ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΡΙΤΗΡΙΑ ΕΠΙΛΟΓΗΣ ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ

Transcript

1 - - ό ό : Ω ί ό ί ώ.. ά

2 ή ί ός ή ς ύ ί ί ή έ ώ ό. ή ς ά ς ής ό ός ά ς ή έ ός ή ς ί ής ί ς. ό έ ώ - ώ ή ής ή ς- ί ά ά ς ί ς.

3 ά ί ί έ έ ά ύ ή, ό ί ά, ό ό ά έ ά ής ί ύ George Wald

4

5 ή ί έ ς ί ύ ό ς ί ς ά έ ί ή ό (.. ή ί ). ή ί ύ ό ό έ ί ά (.. ός ά Southern).

6 ίς ί ές έ ές έ DNA ές έ RNA ές έ ϊ ώ

7

8

9 ή ί ή ί 1500 ί ό έ ό. ό ό ύ m ώ ά ά ς έ ή ύ ά ό 50 m. Zacharias Janssen Robert Hooke Antony van Leuwenhoek

10 ή ί Theodor Schwann, Matthias Schleiden ώ έ ς ς ής ί ς ά ύ έ ό ά ύ Alfred Donne ύ ώ ά ί ό ό ό Trichomonas vaginalis Carl Zeiss ό ό ή ί ό ό.

11 ή ί ώ ί ό ό ύ 1838 ό lfred Donne. ί ύ ί

12 ή ί ά ή ά ό ί ά ύ ό ό ά nm. ά ά ώ, ά ό ί ό ύ ί, ύ ί, ί ς ά ς.. ά ύ ί ύ ό ύ ώ.

13 ή ί

14 έ ς Wilhelm Roux ί ϊ ά ύ ό ς ά ό ό Ross Harrison ί έ ώ ς ό ί έ. ό έ ώ ά, ϊ ώ ά, ώ, ώ. ί έ ς έ ς ί ς.

15 έ ς έ έ ή ά έ ά in vitro ό ς ό 24 ώ ς. έ ς ύ ά ό έ ύ ά ό ό ώ ί ς ίς. ύ ύ ύ ά ά ώ ς ά.

16 3 3 Fibroblast cells Smooth muscle cells MCF7 breast cancer HeLa cervical cancer cells

17 έ ς ύ ώ ά ά ό έ ί ό. ή ύ ί ί Petri ή ές ά ς

18 έ ς Ό ί έ ς ός ός ή ύ, ύ ώ ό ί ς έ ς ύ έ ύ ό ό ό ό ί ί έ, ί ύ όά. ή ώ ά in vitro ί ό ύ ώ ό. Ά ς ή ς, έ ύ ά ά.

19

20 έ ς ό έ έ ύ ύ ύ ό ά ά ά ή. ή ά ό ώ ς ύς ( ή, ύ ς, ό ) ί ύ ή.

21 έ ς ή ς ύ ς ό ής (contact inhibition of growth) ός ά ά έ ά ή ς. ί ής άς. ές ές ί ές ύ ς ϊ ή έ.

22 έ ς έ ς in vitro ί ί ς ό ό ή ά ή ί. ύ έ ς : ός ά ή ί ός ά ς ός DNA ή έ ή ϊ ώ ά

23 ς ύ ύ έ ή?

24 ός ά ά ό ς ής ά ς ώ ά ί έ ς ς ά ς. ά ί ώ ά ς ές, ές ές ς ό ς. ό ό ς ί ς ής ί ό ς.

25 ά έ ς g έ ής ς ής. ύ ς ό 100 έ ς 60,000 rpm ( ές/ ό) ά έ?

26 ί ά ς- έ ί ά ( ά ώ, ί ώ ί ). 1 έ ί : ή ς, έ ύ 2 έ ί : ό, ώ 3 έ ί : ώ, ύ έ ς ά ί έ ί ί, ύ ύ ή ς ό ς ί ς ύ ά ί, DNA, RNA ϊ ς ή ή.

27 Ω

28 DNA

29 Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

30 Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

31 ό ς ής ϊ ά έ ϊ ς

32 ό ς ής ί ά ς

33 ϊ ά έ ύ ό ό ό ώ DNA: ϊ ό ύ RNA: ϊ ό ύ ή ά ί ί, ί ί ό: ύ ά ό ( ό ή ό ) ές ί ς ί ά ί ς ές ί ς.

34 DNA

35 DNA

36 Hydrogen Bonds H H H H O O H C C C C N N C ί H N H H N C C C C N N H N C ί H O N H C C C N N C ί H H H N C C C C N N H N C ί N H O H

37 DNA: ή έ DNA έ ή ής έ ς. ί ώ ί ό έ ύ ύς ό ά ύ ώ ά.

38 Denaturation - Renaturation Denaturation Renaturation Doublestranded DNA Singlestranded DNA Initial Base pairing Renatured DNA

39 ό DNA ό DNA ό ύ, ά ά ς ά έ ά ί ά ί ά. ά ά ώ ά ά ί, ϊ ς ϊ ά έ ί ύ ά. ϊ ά έ ύ ί ύ ϊ ς. ϊ ά έ έ ύ ό ς ϊ ς. ός ί ή CHCl

40 ό DNA ά ί ϊ ώ ϊ ά έ ή ό. ό ς ές ς ί ς, DNA έ ί ό ά ώ. ή ς ά ς ί ή ό ό ς EDTA, ί ύ ό ά ά έ ά.

41 Polymerase Chain Reaction (PCR) ή ί ά ς ή έ ς ής DNA in vitro. ύ ή ή ώ DNA ά ύ ί. ή ί ά ός ύ ά έ ς ί ό ή : ά DNA (Denaturation) ό ώ (Annealing) ή ώ (Extension)

42 Polymerase Chain Reaction DNA ί - ές (Primers) ύ ς ά ς (dntps) DNA Taq ά ό ά dh 2 O

43 Polymerase Chain Reaction 1. έ ς ί ς ός ί DNA ί ό ά ά ό έ 2. ό ί 2 (Tm). ώ ώ ς ές ί ς 3. ή DNA. ς ά ί ς- ή ς ς ό ί ί ή ς ής DNA Taq ά ς.

44 Temperature Melting 94 o C PCR 0 T i m e

45 Temperature Melting 94 o C PCR 0 T i m e 3 5 Heat 5 3

46 Temperature Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 0 T i m e

47 Temperature Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x 0 T i m e 3 5 Heat 5 5 Heat 5 5 3

48 Temperature Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x 0 T i m e

49 Temperature Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x T i m e Heat 5 5 Heat 5

50 Temperature Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x T i m e

51 Temperature Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30x T i m e Fragments of defined length

52 DNA Between The Primers Doubles With Each Thermal Cycle Number Cycles

53 Polymerase Chain Reaction έ ς PCR ί ά ή ί, έ ό ί ς ός ό ί DNA έ ί. PCR ί ή ά ώ ώ ώ ό. ί ς ί ή ό ά ί ό ό ί έ έ ό ό ( ί έ, ί ί ς, ύ, έ ς ή ή ά ώ ή ύ ). έ ς ή ί ή ς DNA fingerprinting.

54 Polymerase Chain Reaction ή PCR: ά ί, ό ύ. ά ό έ έ ό DNA. Έ ύ ά ές (primers) ύς ς ς ές ές ί ς DNA ή ό. ή PCR: ώς ές ά ς ί ς ύ. ώς ές ά ς ό ύ ς έ.

55 ό έ έ έ ς ί ς ϊό PCR ί ό έ (gel electrophoresis). ό PCR ώ έ gel ό ς. ό ό ί έ ός ύ ύ ς (buffer) ϊό ύ έ gel. DNA ί ά έ ό. ί ύ ώ ς, DNA ί ς ά έ ό.

56 ό έ ό ά DNA ύ ς ά ς ό ύ ά ύ. ς ά ς (bands) ί DNA ς ί ύ ί (ethidium bromide) ς ί ώ ς ς (UV). Έ έ ύ ς ώ ί ϊό έ έ ς. ά ός έ ϊό ς gel, ς έ ύ ς ί ό PCR.

57 ό έ ή ό ς

58 ό έ DNA buffer wells Cathode (negative) Anode (positive)

59 ό έ Gel ό ς ό ς ί UV. ή ί ός gel ό ς.

60 ό έ ή ό ό ς ή ή gel ό ς ές ό ς DNA ύ ί ές. ή ά ή ή ό ής ί ϊό ς b

61 ή ά DNA (DNA fingerprinting) ύ DNA. ώ 1985 ό Sir Alec Jeffreys. ή ή ς ής ί έ ός ά ί DNA ή ά ώ ύ ά έ έ ς ί ύ ό έ. ώ DNA έ ές ί ς ά ( ές ς ό DNA), ί ς ά ώς. ό ς ές

62 έ ς ά DNA (DNA fingerprinting) DNA fingerprinting ί έ ς : ί ό ς ί ά

63 έ ς ά DNA (DNA fingerprinting) 1. ός DNA PCR. 2. έ έ DNA. 3. ά ϊό PCR gel ό ς. 4. ά ά ς ό ς ά ς DNA ί ά έ ός ς. 5. Ό 2 ά ς DNA ά, έ ί ό ί, ί ό ά έ ά. ή ή ί έ ς ό ς ί ύ ύ ό.

64 έ ς ά DNA (DNA fingerprinting) ύ DNA έ ό ς.

65

66 ύ ός ά Southern ή ό Ed Southern to 1975 ή ί ί ί ς ή ί ς έ ς ί ς ά DNA. ή ά DNA ό ή έ ί ύς ές ϊ ώ έ.

67 ύ ός ά Southern DNA έ ό ά ά ή ί ς ή ό ς ά ό ί ό ί ύ ί, ίς ί ή ά. ά ά ά, ό ύ ή ή έ ώ ί. έ ύ ύ ά ί ό.

68

69 ύ ός ά Southern

70 ύ ός ά Southern

71 ύ ός ά Southern

72 ύ ός ά Southern ή ή έ ή ά ή ό ή ό ό ς έ ς b

73 RNA

74 Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

75 Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

76 Real-Time PCR PCR ό ό. ό έ ύ ύ ί ί ς ής έ ς ί. Real-time PCR ά ό έ ά ά ά ύ ς ής ί ς ς ά ς ό ό. ό έ PCR, ί ός ό ς ές έ έ ς ς (probes) έ ί ύ, ώ ί PCR- ϊό ό ό.

77 Real-Time PCR probes έ 5 ά ς ί ί 3 ά ς ά ί ί ά ό ς ώ ς ό ί ές έ ς. probes ύ ί ό DNA ά. ό ί έ probes ί ί. Ό ό ς ( ά ύ έ ά ό DNA ά ) ύ, ί ή ί ί ύ

78 ά ύ ί ό ί ή ή ύ ύ ί ί ός ός ά ή ί ς.

79 Real-Time PCR ή : ί ί ό ό ί ύ ή ό RNA ά ό ά έ ί ς ά ύ ϊό ς ς ί ς, ό ς ό έ. ή : ό ό ς ύ ί ί έ ή ή

80 ύ ός ά Northern ή ή ί ή ς ύ ς ύ ά Southern. ί έ ς ό ς ός ί ύς ύς.

81 ύ ός ά Northern ό RNA. ή ί ή ς ί ς ί ς έ. ό ύ ό ό ή, ί ό ή έ ί ή. Έ ί ί ή ύ ί ί ό ό ί. ός ά ς ί ά ς ό ό ί ί. (Ό ό ό mrna ά ό ύ ός ύ, ό ς ό ς ές ύ, έ ς ό ύ ή ί ς)

82

83 ύ ός Northern

84 ύ ός Northern

85 ί ς cdna Microarrays ό ή ά ί ό. ί ί ί ά έ ύ ί. ύ ς ής έ ς ί ύ ύς έ ύ ή ά. ά έ ώ ώ ώς ς ής ί ς ά ί έ ύ.

86 ί ς cdna ά ί έ ί έ ύ ς ί ς ί ς έ ς ί. Glass slide έ ά ς ί ς ί ή ά έ ά ί ύ.

87 ί ς cdna έ ά ί ς ά ύ έ ί ό ς έ ς ώ ί mrna. ί ί ό έ ά ί.

88 ί ς cdna

89 GREEN represents Control DNA, where cdna derived from control cells is hybridized to the target cdna. RED represents Sample DNA, where cdna derived from target cells hybridized to the target cdna. YELLOW represents a combination of Control and Sample cdna, where both hybridized equally to the target cdna. BLACK represents areas where neither the Control nor Sample cdna hybridized to the target cdna.

90 ί ς cdna : ά ί έ ς ά ί ή ό ό : ό ό ς ί ί ή Ά ώ ώ ά

91 ί ς ώ ί ς ώ ύ έ ς έ ς ύ ό ί ς έ ί ς. ό ύ ς 600 ί ύ ό ίς. έ ί έ ά ό. ώ ή ς ί, ώ ό..

92

93 ί ς cdna Έ ί ί ί ς ή έ ί ς ώ ά ί Έ ς ί ς ό

94 ί ς ώ ί ά ά / ό ή ί ά ό ύ ή ής ύ ί ς ή ς ό ί έ ό ί ό ό ύ.

95 Ϊ

96 Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

97 Central dogma of Biology DNA Gene level RNA Gene expression level PROTEIN Functional level

98 ό SDS- ί ς έ ς ό ϊ ώ. ός ό ί ά ό ς ί ή ά ό ς ά ς. ά ό έ ό ί. έ έ ό ύ ύ έ 1000 ές ϊ ς.

99 ό SDS- ί ς ά ϊ ώ ά έ SDS (sodium dodecyl sulfate). έ ϊ ώ ή έ ή (gel). ί ύ ί ό ή ά ή ή έ. ή ί ά έ ί ϊ ς ή ώ.

100 ό SDS- ί ς

101 ό SDS- ί ς

102 ό SDS- ί ς

103 ύ Western έ ς ύ ς ί ϊ ς έ ό ή έ ό, ά ό ύ ό ό έ ά.

104 ύ Western ά ή ή, ό ς ϊ ς ός ώ ς έ ά ί ς έ ά ί ό ς ή ί ϊ, ώ ς ί ί ί έ ά. ί ό, έ ά έ ϊό ή ό ό.

105 ύ Western H ό SDS- ί ς ά ϊ ώ ί ώ έ ί ί ϊ ς

106 ύ Western

107 ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ός ό ς έ ς έ. ή ί ϊ ς ή ά ς ής ί ς. ί ί ό ς ό ό ό (HIV, salmonella ) ό ς ί ώ.

108 ELISA έ ς ί ό ό ό έ ί έ ά ς ά ς. ός έ ς ύ ά ί έ ί, ί ύ ό ί ύ ή.

109 ELISA

110 ELISA

111 ELISA ύ ί ή ί ώ ή ό. ή ά ό. Ά έ. ά ή έ ς. ά ά ς ύς ά.

112 Western blot vs ELISA ί ί ς ύ ή ς ϊ ς ή ς ϊ ς ό ά ς ς ϊ ς ί ί ς ό ς ϊ ς έ ί ί ά ό ά ά ή έ ς

113 ί ής Flow cytometry έ ή ί ής FACS FACS (fluorescence activated cell sorter) έ ς ά ί ό. ί ής έ έ ώ / ώ ώ ά

114 ής

115 ί ής Charged Plates Single cells sorted into test tubes 488 nm laser - + ύ ί ί ς ές έ έ ό ή ί ώ ά ύ ί ί ύ ό έ έ ό ί ί. έ ός ή ς laser. έ ό ί ί ώς έ ά έ ς ά ς έ ά ά.

116 ί ής : ός ό ώ ώ ά ά ύ ύ (cell cycle analysis) ός ύ ά (apoptosis) ώ ί ώ ό ώ ί ό ό ά

117 ός ύ ς G 2 M G 0 s G 1 C o u n t 0 DNA Analysis G 0 G 1 s G 2 M N 4N DNA content

118 0 75 Counts ά ύ ύ N 4N PI Fluorescence

119 B

120 Application of the nuclear factor- B inhibitor BAY for the treatment of endometriosis: a case study ός ός: έ ς ά ς ύ ά ύ ί ί ς ί ς. έ : ός ά ς ί ό ά ά ί ώ ς έ ώ ί caspase-3, -8-9 ή ς έ ς - ώ ί Bcl-2 Bcl-X L. Nasu et al., (2008), Am.J.Physiol.Endocrinol. Metab.

121 Elevated expression of CYP1A1 and -SYNUCLEIN in human ectopic endometriosis compared with eutopic endometrium ός ός ύ ώ ύ ύς ό ίς ί. έ : ί ά ίς ί Singh et al., (2008), Mol.Hum.Reprod.

122 ύ ά ώ ά ς έ ί ί ό ά ς ά ς ές ές ς ό ς. ές ς ής ί ς ύ ύ ό έ ύ ά ί ς ές 19 ώ. ός ό ς ώ ώ έ ή ή ό ά ά ή έ έ. ώ ή ς

123 Western Blot assay should not be used as a screening test. WB should be viewed as a supplemental test which can be used to confirm positive results obtained from EIA.