontaktu ze skórą. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Kwas Foliowy Pojemnik z Kulkami (L2FO12) Z kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-białku wiążącym kwas foliowy. Stabilny w 2 8 C do daty ważności. L2KFO2: 1 Pojemnik L2KFO6: 3 Pojemniki Kwas foliowy Klin Odczynnikowy A (L2FOA2) Z kodem kreskowym. Każdy klin (oznaczony A ) zawiera 15 ml dithiothreitolu (DTT) w buforze, 18,1 ml kwasu foliowego sprzężonego z ligandem w buforze i 15 ml NaOH/KCN (NHCN) w buforze, buforze konserwantem. Przed otwarciem stabilny do daty ważności w 2 8 C. Po otwarciu stabilny w 2 8 C przez 30 dni. L2KFO2: 3 Kliny L2KFO6: 6 Klinów Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu 24 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

25 kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. Kwas foliowy Klin Odczynnikowy D (L2FOD2) Z kodem kreskowym. Kliny (oznaczone D ) zawierają 11,5 ml białek wiążących folian w buforze; 11,5 ml alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z anty-ligandem w buforze z konserwantem. Stabilny w temp. 2 8 C do daty ważności. L2KFO2: 1 klin L2KFO6: 3 kliny Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. Kwas foliowy Kalibratory (LFOL, LFOH) Dwie fiolki (niski i wysoki) zawierające liofilizat kwasu foliowego w matrycy białka ludzkiego z konserwantem. Zawartość każdej fiolki rekonstytuować 3,0 ml jałowej wody destylowanej i wymieszać delikatnie przez odwracanie aż do całkowitego rozpuszczenia. Po rekonstytucji stabilne do 30 dni w 2 8 C lub do 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2KFO2: 2 zestawy L2KFO6: 2 zestawy Przed wykonaniem kalibracji umocować na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Materiały dostarczane oddzielnie Witaminy B12/ Kwas foliowy rozcieńczalnik próbek (L2FVZ) Do rozcieńczania wysokich próbek surowicy w urządzeniu. 25 ml skoncentrowanej, gotowej do użycia, wolnej od witaminy B12 i kwasu foliowego matrycy białka ludzkiego, z konserwantem. Po otwarciu w 2 8 C przez 30 dni 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). Przed wykonaniem kalibracji umocować na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. L2FVZ: 3 nalepki Kwas askorbinowy: dostępny z Siemens Healthcare Diagnostics w postaci fiofilizatu (numer katalogowy: ). Wymagany jedynie do oznaczania kwasu foliowego w krwi pełnej i w krwinkach czerwonych. Nieotwierany pozostaje stabilny w temperaturze 2 8 C do daty ważności na etykiecie fiolki Świeży 0,5% roztwór należy przygotować bezpośrednio przed użyciem. Zawartość fiolki kwasu askorbinowego rekonstytuować 30 ml destylowanej lub dejonizowanej wody. Pozostawić rekonstytuowaną mieszaninę na 15 minut w temperaturze pokojowej (15 28 C), do czasu całkowitego rozpuszczenia, następnie przelać zawartość fiolki do innego pojemnika i dodać kolejne 30 ml wody destylowanej. (Askorbinian sodu nie jest odpowiednim zamiennikiem.) L2SUBM: Substrat Chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór Płuczący L2KPM: Zestaw Czyszczący LRXT: Probówki reakcyjne(jednorazowe) L2ZT: 250 Probówek na rozcieńczalnik próbek ( mm) L2ZC: 250 Kapturki na Rozcieńczalnik Próbek Ponadto niezbędne woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Oba Kliny Odczynnikowe: A (L2FOA2) i D (L2FOD2) muszą być załadowane do aparatu przed przystąpieniem do oznaczenia. Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 4 tygodnie IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 25

26 Próbki kontrolne: Przestrzegać przepisów państwowych i wymogów kontrolnych w zakresie częstotliwości kontroli jakości. Stosować kontrole lub pule surowic co najmniej o niskim i wysokim poziomie kwasu foliowego. Siemens Healthcare Diagnostics zaleca stosowanie dostępnych w handlu próbek kontroli jakości o co najmniej 2 poziomach (niskim i wysokim). Uznaje się, że test przebiega prawidłowo, gdy uzyskane wartości analitu plasują się w przyjętym dla Kontroli zakresie dla danego analizatora lub w zakresie opracowanym w ramach wewnątrzlaboratoryjnego systemu zapewnienia jakości. Oznaczenie kwasu foliowego w Pełnej krwi i Erytrocytach Przygotowanie hemolizatu: Pobrać materiał w postaci pełnej krwi i oznaczyć hematokryt. Rozpuścić krwinki materiału badanego przygotowując rozcieńczenie próbki 1 w 26 ze świeżo przyrządzonym 0,5% roztworem kwasu askorbinowego (np. 40 μl pełnej krwi i 1000 μl 0,5% kwasu askorbinowego). Nie używać askorbinianu sodu. 9 Wymieszać i pozostawić na 180 minut w temperaturze pokojowej (15 28 C) w ciemnym miejscu. 10 Przechowywanie hemolizatu: 3 godziny w 2 8 C lub 2 tygodnie w 20 C. 10,11 Chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym. Po okresie inkubacji, umieścić spreparowaną próbkę badaną w statywie na próbki. W razie konieczności oznaczenia Kwasu foliowego w hemolizacie należy wprowadzić test w rozcieńczeniu ręcznym ( 26, dla uwzględnienia traktowania kwasem askorbinowym). Rozcieńczanie próbek i Ręczne rozcieńczanie: patrz Podręcznik operatora IMMULITE Obliczenia Wyniki w Pełnej Krwi I Erytrocytach Wyświetlone wyniki kwasu foliowego w pełnej krwi będą uwzględniały współczynnik rozcieńczenie ręcznego wprowadzony jako liczba 26 przez Przycisk współczynnika ręcznego rozcieńczenia znajdujący się w menu Listy pracy. (Uwaga: IMMULITE 2000 uwzględnia ręczne rozcieńczenie 1-w-26 wynikające z traktowania kwasem askorbinowym.) Wyniki dla ertytrocytów W celu określenia przybliżonego stężenia kwasu foliowego w upakowanych krwinkach czerwonych (ng/ml) należy pomnożyć stężenie kwasu foliowego w pełnej krwi (R) przez 100/H, gdzie H jest hematokrytem wyrażonym w procentach: Kwas foliowy w ertrocytach R (100 / H) Dokładnie, przed pomnożeniem przez 100/H należy od folianu w pełnej krwi odjąć stężenie folianu w surowicy (S). Pełen wzór wygląda następująco: Kwas foliowy w ertrocytach = (R [S (100 H) / 100]) (100 / H) Ponieważ jednak wartość w kwadratowych nawiasach jest w większości przypadków bardzo mała w stosunku do R, można ją w obliczeniach pominąć. Oczekiwane wartości Ze względu na silny wpływ diety i jej wzbogacania na poziom kwasu foliowego zakresy referencyjne dla poszczególnych populacji geograficznych różnią się między sobą. Na przykład w USA zalecone przez Food and Drug Administration w 1996 roku wzbogacenie diety w produkty pełnoziarniste 13 spowodowało podwojenie poziomu kwasu foliowego w osoczu osób nie zażywających preparatów witaminowych, a także spadek zachorowań spowodowanych niskim poziomem kwasu foliowego, to jest poniżej 3 ng/ml (7 nmol/l). 13 Oczekuje się, że podobny wpływ program miał na zmianę poziomu folianu w krwi pełnej i erytrocytach, które są lepszym wskaźnikiem odzwierciedlającym zasoby tkankowe. Opierając się na podobieństwie z testem IMMULITE Kwas Foliowy (patrz: Porównanie metod) można oczekiwać, że zakresy wartości referencyjnych dla obu testów będą identyczne.uwaga: wartości referencyjne ustalono w USA przy użyciu testu IMMULITE Kwas Foliowy przed wprowadzeniem zaleconej przez FDA diety wzbogacającej. 26 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

27 Zakres referencyjny dla kwasu foliowego w krwi pełnej ustalono w grupie 122 widocznie zdrowych osób pozostających na czczo. Kwas foliowy w surowicy Kwas foliowy w pełnej krwi 3 17 ng/ml (6 39 nmol/l) ng/ml ( nmol/l) Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Białko wiążące folian będące w klinie odczynnikowym wchodzi w pewnym stopniu w reakcję krzyżową z lekiem o nazwie Metotreksat (MTX), stosowanym jako chemio-terapeutyk w leczeniu nowotworów złośliwych. U chorych przyjmujących ten lek nie należy oznaczać kwasu foliowego przy użyciu testu Kwas Foliowy, ponieważ po infuzjach wysokich dawek Metotreksatu osiąga on stężenie ng/ml, a po 48 godzinach 2000 ng/ml. Należy także zachować szczególną uwagę podczas interpretowania wyników oznaczeń folianu u osób niedawno poddawanych terapii tym lekiem lub lekiem o podobnej budowie. Należy ostrożnie interpretować wyniki oznaczeń kwasu foliowego mieszczące się przy dolnej granicy normy. 10 Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin Chem 1988:34:27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i na wykresach. Wyniki podano w ng/dl. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek surowicy pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Przelicznik: ng/ml 2,266 nmol/l Zakres kalibracji: 1 24 ng/ml (2,3 54 nmol/l) Test wykazuje zgodność pomiarową z wewnętrznymi standardami wytwarzania dzięki zastosowaniu kwalifikowanych materiałów i metod pomiaru. Czułość analityczna: 0,8 ng/ml (1,8 nmol/l) Precyzja w serii: Wykonano obliczenia dla próbek oznaczanych w 20 powtórzeniach w jednej serii (patrz: tabela Precyzja w serii ). Precyzja w seriach: Wykonano obliczenia dla próbek oznaczanych w 12 różnych seriach (patrz Tabela Precyzja Całóść ). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom (patrz: tabela Liniowość ). Odzysk: Badano próbki wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 roztworami kwasu foliowego o stężeniach, kolejno: 20, 70 i 180 ng/ml (patrz: tabela Odzysk ). Specyficzność: Metoda jest wysoce specyficzna w stosunku do kwasu foliowego (patrz: tabela Specyficzność ). Bilirubina: Obecność bilirubiny w stężeniu do 200 mg/l nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Hemoliza: Próbki zhemolizowane nie są odpowiednie do oznaczeń folianu w surowicy. Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do 5000 mg/dl nie wpływa na IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 27

28 wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Wpływ materiału na oznaczenie: Wpływ rodzaju próbki na oznaczenie określano u 9 wolontariuszy w próbkach krwi pobranych do robówek zwykłych, z heparyną oraz z barierą żelową SST próżniowego systemu Becton-Dickinson. Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (Hepariyna) = 1,05 (Surowica) 0,36 ng/ml r = 0,996 (SST) = 0,98 (Zwykłe probówki) 0,06 ng/ml r = 0,997 Średnie: 16 ng/ml (Surowica) 16 ng/ml (Heparyna) 15 ng/ml (SST) Porównanie metod (Surowica): Test porównywano testem IMMULITE Kwas foliowy w grupie 156 próbek surowicy. (Zakres stężęń: od około 1,8 do 20 ng/ml. Porównaj wykres.) Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,96 (IML) 0,54 ng/ml r = 0,983 Średnie: 8,3 ng/ml (IMMULITE 2000) 9,2 ng/ml (IMMULITE) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KFO 10 {25} Changes in this Edition: cc#eu22548: 1) Under Warnings and Precautions, added biohazard symbol and potential biohazard statement, caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 2) Under References, added citations from the potential biohazard statement. 3) Changed Origin: UK to Made in: UK. 4) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 5) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej 28 IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, )

29 Symbol Definition En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! Δυνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie LOT Symbol Definition En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: Διατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Health Hazard Cz: Zdravotní riziko El: Κίνδυνος για την υγεία Pl: Zagrożenie dla zdrowia En: Exclamation Mark Cz: Vykřičník El: Θαυμαστικό Pl: Wykrzyknik En: Corrosion Cz: Koroze El: Διάβρωση Pl: Działanie żrące En: Skull and Crossbones Cz: Lebka se zkříženými hnáty El: Νεκροκεφαλή με διασταυρούμενα οστά Pl: Czaszka i skrzyżowane piszczele En: Environment Cz: Prostředí El: Περιβάλλον Pl: Środowisko IMMULITE 2000 Folic Acid (PIEL2KFO-10 {25}, ) 29