ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕ. Αιμιλία Χατηθγιάννθ

Transcript

1 ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕ Αιμιλία Χατηθγιάννθ

2 ΚΟΠΟ-ΗΜΑΙΑ Μζκοδοσ πολλαπλαςιαςμοφ μικροβίων ςε κρεπτικά υλικά ςε ελεγχόμενεσ εργαςτθριακζσ ςυνκικεσ Σφποσ Ποςότθτα μικροβίων βακτιρια μφκθτεσ παράςιτα Entamoeba Plasmodium Leishmania Trypanosoma Trichomonas Αιτιολογικι διάγνωςθ λοιμϊξεων Χοριγθςθ κατάλλθλθσ κεραπείασ Περιοριςμόσ μετάδοςθσ Επιδθμιολογία

3 CCDR: Volume 40 S-1, October 9, 2014 Outbreak of E. coli O157:H7 associated with lettuce served at fast food chains in the Maritimes and Ontario, Canada, Dec περιπτϊςεισ εργαςτθριακά επιβεβαιωμζνεσ, με καλλιζργεια εντερίτιδασ E. coli O157:H7 13 (42%) νοςθλεία - 1 (3%) αιμολυτικό ουραιμικό ςφνδρομο ε επόμενθ ςυνζντευξθ + 10 ε λιγότερο από μία εβδομάδα ςυςτάκθκε ειδικι επιτροπι που επιβεβαίωςε τθν κατανάλωςθ μαρουλιοφ από μια αλυςίδα fast food ωσ πθγι τθσ λοίμωξθσ και ο προμθκευτισ απζςυρε όλθ τθν ποςότθτα μαρουλιοφ που είχε διακζςει

4

5 Σα μικρόβια αναπτφςςονται (καλλιεργοφνται) ςε: Θρεπτικά υλικά (βακτιρια, μφκθτεσ, παράςιτα) Σεχνθτά κρεπτικά υλικά (παραςκευάηονται ςτο εργαςτιριο) Κυτταροκαλλιζργειεσ (βακτιρια, ιοί) Εμβρυοφόρα αυγά κότασ (ιοί) Πειραματόζωα

6 Θρεπτικά Τλικά Περιζχουν κρεπτικζσ ουςίεσ και παράγοντεσ κατάλλθλουσ για τθν ανάπτυξθ και τον πολλαπλαςιαςμό των μικροβίων Νερό Πθγι ενζργειασ και άνκρακα (πρωτείνεσ, υδατάνκρακεσ) Άλατα Πθγι αηϊτου Ιχνοςτοιχεία Επιτρζπουν τθν απομόνωςθ, διαχωριςμό και ταυτοποίθςθ των πακογόνων μικροοργανιςμϊν και τον ζλεγχο ευαιςκθςίασ ςε αντιμικροβιακά Αποςτειρϊνονται με κερμότθτα (κλίβανοσ υγρισ αποςτείρωςθσ: 121 ο C, 2 atm, min) ι διικθςθ

7 Σφποι Θρεπτικών Τλικών ανάλογα με ςφςταςη και χημική ςφνθεςη νερό, εκχφλιςμα κρζατοσ πεπτόνεσ και χλωριοφχο νάτριο *Άγαρ ςτερεοποιθτικό (τιξθ 80 ο /πιξθ 30 ο - εκχφλιςμα από καλάςςια φφκθ- διαφανζσ και δεν επθρεαηει τθν ανάπτυξθ μικροβίων (αποικίεσ, διαχωριςμόσ μικτϊν)

8 Καλλιζργεια ςε κρεπτικά υλικά: τερεά ε τρυβλία Διαχωριςμόσ αποικϊν Ημιποςοτικι Φυςιολογικά ςτείρα βιολ. υγρά και ιςτοί ςυνοδεφονται από καλλιζργεια ςε υγρό Θρ.Τλ. Τγρά Δεν διαχωρίηουν μικτοφσ πλθκυςμοφσ Αραιϊνονται αναςταλτικζσ ουςίεσ του δείγματοσ Για ανάπτυξθ μεγάλων ποςοτιτων Αραιϊςεισ (ποςοτικά)

9 ΗΜΙΡΡΕΤΣΑ ΘΡΕΠΣΙΚΑ ΤΛΙΚΑ Θρεπτικά ςυςτατικά διαλυμζνα ςε αποςταγμζνο νερό και άγαρ 0.5% Motility άγαρ (για ζλεγχο κινθτικότθτασ)

10 1. ΒΑΙΚΑ ΘΡΕΠΣΙΚΑ ΤΛΙΚΑ. Θρεπτικόσ ηωμόσ (500 g κρζασ ςε 1 liter νερό, 10 g peptone, 5 g sodium chloride, ph 7.3. ), Θρεπτικό Άγαρ ( 2.5% άγαρ ςε κρεπτικό ηωμό) Πεπτονοφχο νερό ( Peptone 1%, sodium chloride 0.5%) {Staphylococcus και Enterobacteriaceae} 2. ΕΜΠΛΟΤΣΙΜΕΝΑ ΘΡΕΠΣΙΚΑ ΤΛΙΚΑ. + αίμα, ορόσ, ι αυγό (αιματοφχο άγαρ (5-10% αίμα defibrinated προβάτου ι αλόγου, Lowenstein- Jensen) 3. ΕΚΛΕΚΣΙΚΑ ΘΡΕΠΣΙΚΑ ΤΛΙΚΑ. Περιζχουν ουςίεσ που επιτρζπουν τθν ανάπτυξθ ενόσ είδουσ βακτθρίου, ενϊ ταυτόχρονα οι ίδιεσ ουςίεσ αναςτζλλουν τθν ανάπτυξθ άλλων βακτθρίων (MacConkey agar για εντεροβακτθριοειδι -χολικά οξζα εμποδιηουν gram+). Μπορεί να χρθςιμοποιθκοφν αντιβιοτικά για αναςτολι ανάπτυξθσ 4. ΔΙΑΧΩΡΙΣΙΚΑ ΘΡΕΠΣΙΚΑ ΤΛΙΚΑ. περιζχουν δείκτθ που αλλάηει με τθν ανάπτυξθ ςυγκεκριμζνων μικροβίων (αιματοφχο-αιμόλυςθ, MacConkey agar neutral red Lac(+) Gram - κόκκινεσ αποικίεσ Lac(-) Gram (-) άχρωμεσ αποικίεσ 5. ΤΛΙΚΑ ΜΕΣΑΦΟΡΑ. Cary-Blair medium, Amies medium, Stuart medium. 6. ΤΛΙΚΑ ΦΤΛΑΞΗ. Egg saline medium, chalk cooked meat broth.

11

12 Ποιο κρεπτικό υλικό χρθςιμοποιοφμε??? Ανάλογα με το δείγμα Ανάλογα με τθν κλινικι υποψία

13 Εμβολιαςμόσ ςε υγρά κρεπτικά υλικά

14 πορά ςε ςτερεά κρεπτικά υλικά

15 Επϊαςθ 37 ο C Αερόβια CO2 Αναερόβια

16 ΜΕΣΑΒΟΛΕ ΣΟ ΘΡΕΠΣΙΚΟ ΤΛΙΚΟ ΑΙΜΟΛΤΗ β πλιρθσ α ατελισ γ όχι αιμόλυςθ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΧΡΩΣΙΚΗ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΒΛΕΝΝΗ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΜΤΡΩΔΙΑ

17 Αξιολόγηςη αποικιών ςε ςτερεά θρεπτικά υλικά Μορφολογία : μζγεκοσ, ςχιμα, φψοσ, περιφζρεια, ςφςταςθ, χρϊμα, πυκνότθτα, επιφάνεια ςχιμα φψοσ περιφζρεια

18

19

20

21

22 E coli

23 Klebsiella pneumoniae on BAP

24

25

26 Χρϊμα Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa

27 Staphylococcus aureus and Staphyloccocus epidermidis

28 proteus mirabilis Ερπιςμόσ

29

30 Μεταβολέσ ςτο θρεπτικό υλικό κ.α. Αιμόλυςθ Παραγωγι χρϊματοσ ςε διαχωριςτικά κρεπτικά υλικά Μυρωδιά P.aeruginosa: «γιασεμί» Proteus mirabilis:«καμένη σοκολάτα» Streptococcus milleri group:«καραμέλα» Eikenella corrodens:«χλωρίνη» Βλζννθ

31

32

33

34 ΣΑΤΣΟΠΟΙΗΗ ΒΑΚΣΗΡΙΩΝ Μορφολογία αποικίασ Χρϊςθ Gram αποικία Βιοχθμικζσ δοκιμαςίεσ Ορολογικζσ δοκιμαςίεσ

35 ταφυλόκοκκοσ τρεπτόκοκκοσ Βιοχθμικι ταυτοποίθςθ

36 ΕΙΡΑ ΕΡΓΑΙΑ

37