«ΤΜΒΑΣΗΚΖ ΚΑΗ ΜΟΡΗΑΚΖ ΓΗΑΓΝΧΖ ΛΟΗΜΧΞΔΧΝ ΑΠΟ ΣΑΦΤΛΟΚΟΚΚΟΤ»

Transcript

1 ΔΘΝΗΚΟ ΚΑΗ ΚΑΠΟΓΗΣΡΗΑΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΗΑΣΡΗΚΖ ΥΟΛΖ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΑΚΟ ΓΔΝΗΚΟ ΝΟΟΚΟΜΔΗΟ «ΑΣΣΗΚΟΝ» ΔΡΓΑΣΖΡΗΟ ΚΛΗΝΗΚΖ ΜΗΚΡΟΒΗΟΛΟΓΗΑ Γηεπζύληξηα: Αλ. Καζεγήηξηα Λ. Εέξβα «ΤΜΒΑΣΗΚΖ ΚΑΗ ΜΟΡΗΑΚΖ ΓΗΑΓΝΧΖ ΛΟΗΜΧΞΔΧΝ ΑΠΟ ΣΑΦΤΛΟΚΟΚΚΟΤ» ΓΗΓΑΚΣΟΡΗΚΖ ΓΗΑΣΡΗΒΖ ΚΑΛΛΗΟΠΖ-ΣΑΤΡΟΤΛΑ ΥΑΣΕΖΓΔΧΡΓΗΟΤ ΗΑΣΡΟ ΑΘΖΝΑ 2013

2 Σηη μηηέρα μοσ Σελίδα 2

3 Σελίδα 3

4 Χατζηγεωργίου Καλλιόπη-Σταυρούλα Σελίδα 4

5 Χατζηγεωργίου Καλλιόπη-Σταυρούλα Σελίδα 5

6 Ζ παξνύζα δηδαθηνξηθή δηαηξηβή εθπνλήζεθε ζην Δξγαζηήξην Κιηληθήο Μηθξνβηνινγίαο ηνπ Παλεπηζηεκηαθνύ Γεληθνύ Ννζνθνκείνπ «ΑΣΣΗΚΟΝ» ΣΡΗΜΔΛΖ ΤΜΒΟΤΛΔΤΣΗΚΖ ΔΠΗΣΡΟΠΖ η. Εέναα Λμοηία, Ακαπθδνχηνζα Καεδβήηνζα, Δπζαθέπμοζα Καεδβήηνζα η. ζαθάηαξ Νζηυθαμξ, Δπίημονμξ Καεδβδηήξ η. Μεθεηζάδδξ Ηςζήθ, Δπίημονμξ Καεδβδηήξ ΔΠΣΑΜΔΛΖ ΔΞΔΣΑΣΗΚΖ ΔΠΗΣΡΟΠΖ η. Εέναα Λμοηία, Ακαπθδνχηνζα Καεδβήηνζα, Δπζαθέπμοζα Καεδβήηνζα η. Μπμοηάηδ Δθέκδ, Ακαπθδνχηνζα Καεδβήηνζα η. Σάζζμξ Πακαβζχηδξ, Ακαπθδνςηήξ Καεδβδηήξ η. Υαηγδπακαβζχημο ηοθζακυξ, Ακαπθδνςηήξ Καεδβδηήξ η. Μεθεηζάδδξ Ηςζήθ, Δπίημονμξ Καεδβδηήξ η. ζαθάηαξ Νζηυθαμξ, Δπίημονμξ Καεδβδηήξ η. Σζζυδναξ ςηήνζμξ, Δπίημονμξ Καεδβδηήξ Ζιενμιδκία μνζζιμφ ηνζιεθμφξ ζοιαμοθεοηζηήξ επζηνμπήξ: 06/10/2006 Ζιενμιδκία μνζζιμφ εέιαημξ: 10/10/2007 Ζιενμιδκία ηαηάεεζδξ δζδαηημνζηήξ δζαηνζαήξ: 22/05/2013 Σελίδα 6

7 ΒΗΟΓΡΑΦΗΚΟ ΖΜΔΗΧΜΑ Προζωπικές πληροθορίες Ονομαηεπώνσμο: Υαηγδβεςνβίμο Καθθζυπδ-ηαονμφθα Όνομα παηρός: ςηήνζμξ Όνομα μηηρός: Μανία Τόπος γέννηζης: Αεήκα Έηος: 1981 Σηοιτεία επικοινωνίας Γιεύθσνζη: Α.Πίηηα 12, Ν. Δνοεναία, Τηλέθωνα: , Σποσδές-Διδίκεσζη-Θέζεις εργαζίας 2005: Πηοπίμ Ηαηνζηήξ πμθήξ Πακεπζζηδιίμο Αεδκχκ. Γεκζηυξ ααειυξ: 8,26 (Λίακ Καθχξ) : Γζδάζημοζα Π.Γ. 407/80, Δνβαζηήνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ, ΠΓΝ «ΑΣΣΗΚΟΝ», Ηαηνζηή πμθή Πακεπζζηδιίμο Αεδκχκ 2012: Μεηαπηοπζαηυ Γίπθςια Δζδίηεοζδξ ζηδ «Βζμπθδνμθμνζηή». Γεκζηυξ ααειυξ: 8,9 (Άνζζηα) 2008-ζήιενα: Δζδίηεοζδ ζηδκ Ηαηνζηή Βζμπαεμθμβία (ΓΝΑ «ΗΠΠΟΚΡΑΣΔΗΟ») Ξέκεξ βθχζζεξ: Αββθζηά (Certificate of Proficiency in English), Γαθθζηά (D.A.L.F., Approfondissement III), Ηηαθζηά (Diploma di lingua italiana, CELI 4) Βραβεία Β Βνααείμ Βαζζηήξ Ένεοκαξ, 35 μ Πακεθθήκζμ Ηαηνζηυ οκέδνζμ, 2009 Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., ζαθάηαξ Ν., Εέναα Λ. Ανάπηςξη μεθοδολογίαρ PCR για ηην ηαςηοποίηζη ηος Staphylococcus lugdunensis Γημοζιεύζεις ζε ελληνικά περιοδικά 1. Κ.. Υαηδεγεωξγίνπ, Αζη. Σανπαηγή, Ν. ζαθάηαξ,. Υακζςηάηδ, Λ. Εέναα. Σελίδα 7

8 Απομόνυζη ηος Staphylococcus lugdunensis από κλινικά δείγμαηα. Δθανιμζιέκδ Κθζκζηή Μζηνμαζμθμβία ηαζ Δνβαζηδνζαηή Γζάβκςζδ, 2008, Συιμξ 13, Σεφπμξ 1, ζεθ: Κ. Σζζαενζχηδξ, Κ.. Υαηδεγεωξγίνπ, Κ. Εμονζδάηδ,. Κςκζηακημοθάηδ, Λ. Εέναα, Ο. Πακζάνα, Α. Ανβονμπμφθμο. Αξιολόγηζη πένηε εμποπικών δοκιμαζιών ηασείαρ ηαςηοποίηζηρ ηος Staphyococcus aureus. Γεθηίμ Δθθδκζηήξ Μζηνμαζμθμβζηήξ Δηαζνείαξ, 2009, Συιμξ 54, Σεφπμξ 4, ζεθ: Γημοζιεύζεις ζε διεθνή περιοδικά 1. Rizos EN, Siafakas N, Katsantoni E, Lazou V, Sakellaropoulos K, Kastania A, Kossida S, Chatzigeorgiou KS, Arsenis G, Zerva L, Katsafouros K, Lykouras L. Association of the dopamine D3 receptor Ser9Gly and of the serotonin 2C receptor gene polymorphisms with tardive dyskinesia in Greeks with chronic schizophrenic disorder. Psychiatric Genetics. 2009;19(2): Chatzigeorgiou KS, Siafakas N, Petinaki E, Zerva L. fbl gene as a species-specific target for Staphylococcus lugdunensis identification. Journal of Clinical Laboratory Analysis. 2010;24(2): Chatzigeorgiou KS, Mariolis A, Sergentanis TN. Staphylococcus lugdunensis phenotypic identification: need for further clarification. Japanese Journal of Infectious Diseases. 2010;63(5): Chatzigeorgiou KS, Siafakas N, Petinaki E, Argyropoulou A, Tarpatzi A, Bobola M, Paniara O, Velegraki A, Zerva L. Identification of staphylococci by Phoenix: validation of a new protocol and comparison with Vitek 2. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 2010;68(4): Chatzigeorgiou KS, Ikonomopoulou C, Kalogeropoulou S, Siafakas N, Giannopoulos G, Antoniadou A, Tassios PT, Tarpatzi E, Giannitsioti E, Vlachakos D, Ikonomopoulos T, Petinaki E, Zerva L. Σελίδα 8

9 Two successfully treated cases of Staphylococcus lugdunensis endocarditis. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 2010;68(4): Chatzigeorgiou KS, Sergentanis TN, Tsiodras S, Hamodrakas SJ, Bagos PG. Phoenix 100 versus Vitek 2 in the identification of gram-positive and gram-negative bacteria: a comprehensive meta-analysis. Journal of Clinical Microbiology. 2011;49(9): Tarpatzi A, Avlamis A, Papaparaskevas J, Daikos GL, Stefanou I, Katsandri A, Vasilakopoulou A, Chatzigeorgiou KS, Petrikkos GL. Incidence and risk factors for central vascular catheter-related bloodstream infections in a tertiary care hospital. The New Microbiologica. 2012;35(4): Kousoulis AA, Chatzigeorgiou KS, Danis K, Tsoucalas G, Vakalis N, Bonovas S, Tsiodras S. Malaria in Laconia, Greece, then and now: a 2500-year-old pattern. International Journal of Infectious Diseases. 2013;17(1):e8-e11. Ανακοινώζεις ζε ελληνικά ζσνέδρια 1) Υακζςηάηδ., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Γενμιενζάηδ Κ., Μάνδα Δ., Πακηεθάηδ Μ., Εέναα Λ. Ανακάλςτη ηος νέος παθογόνος ζηαθςλοκόκκος S. lugdunensis. (32 μ Πακεθθήκζμ Ηαηνζηυ οκέδνζμ, 2006) 2) Υαναθαιπάηδ Ν., Πακηεθάηδ Μ., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Κάπδ Μ., ζαθάηαξ Ν., Εέναα Λ. Ανάλςζη κόζηοςρ-οθέλοςρ ζε επιδημιολογική μελέηη θοπίαρ VRE. (3 μ Δεκζηυ οκέδνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ-9μ Πακεθθήκζμ οκέδνζμ Νμζμημιεζαηχκ Λμζιχλεςκ & Τβζεζκήξ, 2007) 3) Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Υαναθαιπάηδ Ν., Πακηεθάηδ Μ., ζαθάηαξ Ν., Σανπαηγή Α., Εέναα Λ. Σελίδα 9

10 Ανάλςζη εςαιζθηζίαρ ζηελεσών Enterococcus casseliflavus/gallinarum. (33 μ Πακεθθήκζμ Ηαηνζηυ οκέδνζμ, 2007) 4) Κυκημξ Φ., Μπανηά Μ. Δ., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., ζαθάηαξ Ν., Εέναα Λ. Ανάπηςξη αξιόλογηρ μεθοδολογίαρ για ηη διάγνυζη ηυν μςκοβακηηπιδιώζευν. (4 μ Δηήζζμ Δπζζηδιμκζηυ οκέδνζμ Ηαηνζηήξ πμθήξ, 2007) 5) ζαθάηαξ Ν., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Πακηεθάηδ Μ., Κυκημξ Φ., Εέναα Λ. Σαοημπμίδζδ ααηηδνίςκ ιε αάζδ ηδ κμοηθεμηζδζηή αθθδθμοπία ημο βμκζδίμο βζα ημ 16S rrna ςξ ιέεμδμξ νμοηίκαξ. (4 μ Δηήζζμ Δπζζηδιμκζηυ οκέδνζμ Ηαηνζηήξ πμθήξ, 2007) 6) Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Πεηεζκάηδ Δ., Σανπαηγή Α., Σζεθέκδ-Κςηζμαίθδ Α., Εέναα Λ. Σςζηήμαηα VITEK 2 και PHOENIX 100: Σςγκπιηική αξιολόγηζη ηαςηοποίηζηρ ζηαθςλοκόκκυν. (5 μ Πακεθθήκζμ οκέδνζμ Ηαηνζηήξ Βζμπαεμθμβίαξ, 2008) 7) Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., ζαθάηαξ Ν., Εέναα Λ. Ανάπηςξη μεθοδολογίαρ PCR για ηην ηαςηοποίηζη ηος Staphylococcus lugdunensis (35 μ Πακεθθήκζμ Ηαηνζηυ οκέδνζμ, 2009) 8) Ανβονμπμφθμο Α., Σζζαενζχηδξ Κ., Εμονζδάηδ Κ., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Κςκζηακημοθάηδ., Εέναα Λ., Πακζάνα Ο. Τασεία ανίσνεςζη Staphylococcus aureus: αξιολόγηζη πένηε εμποπικών πποφόνηυν. (4 μ Δεκζηυ οκέδνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ ηαζ Νμζμημιεζαηχκ Λμζιχλεςκ, 2009) 9) Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Οζημκμιμπμφθμο Υ., Καθμβενμπμφθμο., ζαθάηαξ Ν., Γζακκυπμοθμξ Γ., Ακηςκζάδμο Α., Σάζζμξ Π., Σανπαηγή Α., Βθαπάημξ Γ., Οζημκμιυπμοθμξ Θ., Εέναα Λ. Ενδοκαπδίηιδα από Staphylococcus lugdunensis. (36 μ Πακεθθήκζμ Ηαηνζηυ οκέδνζμ, 2010) 10) Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., ζαθάηαξ Ν., Σανπαηγή Α., Πεηεζκάηδ Δ., Εέναα Λ. Ανάπηςξη ηασείαρ μοπιακήρ μεθοδολογίαρ για ηην ηαςηόσπονη ανίσνεςζη ηος γονιδίος meca και οκηώ ειδών ζηαθςλοκόκκυν και εθαπμογή ηηρ ζε ςλικό θεηικών αιμοκαλλιεπγειών. Σελίδα 10

11 (6 μ Πακεθθήκζμ οκέδνζμ Ηαηνζηήξ Βζμπαεμθμβίαξ, 2010) 11) ζαθάηαξ Ν., Αηηζθάημξ Α., ηέθμξ Δ., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Νζημθαΐδμο Π., Εέναα Λ. Άμεζη ανίσνεςζη και ηαςηοποίηζη ενηεποφών ζε κλινικά δείγμαηα. (36 μ Πακεθθήκζμ Ηαηνζηυ οκέδνζμ, 2010) 12) Βμονθή., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Σανπαηγή Α., Μπυιπμθα Μ., Καθμβενμπμφθμο Δ., Εέναα Λ. Αξιολόγηζη νέαρ μοπιακήρ μεθόδος ηαςηοποίηζηρ MRSA. (36 μ Πακεθθήκζμ Ηαηνζηυ οκέδνζμ, 2010) 13) Βμονθή., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Σανπαηγή Α., Κανχκδξ Θ., Εμφνθα Κ., Εέναα Λ. Φαινοηςπικόρ και μοπιακόρ σαπακηηπιζμόρ κλινικών ζηελεσών MRSA. (8 μ Πακεθθήκζμ οκέδνζμ Γδιυζζαξ Τβείαξ, 2010) 14) Σανπαηγή Α., Βαζζθαημπμφθμο Α., Εμφνθα Κ., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Κανχκδξ Θ., Γαιζακίδμο., Πακηεθάηδ Μ., Εέναα Λ. Απομόνυζη Staphylococcus lugdunensis: Αναδπομική μελέηη 6.5 εηών. (5 μ Δεκζηυ οκέδνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ ηαζ Νμζμημιεζαηχκ Λμζιχλεςκ, 2011) 15) Κςηζάηδξ., Εέναα Λ., Λζαηυπμοθμξ Α., Υαηδεγεωξγίνπ Κ.., Σγμοαεθέηδξ Λ., Πεηεζκάηδ Δ. Μεηαλλάξειρ ζηο γονίδιο ηηρ πενικιλλινοδεζμεςηικήρ ππυηεΐνηρ 1Α/1Β ςπεύθςνερ για ςτηλού επιπέδος ανηοσή ζηη μεθικιλλίνη ζε κλινικό ζηέλεσορ Staphylococcus lugdunensis. (5 μ Δεκζηυ οκέδνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ ηαζ Νμζμημιεζαηχκ Λμζιχλεςκ, 2011) Ανακοινώζεις ζε διεθνή ζσνέδρια 1) Chatzigeorgiou KS, Siafakas N, Tarpatzi A, Chaniotaki S, Kouvardas S, Zerva L. Retrospective analysis of Staphylococcus lugdunensis isolates. (17 th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 2007) 2) Charalampakis N, Pantelaki M, Chatzigeorgiou KS, Kapi M, Siafakas N, Galani L, Zerva L. A cost-effective study of VRE surveillance in a Greek university hospital. (17 th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 2007) Σελίδα 11

12 3) Kontos F, Barda ME, Marinou I, Chatzigeorgiou KS, Siafakas N, Zerva L. Mycobacterium lentiflavum: high isolation rates during routine testing. (28 th Annual Congress of the European Society for Mycobacteriology, 2007) 4) Chatzigeorgiou KS, Siafakas N, Tassios PT, Tarpatzi A, Zerva L. Clinical significance of Staphylococcus lugdunensis isolates. (European Scientific Conference on Applied Infectious Disease Epidemiology, 2007) 5) Siafakas N, Chatzigeorgiou KS, Pantelaki M, Kontos F, Zerva L. Bacterial identification on the basis of 16S rrna gene sequencing. (European Scientific Conference on Applied Infectious Disease Epidemiology, 2007) 6) Chatzigeorgiou KS, Tarpatzi A, Siafakas N, Pantelaki M, Charalampaki N, Zerva L. Identification and susceptibility testing of Enterococcus casseliflavus and Enterococcus gallinarum by Phoenix 100 system (Becton Dickinson). (18 th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 2008) 7) Chatzigeorgiou KS, Siafakas N, Tarpatzi A, Petinaki E, Zerva L. A novel multiplex PCR identifies 7 staphylococcal species and meca gene directly from blood cultures. (20 th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 2010) 8) Kozanitou M, Vlachopoulou A, Kozanitou M, Papageorgiou N, Pallantza Z, Chatzigeorgiou KS, Tousoulis D, Stefanadis C, Bossinakou E. The impact of the G58A polymorphism on fibrinogen a-chain gene on factors V, X and thrombin in patients with advanced athetosclerosis. (Pathophysiology of Haemostasis and Thrombosis, 2010) 9) Chatzigeorgiou KS, Siafakas N, Petinaki E, Tarpatzi A, Argyropoulou A, Paniara O, Zerva L Identification of staphylococci: comparative evaluation of Vitek 2 and Phoenix systems. (48 th Annual ICAAC/IDSA 46 th Annual Meeting, 2008) 10) Liakopoulos A, Chatzigeorgiou KS, Tarpatzi A, Zerva L, Petinaki E. Σελίδα 12

13 Mutations in penicillin-binding protein 1 is responsible for high-level methicillin resistance in a Staphylococcus lugdunensis isolate. (21 th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 2011) Σελίδα 13

14 ΠΔΡΗΔΥΟΜΔΝΑ ΠΡΟΛΟΓΟ 19 ΤΝΣΟΜΟΓΡΑΦΗΔ 21 ΚΟΠΟ 25 ΓΔΝΗΚΟ ΜΔΡΟ Γεληθά ζηνηρεία γηα ην γέλνο ηωλ ζηαθπινθόθθωλ Σαμηλόκεζε ηνπ γέλνπο Staphylococcus Πεξηγξαθή ηνπ γέλνπο Staphylococcus Βαζηθόο δηαρωξηζκόο ηωλ εηδώλ ηνπ γέλνπο Staphylococcus Κιηληθή ζεκαζία ηνπ γέλνπο Staphylococcus Αληνρή ηνπ γέλνπο Staphylococcus ζηα β-ιαθηακηθά αληηκηθξνβηαθά Πεξηγξαθή ηωλ θιηληθά ζεκαληηθόηεξωλ εηδώλ Staphylococcus 32 2.Α Staphylococcus aureus subsp. aureus 32 2.Α.1 Δζζαβςβή ηαζ βεκζηά παναηηδνζζηζηά 32 2.Α.2 Κθζκζηά ζφκδνμια 33 2.Α.2.1 Ποχδεζξ θθεβιμκέξ 33 2.Α Γενιαηζηέξ ζηαθοθμημηηζάζεζξ 33 2.Α Λμζιχλεζξ ηναοιάηςκ ηαζ ιαθαηχκ ιμνίςκ 34 2.Α Λμζιχλεζξ μζηχκ ηαζ ανενχζεςκ 35 2.Α Πκεοιμκία 36 2.A Βαηηδνζαζιία ηαζ εκδμηανδίηζδα 37 2.Α Μδκζββίηζδα 37 2.Α.2.2 Κθζκζηά ζφκδνμια ζπεηζγυιεκα ιε παναβςβή ημλζκχκ 38 2.Α φκδνμιμ ημλζημφ ζμη 38 2.Α Απμθμθζδςηζηυ ζφκδνμιμ 39 2.Α Σνμθζηή δδθδηδνίαζδ 39 2.Α.3 Λμζιμβυκμζ πανάβμκηεξ 40 2.Α.3.1 Πνμζημθθδηίκεξ 40 2.Α.3.2 Πανάβμκηεξ δζαθοβήξ ιδπακζζιχκ άιοκαξ 41 Σελίδα 14

15 2.A.3.3 Σμλίκεξ 42 2.Α.4 Ακημπή ζηα ακηζιζηνμαζαηά 45 2.Β. Staphylococcus epidermidis 46 2.Β.1 Δζζαβςβή ηαζ βεκζηά παναηηδνζζηζηά 46 2.Β.2. Κθζκζηά ζφκδνμια 47 2.Β.3 Λμζιμβυκμζ πανάβμκηεξ 48 2.B.4 Ακημπή ζηα ακηζιζηνμαζαηά 53 2.Γ Staphylococcus haemolyticus 53 2.Γ.1 Δζζαβςβή ηαζ βεκζηά παναηηδνζζηζηά 53 2.Γ.2 Κθζκζηά ζφκδνμια 54 2.Γ.3 Λμζιμβυκμζ πανάβμκηεξ 54 2.Γ.4 Ακημπή ζηα ακηζιζηνμαζαηά 55 2.Γ Staphylococcus saprophyticus 55 2.Γ.1 Δζζαβςβή ηαζ βεκζηά παναηηδνζζηζηά 55 2.Γ.2 Κθζκζηά ζφκδνμια 56 2.Γ.3 Λμζιμβυκμζ πανάβμκηεξ 57 2.Γ.4 Ακημπή ζηα ακηζιζηνμαζαηά 58 2.Δ Staphylococcus hominis 59 2.Σ Staphylococcus lugdunensis 60 2.Σ.1 Δζζαβςβή ηαζ βεκζηά παναηηδνζζηζηά 60 2.Σ.2 Κθζκζηά ζφκδνμια 61 2.Σ.2.1 Λμζιχλεζξ δένιαημξ ηαζ ιαθαηχκ ιμνίςκ 61 2.Σ.2.2 Βαηηδνζαζιία 62 2.Σ.2.3 Δκδμηανδίηζδα 63 2.Σ.2.4 Λμζιχλεζξ μζηχκ ηαζ ανενχζεςκ 64 2.Σ.2.5 Άθθεξ θμζιχλεζξ 64 2.Σ.3 Λμζιμβυκμζ πανάβμκηεξ 66 2.Σ.4 Ακημπή ζηα ακηζιζηνμαζαηά 68 2.Ε Staphylococcus pseudolugdunensis 69 2.Ζ Staphylococcus schleiferi 69 2.Θ Staphylococcus warneri 71 Σελίδα 15

16 2.Η Staphylococcus capitis 72 2.Κ Staphylococcus simulans 74 2.Λ Άιια θναγθνπιάζε αξλεηηθά είδε ζηαθπινθόθθωλ κε θιηληθή ζεκαζία Φαηλνηππηθή ηαπηνπνίεζε ηωλ ζηαθπινθόθθωλ Αθβυνζειμξ «ακαθμνάξ» Απθμπμζδιέκμζ αθβυνζειμζ ηαοημπμίδζδξ Διπμνζηά δζαεέζζια ζοζηήιαηα ηαοημπμίδζδξ Φαζιαημιεηνία ιάγαξ Μνξηαθή ηαπηνπνίεζε ηωλ ζηαθπινθόθθωλ Πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ βμκζδίςκ-ζηυπςκ (sequencing) Ακάθοζδ πμθοιμνθζζιμφ ιήημοξ ηιδιάηςκ πενζμνζζιμφ (Restriction Fragment Length Polymorphism analysis, RFLP analysis) Ρζαμηοπία (ribotyping) Αθοζζδςηή ακηίδναζδ πμθοιενάζδξ (polymerase chain reaction, PCR) Αθοζζδςηή ακηίδναζδ πμθοιενάζδξ πναβιαηζημφ πνυκμο (real-time PCR) 91 ΔΗΓΗΚΟ ΜΔΡΟ 93 1) ΤΛΗΚΑ ΚΑΗ ΜΔΘΟΓΟΗ 94 Α. Κιηληθά θαη πξόηππα ζηειέρε 94 Β. ύγθξηζε ηεο απόδνζεο ηωλ ζπζηεκάηωλ Phoenix θαη Vitek 2 ωο πξνο ηελ ηαπηνπνίεζε θιηληθά ζεκαληηθώλ εηδώλ ζηαθπινθόθθωλ 95 Β.1. ηεθέπδ πμο ελεηάζεδηακ 95 Β.2. Μμνζαηή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ ακίπκεοζδ ημο βμκζδίμο meca 95 Β.2.1 Δηπφθζζδ βεκεηζημφ οθζημφ 95 Β.2.2 Ακάθοζδ πμθοιμνθζζιμφ ιήημοξ ηιδιάηςκ πενζμνζζιμφ ημο βμκζδίμο tuf 96 Β.2.3 Πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ ηιήιαημξ ημο 16S rrna βμκζδίμο 97 Β.2.4 Καεμνζζιυξ ηδξ ακημπήξ ηςκ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ 98 Β.3 Σαοημπμίδζδ ιε ημ ζφζηδια Vitek 2 (biomérieux) 99 Β.4 Σαοημπμίδζδ ιε ημ ζφζηδια Phoenix (Becton Dickinson) 99 Β.5 Ακάθοζδ ηςκ απμηεθεζιάηςκ ηαοημπμίδζδξ 100 Σελίδα 16

17 Γ. Αλάπηπμε κεζνδνινγίαο PCR γηα ηελ ηαπηνπνίεζε ηνπ είδνπο S. lugdunensis 101 Γ.1 Δπζθμβή ημο βμκζδίμο-ζηυπμο 101 Γ.2 πεδζαζιυξ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ 102 Γ.3 πεδζαζιυξ ηδξ PCR βζα ημκ πμθθαπθαζζαζιυ ημο ηιήιαημξ-ζηυπμο ημο fbl βμκζδίμο 103 Γ.4 Αλζμθυβδζδ δζαβκςζηζηήξ εοαζζεδζίαξ ηαζ εζδζηυηδηαξ ηδξ ακηίδναζδξ 103 Γ.5 Γμηζιαζία παναβςβήξ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ 104 Γ. Αλάπηπμε πνιππιεθηηθήο PCR γηα ηελ ηαπηόρξνλε αλίρλεπζε ηνπ γνληδίνπ meca θαη νθηώ εηδώλ ζηαθπινθόθωλ 105 Γ.1.1 ηεθέπδ πμο ελεηάζεδηακ 105 Γ.1.2 Σαοημπμίδζδ ηςκ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ πμο ελεηάζηδηακ ηαζ ηαεμνζζιυξ ηδξ ακημπήξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ 105 Γ.2 πεδζαζιυξ ημο πνςημηυθθμο ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR 106 Δ. Δθαξκνγή ηνπ πξωηνθόιινπ ηεο πνιππιεθηηθήο PCR ζε δείγκαηα ζεηηθώλ αηκνθαιιηεξγεηώλ 107 Δ.1 Αλζμθυβδζδ πέκηε ιεευδςκ εηπφθζζδξ ααηηδνζαημφ βεκεηζημφ οθζημφ απυ θζάθεξ εεηζηχκ αζιμηαθθζενβεζχκ 107 Δ.2 Απεοεείαξ εθανιμβή ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR ζε ηεπκδηά εκμθεαθιζζιέκεξ ιε ζηαθοθμηυηημοξ αζιμηαθθζένβεζεξ 109 Δ.3 Πνμμπηζηή ελέηαζδ εεηζηχκ αζιμηαθθζενβεζχκ αζεεκχκ ιε ημ πνςηυημθθμ ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR 110 Σ. Έιεγρνο απνκόλωζεο δηαδνρηθώλ ζηειερώλ S. lugdunensis: αλάιπζε κηθξνβηνινγηθώλ ραξαθηεξηζηηθώλ θαη θαζνξηζκόο θιηληθήο ζεκαζίαο 110 Σ.1 Ακαγήηδζδ ζηεθεπχκ S. lugdunensis 110 Σ.2 Μμνζαηή ηαζ θαζκμηοπζηή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ 111 Σ.3 Βζμπδιζηέξ δμηζιαζίεξ 112 Σ.4 Έθεβπμξ εοαζζεδζίαξ ηςκ ζηεθεπχκ 114 Σ.5 Ακαγήηδζδ ηθζκζηήξ ζδιαζίαξ ζηεθεπχκ S. lugdunensis 116 Σ.6 Σοπμπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis 116 2) ΑΠΟΣΔΛΔΜΑΣΑ 119 I. ύγθξηζε ηεο απόδνζεο ηωλ ζπζηεκάηωλ Phoenix θαη Vitek 2 ωο πξνο ηελ ηαπηνπνίεζε θιηληθά ζεκαληηθώλ εηδώλ ζηαθπινθόθθωλ 119 Σελίδα 17

18 II. Αλάπηπμε κεζνδνινγίαο PCR γηα ηελ ηαπηνπνίεζε ηνπ είδνπο S. lugdunensis θαη επηθύξωζε ηεο δηαγλωζηηθήο επαηζζεζίαο θαη εηδηθόηεηάο ηεο 122 ΗΗΗ. Αλάπηπμε πνιππιεθηηθήο PCR γηα ηελ ηαπηόρξνλε αλίρλεπζε ηνπ γνληδίνπ meca θαη νθηώ εηδώλ ζηαθπινθόθθωλ 122 IV. Δθαξκνγή ηεο πνιππιεθηηθήο PCR ζε πιηθό ζεηηθώλ αηκνθαιιηεξγεηώλ 123 V. Αλαδξνκηθόο έιεγρνο απνκόλωζεο ζηειερώλ S. lugdunensis 124 i) Aκαγήηδζδ ηςκ ζηεθεπχκ 124 ii) Μμνζαηή ηαζ θαζκμηοπζηή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ, απμηεθέζιαηα αζμπδιζηχκ δμηζιαζζχκ ηαζ ιμνθμθμβία ηςκ απμζηζχκ 124 iii) Έθεβπμξ εοαζζεδζίαξ ηςκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis 125 iv) Πνμζδζμνζζιυξ ηδξ ηθζκζηήξ ζδιαζίαξ ηςκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis 125 v) Tοπμπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis ιε ηδ ιέεμδμ PFGE 130 3) ΤΕΖΣΖΖ 132 4) ΠΑΡΑΡΣΖΜΑ 146 5) ΒΗΒΛΗΟΓΡΑΦΗΑ 177 6) ΠΔΡΗΛΖΦΖ 216 7) SUMMARY 219 Σελίδα 18

19 ΠΡΟΛΟΓΟ Ακ ηαζ δ βκχζδ βφνς απυ ημ βέκμξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ έπεζ λεηζκήζεζ κα δζαιμνθχκεηαζ εδχ ηαζ πμθθέξ δεηαεηίεξ, ημ εκδζαθένμκ ηςκ ενεοκδηχκ παναιέκεζ γςδνυ ιέπνζ ηαζ ηζξ ιένεξ ιαξ, ηυζμ βζα ημκ S. aureus, πμο ζοκεπίγεζ κα απμηεθεί έκα ελαζνεηζηά επζηίκδοκμ παεμβυκμ, υζμ ηαζ βζα ηα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ, πμο μθμέκα ζοπκυηενα ζοκδέμκηαζ ιε ζμαανέξ δζεζζδοηζηέξ θμζιχλεζξ, ζδζαίηενα ζε ακμζμηαηεζηαθιέκμοξ ηαζ αζεεκείξ ιε λέκα ζχιαηα. Ζ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή επζηεκηνχεδηε ζηζξ θαζκμηοπζηέξ ηαζ ιμνζαηέξ ιεευδμοξ ηαοημπμίδζδξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, δ απυδμζδ ηςκ μπμίςκ είκαζ ηαεμνζζηζηή βζα ηδ ζςζηή ακίπκεοζδ κέςκ εζδχκ ηαζ, επαηυθμοεα, ηδκ ακάθοζδ ηςκ ιζηνμαζμθμβζηχκ παναηηήνςκ ηαζ ηδ δζαθεφηακζδ ηδξ ηθζκζηήξ ημοξ ζδιαζίαξ. Δπίζδξ, ιεθεηήεδηε ζδζαίηενα μ S. lugdunensis, πμο απυ ηδκ ανπζηή ημο πενζβναθή ημ 1988 ιέπνζ ζήιενα ελεθίζζεηαζ ζε έκα αζοκήεζζηα απεζθδηζηυ ημαβημοθάζδ ανκδηζηυ είδμξ, ιε παεμβυκμ δοκαιζηυ πανυιμζμ ιε αοηυ ημο S. aureus. Θα ήεεθα κα εοπανζζηήζς εενιά ηδκ Ακαπθδνχηνζα Καεδβήηνζα Μζηνμαζμθμβίαξ η. Λμοηία Εέναα βζα ημ υηζ, ςξ επζαθέπμοζα, ιε ηίιδζε ιε ηδκ ακάεεζδ ημο εέιαημξ αοημφ, ηαεχξ ηαζ βζα ηδκ επζζηδιμκζηή ηαεμδήβδζή ηδξ ηαε υθδ ηδ δζάνηεζα ηδξ πνμζπάεεζάξ ιμο, ιέζς ηδξ μπμίαξ ιμο ιεηέδςζε ηζξ πμθφηζιεξ βκχζεζξ ηαζ ηδ ιαηνυπνμκδ ειπεζνία ηδξ. Δπίζδξ, εα ήεεθα κα εοπανζζηήζς ημκ Δπίημονμ Καεδβδηή Μζηνμαζμθμβίαξ η. Νζηυθαμ ζαθάηα, μ μπμίμξ ιμο δίδαλε υθα υζα βκςνίγς ζήιενα βφνς απυ ηζξ ηεπκζηέξ ηδξ ιμνζαηήξ αζμθμβίαξ ηαζ ιε επέαθερε οπμιμκεηζηά ζηδ δζάνηεζα ηδξ εηπυκδζδξ ημο πεζναιαηζημφ ιένμοξ ηδξ πανμφζαξ δζδαηημνζηήξ δζαηνζαήξ. Αηυια, εοπανζζηχ εενιά ηδκ Ακαπθδνχηνζα Καεδβήηνζα ημο Πακεπζζηδιίμο Θεζζαθίαξ η. Δοεοιία Πεηεζκάηδ βζα ηδκ εοβεκζηή παναπχνδζδ ζηεθεπχκ, πμο πνδζζιμπμίδζα ζηδ ιεθέηδ. Οθείθς, επίζδξ, κα εοπανζζηήζς ημκ Ακαπθδνςηή Καεδβδηή η. Πακαβζχηδ Σάζζμ βζα ηδκ ηαεμνζζηζηή ζοιαμθή ημο ζηδκ ηοπμπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis ηδξ ιεθέηδξ, ηαεχξ ηαζ βζα ηζξ πμθφηζιεξ βκχζεζξ πμο ιμο ιεηέδςζε πάκς ζημ ζοβηεηνζιέκμ ακηζηείιεκμ. Δοπανζζηχ εενιά ημ ηεπκμθμβζηυ πνμζςπζηυ ημο Δνβαζηδνίμο ημο ηαζ ζδζαίηενα ηδκ η. Γεςνβία Γζαιακημπμφθμο, ιέζς ηδξ μπμίαξ ήνεα ζε επαθή ζηδκ πνάλδ ιε ηδκ ηεπκζηή ηδξ PFGE, απμημιίγμκηαξ πμθθά απυ ηδ ιαηνυπνμκδ ειπεζνία ηδξ. Θα ήεεθα κα εηθνάζς ηζξ εοπανζζηίεξ ιμο ηαζ ζηδκ Ακαπθδνχηνζα Καεδβήηνζα η. Αββεθζηή Σζεθέκδ-Κςηζμαίθδ βζα ηζξ πμθφηζιεξ οπμδείλεζξ ηαζ ζοιαμοθέξ ηδξ βζα ηδ αεθηίςζδ ηδξ Σελίδα 19

20 πανμφζαξ ενβαζίαξ, ςξ ιέθμξ ηδξ ανπζηήξ ηνζιεθμφξ ζοιαμοθεοηζηήξ επζηνμπήξ, ηαεχξ επίζδξ ηαζ ημκ Δπίημονμ Καεδβδηή η. Ηςζήθ Μεθεηζάδδ, μ μπμίμξ ηδκ μπμία ακηζηαηέζηδζε ζηδ ζοκέπεζα. Σέθμξ, μθείθς έκα ιεβάθμ εοπανζζηχ ζε υθα ηα ιέθδ ημο Δνβαζηδνίμο Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ ημο ΠΓΝ «ΑΣΣΗΚΟΝ» βζα ηδκ άνζζηδ ζοκενβαζία ιαξ ηαζ ζδζαίηενα ζηδκ Δπζιεθήηνζα Α' η. Αζηαηενίκδ Σανπαηγή, πμο ζηάεδηε δίπθα ιμο ςξ δαζηάθα, πμθφηζιδ ανςβυξ ηαζ θίθδ ζε υθδ ηδ δζάνηεζα ηδξ επίπμκδξ αοηήξ πνμζπάεεζαξ. Ζ δζαηνζαή αοηή δε εα είπε μθμηθδνςεεί πςνίξ ηδκ αιένζζηδ ζηήνζλδ ηδξ μζημβέκεζάξ ιμο ηαζ ζδζαίηενα ηδξ ιδηέναξ ιμο, ζηδκ μπμία ηδκ αθζενχκς ςξ εθάπζζημ δείβια εοβκςιμζφκδξ. Σελίδα 20

21 ΤΝΣΟΜΟΓΡΑΦΗΔ PCR: polymerase chain reaction CRF: coagulase reacting factor MIC: minimal inhibitory concentration PBP: penicillin binding protein SCC: staphylococcal cassette chromosome MRSA: methicillin resistant S. aureus ARDS: acute respiratory distress syndrome TSST-1: toxic shock syndrome toxin-1 SEB: staphylococcal enterotoxin B SEC: staphylococcal enterotoxin C MSCRAMM: microbial surface component recognizing adhesive matrix molecules TNFR1: tumor necrosis factor-a receptor FnbpA: fibronectin binding protein A FnbB: fibronectin binding protein B ClfA: clumping factor A ClfΒ: clumping factor B) Pls: plasmin sensitive protein Cna: collagen adhesin IsdA: iron regulated surface determinant A IsdB: iron regulated surface determinant B IsdC: iron regulated surface determinant C IsdH: iron regulated surface determinant H Σελίδα 21

22 SraP: serine rich adhesin for platelets Ebh: extracellular matrix binding protein homologue Emp: extracellular matrix protein binding protein Atl: autolysin Aaa: autolysin/adhesin EbpS: elastin binding protein of S. aureus CP: capsular polysaccharide FAME: fatty acid modifying enzyme PVL: Panton-Valentine leucocidin HlgA: gamma hemolysin component A HlgB: gamma hemolysin component B HlgC: gamma hemolysin component C CA-MRSA: community acquired methicillin resistant S. aureus SEA: staphylococcal enterotoxin A SEE: staphylococcal enterotoxin E SEG: staphylococcal enterotoxin G SEJ: staphylococcal enterotoxin J SEM: staphylococcal enterotoxin M SEO: staphylococcal enterotoxin O Dsg1: desmoglein 1 HA-MRSA: hospital acquired methicillin resistant S. aureus ETA: exfoliative toxin A ETB: exfoliative toxin Σελίδα 22

23 PNAG: poly-n-acetyl-glucosamine PIA: polysaccharide intercellular adhesion ica: intercellular adhesion AMP: antimicrobial peptide Aap: accumulation-associated protein Bap: biofilm-asscoiated protein Bhp: Bap homologous protein PSM: phenol-soluble modulin agr: accessory gene regulator Esp: S.epidermidis serine protease SdrG: serine aspartate repeat protein G SdrF: serine aspartate repeat protein F PGA: poly-β-glutamic acid Aas: Autolysin/adhesin of S. saprophyticus Ssp: S. saprophyticus surface associated protein SdrI: serine aspartate repeat protein I UafA: uro-adherence factor A UafB: uro-adherence factor B slush: S. lugdunensis synergistic hemolysin vwbl: von Willebrand binding protein of S. lugdunensis Fbl: fibrinogen binding protein of S. lugdunensis OatA: O-acetyltransferase A SdrX: serine aspartate repeat proten X Σελίδα 23

24 RFLP: restriction fragment length polymorphism MALDI-TOF-MS: matrix-assisted laser desorption/ionization ηtime-of-flight mass spectrometry 16S-ITS: 16S internal transcribed spacer BSA: bovine serum albumin Σελίδα 24

25 ΚΟΠΟ Οζ ζηαθοθυημηημζ ζοβηαηαθέβμκηαζ αδζαιθζζαήηδηα ιεηαλφ ηςκ ιζηνμμνβακζζιχκ πμο απμιμκχκμκηαζ ζοπκυηενα απυ ηζξ ηαθθζένβεζεξ ηθζκζηχκ δεζβιάηςκ ηυζμ κμζδθεουιεκςκ, υζμ ηαζ ελςηενζηχκ αζεεκχκ. Δηηυξ απυ ημκ βκςζηυ βζα ημ παεμβυκμ ημο δοκαιζηυ S. aureus, έκαξ μθμέκα αολακυιεκμξ ανζειυξ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ ακαδεζηκφμκηαζ ηζξ ηεθεοηαίεξ δεηαεηίεξ ςξ αίηζα ζμαανχκ δζεζζδοηζηχκ θμζιχλεςκ. ε αοηυ ημ πθαίζζμ, δ έβηαζνδ ηαζ έβηονδ ηαοημπμίδζδ υθςκ ηςκ ηθζκζηά ζδιακηζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαείζηαηαζ επζηαηηζηή, ιε ζηυπμ ηδκ αζθαθή ιεθέηδ ηδξ παεμβυκμο δνάζδξ ηαζ επζδδιζμθμβίαξ ηςκ επζιένμοξ εζδχκ, άθθα ηαζ ηδκ ζςζηή ενιδκεία ηςκ απμηεθεζιάηςκ εοαζζεδζίαξ ημοξ. Ζ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή εζηζάζηδηε ζηδκ ενβαζηδνζαηή δζάβκςζδ ηςκ θμζιχλεςκ απυ ζηαθοθμηυηημοξ, ηυζμ ιε ζοιααηζηέξ υζμ ηαζ ιε ιμνζαηέξ ηεπκζηέξ ηαοημπμίδζδξ ηαζ ζηδκ αλζμθυβδζδ ηδξ απυδμζδξ ηςκ ηεπκζηχκ αοηχκ βζα ηα ζοπκυηενα απακηχιεκα είδδ ζημ Δνβαζηήνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ. Πζμ ακαθοηζηά, πναβιαημπμζήεδηε δ αλζμθυβδζδ ηςκ εονέςξ δζαδμιέκςκ, ειπμνζηά δζαεέζζιςκ, θαζκμηοπζηχκ ζοζηδιάηςκ Phoenix ηδξ εηαζνείαξ Becton Dickinson ηαζ Vitek 2 ηδξ biomérieux, ζε ζφβηνζζδ ιε ηδκ πνυηοπδ ιμνζαηή ιεεμδμθμβία ηαοημπμίδζδξ. Δπζπθέμκ, ζπεδζάζηδηε ιζα απθή αθοζζδςηή ακηίδναζδ πμθοιενάζδξ (polymerase chain reaction, PCR) βζα ηδκ ακαβκχνζζδ ημο είδμοξ S. lugdunensis ηαζ ιζα πμθοπθεηηζηή PCR βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ S. aureus, S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, S. saprophyticus, S. lugdunensis, S. capitis ηαζ S. simulans ηαζ ηδκ ηαοηυπνμκδ ακίπκεοζδ ηδξ ακημπήξ ημοξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ. Δλεηάζηδηε εκδεθεπχξ δ εοαζζεδζία ηαζ δ εζδζηυηδηα ηςκ ιεευδςκ αοηχκ ηαζ ηαηέζηδ δοκαηή δ απεοεείαξ εθανιμβή ημο πμθοπθεηηζημφ πνςημηυθθμο ζε οθζηυ εεηζηχκ αζιμηαθθζενβεζχκ. Σέθμξ, ζηδ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή ιεθεηήεδηε ζδζαίηενα μ ημαβημοθάζδ ανκδηζηυξ S. lugdunensis, πμο απυ ηδκ ανπζηή ημο πενζβναθή ημ 1988 ιέπνζ ζήιενα έπεζ ακαδεζπεεί ςξ μ πθέμκ παεμβυκμξ ζηαθοθυημηημξ ιεηά ημκ S. aureus. Υνδζζιμπμζχκηαξ ιία ζοθθμβή δζαδμπζηχκ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ, ηαηαβνάθδηακ ηα ιζηνμαζμθμβζηά παναηηδνζζηζηά ημο είδμοξ, ημ πνμθίθ εοαζζεδζίαξ ημο ζηα ακηζαζμηζηά, δ βμκμηοπζηή πμζηζθμιμνθία, αθθά ηαζ ημ παεμβυκμ θάζια ημο. Σελίδα 25

26 ΓΔΝΗΚΟ ΜΔΡΟ Σελίδα 26

27 1. Γεληθά ζηνηρεία γηα ην γέλνο ηωλ ζηαθπινθόθθωλ 1.1 Σαμηλόκεζε ηνπ γέλνπο Staphylococcus φιθςκα ιε ηδ δεφηενδ έηδμζδ ημο εβπεζνζδίμο Bergey s Manual of Systematic Bacteriology ημ βέκμξ (genus) Staphylococcus (ιαγί ιε ηα βέκδ Gemella, Jeotgalicoccus, Macrococcus ηαζ Salinococcus) ακήηεζ ζηδκ μζημβέκεζα (family) Staphylococcaceae. Ζ μζημβέκεζα αοηή (ιαγί ιε ηζξ μζημβέκεζεξ Bacillaceae, Alicyclobacillaceae, Caryophanaceae, Listeriaceae, Thermoactinomycetaceae, Turicibacteraceae, Paenibacillaceae, Planococcaceae ηαζ Sporolactobacillaceae) πενζθαιαάκεηαζ ζηδκ ηάλδ (order) Bacillales, δ μπμία (ιαγί ιε ηδκ ηάλδ Lactobacillales) ακήηεζ ζηδκ μιμηαλία (class) Bacilli ηαζ αοηή ιε ηδ ζεζνά ηδξ (ιαγί ιε ηζξ μιμηαλίεξ Clostridia ηαζ Mollicutes) ζηδ ζοκμιμηαλία (phylum) Firmicutes (Garrity, Bell et al. 2004). Mέπνζ ημ 2009, εκηυξ ημο βέκμοξ Staphylococcus είπακ ακαβκςνζζηεί ζοκμθζηά 46 είδδ (species) ηαζ 23 οπμείδδ (subspecies), πμο ακαθοηζηά ήηακ ηα ελήξ: S. arlettae, S. aureus subsp. anaerobius, S. aureus subsp. aureus, S. auricularis, S. capitis subsp. capitis, S. capitis subsp. urealyticus, S. caprae, S. carnosus subsp. carnosus, S. carnosus subsp. utilis, S. cohnii subsp. cohnii, S. cohnii subsp. urealyticus, S. chromogenes, S. condimenti, S. delphini, S. epidermidis, S. equorum subsp. equorum, S. equorum subsp. linens, S. felis, S. fleurettii, S. gallinarum, S. haemolyticus, S. hominis subsp. hominis, S. hominis subsp. novobiosepticus, S. hyicus, S. intermedius, S. kloosii, S. lentus, S. lugdunensis, S. lutrae, S. muscae, S. nepalensis, S. pasteuri, S. pettenkoferi, S. piscifermentans, S. pseudointermedius, S. pseudolugdunensis, S. saccharolyticus, S. saprophyticus subsp. bovis, S. saprophyticus subsp. saprophyticus, S. schleiferi subsp. coagulans, S. schleiferi subsp. schleiferi, S. sciuri subsp. carnaticus, S. sciuri subsp. rodentium, S. sciuri subsp. sciuri, S. simiae, S. simulans, S. succinus subsp. casei, S. succinus subsp. succinus, S. warneri ηαζ S. xylosus (Becker and von Eiff 2011). Σo 2010 πενζβνάθδηακ επζπθέμκ ηα είδδ S. microti (Novakova, Pantucek et al. 2010), S. massiliensis (Al Masalma, Raoult et al. 2010), S. rostri (Riesen and Perreten 2010), S. devriesei (Supre, De Vliegher et al. 2010) ηαζ S. stepanovicii (Hauschild, Stepanovic et al. 2010), ημ 2012 πενζβνάθδηε ημ είδμξ S. agnetis (Taponen, Supre et al. 2012) ηαζ ημ 2013 πενζβνάθδηακ ηα είδδ Σελίδα 27

28 S. petrasii (ιε ηα οπμείδδ S. petrasii subsp. petrasii ηαζ S. petrasii subsp. croceilyticus) (Pantucek, Svec et al. 2013) ηαζ S. jettensis (De Bel, Van Hoorde et al. 2013). 1.2 Πεξηγξαθή ηνπ γέλνπο Staphylococcus Οζ ζηαθοθυημηημζ είκαζ gram εεηζημί, αηίκδημζ, ιδ ζπμνμβυκμζ, ζθαζνζημί ιζηνμμνβακζζιμί, ιε δζάιεηνμ 0,5 έςξ 1,5 ιm, μζ μπμίμζ είηε είκαζ ιμκήνεζξ, είηε δζαηάζζμκηαζ ζε γεφβδ, ηεηνάδεξ ή ιζηνέξ μιάδεξ δίηδκ ηζαιπζχκ ζηαθοθζμφ. Σμ ηοηηανζηυ ημοξ ημίπςια πενζέπεζ πεπηζδμβθοηάκδ ηαζ ηεζπμσηυ μλφ. Δίκαζ ακεεηηζημί ζε ζοβηέκηνςζδ 10% NaCl, ακαπηφζζμκηαζ ζε ιεβάθμ εφνμξ εενιμηναζζχκ ιεηαλφ 18 o C ηαζ 40 μ C ηαζ πανμοζζάγμοκ εοαζζεδζία ζηδ θοζμζηαθίκδ. Με ηδκ ελαίνεζδ ηςκ αοζηδνά ακαενυαζςκ εζδχκ S. saccharolyticus ηαζ S. aureus subsp. anaerobius, μζ ζηαθοθυημηημζ είκαζ πνμαζνεηζηά ακαενυαζα ιζηνυαζα. Πανάβμοκ ημ έκγοιμ ηαηαθάζδ, πμο δζαζπά ημ οπενμλείδζμ ημο οδνμβυκμο ζε κενυ ηαζ μλοβυκμ, ακ ηαζ έπμοκ ακαθενεεί ζπάκζα ηαηαθάζδ ανκδηζηά ζηεθέπδ. Δπίζδξ, εηηυξ απυ ηα είδδ S. fleurettii, S. lentus, S. sciuri ηαζ S. vitulinus, μζ ζηαθοθυημηημζ δε δζαεέημοκ δναζηζηυηδηα μλεζδάζδξ. Σμ ααζζηυηενμ βμκμηοπζηυ παναηηδνζζηζηυ ηςκ ιεθχκ ημο βέκμοξ είκαζ ημ πενζεπυιεκυ ημοξ ζε βμοακίκδ-ηοημζίκδ, πμο ηοιαίκεηαζ ιεηαλφ 30 ηαζ 39 mol%. Βάζεζ ημο πνμζδζμνζζιμφ μθυηθδνδξ ηδξ αθθδθμοπίαξ εκυξ δζανηχξ αολακυιεκμο ανζειμφ ζηεθεπχκ, ηονίςξ S. aureus, ημ βμκζδίςια ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ απμηεθείηαζ απυ έκα πνςιυζςια ιεβέεμοξ 2,8 έςξ 2,9 Mbp, (ιε ζοκηδνδιέκμ πενίπμο ημ 75% ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο ιεηαλφ ηςκ εζδχκ), εκχ ακεονίζηεηαζ ηαζ πθδεχνα ηζκδηχκ βεκεηζηχκ ζημζπείςκ, ηονίςξ πθαζιζδίςκ (Becker and von Eiff 2011). 1.3 Βαζηθόο δηαρωξηζκόο ηωλ εηδώλ ηνπ γέλνπο Staphylococcus Ο παναδμζζαηυξ ηνυπμξ δζαπςνζζιμφ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, πμο πνμηάεδηε ηαζ ζζπφεζ απυ ημ 1925, ζηδνίγεηαζ ζηδκ ζηακυηδηά ημοξ κα πανάβμοκ ημ έκγοιμ ημαβημοθάζδ, αάζεζ ηδξ μπμίαξ δζαηνίκμκηαζ ζε ημαβημοθάζδ εεηζηά ηαζ ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ (von Darányi 1925). Ο ηονζυηενμξ εηπνυζςπμξ ηςκ ημαβημοθάζδ εεηζηχκ εζδχκ είκαζ μ S. aureus, μ μπμίμξ δζαεέηεζ δφμ ιμνθέξ ημο εκγφιμο: ηδκ εθεφεενδ ημαβημοθάζδ (free coagulase) ηαζ ηδ ζοκδεδειέκδ ημαβημοθάζδ (bound coagulase) ή πανάβμκηα ζοβηυθθδζδξ (clumping factor). Ζ εθεφεενδ ημαβημοθάζδ εηηνίκεηαζ ελςηοηηάνζα ηαζ ακηζδνά ιε ημκ πανάβμκηα CRF (coagulase Σελίδα 28

29 reacting factor) ημο πθάζιαημξ, ιε ημκ μπμίμ ζπδιαηίγεζ ζφιπθμημ, πμο, ιε ηδ ζεζνά ημο ιεηαηνέπεζ ημ ζκςδμβυκμ ζε ζκζηή. Eηηυξ απυ ημκ S. aureus subsp. aureus ηαζ ημκ S. aureus subsp. anaerobius, εθεφεενδ ημαβημοθάζδ πανάβμοκ ηαζ ηα είδδ S. delphini, S. intermedius, S. pseudointermedius, S. schleiferi subsp. coagulans ηαζ εκίμηε μ S. hyicus. Ζ ζοκδεδειέκδ ημαβημοθάζδ ανίζηεηαζ ζηδκ επζθάκεζα ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ ηαζ αθθδθεπζδνά άιεζα ιε ημ ζκςδμβυκμ ημο πθάζιαημξ, πνμηαθχκηαξ ηαπεία ηοηηανζηή ζοβηυθθδζδ. Δηηυξ απυ ημκ S. aureus subsp. aureus, ζοκδεδειέκδ ημαβημοθάζδ πανάβμοκ μζ S. lugdunensis, S schleiferi subsp. schleiferi, S. sciuri subsp. rodentium ηαζ εκίμηε μζ S. intermedius ηαζ S. sciuri subsp. carnaticus (Becker and von Eiff 2011). Έκαξ επζπθέμκ δζαπςνζζιυξ πμο αθμνά εζδζηά ημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυημοξ ααζίγεηαζ ζηδκ ακημπή ημοξ ζηδ κμαμαζμηίκδ (Mitchell and Baird-Parker 1967). Ωξ ακεεηηζηυ ζηδ κμαμαζμηίκδ μνίγεηαζ ηάεε ζηέθεπμξ πμο ειθακίγεζ εθάπζζηδ ακαζηαθηζηή ποηκυηδηα (minimal inhibitory concentration, MIC) 1,6 ιg/ml ή δζάιεηνμ γχκδξ ακαζημθήξ ακάπηολδξ 16 mm (ιε δίζημ 5 ιg ημο ακηζιζηνμαζαημφ). Ζ μιάδα ηςκ ακεεηηζηχκ ζηδ κμαμαζμηίκδ ζηαθοθμηυηηςκ πενζθαιαάκεζ ημοξ S. saprophyticus subsp. saprophyticus, S. saprophyticus subsp. bovis, S. xylosus, S. hominis subsp. novobiosepticus, S. cohnii subsp. cohnii, S. cohnii subsp. urealyticus, S. kloosii, S. arlettae, S. lentus, S. fleurettii, S. gallinarum, S. equorum subsp. equorum, S. nepalensis, S. sciuri subsp. sciuri, S. sciuri subsp. carnaticus, S. sciuri subsp.rodentium, S. succinus subsp. succinus ηαζ S. succinus subsp. casei. 1.4 Κιηληθή ζεκαζία ηνπ γέλνπο Staphylococcus Ζ ααζζηή μζημθμβζηή θςθεά ηςκ πενζζζυηενςκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ είκαζ ημ δένια ηαζ μζ αθεκκμβυκμζ εδθαζηζηχκ ηαζ πηδκχκ. Σμ ζδιακηζηυηενμ παεμβυκμ βζα ημκ άκενςπμ είκαζ, αδζαιθζζαήηδηα, μ S. aureus subsp. aureus αημθμοεμφιεκμξ απυ ημκ S. epidermidis, ημκ S. haemolyticus ηαζ ημκ S. saprophyticus subsp. saprophyticus. Άθθμζ ζηαθοθυηημζ πμο απμιμκχκμκηαζ απυ ακενχπζκα δείβιαηα, ιε δζανηχξ αολακυιεκδ ηθζκζηή ζδιαζία, πενζθαιαάκμοκ ημοξ S. hominis (S. hominis subsp. hominis ηαζ S. hominis subsp. novobiosepticus), S. capitis (S. capitis subsp. capitis ηαζ S. capitis subsp. urealyticus), S. schleiferi subsp. schleiferi, S. warneri, S. cohnii (S. cohnii subsp. cohnii ηαζ S. cohnii subsp. urealyticus), S. simulans, S. caprae ηαζ S. xylosus. Ηδζαίηενδ ηθζκζηή ζδιαζία ακάιεζα ζημοξ Σελίδα 29

30 ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ ηαηέπεζ μ S. lugdunensis, μ μπμίμξ ακαδεζηκφεηαζ ςξ ζδιακηζηυ παεμβυκμ ηδκ ηεθεοηαία δεηαεηία. πμναδζηέξ, ιυκμ, ακαθμνέξ, εκμπμπμζμφκ ςξ αίηζα ακενχπζκςκ θμζιχλεςκ ηα είδδ S. sciuri, S. saccharolyticus, S. auricularis, S. pasteuri, S. intermedius, S. hyicus ηαζ πνυζθαηα ηα είδδ S. pettenkoferi, S. pseudolugdunensis, S. massiliensis, S. petrasii ηαζ S. jettensis (Winn, Allen et al. 2006; Trulzsch, Grabein et al. 2007; Tang, Han et al. 2008; Al Masalma, Raoult et al. 2010; Becker and von Eiff 2011; De Bel, Van Hoorde et al. 2013; Pantucek, Svec et al. 2013). Σα οπυθμζπα είδδ ζηαθοθμηυηηςκ απμιμκχκμκηαζ απμηθεζζηζηά απυ γχα είηε ςξ παεμβυκα, είηε ςξ ιέθδ ηδξ πθςνίδαξ ημοξ ή ακεονίζημκηαζ ζε ηνυθζια, ζοιιεηέπμκηαξ ζηδ γφιςζή ημοξ ηαζ δεκ πανμοζζάγμοκ, ιέπνζ ζηζβιήξ, ηθζκζηυ εκδζαθένμκ βζα ημκ άκενςπμ (Winn, Allen et al. 2006). 1.5 Αληνρή ηνπ γέλνπο Staphylococcus ζηα β-ιαθηακηθά αληηκηθξνβηαθά Οζ ηονζυηενμζ ακηζιζηνμαζαημί πανάβμκηεξ πμο πνδζζιμπμζμφκηαζ έκακηζ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ είκαζ μζ α-θαηηάιεξ, ιε ημζκυ δμιζηυ πονήκα έκακ ηεηναιενή εηενμηοηθζηυ δαηηφθζμ, μ μπμίμξ απμηεθείηαζ απυ ηνία άημια άκεναηα ηαζ έκα άημιμ αγχημο (Δζηυκα 1). Ζ αζηάεεζα ημο δεζιμφ ιεηαλφ ημο ηαναμκοθίμο ηαζ ημο αγχημο ζημ α-θαηηαιζηυ δαηηφθζμ, μδδβεί ζηδ δζάκμζλή ημο ηαζ ηδ ζφκδεζδ ηδξ ηαναμκοθζηήξ μιάδαξ ιε ελεζδζηεοιέκα έκγοια ηδξ ιειανάκδξ ηςκ ιζηνμαζαηχκ ηοηηάνςκ. Πνυηεζηαζ βζα ηζξ πεκζηζθθζκμδεζιεοηζηέξ πνςηεΐκεξ (penicillin binding proteins, PBPs), πμο δνμοκ ςξ ηνακζπεπηζδάζεξ ηαηά ημκ πμθοιενζζιυ ηδξ πεπηζδμβθοηάκδξ, ηαηαθφμκηαξ ημ ζπδιαηζζιυ βέθοναξ πεκηαβθοηίκδξ ιεηαλφ ηςκ πεπηζδζηχκ αθοζίδςκ βεζημκζηχκ ιμνίςκ Ν-αηεηοθμ-ιμοναιζημφ μλέμξ (Δζηυκα 2). Ζ ζφκδεζδ ηςκ PBPs ιε ηζξ α-θαηηάιεξ μδδβεί ζηδκ αδνακμπμίδζή ημοξ, ιε απμηέθεζια ηδκ ακαζημθή ηδξ ζφκεεζδξ ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ ηαζ ηεθζηά ημ εάκαημ ηςκ ααηηδνίςκ (Winn, Allen et al. 2006). Ζ πνχηδ α-θαηηάιδ πμο πνδζζιμπμζήεδηε, ζηζξ ανπέξ ηδξ δεηαεηίαξ ημο 1940, ζηδ εεναπεοηζηή ηςκ θμζιχλεςκ απυ ζηαθοθμηυηημοξ ήηακ δ πεκζηζθθίκδ, αεθηζχκμκηαξ δναιαηζηά ηδκ πνυβκςζδ ηςκ πνμζαεαθδιέκςκ αζεεκχκ. Ακεεηηζηά ζηεθέπδ ειθακίζηδηακ ιυθζξ έκα πνυκμ ιεηά ηδκ ηοηθμθμνία ηδξ ηαζ ήδδ απυ ημ ηέθμξ ημο 1960 πάκς απυ ημ 80% ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ πμο απμιμκχκμκηακ ηυζμ απυ κμζμημιεζαηέξ, υζμ ηαζ απυ θμζιχλεζξ ηδξ ημζκυηδηαξ ήηακ ακεεηηζημί ζηδκ πεκζηζθθίκδ, ιε ημ ακηίζημζπμ πμζμζηυ κα οπενααίκεζ ζήιενα ημ 90%. Ζ ακημπή ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδκ πεκζηζθθίκδ μθείθεηαζ ζηδκ παναβςβή ιζαξ Σελίδα 30

31 ελςηοηηάνζαξ α-θαηηαιάζδξ, πμο οδνμθφεζ ημ α-θαηηαιζηυ δαηηφθζμ ηαζ αδνακμπμζεί ημ ακηζαζμηζηυ. Σμ βμκίδζμ blaz, πμο ηςδζημπμζεί ηδ α-θαηηαιάζδ, απμηεθεί ιένμξ ημο μπενμκίμο bla, ημ μπμίμ ιεηαθένεηαζ πθαζιζδζαηά ηαζ πενζθαιαάκεζ επζπθέμκ ηα νοειζζηζηά ημο blaz βμκίδζα blar1 ηαζ blai. Ακαθοηζηυηενα, υηακ ημ ζηέθεπμξ δεκ ανίζηεηαζ οπυ ηδκ επίδναζδ α- θαηηαιζημφ πανάβμκηα, δ πνςηεΐκδ BlaI ζοκδέεηαζ ιε ηδκ αθθδθμοπία-πεζνζζηή (operator) ημο μπενμκίμο, ηαηαζηέθθμκηαξ ηδ ιεηαβναθή ηςκ βμκζδίςκ blaz ηαζ blar1-blai. Ζ ζφκδεζδ ηδξ πεκζηζθθίκδξ ζημ ελςηοηηάνζμ ηαναμλοηεθζηυ άηνμ ηδξ δζαιειανακζηήξ πνςηεΐκδξ BlaR1, πμο θεζημονβεί ςξ ιεηαβςβέαξ ζήιαημξ, μδδβεί ζε απμημπή ηιήιαημξ ημο εκδμηοηηάνζμο αιζκμηεθζημφ ηδξ άηνμο. Σμ ηιήια αοηυ, ιυκμ ημο ή ιε ηδ αμήεεζα ιζαξ επζπθέμκ πνςηεΐκδξ, ηδξ BlaR2, δζαζπά ηαζ απεκενβμπμζεί ηδκ BlaI, επζηνέπμκηαξ ηδκ έκανλδ ηδξ ιεηαβναθήξ ηςκ blaz ηαζ blar1-blai ηζ, έηζζ, ηδκ παναβςβή ηδξ α-θαηηαιάζδξ (Δζηυκα 3) (Lowy 2003). Σμ πνυαθδια ηδξ ακημπήξ ζηζξ θοζζηέξ πεκζηζθθίκεξ λεπενάζηδηε ιε ηδκ παναζηεοή ηςκ διζζοκεεηζηχκ πεκζηζθθζκχκ, μζ μπμίεξ θένμοκ ζημ ααζζηυ α-θαηηαιζηυ ημοξ δαηηφθζμ πθάβζεξ αθοζίδεξ, πμο ηζξ ηαεζζημφκ ακεεηηζηέξ ζηδ δνάζδ ηδξ α-θαηηαιάζδξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ. Ζ εζζαβςβή ηδξ ιεεζηζθθίκδξ ζηδκ ηθζκζηή πνάλδ ημ 1961 ζοκμδεφηδηε, ηδκ ίδζα πνμκζά, απυ ηδκ ειθάκζζδ ακεεηηζηχκ ζηεθεπχκ, δ επίπηςζδ ηςκ μπμίςκ ανίζηεηαζ απυ ηυηε ζε δζανηή άκμδμ. Ακ ηαζ δ παιδθμφ επζπέδμο ακημπή ιπμνεί κα μθείθεηαζ ζε οπενπαναβςβή α-θαηηαιάζδξ ή ζε ηνμπμπμίδζδ ηςκ εκδμβεκχκ PBPs, μ ζδιακηζηυηενμξ ιδπακζζιυξ ακημπήξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ είκαζ δ παναβςβή ιζαξ κέαξ πεκζηζθθζκμδεζιεοηζηήξ πνςηεΐκδξ, ηδξ PBP2a ή PBP2', ιε ιεζςιέκδ ζοββέκεζα βζα ηζξ α-θαηηάιεξ. Σμ βμκίδζμ meca, πμο εοεφκεηαζ βζα ηδ ζφκεεζδ ηδξ PBP2a, είκαζ ζοκηδνδιέκμ ιεηαλφ ηςκ δζαθμνεηζηχκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ ημοξ πνμζδίδεζ ακημπή ζε υθεξ ηζξ α-θαηηάιεξ, ζοιπενζθαιαακμιέκςκ ηςκ ηεθαθμζπμνζκχκ ηαζ ηςκ ηανααπεκειχκ. Μαγί ιε ηα νοειζζηζηά βμκίδζα mecr1 ηαζ meci, απμηεθεί ιένμξ ημο μπενμκίμο mec, πμο εδνάγεηαζ ζηδκ εονφηενδ πνςιμζςιζηή πενζμπή SCC mec (staphylococcal cassette chromosome), δ μπμία δζαεέηεζ δοκαηυηδηα μνζγυκηζαξ δζαζπμνάξ ιεηαλφ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, αθθά ηαζ εκζςιάηςζδξ επζπνυζεεηςκ βμκζδίςκ ακημπήξ. Ζ νφειζζδ ημο meca είκαζ ακάθμβδ ημο blaz: δ έηεεζδ ζημ α-θαηηαιζηυ πανάβμκηα επάβεζ ηδ ζφκεεζδ ηδξ MecR1 ηαζ ηδ ζοκαηυθμοεδ απεκενβμπμίδζδ ημο ηαηαζημθέα MecI, ιε απμηέθεζια ηδκ έκανλδ ηδξ ιεηαβναθήξ ημο meca (Δζηυκα 3) (Chambers 1997; Livermore 2000; Lowy 2003). οπκυ παναηηδνζζηζηυ ηδξ ακημπήξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ είκαζ δ εηενμβεκήξ ηδξ έηθναζδ (απυ ιζηνυ ιυκμ ανζειυ, 10-8 έςξ 10-4, ηοηηάνςκ ημο ζηεθέπμοξ), βεβμκυξ ημ μπμίμ Σελίδα 31

32 ηαεζζηά δοζπενή ηδ θαζκμηοπζηή ακαβκχνζζδ ηςκ ακηίζημζπςκ ζηεθεπχκ ζημ Μζηνμαζμθμβζηυ Δνβαζηήνζμ. Σδκ επζηοπή ακίπκεοζδ ηςκ ζηεθεπχκ αοηχκ εοκμμφκ πεζνζζιμί υπςξ πνήζδ μλαηζθθίκδξ ή ηεθμλζηίκδξ ακηζ ηδξ ιεεζηζθθίκδξ, δ ιείςζδ ηδξ εενιμηναζίαξ (ζημοξ 30 μ C ιε 35 μ C), δ πανάηαζδ ημο πνυκμο επχαζδξ (ιέπνζ 48 χνεξ) ηαζ δ πανμοζία NaCl ζημ ενεπηζηυ οθζηυ (2% ιε 4%). Ωζηυζμ, ιέεμδμξ ακαθμνάξ βζα ηδκ ακίπκεοζδ ηςκ ακεεηηζηχκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ ζηαθοθμηυηηςκ είκαζ δ βμκμηοπζηή ακαγήηδζδ ημο βμκζδίμο meca ιε DNA οανζδζζιυ ή PCR (Winn, Allen et al. 2006; Becker and von Eiff 2011). Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ζφιθςκα ιε ημ Clinical Laboratory Standards Institute ηα υνζα εοαζζεδζίαξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ είκαζ δζαθμνεηζηά βζα ημοξ S. aureus ηαζ S. lugdunensis (ακημπή: MIC ζηδκ ηεθμλζηίκδ 8 ιg/ml ηαζ ζηδκ μλαηζθθίκδ 4 ιg/ml) ηαζ ημοξ οπυθμζπμοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ (ακημπή: MIC ζηδκ μλαηζθθίκδ 0,5 ιg/ml) (CLSI 2013) 2. Πεξηγξαθή ηωλ θιηληθά ζεκαληηθόηεξωλ εηδώλ Staphylococcus 2.Α Staphylococcus aureus subsp. aureus 2.Α.1 Δηζαγωγή θαη γεληθά ραξαθηεξηζηηθά Σμ 1880 μ ηςηζέγμξ πεζνμονβυξ Alexander Ogston παναηήνδζε ζε δείβιαηα πφμο αζεεκχκ ιε πεζνμονβζηά απμζηήιαηα ηδκ πανμοζία ηυηηςκ, μζ μπμίμζ δζαηάζζμκηακ ζε ιζηνέξ μιάδεξ δίηδκ ζηαθοθχκ. Τπμεέημκηαξ υηζ μζ ζοβηεηνζιέκμζ ιζηνμμνβακζζιμί εοεφκμκηακ βζα ημ ζπδιαηζζιυ ηςκ απμζηδιάηςκ, μ Ogston εκμθεάθιζζε ημ πφμ πμο πνμενπυηακ απυ ηα απμζηήιαηα αοηά ζε πμίνμοξ ηαζ πμκηίηζα ηαζ παναηήνδζε ημ ζπδιαηζζιυ κέςκ απμζηδιάηςκ, ηαεχξ ηαζ ηδκ πανμοζία ηςκ ίδζςκ ηυηηςκ ζημ αίια ηςκ ζδπηζηχκ γχςκ. Σμ 1882, μ Ogston μκυιαζε ημοξ ιζηνμμνβακζζιμφξ πμο ακαηάθορε ζηαθοθυημηημοξ, θυβς ηδξ δζάηαλήξ ημοξ (Ogston 1984), εκχ δφμ πνυκζα ανβυηενα μ Friedrich Julius Rosenbach, παναηδνχκηαξ ημ δζαθμνεηζηυ πνχια ηςκ απμζηζχκ ημοξ, δζέηνζκε βζα πνχηδ θμνά ημ πνοζίγμκηα ζηαθοθυημηημ, ημκ μπμίμ μκυιαζε S. aureus (απυ ημ θαηζκζηυ επίεεημ aurum πμο ζδιαίκεζ πνοζυξ) απυ ημ θεοηυ ζηαθοθυημηημ (ημκ ζδιενζκυ S. epidermidis), βζα ημκ μπμίμ πνδζζιμπμίδζε ηδκ μκμιαζία Staphylococcus albus (απυ ημ θαηζκζηυ επίεεημ albus πμο ζδιαίκεζ άζπνμξ) (Rosenbach 1884). Σελίδα 32

33 Αδζαιθζζαήηδηα, μ S. aureus απμηεθεί ημ πθέμκ παεμβυκμ είδμξ ζηαθοθμηυηημο βζα ημκ άκενςπμ. Ακεονίζηεηαζ ςξ ιέθμξ ηδξ θοζζμθμβζηήξ πθςνίδαξ ημο αθεκκμβυκμο ηςκ πνμζείςκ νζκζηχκ ημζθμηήηςκ, εκχ ιπμνεί κα απμζηίζεζ παναηνζιιαηζηέξ δενιαηζηέξ πηοπέξ, ημ πενίκεμ, ημ μνευ, ηζξ ιαζπαθζαίεξ ημζθυηδηεξ ηαζ ημ βοκαζηείμ ηυθπμ (Winn, Allen et al. 2006). Μάθζζηα, δ νζκζηή θμνία ημο S. aureus, δ μπμία ακένπεηαζ ζε πμζμζηυ 37,2% ζημ βεκζηυ πθδεοζιυ, απμηεθεί πανάβμκηα ηζκδφκμο βζα επαηυθμοεδ δζεζζδοηζηή θμίιςλδ ζδίςξ ζε αζεεκείξ πμο οπμαάθθμκηαζ ζε πεζνμονβζηέξ επειαάζεζξ, αζεεκείξ οπυ αζιμδζάθοζδ ή ζοκεπή θμνδηή πενζημκασηή ηάεανζδ, αζεεκείξ ιε AIDS, αζεεκείξ πμο θένμοκ εκδαββεζαημφξ ηαεεηήνεξ ηαζ αζεεκείξ απμζηζζιέκμοξ ιε ζηέθεπμξ ακεεηηζηυ ζηδ ιεεζηζθθίκδ (Methicillin Resistant S. aureus, MRSA) (Kluytmans, van Belkum et al. 1997). 2.Α.2 Κιηληθά ζύλδξνκα Σα ηθζκζηά ζφκδνμια πμο πνμηαθεί μ S. aureus δζαηνίκμκηαζ ζηζξ δζαιεζμθααμφιεκεξ απυ ημλίκεξ κυζμοξ ηαζ ζηζξ δζαποδηζηέξ θθεβιμκέξ. Οζ ηεθεοηαίεξ πενζθαιαάκμοκ ηυζμ επζθακεζαηέξ θμζιχλεζξ ημο δένιαημξ, υζμ ηαζ πενζζζυηενμ δζεζζδοηζηέξ, εκημπζζιέκεξ ή ζοζηδιαηζηέξ, θμζιχλεζξ (Becker and von Eiff 2011). 2.Α.2.1 Ππώδεηο θιεγκνλέο 2.Α Γεξκαηηθέο ζηαθπινθνθθηάζεηο Μεηαλφ ηςκ ποςδχκ θθεβιμκχκ πμο πνμηαθεί μ S. aureus ζοπκυηενεξ είκαζ μζ δενιαηζηέξ ζηαθοθμημηηζάζεζξ, μζ μπμίεξ εηηείκμκηαζ ζε έκα ανηεηά εονφ θάζια απυ πθεονάξ ηθζκζηήξ εζηυκαξ ηαζ αανφηδηαξ. Ζ επζπμθήξ εοθαηίηζδα είκαζ, ίζςξ, δ ηαθμδεέζηενδ θμίιςλδ, πμο πενζμνίγεηαζ ζημ ζηυιζμ ημο ηνζπζημφ εοθάημο ηαζ ανπίγεζ ζακ ιία ιζηνή εμθςηή θθφηηαζκα πενζααθθυιεκδ απυ ενοενή άθς, δ μπμία αοημσάηαζ ζε δζάζηδια επηά έςξ δέηα διενχκ πςνίξ μοθή. Ο δμεζήκαξ απμηεθεί ιζα ααεφηενδ, ζοκήεςξ κεηνςηζηή, ιυθοκζδ ημο ηνζπζημφ εοθάημο, πμο δδιζμονβείηαζ ςξ ζοκέπεζα ηδξ εοθαηίηζδαξ, ζδίςξ ζε πενζμπέξ ιε αολδιέκδ πίεζδ, ηνζαή ηζ εθίδνςζδ, υπςξ είκαζ ημ πνυζςπμ, μ αοπέκαξ, μζ αναπίμκεξ, μζ βθμοημί ηαζ δ πενζβεκκδηζηή πενζμπή. Ανπίγεζ ζακ έκα ιζηνυ εοθαηζηυ, θθεβιμκχδεξ μγίδζμ, ζημ ηέκηνμ ημο μπμίμο Σελίδα 33

34 ειθακίγεηαζ ιζα ζηθδνή ηςκζηή πενζμπή, πμο πενζαάθθεηαζ απυ ενοενή άθς. Σμ μγίδζμ ηαπφηαηα δζαποείηαζ, κεηνμφηαζ ηαζ νήβκοηαζ, ιε πανμπέηεοζδ ημο ποχδμοξ οθζημφ ηαζ πνμμδεοηζηή επμφθςζδ, δ μπμία ηαηαθείπεζ ζχδδ ηδθίδα ή ιυκζιδ μοθή. Ο ρεοδάκεναηαξ πνμηφπηεζ απυ εκ ης αάεεζ επέηηαζδ ημο δμεζήκα ζημκ οπμδυνζμ ζζηυ, ιε απμηέθεζια ημ ζπδιαηζζιυ απμζηήιαημξ ηαζ ιπμνεί κα ζοκμδεφεηαζ απυ ζοζηδιαηζηέξ εηδδθχζεζξ υπςξ πονεηυ ηαζ νίβμξ. Σμ ιμθοζιαηζηυ ηδνίμ είκαζ ιζα επζπμθήξ δενιαηζηή θμίιςλδ, ηονίςξ ηδξ παζδζηήξ δθζηίαξ, δ μπμία ειθακίγεηαζ ζοκήεςξ ζημ πνυζςπμ. Οζ αθάαεξ ημο ηδνίμο λεηζκμφκ ζακ ενοενέξ ηδθίδεξ, πμο ελεθίζζμκηαζ ζε θθφηηαζκεξ ιε μνμαζιαηδνυ πενζεπυιεκμ. ηδ ζοκέπεζα νήβκοκηαζ, λδναίκμκηαζ ηαζ ακηζηαείζηακηαζ απυ ιεθζηυπνμεξ εθεθηίδεξ, μζ μπμίεξ αοημσχκηαζ ζε δζάζηδια δφμ έςξ ηνζχκ εαδμιάδςκ, πςνίξ μοθή, δεδμιέκμο υηζ δ πνμζαμθή είκαζ επζδενιζηή. Ζ δζαποδηζηή ζδναδεκίηζδα είκαζ ιία οπμηνμπζάγμοζα, πομβυκμξ θμίιςλδ ηςκ απεηηνζηζηχκ ζδνςημπμζχκ αδέκςκ ζε παναηνζιιαηζηέξ πενζμπέξ ημο ζχιαημξ, δ μπμία εηδδθχκεηαζ ιε ημπζηυ άθβμξ, μίδδια ηαζ ενφεδια, πςνίξ εζηυκα ζοζηδιαηζηήξ θμίιςλδξ. Σέθμξ, μζ δενιαηζηέξ θμζιχλεζξ απυ S. aureus ιπμνμφκ κα είκαζ δεοηενμπαεμφξ αζηζμθμβίαξ, θυβς επζιυθοκζδξ ηςκ αθααχκ αζεεκχκ ιε έηγεια, ηονίςξ αημπζηή δενιαηίηζδα, ή δενιαηζηά έθηδ, ζδζαίηενα ηςκ ηάης άηνςκ ζε δθζηζςιέκα άημια (Ρδβυπμοθμξ 2001; Winn, Allen et al. 2006). 2.Α Λνηκώμεηο ηξαπκάηωλ θαη καιαθώλ κνξίωλ Ο S. aureus ζοκδέεηαζ ζοπκά ιε θμζιχλεζξ ηναοιάηςκ ηαζ, ιάθζζηα, απμηεθεί ημ ζοπκυηενμ αίηζμ ηςκ κμζμημιεζαηχκ θμζιχλεςκ ημο πεζνμονβζημφ πεδίμο, πμο έπμοκ ζακ απμηέθεζια ηδκ αφλδζδ ηδξ εκδηυηδηαξ, ηδκ πανάηαζδ ηδξ κμζδθείαξ ηαζ ηδκ επζαάνοκζδ ημο ηυζημοξ πενίεαθρδξ ημο αζεεκμφξ (Hidron, Edwards et al. 2008; Anderson and Kaye 2009). Οζ θμζιχλεζξ αοηέξ πνμένπμκηαζ απυ ζηεθέπδ ηδξ πθςνίδαξ ημο ίδζμο ημο αζεεκμφξ ή ιεηαδίδμκηαζ ιε ηα απμζηζζιέκα πένζα ημο ζαηνμκμζδθεοηζημφ πνμζςπζημφ ηαζ δ εηδήθςζή ημοξ ζπεηίγεηαζ ιε πμζηίθμοξ πανάβμκηεξ υπςξ είκαζ δ δθζηία, δ οπμηείιεκδ κυζμξ ηαζ δ δζάνηεζα ηδξ πνμεβπεζνδηζηήξ κμζδθείαξ ημο αζεεκμφξ, ημ είδμξ ηαζ δ έηηαζδ ηδξ επέιααζδξ ζηδκ μπμία οπμαάθθεηαζ, δ ημπμεέηδζδ λέκςκ οθζηχκ ηαζ δ πμνήβδζδ πνμθοθαηηζηήξ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ (Perl and Roy 1995). Σελίδα 34

35 Μία αηυια θμίιςλδ ηςκ ιαθαηχκ ιμνίςκ πμο πνμηαθεί μ S. aureus είκαζ δ πομιομζίηζδα, δ μπμία αθμνά ημοξ ζηεθεηζημφξ ιφεξ, είκαζ, ηαηά ηακυκα, αζιαημβεκμφξ πνμέθεοζδξ ηαζ μδδβεί ζημ ζπδιαηζζιυ απμζηήιαημξ. οιααίκεζ ζε οβζή άημια ιεηά απυ έκημκδ άζηδζδ ή ημπζηυ ηναοιαηζζιυ ηαζ εκημπίγεηαζ, πνςηίζηςξ, ζηα ηάης άηνα ηαζ, δεοηενεουκηςξ, ζηδκ ημζθζαηή ηαζ ηδκ ποεθζηή πχνα. Ζ ηθζκζηή εζηυκα πενζθαιαάκεζ πονεηυ, πυκμ, ενοενυηδηα, εενιυηδηα ηαζ μίδδια ζηδκ πνμζαεαθδιέκδ πενζμπή ηαζ δ ακηζιεηχπζζδ ηδξ θμίιςλδξ επζηοβπάκεηαζ ιε ζοκδοαζιυ πεζνμονβζημφ ηαεανζζιμφ ηαζ ζοιααηζηήξ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ (Burdette, Watkins et al. 2012). Ηδζαίηενδ ακαθμνά αλίγεζ κα βίκεζ ηαζ ζηδ ιαζηίηζδα απυ S. aureus, δ μπμία αθμνά βοκαίηεξ ζηδκ πενίμδμ ηδξ θμπείαξ ηαζ ζηδκ πθεζμρδθία ηςκ πενζπηχζεςκ ηαηαθήβεζ ζημ ζπδιαηζζιυ απμζηήιαημξ. Ζ θμίιςλδ ειθακίγεηαζ έκα πενίπμο ιήκα ιεηά ημκ ημηεηυ, ιε πονεηυ, ζηθήνοκζδ ηαζ δενιαηζηέξ αθθμζχζεζξ ζηδκ πενζμπή ημο ιαζημφ, απαζηεί ζοπκά κμζδθεία, ακηζιεηςπίγεηαζ ιε ακηζιζηνμαζαηή αβςβή ηαζ πανμπέηεοζδ ημο απμζηήιαημξ ηαζ ιπμνεί κα μδδβήζεζ ανηεηέξ βοκαίηεξ ζε δζαημπή ημο εδθαζιμφ (Reddy, Qi et al. 2007). 2.Α Λνηκώμεηο νζηώλ θαη αξζξώζεωλ O S. aureus ηαηέπεζ, ακαιθίαμθα, πνςηαβςκζζηζηυ νυθμ ηαζ ζηζξ θμζιχλεζξ ηςκ μζηχκ ηαζ ηςκ ανενχζεςκ. οβηεηνζιέκα, εοεφκεηαζ βζα πενζζζυηενμ απυ ημ 50% ημο ζοκυθμο ηςκ πενζζηαηζηχκ μζηεμιοεθίηζδαξ, ιζαξ θμίιςλδξ δ μπμία παναηηδνίγεηαζ απυ θθεβιμκχδδ ηαηαζηνμθή, κέηνςζδ ημο πνμζαεαθδιέκμο μζημφ ηαζ ζπδιαηζζιυ κέμο. Ζ μλεία αζιαημβεκήξ μζηεμιοεθίηζδα εηδδθχκεηαζ, ζοκήεςξ, ιε εενιυηδηα, εοαζζεδζία ηαζ ημπζηυ ειιέκμκηα πυκμ, εκχ δ πνυκζα, ηαηά ηακυκα, ζοκδοάγεηαζ ιε ηδκ πανμοζία ιδ επμοθμφιεκμο έθημοξ ή ζονζββίμο πάκς απυ ημ πάζπμκ μζηυ. Με ζηυπμ ηδ αεθηίςζδ ηδξ θεζημονβζηήξ πνυβκςζδξ, δ εεναπεία ηαζ ζηζξ δφμ πενζπηχζεζξ απαζηεί ηαηάθθδθδ ακηζααηηδνζαηή αβςβή, πανμπέηεοζδ ημο ποχδμοξ οθζημφ ηαζ πεζνμονβζηυ ηαεανζζιυ ηςκ κεηνςιέκςκ ή ζζπαζιζηχκ ζζηχκ. Ο S. aureus εοεφκεηαζ, επίζδξ, βζα ημ 40% ιε 60% ηςκ πενζζηαηζηχκ ζδπηζηήξ ανενίηζδαξ, δ μπμία εηδδθχκεηαζ ιε πονεηυ, μίδδια, εενιυηδηα, ενοενυηδηα ηαζ εοαζζεδζία ηδξ πνμζαεαθδιέκδξ άνενςζδξ. Ζ θμίιςλδ πνήγεζ επείβμοζαξ ακηζιεηχπζζδξ ιε πανμπέηεοζδ ημο πφμο, πμνήβδζδ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ αθθά ηαζ θοζζμεεναπεία, πνμηεζιέκμο κα δζαηδνδεεί δ πθήνδξ θεζημονβζηυηδηα ηαζ δ ζςζηή εέζδ ηδξ άνενςζδξ. Σελίδα 35

36 ε υ,ηζ αθμνά ηζξ θμζιχλεζξ ηςκ πνμζεεηζηχκ ανενχζεςκ, μ S. aureus ένπεηαζ δεφηενμξ, ζε ζεζνά ζοπκυηδηαξ, ιεηά ημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ, πνμηαθχκηαξ ημ 23% ηςκ ακηίζημζπςκ πενζζηαηζηχκ. Οζ θμζιχλεζξ αοηέξ ηαηαβνάθμκηαζ ζοπκυηενα ιεηά απυ επειαάζεζξ ακαεεχνδζδξ ιζαξ ανενμπθαζηζηήξ, πανά ιεηά ηδκ ανπζηή ακηζηαηάζηαζδ ηδξ άνενςζδξ. Γζαηνίκμκηαζ ζε πνχζιεξ ηαζ υρζιεξ θμζιχλεζξ, ακαθυβςξ ακ ζοιααίκμοκ πνζκ ή ιεηά ημκ πνχημ ιήκα απυ ημ πεζνμονβείμ ακηίζημζπα, ιε ηζξ πνχζιεξ κα ειθακίγμοκ εμνοαχδδ ηθζκζηή εζηυκα ιε ημπζηά ηαζ ζοζηδιαηζηά ζοιπηχιαηα ηαζ ζδιεία θθεβιμκήξ ηαζ ηζξ υρζιεξ κα δζαδνάιμοκ δπζυηενα ιε ηαηή θεζημονβζηυηδηα ηδξ άνενςζδξ ηαζ ζοκμδυ πυκμ. Μζα οπμμιάδα ηςκ θμζιχλεςκ υρζιδξ έκανλδξ είκαζ αοηή ηςκ υρζιςκ αζιαημβεκχκ θμζιχλεςκ, μζ μπμίεξ πνμηφπημοκ απυ αζιαημβεκή δζαζπμνά ημο ααηηδνίμο ιεηά απυ ζαηνζημφξ πεζνζζιμφξ ή θμίιςλδ ζε απμιαηνοζιέκεξ πενζμπέξ ηαζ εηδδθχκμκηαζ ιε αζθκίδζα έκανλδ πονεημφ, πυκμο ηαζ δοζθεζημοβίαξ ηδξ πνμζεεηζηήξ άνενςζδξ. ε υθεξ αοηέξ ηζξ πενζπηχζεζξ, δ αάζδ ηδξ εεναπείαξ, πένα απυ ηδ πμνήβδζδ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ, είκαζ δ πεζνμονβζηή ακηζηαηάζηαζδ ηδξ μνεμπαζδζηήξ πνυεεζδξ ζε δφμ, ζοκήεςξ, πνυκμοξ (Davis 2005). 2.Α Πλεπκνλία ηζξ δζεζζδοηζηέξ θμζιχλεζξ πμο πνμηαθεί μ S. aureus πενζθαιαάκεηαζ ηαζ δ πκεοιμκία, πμο ιπμνεί κα αθμνά ηυζμ εκήθζηεξ, υζμ ηαζ παζδζά ηαζ μθμέκα ζοπκυηενα μθείθεηαζ ζε ζηεθέπδ MRSA. Ακ ηαζ ανπζηά εηδδθςκυηακ ζοκδεέζηενα ςξ θμίιςλδ κμζμημιεζαηήξ πνμέθεοζδξ, δ πκεοιμκία απυ S. aureus ηαζ εζδζηυηενα απυ ζηεθέπδ MRSA ηαηαβνάθεηαζ, μθμέκα, ζοπκυηενα ζηδκ ημζκυηδηα, πθήηημκηαξ, ηαηά ηακυκα, κεανά, οβζή άημια. Δηδδθχκεηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, ημοξ πεζιενζκμφξ ηαζ θεζκμπςνζκμφξ ιήκεξ ηαζ εβηαείζηαηαζ, ζοκήεςξ, ιεηά απυ ηάπμζα ζμβεκή ακαπκεοζηζηή ζοκδνμιή, ηονίςξ βνίπδ. Ζ ηθζκζηή εζηυκα ηδξ θμίιςλδξ πενζθαιαάκεζ πονεηυ, ηαπφπκμζα, ηαποηανδία, οπυηαζδ ηαζ αζιυπηοζδ. οπκά ακεονίζηεηαζ θεοημπεκία, εκχ ηα ανπζηά αηηζκμθμβζηά εονήιαηα πενζθαιαάκμοκ δζδεήζεζξ ζε έκακ ή πενζζζυηενμοξ θμαμφξ ηαζ, θυβς ηδξ ηορεθζδζηήξ αζιμνναβίαξ, εζηυκα ζοιααηή ιε ημ ζφκδνμιμ μλείαξ ακαπκεοζηζηήξ δοζπένεζαξ (acute respiratory distress syndrome, ARDS). ηδκ πμνεία ηδξ κυζμο, δ κέηνςζδ ημο πκεοιμκζημφ πανεβπφιαημξ μδδβεί ζηδκ ειθάκζζδ πθεονζηζηήξ ζοθθμβήξ ηαζ παναηηδνζζηζηχκ ζπδθαζςδχκ αθααχκ, μζ μπμίεξ ζοννέμοκ. ηζξ πενζζζυηενεξ πενζπηχζεζξ ακαπηφζζεηαζ ζδπηζηυ Σελίδα 36

37 ζμη ηαζ δ εκδηυηδηα ηδξ θμίιςλδξ ακένπεηαζ ζημ 42% (Wallin, Hern et al. 2008; Bien, Sokolova et al. 2011). 2.A Βαθηεξηαηκία θαη ελδνθαξδίηηδα Ανηεηά ζοπκά μ S. aureus απμηεθεί αίηζμ ααηηδνζαζιίαξ, ηαεχξ εοεφκεηαζ βζα ημ 23% ημο ζοκυθμο ηςκ πενζζηαηζηχκ ηαζ δ απμιυκςζή ημο έζης ηαζ απυ ιία εεηζηή αζιμηαθθζένβεζα πνέπεζ πάκηα κα εεςνείηαζ ηθζκζηά ζδιακηζηή. Ζ ααηηδνζαζιία απυ S. aureus ιπμνεί κα είκαζ δεοηενμπαεήξ ιζαξ εκημπζζιέκδξ θμίιςλδξ (π.π. απμζηήιαημξ, έθημοξ, εβηαφιαημξ, πκεοιμκίαξ) ή κα πνμηφπηεζ απυ είζμδμ ημο ααηηδνίμο ζηδκ ηοηθμθμνία ιέζς ηαεεηήνςκ, άθθςκ λέκςκ ζςιάηςκ ή ζονίββςκ, πμο πνδζζιμπμζμφκηαζ βζα ηδκ έβποζδ κανηςηζηχκ μοζζχκ. Οζ αζεεκείξ πανμοζζάγμκηαζ ιε πονεηυ ηαζ θνίηζα ή νίβμξ, εκχ ιπμνεί κα ζοκοπάνπμοκ αζιμνναβζηέξ δενιαηζηέξ αθάαεξ, πμο ελεθίζζμκηαζ ζε ιεβαθφηενα κεηνςηζηά έθηδ. Ζ ααηηδνζαζιία απυ S. aureus ζοκδέεηαζ ιε ορδθή εκδηυηδηα, ηδξ ηάλεςξ ημο 30% ηαζ απμηεθεί ιείγμκα πανάβμκηα ηζκδφκμο βζα ηδκ ακάπηολδ εκδμηανδίηζδαξ, ηονίςξ ζε αζεεκείξ ιε ιδ θοζζμθμβζηέξ ή πνμζεεηζηέξ ααθαίδεξ (Winn, Allen et al. 2006; Thwaites, Edgeworth et al. 2011). οβηεηνζιέκα, δ εκδμηανδίηζδα απυ S. aureus ακηζζημζπεί ζημ 31,4% ημο ζοκυθμο ηςκ πενζζηαηζηχκ εκδμηανδίηζδαξ παβημζιίςξ. Ακ ηαζ ηαηά αάζδ απμηεθεί θμίιςλδ ηδξ ημζκυηδηαξ, δ μπμία ζοπκά ζπεηίγεηαζ ιε ηδκ εκδμθθέαζα πνήζδ κανηςηζηχκ μοζζχκ, έκα δζανηχξ αολακυιεκμ πμζμζηυ πενζζηαηζηχκ, πμο ζήιενα θηάκεζ ημ 39,1%, είκαζ κμζμημιεζαηήξ πνμέθεοζδξ. Βαζζηά παναηηδνζζηζηά ηδξ εκδμηανδίηζδαξ απυ S. aureus είκαζ δ ιζηνυηενδ ημο εκυξ ιδκυξ δζάνηεζα έκανλδξ ηςκ ζοιπηςιάηςκ, δ ηαηαβναθή πνυκζμο οπμηείιεκμο κμζήιαημξ ζημ ζζημνζηυ ημο αζεεκμφξ, δ πανμοζία εκδαββεζαημφ λέκμο ζχιαημξ ςξ πφθδξ εζζυδμο ημο ααηηδνίμο ηαζ δ ειθάκζζδ ζδπηζημφ ειαμθζζιμφ ή ειιέκμοζαξ ααηηδνζαζιίαξ ςξ επζπθμηχκ ηδξ θμίιςλδξ (Fowler, Miro et al. 2005). 2.Α Μεληγγίηηδα Μζα αηυια δζεζζδοηζηή θμίιςλδ ημο S. aureus είκαζ δ ιδκζββίηζδα, πμο ιπμνεί κα μθείθεηαζ ζε αζιαημβεκή δζαζπμνά ημο ααηηδνίμο απυ απμιαηνοζιέκδ εζηία ή κα ειθακίγεηαζ ιεηεβπεζνδηζηά ιεηά απυ κεονμπεζνμονβζηέξ επειαάζεζξ. Ζ αζιαημβεκήξ ιδκζββίηζδα είκαζ, ηαηά Σελίδα 37

38 ηακυκα, θμίιςλδ ηδξ ημζκυηδηαξ ηαζ εηδδθχκεηαζ ζε άημια ιεβάθδξ δθζηίαξ ιε ζμαανά οπμηείιεκα κμζήιαηα, υπςξ ζηεθακζαία ζφκδνμια ηαζ πνυκζα κεθνζηή ακεπάνηεζα. Ακηζεέηςξ, δ ιεηεβπεζνδηζηή ιδκζββίηζδα είκαζ κμζμημιεζαηήξ πνμέθεοζδξ ηαζ αθμνά ηονίςξ κέα άημια, ιε απμθναηηζηυ οδνμηέθαθμ, βζα ηδκ πανμπέηεοζδ ημο μπμίμο θένμοκ εκδμηνακζαηά ειθοηεφιαηα. Ζ ηθζκζηή εζηυκα ηδξ θμίιςλδξ είκαζ αανφηενδ ζηδκ πενίπηςζδ ηδξ αζιαημβεκμφξ ιδκζββίηζδαξ, ιε ημκ αζεεκή κα ειθακίγεζ ζοπκυηενα πονεηυ, ζφβποζδ ηαζ ζδπηζηυ ζμη, εκχ ζδιεία ιδκζββζζιμφ, ηεθαθαθβία, ζπαζιμί ηαζ εζηζαηά κεονμθμβζηά ζοιπηχιαηα παναηδνμφκηαζ ελίζμο ζοπκά ηαζ ζηδ ιεηεβπεζνδηζηή θμίιςλδ. Ζ αζιαημβεκήξ ιδκζββίηζδα απαζηεί πμνήβδζδ ζοκδοαζηζηήξ ακηζααηηδνζαηήξ αβςβήξ βζα δζάζηδια ανηεηχκ, ζοκήεςξ ηνζχκ, εαδμιάδςκ ηαζ δ εκδηυηδηα ηδξ ακένπεηαζ ζημ 43%. Δπζπθέμκ ηδξ ακηζιζηνμαζαηήξ εεναπείαξ, δ αθαίνεζδ ημο ιμθοζιέκμο ειθοηεφιαημξ είκαζ απαναίηδηδ βζα ηδκ ακηζιεηχπζζδ ηδξ ιεηεβπεζνδηζηήξ ιδκζββίηζδαξ, ηδξ μπμίαξ δ εκδηυηδηα θηάκεζ 25% (Aguilar, Urday-Cornejo et al. 2010). 2.Α.2.2 Κιηληθά ζύλδξνκα ζρεηηδόκελα κε παξαγωγή ηνμηλώλ Ζ δεφηενδ ιεβάθδ ηαηδβμνία θμζιχλεςκ πμο πνμηαθεί μ S. aureus πενζθαιαάκεζ ηζξ θμζιχλεζξ πμο ζπεηίγμκηαζ ιε ηζξ ημλίκεξ ημο είδμοξ ηαζ ζοβηεηνζιέκα ημ ζφκδνμιμ ημο ημλζημφ ζμη, ημ ζηαθοθμημηηζηυ απμθμθζδςηζηυ ζφκδνμιμ ηαζ ηδκ ηνμθζηή δδθδηδνίαζδ. 2.Α ύλδξνκν ηνμηθνύ ζνθ Σμ ζφκδνμιμ ημο ημλζημφ ζμη ειθακίγεηαζ ζοκδεέζηενα ζε κεανέξ βοκαίηεξ ηαηά ηδ δζάνηεζα ηδξ ειιήκμο νφζεςξ ή αιέζςξ ιεηά απυ αοηήκ ηαζ ζοκδέεηαζ ιε ηδ πνήζδ οπεναπμννμθδηζηχκ εκδμημθπζηχκ ηαιπυκ. Ωζηυζμ, έκαξ μθμέκα αολακυιεκμξ ανζειυξ πενζζηαηζηχκ ηαηαβνάθεηαζ, πθέμκ, ζε αζεεκείξ ηαζ ηςκ δφμ θφθςκ ςξ επζπθμηή άθθςκ ζηαθοθμημηηζηχκ θμζιχλεςκ υπςξ απμζηδιάηςκ, ιεηεβπεζνδηζηχκ θμζιχλεςκ, ηοηηανίηζδαξ, μζηεμιοεθίηζδαξ ηαζ πκεοιμκίαξ. Σα ηοπζηά ζοιπηχιαηα ηαζ ζδιεία ημο ζοκδνυιμο ημο ημλζημφ ζμη πενζθαιαάκμοκ ορδθυ πονεηυ, ηεθαθαθβία, ειέημοξ, δζάννμζεξ, ιοαθβίεξ ηαζ ειθάκζζδ δζάποημο ενοεδιαηχδμοξ ελακεήιαημξ, πμο αημθμοεείηαζ απυ απμθμθίδςζδ ζηδκ πενζμπή ηςκ παθαιχκ ηαζ ηςκ πεθιάηςκ. Δίκαζ δοκαηυκ κα ζοκοπάνπεζ μίδδια, εζηυκα ιδκζββζζιμφ, θανοββίηζδα, επζπεθοηίηζδα, ανεναθβίεξ, εοενεεζζηυηδηα, ηυπςζδ ηαζ ημζθζαηυ άθβμξ, εκχ Σελίδα 38

39 επζπθμηέξ υπςξ δ οπμβηαζιζηή ηαηαπθδλία, δ κεθνζηή ακεπάνηεζα, ημ ζφκδνμιμ ηδξ μλείαξ ακαπκεοζηζηήξ δοζπένεζαξ ηαζ δ δζάποηδ εκδαββεζαηή πήλδ ιπμνεί, ηεθζηά, κα απεζθήζμοκ ηδ γςή ημο αζεεκμφξ. Τπεφεοκδ βζα ημ ζφκμθμ ηςκ πενζζηαηζηχκ ημο ζοκδνυιμο πμο ειθακίγμκηαζ ηαηά ηδ δζάνηεζα ηδξ ειιήκμο νφζεςξ είκαζ δ ημλίκδ TSST-1 (toxic shock syndrome toxin-1). Σα πενζζηαηζηά πμο δεκ ζπεηίγμκηαζ ιε ηδ πνήζδ ηαιπυκ μθείθμκηαζ ηαηά 50% ζε ζηεθέπδ S. aureus πμο πανάβμοκ ηδκ ημλίκδ TSST-1, ηαηά 47% ζε ζηεθέπδ πμο πανάβμοκ ηδκ εκηενμημλίκδ SEB (staphylococcal enterotoxin B) ηαζ ηαηά 3% ζε ζηεθέπδ πμο πανάβμοκ ηδκ εκηενμημλίκδ SEC (staphylococcal enterotoxin C) (Dinges, Orwin et al. 2000; Herzer 2001). 2.Α Απνθνιηδωηηθό ζύλδξνκν Σμ ζηαθοθμημηηζηυ απμθμθζδςηζηυ ζφκδνμιμ παναηδνείηαζ ηονίςξ ζε κεμβκά ηαζ παζδζά, ακ ηαζ ακαθένμκηαζ πενζζηαηζηά ηαζ ζε εκήθζημοξ αζεεκείξ. Ζ εκημπζζιέκδ ιμνθή ημο ζοκδνυιμο παναηηδνίγεηαζ απυ ηδκ ειθάκζζδ θεπηχκ, ιαθεαηχκ θοζαθίδςκ, πμο νήβκοκηαζ εφημθα πςνίξ κα ζοκμδεφμκηαζ απυ εζηυκα ζοζηδιαηζηήξ θμίιςλδξ. Οζ θοζαθίδεξ αοηέξ ζηα κεμβκά ειθακίγμκηαζ ηονίςξ ζημ πενίκεμ ηαζ ηδκ πενζμιθαθζηή πχνα ηαζ ζηα ιεβαθφηενα παζδζά εηδδθχκμκηαζ, ηαηά ηακυκα, ζηα άηνα. ηδ βεκζηεοιέκδ ιμνθή ημο ζοκδνυιμο παναηδνείηαζ εηηεηαιέκδ απμθμθίδςζδ ημο δένιαημξ, πςνίξ ζοιιεημπή ηςκ αθεκκμβυκςκ. Ζ κυζμξ αημθμοεεί ζοκήεςξ ηάπμζα θμίιςλδ ημο ακχηενμο ακαπκεοζηζημφ ζοζηήιαημξ, ημο έζς ςηυξ, ημο επζπεθοηυηα ή ημο μιθαθζημφ ημθμαχιαημξ, ακ ηαζ έπμοκ ηαηαβναθεί πενζζηαηζηά ηαζ ζε αζεεκείξ ιε πκεοιμκία, ζδπηζηή ανενίηζδα, πομιομζίηζδα ηαζ ιαζηζηά απμζηήιαηα. Δηδδθχκεηαζ ιε πονεηυ, εοενεεζζηυηδηα ηαζ μζηναηζμεζδέξ ελάκεδια, ημ μπμίμ επζηείκεηαζ πενζζημιαηζηά ηαζ ζηζξ πηοπέξ ημο δένιαημξ. Πμθφ ζφκημια ειθακίγμκηαζ ιεβάθεξ θεπηέξ θοζαθίδεξ, πμο νήβκοκηαζ εφημθα ηαζ μδδβμφκ ζε εηηεηαιέκδ απμθμθίδςζδ ηδξ επζδενιίδαξ ηαζ απμβφικςζδ ημο οπμδυνζμο ζζημφ, ιε απχθεζα ηςκ ηνζπχκ ηαζ ηςκ μκφπςκ. Ο αζεεκήξ ιπμνεί κα ηαηαθήλεζ αηυια ηαζ ζημ εάκαημ απυ ηδκ επαηυθμοεδ δζαηαναπή ηδξ εενιμνφειζζδξ, ηδ ζδιακηζηή απχθεζα οβνχκ ηαζ δθεηηνμθοηχκ ηαζ ηζξ πζεακέξ δεοηενμβεκείξ επζιμθφκζεζξ ηςκ δενιαηζηχκ αθααχκ (Ladhani, Joannou et al. 1999). 2.Α Σξνθηθή δειεηεξίαζε Σελίδα 39

40 Μία αηυιδ θμίιςλδ απυ S. aureus πμο ζπεηίγεηαζ ιε ημλίκεξ είκαζ δ ηνμθζηή δδθδηδνίαζδ, πμο πνμηφπηεζ απυ ηδκ ηαηακάθςζδ ηνμθίιςκ, ηα μπμία έπμοκ επζιμθοκεεί, ηαηά ηδκ επελενβαζία ημοξ, ιε ζηεθέπδ πμο πανάβμοκ εκηενμημλίκεξ. Μεηαλφ ηςκ ηνμθίιςκ πμο έπμοκ εκμπμπμζδεεί βζα ηδ κυζμ πενζθαιαάκμκηαζ ημ βάθα, δ ηνέια ηαζ ηα βθοηά πμο πενζέπμοκ ηνέια, ημ αμφηονμ, ηα ηονζά, ηα θμοηάκζηα, μζ ζαθάηεξ, ημ γαιπυκ, μζ ημκζέναεξ ηνέαημξ, ηαεχξ ηαζ δζάθμνα ιαβεζνειέκα βεφιαηα. Ζ ηνμθζηή δδθδηδνίαζδ εηδδθχκεηαζ ιε ημζθζαηέξ ηνάιπεξ, καοηία, ειέημοξ ηαζ εκδεπμιέκςξ δζάννμζεξ. Ζ έκανλδ ηςκ ζοιπηςιάηςκ είκαζ μλεία, ζοκήεςξ ιεηαλφ 30 θεπηχκ ηαζ μηηχ ςνχκ απυ ηδκ ηαηακάθςζδ ηδξ ηνμθήξ ηαζ ζοκήεςξ παναηδνείηαζ αοηυιαηδ αεθηίςζδ ηδξ ηθζκζηήξ εζηυκαξ ιεηά απυ 24 χνεξ (Le Loir, Baron et al. 2003). 2.Α.3 Λνηκνγόλνη παξάγνληεο Ο S. aureus, ςξ ημ πθέμκ παεμβυκμ είδμξ ζηαθοθμηυηημο, δζαεέηεζ έκα ελαζνεηζηά εηηεηαιέκμ μπθμζηάζζμ θμζιμβυκςκ παναβυκηςκ, μζ μπμίμζ ελοπδνεημφκ ηνεζξ ααζζημφξ ζηυπμοξ βζα ημ ααηηήνζμ: ημκ ανπζηυ απμζηζζιυ ημο λεκζζηή, ηδ δζαθοβή ηςκ ιδπακζζιχκ άιοκαξ πμο αοηυξ ακαπηφζζεζ ηαζ, ηεθζηά, ηδκ πνυηθδζδ αθάαδξ ζηα ηφηηανα ηαζ ημοξ ζζημφξ ημο λεκζζηή, δ μπμία, μοζζαζηζηά, ηαεμνίγεζ ηαζ ηδκ ηθζκζηή εζηυκα ηδξ θμίιςλδξ (Foster 1996). 2.Α.3.1 Πξνζθνιιεηίλεο Ο απμζηζζιυξ ημο λεκζζηή απυ ημκ S. aureus λεηζκά ιε ηδκ αθθδθεπίδναζδ ημο ααηηδνίμο ιε πνςηεΐκεξ ηδξ ελςηοηηάνζαξ εειέθζαξ μοζίαξ ηαζ ημο πθάζιαημξ ημο λεκζζηή. Ζ αθθδθεπίδναζδ αοηή δζαιεζμθααείηαζ απυ ιία ζεζνά πνμζημθθδηζκχκ ημο ζηαθοθμηυηημο, μζ μπμίεξ είκαζ βκςζηέξ ςξ «ζοζηαηζηά ηδξ επζθάκεζαξ ημο ιζηνμαίμο πμο ακαβκςνίγμοκ πνμζημθθδηζηά ιυνζα ηδξ εειέθζαξ μοζίαξ» (microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules, MSCRAMMs). Πένα απυ ηδκ απθή ζφκδεζδ ημο ααηηδνίμο ιε ηδκ ελςηοηηάνζα εειέθζα μοζία, ηάπμζεξ απυ ηζξ πνμζημθθδηίκεξ αοηέξ έπμοκ ηδκ ζηακυηδηα κα πανειααίκμοκ ζημοξ ιδπακζζιμφξ άιοκαξ ημο λεκζζηή ή, αηυια, κα ζοιαάθθμοκ ζηδκ εκδμηοηηάνςζδ ημο S. aureus απυ μοδεηενυθζθα ηαζ εκδμεδθζαηά ηφηηανα, δ μπμία ιπμνεί κα είκαζ ηαεμνζζηζηή βζα ηδκ ελέθζλδ ηδξ θμίιςλδξ. Σα πενζζζυηενα ιυνζα MSCRAMMs ζοκδέμκηαζ μιμζμπμθζηά ιε ηδκ πεπηζδμβθοηάκδ ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ ημο S. aureus. ηα Σελίδα 40

41 ιυνζα αοηά πενζθαιαάκεηαζ: i) δ πνςηεΐκδ Α, δ μπμία ζοκδέεηαζ ιε ηδκ ακμζμζθαζνίκδ IgG, ημκ πανάβμκηα von Willebrand ηαζ ημκ οπμδμπέα ημο πανάβμκηα κέηνςζδξ υβηςκ-α TNFR1 (tumor necrosis factor receptor 1), ii) μζ πνςηεΐκεξ ζφκδεζδξ ιε ηδ θζιπνμκεηηίκδ FnbpA (fibronectin binding protein A) ηαζ FnbB (fibronectin binding protein B), μζ μπμίεξ ζοκδέμκηαζ επζπθέμκ ιε ηδκ εθαζηίκδ (εκχ δ FnbpA ζοκδέεηαζ ηαζ ιε ημ ζκςδμβυκμ), iii) μζ πανάβμκηεξ ζοβηυθθδζδξ ClfA (clumping factor A) ηαζ ClfΒ (clumping factor B), πμο αθθδθεπζδνμφκ ιε δζαθμνεηζηά ηιήιαηα ημο ιμνίμο ημο ζκςδμβυκμο ηαζ ζοιιεηέπμοκ ηαζ ζηδκ εκενβμπμίδζδ ηςκ αζιμπεηαθίςκ, iv) δ εοαίζεδηδ ζηδκ πθαζιίκδ πνςηεΐκδ Pls (plasmin sensitive protein), δ μπμία δζαιεζμθααεί ηδ ζφκδεζδ ιε ηα ηοηηανζηά θζπίδζα, v) δ πνμζημθθδηίκδ ημο ημθθαβυκμο Can (collagen adhesin), vi) μζ νοειζγυιεκμζ απυ ημκ ζίδδνμ επζθακεζαημί επίημπμζ IsdA (iron regulated surface determinant A), IsdB (iron regulated surface determinant B), IsdC (iron regulated surface determinant C) ηαζ IsdH (iron regulated surface determinant H), πμο ζοκδέμκηαζ ιε πνςηεΐκεξ πμο πενζέπμοκ ζίδδνμ υπςξ δ αζιμζθαζνίκδ ηαζ δ ηνακζθεννίκδ ηαζ vii) δ πθμφζζα ζε ζενίκδ πνμζημθθδηίκδ ηςκ αζιμπεηαθίςκ SraP (serine rich adhesin for platelets). Άθθεξ πνμζημθθδηίκεξ ημο S. aureus, πμο υιςξ ζοκδέμκηαζ ιε ζμκηζημφξ δεζιμφξ ιε ημ ηοηηανζηυ ημίπςια, είκαζ viii) δ πνςηεΐκδ Ebh (extracellular matrix binding protein homologue) πμο ζοκδέεηαζ ιε ηδ θζιπνμκεηηίκδ, ix) δ πνςηεΐκδ Emp (extracellular matrix protein binding protein), πμο ζοκδέεηαζ ηονίςξ ιε ηδ αζηνμκεηηίκδ ηαζ δεοηενεουκηςξ ιε ημ ζκςδμβυκμ ηαζ ηδ θζιπνμκεηηίκδ, x) μζ αοημθοζίκεξ Atl (autolysin), πμο ζοκδέεηαζ ιε ηδ θζιπνμκεηηίκδ ηαζ Aaa (autolysin/adhesin), πμο ζοκδέεηαζζ ιε ημ ζκςδμβυκμ, ηδ θζιπνμκεηηίκδ ηαζ ηδ αζηνμκεηηίκδ ηαζ xi) δ α-εκμθάζδ, πμο ζοκδέεηαζ ιε ηδ θαιζκίκδ. Σέθμξ, ζηζξ πνμζημθθδηίκεξ ημο S. aureus πενζθαιαάκεηαζ xii) δ δζαιειανακζηή πνςηεΐκδ EbpS (elastin binding protein of S. aureus), πμο ζοκδέεηαζ ιε ηδκ εθαζηίκδ ηαζ xiii) ηα ηεζπμσηά μλέα ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ ημο ααηηδνίμο (Clarke and Foster 2006). 2.Α.3.2 Παξάγνληεο δηαθπγήο κεραληζκώλ άκπλαο Ζ επυιεκδ ηαηδβμνία θμζιμβυκςκ παναβυκηςκ ημο S. aureus αθμνά εηείκμοξ, μζ μπμίμζ ζοιαάθθμοκ ζηδ δζαθοβή ηςκ ιδπακζζιχκ άιοκαξ ημο λεκζζηή. Ο ζδιακηζηυηενμξ πανάβμκηαξ ηδξ ηαηδβμνίαξ αοηήξ είκαζ δ πμθοζαηπανζδζηή ηάρα, πμο πανάβεηαζ απυ ηδκ πθεζμρδθία ηςκ ζηεθεπχκ ημο είδμοξ, ιε ηονίανπμοξ ημοξ μνμηφπμοξ CP5 (capsular polysaccharide 5) ηαζ CP8 Σελίδα 41

42 (capsular polysaccharide 8). Ο ααζζηυηενμξ νυθμξ ηδξ ηάραξ ανίζηεηαζ ζηδκ απμθοβή ηδξ θαβμηοηηάνςζδξ ημο ααηηδνίμο απυ ηα μοδεηενυθζθα ημο λεκζζηή, ειπμδίγμκηαξ ηδκ μρςκζκμπμίδζδ ηδξ πεπηζδμβθοηάκδξ ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ απυ ακηζζχιαηα ηαζ πανάβμκηεξ ημο ζοιπθδνχιαημξ (O'Riordan and Lee 2004). Δηηυξ απυ ηδκ πμθοζαηπανζδζηή ηάρα ηαζ δ πνςηεΐκδ Α, ιέζς ηδξ ζφκδεζήξ ηδξ ιε ημ Fc (ηαζ υπζ ημ Fab) ηιήια ηςκ IgG ακμζμζθαζνζκχκ (ημ μπμίμ, έηζζ, δεζιεφεηαζ ηαζ δεκ ιπμνεί κα αθθδθεπζδνάζεζ ιε ημκ οπμδμπέα ημο ζηδκ επζθάκεζα ηςκ θαβμηοηηάνςκ), πανειαάθθεηαζ ζηζξ δζαδζηαζίεξ ηδξ μρςκζκμπμίδζδξ ηαζ θαβμηοηηάνςζδξ (Foster 1996). Σμκ ίδζμ πζεακχξ νυθμ επζηεθεί ηαζ δ ημαβημοθάζδ ημο S. aureus, πμο ηαηαθφεζ ηδ ιεηαηνμπή ημο ζκςδμβυκμο ζε ζκζηή, δ μπμία ηαθφπηεζ ηδκ επζθάκεζα ημο ααηηδνίμο, ηαεζζηχκηαξ ημ ακεεηηζηυηενμ ζηδκ μρςκζκμπμίδζδ ηαζ ηδ θαβμηοηηάνςζδ. Ζ ηαηαθάζδ, πνμζηαηεφεζ ημ ιζηνμμνβακζζιυ ιεηά ηδ θαβμηοηηάνςζή ημο, αδνακμπμζχκηαξ ημ ημλζηυ οπενμλείδζμ ημο οδνμβυκμο, πμο πανάβεηαζ απυ ηδ ιοεθμτπενμλεζδάζδ ηςκ μοδεηενμθίθςκ (Winn, Allen et al. 2006), εκχ ημ ηνμπμπμζδηζηυ έκγοιμ ηςκ θζπανχκ μλέςκ FAME (fatty acid modifying enzyme) αδνακμπμζεί ηα ααηηδνζμηηυκα θζπίδζα πμο πανάβμκηαζ εκηυξ ηςκ απμζηδιάηςκ (Long, Hart et al. 1992). Ζ θεοημηημκίκδ Panton- Valentine, πμο ακαθένεηαζ θεπημιενχξ ζηδ ζοκέπεζα, ζοιαάθθεζ ζηδκ πνμζηαζία απυ ημ ακμζμπμζδηζηυ ζφζηδια ημο λεκζζηή, ιέζς ηαηαζηνμθήξ ηςκ θεοημηοηηάνςκ. ημοξ θμζιμβυκμοξ πανάβμκηεξ αοηήξ ηδξ ηαηδβμνίαξ πενζθαιαάκμκηαζ έκγοια ημο S. aureus, πμο οδνμθφμοκ ζοζηαηζηά ηδξ ελςηοηηάνζαξ εειέθζαξ μοζίαξ, αμδεχκηαξ ηδ δζαζπμνά ημο ααηηδνίμο εκηυξ ηςκ ζζηχκ ημο λεκζζηή, υπςξ είκαζ δ οαθμονμκζδάζδ, δ εενιμακεεηηζηή κμοηθεάζδ (DNase), δ θζπάζδ ηαζ πμζηίθεξ πνςηεάζεξ (Winn, Allen et al. 2006). Οιμίςξ, δ ζηαθοθμηζκάζδ, εκενβμπμζχκηαξ ηδκ πνςηεμθοηζηή δναζηζηυηδηα ημο πθαζιζκμβυκμο, επζηοβπάκεζ δζάζπαζδ ηςκ ενυιαςκ ζκζηήξ, μζ μπμίμζ πενζπαναηχκμοκ ημ ιζηνμμνβακζζιυ εκηυξ ημο λεκζζηή (Bokarewa, Jin et al. 2006). Σέθμξ, μ ζπδιαηζζιυξ αζμιειανάκδξ απυ ημκ S. aureus ημκ πνμζηαηεφεζ υπζ ιυκμ απυ ηδ δνάζδ ηδξ πμνδβμφιεκδξ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ, αθθά ηαζ απυ ηδκ ακμζζαηή απάκηδζδ ημο λεκζζηή (Archer, Mazaitis et al. 2011). 2.A.3.3 Σνμίλεο Σελίδα 42

43 Ζ ηνίηδ ηαηδβμνία θμζιμβυκςκ παναβυκηςκ αθμνά αοημφξ, μζ μπμίμζ πνμηαθμφκ αθάαδ ζηα ηφηηανα ηαζ ημοξ ζζημφξ ημο λεκζζηή ηαζ ιπμνεί κα ζοκδέμκηαζ εζδζηά ιε ζοβηεηνζιέκεξ θμζιχλεζξ. Ακαθοηζηά, μ S. aureus πανάβεζ ιζα ζεζνά απυ ηοηηανμημλζηά ιυνζα, πμο πενζθαιαάκμοκ ηζξ αζιμθοζίκεξ ηςκ ηάλεςκ α, α, β ηαζ δ, ηαεχξ ηαζ ηδ θεοημηημκίκδ Panton- Valentine (Panton-Valentine leucocidin, PVL). Ζ α-αζιμθοζίκδ (α-ημλίκδ), πμο πανάβεηαζ απυ ορδθυ πμζμζηυ ζηεθεπχκ ημο είδμοξ, είκαζ ημλζηή έκακηζ ιζαξ πμζηζθίαξ ηοηηάνςκ εδθαζηζηχκ, ζδζαίηενα ηςκ ενοενχκ ημο ημοκεθζμφ, εκχ ηαοηυπνμκα δζαεέηεζ δενιμκεηνςηζηή ηαζ κεονμημλζηή δνάζδ. Σα ιμκμιενή ηδξ α- αζιμθοζίκδξ πμο εηηνίκμκηαζ απυ ημκ S. aureus εκζςιαηχκμκηαζ ζηδ ιειανάκδ ημο ηοηηάνμοζηυπμο, υπμο ζοκανιμθμβμφκηαζ ζε έκακ επηαιενή ηοθζκδνζηυ πυνμ. Μέζς αοημφ επζηνέπεηαζ δ εηνμή ζυκηςκ K + ηαζ άθθςκ ιζηνχκ ιμνίςκ ηαζ δ εζζνμή ζυκηςκ Na +, Ca 2+ ηαζ μοζζχκ ιμνζαημφ αάνμοξ ηάης ημο 1 kda, ιε απμηέθεζια ηδκ ςζιςηζηή δζυβηςζδ ημο ηοηηάνμο-ζηυπμο, δ μπμία μδδβεί, ηεθζηά, ζηδ θφζδ ημο. Ζ α-αζιμθοζίκδ (ζθζββμιοεθζκάζδ C) πανάβεηαζ ζε ιεβάθεξ πμζυηδηεξ απυ ορδθυ πμζμζηυ, γςζηήξ ηονίςξ πνμέθεοζδξ, ζηεθεπχκ ηαζ έπεζ ζδζαίηενδ δνάζδ έκακηζ ηςκ ενοενχκ ημο πνμαάημο. Γζαεέηεζ δναζηζηυηδηα θςζθμνοθάζδξ c, πμο απαζηεί ηδκ πανμοζία ζυκηςκ Mg 2+ ηαζ δ εζδζηυηδηά ηδξ πενζμνίγεηαζ ζηδ ζθζββμιοεθίκδ ηαζ ηδ θςζθαηζδοθμπμθίκδ. Σμ πενζεπυιεκμ, ιάθζζηα, ζε ζθζββμιοεθίκδ ηςκ ενοενμηοηηάνςκ ηαεμνίγεζ ηαζ ηδκ εοαζζεδζία ημοξ ζηδ ζοβηεηνζιέκδ ημλίκδ (Dinges, Orwin et al. 2000). Ζ β-αζιμθοζίκδ ημο S. aureus πανάβεηαζ απυ υθα ζπεδυκ ηα ζηεθέπδ ημο είδμοξ ηαζ ιπμνεί κα ηαηαζηνέρεζ ηα ιαηνμθάβα ηαζ ηα μοδεηενυθζθα, ηαεχξ επίζδξ ηαζ ηα ενοενμηφηηανα δζαθυνςκ εδθαζηζηχκ. Απμηεθείηαζ απυ δφμ οπμιμκάδεξ (πμο δζαπςνίγμκηαζ αάζεζ ηδξ ηαπφηδηαξ έηθμοζήξ ημοξ ζε ζμκημακηαθθαηηζηή ζηήθδ): ηδκ οπμιμκάδα S (slow eluting) ηαζ ηδκ οπμιμκάδα F (fast eluting). Ζ οπμιμκάδα S ηςδζημπμζείηαζ απυ ηα βμκίδζα hlgα ηαζ hlgc, ιε απμηέθεζια ηδ ζφκεεζδ δφμ δζαθμνεηζηχκ πνςηεσκζηχκ πνμσυκηςκ ηαεέκα απυ ηα μπμία ζοκδοάγεηαζ ιε ημ πνμσυκ ημο βμκζδίμο hlgb, πμο ηςδζημπμζεί ηδκ οπμιμκάδα F ηδξ β- αζιμθοζίκδξ. Ζ φπανλδ δφμ ιμνίςκ βζα ηδκ οπμιμκάδα S έπεζ ςξ ζοκέπεζα ηδ ζφκεεζδ δφμ ημλζκχκ, απυ ημοξ ζοκδοαζιμφξ HlgA(gamma hemolysin component A)/HlgB(gamma hemolysin component B) ηαζ HlgC(gamma hemolysin component C)/HlgB(gamma hemolysin component B), ιε δζαθμνεηζηέξ εζδζηυηδηεξ ςξ πνμξ ηα ηφηηανα-ζηυπμοξ. Ο ζοκδοαζιυξ ηςκ οπμιμκάδςκ πάκς ζηδκ επζθάκεζα ημο ηοηηάνμο-ζηυπμο, αημθμοεείηαζ απυ πμθοιενζζιυ αοηχκ Σελίδα 43

44 ηαζ ζπδιαηζζιυ πυνμο, ιε ηεθζηυ απμηέθεζια ηδ θφζδ ημο ηοηηάνμο. (Dinges, Orwin et al. 2000; Menestrina, Serra et al. 2001). Ζ δ-αζιμθοζίκδ ζοκηίεεηαζ απυ ημ 97% ηςκ ζηεθεπχκ S. aureus ηαζ απυ ημ 50-70% ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ ιπμνεί κα πνμηαθέζεζ ηδ θφζδ ενοενμηοηηάνςκ ηαζ άθθςκ ηφπςκ ηοηηάνςκ ηςκ εδθαζηζηχκ, ηαεχξ ηαζ εκδμηοηηάνζςκ δμιχκ, υπςξ είκαζ μζ πνςημπθάζηεξ ηαζ μζ ζθαζνμπθάζηεξ. Γνα, ηαηά ηφνζμ θυβμ, ςξ επζθακεζμδναζηζηυξ πανάβμκηαξ δζαζπχκηαξ ηδκ πθαζιαηζηή ιειανάκδ, εκχ ιπμνεί κα αθθδθεπζδνάζεζ ιε αοηήκ βζα ημ ζπδιαηζζιυ πυνςκ, εηθεηηζηχκ βζα ηδ δζέθεοζδ ηαηζυκηςκ (Dinges, Orwin et al. 2000). Ζ θεοημηημκίκδ Panton-Valentine, υπςξ ηαζ δ β-αζιμθοζίκδ, ακήηεζ ζηδκ μζημβέκεζα ηςκ δζιενχκ ημλζκχκ ημο S. aureus. Δίκαζ ημλζηή βζα ηα πμθοιμνθμπφνδκα ηαζ ηα ιαηνμθάβα, αθθά δε δζαεέηεζ αζιμθοηζηή δνάζδ. Απμηεθείηαζ απυ ηζξ οπμιμκάδεξ LukS-PV ηαζ LukF-PV, πμο ηςδζημπμζμφκηαζ απυ πνμθάβμοξ (απυ ηα μιχκοια βμκίδζα luks-pv ηαζ lukf-pv), οπμδδθχκμκηαξ ηδ δοκαηυηδηα μνζγυκηζαξ δζαζπμνάξ ημοξ ιεηαλφ ηςκ ζηεθεπχκ. Μεηά ηδκ έηηνζζή ημοξ απυ ημ ααηηδνζαηυ ηφηηανμ, μζ οπμιμκάδεξ αοηέξ ζοκανιμθμβμφκηαζ ζε έκακ επηαιενή πυνμ ζηδ ιειανάκδ ημο πμθοιμνθμπονήκμο μδδβχκηαξ, ηεθζηά, ζηδ θφζδ ημο. Ζ απεθεοεένςζδ εκενβχκ νζγχκ μλοβυκμο ηαζ ημηηζχδμοξ πενζεπμιέκμο απυ ημ πμθοιμνθμπφνδκμ εοεφκμκηαζ βζα ηδκ επαηυθμοεδ κέηνςζδ ηςκ ζζηχκ. Υαιδθέξ ζοβηεκηνχζεζξ, ιάθζζηα, ηςκ LukS-PV ηαζ LukF-PV, εκενβμπμζμφκ ημ ιδπακζζιυ ηδξ απυπηςζδξ ημο πμθοιμνθμπονήκμο, ιέζς ζπδιαηζζιμφ ημο πυνμο ζηδ ιζημπμκδνζαηή ιειανάκδ, ηδκ απεθεοεένςζδ ημο ηοημπνχιαημξ c ηαζ, ηεθζηά, ηδκ επαβςβή ηςκ ηαζπαζχκ 9 ηαζ 3. Αλίγεζ ζδιεζςεεί υηζ δ θεοημηημκίκδ PVL πανάβεηαζ απυ ημ 2% ημο ζοκυθμο ηςκ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ S. aureus ηαζ απυ υθα ζπεδυκ ηα ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ ζηεθέπδ ηδξ ημζκυηδηαξ (community acquired methicillin resistant S. aureus, CA-MRSA), πμο πνμηαθμφκ δζεζζδοηζηέξ θμζιχλεζξ ημο δένιαημξ ηαζ ηςκ ιαθαηχκ μνίςκ, αζιμνναβζηή κεηνςηζηή πκεοιμκία ηαζ εακαηδθυνμ κεηνςηζηή πενζημκζΐηζδα ζε, πνμδβμοιέκςξ, οβζή άημια (Dinges, Orwin et al. 2000; Kaneko and Kamio 2004; Boyle-Vavra and Daum 2007). Ο S. aureus πανάβεζ ιία ζεζνά απυ 20 πενίπμο μνμθμβζηά δζαηνζηέξ πονεημβυκεξ ημλίκεξ, πμο δνμοκ ςξ οπενακηζβυκα, πνμηαθχκηαξ πμθοηθςκζηή εκενβμπμίδζδ ηςκ Σ θειθμηοηηάνςκ ηζ, έηζζ, ιαγζηή απεθεοεένςζδ ηοημηζκχκ ζηδκ ηοηθμθμνία. ηζξ ημλίκεξ αοηέξ πενζθαιαάκμκηαζ δ ημλίκδ ημο ημλζημφ ζμη TSST-1, μζ ζηαθοθμημηηζηέξ εκηενμημλίκεξ SEA-SEE (staphylococcal enterotoxin A-staphylococcal enterotoxin E), SEG-SEJ (staphylococcal enterotoxin G- Σελίδα 44

45 staphylococcal enterotoxin J) ηαζ SEM-SEO (staphylococcal enterotoxin M-staphylococcal enterotoxin O), ηαζ μζ απμθμθζδςηζηέξ ημλίκεξ ETA (exfoliative toxins A) ηαζ ETB (exfoliative toxins B). Πνυηεζηαζ βζα ιζηνά ιδ βθοημγοθζςιέκα ιυνζα πμο ειθακίγμκηαζ ιεηνίςξ ζηαεενά ζηδ πδιζηή αδνακμπμίδζδ, ηδκ πνςηευθοζδ ηαζ ηδκ απμδζάηαλδ ιέζς αναζιμφ. Κςδζημπμζμφκηαζ απυ πθαζιίδζα, ααηηδνζμθάβμοξ ηαζ κδζίδζα παεμβμκζηυηδηαξ ηαζ δ μιμζυηδηα ηδξ αιζκμλζηήξ ημοξ αημθμοείαξ ηοιαίκεηαζ απυ 22% έςξ 80%. Ζ ημλίκδ TSST-1 εοεφκεηαζ, υπςξ ήδδ ακαθένεδηε, βζα ημ ζφκδνμιμ ημο ημλζημφ ζμη, θυβς ηδξ ιμκαδζηήξ ζηακυηδηάξ ηδξ κα δζαπενκά ημοξ αθεκκμβυκμοξ, ιεηαλφ ηςκ μπμίςκ ηαζ αοηυκ ημο ηυθπμο. Οζ εκηενμημλίκεξ, πμο ζπεηίγμκηαζ ιε ηδκ ηνμθζηή δδθδηδνίαζδ, πνμηαθμφκ αφλδζδ ηδξ πενζζηαθηζηυηδηαξ ημο εκηένμο ηαζ δζαεέημοκ ζζπονή ειεημβυκμ δνάζδ (Dinges, Orwin et al. 2000; Le Loir, Baron et al. 2003; Winn, Allen et al. 2006). Οζ απμθμθζδςηζηέξ ημλίκεξ, ακήημοκ ζηδκ μζημβέκεζα ηςκ πνςηεαζχκ ηδξ ζενίκδξ ηαζ ςξ πζεακυηενμξ ιδπακζζιυξ δνάζδξ ημοξ βζα ηδκ παεμβέκεζδ ημο απμθμθζδςηζημφ ζοκδνυιμο εεςνείηαζ δ ακαβκχνζζδ ηαζ δζάζπαζδ ηδξ δεζιμβθεΐκδξ 1 (desmoglein 1, Dsg1), ιζαξ δεζιμζςιζηήξ ηακηενίκδξ, πμο ζοκδέεζ ηδκ ημηηχδδ ιε ηδκ αηακεςηή ζηζαάδα ηδξ επζδενιίδαξ (Plano 2004). 2.Α.4 Αληνρή ζηα αληηκηθξνβηαθά Πένα απυ ημ εηηεηαιέκμ μπθμζηάζζμ ηςκ θμζιμβυκςκ παναβυκηςκ πμο δζαεέηεζ, ιία αηυια πανάιεηνμξ πμο, ακαιθίαμθα, εκζζπφεζ ημ παεμβυκμ δοκαιζηυ ημο S. aureus είκαζ δ δζανηχξ αολακυιεκδ ακημπή ημο ζε μθμέκα ηαζ πενζζζυηενμοξ ακηζιζηνμαζαημφξ πανάβμκηεξ. Ζ εζζαβςβή ηδξ πεκζηζθθίκδξ ςξ ακηζαζμηζημφ εηθμβήξ βζα ηδ εεναπεία ηςκ θμζιχλεςκ απυ ημ ζοβηεηνζιέκμ είδμξ ζηζξ ανπέξ ηδξ δεηαεηίαξ ημο 1940 αεθηίςζε δναιαηζηά ηδκ πνυβκςζδ ηςκ αζεεκχκ, αθθά ζοκμδεφηδηε, ζπεδυκ αιέζςξ, απυ ηδκ ειθάκζζδ ηςκ πνχηςκ ακεεηηζηχκ ζηεθεπχκ, ιε δοκαηυηδηα παναβςβήξ α-θαηηαιάζδξ. Ήδδ απυ ηα ηέθδ ημο 1960, ημ πμζμζηυ ακημπήξ ημο S. aureus ζηδκ πεκζηζθθίκδ λεπέναζε ημ 80% ηαζ ζήιενα οπμθμβίγεηαζ υηζ οπενααίκεζ ημ 90%, ηυζμ ζημ κμζμημιείμ υζμ ηαζ ζηδκ ημζκυηδηα (Lowy 2003). Ζ εεναπεία ηςκ θμζιχλεςκ απυ ακεεηηζηά ζηδκ πεκζηζθθίκδ ζηεθέπδ ζηδνίπεδηε βνήβμνα ζηζξ διζ-ζοκεεηζηέξ, ακεεηηζηέξ ζηζξ πεκζηζθθζκάζεξ, πεκζηζθθίκεξ, ιε ηδκ εζζαβςβή ηδξ Σελίδα 45

46 ιεεζηζθθίκδξ ζηδκ ηθζκζηή πνάλδ ημ Ο S. aureus ακέπηολε ηαπφηαηα ακημπή, ιεηά ηδκ ελςβεκή απυηηδζδ ημο πνςιμζςιζημφ βμκζδίμο meca, πμο ηςδζημπμζεί ηδκ ηνμπμπμζδιέκδ πεκζηζθθζκμ-δεζιεοηζηή πνςηεΐκδ PBP2a ιε ιεζςιέκδ ζοββέκεζα βζα υθα ηα α-θαηηαιζηά ακηζιζηνμαζαηά. Απυ ημ 1980 μ ακεεηηζηυξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ S. aureus απμηεθεί ζδιακηζηυ κμζμημιεζαηυ παεμβυκμ (hospital-acquired methicillin resistant S. aureus, HA-MRSA), ιε επίπηςζδ πμο ζδιεζχκεζ δζανηή αφλδζδ ηαζ θεάκεζ ζήιενα ημ 59,5% ζηζξ Μμκάδεξ Δκηαηζηήξ Θεναπείαξ. Μάθζζηα, πένακ ηςκ α-θαηηαιζηχκ, ηα ζηεθέπδ HA-MRSA πανμοζζάγμοκ πμθοακημπή ηαζ ζε άθθεξ ηάλεζξ ακηζαζμηζηχκ, ζηζξ μπμίεξ πενζθαιαάκμκηαζ μζ ηζκμθυκεξ, μζ ιαηνμθίδεξ, μζ θζκημζαιίδεξ, μζ ηεημθίδεξ, μζ αιζκμβθοημζίδεξ, μζ ηεηναηοηθίκεξ, δ ημηνζιμλαγυθδ, δ νζθαιπζηίκδ ηαζ ημ θμοζζδζηυ μλφ. Αλίγεζ κα ακαθενεεί υηζ θμζιχλεζξ απυ MRSA ηαηαβνάθμκηαζ μθμέκα ζοπκυηενα ηαζ ζηδκ ημζκυηδηα (community acquired MRSA, CA- MRSA) ζε αζεεκείξ ιε ή πςνίξ ζοκαθείξ πανάβμκηεξ ηζκδφκμο (υπςξ πνμδβδεείζα κμζδθεία, πνήζδ εκδμθθεαίςκ μοζζχκ ή πνυκζμ οπμηείιεκμ κυζδια). ε ζπέζδ ιε ηα HA-MRSA, ηα CA- MRSA ζηεθέπδ δεκ πανμοζζάγμοκ ζοκήεςξ ακημπέξ ζε επζπθέμκ ακηζιζηνμαζαημφξ πανάβμκηεξ, εηηυξ ηςκ α-θαηηαιζηχκ (Rice 2006; Becker and von Eiff 2011). ε υ,ηζ αθμνά ηα βθοημπεπηίδζα, εκδζάιεζδ ακημπή ζηδ αακημιοηίκδ ηαηαβνάθδηε βζα πνχηδ θμνά ημ 1996 ζηδκ Ηαπςκία ηαζ έηημηε ακαθένεηαζ ζε ζηεθέπδ απυ πμθθέξ πχνεξ ημο ηυζιμο, πμο πανμοζζάγμοκ ακαδζμνβάκςζδ ηαζ πάποκζδ ημο ηοηηανζημφ ημοξ ημζπχιαημξ, δ μπμία ημοξ πνμζδίδεζ ακημπή ηαζ ζηδκ ηεσημπθακίκδ (glycopeptide-intermediate S. aureus, GISA). πάκζα παναηδνείηαζ ακημπή ζηδκ ηεσημπθακίκδ ιε πθήνδ εοαζζεδζία ζηδ αακημιοηίκδ. Σέθμξ, ιε αθεηδνία ηζξ ΖΠΑ ημ 2002, ζήιενα απμιμκχκμκηαζ πμθφ ζπάκζα ζηεθέπδ ιε πθήνδ ακημπή ηαζ ζηδ αακημιοηίκδ, ηα μπμία θένμοκ ημ βμκίδζμ vana, ιέζς μνζγυκηζαξ ιεηαθμνάξ ημο απυ ημοξ εκηενμηυηημοξ (Rice 2006; Becker and von Eiff 2011). 2.Β. Staphylococcus epidermidis 2.Β.1 Δηζαγωγή θαη γεληθά ραξαθηεξηζηηθά Ο S. epidermidis πενζβνάθδηε ημ 1884 απυ ημ Γενιακυ Μζηνμαζμθυβμ Friedrich Julius Rosenbach, απυ ημκ μπμίμ μκμιάζηδηε ανπζηά Staphylococcus albus, θυβς ημο άζπνμο Σελίδα 46

47 πνχιαημξ ηςκ απμζηζχκ ημο (Rosenbach 1884). To 1908 ιεημκμιάζηδηε ζε Albococcus epidermidis απυ ημοξ Charles-Edward Amory Winslow ηαζ Anne Rogers Winslow (Winslow and A.R. 1908), βζα κα ηαεζενςεεί, ηεθζηά, ςξ S.epidermidis ημ 1916 απυ ηδκ Αlice Evans (Evans 1916). Ο S. epidermidis απμηεθεί ιέθμξ ηδξ θοζζμθμβζηήξ πθςνίδαξ ημο ακενχπζκμο δένιαημξ ηαζ απμιμκχκεηαζ ζοπκυηενα απυ ηδκ ηεθαθή, ημοξ νχεςκεξ ηαζ ηζξ ιαζπαθζαίεξ ημζθυηδηεξ (Kloos and Musselwhite 1975). Δηηυξ, υιςξ, απυ «αεχμξ» ζοιαζςηζηυξ ιζηνμμνβακζζιυξ, ηα ηεθεοηαία πνυκζα έπεζ ακαδεζπεεί ςξ ημ ζοπκυηενμ αίηζμ κμζμημιεζαηχκ θμζιχλεςκ, ζδίςξ ζε αζεεκείξ ιε λέκα ζχιαηα, ηα μπμία πνδζζιμπμζμφκηαζ υθμ ηαζ πενζζζυηενμ ζηδκ ηαε διένα ζαηνζηή πνάλδ. Ζ επζηναηέζηενδ, ιάθζζηα, εεςνία οπμζηδνίγεζ υηζ ηα πάζδξ θφζεςξ πνμζεεηζηά οθζηά επζιμθφκμκηαζ, ηονίςξ ηαηά ηδκ εζζαβςβή ημοξ, απυ ηα ζηεθέπδ S. epidermidis, πμο απμζηίγμοκ ημ δένια ημο αζεεκμφξ ή ημο ζαηνμκμζδθεοηζημφ πνμζςπζημφ (Uckay, Pittet et al. 2009). Οζ επαηυθμοεεξ θμζιχλεζξ αθμνμφκ ηονίςξ ακμζμηαηεζηαθιέκμοξ αζεεκείξ, υπςξ είκαζ μζ αζεεκείξ ιε ηαημήεεζα, υζμζ πάζπμοκ απυ AIDS, μζ πνήζηεξ εκδμθθέαζςκ μοζζχκ ηαζ ηα πνυςνα κεμβκά (Vuong and Otto 2002). Οζ θμζιχλεζξ αοηέξ ακηζπνμζςπεφμοκ πθέμκ έκα ζμαανυ πνυαθδια ζημ κμζμημιεζαηυ πενζαάθθμκ, ηυζμ θυβς ηδξ ορδθήξ ημοξ επίπηςζδξ, υζμ ηαζ ηδξ πενίπθμηδξ εεναπείαξ ημοξ, δ μπμία δοζπεναίκεηαζ απυ ηδκ ακημπή ημο S. epidermidis ζηα ακηζαζμηζηά ηαζ ηδκ ζηακυηδηά ημο κα ζπδιαηίγεζ αζμιειανάκεξ (Otto 2009). 2.Β.2. Κιηληθά ζύλδξνκα Ο S. epidermidis απμηεθεί ημ ηνίημ, ηαηά ζεζνά ζοπκυηδηαξ, αίηζμ ηθζκζηά ζδιακηζηήξ ααηηδνζαζιίαξ ιεηά ηδκ Escherichia coli ηαζ ημκ S. aureus. Τπμθμβίγεηαζ υηζ εοεφκεηαζ βζα ημ 8,2% ημο ζοκυθμο ηςκ πενζζηαηζηχκ, ημ 10,2% ηςκ πενζζηαηζηχκ κμζμημιεζαηήξ πνμέθεοζδξ ηαζ ημ 4,2% ηςκ πενζζηαηζηχκ ηδξ ημζκυηδηαξ (Luzzaro, Ortisi et al. 2011). Ζ ααηηδνζαζιία πμο πνμηαθεί μ S. epidermidis ζοκδέεηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, ιε ηδκ πανμοζία εκδαββεζαηχκ ηαεεηήνςκ ηαζ ζδζαίηενα ηεκηνζηχκ θθεαζηχκ ηαεεηήνςκ, πμο ημπμεεημφκηαζ βζα ηδ πμνήβδζδ θανιάηςκ, οβνχκ, παναβχβςκ αίιαημξ ηαζ πανεκηενζηήξ δζαηνμθήξ. Οζ θμζιχλεζξ αοηέξ επζιδηφκμοκ ηδ κμζδθεία ηςκ αζεεκχκ, αολάκμοκ ηδ εκδηυηδηα ηαζ εκδζζιυηδηα ηαζ επζαανφκμοκ ημ ηυζημξ πενίεαθρδξ, εκχ δ εεναπεία απαζηεί, ζοπκά, ηδκ αθαίνεζή ημοξ ζε ζοκδοαζιυ ιε παναηεηαιέκδ ακηζιζηνμαζαηή αβςβή (David, Risitano et al. 2005). Αλίγεζ, Σελίδα 47

48 αζθαθχξ, κα ακαθενεεί υηζ, δεδμιέκδξ ηδξ θμνίαξ ημο S. epidermidis ζημ δένια, δ απμιυκςζή ημο απυ εεηζηέξ αζιμηαθθζένβεζεξ απμηεθεί ζοπκά απθή επζιυθοκζδ ηαζ πνέπεζ κα δζαθμνμδζαβκςζηεί πνμζεηηζηά απυ ηδκ ηθζκζηά ζδιακηζηή ααηηδνζαζιία (Finkelstein, Fusman et al. 2002). Γζα ημ ζημπυ αοηυ έπμοκ πνμηαεεί δζάθμνα ενβαζηδνζαηά ηνζηήνζα, πμο ζζπφμοκ ηαζ βζα ημοξ οπυθμζπμοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ. Σα ζδιακηζηυηενα απυ αοηά πενζθαιαάκμοκ ηδκ απμιυκςζή ημο ίδζμο ζηεθέπμοξ απυ δφμ ή πενζζζυηενεξ αζιμηαθθζένβεζεξ, ηδκ ηαπεία εεηζημπμίδζδ ηςκ αζιμηαθθζενβεζχκ αοηχκ ηαζ, ζηδκ πενίπηςζδ ηδξ ζπεηζγυιεκδξ ιε ηαεεηήνα ααηηδνζαζιίαξ, ηδ εεηζημπμίδζδ ηςκ αζιμηαθθζενβεζχκ πμο έπμοκ θδθεεί απυ ημκ ηαεεηήνα ημοθάπζζημκ ηαηά δφμ χνεξ κςνίηενα ζε ζπέζδ ιε αοηέξ πμο έπμοκ θδθεεί ιε πενζθενζηή θθεαμηέκηδζδ (Widerstrom, Wistrom et al. 2012). Ζ εκδμηανδίηζδα ηςκ πνμζεεηζηχκ ααθαίδςκ απμηεθεί ιία αηυια θμίιςλδ πμο πνμηαθεί μ S. epidermidis ζε λέκα ζχιαηα. Μάθζζηα, ςξ είδμξ εοεφκεηαζ βζα ημ 13% ημο ζοκυθμο ηςκ ακηίζημζπςκ πενζζηαηζηχκ ζε ιδ πνήζηεξ εκδμθθέαζςκ κανηςηζηχκ μοζζχκ (Chu, Miro et al. 2009). Ζ εκδμηανδίηζδα εηδδθχκεηαζ ζοκδεέζηενα ημοξ 12 πνχημοξ ιήκεξ ιεηά ηδκ ημπμεέηδζδ ηδξ πνμζεεηζηήξ ααθαίδαξ, δ μπμία, ελαζηίαξ ηδξ αηεθμφξ αηυια εκδμεδθζμπμίδζήξ ηδξ, είκαζ επζννεπήξ ζημ ζπδιαηζζιυ ενυιαςκ ηαζ ηδκ επαηυθμοεδ πνμζηυθθδζδ ααηηδνίςκ. Ζ επζιυθοκζδ ζοιααίκεζ δζεβπεζνδηζηά ηαηά ηδκ ημπμεέηδζδ ηδξ ααθαίδαξ ή ζηδ ζοκέπεζα θυβς πανμδζηήξ ααηηδνζαζιίαξ ημο αζεεκμφξ απυ θμζιχλεζξ ζε ηναφιαηα ή ηαεεηήνεξ ηζ έηζζ δ εκδμηανδίηζδα εεςνείηαζ κμζμημιεζαηήξ πνμέθεοζδξ (Giamarellou 2002). οπκά μδδβεί ζε ζμαανέξ επζπθμηέξ, υπςξ είκαζ δ ηανδζαηή ακεπάνηεζα ηαζ μ ζπδιαηζζιυξ απμζηδιάηςκ, ζπεηίγεηαζ ιε ορδθή εκδηυηδηα ηαζ δ εεναπεία ηδξ απαζηεί, εηηυξ απυ ζοιααηζηή ακηζιζηνμαζαηή αβςβή, επζεεηζηή πεζνμονβζηή πανέιααζδ (Lalani, Kanafani et al. 2006). Ο S. epidermidis απμηεθεί, επίζδξ, ημ ηαηελμπήκ παεμβυκμ πμο επζιμθφκεζ ημοξ αδιαημδυηεξ, πνμηαθχκηαξ θμζιχλεζξ ιέζα ζημ πνχημ ηνίιδκμ απυ ηδκ ημπμεέηδζή ημοξ (Cacoub, Leprince et al. 1998), εκχ ζπμναδζηή ιυκμ είκαζ δ ειπθμηή ημο ζε πενζζηαηζηά εκδμηανδίηζδαξ ζε θοζζηέξ ααθαίδεξ (Arber, Militianu et al. 1991). Άθθα λέκα ζχιαηα ιε θμζιχλεζξ ηςκ μπμίςκ ζπεηίγεηαζ μ S. epidermidis, ςξ ηονζυηενμξ εηπνυζςπμξ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ, είκαζ ηα μνεμπαζδζηά ειθοηεφιαηα, πμο ημπμεεημφκηαζ ζε ανενμπθαζηζηέξ ζζπίμο ηαζ βυκαημξ. Οζ θμζιχλεζξ είκαζ, ηαηά ηακυκα, πνυκζεξ, ηαεχξ εηδδθχκμκηαζ ιενζημφξ ιήκεξ ή έηδ ιεηά ηδκ επέιααζδ ηαζ αημθμοεμφκ ήπζα ηθζκζηή πμνεία, δ μπμία ηαηαθήβεζ ζε ζδπηζηή παθάνςζδ ηδξ άνενςζδξ ηζ εκίμηε ζπδιαηζζιυ Σελίδα 48

49 ζονζββίμο. Ζ εκδεδεζβιέκδ εεναπεία πενζθαιαάκεζ, ακαιθίαμθα, ηδ πεζνμονβζηή ακαεεχνδζδ ηδξ ανενμπθαζηζηήξ, ζε ζοκδοαζιυ ιε ηδ πμνήβδζδ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ (Del Pozo and Patel 2009) Ο S. epidermidis απμηεθεί ημ ζοπκυηενμ αίηζμ επζιυθοκζδξ ηςκ εκδμηνακζαηχκ ειθοηεοιάηςκ, πμο ημπμεεημφκηαζ βζα ηδκ πανμπέηεοζδ ημο εβηεθαθμκςηζαίμο οβνμφ (ΔΝΤ) ζε πενζπηχζεζξ απμθναηηζημφ οδνμηέθαθμο (Naradzay, Browne et al. 1999). Αθήκμκηαξ ζηδ δεφηενδ εέζδ ημκ S. aureus ηαζ ζηδκ ηνίηδ ηα εκηενμααηηδνζαηά, δ επίπηςζή ημο ηοιαίκεηαζ απυ 32% έςξ 70% ζηζξ ζπεηζηέξ ιεθέηεξ. Ζ δζεβπεζνδηζηή επζιυθοκζδ ηςκ ειθοηεοιάηςκ απυ ζηεθέπδ ηδξ πθςνίδαξ ημο δένιαημξ ημο αζεεκμφξ, απμηεθεί ημκ ααζζηυ παεμβεκεηζηυ ιδπακζζιυ ηςκ θμζιχλεςκ αοηχκ (Sacar, Turgut et al. 2006), μζ μπμίεξ ζοκδεέζηενα αθμνμφκ παζδζά ηάης ηςκ ηεζζάνςκ ηαζ εκήθζηεξ άκς ηςκ 61 εηχκ, ιε εκδηυηδηα πμο θηάκεζ ημ 30% ιε 40% (Naradzay, Browne et al. 1999). Πανυθμ πμο δ απμηθεζζηζηή πμνήβδζδ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ εκίμηε απμδεζηκφεηαζ απμηεθεζιαηζηή (Castro, Soriano et al. 2005), δ αέθηζζηδ εεναπεία πενζθαιαάκεζ ηδκ ηαοηυπνμκδ αθαίνεζδ ημο ιμθοζιέκμο ειθοηεφιαημξ, μπυηε ηαζ αεθηζχκεηαζ ζδιακηζηά δ πνυβκςζδ ημο αζεεκμφξ (Wong, Wong et al. 2011). Ο S. epidermidis απμηεθεί ημ ζοπκυηενμ αίηζμ πενζημκίηζδαξ ζε αζεεκείξ ιε ηαεεηήνεξ πενζημκασηήξ δζάθοζδξ, ιε επίπηςζδ πμο θεάκεζ ημ 27,8% (Zelenitsky, Barns et al. 2000), ηαεχξ ηαζ ημ ζοπκυηενμ αίηζμ θμζιχλεςκ ηςκ αββεζαηχκ ιμζπεοιάηςκ, πμο ιπμνεί κα εηδδθςεμφκ ιήκεξ ή ηαζ πνυκζα ιεηά ηδκ ημπμεέηδζή ημοξ (Winn, Allen et al. 2006). Δπίζδξ, έπεζ ζοζπεηζζηεί ιε πενζζηαηζηά ιεηεβπεζνδηζηήξ εκδμθεαθιίηζδαξ ιεηά ηδκ ημπμεέηδζδ θαημφ βζα ηδ εεναπεία ηαηαννάηηδ (Weber, Hoffman et al. 1986), ιε θμζιχλεζξ ειθοηεοιάηςκ, πμο πνδζζιμπμζμφκηαζ ζηδκ πνμζεεηζηή ιαζημφ (Blue 1985) ηαζ ιε μονμθμζιχλεζξ ζε δθζηςιέκα άημια ιε μονμηαεεηήνα ηαζ οπμηείιεκα μονμθμβζηά πνμαθήιαηα. Σέθμξ, μ S. epidermidis είκαζ μ ζοπκυηενα απμιμκμφιεκμξ ζηαθοθυημηημξ ζηζξ Μμκάδεξ Δκηαηζηήξ Θεναπείαξ Νεμβκχκ, ζηζξ μπμίεξ εοεφκεηαζ βζα πενζζηαηζηά ααηηδνζαζιίαξ κεμβκχκ ιε πνμςνυηδηα, αββεζαημφξ ηαεεηήνεξ, ακαπκεοζηζηή οπμζηήνζλδ ή πανεκηενζηή δζαηνμθή (Winn, Allen et al. 2006). 2.Β.3 Λνηκνγόλνη παξάγνληεο Ο ζδιακηζηυηενμξ θμζιμβυκμξ πανάβμκηαξ βζα ημκ S. epidermidis, υπςξ ηαζ βζα πμθθμφξ αηυια ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ, είκαζ δ ζηακυηδηά ημο κα ζπδιαηίγεζ Σελίδα 49

50 αζμιειανάκεξ. Οζ αζμιειανάκεξ απμηεθμφκ ζδζαίηενεξ ιμνθέξ ιζηνμαζαηήξ δζααίςζδξ ηαζ πνμηφπημοκ απυ ζοζζςνεφζεζξ ααηηδνζαηχκ ηοηηάνςκ, πμο εκεοθαηχκμκηαζ ζε ιζα ελςηοηηάνζα ιήηνα πμθοιενχκ μοζζχκ ηαζ πνμζθφμκηαζ ηυζμ ζε έιαζεξ, υζμ ηαζ αδνακείξ επζθάκεζεξ. Λυβς ημο ιδπακζημφ θναβιμφ πμο ζπδιαηίγεηαζ ηαζ ηδξ ηνμπμπμζδιέκδξ ιεηααμθζηήξ ημοξ δναζηδνζυηδηαξ (ιεζςιέκδ ηοηηανζηή δζαίνεζδ, ζφκεεζδ πνςηεσκχκ ηαζ ακαπαναβςβή DNA), μζ ιζηνμμνβακζζιμί εκηυξ ηςκ πμθφπθμηςκ αοηχκ ημζκμηήηςκ ηεθζηά δζαθάεμοκ ηδξ δνάζδξ πμθθχκ ακηζιζηνμαζαηχκ παναβυκηςκ, αθθά ηαζ ιδπακζζιχκ άιοκαξ ημο λεκζζηή. Ο ζπδιαηζζιυξ ηςκ αζμιειανακχκ πενζθαιαάκεζ δζαδμπζηά αήιαηα βζα ηδκ πνμζηυθθδζδ ηαζ ηδ ζοζζχνεοζδ ηςκ ααηηδνίςκ ζηδκ επζθάκεζα-ζηυπμ, ηδ δζαιυνθςζδ ηδξ δμιήξ ηδξ ηαζ ηδκ ηεθζηή απμηυθθδζδ ηδξ αζμιεανάκδξ, ηα μπμία δζαιεζμθααμφκηαζ απυ πθδεχνα πνςηεσκζηχκ ηαζ άθθςκ πμθοιενχκ ιμνίςκ (Otto 2012). Σμ ζηάδζμ ηδξ ανπζηήξ πνμζηυθθδζδξ πναβιαημπμζείηαζ πάνδ ζε ιδ εζδζηέξ θοζζημπδιζηέξ αθθδθεπζδνάζεζξ (υπςξ είκαζ μζ δοκάιεζξ van der Waals, μζ οδνμθμαζηέξ αθθδθεπζδνάζεζξ ηαζ μζ δοκάιεζξ πμθζηυηδηαξ), αθθά ηαζ εζδζηέξ πνςηεΐκεξ, μζ μπμίεξ ζοιιεηέπμοκ ζηδ ζφκδεζδ ημο ιζηνμμνβακζζιμφ ιε ηδκ επζθάκεζα-ζηυπμ (von Eiff, Peters et al. 2002). οβηεηνζιέκα, μ S. epidermidis, υπςξ ηαζ μ S. aureus, δζαεέηεζ ανηεηά πνςηεσκζηά ιυνζα, ηα μπμία ακήημοκ ζηδκ μιάδα ηςκ MSCRAMMs ηαζ δζαεέημοκ δζαθμνεηζηέξ εζδζηυηδηεξ βζα ιζα ζεζνά οπμζηνςιάηςκ ημο ακενχπζκμο πθάζιαημξ (Otto 2012). Μενζηά απυ ηα ιυνζα αοηά είκαζ δ πνςηεΐκδ SdrG (serine aspartate repeat protein G), δ μπμία ζοκδέεηαζ ιε ημ ζκςδμβυκμ (Hartford, O'Brien et al. 2001), δ πνςηεΐκδ Embp, δ μπμία ζοκδέεηαζ ιε ηδ θζιπνμκεηηίκδ (Williams, Henderson et al. 2002), μζ πνςηεΐκεξ GehD (Bowden, Visai et al. 2002) ηαζ SdrF (serine aspartate repeat protein F) (Arrecubieta, Lee et al. 2007), μζ μπμίεξ ζοκδέμκηαζ ιε ημ ημθθαβυκμ ηαζ μζ πνςηεΐκεξ AtlE (Heilmann, Hussain et al. 1997) ηαζ Aae (Heilmann, Thumm et al. 2003), μζ μπμίεξ ζοκδέμκηαζ ιε ηδ αζηνμκεηηίκδ. Μάθζζηα, ηα ιυνζα AtlE ηαζ Aae δνμοκ ηαζ ςξ αοημθοζίκεξ, εκχ δ πνςηεΐκδ GehD θένεζ επζπθέμκ δναζηζηυηδηα θζπάζδξ. Μεηά ηδκ ανπζηή πνμζηυθθδζδ ζηδκ επζθάκεζα-ζηυπμ, δ ζοζζχνεοζδ ηςκ ααηηδνζαηχκ ηοηηάνςκ απμηεθεί ημ επυιεκμ αήια βζα ημ ζπδιαηζζιυ ηδξ αζμιειανάκδξ. Γζα ημ ζημπυ αοηυ, ηα ζηεθέπδ S. epidermidis πανάβμοκ ζηδκ πθεζμρδθία ημοξ ημ μιμπμθοιενέξ πμθφ-ναηεηοθμβθοημγαιίκδ (poly-n-acetyl-glucosamine, PNAG), επίζδξ βκςζηυ ηαζ ςξ δζαηοηηανζηή πμθοζαηπανζδζηή πνμζημθθδηίκδ (polysaccharide intercellular adhesin, PIA), ημ μπμίμ πενζαάθθεζ ηαζ ζοκδέεζ ηα ααηηδνζαηά ηφηηανα εκηυξ ηδξ αζμιειανάκδξ ηαζ ζοκηίεεηαζ απυ ηα Σελίδα 50

51 πνμσυκηα ηςκ βμκζδίςκ ημο μπενμκίμο ica (intercellular adhesion operon): icaa, icad, icab ηαζ icac. οβηεηνζιέκα, μζ ιειανακζηέξ πνςηεΐκεξ IcaA ηαζ IcaD, πμο ζε ζοκδοαζιυ δζαεέημοκ δναζηζηυηδηα UDP N-αηεηοθμβθοημγαιζκοθμ-ηνακζθενάζδξ, πανάβμοκ ιζα αθοζίδα απυ εκενβμπμζδιέκα ιμκμιενή Ν-αηεηοθμβθοημγαιίκδξ. Ζ ελαβςβή ημο παναβυιεκμο πμθοζαηπανίηδ δζαιέζμο ηδξ ηοηηανζηήξ ιειανάκδξ πναβιαημπμζείηαζ πάνδ ζηδκ επίζδξ ιειανακζηή πνςηεΐκδ IcaC, εκχ δ πνςηεΐκδ IcaB πνδζζιεφεζ βζα ηδκ απμαηεηοθίςζδ ημο ιμνίμο, δ μπμία εζζάβεζ ζε αοηυ εεηζηά θμνηία ηαζ είκαζ απαναίηδηδ βζα ηδ ζφκδεζή ημο ιε ηδκ ηοηηανζηή επζθάκεζα, αθθά ηαζ ηζξ πμθθαπθέξ θεζημονβίεξ ημο ηαηά ημ ζπδιαηζζιυ ηδξ αζμιειανάκδξ (Otto 2009; Fey and Olson 2010). Αλίγεζ, ιάθζζηα, κα ζδιεζςεεί υηζ βζα ημκ S. epidermidis δ PIA δζαεέηεζ ηαζ δναζηζηυηδηα αζιμζοβημθθδηίκδξ, πμο ζπεηίγεηαζ ηαζ αοηή ιε ημ ζπδιαηζζιυ αζμιεανάκδξ (Mack, Riedewald et al. 1999) ηαζ επζπθέμκ πνμζηαηεφεζ απυ ηδ ααηηδνζμηηυκμ δνάζδ ηςκ ακηζιζηνμαζαηχκ πεπηζδίςκ (antimicrobial peptides, AMPs) ηαζ ηςκ ακενχπζκςκ μοδεηενμθίθςκ (Vuong, Voyich et al. 2004). Πμθφ πνυζθαηα ακζπκεφεδηε παναβςβή αζμιειανάκδξ ζε ζηεθέπδ S. epidermidis πμο δεκ έθενακ ηα βμκίδζα ica ηαζ έηζζ δεκ πανήβαβακ ηδκ πνμζημθθδηίκδ PIA (Rohde, Burandt et al. 2007). ε ηέημζα ζηεθέπδ μ ζπδιαηζζιυξ ηδξ αζμιειανάκδξ δζαιεζμθααείηαζ επζπνυζεεηα ή απμηθεζζηζηά απυ επζθακεζαηέξ πνςηεΐκεξ υπςξ δ πνςηεΐκδ Embp (πμο ακαθένεδηε πνμδβμοιέκςξ), δ πνςηεΐκδ Aap (accumulation-associated protein) (Hussain, Herrmann et al. 1997) ηαζ δ, μιυθμβδ ηδξ πνςηεΐκδξ Bap (biofilm-asscoiated protein) ημο S. aureus, πνςηεΐκδ Bhp (Bap homologous protein) (Tormo, Knecht et al. 2005). Ακ ηαζ μζ ιδπακζζιμί ηδξ ανπζηήξ πνμζηυθθδζδξ ηαζ δζαηοηηανζηήξ ζοζζχνεοζδξ ηαηά ημ ζπδιαηζζιυ ηδξ αζμιεανάκδξ έπμοκ ιεθεηδεεί εηηεηαιέκα, πμθφ θζβυηενα ζημζπεία είκαζ βκςζηά βζα ηδ δζαιυνθςζδ ηδξ ηνζζδζάζηαηδξ δμιήξ ηδξ αζμιειανάκδξ (δίηδκ πφνβςκ ηαζ ιακζηανζχκ ιε εκδζάιεζδ πανμοζία δζαφθςκ φδαημξ) ηαζ ηδκ ηεθζηή ηδξ απμηυθθδζδ απυ ηδκ επζθάκεζα-ζηυπμ (Otto 2012). Οζ δφμ αοηέξ δζαδζηαζίεξ ζηδνίγμκηαζ ζε ιδπακζζιμφξ δζάζπαζδξ ηδξ ηοηηανζηήξ ζοκμπήξ, μζ μπμίμζ ζημκ S. epidermidis δζαιεζμθααμφκηαζ απυ ελςπνςηεάζεξ (Dubin, Chmiel et al. 2001; Otto 2009), ηαεχξ ηαζ απυ ηα ιζηνά αιθζπαεδηζηά πεπηίδζα PSMs (phenol-soluble modulins), ηςκ μπμίςκ δ επίδναζδ ζηδκ ςνίιακζδ ηδξ αζμιειανάκδξ ηαζ ηδκ επαηυθμοεδ απμηυθθδζή ηδξ βζα ηδ δζαζπμνά ηδξ θμίιςλδξ επζαεααζχεδηε πμθφ πνυζθαηα πάνδ ζε έκα γςζηυ πεζναιαηζηυ ιμκηέθμ θμίιςλδξ λέκμο ζχιαημξ (Wang, Khan et al. 2011). Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ηυζμ μζ ελςπνεςηάζεξ υζμ ηαζ ηα πεπηίδζα PSMs ανίζημκηαζ αοζηδνά Σελίδα 51

52 οπυ ημκ έθεβπμ ημο νοειζζηζημφ ζοζηήιαημξ agr (accessory gene regulator system) (Vuong, Durr et al. 2004; Otto 2009), βεβμκυξ ημ μπμίμ ζοκάδεζ ιε ηδκ παναηήνδζδ υηζ δοζθεζημονβζηά, ςξ πνμξ ημ ζοβηεηνζιέκμ ζφζηδια, ζηεθέπδ S. epidermidis, πνμηαθμφκ εοημθυηενα θμζιχλεζξ ζπεηζγυιεκεξ ιε λέκα ζχιαηα, ιέζς εκζζποιέκδξ πνμζηυθθδζδξ ηαζ αολδιέκδξ ζφκεεζδξ αζμιεανάκδξ πάκς ζε αοηά (Vuong, Kocianova et al. 2004). Έκαξ απυ ημοξ πμθθμφξ θυβμοξ βζα ημοξ μπμίμοξ μ S. epidermidis εεςνείηαζ έκαξ ζπεηζηά «αεχμξ», απυ πθεονάξ παεμβυκμο δοκαιζημφ, ιζηνμμνβακζζιυξ είκαζ δ ελαζνεηζηά πενζμνζζιέκδ ζηακυηδηά ημο βζα παναβςβή ημλζκχκ, ζε ακηίεεζδ ιε ημκ ζαθχξ επζεεηζηυηενμ S. aureus (Otto 2009; Otto 2012). Ακ ηαζ οπάνπμοκ ιειμκςιέκεξ ακαθμνέξ βζα εκηενμημλζκμβυκα ζηεθέπδ (Bautista, Gaya et al. 1988; Marin, de la Rosa et al. 1992), μζ ζδιακηζηυηενεξ μοζίεξ ιε πνμθθεβιμκχδδ ηαζ εκίμηε ηοηηανμθοηζηή δνάζδ πμο πανάβεζ μ S. epidermidis είκαζ ηα πεπηίδζα PSMs, δ επίδναζδ ηςκ μπμίςκ ηαηά ηδκ ςνίιακζδ ηδξ αζμιειανάκδξ ήδδ ακαθένεδηε. Μεηαλφ αοηχκ πενζθαιαάκεηαζ ηαζ δ δ-ημλίκδ ημο S. epidermidis (μκμιάγεηαζ ηαζ PSMβ ηαζ είκαζ μιυθμβδ ηδξ δ-ημλίκδξ ημο S. aureus), δ μπμία δνα πνμηαθχκηαξ θφζδ ηςκ ενοενμηοηηάνςκ ιε ζπδιαηζζιυ πυνςκ ζηδκ ηοηηανμπθαζιαηζηή ημοξ ιειανάκδ ηαζ πζεακμθμβείηαζ υηζ εκέπεηαζ ζηδ κεηνςηζηή εκηενμημθίηζδα ηςκ κεμβκχκ (von Eiff, Peters et al. 2002; Otto 2009). Ο S. epidermidis πανάβεζ επίζδξ ιζα ζεζνά ελςεκγφιςκ, ηα μπμία ζοιιεηέπμοκ ζηδ θμζιμβυκμ δφκαιδ ημο είδμοξ, θυβς ηδξ ζηακυηδηάξ ημοξ κα πνμηαθμφκ αθάαδ ζε ζζημφξ ηαζ πνςηεΐκεξ ημο λεκζζηή. Μεηαλφ αοηχκ πενζθαιαάκμκηαζ δ πνςηεάζδ ηδξ ζενίκδξ Esp (S. epidermidis serine protease), πμο απμδμιεί ημ ζκςδμβυκμ ηαζ ημκ πανάβμκηα ημο ζοιπθδνχιαημξ C5, δ ιεηαθθμπνςηεάζδ SepA ιε δναζηζηυηδηα εθαζηάζδξ ηαζ ιζα πνςηεάζδ ηδξ ηοζηεΐκδξ, δ μπμία επίζδξ δζαεέηεζ δναζηζηυηδηα εθαζηάζδξ ηαζ απμδμιεί ηζξ ακμζμζθαζνίκεξ IgA ηαζ IgM, ηδκ αθαμοιίκδ ημο μνμφ, ημ ζκςδμβυκμ ηαζ ηδ θζιπνμκεηηίκδ. Αηυια μ S. epidermidis πανάβεζ δφμ θζπάζεξ, πμο πζεακχξ ζοιιεηέπμοκ ζημκ απμζηζζιυ ημο δένιαημξ ηαζ ημ ηνμπμπμζδηζηυ ηςκ θζπανχκ μλέςκ έκγοιμ FAME, πμο αδνακμπμζεί ηζξ ααηηδνζμηηυκεξ ζδζυηδηέξ ημοξ ιέζς εζηενμπμίδζδξ (von Eiff, Peters et al. 2002; Vuong and Otto 2002; Otto 2012). Ωξ ηεθεοηαία ηαηδβμνία θμζιμβυκςκ παναβυκηςκ ημο S. epidermidis αλίγεζ κα επζζδιακεμφκ ηα πνμζηαηεοηζηά πμθοιενή πμο πανάβεζ, ζοβηεηνζιέκα ημ πμθο-β-βθμοηαιζηυ μλφ (poly-β-glutamic acid, PGA) ηαζ δ πνμζημθθδηίκδ PIA, πμο ήδδ ακαθένεδηε. Σμ PGA είκαζ ζδιακηζηυ βζα ηδκ ακημπή ημο S. epidermidis έκακηζ ηςκ AMPs ηαζ ηδξ θαβμηφηηςζδξ ηςκ μοδεηενυθζθςκ, υπςξ επίζδξ ηαζ βζα ηδκ πνμζηαζία ημο ζε ζοκεήηεξ ορδθήξ ζοβηέκηνςζδξ Σελίδα 52

53 άθαημξ. Ακαθμνζηά ιε ηδκ PIA, εηηυξ απυ ημ νυθμ ηδξ ζημ ζπδιαηζζιυ ηδξ αζμιειανάκδξ, πνμθοθάζζεζ απυ ηζξ δνάζεζξ ηςκ μοδεηενυθζθςκ, ημο ζοιπθδνχιαημξ, ηςκ ακμζμζθαζνζκχκ ηαζ ηςκ AMPs (Otto 2009). 2.B.4 Αληνρή ζηα αληηκηθξνβηαθά ε υ,ηζ αθμνά ηδκ εοαζζεδζία ημο S. epidermidis ζηα ακηζιζηνμαζαηά, είκαζ πθέμκ ζαθέξ υηζ έπεζ ελεθζπεεί ζε έκα ανηεηά ακεεηηζηυ είδμξ ζε πμθθέξ ηαηδβμνίεξ θανιάηςκ (Ziebuhr, Hennig et al. 2006). Ήδδ απυ ηζξ ανπέξ ηδξ πνμδβμφιεκδξ δεηαεηίαξ, δ ακημπή ζηδ ιεεζηζθθίκδ ηςκ κμζμημιεζαηχκ ζηεθεπχκ έθηακε παβημζιίςξ πμζμζηά ηδξ ηάλδξ ημο 75% ιε 90%, πμθφ ορδθυηενα απυ αοηά ημο S. aureus (Diekema, Pfaller et al. 2001). Δηηυξ απυ ηδ ιεεζηζθθίκδ μ S. epidermidis ηαηαβνάθεζ ορδθά πμζμζηά ακημπήξ ηαζ ζηδκ ενοενμιοηίκδ, ηδκ ηθζκδαιοηίκδ, ηδκ ημηνζιμλαγυθδ, ηδ βεκηαιζηίκδ, ηδ νζθαιπζηίκδ ηαζ ηζξ ηζκμθυκεξ (von Eiff, Reinert et al. 2000; Hellmark, Unemo et al. 2009), εκχ πμθφ ζπάκζα είκαζ δ ακημπή ημο ζηζξ ζηνεπημβναιίκεξ, ζηδ θζκεγμθίδδ, ηδκ ηζβεηοηθίκδ ηαζ ηδ δαπημιοηίκδ (Hellmark, Unemo et al. 2009; Stuart, John et al. 2011). Σμ πμζμζηυ ηςκ ακεεηηζηχκ ζηεθεπχκ ζηδκ ηεσημπθακίκδ δεκ οπενααίκεζ ημ 5% αηυια ηαζ ζε πνυζθαηεξ ιεθέηεξ (Cremniter, Slassi et al. 2010), εκχ ορδθμφ επζπέδμο ακημπή ζηδκ αακημιοηίκδ δεκ έπεζ ιέπνζ ζήιενα ηαηαβναθεί, ακ ηαζ ζπμναδζηά ακζπκεφμκηαζ ζηεθέπδ ιε ιεζςιέκδ εοαζζεδζία (Srinivasan, Dick et al. 2002). 2.Γ Staphylococcus haemolyticus 2.Γ.1 Δηζαγωγή θαη γεληθά ραξαθηεξηζηηθά Ο S. haemolyticus πενζβνάθδηε ςξ είδμξ ημ 1975 απυ ημοξ Karl H. Schleifer ηαζ Wesley E. Kloos ηαζ έθααε ηδκ μκμιαζία ημο θυβς ηδξ ζζπονήξ αζιμθοηζηήξ ημο ζηακυηδηαξ (Schleifer and Kloos 1975). Όπςξ μζ πενζζζυηενμζ ημαβημοθάζδ ανκδηζημί ζηαθοθυημηημζ, απμηεθεί ιέθμξ ηδξ θοζζμθμβζηήξ πθςνίδαξ ημο ακενχπζκμο δένιαημξ, ιε ημοξ ιεβαθφηενμοξ πθδεοζιμφξ ημο είδμοξ κα ακεονίζημκηαζ ζηζξ ιαζπαθζαίεξ ημζθυηδηεξ, ημ πενίκεμ ηαζ ηδ αμοαςκζηή πχνα. Δηηυξ απυ ημκ άκενςπμ απμιμκχκεηαζ ηαζ απυ άθθα πνςηεφμκηα εδθαζηζηά, υπςξ είκαζ μζ πίεδημζ, αθθά ηαζ δζάθμνα μζηυζζηα γχα (Lina, Etienne et al. 2000). Ο S. haemolyticus απμηεθεί Σελίδα 53

54 ημ δεφηενμ ηαηά ζεζνά ζοπκυηδηαξ, ιεηά ημκ S. epidermidis, ημαβημοθάζδ ανκδηζηυ ζηαθοθυημηημ, πμο απμιμκχκεηαζ ηυζμ απυ ημ ζφκμθμ ηςκ ηθζκζηχκ δεζβιάηςκ (Kawamura, Hou et al. 1998), υζμ ηαζ απυ ηζξ αζιμηαθθζένβεζεξ ηςκ αζεεκχκ ιε ηθζκζηά ζδιακηζηή ααηηδνζαζιία (Koksal, Yasar et al. 2009; Kristof, Kocsis et al. 2011). 2.Γ.2 Κιηληθά ζύλδξνκα Ωξ ηαηελμπήκ κμζμημιεζαηυ παεμβυκμ μ S. haemolyticus ζοκδέεηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, ιε πενζζηαηζηά ααηηδνζαζιίαξ ζε μοδεηενμπεκζημφξ αζεεκείξ ιε αζιαημθμβζηέξ ηαημήεεζεξ ηαζ ζε αζεεκείξ ηςκ Μμκάδςκ Δκηαηζηήξ Θεναπείαξ, μζ μπμίμζ θένμοκ αββεζαημφξ ηαεεηήνεξ. Mάθζζηα, ακ ηαζ δ ααηηδνζαζιία πνμηφπηεζ ζοκήεςξ απυ πμθοακεεηηζημφξ ηθχκμοξ ημο είδμοξ πμο εκδδιμφκ ζηα ακηίζημζπα ηθζκζηά πενζαάθθμκηα, δε θαίκεηαζ κα αολάκεζ ηδ κμζμημιεζαηή εκδηυηδηα ηαζ κμζδνυηδηα (Falcone, Micozzi et al. 2004; Rodriguez-Aranda, Daskalaki et al. 2009). Ο S. haemolyticus απμηεθεί, επίζδξ, ζπάκζμ αίηζμ εκδμηανδίηζδαξ, δ μπμία αθμνά ηυζμ ηζξ θοζζηέξ, υζμ ηαζ ηζξ πνμζεεηζηέξ ααθαίδεξ ηαζ ζοπκά ζοκμδεφεηαζ απυ ηδκ ειθάκζζδ ηανδζαηχκ ηαζ ζοζηδιαηζηχκ επζπθμηχκ (Falcone, Campanile et al. 2007). Δπζπθέμκ, εκμπμπμζείηαζ βζα πενζζηαηζηά ιεηεβπεζνδηζηήξ ιδκζββίηζδαξ (Huang, Lu et al. 2005), πενζημκίηζδαξ ζε αζεεκείξ οπυ ζοκεπή θμνδηή πενζημκασηή ηάεανζδ (Ertem, Sari et al. 2010), δενιαηζηέξ θμζιχλεζξ (Shittu, Lin et al. 2004) ηαζ θμζιχλεζξ ζε μνεμπαζδζηά ειθοηεφιαηα (Arciola, Campoccia et al. 2006). Σέθμξ, ζηδκ παζδζαηνζηή o S. haemolyticus εοεφκεηαζ βζα ημκ απμζηζζιυ (μ μπμίμξ εκίμηε αημοθμοεείηαζ απυ ααηηδνζαζιία) πνυςνςκ ηαζ εθθζπμαανχκ κεμβκχκ ζηζξ ακηίζημζπεξ Μμκάδεξ Δκηαηζηήξ Θεναπείαξ, υπμο εκδδιεί (Kazembe, Simor et al. 1993). 2.Γ.3 Λνηκνγόλνη παξάγνληεο Απυ πθεονάξ θμζιμβυκςκ παναβυκηςκ, δ παναβςβή αζμιεανάκδξ παίγεζ πνςηεφμκηα νυθμ ζημ παεμβυκμ δοκαιζηυ ηςκ ζηεθεπχκ S. haemolyticus, πμο ζπεηίγμκηαζ ιε θμζιχλεζξ λέκςκ ζςιάηςκ. Μάθζζηα, μ ζπδιαηζζιυξ ηδξ αζμιεανάκδξ ημο S. haemolyticus (ηαηά ηδ θάζδ ηδξ ζοζζχνεοζδξ) θαίκεηαζ κα δζαιεζμθααείηαζ απυ πνςηεσκζημφξ πανάβμκηεξ ηαζ ελςηοηηάνζμ DNA, πανά απυ ηδκ PIA, υπςξ ζοιααίκεζ ζημκ S. epidermidis (Fredheim, Klingenberg et al. 2009). Έκαξ αηυια θμζιμβυκμξ πανάβμκηαξ είκαζ δ φπανλδ πμθοζαηπανζδζηήξ ηάραξ, δ μπμία Σελίδα 54

55 απμηνέπεζ ηδκ μρςκζκμπμίδζδ ημο ιζηνμμνβακζζιμφ απυ ημ ζοιπθήνςια ηαζ ηδκ επαηυθμοεδ θαβμηοηηάνςζή ημο απυ ηα ακενχπζκα μοδεηενυθζθα (Flahaut, Vinogradov et al. 2008). Σέθμξ, δ παναβςβή ιζαξ ελςηοηηάνζαξ θζπάζδξ είκαζ πζεακυ κα ζοιιεηέπεζ ζημ παεμβυκμ δοκαιζηυ ημο είδμοξ (Oh, Kim et al. 1999). 2..Γ.4 Αληνρή ζηα αληηκηθξνβηαθά Ο S. haemolytcius ηαηέπεζ ελέπμοζα εέζδ ιεηαλφ ηςκ οπμθμίπςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ, θυβς ηςκ ορδθχκ πμζμζηχκ ακημπήξ πμο ηαηαβνάθεζ ζε πμθθαπθέξ ηάλεζξ ακηζιζηνμαζαηχκ παναβυκηςκ. φιθςκα ιε πμθφ πνυζθαηα δεδμιέκα, δ ακημπή ημο είδμοξ ζηδκ πεκζηζθθίκδ ηαζ ηδ ιεεζηζθθίκδ ηοιαίκεηαζ βφνς ζημ 95% ηαζ 90%, ακηίζημζπα (Yu, Chen et al. 2010; Barros, Ceotto et al. 2012). Άθθα ακηζαζμηζηά ζηα μπμία πενζζζυηενα απυ ηα ιζζά ζηεθέπδ είκαζ ακεεηηζηά πενζθαιαάκμοκ ηδ βεκηαιζηίκδ, ηδ ζζπνμθθμλαζίκδ, ηδκ ενοενμιοηίκδ ηαζ ηδκ ημηνζιμλαγυθδ (Barros, Ceotto et al. 2012). ε υ,ηζ αθμνά ηα βθοημπεπηίδζα, μ S. haemolyticus οπήνλε ημ πνχημ ημαβημοθάζδ ανκδηζηυ είδμξ, βζα ημ μπμίμ ειθακίζηδηε ακημπή ζηδκ ηεσημπθακίκδ ζηα ιέζα ηδξ δεηαεηίαξ ημο 80 (Biavasco, Vignaroli et al. 2000), εκχ θίβμ ανβυηενα ηαηαβνάθδηε ακημπή ηαζ ζηδ αακημιοηίκδ, ιεηά απυ παναηεηαιέκδ πμνήβδζή ηδξ (Veach, Pfaller et al. 1990). Ζ ακημπή ζηα ακηζαζμηζηά αοηά πμο, ςξ επί ημ πθείζημκ, εηθνάγεηαζ εηενμβεκχξ, είκαζ πμθοπαναβμκηζηήξ θφζεςξ ηαζ ζπεηίγεηαζ ηονίςξ ιε ηδ δμιή ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ ημο ααηηδνίμο, υπμο μζ ηνμπμπμζήζεζξ ηςκ ζοκδέζεςκ ηδξ πεπηζδμβθοηάκδξ ειπμδίγμοκ ηδκ πνυζδεζδ ηςκ βθοημπεπηζδίςκ (Billot-Klein, Gutmann et al. 1996; Winn, Allen et al. 2006). ε ιία πνυζθαηδ ιεθέηδ απυ ηδκ Αζία ιε 133 ζηεθέπδ S. haemolyticus ηα πμζμζηά εοαζζεδζίαξ ζηδκ ηεσημπθακίκδ ηαζ αακημιοηίκδ οπμθμβίζηδηακ ζημ 94% ηαζ 100%, ακηίζημζπα, ηαηαδεζηκφμκηαξ υηζ δ ακημπή ζηα βθοημπεπηίδζα παναιέκεζ εοηοπχξ ζπμναδζηή (Yu, Chen et al. 2010). Σέθμξ, αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ μ S. haemolyticus ιπμνεί κα ακαπηφλεζ ακημπή ηαζ ζηδ θζκεγμθίδδ, ιέζς ζδιεζαηήξ ιεηάθθαλδξ ημο 23S rrna (Mazzariol, Lo Cascio et al. 2012). 2.Γ Staphylococcus saprophyticus 2.Γ.1 Δηζαγωγή θαη γεληθά ραξαθηεξηζηηθά Σελίδα 55

56 Ο S. saprophyticus ηαηέπεζ λεπςνζζηή εέζδ ιεηαλφ ηςκ ημοαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ, δεδμιέκδξ ηδξ, ζπεδυκ απμηθεζζηζηήξ, ζοζπέηζζήξ ημο ιε ηζξ θμζιχλεζξ ημο μονμπμζδηζημφ ζοζηήιαημξ. Ζ πνχηδ ακαθμνά ζηδκ παεμβυκμ δνάζδ ημο βίκεηαζ ημ 1962, ζε ιζα ιεθέηδ δ μπμία ηαηαβνάθεζ ηδκ απμιυκςζδ ακεεηηζηχκ ζηδ κμαμαζμηίκδ, ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ, πμο θένμοκ ημ ακηζβυκμ 51, ζε μφνα βοκαζηχκ ιε έκημκδ πομονία ηαζ ααηηδνζμονία (Torres Pereira 1962). Έλζ πνυκζα ανβυηενα ηα ζηεθέπδ αοηά παναηηδνίγμκηαζ ςξ ιζηνυημηημζ ηδξ οπμμιάδαξ 3 (Mitchell 1968), βζα κα εκηαπεμφκ μνζζηζηά ημ 1974 ζημ βέκμξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ ζημ είδμξ S. saprophyticus subsp. saprophyticus (Buchanan and Gibson 1974). Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ζηεθέπδ S. saprophyticus έπμοκ απμιμκςεεί ηαζ απυ γχα, ζοβηεηνζιέκα απυ ημοξ πνυζεζμοξ νχεςκεξ οβζχκ αβεθάδςκ, ηαζ απμηεθμφκ ημ οπμείδμξ S. saprophyticus subsp. bovis (Hajek, Meugnier et al. 1996), ημ μπμίμ, υιςξ, δεκ έπεζ ζοζπεηζζεεί, ιέπνζ ζηζβιήξ, ιε θμίιςλδ ζημκ άκενςπμ. 2.Γ.2 Κιηληθά ζύλδξνκα Ο S. saprophyticus (subsp. saprohyticus) απμηεθεί ημ δεφηενμ ζε ζοπκυηδηα (ιεηά ηδκ Escherichia coli) αίηζμ θμζιχλεςκ ημο μονμπμζδηζημφ ζοζηήιαημξ ζε ιδ κμζδθεουιεκεξ βοκαίηεξ ακαπαναβςβζηήξ δθζηίαξ (Wallmark, Arremark et al. 1978; Schneider and Riley 1996; Gupta, Hooton et al. 1999). Μάθζζηα, ημ ορδθυηενμ πμζμζηυ απμιυκςζήξ ημο ηαηαβνάθεηαζ ζηδκ δθζηζαηή μιάδα 16 ςξ 25 εηχκ ηαζ θηάκεζ ημ 42,3% (Wallmark, Arremark et al. 1978). Ζ πθεζμρδθία ηςκ αζεεκχκ, πμο ακαπηφζζμοκ S. saprophyticus ζηζξ μονμηαθθζένβεζέξ ημοξ, πανμοζζάγμκηαζ ιε ιζηνμζημπζηή εζηυκα πομονίαξ ηαζ αζιαημονίαξ ηαζ ηθζκζηά ζοιπηχιαηα πμο παναπέιπμοκ ζε απθή ηοζηίηζδα (Wallmark, Arremark et al. 1978; Hedman and Ringertz 1991). ε πμζμζηυ 13% έςξ 41% ηςκ πενζζηαηζηχκ δ θμίιςλδ επεηηείκεηαζ ζημ ακχηενμ μονμπμζδηζηυ ηαζ ελεθίζζεηαζ ζε ποεθμκεθνίηζδα (Latham, Running et al. 1983; Hedman and Ringertz 1991), εκχ ακαθένμκηαζ ηαζ αηυια ζμαανυηενεξ επζπθμηέξ, υπςξ ζδραζιία (Glimaker, Granert et al. 1988) ηαζ εκδμηανδίηζδα (Singh and Raad 1990). Φαίκεηαζ υηζ δ ηφνζα δελαιεκή ημο S. saprophyticus είκαζ μ βαζηνεκηενζηυξ ζςθήκαξ, εκχ μ απμζηζζιυξ ημο μνεμφ, ημο ηυθπμο ηαζ ηδξ μονήεναξ ανέεδηε κα ζοζπεηίγεηαζ ιε θμζιχλεζξ ημο μονμπμζδηζημφ ζοζηήιαημξ απυ ημ ζοβηεηνζιέκμ ιζηνμμνβακζζιυ (Latham, Running et al. 1983). Σμ πμζμζηυ ηςκ απμζηζζιέκςκ βοκαζηχκ ακένπεηαζ ζημ 6,9%, ιε ημ μνευ κα απμηεθεί ηδ ζοκδεέζηενδ πενζμπή θμνίαξ (Rupp, Σελίδα 56

57 Soper et al. 1992). Συζμ μ απμζηζζιυξ, υζμ ηαζ μζ θμζιχλεζξ ημο μονμπμζδηζημφ απυ S. saprophyticus πανμοζζάγμοκ ζηζξ βοκαίηεξ παναηηδνζζηζηή επμπζηή ηαηακμιή ηαζ ηαηαβνάθμκηαζ ζοπκυηενα ζηδκ πενίμδμ πμο ηαθφπηεζ ημ ηέθμξ ημο ηαθμηαζνζμφ ηαζ ηζξ ανπέξ θεζκμπχνμο, εκχ έπμοκ ζοζπεηζζηεί ηαζ ιε πνμδβδεείζα ζελμοαθζηή επαθή (Gillespie, Sellin et al. 1978; Wallmark, Arremark et al. 1978; Rupp, Soper et al. 1992), πεζνζζιυ ςιμφ ηνέαημξ ηαζ οπαίενζα ημθφιαδζδ (Hedman and Ringertz 1991). ημοξ άκδνεξ μ S. saprophyticus απμηεθεί έκα πμθφ ζπακζυηενμ αίηζμ θμζιχλεςκ ημο μονμπμζδηζημφ, ιε ζοπκυηδηα απμιυκςζδξ ιυθζξ 0,5% απυ αζεεκείξ ιε ηθζκζηά ζδιακηζηή ααηηδνζμονία. Ακηίεεηα ιε υ,ηζ ζζπφεζ ζηζξ βοκαίηεξ, δ δζάιεζδ δθζηία ηςκ πνμζαεαθδιέκςκ ακδνχκ οπμθμβίγεηαζ ζηα 70 έηδ, μζ ιζζμί απυ αοημφξ είκαζ κμζδθεουιεκμζ αζεεκείξ ηαζ ζε πμζμζηυ 75% ειθακίγμοκ ηάπμζμ ζπεηζηυ πνμδζαεεζζηυ πανάβμκηα, υπςξ πανμοζία μονμηαεεηήνα ή απμθναηηζηή μονμπάεεζα θυβς πνμζηαηζηήξ οπενπθαζίαξ (Hovelius, Colleen et al. 1984). ημοξ άκδνεξ μ S. saprophyticus ιπμνεί κα πνμηαθέζεζ, υπζ ιυκμ απθή ααηηδνζμονία, ηοζηίηζδα ή ποεθμκεθνίηζδα, αθθά ηαζ επζδζδοιίηζδα (Hovelius, Colleen et al. 1984), πνμζηαηίηζδα (Bergman, Wedren et al. 1989) ηαζ μονδενίηζδα (Hovelius, Thelin et al. 1979). ηδ αζαθζμβναθία ακαθένεηαζ, επίζδξ, υηζ μ S. saprophyticus πνμηαθεί μλείεξ, ζοιπηςιαηζηέξ θμζιχλεζξ ημο μονμπμζδηζημφ αηυια ηαζ ζε παζδζά ή εθήαμοξ ηαζ ηςκ δφμ θφθςκ, πςνίξ οπμηείιεκδ ακαημιζηή ακςιαθία (Tolaymat and al-jayousi 1991; Abrahamsson, Hansson et al. 1993). Σέθμξ, ζπμναδζηέξ ακαθμνέξ ζοζπεηίγμοκ ημ ζοβηεηνζιέκμ είδμξ ιε κμζμημιεζαηή πκεοιμκία (Hell, Kern et al. 1999), εκδμηανδίηζδα ζε θοζζηή ααθαίδα (Singh and Raad 1990; Garduno, Marquez et al. 2005) ηαζ ηθζκζηά ζδιακηζηή ααηηδνζαζιία (Choi, Woo et al. 2006). 2.Γ.3 Λνηκνγόλνη παξάγνληεο Μέπνζ ζηζβιήξ ανηεημί θμζιμβυκμζ πανάβμκηεξ έπμοκ ιεθεηδεεί βζα ημκ S. saprophyticus. Πμθφ κςνίξ απμδείπεδηε υηζ ημ ζοβηεηνζιέκμ είδμξ πνμζημθθάηαζ εοημθυηενα ζε ζπέζδ ιε άθθα ζηα ηφηηανα ημο μονμεδθίμο (Carbone, Fera et al. 1984), βεβμκυξ ζημ μπμίμ πζεακυηαηα μθείθεηαζ ηαζ δ ηυζμ ζοπκή ειπθμηή ημο ζε θμζιχλεζξ ημο μονμπμζδηζημφ ζοζηήιαημξ. Ζ επζθακεζαηή πνςηεΐκδ Aas (autolysin/adhesin of S. saprophyticus) ιάγαξ 160 kda, δ μπμία έπεζ ζδζυηδηεξ αοημθοζίκδξ, ζοκδέεηαζ ιε ηδ θζιπνμκεηηίκδ, πνμηαθεί ζοβηυθθδζδ ηςκ Σελίδα 57

58 ενοενμηοηηάνςκ ημο πνμαάημο ηαζ εεςνείηαζ δ ααζζηή ηοηηανζηή δμιή πμο δζαιεζμθααεί ηδ ζφκδεζδ ημο S. saprophyticus ιε ηα μονμεδθζαηά ηφηηανα (Meyer, Wengler-Becker et al. 1996; Hell, Meyer et al. 1998). Σμκ ίδζμ ζημπυ ελοπδνεηεί ηαζ δ πνςηεΐκδ επζθακείαξ Ssp (S. saprophyticus surface associated protein) (Gatermann, Kreft et al. 1992), πμο, επζπνυζεεηα, ςξ θζπάζδ πζεακμθμβείηαζ υηζ απμηνέπεζ ηδ θαβμηοηηάνςζδ ημο ιζηνμμνβακζζιμφ ηαζ ελμοδεηενχκεζ ημλζηά βζ αοηυκ θζπανά μλέα, πμο εθεοεενχκμκηαζ ζημ ζδιείμ ηδξ θμίιςλδξ (Sakinc, Woznowski et al. 2005; Sakinc, Kleine et al. 2007). Δπζπθέμκ πνμζημθθδηζηά ιυνζα βζα ημκ S. saprophyticus είκαζ ημ θζπμηεζπμσηυ μλφ (Teti, Chiofalo et al. 1987), ηαεχξ ηαζ δ πνςηεΐκδ SdrI (serine aspartate repeat protein I), δ μπμία ζοκδέεηαζ ιε ημ ημθθαβυκμ ηαζ ηδ θζιπνμκεηηίκδ ηαζ ακήηεζ ζηδκ μζημβέκεζα ηςκ πνςηεσκχκ πμο θένμοκ επακαθήρεζξ ηαηαθμίπςκ ζενίκδξ ηαζ αζπανηζημφ (Sakinc, Kleine et al. 2006; Sakinc, Kleine et al. 2009). Έπμοκ, επίζδξ, πενζβναθεί μ πανάβμκηαξ πνμζηυθθδζδξ ζημ μονμεδθίμ UafA (uro-adherence factor A), πμο δνα ςξ αζιμζοβημθθδηίκδ (Matsuoka, Tanaka et al. 2011) ηαζ μ πανάβμκηαξ UafB (uro-adherence factor B), μ μπμίμξ ζοκδέεηαζ ιε ηδ θζιπνμκεηηίκδ ηαζ ημ ζκςδμβυκμ ηαζ ζοιιεηέπεζ ζηδκ οδνμθμαζηυηδηα ηδξ ηοηηανζηήξ επζθάκεζαξ (King, Beatson et al. 2011). Άθθςζηε, μζ δοκάιεζξ οδνμθμαζηυηδηαξ, πμο αζημφκηαζ απυ επζθακεζαηέξ δμιέξ ημο ιζηνμμνβακζζιμφ, εεςνμφκηαζ βζα ημκ S. saprophyticus, υπςξ ηαζ βζα άθθα μονμπαεμβυκα, ςξ έκαξ επζπθέμκ θμζιμβυκμξ πανάβμκηαξ, πμο δζαιεζμθααεί ηδ ζφκδεζή ημο ιε ηα ηφηηανα ημο μονμεδθίμο (Schneider and Riley 1991). Σέθμξ, ακηίεεηα ιε ημοξ πενζζζυηενμοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ, μ S. saprophyticus ζπάκζα ζπδιαηίγεζ αζμιειανάκδ (Riley and Schneider 1992), εκχ έκα ιμκαδζηυ παναηηδνζζηζηυ ημο είκαζ δ παναβςβή μονεάζδξ, δ μπμία ζπεηίγεηαζ ιε ηδ δζείζδοζδ ημο ααηηδνίμο ζηδκ μονμδυπμ ηφζηδ ηαζ ηδ δδιζμονβία θίεςκ (Gatermann, John et al. 1989). 2.Γ.4 Αληνρή ζηα αληηκηθξνβηαθά O S. saprophyticus subsp. saprophyticus, ιέζς ιεηαθθάλεςκ ζηδ α-οπμιμκάδα ηδξ DNA βονάζδξ, είκαζ εκδμβεκχξ ακεεηηζηυξ ζηδ κμαμαζμηίκδ, παναηηδνζζηζηυ ημ μπμίμ πνδζζιεφεζ βζα ηδ δζάηνζζή ημο απυ ημοξ οπυθμζπμοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ (Vickers, Chopra et al. 2007). Δπζπθέμκ, πανμοζζάγεζ εκδμβεκή ακημπή ζηδ ιεηζθθζκάιδ, ηδ θςζθμιοηίκδ ηαζ ημ καθζδζλζηυ μλφ (Kahlmeter 2003), αθθά παναιέκεζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, εοαίζεδημξ ζηα οπυθμζπα ακηζαζμηζηά (Marrie and Kwan 1982; Nicolle and Harding 1982; Kahlmeter 2003). Σελίδα 58

59 Γεδμιέκμο υηζ μ S. saprophyticus δεκ απμζηίγεζ ημ ακενχπζκμ δένια ηαζ, έηζζ, οπυηεζηαζ ζπακζυηενα ζε μνζγυκηζα ιεηαθμνά βμκζδίςκ ακημπήξ, ζπμναδζηά, ιυκμ, απμιμκχκμκηαζ ζηεθέπδ πμο θένμοκ ημ βμκίδζμ ηδξ ακημπήξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ meca (Higashide, Kuroda et al. 2008). Σέθμξ, ηαζ ζημ είδμξ αοηυ έπεζ πενζβναθεί ιεζςιέκδ εοαζζεδζία ζηδ αακημιοηίκδ (Weiss, Rouleau et al. 1996). 2.Δ Staphylococcus hominis Ο S. hominis πενζβνάθδηε ημ 1975 απυ ημοξ Wesley E. Kloos ηαζ Karl H. Schleifer ηαζ μκμιάζηδηε έηζζ (hominis ζδιαίκεζ ακενχπζκμξ) θυβς ημο υηζ μ άκενςπμξ απμηεθεί ημ ηονζυηενμ λεκζζηή ημο (Kloos and Schleifer 1975). Απμηεθεί ημ 4% έςξ 20% ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ πμο απμιμκχκμκηαζ απυ ημ ηεθάθζ ηαζ ημ 10% έςξ 75% ηςκ ζηαθοθμημηυηηςκ πμο απμιμκχκμκηαζ απυ ηζξ ιαζπαθζαίεξ ημζθυηδηεξ, ηα άκς ηαζ ηα ηάης άηνα (Kloos and Musselwhite 1975). Μεηά ημκ S. epidermidis ηαζ ημκ S. haemolyticus, μ S. hominis είκαζ ημ ηνίημ ζε ζεζνά ζοπκυηδηαξ ημαβημοθάζδ ανκδηζηυ είδμξ, πμο απμιμκχκεηαζ απυ αζιμηαθθζένβεζεξ αζεεκχκ ιε ηθζκζηά ζδιακηζηή ααηηδνζαζιία (Koksal, Yasar et al. 2009). Eπίζδξ έπεζ ακαθενεεί ςξ αίηζμ εκδμηανδίηζδαξ ηυζμ ζε θοζζηέξ ααθαίδεξ (Kessler, Kimbrough et al. 1998; Cunha, Esrick et al. 2007), υζμ ηαζ ζε ζφζηδια αδιαημδυηδ (Sunbul, Demirag et al. 2006), εκχ έπεζ δδιμζζεοεεί ηαζ έκα πενζζηαηζηυ εκδμθεαθιίηζδαξ ιεηά απυ επέιααζδ ηαηαννάηηδ (Iyer, Wirostko et al. 2005). Ζ παναβςβή αζμιειανάκδξ είκαζ ιέπνζ ζηζβιήξ μ ζδιακηζηυηενμξ βκςζηυξ θμζιμβυκμξ πανάβμκηαξ ημο είδμοξ ηαζ ηαηαβνάθεηαζ ζημ 26% έςξ 28% ηςκ ζηεθεπχκ (Boynukara, Gulhan et al. 2007; Koksal, Yasar et al. 2009). ε υ,ηζ αθμνά ηδκ εοαζζεδζία ημο S. hominis ζημοξ ακηζιζηνμαζαημφξ πανάβμκηεξ, δ ακημπή ημο ζηδ ιεεζηζθθίκδ ηαζ ηδκ ενοενμιοηίκδ λεπενκά ημ 50%, εκχ παιδθυηενα πμζμζηά (βφνς ζημ 30%) ακαθένμκηαζ βζα ηδκ ηθζκδαιοηίκδ ηαζ ηδκ ηεθζενμιοηίκδ (John, Pletch et al. 2002). Ζ ακημπή ημο είδμοξ ζηζξ ζηνεπημβναιίκεξ, ηα βθοημπεπηίδζα (εκδζάιεζδ ακημπή) ηαζ ηδ θζκεγμθίδδ είκαζ ζπμναδζηή (Petinaki, Spiliopoulou et al. 2005; Sorlozano, Gutierrez et al. 2010). Σμ 1988 πενζβνάθδηε ημ οπμείδμξ S. hominis subsp. novobiosepticus, πμο μθείθεζ ηδκ μκμιαζία ημο (ηα δφμ ζοκεεηζηά ηδξ θέλδξ novobiosepticus) ζηδκ εββεκή ακημπή ημο ζηδ κμαμαζμηίκδ ηαζ ηδκ ζηακυηδηά ημο κα πνμηαθεί ζήρδ. Μάθζζηα, δ ακημπή ζηδ κμαμαζμηίκδ ζε ζοκδοαζιυ ιε ηδκ ακζηακυηδηα αενυαζαξ παναβςβήξ μλέμξ απυ ηδκ D-ηνεπαθυγδ ηαζ ηδ Ν- Σελίδα 59

60 αηεηοθ-d-βθοημγαιίκδ είκαζ ηα παναηηδνζζηζηά πμο ημ δζαπςνίγμοκ απυ ημκ S. hominis subsp. hominis (Kloos, George et al. 1998). Ο S. hominis subsp. novobiosepticus έπεζ απμιμκςεεί ιέπνζ ζήιενα απυ ααηηδνζαζιίεξ, πμο ηαηαβνάθμκηαζ ζε Κθζκζηέξ ηαζ Μμκάδεξ Δκηαηζηήξ Θεναπείαξ εκδθίηςκ (d'azevedo, Trancesi et al. 2008; Palazzo, d'azevedo et al. 2008) ηαζ κεμβκχκ (Chaves, Garcia-Alvarez et al. 2005). Φαίκεηαζ, ιάθζζηα, υηζ ζε υθεξ αοηέξ ηζξ πενζπηχζεζξ επζηναηεί ηάεε θμνά ηάπμζμξ ζοβηεηνζιέκμξ ηθχκμξ ημο οπμείδμοξ, μ μπμίμξ δζαζπείνεηαζ εκδμκμζμημιεζαηά (Chaves, Garcia-Alvarez et al. 2005; d'azevedo, Trancesi et al. 2008; Palazzo, d'azevedo et al. 2008) ηαζ ιπμνεί κα παναιείκεζ εκδδιζηυξ αηυια ηαζ βζα δζάζηδια εηχκ (Chaves, Garcia- Alvarez et al. 2005). Ζ ζοκηνζπηζηή πθεζμρδθία ηςκ ζηεθέπςκ S. hominis subsp novobiosepticus πανμοζζάγμοκ έκακ πμθοακεεηηζηυ θαζκυηοπμ, πμο ηονίςξ πενζθαιαάκεζ ακημπή ζε πεκζηζθθίκδ, ιεεζηζθθίκδ, ενοενμιοηίκδ, βεκηαιζηίκδ ηαζ ηθζκδαιοηίκδ ηαζ δεοηενεουκηςξ ακημπή ζε πθςναιθεκζηυθδ, ημηνζιμλαγυθδ ηαζ ζζπνμθθμλαζίκδ (Kloos, George et al. 1998; Chaves, Garcia-Alvarez et al. 2005). Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ έπμοκ ακαθενεεί ζηεθέπδ ακεεηηζηά ηαζ ζηδκ ηεσημπθακίκδ ιε ηαοηυπνμκδ ιεζςιέκδ εοαζζεδζία ζηδκ αακημιοηίκδ (d'azevedo, Trancesi et al. 2008; Palazzo, d'azevedo et al. 2008). 2.Σ Staphylococcus lugdunensis 2.Σ.1 Δηζαγωγή θαη γεληθά ραξαθηεξηζηηθά O S. lugdunensis πενζβνάθδηε ςξ κέμ είδμξ ημ 1988 απυ ενεοκδηέξ ημο Δεκζημφ Κέκηνμο Ακαθμνάξ ηαθοθμηυηηςκ ηδξ Γαθθίαξ, πμο ανίζηεηαζ ζηδκ πυθδ Lyon, ζηδκ μπμία ηαζ απμιμκχεδηε βζα πνχηδ θμνά. ημ θαηζκζηυ, ιάθζζηα υκμια (Lugdunum) ηδξ Lyon μθείθεζ ηαζ ηδκ μκμιαζία ημο ςξ S. lugdunensis (Freney, Brun et al. 1988). Όπςξ μζ πενζζζυηενμζ ημαβημοθάζδ ανκδηζημί ζηαθοθυημηημζ, ακαβκςνίζηδηε ελανπήξ ςξ απμζηζζηήξ ημο άροπμο κμζμημιεζαημφ πενζαάθθμκημξ, ςξ ιέθμξ ηδξ θοζζμθμβζηήξ πθςνίδαξ ημο δένιαημξ ηαζ ηςκ αθεκκμβυκςκ, αθθά ηαζ ςξ δοκδηζηά επζηίκδοκμ ακενχπζκμ παεμβυκμ (Fleurette, Bes et al. 1989). Απυ ηδκ ανπζηή ημο πενζβναθή ηαζ ιέπνζ ζήιενα, μ S. lugdunensis απμηεθεί έκα ζπάκζμ απακηχιεκμ ζηαθοθμηυηημ. ηδ ιεβαθφηενδ, ιέπνζ ζηζβιήξ, ιεθέηδ πάκς ζηδκ επίπηςζδ ημο είδμοξ, δ μπμία πναβιαημπμζήεδηε ζηζξ Ζκςιέκεξ Πμθζηείεξ ηδξ Αιενζηήξ ηαηά δζάνηεζα πνμκζημφ δζαζηήιαημξ 63 ιδκχκ, οπμθμβίζηδηε υηζ μ S. lugdunensis ακηζζημζπεί ζημ 10,1% ηςκ Σελίδα 60

61 ιδ S. aureus ηαζ ιδ S. epidermidis ζηεθεπχκ, πμο πνμένπμκηαζ απυ υθμ ημ θάζια ηςκ ηθζκζηχκ δεζβιάηςκ ηυζμ απυ κμζδθεουιεκμοξ, υζμ ηαζ απυ ελςηενζημφξ αζεεκείξ (Herchline and Ayers 1991). Ωζηυζμ, ιία ελίζμο εηηεηαιέκδ, πμθοηεκηνζηή ένεοκα, πνμενπυιεκδ απυ ηδκ Ηαπςκία εηηίιδζε ημ ακηίζημζπμ πμζμζηυ ζε αηυια παιδθυηενμ επίπεδμ, ιυθζξ 2,9% (Kawamura, Hou et al. 1998). Άθθεξ ιζηνυηενεξ ιεθέηεξ βζα ηδκ επίπηςζδ ημο S. lugdunensis ζημ ζφκμθμ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ ακαθένμοκ πμζμζηά ηδξ ηάλδξ ημο 0,7% ζηδκ Κίκα (Liu, Shen et al. 2012), 0,8% ζηδκ Κμνέα (Shin, Jung et al. 2007), 6% ζηδκ Ανβεκηζκή (De Paulis, Predari et al. 2003) ηαζ 7,3% ζηζξ ΖΠΑ (Kleiner, Monk et al. 2010). Ωξ ιένμξ ηδξ θοζζμθμβζηήξ πθςνίδαξ ημο ακενχπζκμο ζχιαημξ, μ S. lugdunensis απμζηίγεζ, ζοπκά ηαοηυπνμκα, πθδεχνα ακαημιζηχκ πενζμπχκ. Οζ πενζμπέξ αοηέξ, ηαηά ζεζνά ζοπκυηδηαξ, είκαζ δ αμοαςκζηή πχνα, ηα δάηηοθα ημο άηνμο πμδυξ, μζ ιαζπαθζαίεξ πηοπέξ, ημ πενίκεμ, δ ιφηδ ηαζ μ ιαζηυξ, ιε ηα ακηίζημζπα πμζμζηά θμνίαξ (υπςξ αοηά οπμθμβίγμκηαζ ζε οβζείξ εεεθμκηέξ) κα ακένπμκηαζ ζε 32%, 29,3%, 20%, 14,7%, 9,3% ηαζ 5,3% (Bieber and Kahlmeter 2010). Μάθζζηα, μ απμζηζζιυξ ηςκ αμοαςκζηχκ πηοπχκ (απυ δεδμιέκα ζε αζεεκείξ ημο ηιήιαημξ επεζβυκηςκ πενζζηαηζηχκ) είκαζ αιθμηενυπθεονμξ ζημ 68% ηςκ αηυιςκ, δε δζαθένεζ ακάθμβα ιε ημ θφθμ ή ημ δείηηδ ιάγαξ ζχιαημξ ηαζ πανμοζζάγεηαζ ορδθυηενμξ ζε βοκαίηεξ άκς ηςκ 65 εηχκ (van der Mee-Marquet, Achard et al. 2003). 2.Σ.2 Κιηληθά ζύλδξνκα Ο S. lugdunensis ιπμνεί κα εκμπμπμζδεεί βζα έκα ελαζνεηζηά εονφ θάζια θμζιχλεςκ, πμθθέξ απυ ηζξ μπμίεξ παναηηδνίγμκηαζ απυ ηθζκζηή εζηυκα ηαζ έηααζδ ακάθμβδ ηςκ θμζιχλεςκ ημο S. aureus. ημ βεβμκυξ αοηυ μθείθεηαζ ηαζ δ λεπςνζζηή εέζδ πμο ηαηέπεζ ακάιεζα ζηα οπυθμζπα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ ζηαθοθμηυηηςκ, έπμκηαξ πνμζεθηφζεζ ημ εκδζαθένμκ ηςκ ζφβπνμκςκ ενεοκδηχκ. 2.Σ.2.1 Λνηκώμεηο δέξκαηνο θαη καιαθώλ κνξίωλ Οζ ζοπκυηενεξ θμζιχλεζξ πμο πνμηαθεί μ S. lugdunensis είκαζ μζ θμζιχλεζξ ημο δένιαημξ ηαζ ηςκ ιαθαηχκ ιμνίςκ. Τπμθμβίγεηαζ υηζ πάκς απυ 50% ημο ζοκυθμο ηςκ θμζιχλεςκ πμο πνμηαθεί μ S. lugdunensis είκαζ απμζηήιαηα ηαζ θμζιχλεζξ ηναοιάηςκ (Herchline and Ayers Σελίδα 61

62 1991; Bocher, Tonning et al. 2009). Μάθζζηα, δ ηθζκζηή ημοξ εζηυκα είκαζ πανυιμζα αοηήξ ηςκ ακηίζημζπςκ θμζιχλεςκ απυ ημκ S. aureus ηαζ δ εεναπεία ημοξ απαζηεί ζοκδοαζιυ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ ηαζ πεζνμονβζηήξ πανέιααζδξ. Ακαημιζηά, μζ θμζιχλεζξ ημο δένιαημξ ηαζ ηςκ ιαθαηχκ ιμνίςκ απυ S. lugdunensis ιπμνμφκ κα αθμνμφκ μπμζαδήπμηε πενζμπή ημο ζχιαημξ ηαζ ηονίςξ ηα ζδιεία πμο δζαεέημοκ απμηνζκείξ αδέκεξ (Bocher, Tonning et al. 2009). Κάπμζμζ ενεοκδηέξ, ςζηυζμ, έπμοκ δζαπζζηχζεζ οπενμπή ηςκ θμζιχλεςκ αοηχκ ζημ ηαηχηενμ διζιυνζμ ημο ζχιαημξ, βεβμκυξ ημ μπμίμ ένπεηαζ ζε ζοιθςκία ιε ηδ θμνία ημο S. lugdunensis ζηδκ ποεθζηή, πενζκεσηή ηαζ αμοαςκζηή πχνα (Vandenesch, Eykyn et al. 1995; Bellamy and Barkham 2002; Hellbacher, Tornqvist et al. 2006). ε ηάεε πενίπηςζδ, μζ ζοκδεέζηενεξ θμζιχλεζξ απυ ηδ ιέζδ ηαζ πάκς ηδξ ηαηδβμνίαξ αοηήξ είκαζ ηα απμζηήιαηα ημο ιαζημφ (Hellbacher, Tornqvist et al. 2006; Klotchko, Wallace et al. 2011), ηα μπμία αθμνμφκ βοκαίηεξ εηηυξ θμπείαξ ηαζ ιπμνεί κα αημθμοεμφκ πνυζθαηδ πεζνμονβζηή επέιααζδ ζηδκ πενζμπή ή κα εηδδθχκμκηαζ αοηυιαηα, ζζπονμπμζχκηαξ ηδκ άπμρδ υηζ μ ιαζηυξ απμηεθεί ιζα επζπθέμκ εέζδ απμζηζζιμφ βζα ημκ S. lugdunensis (Lina, Vandenesch et al. 1994; Hellbacher, Tornqvist et al. 2006; Klotchko, Wallace et al. 2011) 2.Σ.2.2 Βαθηεξηαηκία Ζ πζμ ακδζοπδηζηή θμίιςλδ ζηδκ μπμία εκέπεηαζ μ S. lugdunensis είκαζ, αδζαιθζζαήηδηα, δ ααηηδνζαζιία, πμο ιπμνεί κα ζοκμδεφεηαζ ή υπζ απυ εκδμηανδίηζδα. Πζμ ζοβηεηνζιέκα, μ S. lugdunensis ακηζζημζπεί ζημ 0,26% ημο ζοκυθμο ηςκ ζηεθεπχκ ηαζ ζημ 0,9% ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ, πμο απμιμκχκμκηαζ απυ εεηζηέξ αζιμηαθθζένβεζεξ, ιε ηδκ επίπηςζδ ηδξ ηθζκζηά ζδιακηζηήξ ααηηδνζαζιίαξ πμο πνμηαθεί κα οπμθμβίγεηαζ ζε 1,3 πενζζηαηζηά ακά εζζαβςβέξ (Choi, Chung et al. 2010). Μάθζζηα, απυ ενβαζηδνζαηήξ πθεονάξ, αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ηθζκζηά ζδιακηζηή ααηηδνζαζιία ακαδεζηκφεηαζ αηυια ηαζ ζε αζεεκείξ ιε ιία ιυκμ εεηζηή αζιμηαθθζένβεζα ζε πμζμζηυ πμο θηάκεζ ημ 45% (Fadel, Patel et al. 2011). Ζ ηθζκζηά ζδιακηζηή ααηηδνζαζιία απυ S. lugdunensis, απμηεθεί ιζα, ηαηά ηακυκα, κμζμημιεζαηή θμίιςλδ, ιε ζοκδεέζηενεξ πφθεξ εζζυδμο ηδκ πανμοζία αββεζαηχκ ηαεεηήνςκ ή άθθςκ λέκςκ ζςιάηςκ. οκδεέζηενα αθμνά αζεεκείξ ιε ζμαανά οπμηείιεκα κμζήιαηα υπςξ αζιαημθμβζηέξ ηαημήεεζεξ ή ηαημήεεζεξ ζοιπαβχκ μνβάκςκ, δζααήηδ ηαζ πνυκζα κεθνζηή ακεπάνηεζα. Ζ έηααζή ηδξ είκαζ, ζηδκ πθεζμρδθία ηςκ πενζπηχζεςκ, ζηακμπμζδηζηή ιε ηδ θήρδ ηδξ ηαηάθθδθδξ ακηζιζηνμαζαηήξ Σελίδα 62

63 αβςβήξ, πςνίξ κα ζδιεζχκμκηαζ επζπθμηέξ ή οπμηνμπέξ ηδξ θμίιςλδξ. (Ebright, Penugonda et al. 2004; Zinkernagel, Zinkernagel et al. 2008; Choi, Chung et al. 2010). ε ελαζνεηζηά ζπάκζεξ πενζπηχζεζξ δ ααηηδνζαζιία απυ S. lugdunensis ιπμνεί κα ελεθζπεεί ζε ζδπηζηυ ζμη (Castro and Dowdy 1999). 2.Σ.2.3 Δλδνθαξδίηηδα Ζ εκδμηανδίηζδα ζοκμδεφεζ ημ 16,7% έςξ 46,4% ηςκ πενζζηαηζηχκ ηθζκζηά ζδιακηζηήξ ααηηδνζαζιίαξ απυ S. lugdunensis (Ebright, Penugonda et al. 2004; Zinkernagel, Zinkernagel et al. 2008; Choi, Chung et al. 2010) ηαζ πνήγεζ ζδζαίηενδξ πνμζμπήξ ηαεχξ δ εκδηυηδηά ηδξ είκαζ ιεβαθφηενδ ηδξ εκδμηανδίηζδαξ ηυζμ απυ S. aureus, υζμ ηαζ απυ S. epidermidis (Anguera, Del Rio et al. 2005). Τπμθμβίγεηαζ υηζ μ S. lugdunensis ακηζζημζπεί ζημ 18% ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ (Patel, Piper et al. 2000) ηαζ ζημ 1,1% ημο ζοκυθμο ηςκ αζηίςκ, πμο πνμηαθμφκ εκδμηανδίηζδα (Anguera, Del Rio et al. 2005). Ζ εκδμηανδίηζδα απυ S. lugdunensis είκαζ, ηαηά ηακυκα, θμίιςλδ ηδξ ημζκυηδηαξ, ιε ημ 80,6% ηςκ πενζζηαηζηχκ κα ζπεηίγεηαζ ιε ηζξ θοζζηέξ ααθαίδεξ, εκχ αημθμοεεί δ εκδμηανδίηζδα ζε πνμζεεηζηέξ ααθαίδεξ ιε πμζμζηυ 11,9% ηαζ ζε αδιαημδυηεξ ιε πμζμζηυ 7,5% (Liu, Huang et al. 2010). Ζ εκδμηανδίηζδα ηςκ θοζζηχκ ααθαίδςκ αθμνά ζοπκυηενα ηδ ιζηνμεζδή (55% ηςκ πενζζηαηζηχκ) ηαζ δεοηενεουκηςξ (28% ηςκ πενζζηαηζηχκ) ηδκ αμνηζηή ααθαίδα ηαζ παναηηδνίγεηαζ απυ μλεία έκανλδ ηςκ ζοιπηςιάηςκ (54% ηςκ πενζζηαηζηχκ) ηαζ ζοπκέξ επζπθμηέξ, υπςξ ηανδζαηή ακεπάνηεζα (45% ηςκ πενζζηαηζηχκ), ζπδιαηζζιυ απμζηήιαημξ (19% ηςκ πενζζηαηζηχκ) ηαζ πενζθενζηυ ειαμθζζιυ (30% ηςκ πενζζηαηζηχκ). Ζ ζοκμθζηή εκδηυηδηα ηδξ θμίιςλδξ ακένπεηαζ ζημ 42%, εκχ δ έβηαζνδ πεζνμονβζηή πανέιααζδ ιεζχκεζ ηδ εκδηυηδηα ζημ 29% ηαζ αεθηζχκεζ ζδιακηζηά ηδκ επζαίςζδ ηςκ ακηίζημζπςκ αζεεκχκ (Anguera, Del Rio et al. 2005). Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ δ εκδμηανδίηζδα απυ S. lugdunensis ζηζξ θοζζηέξ ααθαίδεξ απμηεθεί ζπάκζα επζπθμηή ηδξ αββεζεηημιήξ (Lessing, Crook et al. 1996; Fervenza, Contreras et al. 1999), ηδξ ιεηαιυζπεοζδξ κεθνμφ (Patel, Piper et al. 2000), ηδξ πνυκζαξ αζιμδζάθοζδξ (Schonheyder, Hansen et al. 1993; Kamaraju, Nelson et al. 1999), ηδξ ιδνζαίαξ αββεζμβναθίαξ ή αββεζμπθαζηζηήξ (Breen and Karchner 1994; Polenakovik, Herchline et al. 2000; Viganego, Nazir et al. 2007; Matthews, Missouris et al. 2008) ηαζ ημο ηναοιαηζζιμφ ζημ υζπεμ (Patel, Piper et al. 2000). Σελίδα 63

64 ηδκ εκδμηανδίηζδα ηςκ πνμζεεηζηχκ ααθαίδςκ απυ S. lugdunensis δ αμνηζηή πνμζαάθθεηαζ ζημ 77% ηςκ πενζζηαηζηχκ. Ζ θμίιςλδ ζπεηίγεηαζ ιε ορδθυ πμζμζηυ επζπθμηχκ, ιε ηονζυηενδ ημ ζπδιαηζζιυ απμζηήιαημξ (66% ηςκ πενζζηαηζηχκ), απαζηεί επείβμοζα πεζνμονβζηή πανέιααζδ ζε πενζζζυηενμοξ απυ ημοξ ιζζμφξ αζεεκείξ (55% ηςκ πενζζηαηζηχκ) ηαζ ζοκδέεηαζ ιε ζοκμθζηή εκδηυηδηα πμο θηάκεζ ημ 78% ηαζ δε θαίκεηαζ κα ιεζχκεηαζ ζδιακηζηά αηυια ηαζ ιε ηδ πεζνμονβζηή ακηζιεηχπζζδ (Anguera, Del Rio et al. 2005). Σέθμξ, δ ζπακζυηενδ ιμνθή εκδμηανδίηζδαξ απυ S. lugdunensis είκαζ δ αοηή πμο αθμνά ηζξ ζοζηεοέξ αδιαημδυηδζδξ, ηδξ μπμίαξ, ζηζξ ιζζέξ ηαζ πθέμκ πενζπηχζεζξ, πνμδβείηαζ ηάπμζμξ πεζνζζιυξ ημο ζοζηήιαημξ υπςξ ακηζηαηάζηαζδ ιπαηανίαξ ή επακαημπμεέηδζδ δθεηηνμδίςκ. Ζ ακηζιεηχπζζδ απαζηεί πεζνμονβζηή αθαίνεζδ μθυηθδνμο ημο αδιαημδυηδ ηαζ δ εκδηυηδηα ηδξ θμίιςλδξ ακένπεηαζ ζημ 18,2% (Tsao, Wang et al. 2012). 2.Σ.2.4 Λνηκώμεηο νζηώλ θαη αξζξώζεωλ Ο S. lugdunensis εοεφκεηαζ βζα ημ 7% ημο ζοκυθμο ηςκ θμζιχλεςκ πμο πνμηαθμφκ μζ ημαβημοθάζδ ανκδηζημί ζηαθοθυημηημζ ζε μζηά ηαζ ανενχζεζξ (Sivadon, Rottman et al. 2005) ηαζ βζα ημ 1% ηςκ ακηίζημζπςκ θμζιχλεςκ ζε μνεμπαζδζηά ειθοηεφιαηα (Arciola, Campoccia et al. 2006). Έπεζ ζοζπεηζζηεί ιε πενζζηαηζηά ζπμκδοθμδζζηίηζδαξ (Guttmann, Garazi et al. 2000; Camacho, Guis et al. 2002) ηαζ μζηεμιοεθίηζδαξ ηδξ ζπμκδοθζηήξ ζηήθδξ (Murdoch, Everts et al. 1996; Weightman, Allerton et al. 2000; Greig and Wood 2003). Δπίζδξ, ακαθένεηαζ ςξ αίηζμ ζδπηζηήξ ανενίηζδαξ, δ μπμία ιπμνεί κα ζοζπεηίγεηαζ (Palazzo, Pierre et al. 1992; Mei-Dan, Mann et al. 2008) ή υπζ (Grupper, Potasman et al. 2010) ιε πνμδβδεείζεξ ανενμζημπζηέξ πανειαάζεζξ, εκχ πνμζαάθεζ ηαζ ηζξ πνμζεεηζηέξ ανενχζεζξ πνςηίζηςξ ημο βυκαημξ (89% ηςκ πενζζηαηζηχκ) ηαζ δεοηενεουκηςξ ημο ζζπίμο (11% ηςκ πενζζηαηζηχκ), ζδίςξ ζε άημια ιε οπμηείιεκδ ακςιαθία ημο μονμβεκκδηζημφ ζοζηήιαημξ (32% ηςκ πενζζηαηζηχκ) (Shah, Osmon et al. 2010). 2.Σ.2.5 Άιιεο ινηκώμεηο Ακαθμνζηά ιε ηδ ζοιιεημπή ημο S. lugdunensis ζε θμζιχλεζξ ημο Κεκηνζημφ Νεονζημφ οζηήιαημξ, έπεζ ηαηαβναθεί ιζα πενίπηςζδ ιδκζββίηζδαξ ιεηά ηδ δζεκένβεζα ημζθζμζημιίαξ βζα Σελίδα 64

65 ηδ εεναπεία ζοββεκμφξ απμθναηηζημφ οδνμηέθαθμο ζε παζδί 12 εηχκ (Kaabia, Scauarda et al. 2002). Δπζπθέμκ, ακαθένμκηαζ δφμ πενζζηαηζηά εβηεθαθζηχκ απμζηδιάηςκ, ημ πνχημ ζε αζεεκή ιε μδμκηζηή θμίιςλδ (Fleurette, Bes et al. 1989) ηαζ ημ δεφηενμ ζε αζεεκή ιε εκδμηανδίηζδα δζβθχπζκαξ αμνηζηήξ ααθαίδαξ, ηδκ μπμία αημθμφεδζε ζδπηζηή ειαμθή ζηδκ ανζζηενή έλς ηάρα ημο εβηεθάθμο (Gianella, Ulrich et al. 2006), ηαεχξ ηαζ ηνία πενζζηαηζηά θμίιςλδξ ζε ειθοηεφιαηα ημζθζμπενζημκασηήξ πανμπέηεοζδξ ημο ΔΝΤ ζε δφμ παζδζαηνζημφξ ηαζ έκακ εκήθζημ αζεεκή, ιε ηθζκζηή εζηυκα πανυιμζα αοηήξ ηςκ ακηίζημζπςκ θμζιχλεςκ απυ S. aureus (Elliott, Yogev et al. 2001; Sandoe and Longshaw 2001). Ο S. lugdunensis έπεζ, επίζδξ, παναηηδνζζηεί ςξ έκα αθδεέξ, πανυηζ αζφκδεεξ, μονμπαεμβυκμ ηυζμ βζα εκδθίημοξ, υζμ ηαζ παζδζαηνζημφξ αζεεκείξ (Haile, Hughes et al. 2002; Casanova-Roman, Sanchez-Porto et al. 2004; Klotchko, Wallace et al. 2011). Απμηεθεί ημ 6% ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ πμο απμιμκχκμκηαζ απυ ηαθθζένβεζεξ μφνςκ ηαζ ζοκήεςξ ακαπηφζζεηαζ ςξ ιέθμξ ιζηηήξ ζαπνμθοηζηήξ πθςνίδαξ (Haile, Hughes et al. 2002), ακ ηαζ έπμοκ ακαθενεεί ηαζ ιμκμιζηνμαζαηέξ μονμθμζιχλεζξ (Casanova-Roman, Sanchez-Porto et al. 2004; Klotchko, Wallace et al. 2011). Ο S. lugdunensis εοεφκεηαζ βζα ημ 2,3% ηςκ πενζζηαηζηχκ πενζημκίηζδαξ απυ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ ζε αζεεκείξ οπυ ζοκεπή θμνδηή πενζημκασηή ηάεανζδ (Ludlam and Phillips 1989), εκχ έπεζ ακαθενεεί ηαζ ςξ αίηζμ πενζημκίηζδαξ ιεηά απυ ηαζζανζηή ημιή (Fleurette, Bes et al. 1989). Ζ ηθζκζηή πμνεία ηδξ ζοβηεηνζιέκδξ θμίιςλδξ, πμο ιπμνεί κα επζπθαηεί απυ ζπδιαηζζιυ απμζηήιαημξ, πνμζμιμζάγεζ αοηήξ ημο S. aureus ηαζ απαζηεί ακηίζημζπα εεναπεοηζηά ιέηνα (Schnitzler, Meilicke et al. 1998). Ο S. lugdunensis ζπεηίγεηαζ αηυια ηαζ ιε μθεαθιζηέξ θμζιχλεζξ. οβηεηνζιέκα, ακηζζημζπεί ζημ 6% ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ πμο πνμηαθμφκ ιεηεβπεζνδηζηή εκδμθεαθιίηζδα (Bannerman, Rhoden et al. 1997; Chiquet, Pechinot et al. 2007), ιε ορδθή ζοπκυηδηα επζπθμηχκ ηαζ ηαηή θεζημονβζηή πνυβκςζδ (Chiquet, Pechinot et al. 2007), εκχ ακαθένεηαζ ηαζ ςξ αίηζμ δζαποδηζηήξ ηεναηίηζδαξ (Pinna, Zanetti et al. 1999). Σέθμξ, ημ θάζια ηςκ θμζιχλεςκ απυ ηζξ μπμίεξ απμιμκχκεηαζ μ S. lugdunensis πενζθαιαάκεζ θμζιχλεζξ ηδξ ηεθαθήξ ηαζ ημο ηναπήθμο υπςξ μζηεμιοεθίηζδα ημο ηνμηαθζημφ μζημφ (Thomas, Hoy et al. 2006,) θμζιχλεζξ ηδξ ζημιαηζηήξ ημζθυηδηαξ (You, Kim et al. 1999) ηαζ μλεία κεηνςηζηή παναννζκμημθπίηζδα (Matthews, Lazarus et al. 2011). Σελίδα 65

66 2.Σ.3 Λνηκνγόλνη παξάγνληεο Πμθφ ζφκημια ιεηά ηδκ πενζβναθή ημο S. lugdunensis ημ εκδζαθένμκ ηςκ ενεοκδηχκ εζηζάζηδηε ζηδκ ακεφνεζδ ηςκ θμζιμβυκςκ παναβυκηςκ, πμο εοεφκμκηαζ βζα ημ παεμβυκμ δοκαιζηυ ημο είδμοξ. Οζ πνμζπάεεζεξ ακίπκεοζδξ ηςκ εκηενμημλζκχκ Α, B, C, D ηαζ Δ, ηδξ απμθμθζδςηζηήξ ημλίκδξ ηαζ ηδξ ημλίκδξ ημο ημλζημφ ζμη ήηακ ακεπζηοπείξ (Fleurette, Bes et al. 1989; Pareja, Gupta et al. 1998). Δπζπθέμκ, ημ βμκζδίςια ημο S. lugdunensis δε ανέεδηε κα ηςδζημπμζεί αζιμθοζίκεξ μιυθμβεξ ηςκ α-, β- ηαζ γ- αζιμθοζζκχκ ημο S. aureus. Ζ αζιμθοηζηή δναζηδνζυηδηα ημο είδμοξ απμδυεδηε ζηδκ παναβςβή ιζαξ αζιμθοζίκδξ υιμζαξ (ςξ πνμξ ηδ ζηαεενυηδηά ηδξ ζηδ εενιυηδηα ηαζ ηδ ζοκενβζηή ηδξ δνάζδ ιε ηδ β-ημλίκδ ημο S. intermedius) ιε ηδ δ-αζιμθοζίκδ ημο S. aureus (Hebert 1990; Vandenesch, Storrs et al. 1991). Mάθζζηα, πεζνάιαηα οανζδζζιμφ ιε αζιμθοηζηά ζηεθέπδ S. lugdunensis ακέδεζλακ ηαζ ηδκ πανμοζία αθθδθμοπίαξ μιυθμβδξ ιε ημ βμκίδζμ hld, ημ μπμίμ ηςδζημπμζεί ηδ δ-αζιμθοζίκδ ζημκ S. aureus (Vandenesch, Storrs et al. 1991). ημ ζδιείμ αοηυ αλίγεζ κα ακαθενεεί υηζ ημ βμκζδίςια ημο S. lugdunensis πενζέπεζ ιζα πενζμπή μιυθμβδ ημο μπενμκίμο agr ημο S. aureus, πμο νοειίγεζ ηδκ έηθναζδ ηςκ βμκζδίςκ ηςκ πενζζζυηενςκ ελςηοηηάνζςκ πνμσυκηςκ ημο ααηηδνίμο, ζοιπενζθααακμιέκςκ πμζηίθςκ εκγφιςκ, ημλζκχκ, αζιμθοζζκχκ ηαζ πνςηεσκχκ επζθακείαξ. Ζ αθθδθμοπία ηδξ πενζμπήξ agr-sl ημο S. lugdunensis δζαεέηεζ 63,4% μιμζυηδηα ηαζ ακηίζημζπδ βμκζδζαηή μνβάκςζδ ιε αοηήκ ημο S. aureus. Ωζηυζμ, ακ ηαζ ζημκ S. aureus ημ βμκίδζμ hld ανίζηεηαζ εκηυξ ημο agr μπενμκίμο, δ πενζμπή agr-sl ημο S. lugdunensis δε ανέεδηε κα πενζέπεζ ηάπμζμ ακμζπηυ πθαίζζμ ακάβκςζδξ, πμο κα ηςδζημπμζεί ηδ δναζηζηυηδηα δ-αζιμθοζίκδξ ημο είδμοξ (Vandenesch, Projan et al. 1993). Ανβυηενα απμδείπηδηε υηζ βζα ηδ δναζηζηυηδηα αοηή ημο S. lugdunensis οπεφεοκα είκαζ ηνία πεπηίδζα, ιεβέεμοξ 43 αιζκμλζηχκ ηαηαθμίπςκ ημ ηαεέκα, πμο ηςδζημπμζμφκηαζ απυ ημ μπενυκζμ slush (S. lugdunensis synergistic hemolysin) ηαζ ηα ακηίζημζπα ακμζπηά πθαίζζα ακάβκςζδξ SLUSH-A, SLUSH-B ηαζ SLUSH-C εηηυξ ηδξ agr-sl πενζμπήξ (Donvito, Etienne et al. 1997). Ζ πνυζθαηδ πανημβνάθδζδ ημο βμκζδζχιαημξ ημο S. lugdunensis ακέδεζλε ηαζ άθθα βμκίδζα πζεακχκ αζιμθοζζκχκ, υπςξ ημ SLGD_00847 βζα ηδκ αζιμθοζίκδ III ηαζ ημ SLGD_00006 βζα ηδ α-αζιμθοζίκδ (Tse, Tsoi et al. 2010), ηα μπμία, ιάθζζηα, ακεονίζημκηαζ ζημ ζφκμθμ, ζπεδυκ, ηςκ ζηεθεπχκ ημο είδμοξ. ε ακηίεεζδ ιε αοηά, ημ μπενυκζμ slush ακζπκεφεηαζ ζηα ιζζά ιυκμ ζηεθέπδ, ακαδεζηκφμκηαξ έιιεζα ηδκ φπανλδ Σελίδα 66

67 πεναζηένς ιδπακζζιχκ αζιυθοζδξ βζα ημκ S. lugdunensis, πμο δεκ έπμοκ αηυια δζενεοκδεεί (Szabados, Nowotny et al. 2011). Ζ ειπθμηή ημο S. lugdunensis ζε θμζιχλεζξ πμο ζπεηίγμκηαζ ιε λέκα ζχιαηα οπμδδθχκεζ, υπςξ ηαζ βζα ηα οπυθμζπα είδδ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ, ηδκ ζηακυηδηά ημο κα αθθδθεπζδνά ιε ημοξ ζζημφξ ηαζ ηζξ πνςηεΐκεξ ημο λεκζζηή, πμο επζηαθφπημοκ ηζξ επζθάκεζεξ ηςκ ζςιάηςκ αοηχκ. Ο S. lugdunensis ζοκδέεηαζ ιε πμζηζθία δζαθοηχκ πνςηεσκχκ υπςξ είκαζ ημ ημθθαβυκμ (ηςκ ηφπςκ I ηαζ IV), δ ακμζμζθαζνίκδ IgG ηαζ, ζε ιζηνυηενμ ααειυ, ημ ζκςδμβυκμ, δ θαιζκίκδ, δ αζηνμκεηηίκδ, δ θζιπνμκεηηίκδ, δ ενμιαμζπμκδίκδ ηαζ ημ πθαζιζκμβυκμ (Paulsson, Petersson et al. 1993). Ζ ζφκδεζή ημο ιε ηα ζοβηεηνζιέκα ιυνζα δζαιεζμθααείηαζ απυ επζθακεζαημφξ πνςηεσκζημφξ οπμδμπείξ, πμο ζοιαάθθμοκ, έηζζ, ηαεμνζζηζηά ζημ παεμβυκμ δοκαιζηυ ημο είδμοξ. Μέπνζ ζήιενα, απυ ημοξ οπμδμπείξ αοημφξ έπμοκ ιεθεηδεεί δ πνςηεΐκδ ζφκδεζδξ ιε ημκ πανάβμκηα von Willebrand ηαζ δ πνςηεΐκδ ζφκδεζδξ ιε ημ ζκςδμβυκμ. Ζ πνχηδ (πνςηεΐκδ vwbl, von Willebrand binding protein of S. lugdunensis) απμηεθείηαζ ζοκμθζηά απυ αιζκμλζηά ηαηάθμζπα, δζαεέηεζ ηοπζηή δμιζηή μνβάκςζδ πνςηεΐκδξ επζθακείαξ ηαζ ημ βμκίδζμ (vwbl), πμο ηδκ ηςδζημπμζεί, ακεονίζηεηαζ ζε υθα ηα ζηεθέπδ ημο είδμοξ. Σμ βεβμκυξ υηζ δ δνάζδ ηδξ ακαζηέθθεηαζ απυ ηδκ μιυθμβδ πνςηεΐκδ ημο S. aureus ηαηαδεζηκφεζ υηζ ηα δφμ ιυνζα αθθδθεπζδνμφκ ιε ηδκ ίδζα πενζμπή ημο πανάβμκηα von Willebrand (Nilsson, Bjerketorp et al. 2004). Ζ πνςηεΐκδ ζφκδεζδξ ιε ημ ζκςδμβυκμ ζημκ S. lugdunensis (πνςηεΐκδ Fbl, fibrinogen binding protein of S. lugdunensis) είκαζ μιυθμβδ ημο πανάβμκηα ζοβηυθθδζδξ clfa ημο S. aureus ηαζ ζοκδέεηαζ, υπςξ ηαζ αοηυξ, ζημ ηαναμλοηεθζηυ άηνμ ηδξ β-αθοζίδαξ ημο ζκςδμβυκμο, ακ ηαζ ιε δέηα θμνέξ ιζηνυηενδ ζοββέκεζα. Μάθζζηα, ηα ηνίζζια βζα ηδ ζφκδεζδ ηαηάθμζπα είκαζ ζοκηδνδιέκα ακάιεζα ζηζξ δφμ πνςηεΐκεξ, εκχ ακηζζχιαηα έκακηζ ηδξ ιίαξ ακαζηέθθμοκ ηδ δνάζδ ηδξ άθθδξ. Ζ πνςηεΐκδ Fbl πενζθαιαάκεζ ζοκμθζηά 881 αιζκμλέα ηαζ ημ βμκίδζυ ηδξ (fbl) ακζπκεφεηαζ ζε υθα ηα ζηεθέπδ ημο είδμοξ (Mitchell, Tristan et al. 2004; Nilsson, Bjerketorp et al. 2004). Αλίγεζ, πάκηςξ, κα ζδιεζςεεί υηζ δ δζείζδοζδ ημο S. lugdunensis ζηα εοηανοςηζηά εκδμεδθζαηά ηαζ επζεδθζαηά ηφηηανα ελανηάηαζ πενζζζυηενμ απυ ηδκ ζηακυηδηά ημο κα ζοκδέεηαζ ιε ηδ θζιπνμκεηηίκδ, πανά ιε ημ ζκςδμβυκμ, ακ ηαζ μζ ακηίζημζπμζ οπμδμπείξ δεκ έπμοκ αηυια πενζβναθεί (Szabados, Marlinghaus et al. 2011). Ο ζπδιαηζζιυξ αζμιεανάκδξ απμηεθεί βζα ημκ S. lugdunensis, υπςξ ηαζ βζα ηα πενζζζυηενα είδδ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ, έκακ επζπθέμκ θμζιμβυκμ Σελίδα 67

68 πανάβμκηα. Σμ βμκζδίςιά ημο πενζέπεζ έκα μπενυκζμ μιυθμβμ ημο μπενμκίμο icaadbc, πμο, ςξ βκςζηυκ, ηςδζημπμζεί ηδ ζφκεεζδ ηδξ πνμζημθθδηίκδξ PIA. Ζ ηεθεοηαία, ςζηυζμ, δε θαίκεηαζ κα απμηεθεί ηονίανπμ ζοζηαηζηυ ηδξ αζμιεανάκδξ ημο S. lugdunensis, δ μπμία απανηίγεηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, απυ ελςηοηηάνζεξ πνςηεΐκεξ (Frank and Patel 2007). Όπςξ είκαζ ακαιεκυιεκμ, μ ζπδιαηζζιυξ αζμιειανάκδξ πνμζδίδεζ ζημ ζηέθεπμξ πμο ηδκ πανάβεζ ορδθή ακημπή έκακηζ πμζηίθςκ ακηζιζηνμαζαηχκ παναβυκηςκ, ζημοξ μπμίμοξ ζοιπενζθαιαάκμκηαζ δ δαπημιοηίκδ, δ νζθαιπζηίκδ, δ θζκεγμθίδδ, δ ηεηναηοηθίκδ, δ ημηνζιμλαγυθδ ηαζ δ αακημιοηίκδ. Ζ ιμλζθθμζακίκδ αζηχκηαξ ααηηδνζμηηυκμ δνάζδ ζημ 73% ηςκ ζηεθεπχκ πμο ακαπηφζζμοκ αζμιεανάκεξ ζε ζοβηέκηνςζδ 0,5 ιg/ml, θαίκεηαζ κα έπεζ ηδ ιεβαθφηενδ απμηεθεζιαηζηυηδηα βζα ηδ εεναπεία ηςκ ακηίζημζπςκ θμζιχλεςκ (Frank, Reichert et al. 2007). Ο S. lugdunensis, υπςξ ηαζ άθθμζ παεμβυκμζ ζηαθοθυημηημζ, πανμοζζάγεζ ορδθμφ επζπέδμο ακημπή ζηδ θοζμγφιδ, δ μπμία, πάνδ ζηδκ ζηακυηδηά ηδξ κα οδνμθφεζ ημοξ α-1,4- βθοημζζδζημφξ δεζιμφξ ιεηαλφ ηδξ Ν-αηεηοθμβθοημγαιίκδξ ηαζ ημο Ν-αηεηοθμιμοναιζημφ μλέμξ ηδξ πεπηζδμβθοηάκδξ, απμηεθεί ημ ζδιακηζηυηενμ ααηηδνζμθοηζηυ έκγοιμ ηδξ ακενχπζκδξ θοζζηήξ ακμζίαξ. Ζ ακημπή ζηδ θοζμγφιδ ζπεηίγεηαζ ιε έκακ ιδπακζζιυ Ο-αηεηοθίςζδξ ηδξ πεπηζδμβθοηάκδξ, μ μπμίμξ ζημκ S. lugdunensis, δζαιεζμθααείηαζ απυ ιζα δζαιειανακζηή Ο- αηεηοθμηνακζθενάζδ (OatA, O-acetyltransferase A), πμο εεςνείηαζ έκαξ αηυια θμζιμβυκμξ πανάβμκηαξ ημο είδμοξ (Bera, Biswas et al. 2006). 2.Σ.4 Αληνρή ζηα αληηκηθξνβηαθά ε υ,ηζ αθμνά ηδκ ακημπή ημο ζηα ακηζιζηνμαζαηά, μ S. lugdunensis πανμοζζάγεζ, ιέπνζ ζήιενα, έκακ πμθοεοαίζεδημ θαζκυηοπμ, ημκ μπμίμ δζαηδνεί ακελάνηδηα απυ ηδκ πδβή πνμέθεοζδξ ηδξ θμίιςλδξ (Frank, Del Pozo et al. 2008). Σα ορδθυηενα πμζμζηά ακημπήξ ημο είδμοξ ηαηαβνάθμκηαζ έκακηζ ηδξ πεκζηζθθίκδξ ηαζ, ιάθζζηα, θαίκμκηαζ κα δζαθένμοκ ιεηαλφ ηςκ ζηεθεπχκ απυ δζαθμνεηζηέξ βεςβναθζηέξ πενζμπέξ. οβηεηνζιέκα, ζηζξ πενζζζυηενεξ ιεθέηεξ απυ ηζξ ΖΠΑ δ ακημπή ημο S. lugdunensis ζηδκ πεκζηζθθίκδ ηοιαίκεηαζ απυ 24% έςξ 45% (Herchline, Barnishan et al. 1990; Haile, Hughes et al. 2002; Ebright, Penugonda et al. 2004; Frank, Reichert et al. 2007; Kleiner, Monk et al. 2010), εκχ ζε ιία πμθφ πνυζθαηδ ένεοκα ακαθένεηαζ πμζμζηυ ακημπήξ αηυια ηαζ 80% (Klotchko, Wallace et al. 2011). Δλίζμο ορδθά είκαζ ηα πμζμζηά ηαζ ζηδκ Αζία, ηα μπμία ηοιαίκμκηαζ απυ 27% έςξ 53% (Tan, Ng et al. 2008; Σελίδα 68

69 Wu, Wang et al. 2011). ε εονςπασηέξ ζοθθμβέξ δ επίπηςζδ ηςκ α-θαηηαιάζδ εεηζηχκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis ακένπεηαζ ζημ 15% ζηδ μοδδία (Hellbacher, Tornqvist et al. 2006), 16% ζηδκ Ηζπακία (Anguera, Del Rio et al. 2005), 18% ζηδκ Δθαεηία (Zinkernagel, Zinkernagel et al. 2008), 20% ζηδ Γακία (Bocher, Tonning et al. 2009) ηαζ 7% έςξ 24% ζηδ Γαθθία (Fleurette, Bes et al. 1989; van der Mee-Marquet, Achard et al. 2003). Ζ ακημπή ημο S. lugdunensis ζηδ ιεεζηζθθίκδ είκαζ, ιέπνζ ζήιενα, ζπμναδζηή, ηαεχξ δεκ λεπενκά ημ 5% ζηδκ Δονχπδ ηαζ ηδκ Αζία (Hellbacher, Tornqvist et al. 2006; Tan, Ng et al. 2008; Bocher, Tonning et al. 2009; Wu, Wang et al. 2011) ηαζ ημ 10% ζηδκ Αιενζηή (Kleiner, Monk et al. 2010; Klotchko, Wallace et al. 2011). Σέθμξ, ακαθμνζηά ιε ηα βθοημπεπηίδζα, πανά ημ βεβμκυξ υηζ δεκ έπμοκ αηυια απμιμκςεεί ακεεηηζηά ζηεθέπδ παναηδνείηαζ ημ θαζκυιεκμ ηδξ ακμπήξ (tolerance), ηυζμ ζηδ αακημιοηίκδ υζμ ηαζ ηδκ ηεσημπθακίκδ, ζε ζδιακηζηυ ανζειυ ζηεθεπχκ, ηα μπμία ακείζηακηαζ ζηδ ααηηδνζμηηυκμ δνάζδ ηςκ ζοβηεηνζιέκςκ ακηζιζηνμαζαηχκ (Bourgeois, Pestel-Caron et al. 2007; Frank, Reichert et al. 2007). 2.Ε Staphylococcus pseudolugdunensis Δίημζζ πνυκζα ιεηά ηδκ πενζβναθή ημο S. lugdunensis, πνμέηορε δ ακάβηδ κα παναηηδνζζηεί έκα κέμ, αζμπδιζηά πανυιμζμ αθθά βεκεηζηά λεπςνζζηυ, είδμξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφ ζηαθοθμηυηημο, μ S. pseudolugdunensis. Οζ αζμπδιζηέξ μιμζυηδηεξ ημο κέμο είδμοξ ιε ημκ S. lugdunensis (ζηζξ μπμίεξ, μθείθεζ ηαζ ημκ παναηηδνζζιυ ημο ςξ S. pseudolugdunensis) αθμνμφκ ζηδκ ζηακυηδηα απμηαναμλοθίςζδξ ηδξ μνκζείκδξ ηαζ οδνυθοζδξ ηδξ L-ποννμθζδμκοθα-καθεοθαιίκδξ, εκχ μζ αζμπδιζηέξ δζαθμνέξ ημο ζπεηίγμκηαζ ιε ηδ ιδ παναβςβή μλέμξ απυ ηδ ιακκυγδ, ηδ ιαθηυγδ, ηδ θαηηυγδ ηαζ ηδ Ν-αηεηοθ-βθοημγαιίκδ. Ωξ επί ημ πθείζημκ, υιςξ, δ ζαθήξ δζάηνζζδ ηςκ δφμ εζδχκ ζηδνίγεηαζ ζηζξ δζαθμνεηζηέξ αθθδθμοπίεξ ηςκ 16S rrna ηαζ tuf βμκζδίςκ ημοξ. Μέπνζ ζήιενα ηα ιμκαδζηά ζηεθέπδ S. pseudolugdunensis πμο έπμοκ απμιμκςεεί απμηέθεζακ ζηδ ζοκηνζπηζηή ημοξ πθεζμρδθία (δέηα απυ ηα 12 ζοκμθζηά ζηεθέπδ) επζιμθφκζεζξ ηαθθζενβεζχκ αίιαημξ ηαζ ζε ιία ιυκμ πενίπηςζδ (δφμ ζηεθέπδ απυ ημκ ίδζμ αζεεκή, πμο απμιμκχεδηακ ζε δζάζηδια 16 διενχκ) ανέεδηακ κα ζπεηίγμκηαζ ιε ηθζκζηά ζδιακηζηή ααηηδνζαζιία (Tang, Han et al. 2008). 2.Ζ Staphylococcus schleiferi Σελίδα 69

70 Ο S. schleiferi (S. schleiferi subsp. schleiferi) πενζβνάθδηε ςξ κέμ είδμξ ιαγί ιε ημκ S. lugdunensis ημ 1988 ηαζ έθααε ηδκ μκμιαζία ημο πνμξ ηζιήκ ημο Γενιακμφ ιζηνμαζμθυβμο Karl Heinz Schleifer, μ μπμίμξ δζαηνίεδηε βζα ηδ ζοκεζζθμνά ημο ζηδκ ηαλζκυιδζδ ηςκ gram εεηζηχκ ιζηνμμνβακζζιχκ (Freney, Brun et al. 1988). Ακ ηαζ δ απμιυκςζή ημο αλζμθμβείηαζ ζοπκά ςξ επζιυθοκζδ ηςκ ηθζκζηχκ δεζβιάηςκ (Fleurette, Bes et al. 1989), δ αζαθζμβναθία έπεζ ζοζπεηίζεζ ημ είδμξ αοηυ αηυια ηαζ ιε ζμαανέξ δζεζζδοηζηέξ θμζιχλεζξ. Γεδμιέκα απυ ιία ζεζνά 28 ηθζκζηχκ πενζζηαηζηχκ, ηαεχξ ηαζ απυ ιειμκςιέκεξ εκδζαθένμοζεξ πενζπηχζεζξ δείπκμοκ υηζ εοεφκεηαζ ζοκδεέζηενα βζα θμζιχλεζξ ηναοιάηςκ ηονίςξ ημο πεζνμονβζημφ πεδίμο (Kluytmans, Berg et al. 1998; Hernandez, Calvo et al. 2001), ηαεχξ ηαζ βζα θμζιχλεζξ λέκςκ ζςιάηςκ, ζηζξ μπμίεξ πενζθαιαάκμκηαζ ααηηδνζαζιίεξ πανμοζία εκδαββεζαηχκ ηαεεηήνςκ (Jean-Pierre, Darbas et al. 1989; Hernandez, Calvo et al. 2001), θμζιχλεζξ ζε ζοζηήιαηα αδιαημδμηχκ (Celard, Vandenesch et al. 1997; Da Costa, Lelievre et al. 1998; Hernandez, Calvo et al. 2001), εκδμηανδίηζδα ζε πνμζεεηζηή ιζηνμεζδή ααθαίδα (Leung, Nuttall et al. 1999), ιδκζββίηζδα ζε αζεεκή ιε ημζθζμπενζημκασηή επζημζκςκία (Hernandez, Calvo et al. 2001), αηυια ηαζ θμίιςλδ πνμζεεηζηήξ άνενςζδξ (Jean-Pierre, Darbas et al. 1989). πμναδζηά, μ S. schleiferi έπεζ επίζδξ απμιμκςεεί ςξ παεμβυκμ απυ πενζζηαηζηά μονμθμζιχλεςκ (Ozturkeri, Kocabeyoglu et al. 1994), μζηεμιοεθίηζδαξ (Calvo, Hernandez et al. 2000; Hernandez, Calvo et al. 2001), εβηεθαθζημφ απμζηήιαημξ (Fleurette, Bes et al. 1989; Hernandez, Calvo et al. 2001), πθεονζηζημφ ειποήιαημξ, μλείαξ ςηίηζδαξ ηαζ εκδμθεαθιίηζδαξ (Hernandez, Calvo et al. 2001). Ζ πθεζμρδθία ηςκ θμζιχλεςκ είκαζ κμζμημιεζαηέξ ηαζ μζ ακηίζημζπμζ αζεεκείξ ζοπκά πάζπμοκ απυ ζμαανά οπμηείιεκα κμζήιαηα, ηονίςξ ηαημήεεζεξ ηαζ δεοηενεουκηςξ ηανδζαββεζαηέξ ηαζ κεονμθμβζηέξ αζεέκεζεξ ηαζ έπμοκ οπμαθδεεί ζε ηάπμζα πεζνμονβζηή επέιααζδ ηζξ ιένεξ πμο πνμδβμφκηαζ ηδξ απμιυκςζδξ ημο παεμβυκμο (Hernandez, Calvo et al. 2001). Οζ πζεακυηενμζ θμζιμβυκμζ πανάβμκηεξ ημο είδμοξ πενζθαιαάκμοκ ηδκ παναβςβή αζμιειανάκδξ, κμοηθεάζδξ, θζπάζδξ, εζηενάζδξ, πνςηεάζδξ, α-αζιμθοζίκδξ, δ-αζιμθοζίκδξ (Lambe, Ferguson et al. 1990), ηαζ β-αζιμθοζίκδξ (Hebert 1990). Σέθμξ, απυ πθεονάξ ακημπήξ ζηα ακηζιζηνμαζαηά θάνιαηα, μ S. schleiferi δζαεέηεζ έκακ, ςξ επί ημ πθείζημκ, πμθοεοαίζεδημ θαζκυηοπμ (Fleurette, Bes et al. 1989; Jean-Pierre, Darbas et al. 1989; Latorre, Rojo et al. 1993; Leung, Nuttall et al. 1999; Hernandez, Calvo et al. 2001). Σελίδα 70

71 Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ημ 1990 πενζβνάθδηε έκα ηαζκμφνζμ οπμείδμξ, μ S. schleiferi subsp. coagulans, πμο απμιμκχεδηε απυ ημκ έλς αημοζηζηυ πυνμ ζηφθςκ ιε ελςηενζηή ςηίηζδα (Igimi, Takahashi et al. 1990). ε ακηίεεζδ ιε ημκ S. schleiferi subsp. schleiferi, ηo οπμείδμξ αοηυ είκαζ εεηζηυ ζηδ δμηζιαζία ηδξ εθεφεενδξ ηαζ ανκδηζηυ ζηδ δμηζιαζία ηδξ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ ηαζ οπάνπμοκ, ιέπνζ ζήιενα, ιυκμ δφμ ακαθμνέξ απμιυκςζήξ ημο απυ ημκ άκενςπμ, δ πνχηδ ζε θμίιςλδ πεζνμονβζημφ ηναφιαημξ δαηηφθμο (Vandenesch, Lebeau et al. 1994) ηαζ δ δεφηενδ ζε έκα πενζζηαηζηυ ζμαανά επζπθεβιέκδξ εκδμηανδίηζδαξ ηδξ αμνηζηήξ ααθαίδαξ (Kumar, Cawley et al. 2007). 2.Θ Staphylococcus warneri Ο S. warneri πενζβνάθδηε ημ 1975 ςξ έκα αηυια είδμξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφ ζηαθοθμηυηημο, πμο πενζθαιαάκεηαζ ζηδ θοζζμθμβζηή πθςνίδα ηςκ νζκζηχκ ημζθμηήηςκ, ηδξ ηεθαθήξ, ηςκ άκς ηαζ ηάης άηνςκ ηαζ ζπακζυηενα ηςκ ιαζπαθζαίςκ ημζθμηήηςκ (Kloos and Musselwhite 1975) ηαζ μθείθεζ ηδκ μκμιαζία ημο ζημκ Arthur Warner, απυ ημκ μπμίμ απμιμκχεδηε βζα πνχηδ θμνά (Kloos and Schleifer 1975). Γεδμιέκδξ ηδξ ζοζπέηζζήξ ημο αηυια ηαζ ιε ζμαανέξ δζεζζδοηζηέξ θμζιχλεζξ, απμηεθεί ζήιενα έκα ακαδουιεκμ, δοκδηζηά επζηίκδοκμ, εοηαζνζαηυ παεμβυκμ. Ακαθοηζηά, μ S. warneri έπεζ ηαηαβναθεί ςξ αίηζμ ηθζκζηά ζδιακηζηήξ ααηηδνζαζιίαξ, ζδίςξ ζε ακμζμηαηεζηαθιέκμοξ ηαζ ζε αζεεκείξ ιε εκδαββεζαημφξ ηαεεηήνεξ (Kamath, Singer et al. 1992), ηαεχξ ηαζ εκδμηανδίηζδαξ, ζοπκυηενα ηδξ αμνηζηήξ (θοζζηήξ ή πνμζεεηζηήξ) ααθαίδαξ (Dan, Marien et al. 1984; Wood, Sewell et al. 1989; Kamath, Singer et al. 1992; Abgrall, Meimoun et al. 2001; Stollberger, Wechsler-Fordos et al. 2006; Kini, Patel et al. 2010; Arslan, Saltoglu et al. 2011). οκδέεηαζ, επίζδξ, ιε θμζιχλεζξ μνεμπαζδζηχκ ειθοηεοιάηςκ, ηονίςξ ζζπίμο ηαζ βυκαημξ (Campoccia, Montanaro et al. 2010), αθθά ηαζ ιε πενζζηαηζηά μζηεμιοεθίηζδαξ ηδξ ζπμκδοθζηήξ ζηήθδξ (Karthigasu, Bowman et al. 1986; Bryan, Parisi et al. 1987; Wood, Sewell et al. 1989; Announ, Mattei et al. 2004), ηδξ ηκήιδξ ηαζ ημο ιδνμφ (Campoccia, Montanaro et al. 2010). Ο S. warneri απμιμκχκεηαζ ςξ αίηζμ μονμθμζιχλεςκ ηαζ απυ ηα δφμ θφθα, ακ ηαζ ζοπκυηενα αθμνά ζε άκδνεξ ιε οπμηείιεκεξ ακςιαθίεξ ημο μονμπμζδηζημφ ζοζηήιαημξ (Leighton and Little 1986). Αηυια, έπεζ ζοζπεηζζηεί ιε θμζιχλεζξ ζοζηδιάηςκ πανμπέηεοζδξ ημο εβηεθαθμκςηζαίμο οβνμφ (Martinez-Lage, Martinez-Lage Azorin Σελίδα 71

72 et al.; Torre, Ferraro et al. 1992; Turgut, Alabaz et al. 2005), πενζζηαηζηά ιδκζββίηζδαξ (Incani, Hernandez et al. 2010) ηαζ πνυκζαξ αθεθανίηζδαξ (Pinna, Zanetti et al. 1999). Σέθμξ, ιζα ζδζαίηενα εκδζαθένμοζα παναηήνδζδ απμηεθεί ημ βεβμκυξ υηζ ζε μνζζιέκεξ Παζδζαηνζηέξ Κθζκζηέξ ηαζ Μμκάδεξ Δκηαηζηήξ Θεναπείαξ Νεμβκχκ μ S. warneri είκαζ μ δεφηενμξ, ηαηά ζεζνά ζοπκυηδηαξ (ιεηά ημκ S. epidermidis), ημαβημοθάζδ ανκδηζηυξ ζηαθοθυημηημξ πμο απμιμκχκεηαζ ηυζμ ςξ αίηζμ ηθζκζηά ζδιακηζηήξ ααηηδνζαζιίαξ (Buttery, Easton et al. 1997), υζμ ηαζ ςξ απμζηζζηήξ ημο δένιαημξ αζεεκχκ ηαζ κμζδθεοηζημφ πνμζςπζημφ (Center, Reboli et al. 2003; Cimiotti, Haas et al. 2007). Ωξ ιμκαδζηυξ θμζιμβυκμξ πανάβμκηαξ ημο είδμοξ πενζβνάθεηαζ δ παναβςβή εκυξ ελςηοηηάνζμο εκγφιμο ιε δναζηζηυηδηεξ θζπάζδξ ηαζ θςζθμθζπάζδξ (Winn, Allen et al. 2006). Απυ πθεονάξ ακημπήξ ζηα ακηζιζηνμαζαηά θάνιαηα, πανυηζ οπάνπμοκ δεδμιέκα απυ εθάπζζηεξ ζεζνέξ ζηεθεπχκ S. warneri, δζαπζζηχκμκηαζ ορδθά πμζμζηά ακημπήξ ζε πεκζηζθθίκδ (πάκς απυ 80%) ηαζ ιεεζηζθθίκδ (πάκς απυ 30%) (Kamath, Singer et al. 1992; Buttery, Easton et al. 1997; Cimiotti, Haas et al. 2007), εκχ έπμοκ ηαηαβναθεί αηυια ηαζ ζηεθέπδ ιε ιεζςιέκδ εοαζζεδζία ζηδ αακημιοηίκδ (Center, Reboli et al. 2003; Cimiotti, Haas et al. 2007). 2.Η Staphylococcus capitis Ο S. capitis πενζβνάθδηε ςξ κέμ είδμξ ημ 1975 ηαζ μθείθεζ ηδκ μκμιαζία ημο ζηδκ πνμηίιδζή ημο κα απμζηίγεζ ζοπκυηενα ηδκ πενζμπή ηδξ ηεθαθήξ (ζηα θαηζκζηά caput) ζε ζπέζδ ιε ημ οπυθμζπμ ζχια (Kloos and Schleifer 1975). Ζ ζμαανυηενδ θμίιςλδ πμο πνμηαθεί, ελαζηίαξ ηδξ μπμίαξ έπεζ πνμζεθηφζεζ ηυζμ ηθζκζηυ υζμ ηαζ ενβαζηδνζαηυ εκδζαθένμκ, είκαζ δ εκδμηανδίηζδα. Μέπνζ ζήιενα έπμοκ πενζβναθεί εκκέα πενζζηαηζηά ζε θοζζηέξ ααθαίδεξ, απυ ηα μπμία ηα πέκηε αθμνμφκ ζηδ ιζηνμεζδή (Bandres and Darouiche 1992; Lina, Celard et al. 1992; Mainardi, Lortholary et al. 1993; Breuer, Yinnon et al. 1998) ηαζ ηα ηέζζενα ζηδκ αμνηζηή ααθαίδα (al-rashdan, Bashir et al. 1998; Sandoe, Kerr et al. 1999; Kamalesh and Aslam 2000). Ζ θμίιςλδ ζηζξ πενζπηχζεζξ αοηέξ ζοκδέεηαζ ζοκήεςξ ιε οπμηείιεκεξ ηανδζαηέξ ακςιαθίεξ (Lina, Celard et al. 1992; Mainardi, Lortholary et al. 1993; Sandoe, Kerr et al. 1999; Kamalesh and Aslam 2000), ζπάκζα μδδβεί ζε επζπθμηέξ (Lina, Celard et al. 1992; Sandoe, Kerr et al. 1999; Kamalesh and Aslam 2000) ηαζ παναηηδνίγεηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, απυ ηαθή ηθζκζηή έηααζδ ιε ηδ πμνήβδζδ ηαηάθθδθδξ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ Σελίδα 72

73 (Bandres and Darouiche 1992; Lina, Celard et al. 1992; Mainardi, Lortholary et al. 1993; al- Rashdan, Bashir et al. 1998; Breuer, Yinnon et al. 1998; Sandoe, Kerr et al. 1999; Kamalesh and Aslam 2000). Γζαθμνεηζηά είκαζ ηα δεδμιέκα βζα ηδκ εκδμηανδίηζδα ηςκ πνμζεεηζηχκ ααθαίδςκ, βζα ηδκ μπμία έπμοκ δδιμζζεοεεί μηηχ πενζζηαηζηά, ζε πέκηε αζεεκείξ ιε πνμζεεηζηή αμνηζηή ααθαίδα (Nalmas, Bishburg et al. 2008; Takano, Ohtsu et al. 2011), ζε δφμ αζεεκείξ ιε πνμζεεηζηή ιζηνμεζδή ααθαίδα (Terada, Mitsui et al. 1996; Takano, Ohtsu et al. 2011) ηαζ ζε ιία αζεεκή ιε πνμζεεηζηή αμνηζηή ηαζ ιε πνμζεεηζηή ιζηνμεζδή ααθαίδα (Dominguez Rodriguez, Garcia Gonzalez et al. 1999). Οζ εκδμηανδίηζδεξ αοηέξ ανέεδηακ κα ζπεηίγμκηαζ ζοπκυηενα ιε ηδκ ειθάκζζδ ηανδζαηχκ επζπθμηχκ, υπςξ απμηυθθδζδ ή δζάηνδζδ ηςκ πνμζαεαθδιέκςκ ααθαίδςκ ηαζ ζπδιαηζζιυ πενζααθαζδζηχκ απμζηδιάηςκ (Terada, Mitsui et al. 1996; Nalmas, Bishburg et al. 2008; Takano, Ohtsu et al. 2011) ηαζ βζα ηδκ ηαθή ημοξ έηααζδ ήηακ απαναίηδηδ εηηυξ απυ ηαηάθθδθδ ακηζιζηνμαζαηή εεναπεία ηαζ δ άιεζδ πεζνμονβζηή πανέιααζδ (Nalmas, Bishburg et al. 2008; Takano, Ohtsu et al. 2011). Σέθμξ, οπάνπμοκ ζπάκζεξ ακαθμνέξ βζα θμζιχλεζξ ζε ζοζηήιαηα αδιαημδμηχκ (von Eiff, Vaudaux et al. 1999; Cone, Sontz et al. 2005) ηαζ ζε ηανδζαηά ειθοηεφιαηα, πμο πνδζζιμπμζμφκηαζ βζα ηδ δζυνεςζδ ζοββεκχκ ακςιαθζχκ. (Demarie, De Vivo et al. 2011). Δηηυξ απυ ηδκ εκδμηανδίηζδα, μ S. capitis ζοζπεηίγεηαζ ιε πενζπηχζεζξ μζηεμιοεθίηζδαξ (Fukuda, Wada et al. 2010), πνυκζαξ ζβιμνίηζδαξ (Hyo, Yamada et al. 2008), μονμθμίιςλδξ (Leighton and Little 1986), πκεοιμκίαξ, ηοηηανίηζδαξ ηαζ ιδκζββίηζδαξ ζε αζεεκείξ ιε ημζθζμπενζημκασηή επζημζκςκία (Nalmas, Bishburg et al. 2008). Πένα απυ ηζξ θμζιχλεζξ ζημοξ εκήθζηεξ, εοεφκεηαζ ηαζ βζα πενζζηαηζηά υρζιδξ ζήρδξ ζε κεμβκά πμθφ παιδθμφ αάνμοξ βέκκδζδξ, απμηεθχκηαξ ακαδουιεκμ παεμβυκμ βζα ηζξ ακηίζημζπεξ Μμκάδεξ Δκηαηζηήξ Θεναπείαξ (Van Der Zwet, Debets-Ossenkopp et al. 2002; Ng, Chow et al. 2006; D'Mello, Daley et al. 2008). Μάθζζηα, ζφιθςκα ιε πμθφ πνυζθαηα δεδμιέκα απυ ηδ Γαθθία, ζηζξ Μμκάδεξ αοηέξ μ S. capitis θαίκεηαζ κα πνμηαθεί ααηηδνζαιίεξ ζοπκυηενα ζε ζπέζδ ιε ημοξ οπυθμζπμοξ ζηαθοθμηυηημοξ (αθήκμκηαξ δεφηενμ ημκ S. epidermidis ηαζ ηνίημ ημκ S. aureus), ιε πμζμζηυ απμιυκςζδξ απυ εεηζηέξ αζιμηαθθζένβεζεξ πμο θηάκεζ ημ 39,1% (Rasigade, Raulin et al. 2012). ε υ,ηζ αθμνά πζεακμφξ θμζιμβυκμοξ πανάβμκηεξ, μ S. capitis δζαεέηεζ ιζα απμηαναμλοθάζδ βζα ηδ ιεηαηνμπή ηδξ ζζηζδίκδξ ζε ζζηαιίκδ, ιζα μοζία ιε ηεκηνζηυ νυθμ ζηζξ ηνμθζηέξ δδθδηδνζάζεζξ (de las Rivas, Rodriguez et al. 2008). Δπίζδξ, έπεζ ιεθεηδεεί δ πνςηεΐκδ SdrX (serine aspartate repeat proten X), δ μπμία ζοκδέεηαζ ιε ημ ημθθαβυκμ ηφπμο VI ηαζ ακήηεζ Σελίδα 73

74 ζηδκ μζημβέκεζα ηςκ ιζηνμαζαηχκ ιμνίςκ επζθακείαξ πμο ακαβκςνίγμοκ ζοζηαηζηά ηδξ ελςηοηηάνζαξ εειέθζαξ μοζίαξ ηαζ θένμοκ επακαθήρεζξ ζενίκδξ ηαζ αζπανηζημφ ζηδκ αιζκμλζηή ημοξ αημθμοεία (Liu, Ames et al. 2004). ε ζφβηνζζδ ιε άθθμοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ, παιδθυηενα πμζμζηά ζηεθεπχκ S. capitis θαίκεηαζ κα πανάβμοκ ακζπκεφζζια επίπεδα αζμιειανάκδξ, βζα ηδκ πνμζηυθθδζή ημοξ ζηζξ επζθάκεζεξ ηςκ λέκςκ ζςιάηςκ (Needham and Stempsey 1984; Boynukara, Gulhan et al. 2007). Σα δεδμιέκα βζα ημ θαζκυηοπμ εοαζζεδζίαξ ημο είδμοξ ζηα ακηζιζηνμαζαηά πνμένπμκηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, απυ ζηεθέπδ πνμζαεαθδιέκςκ κεμβκχκ ηαζ ηαηαδεζηκφμοκ ορδθά πμζμζηά ακημπήξ ζε πεκζηζθθίκδ, ιεεζηζθθίκδ, βεκηαιζηίκδ ηαζ νζθαιπζηίκδ (Rasigade, Raulin et al. 2012). Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ ζηεθέπδ S. capitis ιε ιεζςιέκδ εοαζζεδζία ζηδκ αακημιοηίκδ ιπμνμφκ κα πανμοζζάζμοκ ηθςκζηή δζαζπμνά ηαζ κα βίκμοκ εκδδιζηά ζηζξ Μμκάδεξ Δκηαηζηήξ Θεναπείαξ Νεμβκχκ (Van Der Zwet, Debets-Ossenkopp et al. 2002; Rasigade, Raulin et al. 2012), εέημκηαξ, έηζζ, ζε ηίκδοκμ ηδκ, ςξ ηχνα, ηαθή πνυβκςζδ ηςκ ακηίζημζπςκ θμζιχλεςκ (Gras-Le Guen, Fournier et al. 2007; D'Mello, Daley et al. 2008). 2.Κ Staphylococcus simulans O S. simulans πενζβνάθδηε βζα πνχηδ θμνά ημ 1975 απυ ημοξ Kloos ηαζ Schleifer ηαζ μθείθεζ ηδκ μκμιαζία ημο ζηζξ μιμζυηδηεξ πμο ηαηέβναρακ μζ ενεοκδηέξ ιε άθθα ημαβημοθάζδ εεηζηά είδδ (simulans ζδιαίκεζ πνμζμιμζάγςκ), ζοιπενζθαιαακμιέκμο ημο πνοζίγμκημξ ζηαθοθμηυηημο. Οζ μιμζυηδηεξ αοηέξ αθμνμφκ ηδ δοκαηυηδηα αενυαζαξ ακάπηολδξ ημο είδμοξ ζημοξ 45 o C ηαζ ακαενυαζαξ ακάπηολδξ ζε διζζηενευ εεζμβθοημθζηυ ιέζμ, ηδκ ακαβςβή ηςκ κζηνζηχκ ηαζ ηδκ αενυαζα παναβςβή μλέμξ απυ D-βθοηυγδ, D-θνμοηηυγδ, D-ιακκυγδ, D- ηνεπαθυγδ, D-ιακκζηυθδ, α-θαηηυγδ ηαζ ζμοηνυγδ (Kloos and Schleifer 1975). Ωξ επί ημ πθείζημκ, μ S. simulans απμιμκχκεηαζ απυ θμζιχλεζξ μζηυζζηςκ γχςκ, υπςξ είκαζ ηα αμμεζδή (Aarestrup, Larsen et al. 1999), μζ βάηεξ (Devriese, Nzuambe et al. 1984) ηαζ μζ ζηφθμζ (Medleau, Long et al. 1986), εκχ βζα ημκ άκενςπμ θαίκεηαζ κα απμηεθεί έκα επζηίκδοκμ, ακ ηαζ ζπάκζμ, παεμβυκμ ιε δοκαιζηυ πμο πνμζμιμζάγεζ αοηυ ηςκ S. aureus ηαζ S. lugdunensis (Sturgess, Martin et al. 1993). Έπεζ, ιάθζζηα, δζαηοπςεεί δ οπυεεζδ υηζ δ επαθή ημο αηυιμο ιε ιμθοζιέκα ή απμζηζζιέκα γχα ή δ ηαηακάθςζδ πνμσυκηςκ πμο πνμένπμκηαζ απυ αοηά, απμηεθμφκ ημκ ηνυπμ Σελίδα 74

75 ιεηάδμζδξ ημο ζοβηεηνζιέκμο ιζηνμμνβακζζιμφ. (Razonable, Lewallen et al. 2001; Vallianou, Evangelopoulos et al. 2008). Ζ ζμαανυηενδ, ίζςξ, θμίιςλδ ιε ηδκ μπμία ζπεηίγεηαζ μ S. simulans είκαζ δ εκδμηανδίηζδα ηςκ θοζζηχκ ααθαίδςκ (McCarthy, Stanley et al. 1991; Jansen, Schumacher- Perdreau et al. 1992; Vallianou, Evangelopoulos et al. 2008), εκχ ζοπκυηενα ακαθένεηαζ ςξ αίηζμ θμζιχλεςκ μζηχκ ηαζ ανενχζεςκ πμο αθμνμφκ, ηαηά ηακυκα, αζεεκείξ ιε μνεμπαζδζηέξ πνμεέζεζξ (Males, Bartholomew et al. 1985; Sturgess, Martin et al. 1993; Razonable, Lewallen et al. 2001; Vallianou, Evangelopoulos et al. 2008; Desideri-Vaillant, Nedelec et al. 2011). Δπίζδξ, ιε επίπηςζδ πμο ηοιαίκεηαζ απυ 0,2% ιέπνζ 5,0% ζημ ζφκμθμ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ, εκέπεηαζ αηυια ηαζ ζε μονμθμζιχλεζξ (Ozturkeri, Kocabeyoglu et al. 1994). Ωξ πζεακμί θμζιμβυκμζ πανάβμκηέξ ημο έπμοκ ηαηαβναθεί δ παναβςβή αζμιειανάκδξ (Males, Bartholomew et al. 1985; Koksal, Yasar et al. 2009), θοζμζηαθίκδξ, θζπάζδξ ηαζ ηνμπμπμζδηζημφ εκγφιμο ηςκ θζπανχκ μλέςκ (Long, Hart et al. 1992) ηαζ δ πανμοζία ηάραξ ιε ακημπή ζηδ θαβμηοηηανζηή δνάζδ ηςκ ακενχπζκςκ πμθοιμνθμπονήκςκ(ohshima, Schumacher- Perdreau et al. 1990). Ακ ηαζ απμοζζάγμοκ απυ ηδ αζαθζμβναθία ιεθέηεξ πάκς ζε ιεβάθεξ ζεζνέξ ζηεθεπχκ ημο είδμοξ, μ S. simulans θαίκεηαζ κα δζαηδνεί ιέπνζ ζήιενα έκακ πμθοεοαίζεδημ θαζκυηοπμ (Mallet, Loiez et al. 2011). 2.Λ Άιια θναγθνπιάζε αξλεηηθά είδε ζηαθπινθόθθωλ κε θιηληθή ζεκαζία Ο S. caprae, πμο ανπζηά ακηζιεηςπίζηδηε απμηθεζζηζηά ςξ γςζηυ είδμξ θυβς ηδξ απμιυκςζήξ ημο απυ αίβεζμ βάθα, απμηεθεί έκα ζπάκζμ ακενχπζκμ παεμβυκμ, πμο ζοκδέεηαζ, ηονίςξ, ιε θμζιχλεζξ μζηχκ ηαζ ανενχζεςκ (Shuttleworth, Behme et al. 1997; Elsner, Dahmen et al. 1998). Δπίζδξ, έπεζ ακαθενεεί ςξ αίηζμ εκδμηανδίηζδαξ, ααηηδνζαζιίαξ ζε αζεεκείξ ιε ηεκηνζημφξ θθεαζημφξ ηαεεηήνεξ, μονμθμίιςλδξ (Vandenesch, Eykyn et al. 1995), αθθά ηαζ ιδκζββίηζδαξ θυβς επζιυθοκζδξ ακηθίαξ πμνήβδζδξ εκδμναπζαίαξ ακαθβδζίαξ (Benedetti, Pellizzer et al. 2008). Ο S. cohnii πςνίγεηαζ ζηα οπμείδδ S. cohnii subsp. cohnii ηαζ S. cohnii subsp. urealyticum, εη ηςκ μπμίςκ ημ πνχημ απμιμκχκεηαζ ιυκμ απυ ημκ άκενςπμ, εκχ ημ δεφηενμ απμιμκχκεηαζ ηυζμ απυ ημκ άκενςπμ, υζμ ηαζ απυ άθθα εδθαζηζηά (Winn, Allen et al. 2006). Ο Σελίδα 75

76 S. cohnii απμηεθεί ιέθμξ ηδξ θοζζμθμβζηήξ πθςνίδαξ ημο δένιαημξ ηαζ έπεζ ηαηαβναθεί ςξ παεμβυκμ ζε πενζζηαηζηά πκεοιμκίαξ ηδξ ημζκυηδηαξ (Mastroianni, Coronado et al. 1995), ζδπηζηήξ ανενίηζδαξ (Mastroianni, Coronado et al. 1996) ηαζ ζδραζιίαξ ζε ακμζμηαηεζηαθιέκμοξ αζεεκείξ (Basaglia, Moras et al. 2003), εκχ έπεζ ζοζπεηζζηεί ηαζ ιε πμνζμαικζμκίηζδα ηαζ κεμβκζηή ιδκζββίηζδα (Kaya, Gamberzade et al. 1996; Sorlin, Maes et al. 1998). Ο S. xylosus ακεονίζηεηαζ θοζζμθμβζηά ζε ςιυ ηνεάξ ηαζ βάθα, εκχ πνδζζιμπμζείηαζ ηαζ ζηδκ ηεπκμθμβία γφιςζδξ ηνμθίιςκ ςξ ηαθθζένβεζα εηηίκδζδξ (Akhaddar, Elouennass et al. 2010). Έπεζ ακαθενεεί ςξ αίηζμ μλείαξ ποεθμκεθνίηζδαξ (Tselenis-Kotsowilis, Koliomichalis et al. 1982), εκδμηανδίηζδαξ ζε πνήζηδ εκδμθθέαζςκ μοζζχκ (Conrad and West 1984), παβηνεαηζηήξ ρεοδμηφζηδξ ζε αζεεκή ιμθοζιέκμ ιε HIV (Mastroianni, Coronado et al. 1994) ηαζ εβηεθαθζημφ απμζηήιαημξ ιεηά απυ μλεία ςηίηζδα (Akhaddar, Elouennass et al. 2010). Ο S. sciuri πενζθαιαάκεζ ηα οπμείδδ S. sciuri subsp. sciuri, S. sciuri subsp. rodentium ηαζ S. sciuri subsp. carnaticus, ηα μπμία ακηζζημζπμφκ ζημ 70%, 23% ηαζ 7% ηςκ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ ημο είδμοξ, ακηίζημζπα (Marsou, Bes et al. 1999). Ο S. sciuri έπεζ ακαθενεεί ςξ αίηζμ θμζιχλεςκ ηναοιάηςκ, θμζιχλεςκ ημο δένιαημξ ηαζ ηςκ ιαθαηχκ ιμνίςκ (Marsou, Bes et al. 1999; Stepanovic, Dakic et al. 2002), μονμθμίιςλδξ (Stepanovic, Jezek et al. 2003), εκδμηανδίηζδαξ (Hedin and Widerstrom 1998) ηαζ πενζημκίηζδαξ ζε αζεεκή οπυ ζοκεπή θμνδηή πενζημκασηή ηάεανζδ (Wallet, Stuit et al. 2000). Σμ ακαενυαζμ είδμξ S. saccharolyticus έπεζ ζοζπεηζζηεί ιε πενζζηαηζηά εκδμηανδίηζδαξ (Westblom, Gorse et al. 1990), πκεοιμκίαξ (Wu, Yu et al. 2009) ηαζ ζπμκδοθμδζζηίηζδαξ (Godreuil, Jean-Pierre et al. 2005). O S. intermedius είκαζ έκα ημαβημοθάζδ εεηζηυ είδμξ γςζηήξ πνμέθεοζδξ, βκςζηυ ηονίςξ βζα ηδ ζοιιεημπή ημο ζε δζεζζδοηζηέξ θμζιχλεζξ ηςκ ζηφθςκ. ημκ άκενςπμ έπεζ ακαθενεεί ςξ αίηζμ θμζιχλεςκ ημο δένιαημξ ηαζ ηςκ ιαθαηχκ ιμνίςκ (ζοκδεέζηενα ιεηά απυ επαθή ιε ιμθοζιέκα γχα), εκδμηανδίηζδαξ, ααηηδνζαζιίαξ, πκεοιμκίαξ, ζβιμνίηζδαξ, ςηίηζδαξ, ιαζημεζδίηζδαξ, εβηεθαθζημφ απμζηήιαημξ ηαζ (θυβς ηδξ παναβςβήξ εκηενμημλζκχκ) ηνμθζηήξ δδθδηδνίαζδξ (Kelesidis and Tsiodras 2010). Σέθμξ, έκα αηυια γςζηυ είδμξ, μ S. hyicus, πμο ααζζηά απμηεθεί ημ αίηζμ ηδξ ελζδνςιαηζηήξ επζδενιίηζδαξ ζημοξ πμίνμοξ, έπεζ ηαηαβναθεί ζημ άκενςπμ ςξ αίηζμ Σελίδα 76

77 ααηηδνζαζιίαξ ηαζ θμίιςλδξ ηναφιαημξ ιεηά απυ επαθή ιε γχα (Osterlund and Nordlund 1997; Casanova, Iselin et al. 2011). 3. Φαηλνηππηθή ηαπηνπνίεζε ηωλ ζηαθπινθόθθωλ Ζ θαζκμηοπζηή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ιπμνεί κα ζηδνζπεεί ζε ιζα πθδεχνα ιμνθμθμβζηχκ, θοζζμθμβζηχκ ηαζ αζμπδιζηχκ παναηηδνζζηζηχκ. Ο αθβυνζειμξ ακαθμνάξ ηςκ Kloos W.E. ηαζ Schleifer K.H., πμο δδιμζζεφεδηε ημ 1975 ηαζ οθίζηακηαζ απυ ηυηε ζοκεπείξ ηνμπμπμζήζεζξ ιε ηδκ πνμζεήηδ κέςκ εζδχκ, είκαζ ελαζνεηζηά πμθφπθμημξ ηαζ πνμκμαυνμξ βζα κα εθανιμζηεί ζηδκ ηαε διένα ενβαζηδνζαηή πνάλδ. Έηζζ, δ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ πμο εεςνμφκηαζ ηθζκζηά ζδιακηζηά επζηοβπάκεηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, ιε δζάθμνα απθμπμζδιέκα αζμπδιζηά πνςηυημθθα ή ζοκδεέζηενα ιε ηάπμζμ απυ ηα διζ- ή πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκα ιζηνμαζμθμβζηά ζοζηήιαηα πμο δζαηίεεκηαζ ζημ ειπυνζμ (Becker and von Eiff 2011). Αζθαθχξ, πνζκ ηδκ εζζαβςβή ημοξ ζηδ δζαβκςζηζηή νμοηίκα ηυζμ ηα απθμπμζδιέκα αζμπδιζηά πνςηυημθθα, υζμ ηαζ ηα αοημιαημπμζδιέκα ζοζηήιαηα μθείθμοκ κα αλζμθμβμφκηαζ εκδεθεπχξ, ζδζαίηενα ςξ πνμξ ηδκ απυδμζή ημοξ βζα ηα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ, ηςκ μπμίςκ δ ηαοημπμίδζδ είκαζ δοζπενέζηενδ ζε ζπέζδ ιε αοηή ημο S. aureus, θυβς ημο ανβμφ ιεηααμθζημφ νοειμφ ημοξ ηαζ ηδξ πμζηζθυιμνθδξ έηθναζδξ ηςκ θαζκμηοπζηχκ παναηηήνςκ ημοξ (Spanu, Sanguinetti et al. 2003; Heikens, Fleer et al. 2005). Σα απμηεθέζιαηα ηδξ αλζυβδζδξ ηςκ πμζηίθςκ αοηχκ θαζκμηοπζηχκ ηεπκζηχκ, επδνεάγμκηαζ ηυζμ απυ ηδ ιεεμδμθμβία ακαθμνάξ, πμο πνδζζιμπμζείηαζ βζα ηδ ζφβηνζζδ ηςκ ηαοημπμζήζεςκ, υζμ ηαζ απυ ημκ ανζειυ ηαζ ηα είδδ ηςκ ζηεθεπχκ πμο ελεηάγμκηαζ, βεβμκυξ ημ μπμίμ πνέπεζ κα θαιαάκεηαζ ζμαανά οπ υρζκ ηαηά ηδκ ελαβςβή ζοιπεναζιάηςκ ςξ πνμξ ηδκ αηνίαεζα ηάεε ιεευδμο (Chatzigeorgiou, Sergentanis et al. 2011). 3.1 Αιγόξηζκνο «αλαθνξάο» Σμ 1975 μζ Kloos W.E. ηαζ Schleifer K.H. δδιμζίεοζακ ημκ πνχημ εηηεηαιέκμ θαζκμηοπζηυ αθβυνζειμ βζα ηδκ ηαοημπμπμίδζδ ηςκ, ιέπνζ ηυηε βκςζηχκ, εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Βάζεζ ημο ζπήιαημξ αοημφ, δ παναβςβή, εθεφεενδξ ηαζ ζοκδεδειέκδξ, ημαβημοθάζδξ ήηακ ανηεηή βζα ηδκ ακίπκεοζδ ημο S. aureus, εκχ δ ακαβκχνζζδ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ ζηδνζγυηακ ζε 19 επζπθέμκ, ιμνθμθμβζηά, θοζζμθμβζηά ηαζ Σελίδα 77

78 αζμπδιζηά παναηηδνζζηζηά ηςκ οπυ ελέηαζδ ζηεθεπχκ (Kloos and Schleifer 1975). Σα πνυκζα πμο αημθμφεδζακ ημκ ανπζηυ ημο ζπεδζαζιυ, ημ πνςηυημθθμ οπέζηδ επακεζθδιιέκεξ ηνμπμπμζήζεζξ, δεδμιέκδξ ηδξ πενζβναθήξ εκυξ μθμέκα αολακυιεκμο ανζειμφ κέςκ εζδχκ. Ζ πθέμκ πνυζθαηδ εηδμπή ημο, πμο ζοιπενζθαιαάκεζ ημ ζφκμθμ ηςκ, ιέπνζ ζήιενα, βκςζηχκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ ζοκζζηά ημκ αθβυνζειμ ακαθμνάξ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ημοξ, ανίζηεηαζ δδιμζζεοιέκδ ζηδκ 10 δ έηδμζδ ημο εβπεζνζδίμο Manual of Clinical Microbiology. φιθςκα ιε ημ επζηαζνμπμζδιέκμ πνςηυημθθμ, δ ηαηάηαλδ εκυξ ζηεθέπμοξ ζε επίπεδμ είδμοξ ηαζ οπμείδμοξ επζηοβπάκεηαζ ιε 36 ζοκμθζηά δμηζιαζίεξ, ηςκ μπμίςκ δ εηηέθεζδ απαζηεί ιέπνζ ηαζ πέκηε διένεξ (Becker and von Eiff 2011). Οζ δμηζιαζίεξ αοηέξ, πμο αθμνμφκ ηδ ιμνθμθμβία, ηζξ θοζζμθμβζηέξ ζδζυηδηεξ, ηζξ εκγοιζηέξ δναζηζηυηδηεξ ηαζ ημοξ αζμπδιζημφξ παναηηήνεξ ημο ζηεθέπμοξ θαίκμκηαζ ακαθοηζηά ζημκ Πίκαηα Απινπνηεκέλνη αιγόξηζκνη ηαπηνπνίεζεο Γεδμιέκμο υηζ μ αθβυνζειμξ «ακαθμνάξ», πμο πενζβνάθδηε πνμδβμοιέκςξ, είκαζ αδφκαημ κα εηηεθείηαζ ζε αάζδ νμοηίκαξ, απθμπμζδιέκα ζπήιαηα ηαοημπμίδζδξ, ιε πενζμνζζιέκμ ανζειυ θαζκμηοπζηχκ δμηζιαζζχκ, πνδζζιμπμζμφκηαζ εκαθθαηηζηά βζα ηα ηθζκζηά ζδιακηζηυηενα είδδ ζηαθοθμηυηηςκ. Οζ δμηζιαζίεξ πμο ζοιπενζθαιαάκμκηαζ ζηα πνςηυημθθα αοηά, επζθέβμκηαζ χζηε κα πναβιαημπμζμφκηαζ ιε εφημθμ ηαζ βνήβμνμ ηνυπμ ηαζ κα μδδβμφκ ζε υζμ ημ δοκαηυκ πζμ πενζμνζζιέκμ ανζειυ ζηεθεπχκ ιε άηοπεξ ακηζδνάζεζξ. Σέημζμο είδμοξ δμηζιαζίεξ είκαζ: α) δ ακημπή ζηδ κμαμαζμηίκδ, πμο πνδζζιμπμείηαζ βζα ηδκ ακαβκχνζζδ ηςκ εζδχκ S. saprophyticus, S. hominis subsp. novobiosepticus, S. cohnii, S. sciuri ηαζ S. xylosus. α) δ δναζηζηυηδηα ηδξ ποννμθζδμκοθ-ανοθαιζδάζδξ πμο ακζπκεφεηαζ ζηα είδδ S. haemolyticus, S. lugdunensis, S. simulans ηαζ S. schleiferi subsp. schleiferi. β) δ δμηζιαζία ηδξ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ πμο είκαζ εεηζηή, εηηυξ απυ ημκ S. aureus, ζημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ S. schleiferi subsp. schleiferi ηαζ S. lugdunensis. δ) δ απμηαναμλοθίςζδ ηδξ μνκζείκδξ, πμο πνδζζιμπμζείηαζ εζδζηά βζα ηδκ ακαβκχνζζδ ημο S. lugdunensis ηαζ Σελίδα 78

79 ε) δ εοαζεδζία ζηδ δεζθεννζμλαιίκδ, πμο είκαζ παναηηδνζζηζηή ηςκ εζδχκ S. epidermidis ηαζ S. hominis ηαζ πνδζζιμπμζείηαζ ηαζ βζα ηδ δζάηνζζδ ημο ηεθεοηαίμο απυ ημκ S. warneri (Ieven, Verhoeven et al. 1995; Monsen, Ronnmark et al. 1998; De Paulis, Predari et al. 2003; Iorio, Ferreira et al. 2007). ηδ ζοκέπεζα παναηίεεκηαζ ηνία παναδείβιαηα απθμπμζδιέκςκ ζπδιάηςκ, πμο ιπμνμφκ κα πνδζζιμπμζδεμφκ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηθζκζηά ζδιακηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ ζε αάζδ νμοηίκαξ, ηαεχξ ηαζ δ αηνίαεζα ηςκ ζπδιάηςκ αοηχκ ζε ζπέζδ ιε ημ θαζκμηοπζηυ αθβυνζειμ «ακαθμνάξ». Σμ πνςηυημθθμ ηςκ Iorio ηαζ ζοκ., ακαβκςνίγεζ 12 είδδ ηαζ μηηχ οπμείδδ (S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. lugdunensis, S schleiferi subsp. schleiferi, S. warneri, S. capitis subsp. capitis, S. capitis subsp. urealyticus, S. hominis subsp. hominis, S. hominis subsp. novobiosepticus, S. saprophyticus subsp. saprophyticus, S. cohnii subsp. cohnii, S. cohnii subsp. urealyticus, S. sciuri ηαζ S. xylosus) ιε ηδ αμήεεζα εκκέα δμηζιαζζχκ (βζα ημκ πανάβμκηα ζοβηυθθδζδξ, ηδκ μονεάζδ, ηδκ αθηαθζηή θςζθαηάζδ, ηδκ παναβςβή μλέμξ απυ D-ιακκυγδ, D- ηνεπαθυγδ ηαζ D-λοθυγδ ηαζ ηδκ ακημπή ζηδ κμαμαζμηίκδ ηαζ ηδ δεζθεννζμλαιίκδ), πμο απαζημφκ έςξ ηαζ 72 χνεξ βζα κα μθμηθδνςεμφκ. Ζ αηνίαεζα ημο ζπήιαημξ ακαθένεηαζ υηζ θεάκεζ ημ 98,5% (Iorio, Ferreira et al. 2007). Ο αθβυνζειμξ πμο αημθμοεείηαζ θαίκεηαζ ζηδκ Δζηυκα 4. Σμ επυιεκμ ζπήια πμο αλίγεζ κα ακαθενεεί είκαζ αοηυ ηςκ Ieven ηαζ ζοκ. Σμ ζπήια πενζθαιαάκεζ ηα μηηχ ζδιακηζηυηενα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ (S. epidermidis, S. haemolyticus, S. saprophyticus, S. lugdunensis, S. schleiferi, S. hominis, S. capitis, S. warneri), βζα ηα μπμία απαζημφκηαζ ιυκμ επηά δμηζιαζίεξ (παναβςβή μλέμξ απυ D-ηνεπαθυγδ, δναζηζηυηδηεξ μονεάζδξ, αθηαθζηήξ θςζθαηάζδξ ηαζ απμηαναμλοθάζδξ ηδξ μνκζείκδξ, ακημπή ζηδ κμαμαζμηίκδ ηαζ ηδ θςζθμιοηίκδ ηαζ ακαενυαζα ακάπηολδ) πμο πναβιαημπμζμφκηαζ ζε δφμ ζηάδζα. Οζ εκγοιζηέξ δναζηζηυηδηεξ ηδξ μονεάζδξ ηαζ ηδξ αθηαθζηήξ θςζθαηάζδξ, ηαεχξ ηαζ δ παναβςβή μλέμξ απυ D-ηνεπαθυγδ, πμο απμηεθμφκ ημ πνχημ αήια ημο αθβμνίειμο, ιπμνμφκ κα ελεηαζημφκ ιε ηαπείεξ δμηζιαζίεξ ηεζζάνςκ ςνχκ ηαζ ανημφκ βζα κα ηαοημπμζήζμοκ ημ 81,3% ηςκ ζηεθεπχκ. Μία ή δφμ επζπθέμκ δμηζιαζίεξ απαζημφκηαζ βζα ηα οπυθμζπα ζηεθέπδ, παναηείκμκηαξ ημ πνυκμ ηδξ ηαοημπμίδζδξ ζηζξ 24 χνεξ ηαζ ακεαάγμκηαξ ηδ ζοκμθζηή αηνίαεζα ημο πνςημηυθθμο ζε ζπέζδ ιε ημκ αθβυνζειμ «ακαθμνάξ» ζημ 97,7% (Ieven, Verhoeven et al. Σελίδα 79

80 1995). Οζ δμηζιαζίεξ ημο αθβμνίειμο ηαζ ηα ακαιεκυιεκα απμηεθέζιαηα ακά είδμξ θαίκμκηαζ ζημκ Πίκαηα 2. Σέθμξ, ημ ζπήια ηςκ de Paulis ηαζ ζοκ. πενζθαιαάκεζ πέκηε ιυκμ δμηζιαζίεξ (ακημπή ζηδ κμαμαζμηίκδ, παναβςβή μλέμξ απυ D-ιακκυγδ ηαζ δναζηζηυηδηεξ μονεάζδξ, ποννμθζδμκοθανοθαιζδάζδξ ηαζ απμηαναμλοθάζδξ ηδξ μνκζείκδξ) βζα ηδκ πνμηαηανηηζηή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζδιακηζηυηενςκ εζδχκ ή μιάδςκ εζδχκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ. οβηεηνζιέκα, ακαβκςνίγεζ ηδκ μιάδα ημο S. epidermidis (πμο πενζθαιαάκεζ ηα είδδ S. epidermidis, S. capitis subsp. ureolyticus ηαζ S. caprae), ηδκ μιάδα ημο S. haemolyticus (πμο πενζθαιαάκεζ ηα είδδ S. haemolyticus, S. auricularis ηαζ S. casseolyticus), ηδκ μιάδα ημο S. saprophyticus (πμο πενζθαιαάκεζ ηα είδδ S. saprophyticus subsp. saprophyticus, ηαζ S. hominis subsp. novobiosepticus), ηδκ μιάδα ημο S. warneri (πμο πενζθαιαάκεζ ηα είδδ S. warneri ηαζ S. hominis subsp. hominis), ηδκ μιάδα ημο S. cohnii (πμο πενζθαιαάκεζ ηα είδδ S. xylosus ηαζ S. cohnii subsp. urealyticum) ηαζ ηα είδδ S. lugdunensis, S. schleiferi subsp. schleiferi, S. capitis subsp. capitis, S. simulans ηαζ S. cohnii subsp. cohnii. Ζ δζάηνζζδ ηςκ εζδχκ ηδξ ίδζαξ μιάδαξ απαζηεί ιία ή δφμ ζοιπθδνςιαηζηέξ δμηζιαζίεξ (ηδκ παναβςβή μλέμξ απυ D-ηνεπαθυγδ ηαζ D- ιακκζηυθδ βζα ηδκ μιάδα ημο S. epidermidis, ηδκ παναβςβή αηεημΐκδξ ηαζ ηδκ παναβςβή μλέμξ απυ α-θαηηυγδ βζα ηδκ μιάδα ημο S. haemolyticus, ηδκ παναβςβή μλέμξ απυ D-ηνεπαθυγδ βζα ηδκ μιάδα ημο S. saprophyticus, ηδ δναζηζηυηδηα α-βθοημζζδάζδξ ή/ηαζ ηδκ ακαενυαζα ακάπηολδ βζα ηδκ μιάδα ημο S. warneri ηαζ ηδκ παναβςβή μλέμξ απυ D-λοθυγδ βζα ηδκ μιάδα ημο S. cohnii), ιε ημ πνυκμ ηδξ μνζζηζηήξ ηαοημπμίδζδξ κα θεάκεζ ιέπνζ ηαζ ηζξ 72 χνεξ ηαζ ηδκ αηνίαεζα ημο πνςημηυθθμο κα ακένπεηαζ ζημ 97,5% (De Paulis, Predari et al. 2003). Οζ δμηζιαζίεξ πμο πενζθαιαάκμκηαζ ζημκ αθβυνζειμ ηαζ ηα ακαιεκυιεκα απμηεθέζιαηα ακά μιάδα εζδχκ θαίκμκηαζ ζημκ Πίκαηα Δκπνξηθά δηαζέζηκα ζπζηήκαηα ηαπηνπνίεζεο ηα ζφβπνμκα δζαβκςζηζηά ενβαζηήνζα νμοηίκαξ δ ηαοημπμίδζδ ηςκ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ πναβιαημπμζείηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, ιε πμζηίθα, διζ- ηαζ πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκα, ειπμνζηά δζαεέζζια ιζηνμαζμθμβζηά ζοζηήιαηα. οβηνζηζηά ιε ηδ πεζνμηίκδηδ εηηέθεζδ ηςκ θαζκμηοπζηχκ αθβμνίειςκ, πμο ακαθένεδηακ πνμδβμοιέκςξ, ηα ζοζηήιαηα αοηά ελαζθαθίγμοκ ηδκ ηαπφηδηα ηςκ πανεπυιεκςκ απμηεθεζιάηςκ, εκχ δ πνήζδ Σελίδα 80

81 ημοξ πναβιαημπμζείηαζ ιε έκακ αοζηδνά πνμηοπμπμζδιέκμ ηαζ εφημθμ ηνυπμ (Becker and von Eiff 2011). ε ηάεε ηέημζμ ζφζηδια, δ ηαοημπμίδζδ εκυξ ζηεθέπμοξ ζε επίπεδμ είδμοξ ζηδνίγεηαζ ζε έκα ζφκμθμ, πνμζεηηζηά επζθεβιέκςκ οπμζηνςιάηςκ, μζ ακηζδνάζεζξ ηςκ μπμίςκ ηαεμνίγμοκ ημ ιεηααμθζηυ πνμθίθ ημο ζηεθέπμοξ, πμο ζηδ ζοκέπεζα ζοβηνίκεηαζ ιε ηδ αάζδ δεδμιέκςκ ηδξ ηαηαζηεοάζηνζαξ εηαζνείαξ. Κάπμζεξ δμηζιαζίεξ εηηεθμφκηαζ ιε απθή ακίπκεοζδ ηδξ εμθενυηδηαξ, πμο πνμηφπηεζ απυ ηδκ ακάπηολδ ημο ιζηνμμνβακζζιμφ πανμοζία ζοβηεηνζιέκςκ οπμζηνςιάηςκ. Άθθεξ δμηζιαζίεξ απαζημφκ ηδκ πνμζεήηδ (πνςιμβυκςκ ή θεμνζζιμβυκςκ) δεζηηχκ, μζ μπμίμζ ιεηααάθθμκηαζ ηαηά ηδ πνήζδ ή ηδκ εκγοιζηή οδνυθοζδ ηαηάθθδθςκ οπμζηνςιάηςκ απυ ημ ααηηήνζμ, θυβς αθθαβήξ ημο ph ή απεθεοεένςζδξ πνςιμβυκςκ ή θεμνζζιμβυκςκ παναβχβςκ, ακηίζημζπα. Σα ιζηνμαζμθμβζηά ζοζηήιαηα ηαοημπμίδζδξ δζαηνίκμκηαζ ζε διζ- ηαζ πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκα, ακάθμβα ιε ημ ακ μ πνήζηδξ ειπθέηεηαζ ή υπζ ζηδκ ακάβκςζδ ηαζ ηδκ ενιδκεία ηςκ απμηεθεζιάηςκ (Petti, Weinstein et al. 2011). Σμ πνμσυκ ΑPI Staph ηδξ εηαζνείαξ biomérieux ακηζπνμζςπεφεζ έκα απυ ηα δδιμθζθέζηενα διζ-αοημιαημπμζδιέκα ζοζηήιαηα ηαοημπμίδζδξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, εζημζζηεηνάςνδξ επχαζδξ. Πενζθαιαάκεζ 19 αζμπδιζηέξ δμηζιαζίεξ, μζ μπμίεξ εηηεθμφκηαζ ζε ιζηνμζςθδκίζημοξ ιε αθοδαηςιέκα αζμπδιζηά οπμζηνχιαηα, βζα ηδκ ακαζφζηαζδ ηςκ μπμίςκ πνδζζιμπμζείηαζ ηαηάθθδθμ εκαζχνδια ημο οπυ ελέηαζδ ζηεθέπμοξ. Μεηά ηδκ ακάβκςζδ ηςκ ακηζδνάζεςκ, αημθμοεεί ααειμθυβδζδ ηςκ απμηεθεζιάηςκ ημοξ ηαζ ελαβςβή εκυξ επηαρήθζμο ηςδζημφ, μ μπμίμξ ζοβηνίκεηαζ ιε ημοξ ηςδζημφξ ηδξ αάζδξ δεδμιέκςκ ημο ζοζηήιαημξ βζα ημκ ηαεμνζζιυ ηδξ ηαοημπμίδζδξ ημο ζηεθέπμοξ. Ζ αάζδ δεδμιέκςκ ημο API Staph πενζθαιαάκεζ ζοκμθζηά 25 είδδ ηςκ βεκχκ Staphylococcus ηαζ Micrococcus, ηαεχξ ηαζ ηδ Rothia mucilaginosa (Winn, Allen et al. 2006) ηαζ δ απυδμζή ημο, ζε ζφβηνζζδ ιε ημκ αθβυνζειμ ακαθμνάξ ηςκ Kloos W.E. ηαζ Schleifer K.H., βζα ημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ θεάκεζ ζοκμθζηά ημ 74%, ιε ηα ζδιακηζηυηενα είδδ. S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis ηαζ S. saprophyticus κα ηαοημπμζμφκηαζ επζηοπχξ ζε πμζμζηά 94%, 85%, 76% ηαζ 50%, ακηίζημζπα (Perl, Rhomberg et al. 1994). Πανυιμζμ πνμσυκ (απυ πθεονάξ ζπεδζαζιμφ ηαζ πνυκμο επχαζδξ) ιε ημ API Staph είκαζ ηαζ ημ ζφζηδια ID32 Staph ηδξ ίδζαξ εηαζνείαξ, πμο πενζθαιαάκεζ 26 αζμπδιζηέξ δμηζιαζίεξ ηαζ ηαοημπμζεί ηo ζφκμθμ ζπεδυκ ηςκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ, πμο ζπεηίγμκηαζ ιε θμζιχλεζξ ημο ακενχπμο (εηηυξ ημο S. saccharolyticus), έλζ είδδ ημο βέκμοξ Micrococcus ηαζ ηδ R. mucilaginosa. Με ημ ID32 Staph δ ακάβκςζδ ηςκ απμηεθεζιάηςκ ιπμνεί κα βίκεζ, υπζ ιυκμ Σελίδα 81

82 πεζνμηίκδηα, αθθά ηαζ αοηυιαηα πάνδ ζηδκ πθαηθυνια biomérieux ATB system, πμο ημ ζοκμδεφεζ (Winn, Allen et al. 2006). Ζ απυδμζδ ημο ζοζηήιαημξ, ζε ζπέζδ ιε ημκ αθβυνζειμ ακαθμνάξ, ηοιαίκεηαζ απυ 80% έςξ ηαζ 95% ζοκμθζηά βζα ημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ ηαζ θεάκεζ αηυια ηαζ ημ 100% βζα ηα είδδ S. haemolyticus, S. lugdunensis ηαζ S. saprophyticus (Ieven, Verhoeven et al. 1995; Renneberg, Rieneck et al. 1995). Ζ πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκδ πθαηθυνια, πμο δζαηίεεηαζ απυ ηδκ εηαζνεία biomérieux, βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ (ηαζ ημκ ηαοηυπνμκμ έθεβπμ εοαζζεδζίαξ) ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ είκαζ ημ ζφζηδια Vitek 2. Σμ ιμκαδζηυ αήια πμο εηηεθείηαζ απυ ημ πνήζηδ είκαζ δ παναζηεοή ηαεμνζζιέκμο εκαζςνήιαημξ ημο οπυ ελέηαζδ ζηεθέπμοξ, ημ μπμίμ εκμθεαθιίγεηαζ, ιε πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκμ ηνυπμ, ζηδκ ηάνηα πμο πνμμνίγεηαζ βζα ημοξ gram εεηζημφξ ηυηημοξ. Αημθμοεεί επχαζδ ηδξ ηάνηαξ ζηδ εενιμηναζία ηςκ 35 μ C ημο μνβάκμο, ηαηά ηδ δζάνηεζα ηδξ μπμίαξ έκα εκζςιαηςιέκμ μπηζηυ ζφζηδια θαιαάκεζ πενζμδζηέξ ιεηνήζεζξ ηςκ (43 ζοκμθζηά) ακηζδνάζεςκ πμο ανίζημκηαζ ζε ελέθζλδ. Ζ επελενβαζία ηςκ παναβυιεκςκ απμηεθεζιάηςκ βζα ημκ ηαεμνζζιυ ηδξ ηαοημπμίδζδξ ημο ζηεθέπμοξ, επζηοβπάκεηαζ, ιέζς πμθφπθμηςκ αθβμνίειςκ, ιε ημ θμβζζιζηυ πμο ζοκμδεφεζ ημ ζφζηδια. Σμ Vitek 2, ιε ηδ κέα πνςιαημιεηνζηή ηάνηα ID-GP βζα ημοξ gram εεηζημφξ ηυηημοξ, ηαοημπμζεί 25 είδδ ζηαθοθμηυηηςκ εκηυξ δέηα, πενίπμο, ςνχκ (biomérieux). Βάζεζ ηδξ ιεηα-ακάθοζδξ υθςκ ηςκ ιεθεηχκ αλζμθυβδζδξ ημο ζοζηήιαημξ (πμο πναβιαημπμζήεδηακ είηε ιε θαζκμηοπζηέξ, είηε ιε ιμνζαηέξ ιεευδμοξ ακαθμνάξ), δ αηνίαεζά ημο ζε επίπεδμ είδμοξ οπμθμβίγεηαζ πενίπμο ζημ 98% βζα ημκ S. aureus ηαζ ζημ 92% βζα ημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ (Chatzigeorgiou, Sergentanis et al. 2011). Δηηυξ απυ ηδκ biomérieux, δ εηαζνεία Becton Dickinson δζαεέηεζ ζημ ειπυνζμ ακηίζημζπδ διζ-αοημιαημπμζδιέκδ ιζηνμιέεμδμ ηαοημπμίδζδξ ζηαθοθμηυηηςκ, ημ BBL Crystal Gram Positive ID Kit. Σμ ζφζηδια αοηυ πνδζζιμπμζεί πάκεθ ιε πδβαδάηζα, ιέζα ζηα μπμία πενζέπμκηαζ αθοδαηςιέκα οπμζηνχιαηα βζα ηδκ εηηέθεζδ 29 αζμπδιζηχκ ηαζ εκγοιζηχκ δμηζιαζζχκ. Ο εκμθεαθιζζιυξ ηάεε πάκεθ βίκεηαζ ιε ηαηάθθδθα παναζηεοαζιέκμ εκαζχνδια ημο οπυ ελέηαζδ ζηεθέπμοξ ηαζ αημθμοεεί επχαζδ βζα 18 έςξ 24 χνεξ ζημοξ 35 o C ιε 37 o C. H ακάβκςζδ ηαζ ενιδκεία ηςκ απμηεθεζιάηςκ βίκμκηαζ είηε πεζνμηίκδηα, είηε αοηυιαηα ιε ηδ αμήεεζα ημο BBL Crystal AutoReader. Σμ ζφζηδια ηαοημπμζεί ζοκμθζηά 25 είδδ ζηαθοθμηυηηςκ, ακ ηαζ δ αηνίαεζά ημο, ζε ζπέζδ ιε ηδκ ακάθοζδ πμθοιμνθζζιμφ ιήημοξ ηιδιάηςκ πενζμνζζιμφ (restriction fragment length polymorphism, RFLP) ημο βμκζδίμο tuf, είκαζ παιδθυηενδ ημο 50% βζα ηα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά ζηεθέπδ (Alexopoulou, Foka et al. 2006). Σελίδα 82

83 Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ηοηθμθμνμφκ ηαζ πάκεθ ηαπείαξ ηαοημπμίδζδξ (BBL Crystal Rapid Gram Positive ID Kit), ιε ηα μπμία ακαβκςνίγμκηαζ 14 είδδ ζηαθοθμηυηηςκ, εκηυξ ηεζζάνςκ, ιυκμ, ςνχκ (Becton Dickinson). Σμ πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκμ ζφζηδια πμο πνμςεεί δ Becton Dickinson είκαζ ημ Phoenix 100, ημ μπμίμ δζαεέηεζ πανυιμζα θεζημονβία ηαζ απυδμζδ ιε ημ Vitek 2. Tα πάκεθ ημο Phoenix, πμο πνμμνίγμκηαζ βζα ημοξ gram εεηζημφξ ηυηημοξ, ηαοημπμζμφκ ημ ζφκμθμ ηςκ βκςζηχκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ (εηηυξ ηςκ S. nepalensis, S. pettenkoferi, S. pseudointermedius ηαζ S. simiae) ζε έκα ιέβζζημ δζάζηδια 16 ςνχκ (Becton Dickinson). Όπςξ πνμηφπηεζ απυ ηδ ιεηα-ακάθοζδ υθςκ ηςκ ιεθεηχκ αλζμθυβδζδξ ημο Phoenix, ηυζμ ζε ζφβηνζζδ ιε θαζκμηοπζηέξ, υζμ ηαζ ιε ιμνζαηέξ ιεευδμοξ ακαθμνάξ, δ αηνίαεζά ημο ζε επίπεδμ είδμοξ οπμθμβίγεηαζ ζπεδυκ ζημ 100% βζα ημκ S. aureus ηαζ ζημ 88,5% βζα ημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ (Chatzigeorgiou, Sergentanis et al. 2011). Λζβυηενμ δζαδμιέκα ζοζηήιαηα βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, πμο δεκ έπμοκ αλζμθμβδεεί επανηχξ ζηδ αζαθζμβναθία, είκαζ ημ πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκμ MicroScan Walk/Away ηδξ εηαζνείαξ Siemens, ημ μπμίμ θεζημονβεί ιε «ζοιααηζηά» (μθμκφηηζαξ επχαζδξ) ηαζ «ηαπέα» (δίςνδξ επχαζδξ) πάκεθ ηαζ ακαβκςνίγεζ ζοκμθζηά 19 είδδ. Δπίζδξ, ηα ζοζηήιαηα Biolog ηδξ μιχκοιδξ εηαζνείαξ ηαοημπμζμφκ 34 είδδ ζηαθοθμηυηηςκ εκηυξ ηεζζάνςκ πενίπμο ςνχκ ηαζ είκαζ δζαεέζζια ςξ πενζζζυηενμ ή θζβυηενμ αοημιαημπμζδιέκεξ πθαηθυνιεξ. Σέθμξ, ημ ζφζηδια Sherlock Microbial Identification System ηδξ εηαζνείαξ MIDI ακζπκεφεζ 30 είδδ ζηαθοθμηυηηςκ ζε θζβυηενμ απυ 15 min, πνδζζιμπμζχκηαξ ορδθήξ ακάθοζδξ αένζα πνςιαημβναθία ηςκ ηοηηανζηχκ θζπανχκ μλέςκ (Becker and von Eiff 2011). 3.4 Φαζκαηνκεηξία κάδαο Ζ θαζιαημιεηνία ιάγαξ είκαζ ιία βεκζηή ιέεμδμξ βζα ημκ πμζμηζηυ ηαζ πμζμηζηυ πνμζδζμνζζιυ ηςκ πδιζηχκ εκχζεςκ, πμο ααζίγεηαζ ζηδκ παναβςβή δέζιδξ ζμκηζηχκ εναοζιάηςκ ιεηά απυ αμιαανδζζιυ ηςκ ελεηαγυιεκςκ ιμνίςκ ιε δθεηηνυκζα ορδθήξ εκένβεζαξ. Σα παναβυιεκα εναφζιαηα, ζηδ ζοκέπεζα, δζαπςνίγμκηαζ ιε εθανιμβή δθεηηνζημφ ή/ηαζ ιαβκδηζημφ πεδίμο ηαζ μ δζαπςνζζιυξ ημοξ ααζίγεηαζ ζημ δζαθμνεηζηυ θυβμ ιάγαξ πνμξ θμνηίμ ηάεε ζμκηζημφ εναφζιαημξ. Ζ ακίπκεοζδ ηαζ ακάθοζδ ημο θάζιαημξ ιάγαξ πμο πνμηφπηεζ βζα ημ οπυ ελέηαζδ ιυνζμ μδδβεί ηεθζηά ζηδκ ηαοημπμίδζδ ημο ιμνίμο αοημφ. Μζα απυ ηζξ παναθθαβέξ Σελίδα 83

84 ηδξ θαζιαημιεηνίαξ ιάγαξ, ελαζνεηζηά δζαδμιέκδ ζηδκ ακάθοζδ ηςκ πνςηεσκχκ, πνδζζιμπμζεί ζμκζζιυ εηνυθδζδξ ιε ηδ αμήεεζα πδιζημφ οπμζηνχιαημξ-ιήηναξ ηαζ ζηδνίγεηαζ ζε ακαθοηή πνυκμο πηήζδξ βζα ημ δζαπςνζζιυ ηςκ ζμκηζηχκ εναοζιάηςκ, οπμθμβίγμκηαξ ηδκ ηαπφηδηά ημοξ (matrix-assisted laser desorption/ionization ηtime-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF- MS). Ζ εθανιμβή αοηή πνδζζιμπμζείηαζ ήδδ απυ ημ 1975 ζημκ ημιέα ηδξ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ, βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ααηηδνίςκ αάζεζ ημο πενζεπμιέκμο ημοξ ζε, επζθακεζαηέξ ηαζ νζαμζςιζηέξ ηονίςξ, πνςηεΐκεξ, ιε ηδ πνήζδ αάζεςκ δεδμιέκςκ πμο πενζέπμοκ θάζιαηα βζα ηα πενζζζυηενα gram εεηζηά ηαζ gram ανκδηζηά είδδ (Croxatto, Prod'hom et al. 2012; Wieser, Schneider et al. 2012). Ανηεημί ενεοκδηέξ έπμοκ αλζμθμβήζεζ ηδκ απυδμζή ηδξ βζα ημοξ ζηαθοθμηυηημοξ, ηαηαθήβμκηαξ ζε ελαζνεηζηά εκεαννοκηζηά, ιέπνζξ ζηζβιήξ, απμηεθέζιαηα. Ο S. aureus ηαζ ιε αοηή ηδ ιέεμδμ ακαβκςνίγεηαζ άνζζηα (Dubois, Leyssene et al. 2010; Bergeron, Dauwalder et al. 2011; Spanu, De Carolis et al. 2011), εκχ ημ πμζμζηυ ζςζηήξ ηαοημπμίδζδξ βζα ηα ηθζκζηά ζηεθέπδ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ οπμθμβίγεηαζ ζε 100% (Carpaij, Willems et al. 2011), 99,1% (Spanu, De Carolis et al. 2011) ηαζ 97,4% (Dupont, Sivadon-Tardy et al. 2010) ζε ζφβηνζζδ ιε ημ ιμνζαηυ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ηςκ βμκζδίςκ tuf, rpob ηαζ sodα ηςκ ζηεθεπχκ αοηχκ, ακηίζημζπα. 4. Μνξηαθή ηαπηνπνίεζε ηωλ ζηαθπινθόθθωλ Γεδμιέκδξ ηδξ πμθοπθμηυηδηαξ ημο αθβμνίειμο «ακαθμνάξ» ηςκ Kloos W.E. ηαζ Schleifer K.H., αθθά ηαζ ηδξ πνμαθδιαηζηήξ ακίπκεοζδξ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ ιε ηζξ οπυθμζπεξ ζοιααηζηέξ ιεεμδμθμβίεξ, ηα ζφβπνμκα Μζηνμαζμθμβζηά Δνβαζηήνζα ζηδνίγμκηαζ, μθμέκα ηαζ πενζζζυηενμ, ζε βμκμηοπζηέξ ηεπκζηέξ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ηθζκζηά ζδιακηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Οζ ηεπκζηέξ αοηέξ ηαηαθαιαάκμοκ έκα εονφ θάζια εθανιμβχκ, πμο εηηείκεηαζ απυ ηδκ απθή PCR ιέπνζ ηαζ ηδκ ηεπκμθμβία ηςκ ιζηνμζοζημζπζχκ ηαζ ημ ααζζηυ ημοξ πθεμκέηηδια είκαζ δ αηνίαεζα ηαζ δ ηαπφηδηα ηςκ παναβυιεκςκ απμηεθεζιάηςκ. Ακάθμβα ιε ημ δζαεέζζιμ ελμπθζζιυ, ηδκ ηαηάνηζζδ ημο πνμζςπζημφ ηαζ ηζξ μζημκμιζηέξ ημο δοκαηυηδηεξ, ηάεε Δνβαζηήνζμ ιπμνεί κα επζθέλεζ ηδκ ηαηαθθδθυηενδ ιεεμδμθμβία βζα ηδκ ακαβκχνζζδ ηςκ ηθζκζηά ζδιακηζηυηενςκ εζδχκ (Winn, Allen et al. 2006). ηζξ εκυηδηεξ πμο αημθμοεμφκ βίκεηαζ ζοκμπηζηή ακαθμνά ζηζξ ζοπκυηενα πνδζζιμπμζμφιεκεξ ιμνζαηέξ ηεπκζηέξ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, μζ μπμίεξ πενζθαιαάκμοκ ημκ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ, ηδκ RFLP Σελίδα 84

85 ακάθοζδ (ζοιπενζθαιαακμιέκδξ ηαζ ηδξ νζαμηοπίαξ) ηαζ ημκ πμθθαπθαζζαζιυ ιε PCR (απθή ή πναβιαηζημφ πνυκμο) βμκζδίςκ-ζηυπςκ, πμο επζηνέπμοκ ημ δζαπςνζζιυ ηςκ εζδχκ. 4.1 Πξνζδηνξηζκόο ηεο αιιεινπρίαο γνληδίωλ-ζηόρωλ (sequencing) Ζ ζδιακηζηυηενδ ιμνζαηή ιέεμδμξ ηαοημπμίδζδξ παεμβυκςκ ιζηνμμνβακζζιχκ, ιεηαλφ ηςκ μπμίςκ ζοιπενζθαιαάκμκηαζ ηαζ μζ ζηαθοθυημηημζ, είκαζ, ακαιθίαμθα, μ πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ επζθεβιέκςκ βμκζδίςκ, πμο, ζοκήεςξ. απμηεθμφκ δμιζηά ζοζηαηζηά ημο πνμηανοςηζημφ βμκζδζχιαημξ. ηα ζφβπνμκα ενβαζηήνζα, ιεηά ημκ ανπζηυ πμθθαπθαζζαζιυ (μθυηθδνμο ή ηιήιαημξ) ημο βμκζδίμο-ζηυπμο (ιε αθοζζδςηή ακηίδναζδ πμθοιενάζδξ), μ πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο βίκεηαζ ιε πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκμοξ ακαθοηέξ, ζημοξ μπμίμοξ εθανιυγεηαζ δ ιέεμδμξ ηαηά Sanger. Πνυηεζηαζ βζα ιζα εκγοιζηή ηεπκζηή, ζηδκ μπμία ημ πνμξ ελέηαζδ ηιήια ημο DNA πνδζζιεφεζ ςξ εηιαβείμ βζα ηδ ζφκεεζδ ακηζβνάθςκ, ιε δμιζημφξ θίεμοξ, υπζ ιυκμ ηα ζοκδεζζιέκα ηνζθςζθμνζηά δεμλοκμοηθεμζίδζα (deoxynucleoside triphosphates, dntps), αθθά ηαζ ηα δζδευλο- ακάθμβά ημοξ (dideoxynucleoside triphosphates, ddntps). Σα ηεθεοηαία θένμοκ οδνμβυκμ ακηί οδνμλοθίμο ζηδ εέζδ 3' ηδξ δεμλονζαυγδξ ηαζ δ εκζςιάηςζή ημοξ ζηδ κεμζοκηζεέιεκδ αθοζίδα ειπμδίγεζ ηδκ πεναζηένς επζιήηοκζή ηδξ, ηαεχξ δεκ είκαζ δοκαηυξ μ ζπδιαηζζιυξ ημο επυιεκμο θςζθμδζεζηενζημφ δεζιμφ. Γζα ηδκ εηηέθεζδ ηδξ ιεευδμο, απαζηείηαζ δ πνήζδ εκυξ ζοκεεηζημφ μθζβμκμοηθεμηζδίμο, ζοιπθδνςιαηζημφ ημο ανπζημφ ηιήιαημξ ηδξ οπυ ελέηαζδ αθθδθμοπίαξ, ημ μπμίμ δνα ςξ εηηζκδηήξ (primer). ε έκα ιίβια ηδξ ακηίδναζδξ πμο πενζέπεζ ηαζ ηα ηέζζενα dntps (datp, dttp, dctp, dgtp), πνμζηίεεηαζ ιζηνή ηαζ ζοβηεηνζιέκδ πμζυηδηα εκυξ, ζδιαζιέκμο ιε θεμνίγμκ, ζοκήεςξ, ιυνζμ, ddntp (ddασp, ddttp, ddctp ή ddgtp). Πναβιαημπμζμφκηαζ ηαοηυπνμκα ηέζζενζξ δζαθμνεηζηέξ ακηζδνάζεζξ ακηζβναθήξ, ιία βζα ηάεε ddntp. ε ηάεε ακηίδναζδ, ηαηά ημκ πμθοιενζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ, ημ εηάζημηε δζδεμλοκμοηθεμζίδζμ ακηαβςκίγεηαζ, βζα ηζξ ηαηάθθδθεξ εέζεζξ εκζςιάηςζδξ, ιε ημ θοζζμθμβζηυ ακάθμβυ ημο, ιε απμηέθεζια εκίμηε κα εκζςιαηχκεηαζ ζηδκ αθοζίδα, επζθένμκηαξ θήλδ ημο πμθοιενζζιμφ. Πνμηφπημοκ, έηζζ, ηέζζενα ιίβιαηα απυ ζδιαζιέκεξ αθοζίδεξ, πμο ηεθεζχκμοκ ιε έκα ddntp ζημ 3' άηνμ ημοξ, ηα ιήηδ ηςκ μπμίςκ ελανηχκηαζ απυ ηδ ζπεηζηή εέζδ ηδξ ζοβηεηνζιέκδξ αάζδξ απυ ημ άηνμ ημο DNA ηαζ ακάθμβα ιε ηδκ ακηίδναζδ θήβμοκ ζε αδεκίκδ (Α), εοιίκδ (Σ), βμοακίκδ (G) ή ηοημζίκδ (C). Σα ιίβιαηα δθεηηνμθμνμφκηαζ ζε Σελίδα 85

86 πήηηςια πμθοαηνοθαιίδδξ, υπμο βίκεηαζ δζαπςνζζιυξ ηςκ αθοζίδςκ αάζεζ ημο ιήημοξ ημοξ. Σμ απμηέθεζια ηδξ ιεευδμο είκαζ ιζα ζφκεεζδ ηςκ θεμνζγυκηςκ ζδιάηςκ ηαζ απυ ηζξ ηέζζενζξ ακηζδνάζεζξ, δ μπμία απμδίδεηαζ ςξ πνςιαημβνάθδια (chromatogram), υπμο ημ ηάεε κμοηθεμηίδζμ ακηζζημζπεί ζε ιζα ημνοθή ηαζ ειθακίγεηαζ ιε δζαθμνεηζηυ πνχια. Μεηά ημκ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο βμκζδίμο-ζηυπμο, δ ηαοημπμίδζδ ημο ααηηδνίμο, ζε επίπεδμ βέκμοξ ηαζ είδμοξ, πναβιαημπμζείηαζ ιε ζφβηνζζδ ηδξ αθθδθμοπίαξ αοηήξ, ιέζς ηαηάθθδθςκ θμβζζιζηχκ ζημίπζζδξ, ιε ηζξ, ιέπνζ ζήιενα, βκςζηέξ αθθδθμοπίεξ, πμο ανίζημκηαζ απμεδηεοιέκεξ ζηζξ ηνάπεγεξ βεκεηζηχκ δεδμιέκςκ, ιε ηονζυηενδ ηδκ GenBank (Men, Wilson et al. 2008). Γεδμιέκμο υηζ, βζα ημοξ ζηαθοθμηυηημοξ, μ ιεβαθφηενμξ υβημξ δζαεέζζιδξ βεκεηζηήξ πθδνμθμνίαξ αθμνά ηδκ αθθδθμοπία ηςκ νζαμζςιζηχκ ημοξ μπενμκίςκ, ημ βμκίδζμ 16S rrna απμηεθεί ημ δδιμθζθέζηενμ ζηυπμ, ιέζς ημο μπμίμο επζπεζνείηαζ δ ηαοημπμίδζή ημοξ. Ωζηυζμ, μ ιεβάθμξ ααειυξ μιμζυηδηαξ ημο 16S rrna, πμο οπμθμβίγεηαζ ηαηά ιέζμ υνμ ζημ 96% (92% έςξ 99%) ιεηαλφ ηςκ δζαθυνςκ εζδχκ, ηαεζζηά δοζπενή ηδκ αζθαθή δζάηνζζή ημοξ. Δπζπθέμκ, δ, ζοπκά, θηςπή πμζυηδηα ηδξ πθδεχναξ ηςκ αθθδθμοπζχκ ημο βμκζδίμο, πμο είκαζ ηαηαηεεεζιέκεξ ζηδκ GenBank ιπμνεί κα μδδβήζεζ ζε εζθαθιέκδ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ. (Kwok, Su et al. 1999; Heikens, Fleer et al. 2005). Ωξ εκαθθαηηζημί ζηυπμζ πνδζζιμπμζμφκηαζ ημ βμκίδζμ tuf, πμο ηςδζημπμζεί ημ πανάβμκηα επζιήηοκζδξ Tu (elongation factor Tu, EF-Tu), μ μπμίμξ ζοιιεηέπεζ ζημ ζπδιαηζζιυ ηδξ πμθοπεπηζδζηήξ αθοζίδαξ ηαηά ηδκ πνςηεσκμζφκεεζδ, ημ βμκίδζμ rpob, πμο ηςδζημπμζεί ηδ α-οπμιμκάδα ηδξ ααηηδνζαηήξ RNA πμθοιενάζδξ, ημ βμκίδζμ hsp60 (ή groel), πμο ηςδζημπμζεί ηδκ πνςηεΐκδ ημο εενιζημφ ζμη 60 (heat shock protein 60), δ μπμία ζοιιεηέπεζ ζημ πνςηεσκζηυ δίπθςια (protein folding), ημ βμκίδζμ soda, πμο ηςδζημπμζεί ιζα, ελανηχιεκδ απυ ημ ιαββάκζμ, οπενμλεζδζηή δζζιμοηάζδ ηαζ ημ βμκίδζμ gap, πμο ηςδζημπμζεί ιζα πνςηεΐκδ ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, ιεβέεμοξ 42 kda, πμο ζοκδέεηαζ ιε ηδκ ηνακζθεννίκδ ηαζ έπεζ επζπθέμκ δναζηζηυηδηα αθοδνμβμκάζδξ βζα ηδ ιεηαηνμπή ηδξ 3- θςζθμνζηήξ βθοηεναθδεΰδδξ ζε 1,3-δζθςζθμβθοηενζηυ, ηαηά ηδ δζαδζηαζία ηδξ βθοηυθοζδξ. Σα βμκίδζα αοηά δζαεέημοκ ορδθυηενδ δζαηνζηζηή ζηακυηδηα ζε ζπέζδ ιε ημ 16S rrna, δεδμιέκμο υηζ δ μιμζυηδηα ηδξ αθθδθμοπίαξ ημοξ ιεηαλφ ηςκ δζαθυνςκ εζδχκ ηοιαίκεηαζ απυ 89% έςξ 97% (ιέζμξ υνμξ 92,6%), απυ 71,6% έςξ 93,6% (ιέζμξ υνμξ 86%), απυ 74% έςξ 93% (ιέζμξ υνμξ 82%), απυ 66,9% έςξ 93,9% (ιέζμξ υνμξ 81,5%) ηαζ απυ 24,3% έςξ 96%, Σελίδα 86

87 ακηίζημζπα (Martineau, Picard et al. 2001; Poyart, Quesne et al. 2001; Drancourt and Raoult 2002; Ghebremedhin, Layer et al. 2008). 4.2 Αλάιπζε πνιπκνξθηζκνύ κήθνπο ηκεκάηωλ πεξηνξηζκνύ (Restriction Fragment Length Polymorphism analysis, RFLP analysis) Ζ ακάθοζδ πμθοιμνθζζιμφ ιήημοξ ηιδιάηςκ πενζμνζζιμφ είκαζ ιζα ηεπκζηή ηδξ ιμνζαηήξ αζμθμβίαξ, πμο αλζμπμζεί ηδκ πμζηζθμιμνθία μιυθμβςκ βεκεηζηχκ αθθδθμοπζχκ. Γζα ηδκ ακάδεζλδ ηδξ πμζηζθμιμνθίαξ αοηήξ, ιεηά ημκ ανπζηυ πμθθαπθαζζαζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξζηυπμο (ιε απθή αθοζζδςηή ακηίδναζδ πμθοιενάζδξ), αημθμοεεί πέρδ ηδξ αθθδθμοπίαξ ιε ιία ή πενζζζυηενεξ εκδμκμοηθεάζεξ πενζμνζζιμφ, μζ μπμίεξ ακαβκςνίγμοκ ηαζ ηυαμοκ εζδζηά, ζοκήεςξ παθίκδνμια, ηιήιαηα DNA, ηεζζάνςκ έςξ μηηχ αάζεςκ. Σα εναφζιαηα ηδξ αθθδθμοπίαξ πμο πνμηφπημοκ ιε ηδ ζοβηεηνζιέκδ δζαδζηαζία, ηεθζηά δζαπςνίγμκηαζ, αάζεζ ημο ιεβέεμοξ ημοξ, ιε δθεηηνμθυνδζδ ζε πήηηςια αβανυγδξ. Έηζζ, μιυθμβεξ αθθδθμοπίεξ ιε πμθοιμνθζζιμφξ ζηα ζδιεία ακαβκχνζζδξ ηςκ πενζμνζζηζηχκ εκγφιςκ, ακηζπνμζςπεφμκηαζ απυ δζαθμνεηζηυ ανζειυ ηιδιάηςκ ή/ηαζ δζαθμνεηζημφ ιεβέεμοξ ηιήιαηα ζηδκ δθεηηνμθυνδζδ, δίκμκηαξ δ ηάεε ιία έκα λεπςνζζηυ βεκεηζηυ απμηφπςια (πνμθίθ) (Millar, Xu et al. 2007). Ζ RFLP ακάθοζδ πνδζζιμπμζείηαζ ζηδ Μμνζαηή Μζηνμαζμθμβία βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ παεμβυκςκ ιζηνμμνβακζζιχκ, ιεηαλφ ηςκ μπμίςκ πενζθαιαάκμκηαζ ηαζ μζ ζηαθοθυημηημζ. Σα ακηίζημζπα πνςηυημθθα ζηδνίγμκηαζ ζηδκ επζθμβή εκυξ βεκεηζημφ ηυπμο, μ μπμίμξ είκαζ ιεκ ζοκηδνδιέκμξ εκηυξ ημο βέκμοξ, αθθά ηαοηυπνμκα δζαεέηεζ ηδκ απαζημφιεκδ, απυ πθεονάξ αθθδθμοπίαξ, πμζηζθμιμνθία ιεηαλφ ηςκ εζδχκ, χζηε κα ηαείζηαηαζ εθζηηή δ δζάηνζζή ημοξ. Έκαξ ηέημζμξ ζηυπμξ είκαζ ημ βμκίδζμ gap. Πμθθαπθαζζαζιυξ ηιήιαημξ 933 bp ημο βμκζδίμο, αημθμοεμφιεκμξ απυ πέρδ ιε ημ πενζμνζζηζηυ έκγοιμ AluΗ, πανέπεζ ηδ δοκαηυηδηα ηαοημπμίδζδξ 24 εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ, ιεηαλφ ηςκ μπμίςκ πενζθαιαάκμκηαζ υθα ηα παεμβυκα είδδ βζα ημκ άκενςπμ, αθθά ηαζ είδδ πενζααθθμκηζηήξ πνμέθεοζδξ. Ζ ιέεμδμξ επζηνέπεζ αηυια ηαζ ηδ δζάηνζζδ ηςκ οπμεζδχκ S. cohnii subsp. cohnii ηαζ S. cohnii subsp. urealyticum, ακ ηαζ δοζπεναίκεηαζ απυ πμθοιμνθζζιμφξ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο βμκζδίμο εκηυξ ημο ίδζμο είδμοξ, υπςξ ζοιααίκεζ βζα ηα είδδ S.epidermidis, S. hominis ηαζ S. simulans (Yugueros, Temprano et al. 2000; Yugueros, Temprano et al. 2001). Πνςηυημθθμ RFLP βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ οπάνπεζ, επίζδξ, ηαζ βζα ημ βμκίδζμ groel. Πμθθαπθαζζαζιυξ ηιήιαημξ 550 bp ημο βμκζδίμο ηαζ Σελίδα 87

88 πέρδ ιε ημ έκγοιμ AluI επζηνέπεζ ηδκ ακαβκχνζζδ ηςκ 12 πζμ παεμβυκςκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ βζα ημκ άκενςπμ, ιε πζεακή ηδκ ακεφνεζδ πμζηζθμιμνθίαξ εκηυξ ηςκ εζδχκ S. aureus ηαζ S. lugdunensis (Barros, Iorio et al. 2007). Έκαξ αηυιδ βεκεηζηυξ ηυπμξ, πμο ιπμνεί κα πνδζζιμπμζδεεί βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ιε ακάθοζδ RFLP, είκαζ δ εζςηενζηή ιεηαβναθυιεκδ πενζμπή ιεηαλφ ηςκ βμκζδίςκ 16S rrna ηαζ 23S rrna ημο rrna μπενμκίμο (16S internal transcribed spacer, 16S-ITS). Σμ έκγοιμ TaqI πμο πνδζζιμπμζείηαζ ζηδκ πενίπηςζδ αοηή πανάβεζ λεπςνζζηά βεκεηζηά απμηοπχιαηα βζα 15 ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ, ηαεχξ ηαζ βζα ημκ S. aureus, ακ ηαζ ζηεθέπδ ημο ηεθεοηαίμο ιπμνεί κα πανμοζζάζμοκ πμθοιμνθζζιυ ζηδκ αθθδθμοπία ημο 16S-ITS (Sudagidan, Yenidunya et al. 2005). Σέθμξ, έκα πνςηυημθθμ RFLP, πμο πνδζζιμπμζήεδηε ηαζ ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή, ζηδνίγεηαζ ζημκ πμθθαπθαζζαζιυ ηιήιαημξ 370 bp ημο βμκζδίμο tuf. Ζ ζοβηεηνζιέκδ ιέεμδμξ απαζηεί πέρδ ιε ηέζζενζξ πενζμνζζηζηέξ εκδμκμοηθεάζεξ (ηζξ BstZ17I, MseI, BseNI ηαζ HinfI) ηαζ πνδζζιμπμζείηαζ βζα ηδκ ακαβκχνζζδ ηςκ εζδχκ S. aureus, S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, S. simulans, S. warneri, S. capitis, S. saprophyticus, S. cohnii, S. lugdunensis ηαζ S. auricularis (Kontos, Petinaki et al. 2003). 4.3 Ρηβνηππία (ribotyping) Ζ ακάθοζδ πμθοιμνθζζιμφ ιήημοξ ηιδιάηςκ πενζμνζζιμφ ημο μπενμκίμο rrna, πμο ανίζηεηαζ ζε έλζ ακηίβναθα ζημ βμκζδίςια ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, μκμιάγεηαζ νζαμηοπία ηαζ ιπμνεί κα εθανιμζηεί ηυζμ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ, υζμ ηαζ ηδκ ηοπμπμίδζή ημοξ. Ζ πεζνμηίκδηδ εηηέθεζδ ηδξ ιεευδμο (ιε πνςηυημθθα υπςξ αοηά πμο πενζβνάθδηακ πνμδβμοιέκςξ) είκαζ πνμκμαυνμξ, ηεπκζηά απαζηδηζηή ηαζ εθάπζζηα πνμηοπμπμζδιέκδ βζα ηδ ζφβηνζζδ ηςκ απμηεθεζιάηςκ ιεηαλφ δζαθμνεηζηχκ Δνβαζηδνίςκ. ήιενα εθανιυγεηαζ πθέμκ ιε πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκμ ηνυπμ, πάνδ ζημκ ακαθοηή RiboPrinter (DuPont, Qualicon Inc.), μ μπμίμξ πνδζζιμπμζεί ηδκ πενζμνζζηζηή εκδμκμοηθεάζδ EcoRI. Ζ αάζδ δεδμιέκςκ ημο ακαθοηή πενζθαιαάκεζ ηα πνμθίθ υθςκ ζπεδυκ ηςκ ιέπνζ ζήιενα βκςζηχκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηηςκ, έπμκηαξ ηδ δοκαηυηδηα δζανημφξ ειπθμοηζζιμφ ή ηνμπμπμίδζδξ ηςκ εββναθχκ πμο πενζέπεζ, ηαεχξ ελεθίζζεηαζ δ ηαλζκυιδζδ ημο βέκμοξ. Ζ αηνίαεζα ημο RiboPrinter, ζε ιεθέηεξ πμο ημκ ζοβηνίκμοκ ιε ημ ζφζηδια API Staph, οπμθμβίγεηαζ ζημ 96% βζα ημ ζφκμθμ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ παναιέκεζ πάκς απυ 90%, αηυια ηαζ υηακ ζηα ζηεθέπδ δε Σελίδα 88

89 ζοιπενζθαιαάκμκηαζ ηα είδδ S. aureus ηαζ S. epidermidis (Andollina, De Cesare et al. 2004; Carretto, Barbarini et al. 2005; Campoccia, Baldassarri et al. 2006). 4.4 Αιπζηδωηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο (polymerase chain reaction, PCR) Ζ απθμφζηενδ ιμνζαηή ηεπκζηή, πμο πνδζζιμπμζείηαζ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ εκυξ ααηηδνζαημφ ζηεθέπμοξ ζε επίπεδμ είδμοξ, είκαζ δ PCR, ιε ζηυπμ ημκ πμθθαπθαζζαζιυ ιζαξ ηαηάθθδθα επζθεβιέκδξ κμοηθεμηζδζηήξ αθθδθμοπίαξ. Σμ πνχημ αήια βζα ηδκ εηηέθεζδ ηδξ ιεευδμο είκαζ μ ζπεδζαζιυξ εκυξ γεφβμοξ μθζβμκμοηθεμηζδζηχκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ, ηα μπμία οανζδίγμκηαζ ζηα 3' άηνα ημο δίηθςκμο DNA-ζηυπμο, μνζμεεηχκηαξ ημ ηιήια πμο πνυηεζηαζ κα πμθθαπθαζζαζηεί. Ζ ζφκεεζδ ηςκ εοβαηνζηχκ αθοζίδςκ επζηεθείηαζ, ζηδ ζοκέπεζα, πάνδ ζημ έκγοιμ DNA πμθοιενάζδ, πμο πνμζεέηεζ ηνζθςζθμνζηά δεμλονζαμκμοηθεμζίδζα ηαζ ηςκ ηεζζάνςκ αάζεςκ (datp, dttp, dctp ηαζ dgtp) ζηδκ ηαηεφεοκζδ 5' 3'. Σμ ιίβια ηδξ ακηίδναζδξ πενζέπεζ, επζπθέμκ, ζυκηα ιαβκδζίμο, πμο πνδζζιμπμζμφκηαζ ςξ ζοιπανάβμκηεξ ηδξ πμθοιενάζδξ ηαζ ηαηάθθδθμ νοειζζηζηυ δζάθοια βζα ηδ δζαηήνδζδ ζηαεενμφ ph. H ακηίδναζδ επζηοβπάκεηαζ ιε επακαθαιαακυιεκμοξ ηφηθμοξ ηνζχκ ζηαδίςκ, πμο πναβιαημπμζμφκηαζ ζε δζαθμνεηζηέξ εενιμηναζίεξ ηαζ πενζθαιαάκμοκ α) απμδζάηαλδ ηδξ δίηθςκδξ αθθδθμοπίαξζηυπμο (ζε εενιμηναζία πενίπμο 95 C) α) οανζδζζιυ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ ζηα ζοιπθδνςιαηζηά 3' άηνα ηδξ (ζε εενιμηναζία πενίπμο 55 C ) ηαζ β) ζφκεεζδ ηςκ εοβαηνζηχκ αθοζίδςκ ιε ηδκ εκζςιάηςζδ ηνζθςζθμνζηχκ δεμλονζαμκμοηθεμζζδίςκ απυ ηδκ DNA πμθοιενάζδ (ζε εενιμηναζία πενίπμο 72 C). Σεθζηά, δ ακίπκεοζδ ηςκ πνμσυκηςκ ηδξ ακηίδναζδξ επζηοβπάκεηαζ ιε δθεηηνμθυνδζδ ζε βέθδ αβανυγδξ. Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ δ πνμζεήηδ πενζζζυηενςκ ημο εκυξ γεοβχκ εηηζκδηχκ ζε ιζα πμθοπθεηηζηή ακηίδναζδ επζηνέπεζ ηδκ ηαοηυπνμκδ ακίπκεοζδ ηςκ ακηίζημζπςκ αθθδθμοπζχκ-ζηυπςκ (Millar, Xu et al. 2007). Ζ ηαοημπμίδζδ εκυξ είδμοξ ζηαθοθμηυηημο ιε PCR απαζηεί πνμζεηηζηή επζθμβή ημο βεκεηζημφ ηυπμο, ζημκ μπμίμ εα ζημπεφζεζ δ ιέεμδμξ. Καηάθθδθμ ζηυπμ απμηεθεί ηάεε βμκίδζμ ή ηιήια βμκζδίμο πμο, απμδεδεζβιέκα, ακεονίζηεηαζ ιυκμ ζημ ζοβηεηνζιέκμ είδμξ ηαζ, ιάθζζηα, ζε υθα ηα ζηεθέπδ πμο ακήημοκ ζημ είδμξ αοηυ, χζηε κα ελαζθαθίγεηαζ ηυζμ δ εζδζηυηδηα, υζμ ηαζ δ εοαζζεδζία ηδξ ακηίδναζδξ. ε αοηυ ημ πθαίζζμ, ημ βμκίδζμ nuc, πμο ηςδζημπμζεί ηδ εενιμακεεηηζηή κμοηθεάζδ (Brakstad and Maeland 1995), ημ βμκίδζμ coa, πμο ηςδζημπμζεί ηδκ ημαβημοθάζδ (Sabet, Subramaniam et al. 2006) ηζ έκα πνςιμζςιζηυ ηιήια, ιήημοξ 442 bp, Σελίδα 89

90 άβκςζηδξ ηςδζηήξ ζδιαζίαξ (Martineau, Picard et al. 1998) ιπμνμφκ κα πνδζζιμπμζδεμφκ ςξ εζδζημί ζηυπμζ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ημο S. aureus. Ακηίζημζπα, δ ηαοημπμίδζδ ημο S. epidermidis επζηοβπάκεηαζ ιε ηδκ ακίπκεοζδ ημο βμκζδίμο gsea, πμο ηςδζημπμζεί ιζα εζδζηή βζα ημ βθμοηαιζηυ πνςηεάζδ ηδξ ζενίκδξ (Ikeda, Ohara-Nemoto et al. 2004), ημο βμκζδίμο serp0107 πμο ηςδζημπμζεί έκα πζεακυ ιεηαβναθζηυ εκενβμπμζδηή ημο μπενμκίμο ζφκεεζδξ ημο βθμοηαιζημφ (Liu, Swiatlo et al. 2006) ηαζ εκυξ πνςιμζςιζημφ ηιήιαημξ, ιήημοξ 705 bp, άβκςζηδξ ηςδζηήξ ζδιαζίαξ (Martineau, Picard et al. 1996). Σμ βμκίδζμ mvaa, πμο ηςδζημπμζεί ιία νεδμοηηάζδ ημο 3'-οδνμλο-3'-ιεεοθβθμοηανοθ ζοκεκγφιμο Α, δ μπμία ζοιιεηέπεζ ζηδ αζμζφκεεζδ ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ ιπμνεί κα ζημπεοεεί βζα ηδκ ακαβκχνζζδ ημο S. haemolyticus (Schuenck, Pereira et al. 2008,), εκχ έκα πνςιμζςιζηυ ηιήια, ιήημοξ 380 bp, άβκςζηδξ ηςδζηήξ ζδιαζίαξ πνδζζιεφεζ βζα ημκ S. saprophyticus (Martineau, Picard et al. 2000). Σμ βμκίδζμ soda (ιε εηηζκδηέξ ζπεδζαζιέκμοξ πάκς ζε ιεηααθδηέξ πενζμπέξ ημο) αλζμπμζείηαζ βζα ηα είδδ S.simulans, S. carnosus (Blaiotta, Casaburi et al. 2005), S. hyicus (Voytenko, Kanbar et al. 2006) ηαζ S. equorum (Blaiotta, Ercolini et al. 2004), εκχ ημ βμκίδζμ 16S rrna (επίζδξ ιε εηηζκδηέξ ζπεδζαζιέκμοξ πάκς ζε ιεηααθδηέξ πενζμπέξ ημο) αλζμπμζείηαζ βζα ηα είδδ S. saprophyticus, S. capitis, S. haemolyticus, S. hominis, S. sciuri, S. schleiferi, S. epidermidis ηαζ S. warneri (Gribaldo, Cookson et al. 1997). Γζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ημο S. xylosus πνδζζιμπμζείηαζ ημ βμκίδζμ ηδξ λοθμηζκάζδξ xylb, ηαεχξ ηαζ ημ hsp60 (Blaiotta, Pennacchia et al. 2003). Σέθμξ, έκα ζδζαίηενμ πνςηυημθθμ PCR, πμο ιπμνεί κα δζαηνίκεζ ηαοηυπνμκα υθα ηα είδδ ζηαθοθμηυηηςκ, ζηδνίγεηαζ ζηδκ πενζμπή ITS, πμο ανίζηεηαζ ακάιεζα ζηα βμκίδζα 16S ηαζ 23S ημο μπενμκίμο rrna. H πενζμπή αοηή πανμοζζάγεζ ορδθυ ααειυ πμζηζθμιμνθίαξ, ηυζμ απυ πθεονάξ αθθδθμοπίαξ, υζμ ηαζ ιεβέεμοξ, ιεηαλφ ηςκ εζδχκ, δ μπμία, εκ ιένεζ, μθείθεηαζ ζημκ ανζειυ ηαζ ημ είδμξ ηςκ trna βμκζδίςκ πμο πενζέπεζ. Πμθθαπθαζζαζιυξ ηδξ ITS ιε εηηζκδηέξ πμο οανζδίγμκηαζ ζε ζοκηδνδιέκα ηιήιαηα ηςκ παναηείιεκςκ 16S ηαζ 23S rrna βμκζδίςκ, μδδβεί ζηδκ ακίπκεοζδ εκυξ δζαθμνεηζημφ βεκεηζημφ απμηοπχιαημξ βζα ηάεε είδμξ ζηαθοθμηυηημο, πμο απμηεθείηαζ απυ ηέζζενα ςξ εκκέα πνμσυκηα, ιεβέεμοξ 320 bp έςξ 750 bp, πςνίξ κα απαζηείηαζ πνήζδ πενζμνζζηζηήξ εκδμκμοηθεάζδξ. Πζεακμί πμθοιμνθζζιμί εκηυξ ηςκ S. aureus, S epidermidis, S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. caprae ηαζ S. lugdunensis εκίμηε δοζπεναίκμοκ, αθθά δεκ απμηθείμοκ ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ εζδχκ αοηχκ (Couto, Pereira et al. 2001). Σελίδα 90

91 4.5 Αιπζηδωηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο πξαγκαηηθνύ ρξόλνπ (real-time PCR) Ζ PCR πναβιαηζημφ πνυκμο απμηεθεί ιία παναθθαβή ηδξ ηθαζζηήξ αθοζζδςηήξ ακηίδναζδξ πμθοιενάζδξ, ιε ηδκ μπμία επζηοβπάκεηαζ μ πμθθαπθαζζαζιυξ ηαζ, ηαοηυπνμκα, δ πμζμηζημπμίδζδ ιζαξ βεκεηζηήξ αθθδθμοπίαξ-ζηυπμο. Κθαζζηά, δ ηεπκζηή ζηδνίγεηαζ ζηδ πνήζδ ιζαξ ιδ εζδζηήξ πανειααθθυιεκδξ πνςζηζηήξ, ζοκδεέζηενα ηδξ SYBR Green I, δ μπμία πανάβεζ ζζπονυ θεμνίγμκ ζήια, υηακ ζοκδέεηαζ ιε ιυνζα δίηθςκμο DNA. Με ημκ ηνυπμ αοηυ, μ ζπδιαηζζιυξ ημο πνμσυκημξ ηδξ ακηίδναζδξ μδδβεί ζε αφλδζδ ημο ηαηαβναθυιεκμο θεμνζζιμφ, μ μπμίμξ είκαζ ακάθμβμξ ημο πθδεοζιμφ ηςκ παναβυιεκςκ αθθδθμοπζχκ ζε ηάεε εενιμδοκαιζηυ ηφηθμ, επζηνέπμκηαξ, έηζζ, ηδκ πμζμηζημπμίδζή ημοξ. Γεδμιέκμο υηζ δ πνςζηζηή ζοκδέεηαζ ιδ εζδζηά ιε μπμζμδήπμηε ιυνζμ δίηθςκμο DNA, υπςξ, βζα πανάδεζβια, ιε ηα δζιενή ηςκ εηηζκδηχκ ή ιε αθθδθμοπίεξ πμο επζιμθφκμοκ ηδκ ακηίδναζδ, δ ακίπκεοζδ ημο επζεοιδημφ πνμσυκημξ επζαεααζχκεηαζ ιε ηδκ ακάθοζδ ηδξ ηαιπφθδξ ηήλδξ ημο. οβηεηνζιέκα, ιεηά ηδκ μθμηθήνςζδ ηδξ ακηίδναζδξ αημθμοεεί ζηαδζαηή αφλδζδ ηδξ εενιμηναζίαξ, δ μπμία μδδβεί ζε απμδζάηαλδ ηςκ δίηθςκςκ αθθδθμοπζχκ πμο έπμοκ ζπδιαηζζηεί. Ζ απεθεοεένςζδ ηδξ πνςζηζηήξ, πμο αθθδθεπζδνά ιε αοηέξ έπεζ ςξ απμηέθεζια ηδ ιείςζδ ημο παναβυιεκμο θεμνζζιμφ, δ ανκδηζηή πανάβςβμξ ημο μπμίμο ηαηαβνάθεηαζ ζε ζοκάνηδζδ ιε ηδ εενιμηναζία, βζα ηδκ ακάδεζλδ ιζαξ δζαηνζηήξ ημνοθήξ ηήλδξ (πμο ακηζζημζπεί ζηδ εενιμηναζία απμδζάηαλδξ ημο 50% ημο πνμσυκημξ). Ζ επζπθέμκ πνήζδ εκυξ, ζδιαζιέκμο ιε θεμνίγμκ ιυνζμ, ζπκδεέηδ επζηνέπεζ ηδκ εζδζηή ακίπκεοζδ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο πνμσυκημξ ηδξ ακηίδναζδξ. οβηεηνζιέκα, δ απεθεοεένςζδ ημο ζπκδεέηδ, απυ ηδ ζοιπθδνςιαηζηή αθθδθμοπία ημο πνμσυκημξ, ζηδκ μπμία οανζδίγεηαζ, μδδβεί ζηδκ ειθάκζζδ ιζαξ επζπθέμκ ημνοθήξ ζηδκ ηαιπφθδ, ηαηά ηδ δζαδζηαζία ηδξ ηήλδξ (Edwards, Kaufmann et al. 2001; Nolte and Caliendo 2011). Ζ PCR πναβιαηζημφ πνυκμο, ζε ζοκδοαζιυ ιε ηδκ ακάθοζδ ηδξ ηαιπφθδξ ηήλδξ ημο παναβυιεκμο πνμσυκημξ ιε ηδ αμήεεζα ζπκδεεηχκ, ιπμνεί κα πνδζζιμπμζδεεί ζηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ δζαθμνεηζηχκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Έπμοκ ακαπηοπεεί δφμ ζπεηζηά πνςηυημθθα ζηδ αζαθζμβναθία, πμο ηαοημπμζμφκ ηθζκζηά ζηεθέπδ ηαζ ααζίγμκηαζ ζημ βμκίδζμ 16S rrna. Σμ πνςηυημθθμ ηςκ Edrwards ηαζ ζοκ. επζηνέπεζ ηδκ ακαβκχνζζδ ημο S. aureus ηαζ 14 ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ (S. epidermidis, S. warneri,s. lugdunensis, S. intermedius, S. chromogenes,s. sciuri, S. hominis, S. haemolyticus, S. capitis, S. caprae, S. schleiferi, S. Σελίδα 91

92 simulans, S. saprophyticus ηαζ S. cohnii, πςνίξ ηδ δοκαηυηδηα δζάηνζζδξ ιεηαλφ ημο S. capitis ηαζ ημο S. caprae) ηαζ πενζθαιαάκεζ ηέζζενζξ λεπςνζζηέξ ακηζδνάζεζξ, πμο πναβιαημπμζμφκηαζ ιε δζαθμνεηζημφξ ζπκδεέηεξ ηαζ εηηζκδηέξ (Edwards, Kaufmann et al. 2001). Οζ Skow ηαζ ζοκ. πνμηείκμοκ ηδ πνήζδ δφμ ζπκδεεηχκ ζηδκ ίδζα ακηίδναζδ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ημο S. aureus ηαζ ηςκ μηηχ ζδιακηζηυηενςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ (S. epidermidis, S. capitis, S. warneri, S. haemolyticus, S. lugdunensis, S. hominis, S. schleiferi ηαζ S. simulans) ακ ηαζ δ ιέεμδυξ ημοξ πανμοζζάγεζ αδοκαιία δζάηνζζδξ ημο S. lugdunensis απυ ημκ S. haemolyticus ηαζ ημο S. hominis απυ ημκ S. schleiferi ηαζ S. simulans (Skow, Mangold et al. 2005). Aλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ οπάνπμοκ ηαζ πμθοπθεηηζηά πνςηυημθθα PCR πναβιαηζημφ πνυκμο, πμο πνδζζιμπμζμφκ πενζζζυηενα ημο εκυξ γεφβδ εηηζκδηχκ. Σέημζα πνςηυημθθα ιπμνμφκ κα δζαηνίκμοκ ημκ S. aureus απυ ημκ S. epidermidis, ημκ S. lugdunensis ή, βεκζηά, απυ ημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ, ιε ηαοηυπνμκδ ακίπκεοζδ ημο βμκζδίμο meca (Pinsky, Samson et al. 2009; Jukes, Mikhail et al. 2010; Kilic, Muldrew et al. 2010). Tέθμξ, απθέξ ακηζδνάζεζξ πναβιαηζημφ πνυκμο ιπμνμφκ κα πνδζζιμπμζδεμφκ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ιειμκςιέκςκ εζδχκ, υπςξ μ S. capitis, o S. haemolyticus ηαζ μ S. warneri (Iwase, Seki et al. 2007). Σελίδα 92

93 ΔΗΓΗΚΟ ΜΔΡΟ Σελίδα 93

94 1) ΤΛΗΚΑ ΚΑΗ ΜΔΘΟΓΟΗ Ζ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή εζηζάζηδηε ζηζξ θαζκμηοπζηέξ ηαζ ιμνζαηέξ ηεπκζηέξ ηαοημπμίδζδξ ηθζκζηά ζδιακηζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ. οβηεηνζιέκα, πναβιαημπμζήεδηε ζφβηνζζδ ηδξ απυδμζδξ ηςκ εονέςξ δζαδμιέκςκ, ειπμνζηά δζαεέζζιςκ, θαζκμηοπζηχκ ζοζηδιάηςκ Phoenix (Becton Dickinson) ηαζvitek 2 (biomérieux), ςξ πνμξ ηδκ ηαοημπμίδζδ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Δπζπθέμκ, επζπεζνήεδηε δ εθανιμβή δφμ κέςκ ιμνζαηχκ ιεευδςκ. Aνπζηά ακαπηφπεδηε ιζα απθή PCR βζα ηδκ ακαβκχνζζδ ημο είδμοξ S. lugdunensis ηαζ ζηδ ζοκέπεζα ζπεδζάζηδηε ιζα πμθοπθεηηζηή PCR βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ εζδχκ S. aureus, S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, S. saprophyticus, S. lugdunensis, S. capitis ηαζ S. simulans ηαζ ηδκ ηαοηυπνμκδ ακίπκεοζδ ηδξ ακημπήξ ημοξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ. Πνμηεζιέκμο κα δζαζθαθζζηεί δ δζαβκςζηζηή πνδζζιυηδηα ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR ζηδκ ηαε διένα ενβαζηδνζαηή πνάλδ, δ ιέεμδμξ εθανιυζηδηε ηαηεοεείακ ζε οθζηυ εεηζηχκ αζιμηαθθζενβεζχκ, ιεηά ηδκ ακεφνεζδ ηαηάθθδθμο πνςημηυθθμο εηπφθζζδξ ααηηδνζαημφ DNA απυ ημοξ ακηίζημζπμοξ γςιμφξ. Σέθμξ, ιεθεηήεδηακ θαζκμηοπζηά ηαζ ιμνζαηά υθα ηα δζαδμπζηά ζηεθέπδ S. lugdunensis πμο απμιμκχεδηακ ζημ Δνβαζηήνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ ημο Πακεπζζηδιζαημφ Γεκζημφ Νμζμημιείμο «ΑΣΣΗΚΟΝ» ηαηά ηδ δζάνηεζα ηνζχκ εηχκ ηαζ εηηζιήεδηε δ ηθζκζηή ημοξ ζδιαζία. Α. Κιηληθά θαη πξόηππα ζηειέρε ηα πεζνάιαηα πμο δζεκενβήεδηακ ιεθεηήεδηακ ζοκμθζηά 206 ηθζκζηά ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ, πμο πνμένπμκηακ απυ ημ Πακεπζζηδιζαηυ Γεκζηυ Νμζμημιείμ «ΑΣΣΗΚΟΝ» ηαζ ημ Πακεπζζηδιζαηυ Γεκζηυ Νμζμημιείμ Λάνζζαξ (εοβεκζηή παναπχνδζδ ηδξ Ακ. Καεδβήηνζαξ η. Δοεοιίαξ Πεηεζκάηδ). Δπζθέπεδηακ χζηε κα ακηζπνμζςπεφμοκ έκα θάζια δέηα ηθζκζηά ζδιακηζηχκ εζδχκ (S. aureus, S. epidermidis, S. lugdunensis, S. haemolyticus, S. hominis, S. cohnii, S. saprophyticus, S. capitis, S. simulans ηαζ S. sciuri) ηαζ ζε πμζμζηυ 46,6% ήηακ ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ. Δπίζδξ, ελεηάζεδηακ ακηζπνμζςπεοηζηά ηθζκζηά ζηεθέπδ απυ 17 επζπθέμκ ζοπκά απακηχιεκα (έλζ gram εεηζηά ηαζ 11 gram ανκδηζηά) είδδ (έκα ζηέθεπμξ ακά είδμξ), ηαεχξ ηαζ 20 πνυηοπα ζηεθέπδ Staphylococcus spp., Streptococcus spp., E. faecalis, E. Σελίδα 94

95 coli ηαζ Pseudomonas aeruginosa. Ζ ζοθθμβή ηςκ ζηεθεπχκ πμο πνδζζιμπμζήεδηε ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή θαίκεηαζ ακαθοηζηά ζημκ Πίκαηα 4. Β. ύγθξηζε ηεο απόδνζεο ηωλ ζπζηεκάηωλ Phoenix θαη Vitek 2 ωο πξνο ηελ ηαπηνπνίεζε θιηληθά ζεκαληηθώλ εηδώλ ζηαθπινθόθθωλ Β.1 ηειέρε πνπ εμεηάζζεθαλ Γζα ηδ ζφβηνζζδ ηδξ απυδμζδξ ηςκ ζοζηδιάηςκ Phoenix ηαζ Vitek 2, ιεθεηήεδηακ ζοκμθζηά 147 ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ δζαθμνεηζηχκ αζεεκχκ, πμο είπακ απμιμκςεεί απυ πμζηίθα ηθζκζηά δείβιαηα (υπςξ αίια, ηναφιαηα, αββεζαημφξ ηαεεηήνεξ, μφνα ηαζ δείβιαηα ακαπκεοζηζημφ) ηαζ ζηδκ πθεζμκυηδηά ημοξ είπακ εεςνδεεί ηθζκζηά ζδιακηζηά. Σα ζηεθέπδ επζθέπεδηακ χζηε κα ακηζπνμζςπεφμοκ έκα ζηακμπμζδηζηυ θάζια ζοπκά απμιμκμφιεκςκ ζημ Μζηνμαζμθμβζηυ Δνβαζηήνζμ (εκκέα ζοκμθζηά) εζδχκ, πμο πενζθαιαάκμκηαζ, επζπθέμκ, ζηζξ αάζεζξ δεδμιέκςκ ηςκ δφμ οπυ αλζμθυβδζδ ζοζηδιάηςκ. οβηεηνζιέκα, 52 ζηεθέπδ ακήηακ ζημ είδμξ S. aureus, 50 ζηεθέπδ ζημ είδμξ S. epidermidis, 13 ζηεθέπδ ζημ είδμξ S. haemolyticus, 10 ζηεθέπδ ζημ είδμξ S. hominis, 8 ζηεθέπδ ζημ είδμξ S. cohnii, 6 ζηεθέπδ ζημ είδμξ S. lugdunensis, 5 ζηεθέπδ ζημ είδμξ S. saprophyticus, 2 ζηεθέπδ ζημ είδμξ S. sciuri ηαζ 1 ζηέθεπμξ ζημ είδμξ S. simulans. Σα ζηεθέπδ ήηακ θοθαβιέκα ζε γςιυ βθοηενυθδξ ζημοξ -70 μ C ηαζ ακαηαθθζενβήεδηακ δφμ θμνέξ ζε ΣSA (trypticase soya agar) άβαν ιε 5% αίια πνμαάημο (Becton Dickinson) πνζκ ηαοημπμζδεμφκ ηυζμ ιμνζαηά υζμ ηαζ θαζκμηοπζηά. Β.2 Μνξηαθή ηαπηνπνίεζε ηωλ ζηαθπινθόθθωλ θαη αλίρλεπζε ηνπ γνληδίνπ meca Β.2.1 Δθρύιηζε γελεηηθνύ πιηθνύ Ζ εηπφθζζδ βεκεηζημφ οθζημφ απυ ηα ηθζκζηά ηαζ πνυηοπα ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ αημθμφεδζε ηδκ ακάπηολή ημοξ ζε ζηενεά ενεπηζηά οθζηά, εθανιυγμκηαξ ημ πνςηυημθθμ ηςκ Casas ηαζ ζοκ. ιε ιενζηέξ ηνμπμπμζήζεζξ (Casas, Powell et al. 1995). Πζμ ακαθοηζηά δ δζαδζηαζία βζα ηάεε ζηέθεπμξ εηηεθέζηδηε ςξ ελήξ: Μζηνυξ ανζειυξ απμζηζχκ ημο ζηεθέπμοξ ακαζφνεδηε απυ ημ ηνοαθίμ ιε ηδ αμήεεζα ηνζημθυνμο ζηοθεμφ ηαζ ακαιείπεδηε ιε 600 ιl Σελίδα 95

96 δζαθφιαημξ θφζδξ (ημ δζάθοια αοηυ πενζείπε 4 Μ εεζμηοακζμφπμο βμοακζδίκδξ, 0.5% N-lauroyl sarcosine, 1 mm dithiothreitol, 25 mm ηζηνζημφ καηνίμο ηαζ 50 ιg βθοημβυκμο ακά ζςθδκάνζμ). ηδ ζοκέπεζα, πνμζηέεδηακ 500 ιl παβςιέκδξ ζζμπμνμποθζηήξ αθημυθδξ, ημ δείβια ακαηζκήεδηε βζα ημοθάπζζημκ 10 sec ηαζ επςάζηδηε ζημοξ 0 μ C βζα ιία χνα. Αημθμφεδζε θοβμηέκηνδζδ βζα 10 min ζηα g ηαζ ζε εενιμηναζία 4 o C, απμιάηνοκζδ ηδξ ζζμπνμποθζηήξ αθημυθδξ ηαζ λέπθοια ημο ζγήιαημξ ιε 1 ml παβςιέκδξ απυθοηδξ αζεακυθδξ 70%. Μεηά απυ κέα θοβμηέκηνδζδ ζηζξ ίδζεξ ζοκεήηεξ, αημθμφεδζε απυννζρδ ηδξ αζεακυθδξ ηαζ ζηέβκςια ημο ζγήιαημξ βζα 5 min ζημοξ 65 o C. Ζ ηεθζηή ακαζφζηαζδ ημο ζγήιαημξ έβζκε ζε 100 ιl απεζηαβιέκμο κενμφ εθεφεενμο κμοηθεαζχκ. Ζ ιέεμδμξ εηπφθζζδξ πνδζζιμπμζήεδηε ζε υθεξ ηζξ ιμνζαηέξ ιεευδμοξ ηαοημπμίδζδξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ ακίπκεοζδξ ηδξ ακημπήξ ημοξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ (πθδκ υζςκ εθανιυζηδηακ απεοεείαξ ζε θζάθεξ αζιμηαθθζενβεζχκ). Β.2.2 Αλάιπζε πνιπκνξθηζκνύ κήθνπο ηκεκάηωλ πεξηνξηζκνύ ηνπ γνληδίνπ tuf Ωξ ιέεμδμξ ακαθμνάξ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ ηδξ ιεθέηδξ πνδζζιμπμζήεδηε δ ακάθοζδ πμθοιμνθζζιμφ ιήημοξ ηιδιάηςκ πενζμνζζιμφ (Restriction Fragment Length Polymorphism analysis, RFLP analysis) ηιήιαημξ ημο βμκζδίμο tuf ιεηά απυ PCR. Σμ βμκίδζμ αοηυ απμηεθεί ααζζηυ ζοζηαηζηυ ημο ααηηδνζαημφ βμκζδζχιαημξ, ηαεχξ ηςδζημπμζεί ημκ πανάβμκηα επζιήηοκζδξ Tu (Δlongation Factor Thermo-unstable, EF-Tu), πμο ζοιιεηέπεζ ζηδκ πνςηεσκμζφκεεζδ, δζαιεζμθααχκηαξ ηδκ είζμδμ ημο άιζκμ-άηοθμ-trna ζηδκ Α εέζδ ημο νζαμζχιαημξ. RFLP ακάθοζδ ημο βμκζδίμο αοημφ, ιε ηδ πνήζδ εκυξ γεφβμοξ εζδζηχκ βζα ημ βέκμξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ εηηζκδηχκ ηαζ ηεζζάνςκ εκγφιςκ πενζμνζζιμφ, επζηνέπεζ ηδ δζάηνζζδ ζοκμθζηά 11 εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ (ημο Staphylococcus aureus ηαζ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ S.epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, S. auricularis, S. simulans, S. warneri, S. capitis, S. saprophyticus, S. cohnii, S. lugdunensis), ιε αάζδ ημκ αθβυνζειμ πμο θαίκεηαζ ζηδκ Δζηυκα 5 (Kontos, Petinaki et al. 2003): Ακαθοηζηά ημ πνςηυημθθμ πμο εθανιυζηδηε βζα ηα ζηεθέπδ ηδξ πανμφζαξ ιεθέηδξ είπε ςξ ελήξ: Ανπζηά, ηιήια ημο βμκζδίμο tuf ιήημοξ 370 bp πμθθαπθαζζάζηδηε πνδζζιμπμζχκηαξ ημοξ εηηζκδηέξ TStaG422 5'- GGC CGT GTT GAA CGT GGT CAA ATC A-3' (μ μπμίμξ οανζδίγεηαζ ζηζξ εέζεζξ 422 έςξ 446 ημο βμκζδίμο tuf ηδξ E. coli) ηαζ TStag765 5'- TIA CCA TTT CAG TAC CTT CTG GTA A-3' (μ μπμίμξ οανζδίγεηαζ ζηζξ εέζεζξ 765 έςξ 792 ημο βμκζδίμο tuf Σελίδα 96

97 ηδξ E. coli). Σα 50 ιl ημο υβημο ηδξ ακηίδναζδξ πενζείπακ 5 ιl εηποθζζιέκμο DNA, 2.5 U Taq DNA πμθοιενάζδξ (Qiagen), 10x PCR buffer (Qiagen), 2 mm MgCl 2 (Qiagen), 10 mm ηάεε ηνζθςζθμνζημφ δεμλοκμοηθεμζζδίμο (Invitrogen) ηαζ 20 pmol ηαεεκυξ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ. Οζ ζοκεήηεξ εηηέθεζδξ ηδξ ακηίδναζδξ πενζεθάιαακακ: ανπζηή απμδζάηαλδ βζα 4 min ζημοξ 94 o C, ζηδ ζοκέπεζα 30 ηφηθμοξ απμδζάηαλδξ βζα 1 min ζημοξ 95 o C, οανζδζζιμφ βζα 1 min ζημοξ 58 o C ηαζ επέηηαζδξ βζα 2 min ζημοξ 72 o C ηαζ, ηέθμξ, έκα αήια επέηηαζδξ ηςκ 10 min ζημοξ 72 o C. Σα πνμσυκηα ακζπκεφεδηακ ιεηά απυ δθεηηνμθυνδζδ ζε 2% βέθδ αβανυγδξ (Biotools). Ζ απεζηυκζζή ημοξ πναβιαημπμζήεδηε ιε ηδ ζοζηεοή εηπμιπήξ οπενζχδμοξ αηηζκμαμθίαξ MultiImageTM Light Cabinet ηαζ ημ θμβζζιζηυ AlphaImager EC (Alpha Innotech Corporation), πμο πνδζζιμπμζήεδηακ βζα υθεξ ηζξ δθεηηνμθμνήζεζξ ηδξ ιεθέηδξ. Αημθμφεδζε επχαζδ ηςκ πνμσυκηςκ ιε ηα πενζμνζζηζηά έκγοια. οβηεηνζιέκα, 5 ιl ηάεε πνμσυκημξ ακαιείπεδηακ ιε 10 U ηάεε εκγφιμο ηαζ ιε ημ ακηίζημζπμ 10 x buffer ηαζ αημθμφεδζε επχαζδ βζα 3 χνεξ ζημοξ 37 o C βζα ηα έκγοια BstZ17I (Fermentas) ηαζ HinfI (Fermentas) ηαζ βζα 3 χνεξ ζημοξ 65 o C βζα ηα έκγοια MseI (Fermentas) ηαζ BseNI (Fermentas). Σα πνμσυκηα ηδξ πέρδξ απεζημκίζηδηακ ιεηά απυ δθεηηνμθυνδζδ ζε 3% βέθδ αβανυγδξ (metaphor) ορδθήξ πμζυηδηαξ (FMC Bioproducts) ηαζ δ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ ζε επίπεδμ είδμοξ πνμέηορε απυ ηδ ζφβηνζζδ ηςκ ηιδιάηςκ πενζμνζζιμφ ηάεε ζηεθέπμοξ ιε ημκ αθβυνζειμ ημο πνςημηυθθμο. Β.2.3 Πξνζδηνξηζκόο ηεο αιιεινπρίαο ηκήκαηνο ηνπ 16S rrna γνληδίνπ Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ επεζδή ηα πνμσυκηα πέρδξ ηςκ εζδχκ S. epidermidis ηαζ S. hominis δζαεέημοκ πανυιμζα ιεβέεδ πμο ηαεζζημφκ δοζπενή ηδ δζάηνζζή ημοξ ιε ηδκ ακάθοζδ RFLP ημο βμκζδίμο tuf, ηα ζηεθέπδ ηςκ εζδχκ αοηχκ οπμαθήεδηακ ηαζ ζε ιενζηυ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο 16S rrna βμκζδίμο ημοξ βζα ηδκ επζαεααίςζδ ηδξ ηαοημπμίδζήξ ημοξ. Με ηδκ ιέεμδμ αοηή ελεηάζηδηακ, επζπθέμκ, ηαζ ηα δφμ ζηεθέπδ ημο είδμοξ S. sciuri, ημ μπμίμ δεκ πενζθαιαάκεηαζ ζημκ RFLP αθβυνζειμ, ηαεχξ ηαζ ηα 16 ζηεθέπδ S. lugdunensis ηδξ ζοθθμβήξ. Ακαθοηζηυηενα, ηιήια ημο βμκζδίμο ιήημοξ 1503 bp πμθθαπθαζζάζηδηε ιε PCR, πνδζζιμπμζχκηαξ ηα εηηζκδηζηά ιυνζα: F16S 5 -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 (πμο ακηζζημζπεί ζηζξ εέζεζξ 8 έςξ 27 ημο 16S rrna βμκζδίμο ηδξ E. coli) ηαζ R16S 5 - GGTTACCTTGTTACGACTT-3 (πμο ακηζζημζπεί ζηζξ εέζεζξ 1492 έςξ 1510 ημο 16S rrna βμκζδίμο ηδξ E. coli) (Hiraishi 1992). Σα 50 ιl ημο υβημο ηδξ ακηίδναζδξ πενζείπακ 5 ιl Σελίδα 97

98 εηποθζζιέκμο DNA, 10x PCR buffer (Qiagen), 0,2 mm ηάεε ηνζθςζθμνζημφ δεμλοκμοηθεμζζδίμο (Invitrogen), 2 mm MgCl 2 (Qiagen), 50 pmol ηαεεκυξ ηςκ μθζβμκμοηθεμηζδίςκ ηαζ 2.5 U Taq DNA πμθοιενάζδξ (Qiagen). Οζ ζοκεήηεξ ηδξ ακηίδναζδξ ήηακ μζ αηυθμοεεξ: ανπζηή απμδζάηαλδ βζα 3 min ζημοξ 94 o C, ζηδ ζοκέπεζα 30 ηφηθμζ ιε 30 sec ζημοξ 94 o C, αημθμφεςξ 30 sec ζημοξ 50 o C ηαζ ηαηυπζκ 1 min ζημοξ 72 o C ηαζ έκα ηεθζηυ αήια επέηηαζδξ ηςκ 7 min ζημοξ 72 o C. Σα πνμσυκηα ηδξ ακηίδναζδξ απεζημκίζηδηακ ιε δθεηηνμθυνδζδ ζε 2% βέθδ αβανυγδξ (Biotools). O πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ ηςκ πνμσυκηςκ έβζκε απυ ηδκ εηαζνεία Macrogen Inc. (Seoul, Korea). Αημθμφεδζε δ ηαοημπμίδζδ ηάεε ζηεθέπμοξ ιε ηδ πνήζδ ημο θμβζζιζημφ BLAST, ιέζς ζφβηνζζδξ ηδξ κέαξ αθθδθμοπίαξ ιε ηζξ ήδδ ηαηαπςνδιέκεξ αθθδθμοπίεξ ζηδ αάζδ δεδμιέκςκ Genbank. Δθάπζζημ πμζμζηυ μιμζυηδηαξ 99% ιεηαλφ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο ζηεθέπμοξ ηδξ ιεθέηδξ ηαζ ιζαξ απμεδηεοιέκδξ αθθδθμοπίαξ ζηδκ GenBank ήηακ απαναίηδημ βζα κα ηαηαηαβεί ημ ζηέθεπμξ αοηυ ζημ είδμξ ηδξ βκςζηήξ αθθδθμοπίαξ. Γζα ηα ηθζκζηά ζηεθέπδ S. lugdunensis πμο ελεηάζεδηακ ηαηαηέεδηακ ζηδκ Genbank μζ αηυθμοεεξ αθθδθμοπίεξ: EU EU130685, EF EF ηαζ DQ DQ Β.2.4 Καζνξηζκόο ηεο αληνρήο ηωλ θιηληθώλ ζηειερώλ ζηαθπινθόθθωλ ζηε κεζηθηιιίλε Ο ηονζυηενμξ ιδπακζζιυξ ακημπήξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ αθμνά ζηδκ παναβςβή ηδξ πεκζηζθθζκμδεζιεοηζηήξ πνςηεΐκδξ PBP2a (ή PBP2'), πμο παναηηδνίγεηαζ απυ ιεζςιέκδ ζοκάθεζα βζα ηα α-θαηηαιζηά ακηζαζμηζηά ηαζ ηςδζημπμζείηαζ απυ ημ βμκίδζμ meca. Μζα απθή PCR πνδζζιμπμζήεδηε βζα ηδκ ακίπκεοζδ ηιήιαημξ ημο βμκζδίμο meca ιήημοξ 533 bp, πνδζζιμπμζχκηαξ ηα εηηζκδηζηά ιυνζα P2:5'-AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC-3' (ακηίζημζπμ πνμξ ηζξ εέζεζξ 1282 έςξ 1303 ημο βμκζδίμο) ηαζ P3:5'-AGTTCTGCAGTACCGGATTTGC-3 (ακηίζημζπμ πνμξ ηζξ εέζεζξ 1793 έςξ 1814 ημο βμκζδίμο) (Murakami, Minamide et al. 1991). Γζα ηάεε ζηέθεπμξ δ ακηίδναζδ έθααε πχνα ζε υβημ 50 ιl, μ μπμίμξ πενζείπε 5 ιl εηποθζζιέκμο DNA, 10x PCR buffer (Qiagen), 0,2 mm ηάεε ηνζθςζθμνζημφ δεμλοκμοηθεμζζδίμο (Invitrogen), 2 mm MgCl 2 (Qiagen), 50 pmol ηαεεκυξ ηςκ μθζβμκμοηεθμηζδίςκ ηαζ 2.5 U Taq DNA πμθοιενάζδξ (Qiagen). Οζ ζοκεήηεξ ηδξ ακηίδναζδξ ήηακ μζ αηυθμοεεξ: ανπζηή απμδζάηαλδ βζα 4 min ζημοξ 94 o C, ζηδ ζοκέπεζα 30 ηφηθμζ ημο 1 min ζημοξ 95 o C, 1 min ζημοξ 58 o C ηαζ 2 min Σελίδα 98

99 ζημοξ 72 o C ηαζ έκα ηεθζηυ αήια επέηηαζδξ ηςκ 10 min ζημοξ 72 o C. Σα πνμσυκηα ηδξ ακηίδναζδξ απεζημκίζηδηακ ιε δθεηηνμθυνδζδ ζε 2% βέθδ αβανυγδξ (Biotools). Ζ meca PCR δζεκενβήεδηε ζε υθα ηα δζαεέζζια ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ. Β.3 Σαπηνπνίεζε κε ην ζύζηεκα Vitek 2 (biomérieux) Γζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ ηδξ ιεθέηδξ ιε ημ ζφζηδια Vitek 2, πνδζζιμπμζήεδηε δ πνςιαημιεηνζηή ηάνηα ID-GP (πμο πνμμνίγεηαζ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ gram εεηζηχκ ηυηηςκ) ηαζ δ ακηίζημζπδ έηδμζδ θμβζζιζημφ 4.01, ζφιθςκα ιε ηζξ μδδβίεξ ηδξ ηαηαζηεοάζηνζαξ εηαζνείαξ. Ζ ηάνηα ID-GP πενζθαιαάκεζ 43 αζμπδιζηέξ δμηζιαζίεξ, πμο ελεηάγμοκ ηδ πνήζδ δζαθυνςκ πδβχκ άκεναηα, εκγοιζηέξ δναζηζηυηδηεξ ηαζ ακεεηηζηυηδηα ζε πμζηίθεξ μοζίεξ. οβηεηνζιέκα, ιε ηδκ ID-GP εθέβπεηαζ δ παναβςβή μλέμξ απυ D-αιοβδαθίκδ, D-λοθυγδ, ηοηθμδεληνίκδ, D-ζμναζηυθδ, D-βαθαηηυγδ, D-νζαυγδ, θαηηυγδ, βαθαηηζηυ, Ν- αηεηοθ-βθοημγαιίκδ, D-ιαθηυγδ, D-ιακκζηυθδ, D-ιακκυγδ, ιεεοθ-α-d-βθοημπονακμζίδδ, πμοθθμοθάκδ, D-ναθθζκυγδ, ζαθζηίκδ, ζμοηνυγδ ηαζ D-ηνεπαθυγδ. Δπίζδξ ελεηάγμκηαζ μζ εκγοιζηέξ δναζηζηυηδηεξ θςζθμθζπάζδξ C ηδξ θςζθαηζδοθμσκμζζηυθδξ, οδνμθάζδξ ηδξ ανβζκίκδξ, α- βαθαηημπονακμζζδάζδξ, α-βθοημζζδάζδξ, ανοθαιζδάζδξ ημο ηνζπεπηζδίμο αθακίκδθαζκοθαθακίκδ-πνμθίκδ, ανοθαιζδάζδξ ημο L-αζπανηζημφ, α-ιακκμζζδάζδξ, αθηαθζηήξ θςζθαηάζδξ, ανοθαιζδάζδξ ηδξ L-θεοηίκδξ, ανοθαιζδάζδξ ηδξ πνμθίκδξ, α-βθοημονμκζδάζδξ, α-βαθαηημζζδάζδξ, α-βαθαηημζζδάζδξ, L-ποννμθζδμκοθ-ανοθαιζδάζδξ, ανοθαιζδάζδξ ηδξ αθακίκδξ, ανοθαιζδάζδξ ηδξ ηονμζίκδξ, απμηαναμλοθάζδξ ηδξ θοζίκδξ, απμηαναμλοθάζδξ ηδξ μνκζείκδξ ηαζ μονεάζδξ. Σέθμξ, άθθεξ δμηζιαζίεξ πμο πενζθαιαάκμκηαζ ζηδκ ηάνηα είκαζ μ έθεβπμξ ακάπηολδξ ζε ζοβηέκηνςζδ 6,5% NaCl ηαζ μ έθεβπμξ ακημπήξ ζε πμθοιολίκδ Β, ααηζηναηίκδ, κμαμαζμηίκδ, Ο129 ηαζ μπημπίκδ. ηδκ πανμφζα ιεθέηδ, μ εκμθεαθιζζιυξ ηδξ ηάνηαξ ID-GP βζα ηάεε ζηέθεπμξ, πναβιαημπμζήεδηε πνδζζιμπμζχκηαξ εκαζχνδια εμθενυηδηαξ 0,5 ΜcFarland (ζε 3,0 ml δζαθφιαημξ ΝaCl ζοβηέκηνςζδξ 0,45%) ηαζ ημ απμηέθεζια ηδξ ηαοημπμίδζδξ ήηακ δζαεέζζιμ ιεηά απυ επχαζδ μηηχ πενίπμο ςνχκ ή ηαζ θζβυηενμ ζημοξ 35 o C ημο μνβάκμο. Β.4 Σαπηνπνίεζε κε ην ζύζηεκα Phoenix (Becton Dickinson) Σελίδα 99

100 Ζ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ ιε ημ Phoenix πναβιαημπμζήεδηε ιε ημ πάκεθ PMIC/ID-53 (βζα gram εεηζημφξ ηυηημοξ) ηαζ ηδκ έηδμζδ V5.10A/V4.23D ημο θμβζζιζημφ ημο ζοζηήιαημξ. Ζ ηαοημπμίδζδ ιε ημ ζφζηδια αοηυ ααζίγεηαζ ζε ιζα ζεζνά ζοιααηζηχκ, θεμνζζιμβυκςκ ηαζ πνςιμβυκςκ, αζμπδιζηχκ ελεηάζεςκ ηαηά ηζξ μπμίεξ δ πνήζδ ηαζ δ δζάζπαζδ απυ ηα ιζηνυαζα ζοβηεηνζιέκςκ οπμζηνςιάηςκ, ηαεχξ ηαζ δ ακημπή ημοξ ζε ακηζαζμηζηέξ μοζίεξ, ακζπκεφμκηαζ απυ δζάθμνα ζοζηήιαηα δεζηηχκ. οβηεηνζιέκα, ιε ημ πάκεθ ηςκ gram εεηζηχκ ηυηηςκ εθέβπεηαζ δ εκγοιαηζηή οδνυθοζδ ηδξ α-d-ηεθθμαζμζίδδξ, L-αθακίκδξ, α-d-βθοημζζδίμο, L- πνμθίκδξ, L-ποννμβθμοηαιζημφ, L-θαζκοθαθακίκδξ, L-ηνοπημθάκδξ, θςζθμνζημφ, ιεεεζμκίκδξ, α-d-βθοημζζδίμο, ανβζκίκδξ-ανβζκίκδξ, βθοηίκδξ-πνμθίκδξ, α-d-βθοημονμκίδδξ, L-θεοηίκδξ, N- αηεηοθ-α-d-βθοημγαιίκδξ, L-ανβζκίκδξ, L-ζζηζδίκδξ, L-ζζμθεοηίκδξ, α-d-βαθαηημγίηδ, αθακίκδξαθακίκδξ, L-πνμθίκδξ, ααθίκδξ-αθακίκδξ, α-d-βθοημζζδίμο, μονίαξ ηαζ εζημοθίκδξ, ηαεχξ ηαζ δ ακημπή ζηδκ ημθζζηίκδ ηαζ πμθοιολίκδ Β. Δπίζδξ εθέβπεηαζ δ πνήζδ ςξ πδβχκ άκεναηα ημο D- βθοημκζημφ, 3-ιεεοθ-βθμοηανζημφ, D-θνμοηηυγδξ, ζιζκμδζαηεηζημφ, α-ηεημβθμοηανζημφ, D- ιακκζηυθδξ, 3-ιεεοθ-αδζπζημφ ηαζ εοιζδίκδξ, ηαεχξ ηαζ δ παναβςβή μλέμξ απυ ημοξ οδαηάκεναηεξ D-βεκηζμαζυγδ, D-ζαηπανυγδ, ιαθημηνζυγδ, Ν-αηεηοθ-βθοημγαιίκδ, D-ηνεπαθυγδ, D-ηαβηαηυγδ, ιαθηυγδ ηαζ δεληνυγδ. Δηηυξ απυ ημ ηαεζενςιέκμ πνςηυημθθμ ηαοημπμίδζδξ (βζα ημ μπμίμ απαζηείηαζ εκαζχνδια ημο ζηεθέπμοξ εμθενυηδηαξ 0,5 McFarland), δμηζιάζηδηε ηαζ ημ κευηενμ πνςηυημθθμ πμο πνμηείκεηαζ απυ ηδκ εηαζνεία, πνδζζιμπμζχκηαξ εκαζχνδια εμθενυηδηαξ 0,25 McFarland. Ο εκμθεαθιζζιυξ ηςκ πάκεθ έβζκε ιε ηα ηαηάθθδθα εκαζςνήιαηα (ηα μπμία παναζηεοάζηδηακ ιε ημ γςιυ ηαοημπμίδζδξ, ID Βroth, πμο ηα ζοκμδεφεζ), ζφιθςκα ιε ηζξ μδδβίεξ ημο ηαηαζηεοάζηνζαξ εηαζνείαξ ηαζ μζ ηαοημπμζήζεζξ ζε επίπεδμ είδμοξ πνμέηορακ ιεηά απυ επχαζδ βζα πενίπμο ηνεζξ έςξ ηέζζενζξ χνεξ ζηδ εενιμηναζία ηςκ 35 o C ημο μνβάκμο. Β.5 Αλάιπζε ηωλ απνηειεζκάηωλ ηαπηνπνίεζεο Θεςνχκηαξ ςξ μνζζηζηή ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ πμο πνμέηορε απυ ηδκ RFLP ακάθοζδ ημο βμκζδίμο tuf ηαζ ημκ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο 16S rrna (βζα ηα είδδ S. epidermidis, S. hominis, S. sciuri ηαζ S. lugdunensis), ηαεέκα απυ ηα απμηεθέζιαηα πμο πανείπακ ηα δφμ αοημιαημπμζδιέκα ζοζηήιαηα ηαηαηάπεδηε ζε ιία απυ ηζξ παναηάης ηαηδβμνίεξ: ζςζηή ηαοημπμίδζδ (ίδζα ιε αοηή ηδξ ιμνζαηήξ ιεευδμο), θακεαζιέκδ ηαοημπμίδζδ (ζε αζοιθςκία ιε ηδ ιμνζαηή ιέεμδμ) ηαζ ιδ ηαοημπμίδζδ. Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ιε ημ Vitek 2, υπςξ επίζδξ ηαζ Σελίδα 100

101 ιε ημ πνςηυημθθμ παιδθμφ εκαζςνήιαημξ (0,25 McFarland) ημο Phoenix, πνμέηορακ απμηεθέζιαηα ηαοημπμίδζδξ «παιδθήξ δζάηνζζδξ» ιεηαλφ δφμ ή πενζζζυηενςκ εζδχκ, βζα ηδκ μνζζηζημπμίδζδ ηςκ μπμίςκ πνμηεζκυηακ απυ ημ ακηίζημζπμ ζφζηδια δ δζεκένβεζα απθχκ ζοιπθδνςιαηζηχκ δμηζιαζζχκ. ηδκ πανμφζα ιεθέηδ, ηα απμηεθέζιαηα «παιδθήξ δζάηνζζδξ» παναηηδνίζηδηακ ςξ ζςζηέξ ηαοημπμζήζεζξ, ακ ηα πζεακά είδδ ζοιπενζθάιαακακ ηαζ ημ ζςζηυ είδμξ ηαζ ςξ ιδ ηαοημπμζήζεζξ ζηδκ ακηίεεηδ πενίπηςζδ. ηζξ πενζπηχζεζξ πμο μζ ηαοημπμζήζεζξ ιε μπμζμδήπμηε απυ ηα πνςηυημθθα Phoenix ή ιε ημ Vitek 2 ήηακ δζαθμνεηζηέξ απυ αοηέξ ηδξ ιμνζαηήξ ιεευδμο ακαθμνάξ, ηα ακηίζημζπα ζηεθέπδ επακελεηάζηδηακ ιε ημ ζφζηδια απυ ημ μπμίμ πνμέηορε δ αζοιθςκία (μζ επακαθήρεζξ ιε ημ Phoenix βίκμκηακ πάκηα ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα), χζηε κα απμηθεζζηεί δ πζεακυηδηα ηεπκζημφ θάεμοξ. Ζ ζηαηζζηζηή ζδιακηζηυηδηα ηςκ απμηεθεζιάηςκ ζφβηνζζδξ ηςκ ιεευδςκ (ακά γεφβδ) εηηζιήεδηε ιε ηδ δμηζιαζία π 2 (Stata 8.0 software; Stata-Corp, College Station, TX). Γ. Αλάπηπμε κεζνδνινγίαο PCR γηα ηελ ηαπηνπνίεζε ηνπ είδνπο S. lugdunensis. Γ.1 Δπηινγή ηνπ γνληδίνπ-ζηόρνπ Ωξ ηαηάθθδθμξ βεκεηζηυξ ζηυπμξ βζα ηδκ εζδζηή ηαοημπμίδζδ ημο S. lugdunensis ιε ηδ ιέεμδμ ηδξ PCR, επζθέπεδηε ημ βμκίδζμ fbl. Σμ ακμζηηυ πθαίζζμ ακάβκςζδξ ημο βμκζδίμο αοημφ, ιήημοξ κμοηθεμηζδίςκ, ηςδζημπμζεί ηδκ μιχκοιδ πνςηεΐκδ ζφκδεζδξ ιε ημ ζκςδμβυκμ ημο S. lugdunensis Fbl, ιεβέεμοξ 881 αιζκμλέςκ. Ζ Fbl πανμοζζάγεζ μιμζυηδηεξ αθθδθμοπίαξ ηαζ δμιζηήξ μνβάκςζδξ ιε ημκ πανάβμκηα ζοβηυθθδζδξ ClfA ημο S. aureus, ιε ημκ μπμίμ (υπςξ ηαζ ιε άθθεξ ζηαθοθμημηηζηέξ πνςηεΐκεξ επζθακείαξ) ακήηεζ ζηδκ μζημβέκεζα Sdr (μκμιάγεηαζ έηζζ βζαηί πενζθαιαάκεζ ιυνζα πμο θένμοκ επακαθήρεζξ ηαηαθμίπςκ ζενίκδξ ηαζ αζπανηζημφ). H πνςηεΐκδ Fbl ζοκδέεηαζ ζηδκ ίδζα πενζμπή ημο ηαναμλοηεθζημφ άηνμο ηδξ β-αθοζίδαξ ημο ζκςδμβυκμο, υπςξ ηαζ μ πανάβμκηαξ ClfA, ακ ηαζ ιε, ηαηά δέηα θμνέξ πενίπμο, ιζηνυηενδ ζοββέκεζα. ε ακηζζημζπία ιε ημκ ClfA, δ πνςηεΐκδ Fbl θένεζ έκα ζδιαημδμηζηυ πεπηίδζμ 40 αιζκμλέςκ, πμο πενζέπεζ ημ, απαναίηδημ βζα ηδκ απμηεθεζιαηζηή ηδξ έηηνζζδ, ιμηίαμ YSIRK- G/S (ηονμζίκδ-ζενίκδ-ζζμθεοηίκδ-ανβζκίκδ-θοζίκδ-βθοηίκδ/ζενίκδ). Αημθμοεεί δ πενζμπή Α, ιεβέεμοξ 494 αιζκμλέςκ, πμο ζοκδέεηαζ ιε ημ ζκςδμβυκμ ηαζ ζηδ ζοκέπεζα ημ ηιήια R, 270 αιζκμλέςκ, ημ μπμίμ θένεζ επακαθήρεζξ ημο ελαπεπηζδίμο SDSDSA (ζενίκδ-αζπανηζηυ-ζενίκδ- Σελίδα 101

102 αζπανηζηυ-ζενίκδ-αθακίκδ), ημ μπμίμ δζαπενκχκηαξ ημ ηοηηανζηυ ημίπςια αμδεά ζηδκ έηηαζδ ηδξ πενζμπήξ Α έλς απυ ηδ ααηηδνζαηή επζθάκεζα. Σμ ηαναμλοηεθζηυ άηνμ ηαζ ηςκ δφμ πνςηεσκχκ, απμηεθείηαζ απυ ιζα αθθδθμοπία ζφκδεζδξ ιε ημ ηοηηανζηυ ημίπςια (ιμηίαμ LPXTG, θεοηίκδ-πνμθίκδ-απνμζδζυνζζημ αιζκμλφ-ενεμκίκδ-βθοηίκδ), έκα οδνυθμαμ δζαιειανακζηυ ηιήια ηαζ, ηέθμξ, ιζα ζεζνά εεηζηά θμνηζζιέκςκ ηαηαθμίπςκ, υθα ηοπζηά παναηηδνζζηζηά ηςκ επζθακεζαηχκ ιμνίςκ ηςκ gram εεηζηχκ ααηηδνίςκ. Δζδζηά βζα ηδκ πενζμπή Α ηςκ Fbl ηαζ ClfA, είκαζ βκςζηυ υηζ απμηεθείηαζ απυ ηνία επζιένμοξ ηιήιαηα: Ν1 (ηαηάθμζπα ), Ν2 (ηαηάθμζπα ) ηαζ Ν3 (ηαηάθμζπα ). Σα ηιήιαηα πμο ηονίςξ δζαιεζμθααμφκ ηδ ζφκδεζδ ιε ημ ζκςδμβυκμ είκαζ ηα Ν2 ηαζ Ν3, ηα μπμία ηαζ πανμοζζάγμκηαζ πενζζζυηενμ ζοκηδνδιέκα ιεηαλφ ηςκ πνςηεσκχκ ιε μιμζυηδηα πμο θεάκεζ ημ 60%. Μάθζζηα, ηα αιζκμλζηά ηαηάθμζπα πμο απαζημφκηαζ βα ηδ ζφκδεζδ ζημκ πανάβμκηα ClfA (P{πνμθίκδ}336, Y{ηονμζίκδ}338, K{θοζίκδ}389, I{ζζμθεοηίκδ}387, Y{ηονμζίκδ}256, A{αθακίκδ}254, E{βθμοηαιζηυ}526, V{ααθίκδ}527) ακεονίζημκηαζ ζοκηδνδιέκα ηαζ ζηδκ πνςηεΐκδ Fbl. ε ακηίεεζδ ιε ηα Ν2 ηαζ Ν3, ημ ηιήια Ν1 ηδξ πενζμπήξ Α, δε δζαεέηεζ λεηάεανδ θεζημονβία ηαζ είκαζ ιυκμ ηαηά 19% υιμζμ ιεηαλφ ηςκ δφμ πνςηεσκχκ (Δζηυκα 6) (Mitchell, Tristan et al. 2004; Nilsson, Bjerketorp et al. 2004). Γ.2 ρεδηαζκόο ηωλ εθθηλεηηθώλ κνξίωλ Ζ ιμκαδζηή δζαεέζζιδ αθθδθμοπία ημο fbl βμκζδίμο ζηδκ ηνάπεγα κμοηθεμηζδζηχκ αημθμοεζχκ GenBank (Accession Number AF404823) πνδζζιμπμζήεδηε βζα ημ ζπεδζαζιυ ηςκ εηηζκδηχκ ηδξ PCR. Με αάζδ ηα υζα ακαθένεδηακ, επζθέπεδηε ςξ ηαηαθθδθυηενμ ημ ηιήια ημο fbl πμο εηηείκεηαζ ιεηαλφ ηςκ κμοηθεμηζδίςκ 1 έςξ 1020 ηαζ ακηζζημζπεί ζημ ανπζηυ ζδιαημδμηζηυ πεπηίδζμ ηαζ ζηα ηιήιαηα Ν1 ηαζ Ν2 ηδξ Α πενζμπήξ ζφκδεζδξ ιε ημ ζκςδμβυκμ. Ο ζπεδζαζιυξ ηςκ εηηζκδηχκ πναβιαημπμζήεδηε ιε ημ θμβζζιζηυ Primer3 ( ηζξ παναιέηνμοξ ημο πνμβνάιιαημξ, δ πνμηζιχιεκδ εενιμηναζία οανζδζζιμφ μνίζηδηε ιεηαλφ 45 o C ηαζ 55 o C ηαζ ημ πενζεπυιεκμ ζε βμοακίκδ ηαζ ηοημζίκδ νοειίζηδηε ζημ 55%. Απυ ηα πνμηεζκυιεκα γεφβδ εηηζκδηχκ, επζθέπεδηακ ηα μθζβμκμοηθεμηίδζα Fbl1 (5 -CCGATGTATCACCTGCAACG-3 ) ηαζ Fbl2 (5 -ACATCATCTGGGGCTTGG-3 ), βζα ημκ πμθθαπθαζζαζιυ ηιήιαημξ ιήημοξ 390 bp ημο βμκζδίμο fbl ιεηαλφ ηςκ κμοηθεμηζδίςκ 433 έςξ 823. Γζα ημκ απμηθεζζιυ ιδ εζδζηχκ πνμσυκηςκ πμθθαπθαζζαζιμφ, ηα δφμ εηηζκδηζηά Σελίδα 102

103 ιυνζα εθέβπεδηακ ζοβηνζηζηά ιε υθεξ ηζξ δζαεέζζιεξ κμοηθεμηζδζηέξ αθθδθμοπίεξ ηδξ GenBank ιε ημ θμβζζιζηυ BLAST ( Γ.3 ρεδηαζκόο ηεο PCR γηα ηνλ πνιιαπιαζηαζκό ηνπ ηκήκαηνο-ζηόρνπ ηνπ fbl γνληδίνπ Γζα ηδ αεθηζζημπμίδζδ ηςκ ζοκεδηχκ ηδξ ακηίδναζδξ δμηζιάζηδηακ βζα ηα εηηζκδηζηά ιυνζα δφμ ζοβηεκηνχζεζξ (20 pmol ηαζ 50 pmol) ηαζ πέκηε εενιμηναζίεξ οανζδζζιμφ (58,0 o C, 56,4 o C, 54,8 o C, 51,5 o C ηαζ 50,0 o C). Ακαθοηζηά, ηα 50 ιl ημο υβημο ηδξ ακηίδναζδξ πενζείπακ 5 ιl ημο εηποθζζιέκμο DNA, 2.5 U Taq DNA πμθοιενάζδξ (Qiagen), 10x PCR buffer (Qiagen), 2 mm MgCl 2 (Qiagen), 25 mm ηάεε ηνζθςζθμνζημφ δεμλοκμοηθεμζζδίμο (Invitrogen) ηαζ ιία εη ηςκ ζοβηεκηνχζεςκ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ. Ακηίζημζπα, μζ ζοκεήηεξ ηδξ ακηίδναζδξ πενζεθάιαακακ: ανπζηή απμδζάηαλδ βζα 10 min ζημοξ 94 o C, ζηδ ζοκέπεζα 35 ηφηθμοξ ιε απμδζάηαλδ βζα 30 sec ζημοξ 95 o C, οανζδζζιυ βζα 30 sec ζε ηάεε εενιμηναζία οανζδζζιμφ ηαζ επέηηαζδ βζα 30 sec ζημοξ 72 o C ηαζ έκα ηεθζηυ αήια επέηηαζδξ ηςκ 10 min ζημοξ 72 o C. Σα πνμσυκηα ηδξ ακηίδναζδξ ακζπκεφεδηακ ιε δθεηηνμθυνδζδ ζε 2% βέθδ αβανυγδξ (Biotools). Γ.4 Αμηνιόγεζε δηαγλωζηηθήο επαηζζεζίαο θαη εηδηθόηεηαο ηεο αληίδξαζεο Γζα κα επζαεααζςεεί δ πανμοζία ημο fbl ζε υθα ηα ζηεθέπδ ημο είδμοξ S. lugdunensis, ημ βμκίδζμ ακαγδηήεδηε ζε 16 ηθζκζηά ζηεθέπδ, ηα μπμία είπακ απμιμκςεεί απυ ηέζζενζξ ηαθθζένβεζεξ αίιαημξ, δέηα ηαθθζένβεζεξ πφμο, ιία μονμηαθθζένβεζα ηαζ ιία ηαθθζένβεζα ηαεεηήνα, ακηίζημζπα. Ο παναηηδνζζιυξ ηςκ ζηεθεπχκ αοηχκ ςξ S. lugdunensis είπε πναβιαημπμζδεεί ιε RFLP ακάθοζδ ημο βμκζδίμο tuf ηαζ ιε ιενζηυ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο 16S rrna, υπςξ πενζβνάθδηε. ηδ ιεθέηδ ζοιπενζθήθεδηε ηαζ ημ πνυηοπμ ζηέθεπμξ S. lugdunensis ATCC Με ζηυπμ κα απμηθεζζηεί μ πμθθαπθαζζαζιυξ ιδ εζδζηχκ πνμσυκηςκ απυ άθθα ζηαθοθμημηηζηά είδδ, αθθά ηαζ βέκδ gram εεηζηχκ ηαζ ανκδηζηχκ ααηηδνίςκ, δ ακηίδναζδ δμηζιάζηδηε ζε 70 ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ (17 S. aureus, 20 S. epidermidis, 10 S. hominis, 8 S. cohnii, 8 S. haemolyticus, 4 S. saprophyticus, 2 S. sciuri and 1 S. simulans) ηαζ έκα ζηέθεπμξ απυ ηαεέκα απυ ηα παναηάης είδδ: E. casseliflavus/gallinarum, E. faecium, E. faecalis, S. pyogenes, S. pneumoniae, S. agalactiae, E. coli, K. pneumoniae, K. oxytoca, P. aeruginosa, A. baumanni, P. Σελίδα 103

104 vulgaris, S. maltophilia, E. cloacae, C. koseri, M. morganii ηαζ S. marcescens (Πίκαηαξ 4). Σα ζηεθέπδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ είπακ ηαοημπμζδεεί ιε ακάθοζδ RFLP ημο βμκζδίμο tuf, εκχ ηα ζηεθέπδ ηςκ οπμθμίπςκ εζδχκ ιε ημ αοημιαημπμζδιέκμ ζφζηδια Phoenix 100 (Becton Dickinson). Δπζπθέμκ ελεηάζηδηακ ηαζ ηα πνυηοπα ζηεθέπδ S. aureus ATCC 25923, S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC 43300, S. epidermidis ATCC 12228, S. haemolyticus ATCC 29970, S. saprophyticus ATCC 49453, S. simulans ATCC 27851, S. capitis subsp. capitis ATCC 35661, S. warneri ATCC 49454, S. xylosus ATCC ηαζ S. sciuri subsp. sciuri ATCC Γ.5 Γνθηκαζία παξαγωγήο ζπλδεδεκέλεο θναγθνπιάζεο Σα 16 ηθζκζηά ηαζ ημ πνυηοπμ ζηέθεπμξ S. lugdunensis ελεηάζηδηακ ιε ηδ δμηζιαζία latex BBL Staphyloslide Latex test (Becton Dickinson) βζα ημκ έθεβπμ παναβςβήξ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ. Ζ δμηζιαζία είκαζ ζπεδζαζιέκδ βζα ηδκ ακίπκεοζδ ηδξ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ ή/ηαζ ηδξ επζθακεζαηήξ πνςηεΐκδξ A ημο S. aureus. ηδ ιέεμδμ πνδζζιμπμζμφκηαζ ιπθε ζςιαηίδζα latex ηαθοιιέκα ιε ακενχπζκμ ζκςδμβυκμ ηαζ IgG, ηα μπμία πανάβμοκ μναηή ζοβηυθθδζδ πανμοζία ηςκ δφμ παναπάκς πνςηεσκχκ (μ πανάβμκηαξ ζοβηυθθδζδξ ζοκδέεηαζ ιε ημ ζκςδμβυκμ ηαζ δ πνςηεΐκδ Α ιε ημ Fc ηιήια ηδξ ακμζμζθαζνίκδξ IgG). Ζ δμηζιαζία εηηεθέζηδηε ζφιθςκα ιε ηζξ μδδβίεξ ηδξ ηαηαζηεοάζηνζαξ εηαζνείαξ. Ακαθοηζηά, ιζηνυξ ανζειυξ απμζηζχκ (πενίπμο 5) ηάεε ζηεθέπμοξ μιμβεκμπμζήεδηε λεπςνζζηά ιε ηα ακηζδναζηήνζα Test Latex ηαζ Control Latex ηαζ, ιεηά απυ ήπζα ακαηίκδζδ, δ πανμοζία ζοβηυθθδζδξ αλζμθμβήεδηε ζηα 20 sec. Tμ απμηέθεζια ηαηαβνάθδηε ςξ εεηζηυ βζα ηα ζηεθέπδ πμο, ζημ πνυκμ αοηυ, πανήβαβακ ζοβηυθθδζδ (ιε ηδκ ειθάκζζδ ιζηνυηενςκ ή ιεβαθφηενςκ ζοζζςιαηςιάηςκ) ηαζ ηαοηυπνμκδ δζαφβαζδ ημο ιπθε θυκημο ημο εκαζςνήιαημξ ιε ημ Test Latex, πςνίξ ηαιία ιεηααμθή ημο εκαζςνήιαημξ ιε ημ Control Latex. Ακηίζημζπα, ανκδηζηά ζηδ δμηζιαζία αοηή εεςνήεδηακ ηα ζηεθέπδ βζα ηα μπμία δεκ ηαηαβνάθδηε ηαιία ιεηααμθή ημο εκαζςνήιαημξ ηαζ ηςκ δφμ ακηζδναζηδνίςκ. Καηά ηδκ εηηέθεζδ ηδξ ιεευδμο, ηα πνυηοπα ζηεθέπδ S. aureus ATCC ηαζ S. epidermidis ATCC πνδζζιμπμζήεδηακε ςξ εεηζηυξ ιάνηοναξ ηαζ ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, ακηίζημζπα. Σελίδα 104

105 Γ. Αλάπηπμε πνιππιεθηηθήο PCR γηα ηελ ηαπηόρξνλε αλίρλεπζε ηνπ γνληδίνπ meca θαη νθηώ εηδώλ ζηαθπινθόθωλ Γ.1.1 ηειέρε πνπ εμεηάζζεθαλ Γζα ηδκ επζηφνςζδ ημο πνςημηυθθμο ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR ελεηάζεδηακ 243 ααηηδνζαηά ζηεθέπδ απυ 19 gram εεηζηά είδδ (ζοιπενζθαιαακμιέκςκ 13 εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ) ηαζ 11 gram ανκδηζηά είδδ. Υνδζζιμπμζήεδηακ 223 ηθζκζηά ζηεθέπδ πμο πενζεθάιαακακ 67 ζηεθέπδ S. aureus, 73 S. epidermidis, 18 S. lugdunensis, 16 S. haemolyticus, δέηα S. hominis, μηηχ S. cohnii, έλζ S. saprophyticus, ηέζζενα S. capitis, δφμ S. simulans, δφμ S. sciuri, έκα E. faecium, έκα E. faecalis, έκα E. casseliflavus/gallinarum, έκα S. pyogenes, έκα S. pneumoniae, έκα S. agalactiae, έκα E. coli, έκα K. pneumoniae, έκα K. oxytoca, έκα P. aeruginosa, έκα A. baumanni, έκα P. vulgaris, έκα S. maltophilia, έκα E. cloacae, έκα C. koseri, έκα M. morganii ηαζ έκα S. marcescens. Απυ ηα ζηεθέπδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ, 29 ζηεθέπδ S. aureus, 49 ζηεθέπδ S. epidermidis, 14 ζηεθέπδ S. haemolyticus ηαζ ηέζζενα ζηεθέπδ S. hominis ήηακ ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ. Δπζπνυζεεηα ιεθεηήεδηακ ηα αηυθμοεα 20 πνυηοπα ζηεθέπδ: S. aureus ATCC 25923, S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC (ακεεηηζηυ ζηδ ιεεζηζθθίκδ), S. epidermidis ATCC 12228, S. haemolyticus ATCC 29970, S. hominis ATCC 27844, S. lugdunensis ATCC , S. saprophyticus ATCC 49453, S. simulans ATCC 27851, S. capitis subsp. capitis ATCC 35661, S. warneri ATCC 49454, S. xylosus ATCC 29971, S. sciuri subsp. sciuri ATCC 29060, S. schleiferi subsp. schleiferi ATCC 43808, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, S. agalactiae ATCC 13286, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC ηαζ P. aeruginosa ATCC Γ.1.2 Σαπηνπνίεζε ηωλ θιηληθώλ ζηειερώλ πνπ εμεηάζηεθαλ θαη θαζνξηζκόο ηεο αληνρήο ηωλ ζηαθπινθόθθωλ ζηε κεζηθηιιίλε Σα ζηεθέπδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαοημπμζήεδηακ, υπςξ ήδδ ακαθένεδηε, ιε ακάθοζδ RFLP ημο βμκζδίμο tuf, εκχ δ ηαοημπμίδζδ ηςκ εζδχκ S. epidermidis, S. hominis, S. sciuri ηαζ S. lugdunensis επζαεααζχεδηε ηαζ ιε πνμζδζμνζζιυ ηιήιαημξ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο 16S rrna βμκζδίμο. Tα ζηεθέπδ ηςκ ζηνεπημηυηηςκ, ηςκ εκηενμηυηηςκ ηαζ ηςκ gram ανκδηζηχκ εζδχκ Σελίδα 105

106 ιεηά ημκ πνμηαηανηηζηυ έθεβπμ ηδξ ιμνθμθμβίαξ ημοξ ιε πνχζδ gram, ηαοημπμζήεδηακ ιε ημ αοημιαημπμζδιέκμ ζφζηδια Phoenix (Becton Dickinson), πνδζζιμπμζχκηαξ ηα πάκεθ PMIC/ID- 53 ηαζ NMIC/ID-62 βζα ηα gram εεηζηά ηαζ gram ανκδηζηά, ακηίζημζπα. Ζ ακημπή ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ εθέβπεδηε ιε PCR βζα ηδκ ακίπκεοζδ ηιήιαημξ ημο βμκζδίμο meca ιήημοξ 533 bp, ζφιθςκα ιε ημ πνςηυημθθμ πμο πενζβνάθδηε πνμδβμοιέκςξ. Γ.2 ρεδηαζκόο ηνπ πξωηνθόιινπ ηεο πνιππιεθηηθήο PCR Σμ πνςηυημθθμ ηδξ πμθοπθεηηζηήξ αθοζζδςηήξ ακηίδναζδξ πμθοιενάζδξ ζπεδζάζηδηε βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ εζδχκ S. aureus, S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, S. saprophyticus, S. lugdunensis, S. capitis ηαζ S. simulans, ηαεχξ ηαζ βζα ηδκ ηαοηυπνμκδ ακίπκεοζδ ηιήιαημξ ημο βμκζδίμο meca. Γζα ηα είδδ S. aureus ηαζ S. saprophyticus ζημπεφεδηε ημ βμκίδζμ fema (Vannuffel, Heusterspreute et al. 1999), βζα ημκ S. lugdunensis ζημπεφεδηε ημ βμκίδζμ fbl (Chatzigeorgiou, Siafakas et al. 2010), βζα ηα είδδ S. haemolyticus, S. capitis ηαζ S. simulans ζημπεφεδηε ημ βμκίδζμ sodα (Blaiotta, Casaburi et al. 2005; Iwase, Seki et al. 2007), έκα πνςιμζςιζηυ ηιήια άβκςζηδξ ηςδζηήξ ζδιαζίαξ ζημπεφεδηε βζα ημκ S. epidermidis (Martineau, Picard et al. 1996) ηαζ ηιήια ημο 16S rrna βμκζδίμο ζημπεφεδηε βζα ημ είδμξ S. hominis (Gribaldo, Cookson et al. 1997). Aπυ ημ βμκίδζμ meca πμθθαπθαζζάζηδηε έκα ηιήια ιήημοξ 533 bp (Murakami, Minamide et al. 1991). Οζ αθθδθμοπίεξ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ πμο πνδζζιμπμζήεδηακ βζα ηα δζαθμνεηζηά είδδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ βζα ημ mecα, ηα ακηίζημζπα βμκίδζα-ζηυπμζ ηαζ ηα ακαιεκυιεκα ιεβέεδ ηςκ πνμσυκηςκ ηδξ ακηίδναζδξ θαίκμκηαζ ζημκ πίκαηα 5. Μία πνμζέββζζδ δμηζιήξ-θάεμοξ (trial-error approach) ιεηααάθμκηαξ ηδ εενιμηναζία οανζδζζιμφ ηαζ ηζξ ζοβηεκηνχζεζξ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ, εθανιυζηδηε βζα ηδ αεθηζζημπμίδζδ ηςκ ζοκεδηχκ ηδξ ακηίδναζδξ. Οζ αέθηζζηεξ ζοκεήηεξ ηδξ ακηίδναζδξ, ηεθζηά, ηαεμνίζηδηακ ςξ ελήξ: ανπζηή απμδζάηαλδ ζημοξ 95 o C βζα 10 min, ζηδ ζοκέπεζα 40 ηφηθμζ πμο πενζεθάιαακακ απμδζάηαλδ βζα 30 sec ζημοξ 94 o C, οανζδζζιυ βζα 30 sec ζημοξ 45 o C ηαζ επζιήηοκζδ βζα 60 sec ζημοξ 72 o C ηαζ έκα ηεθζηυ αήια επέηηαζδξ βζα 10 min ζημοξ 72 o C.Σα 50 ιl ημο υβημο ηδξ ακηίδναζδξ πενζείπακ 5 ιl εηποθζζιέκμο DNA, 2.5 U HotStar Taq DNA πμθοιενάζδξ (Qiagen), Σελίδα 106

107 10x PCR buffer (Qiagen), 250 ιμ ηάεε ηνζθςζθμνζημφ δεμλοκμοηθεμζζδίμο (Invitrogen), 2 mm MgCl 2 (Qiagen) ηαζ 10 pmol ηαεεκυξ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ. Σα πνμσυκηα ηδξ ακηίδναζδξ ακζπκεφεδηακ ιε δθεηηνμθυνδζδ ζε 3% βέθδ αβανυγδξ ορδθήξ πμζυηδηαξ (FMC Bioproducts). Δ. Δθαξκνγή ηνπ πξωηνθόιινπ ηεο πνιππιεθηηθήο PCR ζε δείγκαηα ζεηηθώλ αηκνθαιιηεξγεηώλ Δ.1 Αμηνιόγεζε πέληε κεζόδωλ εθρύιηζεο βαθηεξηαθνύ γελεηηθνύ πιηθνύ από θηάιεο ζεηηθώλ αηκνθαιιηεξγεηώλ Γζα ηδκ απεοεείαξ εθανιμβή ηδξ πμθοπθεηηζηήξ αθοζζδςηήξ ακηίδναζδξ πμθοιενάζδξ ζε θζάθεξ αζιμηαθθζενβεζχκ εεηζηχκ βζα ζηαθοθμηυηημοξ, πνμδβήεδηε ακαγήηδζδ ηαηάθθδθδξ ιεευδμο εηπφθζζδξ ααηηδνζαημφ βεκεηζημφ οθζημφ απυ ημοξ γςιμφξ ηςκ ακηίζημζπςκ θζαθχκ. Γζα ημ ζημπυ αοηυ, πέκηε πνςηυημθθα εηπφθζζδξ αλζμθμβήεδηακ ςξ πνμξ ηδκ ζηακυηδηά ημοξ κα απμιμκχκμοκ επανηχξ ααηηδνζαηυ βεκεηζηυ οθζηυ ηαζ, ηαοηυπνμκα, κα ελμοδεηενχκμοκ απμηεθεζιαηζηά ηδκ δνάζδ ηςκ υπμζςκ ακαζημθέςκ ηδξ PCR είκαζ πανυκηεξ ζημοξ γςιμφξ ηςκ ηαθθζενβεζχκ αίιαημξ. ηα πνμηαηανηηζηά πεζνάιαηα πμο δζεκενβήεδηακ, ηνεζξ ειπμνζηά δζαεέζζιεξ θζάθεξ αζιμηαθθζενβεζχκ (Bactec Plus Aerobic/F, Becton Dickinson) εκμθεαθιίζηδηακ ιε 10 ml αίιαημξ οβζμφξ δυηδ ηαζ ηνία, ηοπαία επζθεβιέκα, ηθζκζηά ζηεθέπδ ακεεηηζηχκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ S. aureus (βζα ηα μπμία παναζηεοάζηδηε εκαζχνδια 1x10 8 CFU/mL ζε θοζζμθμβζηυ μνυ ηαζ πνδζζιμπμζήεδηε έκα ml ημο εκαζςνήιαημξ). Αημθμφεςξ, μζ θζάθεξ επςάζηδηακ ζημ αοημιαημπμζδιέκμ ζφζηδια αζιμηαθθζενβεζχκ BACTEC 9240 (Becton Dickinson) ηαζ, αθυημο ζδιάκεδηακ ςξ εεηζηέξ, οπμαθήεδηακ ζε εηπφθζζδ βεκεηζημφ οθζημφ ιε ηαεέκα απυ ηα παναηάης πνςηυημθθα. α) πξωηόθνιιν έθπιπζεο κε αιθαιηθό δηάιπκα θαη ζεξκηθή ιύζε Ανπζηά, 0,5 ml υβημο απυ ηάεε εεηζηή θζάθδ πνμζηέεδηε ζε 1 ml αθηαθζημφ δζαθφιαημξ (πενζεηηζηυηδηαξ 0,5 Μ ζε NaOH ηαζ 0,05 Μ ζε ηζηνζηυ κάηνζμ) ηαζ αημθμφεδζε ήπζα ακάδεοζδ βζα 10 min ζε εενιμηναζία δςιαηίμο. Μεηά απυ θοβμηέκηνδζδ ζηα g βζα 5 min, ημ ίγδια επακαζςνήεδηε ζε 0,5 ml δζαθφιαημξ 0,5 M Tris-HCl (ιε ph 8.0) ηαζ λακαθοβμηεκηνήεδηε ζηα g βζα 5 min. Αημθμφεδζε επακάθδρδ ημο ηεθεοηαίμο αήιαημξ, επακαζχνδζδ ημο ζγήιαημξ ζε 0,1 ml δζαθφιαημξ Tris-EDTA (πενζεηηζηυηδηαξ 10 mμ ζε Tris- Σελίδα 107

108 HCl ηαζ 1 mμ ζε EDTA, ιε ph 8.0) ηαζ εένιακζδ ζημοξ 100 o C βζα ιία χνα. ηδ ζοκέπεζα, ημ δείβια ρφπεδηε ηαζ απμρφπεδηε δφμ θμνέξ ηαζ θοβμηεκηνήεδηε ζηα g βζα 15 min. To οπενηείιεκμ ηδξ θοβμηέκηνδζδξ, πμο πενζείπε ημ απμιμκςεέκ βεκεηζηυ οθζηυ, πνδζζιμπμζήεδηε βζα ηδκ εηηέθεζδ ηδξ PCR (Millar, Jiru et al. 2000). β) πξωηόθνιιν έθπιπζεο ηνπ βαθηεξηαθνύ ηδήκαηνο κε απεζηαγκέλν λεξό Δηαηυ ιl υβημο απυ ηάεε εεηζηή θζάθδ εκμθεαθιίζηδηακ ιε αναίςζδ 1:100 ζε γςιυ εηποθίζιαημξ εβηεθάθμο-ηανδζάξ (brain heart infusion broth) ηαζ επςάζηδηακ βζα 45 min ζημοξ 35 o C. Μεηά απυ δφμ θοβμηεκηνήζεζξ, ζηα g βζα 5 min (βζα ηδκ απμιάηνοκζδ ηςκ ενοενχκ αζιμζθαζνίςκ) ηαζ ζηδ ζοκέπεζα ζηα g βζα 5 min, ημ οπενηείιεκμ απμννίθεδηε. Αημθμφεδζακ δφμ εηπθφζεζξ ημο ααηηδνζαημφ ζγήιαημξ ιε κενυ, ιεηά ηζξ μπμίεξ αοηυ επακαζςνήεδηε ζε 50 ιl δζαθφιαημξ θοζμζηαθίκδξ (ζοβηέκηνςζδξ 100 ιg/ml) ηαζ επςάζηδηε ζημοξ 37 o C βζα 10 min. ηδ ζοκέπεζα, πνμζηέεδηακ 50 ιl δζαθφιαημξ πνςηεσκάζδξ Κ (ζοβηέκηνςζδξ 100 ιg/ml) ηαζ 150 ιl δζαθφιαημξ 0.1 M Tris (ιε ph 7,5), ημ δείβια επςάζηδηε ζημοξ 37 o C βζα 10 min ηαζ ηεθζηά ημπμεεηήεδηε βζα 5 min ζε οδαηυθμοηνμ ζε εενιμηναζία αναζιμφ. Σμ οθζηυ αοηυ, πμο πενζείπε ημ απμιμκςεέκ ααηηδνζαηυ βεκεηζηυ οθζηυ, πνδζζιμπμζήεδηε βζα ηδκ εθανιμβή ηδξ PCR (Maes, Magdalena et al. 2002). γ) πξωηόθνιιν έθπιπζεο ηνπ βαθηεξηαθνύ ηδήκαηνο κε βόεην αιβνπκίλε νξνύ (bovine serum albumin, BSA) Ανπζηά, 100 ιl υβημο ηάεε εεηζηήξ θζάθδξ εκμθεαθιίζηδηακ ιε αναίςζδ 1:15 ζε γςιυ εηποθίζιαημξ εβηεθάθμο-ηανδζάξ (brain heart infusion broth) ηαζ επςάζηδηακ βζα 45 min ζε εενιμηναζία 35 o C. Μεηά απυ δφμ θοβμηεκηνήζεζξ, ζηα g βζα 5 min (βζα ηδκ απμιάηνοκζδ ηςκ ενοενχκ αζιμζθαζνίςκ) ηαζ ζηα g βζα 5 min, ημ οπενηείιεκμ απμννίθεδηε. Αημθμφεδζε έηπθοζδ ημο ζγήιαημξ ιε 1 ml απεζηαβιέκμο κενμφ εθεφεενμο κμοηθεαζχκ ηαζ ζηδ ζοκέπεζα έηπθοζδ ιε 1ml δζαθφιαημξ 0,1% BSA (bovine serum albumin), βζα ηδκ απμιάηνοκζδ ηςκ ακαζηαθηχκ ηδξ PCR. Σμ ίγδια δζαθφεδηε ζε 100 ιl δζαθφιαημξ ΣΔ (πενζεηηζηυηδηαξ 10mΜ ζε Tris ηαζ 1mΜ ζε EDTA, ιε ph 7,8) ηαζ εενιάκεδηε ζημοξ 100 o C βζα 10 min. Μεηά απυ θοβμηέκηνδζδ ζηα g βζα 30 sec, ημ οπενηείιεκμ, πμο πενζείπε ημ εηποθζζιέκμ βεκεηζηυ οθζηυ, ζοθθέπεδηε βζα ηδκ PCR (Pereira, Schuenck et al. 2010) δ) πξωηόθνιιν νξγαληθήο εθρύιηζεο κε βελδπιηθή αιθνόιε θαη ζεηνθπαληνύρν γνπαληδίλε Δηαηυ ιl υβημο ηάεε εεηζηήξ θζάθδξ ακαιείπεδηακ ιε 100 ιl δζαθφιαημξ θφζδξ (πενζεηηζηυηδηαξ 4 Μ ζε εεζμηοακζμφπμ βμοακζδίκδ, 0.5% ζε N-lauroyl sarcosine, 1 mm ζε Σελίδα 108

109 dithiothreitol ηαζ 25 mm ζε ηζηνζηυ κάηνζμ) ηαζ αημθμφεδζε πνμζεήηδ 400 ιl κενμφ ηαζ 800 ιl αεκγοθζηήξ αθημυθδξ 99%. Μεηά απυ έκημκδ ακάδεοζδ, ημ δείβια θοβμηεκηνήεδηε ζηα g βζα 5 min ηαζ 400 ιl ημο οδαηχδμοξ οπενηεζιέκμο ιεηαθένεδηακ ζε λεπςνζζηυ ιζηνμζςθδκάνζμ. ηδ ζοκέπεζα, πνμζηέεδηακ 40 ιl δζαθφιαημξ ηζηνζημφ καηνίμο 3,0 Μ ηαζ 440 ιl ζζμπνμπακυθδξ ηαζ αημθμφεδζε θοβμηέκηνδζδ ζηα g βζα 15 min ζημοξ 4 o C. Σμ ίγδια πθφεδηε ιε 70% αζεακυθδ, αθέεδηε κα ζηεβκχζεζ ζημκ αένα ηαζ επακαζςνήεδηε ζε 0,1 ml δζαθφιαημξ Tris- EDTA (ζοβηέκηνςζδξ 10 mμ ζε Tris ηαζ 0,1 mm ζε EDTA, ιε ph 8,5). Σμ οθζηυ αοηυ, πμο πενζείπε ημ απμιμκςεέκ βεκεηζηυ οθζηυ, πνδζζιμπμζήεδηε βζα ηδκ εθανιμβή ηδξ PCR (Fredricks and Relman 1998). ε) High Pure PCR Template Preparation Kit (Roche) Ζ ζοβηεηνζιέκδ ειπμνζηά δζαεέζζιδ ιέεμδμξ εηπφθζζδξ πνδζζιμπμζήεδηε ιε αάζδ ηζξ μδδβίεξ ηδξ ηαηαζηεοάζηνζαξ εηαζνείαξ. Ακαθοηζηά, 200 ιl υβημο ηάεε εεηζηήξ θζάθδξ ακαιείπεδηακ ιε 200 ιl «δζαθφιαημξ πνυζδεζδξ» (Binding Buffer) ηαζ 40 ιl δζαθφιαημξ πνςηεσκάζδξ Κ (ζοβηέκηνςζδξ 20 mg/ml), ακαδεφηδηακ επζζηαιέκα ηαζ επςάζηδηακ βζα 10 min ζημοξ 70 o C. Αημθμφεδζε πνμζεήηδ 100 ιl ζζμπνμπακυθδξ ηαζ πάθζ έκημκδ ακάδεοζδ. ηδ ζοκέπεζα, ημ δείβια ιεηαθένεδηε ζε ζςθδκάνζμ ιε θίθηνμ, ημ μπμίμ ιε ηδ ζεζνά ημο εθανιυζηδηε ζε ηαηάθθδθμ ζςθδκάνζμ ζοθθμβήξ ηαζ θοβμηεκηνήεδηε ζηα g βζα 1 min. Σμ ζςθδκάνζμ ζοθθμβήξ ιε ημ οβνυ πμο ζοβηεκηνχεδηε ιεηά ηδ θοβμηέκηνδζδ απμννίθεδηε ηαζ ημ ζςθδκάνζμ ιε ημ θίθηνμ εθανιυζηδηε ζε ηαζκμφνζμ ζςθδκάνζμ ζοθθμβήξ. Πνμζηέεδηακ 500 ιl δζαθφιαημξ απμιάηνοκζδξ ηςκ ακαζηαθηχκ (Inhibitor Removal Buffer) ηαζ αημθμφεδζε κέα θοβμηέκηνδζδ ζηα g βζα 1 min. Σμ ζςθδκάνζμ ζοθθμβήξ απμννίθεδηε εη κέμο ηαζ δ δζαδζηαζία επακαθήθεδηε βζα αηυια δφμ θμνέξ ιε ηδκ πνμζεήηδ 500 ιl δζαθφιαημξ πθφζδξ (Wash Buffer) ηάεε θμνά. Πναβιαημπμζήεδηε ιζα αηυια θοβμηέκηνδζδ βζα επζπθέμκ 10 sec ζηδ ιέβζζηδ ηαπφηδηα (βζα κα απμιαηνοκεμφκ ηοπυκ οπμθείιιαηα ημο δζαθφιαημξ πθφζδξ) ηαζ ημ ζςθδκάνζμ ιε ημ θίθηνμ εθανιυζηδηε ζε απμζηεζνςιέκμ ζςθδκάνζμ ιζηνμθοβμηέκηνμο. Σεθζηά, πνμζηέεδηακ 200 ιl δζαθφιαημξ έηπθοζδξ ημο DNA (Elution Buffer), ημ μπμίμ είπε πνμεενιακεεί ζημοξ 70 o C ηαζ ημ απμιμκςεέκ βεκεηζηυ οθζηυ ζοθθέπεδηε ιεηά απυ θοβμηέκηνδζδ ζηα g βζα 1 min. Δ.2 Απεπζείαο εθαξκνγή ηεο πνιππιεθηηθήο PCR ζε ηερλεηά ελνθζαικηζκέλεο κε ζηαθπινθόθθνπο αηκνθαιιηέξγεηεο Σελίδα 109

110 οκμθζηά 24 θζάθεξ αζιμηαθθζενβεζχκ (Bactec Plus Aerobic/F, Becton Dickinson) εκμθεαθιίζηδηακ ηεπκδηά ιε δζαθμνεηζηά ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ, επςάζηδηακ ζημ ζφζηδια BACTEC 9240 (Becton Dickinson) ηαζ, αθυημο ζδιάκεδηακ ςξ εεηζηέξ, οπμαθήεδηακ ζε απμιυκςζδ βεκεηζημφ οθζημφ ιε ηδκ μνβακζηή ιέεμδμ εηπφθζζδξ αεκγοθζηήξ αθημυθδξ/εεζμηοακζμφπμο βμοακζδίκδξ, υπςξ πενζβνάθδηε πνμδβμοιέκςξ. Γζα ημκ εκμθεαθιζζιυ ηςκ θζαθχκ πνδζζιμπμζήεδηακ δφμ ηθζκζηά ηαζ ημ ακηίζημζπμ πνυηοπμ ζηέθεπμξ ηαεεκυξ ηςκ μηηχ εζδχκ πμο ζοιπενζθαιαάκμκηαζ ζημ πνςηυημθθμ ηδξ PCR. Γζα ηα είδδ S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus ηαζ S. hominis επζθέπεδηακ ζηεθέπδ ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ. Δ.3 Πξννπηηθή εμέηαζε ζεηηθώλ αηκνθαιιηεξγεηώλ αζζελώλ κε ην πξωηόθνιιν ηεο πνιππιεθηηθήο PCR οκμθζηά, 29 εεηζηέξ αζιμηαθθζένβεζεξ ζζάνζειςκ αζεεκχκ, (13 αενυαζεξ ζε γςιμφξ Βactec Plus Aerobic/F, 12 ακαενυαζεξ ζε γςιμφξ Bactec Plus Anaerobic/F ηαζ ηέζζενζξ παζδζαηνζηέξ ζε γςιμφξ Peds Plus/F ηδξ εηαζνείαξ Becton Dickinson), βζα ηζξ μπμίεξ δ πνχζδ gram ακέδεζλε ηδκ πανμοζία gram εεηζηχκ ηυηηςκ ζε μιάδεξ, ελεηάζηδηακ ιε ημ πνςηυημθθμ ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR, πνδζζιμπμζχκηαξ ηδκ μνβακζηή ιέεμδμ εηπφθζζδξ αεκγοθζηήξ αθημυθδξ/εεζμηοακζμφπμο βμοακζδίκδξ, υπςξ πενζβνάθδηε πνμδβμοιέκςξ. Οζ ίδζεξ θζάθεξ ηαοηυπνμκα, ακαηαθθζενβήεδηακ ζε ζηενεά ενεπηζηά οθζηά (αζιαημφπμ, ζμημθαηυπνςιμ ηαζ MacConkey άβαν) ηαζ ηα ζηεθέπδ πμο ακαπηφπεδηακ ζε αοηά, ιεηά απυ εζημζζηεηνάςνδ επχαζδ, οπμαθήεδηακ ζε ηαοημπμίδζδ ηαζ έθεβπμ εοαζζεδζίαξ ιε ημ αοημιαημπμζδιέκμ ζφζηδια Vitek 2 (biomérieux) ηαζ ηζξ ακηίζημζπεξ ηάνηεξ ID-GP ηαζ AST-P613. Σ. Έιεγρνο απνκόλωζεο δηαδνρηθώλ ζηειερώλ S. lugdunensis: αλάιπζε κηθξνβηνινγηθώλ ραξαθηεξηζηηθώλ θαη θαζνξηζκόο θιηληθήο ζεκαζίαο Σ.1 Αλαδήηεζε ζηειερώλ S. lugdunensis Σελίδα 110

111 Ακαθμνζηά ιε ημ κέμ είδμξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφ ζηαθοθμηυηημο S. lugdunensis, δζεκενβήεδηε ιζα εκδεθεπήξ ακαδνμιζηή ιεθέηδ ζηεθεπχκ ημο είδμοξ, πμο είπακ απμιμκςεεί ζημ Δνβαζηήνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ ημο Πακεπζζηδιζαημφ Γεκζημφ Νμζμημιείμο «ΑΣΣΗΚΟΝ». Ζ ιεθέηδ ζοιπενζέθααε ηυζμ ηδκ ακάθοζδ ηςκ ιζηνμαζμθμβζηχκ ημοξ παναηηδνζζηζηχκ, υζμ ηαζ ηδκ εηηίιδζδ ηδξ ηθζκζηήξ ημοξ ζδιαζίαξ. Απυ ηδκ δθεηηνμκζηή αάζδ δεδμιέκςκ ημο Δνβαζηδνίμο ακαγδηήεδηακ ηα ζηεθέπδ, πμο είπακ ηαοημπμζδεεί ςξ S. lugdunensis απυ ημ ζφζηδια Phoenix (Becton Dickinson), ηαηά ηδ δζάνηεζα πνμκζημφ δζαζηήιαημξ ηνζχκ πενίπμο εηχκ (απυ 1/4/2004 έςξ 1/5/2007). Σα ζηεθέπδ πμο εκημπίζηδηακ, ακαζφνεδηακ απυ ηδ θφθαλή ημοξ (ζε γςιυ βθοηενυθδξ ηαζ εενιμηναζία -40 μ C) ηαζ ακαηαθθζενβήεδηακ δφμ θμνέξ ζε άβαν ηνοπηζηάζδξ-ζυβζαξ ιε 5% αίια πνμαάημο (Becton Dickinson) πνζκ οπμαθδεμφκ ζε πεναζηένς έθεβπμ. Με υθεξ ηζξ ιεευδμοξ, πμο ακαθένμκηαζ παναηάης, ελεηάζηδηε έκα ηοπαία επζθεβιέκμ ζηέθεπμξ ακά αζεεκή (ιε ηδκ ελαίνεζδ ηδξ δθεηηνμθυνδζδξ ζε παθθυιεκμ πεδίμ, ιε ηδκ μπμία ελεηάζηδηακ υθα ηα δζαεέζζια ζηεθέπδ). Σ.2 Μνξηαθή θαη θαηλνηππηθή ηαπηνπνίεζε ηωλ ζηειερώλ Γζα ηδ ιμνζαηή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ πναβιαημπμζήεδηε πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ ηιήιαημξ ημο 16S rrna βμκζδίμο, υπςξ πενζβνάθδηε πνμδβμοιέκςξ. Σμ απμηέθεζια πμο πνμέηορε εεςνήεδηε ςξ μνζζηζηή ηαοημπμίδζδ ημο ζηεθέπμοξ. Ζ θαζκμηοπζηή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ πναβιαημπμζήεδηε ιε ημ ζφζηδια Phoenix 100 (Becton Dickinson) ιε εκαζχνδια εμθενυηδηαξ 0,5 McFarland, υπςξ ήδδ πενζβνάθδηε, ηαεχξ ηαζ ιε ημ διζ-αοημιαημπμζδιέκμ ζφζηδια API Staph (biomérieux). Με ημ ηεθεοηαίμ, δ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ααζίγεηαζ ζε 19 αζμπδιζηέξ δμηζιαζίεξ, πμο πναβιαημπμζμφκηαζ ζηα ιζηνμζςθδκάνζα ηςκ ηαζκζχκ ημο ζοζηήιαημξ, ιεηά ηδκ ακαζφζηαζδ ηςκ αθοδαηςιέκςκ οπμζηνςιάηςκ ιε ηαηάθθδθμ εκαζχνδια ημο οπυ ελέηαζδ ζηεθέπμοξ. οβηεηνζιέκα, ιε ημ ΑPI Staph εθέβπεηαζ δ μλείδςζδ ηδξ D-βθοηυγδξ, D-θνμοηηυγδξ, D- ιακκυγδξ, D-ιαθηυγδξ, D-θαηηυγδξ, D-ηνεπαθυγδξ, D-ιακκζηυθδξ, D-ιεθζαζυγδξ, D- ναθθζκυγδξ, D-λοθυγδξ, D-ζμοηνυγδξ, λοθζηυθδξ, ιεεοθ-α-d-βθοημπονακμζίδδξ ηαζ Ν-αηεηοθβθοημγαιίκδξ, δ ακαβςβή ηςκ κζηνζηχκ, δ οδνυθοζδ ηδξ ανβζκίκδξ, δ πανμοζία αθηαθζηήξ θςζθαηάζδξ, δ παναβςβή αηεηοθ-ιεεοθ-ηαναζκυθδξ ηαζ δ δζάζπαζδ ηδξ μονίαξ. Ο εκμθεαθιζζιυξ ηςκ ηαζκζχκ ημο ζοζηήιαημξ ηαζ δ ακάβκςζδ ηςκ απμηεθεζιάηςκ έβζκακ Σελίδα 111

112 ζφιθςκα ιε ηζξ μδδβίεξ ηδξ ηαηαζηεοάζηνζαξ εηαζνείαξ. οβηεηνζιέκα, βζα ηάεε ζηέθεπμξ παναζηεοάζηδηε εκαζχνδια εμθενυηδηαξ 0,5 McFarland ζημ γςιυ API Staph Medium, ημ μπμίμ πνδζζιμπμζήεδηε βζα ημκ εκμθεαθιζζιυ ηδξ ακηίζημζπδξ ηαζκίαξ (βζα ηζξ δμηζιαζίεξ οδνυθοζδξ ηδξ ανβζκίκδξ ηαζ δζάζπαζδξ ηδξ μονίαξ ελαζθαθίζηδηακ ακαενυαζεξ ζοκεήηεξ ιε ηάθορδ ηςκ ακηίζημζπςκ ιζηνμζςθδκανίςκ ιε παναθζκέθαζμ) ηαζ αημθμφεδζε επχαζδ βζα 18 έςξ 24 χνεξ ζημοξ 36 ± 2 o C. Μεηά ημ πέναξ ηδξ επχαζδξ, ζηα ιζηνμζςθδκάνζα ηςκ κζηνζηχκ, ηδξ αθηαθζηήξ θςζθαηάζδξ ηαζ ηδξ αηεηοθ-ιεεοθ-ηαναζκυθδξ πνμζηέεδηε ιία ζηαβυκα απυ ηα πνμαθεπυιεκα ακηζδναζηήνζα (ΝΗΣ 1 ηαζ ΝΗΣ 2, ΕΤΜ Α ηαζ ΕΤΜ Β, VP 1 ηαζ VP 2, ακηίζημζπα) ηαζ αημθμφεδζε ακάβκςζδ ηαζ ααειμκυιδζδ υθςκ ηςκ δμηζιαζζχκ ηδξ ηαζκίαξ, ακάθμβα ιε ηζξ παναηδνμφιεκεξ ιεηααμθέξ ηςκ πνςιάηςκ. Ο επηαρήθζμξ ηςδζηυξ πμο πνμέηορε βζα ηάεε ζηέθεπμξ ακαγδηήεδηε ζηδ αάζδ δεδμιέκςκ ημο ζοζηήιαημξ βζα ημκ ηαεμνζζιυ ηδξ ηαοημπμίδζδξ ζε επίπεδμ είδμοξ. Σ.3 Βηνρεκηθέο δνθηκαζίεο Δθανιυζεδηακ μζ αηυθμοεεξ αζμπδιζηέξ δμηζιαζίεξ: Γνθηκαζία θαηαιάζεο: Ζ δμηζιαζία αοηή εθέβπεζ ηδκ πανμοζία ημο εκγφιμο ηαηαθάζδ, πμο δζαζπά ημ, παναβυιεκμ απυ ημκ ηαηααμθζζιυ ηςκ οδαηακενάηςκ, Ζ 2 Ο 2 ζε Ζ 2 Ο ηαζ Ο 2. Γζα ηδ δμηζιαζία ιζα απμζηία ημο ζηεθέπμοξ ακαιείπεδηε ιε ιζα ζηαβυκα δζαθφιαημξ Ζ 2 Ο 2 ζοβηέκηνςζδξ 3% πάκς ζε ακηζηεζιεκμθυνμ πθάηα. Ζ έηθοζδ θοζαθίδςκ ενιδκεφεδηε ςξ εεηζηυ απμηέθεζια. Έκα ηθζκζηυ ζηέθεπμξ S.aureus ηζ έκα ηθζκζηυ ζηέθεπμξ E. faecalis πνδζζιμπμζήεδηακ ςξ εεηζηυξ ηαζ ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, ακηίζημζπα. Γνθηκαζία ειεύζεξεο θναγθνπιάζεο: Ζ εθεφεενδ ημαβημοθάζδ είκαζ ιζα ελςηοηηάνζα πνςηεΐκδ ιε δναζηζηυηδηα ενμιαίκδξ, πμο πανάβεηαζ, ηαηά ηφνζμ θυβμ, απυ ημ πνοζίγμκηα ζηαθοθυημηημ ηαζ ημκ δζαθμνμπμζεί απυ ηα οπυθμζπα είδδ ημο βέκμοξ. Ζ εθεφεενδ ημαβημοθάζδ ζπδιαηίγεζ ζφιπθμημ ιε ιία μοζία ημο πθάζιαημξ, ημκ πανάβμκηα πμο ακηζδνά ιε ηδκ ημαβημοθάζδ (CRF), μ μπμίμξ ιε ηδ ζεζνά ημο ακηζδνά ιε ημ ζκςδμβυκμ ηαζ μδδβεί ζημ ζπδιαηζζιυ ζκζηήξ. ηδκ πανμφζα ιεθέηδ, δ ακίπκεοζδ ηδξ εθεφεενδξ ημαβημοθάζδξ πναβιαημπμζήεδηε ιε ημ ειπμνζηά δζαεέζζιμ ακηζδναζηήνζμ Coagulase Rabbit Plasma w/edta (πθάζια ημοκεθζμφ ιε EDTA) ηδξ Remel. οβηεηνζιέκα, ζε 0,5 ml πθάζιαημξ πνμζηέεδηε ιζα απμζηία ημο οπυ ελέηαζδ ζηεθέπμοξ ηαζ ημ δείβια επςάζηδηε ζημοξ 35 o C βζα 24 χνεξ. Σελίδα 112

113 Ακαγήηδζδ ζπδιαηζζιμφ πήβιαημξ, πμο ενιδκεφεδηε ςξ εεηζηυ απμηέθεζια, έβζκε ζηζξ ηέζζενζξ ηαζ 24 χνεξ. Σα πνυηοπα ζηεθέπδ S. aureus ATCC ηαζ S. epidermidis ATCC πνδζζιμπμζήεδηακ ςξ εεηζηυξ ηαζ ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, ακηίζημζπα. Γνθηκαζία ζπλδεδεκέλεο θναγθνπιάζεο: Ζ ιέεμδμξ αοηή εηηεθέζηδηε, υπςξ πενζβνάθδηε πνμδβμοιέκςξ. Γνθηκαζία πδξόιπζεο ηνπ L-ππξξνιηδνλπι-β-λαθζπιακηδίνπ (L-pyrrolidonyl-βnaphthylamide): H δμηζιαζία αοηή ελεηάγεζ ηδ δναζηζηυηδηα ημο εκγφιμο ποννμθζκμδάζδ, ημ μπμίμ οδνμθφεζ ημ L-ποννμθζδμκοθ-α-καθεοθαιίδζμ ζε L-ποννμθζδυκδ ηαζ α-καθεοθαιίκδ. Ζ πανμοζία ηδξ α-καθεοθαιίκδξ ακζπκεφεηαζ ιεηά ηδκ ακηίδναζή ηδξ ιε p-δζιεεοθαιζκμηζκκαιαθδεΰδδ, ιε απμηέθεζια ηδκ ειθάκζζδ ηυηηζκμο/νμγ πνχιαημξ. Υνδζζιμπμζήεδηε δ ειπμνζηά δζαεέζζιδ δμηζιαζία BBL DrySlide PYR Kit (Becton Dickinson), δ μπμία εηηεθέζηδηε πάκς ζε εζδζηά ηαηαζηεοαζιέκεξ πθάηεξ, ζφιθςκα ιε ηζξ μδδβίεξ ηδξ ηαηαζηεοάζηνζαξ εηαζνείαξ. οκμπηζηά, βζα ηάεε ζηέθεπμξ ημπμεεηήεδηακ 10 ιl απεζηαβιέκμο κενμφ ζηδκ επζθάκεζα ακηίδναζδξ ηδξ ακηίζημζπδξ πθάηαξ ηαζ αημθμφεδζε εκμθεαθιζζιυξ, ιε ααιααημθυνμ ζηοθευ, ιζηνμφ ανζειμφ απμιμκςιέκςκ απμζηζχκ ημο ζηεθέπμοξ ζηδκ ίδζα πενζμπή. Σμ δείβια πανέιεζκε ζε εενιμηναζία δςιαηίμο βζα δφμ θεπηά ηαζ ζηδ ζοκέπεζα πνμζηέεδηε ιζα ζηαβυκα ημο πνςιμβυκμο ακηζδναζηδνίμο BBL DrySlide PYR Color Developper. H δμηζιαζία ήηακ εεηζηή ζε πενίπηςζδ παναβςβήξ νμγ/θμφλζα πνχιαημξ ιεηά απυ έκα θεπηυ. Γφμ ηθζκζηά ζηέθεπδ E. faecalis ηαζ S. agalactiae, πνδζζιμπμζήεδηακ ςξ εεηζηυξ ηαζ ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, ακηίζημζπα. Γνθηκαζία απνθαξβνμπιίωζεο ηεο νξληζίλεο: Οζ απμηαναμλοθάζεξ είκαζ έκγοια πμο ακηζδνμφκ ιε ημ ηαναμλφθζμ ηςκ αιζκμλέςκ ηαζ μδδβμφκ ζηδκ παναβςβή αθηαθζηχκ αιζκχκ ηαζ δζμλεζδίμο ημο άκεναηα. Δζδζηυηενα ζηδκ πενίπηςζδ ηδξ απμηαναμλοθίςζδξ ηδξ μνκζείκδξ, δ αιίκδ πμο ζπδιαηίγεηαζ είκαζ δ πμοηνεζηίκδ. ηδκ πανμφζα ιεθέηδ, δ δμηζιαζία εηηεθέζηδηε ζημκ ηθαζζηυ γςιυ Moeller (ph=6.0), o oπμίμξ πενζείπε πεπηυκδ (5g/L), εηπφθζζια ηνέαημξ (5g/L), βθοηυγδ (0,5g/L), ηοακυ ανςιμηνεγυθδξ (0,01g/L), ενοενυ ηνεγυθδξ (0,005g/L), πονζδμλάθδ (0,005g/L) ηαζ ημ αιζκμλφ μνκζείκδ ζηδκ L ζηενεμσζμιενή ιμνθή ημο ηαζ ζε ηεθζηή ζοβηέκηνςζδ 10g/L (Remel). Ο γςιυξ εκμθεαθιίζηδηε ιε ιζηνυ ανζειυ απμζηζχκ ημο οπυ ελέηαζδ ζηεθέπμοξ, ηαθφθεδηε ιε παναθζκέθαζμ βζα ηδκ ελαζθάθζζδ ακαενυαζςκ ζοκεδηχκ ηαζ επςάζηδηε ζημοξ 35 o C βζα 18 έςξ 24 χνεξ. Μεηααμθή ημο πνχιαημξ ημο γςιμφ ζε ιςα, θυβς ηδξ παναβυιεκδξ αιίκδξ, ενιδκεφηδηε ςξ εεηζηυ απμηέθεζια. Ανκδηζηυ απμηέθεζια εεςνήεδηε ημ ηίηνζκμ πνχια, εκδεζηηζηυ ηδξ αζςζζιυηδηαξ ημο ζηεθέπμοξ ηαζ ηδξ επανημφξ ιείςζδξ ημο ph Σελίδα 113

114 ημο γςιμφ χζηε κα εκενβμπμζδεεί ηοπυκ πανμφζα απμηαναμλοθάζδ. Σα πνυηοπα ζηεθέπδ S. lugdunensis ATCC ηαζ S. aureus ATCC πνδζζιμπμζήεδηακ ςξ εεηζηυξ ηαζ ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, ακηίζημζπα. Μνξθνινγία ηωλ απνηθηώλ: Ζ ιμνθμθμβία ηςκ απμζηζχκ ηςκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis ελεηάζηδηε ζημ άβαν ηνοπηζηάζδξ-ζυβζαξ ιε 5% αίια πνμαάημο. ηζξ 24 ηαζ 48 χνεξ, αλζμθμβήεδηε δ πανμοζία πμθοιμνθζζιμφ, δ αζιυθοζδ, δ παναβςβή ή υπζ ηίηνζκδξ πνςζηζηήξ (ιε ηδ πνήζδ ααιααημθυνμο ζηοθεμφ) ηαζ δ μζιή ηςκ ζηεθεπχκ. Σ.4 Έιεγρνο επαηζζεζίαο ηωλ ζηειερώλ Γζα ηδ ιεθέηδ ηδξ εοαζζεδζίαξ ηςκ ζηεθεπχκ ζε ακηζιζηνμαζαημφξ πανάβμκηεξ πνδζζιμπμζήεδηακ μζ αηυθμοεεξ ιέεμδμζ. Μέζνδνο δηάρπζεο δίζθωλ: Γζα ηάεε ζηέθεπμξ παναζηεοάζηδηε ααηηδνζαηυ εκαζχνδια εμθενυηδηαξ 0,5 McFarland, ημ μπμίμ εκμθεαθιίζηδηε ζε άβαν Mueller Hinton (Bioprepare). Αημθμφεδζε ημπμεέηδζδ δζζηίςκ ηςκ αηυθμοεςκ ακηζαζμηζηχκ (μζ ακηίζημζπεξ απυθοηεξ ζοβηεκηνχζεζξ οπμδεζηκφμκηαζ εκηυξ πανεκεέζεςξ): ηνζιεεμπνίιδ-ζμοθθαιεεμλαγυθδ (1,25/23,75 ιg), ηθζκδαιοηίκδ (2 ιg), ενοενμιοηίκδ (15 ιg), κμνθθμλαζίκδ (10 ιg), ζζπνμθθμλαζίκδ (5 ιg), ηεηναηοηθίκδ (130 ιg), νζθαιπζηίκδ (5 ιg), βεκηαιζηίκδ (10 ιg), πεκζηζθθίκδ (6 ιg), μλαηζθθίκδ (1 ιg), ηεθμλζηίκδ (30 ιg), αακημιοηίκδ (30 ιg), ηεσημπθακίκδ (30 ιg) ηαζ κζηνμθμονακημΐκδ (30 ιg) (BIORAD). Σα ηνοαθία επςάζηδηακ ζημοξ 35 o C βζα 24 χνεξ. Ζ ακάβκςζδ ηςκ γςκχκ ακαζημθήξ ηαζ δ ενιδκεία ηςκ απμηεθεζιάηςκ πναβιαημπμζήεδηε ζφιθςκα ιε ηζξ μδδβίεξ ημο Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI 2013). Γνθηκαζία παξαγωγήο β-ιαθηακάζεο: Ο έθεβπμξ παναβςβήξ α-θαηηαιάζδξ έβζκε ιε δζζηία ειπμηζζιέκα ιε ηδ πνςιμβυκμ ηεθαθμζπμνίκδ, κζηνμζεθίκδ (BBL Cefinase Discs, Becton Dickinson). Πανμοζία α-θαηηαιάζδξ, δ οδνυθοζδ ημο αιζδζημφ δεζιμφ ημο α-θαηηαιζημφ δαηηοθίμο ηδξ κζηνμζεθίκδξ μδδβεί ζε ηαπεία ιεηααμθή ημο πνχιαημξ απυ ηίηνζκμ ζε ηυηηζκμ. Λίβεξ ιειμκςιέκεξ απμζηίεξ ηάεε ζηεθέπμοξ ημπμεεηήεδηακ ζηδκ επζθάκεζα εκυξ δζζηίμο κζηνμζεθίκδξ (ημ μπμίμ πνμδβμοιέκςξ είπε εθοβνακεεί ιε θοζζμθμβζηυ μνυ). Ζ άιεζδ ιεηααμθή ημο ηίηνζκμο πνχιαημξ ηδξ επζθάκεζαξ ημο δζζηίμο ζε ηυηηζκμ ενιδκεφεδηε ςξ εεηζηυ Σελίδα 114

115 απμηέθεζια. Σα πνυηοπα ζηεθέπδ S. aureus ATCC ηαζ S. aureus ATCC πνδζζιμπμζήεδηακ ςξ εεηζηυξ ηαζ ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, ακηίζημζπα. E-test: Με ηδ δμηζιαζία αοηή πνμζδζμνίζηδηακ μζ εθάπζζηεξ ακαζηαθηζηέξ ποηκυηδηεξ ηςκ ζηεθεπχκ ζε πεκζηζθθίκδ ηαζ μλαηζθθίκδ. Γζα ηάεε ζηέθεπμξ παναζηεοάζηδηε ααηηδνζαηυ εκαζχνδια εμθενυηδηαξ 0,5 ΜcFarland, ημ μπμίμ εκμθεαθιίζηδηε ζε άβαν Mueller Hinton (Bioprepare). Αημθμφεδζε ημπμεέηδζδ ηδξ ηαζκίαξ ηδξ ιεευδμο (ΑB Biodisk, Sweden) ζηδκ επζθάκεζα ημο άβαν ηαζ επχαζδ ζημοξ 35 o C βζα 24 χνεξ. Ζ MIC εηηζιήεδηε ζημ ζδιείμ πμο δ έθθεζρδ ζοκακημφζε ηδκ ηαζκία. Γζα ηδκ ενιδκεία ημο απμηεθέζιαημξ αημθμοεήεδηακ μζ μδδβίεξ ημο Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI 2013). Aλίρλεπζε ηεο πξωηεΐλεο PBP2a: Ακαγδηήεδηε δ πνςηεΐκδ PBP2a, πμο απμηεθεί ημ πνμσυκ ηδξ ιεηάθναζδξ ημο βμκζδίμο meca, ιε ηδ δμηζιαζία ζοβηυθθδζδξ ζςιαηζδίςκ latex Slidex MRSA detection (biomérieux), ζηδκ μπμία ζοκδεδειέκα ιε ιμκμηθςκζηυ ακηίζςια έκακηζ ηδξ PBP2a ζςιαηίδζα latex ακηζδνμφκ ιε ηα ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ, πνμηαθχκηαξ ζοβηυθθδζδ μναηή ιε βοικυ ιάηζ. Γεδμιέκμο υηζ μζ μδδβίεξ ηδξ ηαηαζηεοάζηνζαξ εηαζνείαξ αθμνμφκ ζημ είδμξ S. aureus, εθανιυζηδηε ιζα εη ηςκ ηνμπμπμζήζεςκ ηδξ ιεευδμο πμο έπμοκ πνμηαεεί αζαθζμβναθζηά βζα ηδκ εθανιμβή ηδξ ζε ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ (Louie, Majury et al. 2001). Ακαθοηζηυηενα, ηαηά ημ πνχημ ζηάδζμ ηδξ δζαδζηαζίαξ, πμο αθμνά ζηδκ εηπφθζζδ ηδξ πνςηεΐκδξ PBP2a, ζοθθέπεδηε ιεβαθφηενμξ ημο πνμηεζκυιεκμο ανζειυξ απμζηζχκ (πενίπμο 30 ιε 50 απμζηίεξ, ακαθυβςξ ημο ιεβέεμοξ), μζ μπμίεξ μιμβεκμπμζήεδηακ ιε ηέζζενζξ ζηαβυκεξ ημο ακηζδναζηδνίμο εηπφθζζδξ R3. Αημθμφεδζε επχαζδ ζημοξ 100 μ C βζα πενίπμο 5 min. Μεηά ηδκ επακαθμνά ημο εκαζςνήιαημξ ζε εενιμηναζία δςιαηίμο, πνμζηέεδηε ιία ζηαβυκα ημο ακηζδναζηδνίμο εηπφθζζδξ R4 ηαζ αημθμφεδζε θοβμηέκηνδζδ ζηα 1500 g βζα 5 min. ημ δεφηενμ ζηάδζμ ηδξ ιεευδμο, πμο αθμνά ζηδκ ελέηαζδ ηδξ ζοβηυθθδζδξ, 50 ιl ημο οπενηείιεκμο ηδξ θοβμηέκηνδζδξ ακαιείπεδηακ λεπςνζζηά ιε ημ εοαζζεδημπμζδιέκμ latex R1 ηαζ ημ latex ανκδηζημφ εθέβπμο R2 ηαζ ιεηά απυ ακαηίκδζδ 3 min αλζμθμβήεδηε δ πανμοζία μναηήξ ζοβηυθθδζδξ. Γεδμιέκδξ ηδξ απμοζίαξ ζοβηυθθδζδξ ιε ημ latex ανκδηζημφ εθέβπμο R2, ςξ εεηζηά ζηδ δμηζιαζία αλζμθμβήεδηακ ηα ζηεθέπδ βζα ηα μπμία παναηδνήεδηε ζοβηυθθδζδ ιε ημ εοαζζεδημπμζδιέκμ latex R1 ηαζ ακηίζημζπα ςξ ανκδηζηά αλζμθμβήεδηακ αοηά βζα ηα μπμία δεκ παναηδνήεδηε ηαιία ζοβηυθθδζδ ή παναηδνήεδηε πμθφ θεπηή ημηημπμίδζδ. Σα πνυηοπα ζηεθέπδ S. aureus ATCC ηαζ S. aureus ATCC πνδζζιμπμζήεδηακ ςξ εεηζηυξ ηαζ ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, ακηίζημζπα. Σελίδα 115

116 Αλίρλεπζε ηνπ γνληδίνπ meca: Ζ ιέεμδμξ ηδξ αθοζζδςηήξ ακηίδναζδξ πμθοιενάζδξ πνδζζιμπμζήεδηε βζα ηδκ ακίπκεοζδ ηιήιαημξ ημο βμκζδίμο meca, ιε ημ πνςηυημθθμ πμο ήδδ πενζβνάθδηε. Σ.5 Αλαδήηεζε θιηληθήο ζεκαζίαο ζηειερώλ S. lugdunensis Γζα ημκ ηαεμνζζιυ ηδξ ηθζκζηήξ ζδιαζίαξ ηςκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis, ιεθεηήεδηε μ ζαηνζηυξ θάηεθμξ ηςκ ακηίζημζπςκ αζεεκχκ ζε ζοκενβαζία ιε ημοξ εενάπμκηεξ ζαηνμφξ, υπμο ηνίεδηε απαναίηδημ. Γζα ηάεε αζεεκή ηαηαβνάθδηε ημ θφθμ, δ δθζηία, δ ηθζκζηή ηαζ δ διενμιδκία εζζαβςβήξ, ημ είδμξ ηαζ μ ανζειυξ ηςκ δεζβιάηςκ πμο ακέπηολακ S. lugdunensis (ιαγί ιε ημκ ανζειυ ηςκ ακηίζημζπςκ ζηεθεπχκ πμο απμιμκχεδηακ ζοκμθζηά), δ αζηία εζζυδμο ζημ κμζμημιείμ, μζ οπμηείιεκεξ κυζμζ, δ πμνδβδεείζα ακηζιζηνμαζαηή αβςβή, δ ηθζκζηή ζδιαζία ημο S. lugdunensis ηαζ δ έηααζδ ηδξ θμίιςλδξ. Σ.6 Σππνπνίεζε ηωλ ζηειερώλ S. lugdunensis Ζ ηοπμπμίδζδ υθςκ ηςκ δζαεέζζιςκ ζηεθεπχκ ακά αζεεκή, πμο ηαοημπμζήεδηακ μνζζηζηά ςξ S. lugdunensis, πναβιαημπμζήεδηε ιε ηδ ιέεμδμ ηδξ δθεηηνμθυνδζδξ παθθυιεκμο πεδίμο (pulsed-field gel electrophoresis, PFGE). Ακαθοηζηά ημ πνςηυημθθμ πμο εηηεθέζηδηε είπε ςξ ελήξ: Κάεε ζηέθεπμξ ακαηαθθζενβήεδηε ζε απθυ ενεπηζηυ άβαν (nutrient agar) ηαζ επχαζηδηε βζα 18 χνεξ ζε εενιμηναζία 35 μ C. Αημθμφεςξ, ιε ηδ αμήεεζα ααιααημθυνμο ζηοθεμφ, ζοθθέπεδηακ ανηεηέξ απμζηίεξ ημο ζηεθέπμοξ ηαζ παναζηεοάζηδηε εκαζχνδια εμθενυηδηαξ 1,5 McFarland ζε 2 ml δζαθφιαημξ ΣΔΝ (ζοβηέκηνςζδξ 100 mm ζε Tris, 100 mm ζε EDTA ηαζ 10 mm ζε NaCl ιε ph 7,5 [Sigma-Aldrich]). Απυ ημ εκαζχνδια αοηυ, 400 ιl θοβμηεκηνήεδηακ βζα 1,5 min ιε θοβυηεκηνμ δφκαιδ rpm ζε εενιμηναζία 4 μ C. Tμ οπενηείιεκμ απμννίθεδηε ηαζ ημ ααηηδνζαηυ ίγδια επακαζςνήεδηε ζε 1 ml ΣΔΝ. Αημθμφεδζε θοβμηέκηνδζδ ζηζξ ίδζεξ ζοκεήηεξ, απυννζρδ ημο οπενηεζιέκμο ηαζ έηπθοζδ ημο ζγήιαημξ ηαηά ημκ ίδζμ ηνυπμ βζα άθθδ ιία θμνά. Σεθζηά, ημ ίγδια επακαζςνήεδηε ζε 200 ιl ηνφμο δζαθφιαημξ EC (ζοβηέκηνςζδξ 6 mm ζε Tris, 1 M ζε NaCl, 100 mm ζε EDTA, 0,5% Brij 58, 0,2% sodium deoxycholate ηαζ Σελίδα 116

117 0,5% N-lauroyl sarcosine ιε ph 7,5 [Sigma-Aldrich]). ηδ ζοκέπεζα, πνμζηέεδηακ 200 ιl αβανυγδξ παιδθμφ ζδιείμο ηήλεςξ (2% [Sigma-Aldrich]), 1,6 ιl δζαθφιαημξ θοζμγφιδξ (25 mg/dl [Sigma-Aldrich]) ηαζ 10 ιl δζαθφιαημξ θοζμζηαθίκδξ (2 mg/dl [Sigma-Aldrich]) ηαζ αημθμφεδζε έκημκδ ακάδεοζδ βζα 5 sec. Αοηυ ημ ιίβια (πενίπμο 100 ιl) πνδζζιμπμζήεδηε βζα κα δδιζμονβδεμφκ, βζα ηάεε ζηέθεπμξ, ιε ηδ αμήεεζα εζδζηχκ πθαζηζηχκ εδηχκ, δφμ πθάηεξ (plugs) αβανυγδξ, πμο αθέεδηακ κα πήλμοκ ζημοξ 4 μ C βζα 10 min. ηδ ζοκέπεζα, μζ πθάηεξ αοηέξ ημπμεεηήεδηακ ζε 500 ιl δζαθφιαημξ EC ηαζ επςάζηδηακ βζα ιζάιζζδ χνα ζημοξ 37 μ C (βζα κα θοεεί ημ ηοηηανζηυ ημίπςια). Σα plugs ημπμεεηήεδηακ βζα αηυια ιζα θμνά ζημοξ 4 μ C βζα 10 min πνζκ ημοξ επυιεκμοξ πεζνζζιμφξ. Μεηά ημ πνυκμ αοηυ, ημ EC αθαζνέεδηε πνμζεηηζηά ηαζ αημθμφεδζε λέπθοια ιε 850 ιl EDTA (ζοβηέκηνςζδξ 0,5 Μ ιε ph 9,0), ιεηά ηδκ αθαίνεζδ ηςκ μπμίςκ πνμζηέεδηακ 500 ιl ESP (ζοβηέκηνςζδξ 0,5 M ζε EDTA ηαζ 1% sarkosyl ιε ph 9,0-9,5 [Sigma-Aldrich]), ημ μπμίμ πενζείπε πνςηεσκάζδ Κ (Signa-Aldrich), ζε ηεθζηή ζοβηέκηνςζδ 1 mg/dl. Αημθμφεδζε μθμκφηηζα επχαζδ ζημοξ 55 o C (βζα κα ηαηαζηναθμφκ υθεξ μζ ηοηηανζηέξ πνςηεΐκεξ). Πνζκ ημοξ επυιεκμοξ πεζνζζιμφξ, ηα plugs λακαημπμεεηήεδηακ ζημοξ 4 μ C. ηδ ζοκέπεζα αθαζνέεδηε ημ δζάθοια ESP/πνςηεσκάζδξ Κ ηαζ αημθμφεδζε λέπθοια ιε 5 ml Ζ 2 Ο ζημοξ 50 μ C βζα min. H δζαδζηαζία επακαθήθεδηε ιε θνέζημ Ζ 2 Ο άθθδ ιία θμνά. Σμ Ζ 2 Ο αθαζνέεδηε ηαζ αημθμφεδζε λέπθοια ιε δζάθοια ΣΔ (ζοβηέκηνςζδξ 10 mm ζε Tris ηαζ 1 mm ζε EDTA ιε ph 7,6 [Sigma-Aldrich]) ζοκμθζηά δέηα θμνέξ, ιε ηζξ ίδζεξ ζοκεήηεξ (βζα κα αθαζνεεμφκ υθα ηα ίπκδ πνςηεσκάζδξ Κ). Σμ έκα ηνίημ απυ ηάεε plug ηυπδηε πνμζεηηζηά ιε ιαπαζνίδζμ ηαζ επςάζηδηε μθμκφηηζα ζημοξ 30 μ C, ιε ημ πενζμνζζηζηυ εκγφιμ SmaI. Σμ ιίβια ημο εκγφιμο βζα ηάεε plug πενζθάιαακε 110,25 ιl dζ 2 Ο, 12,5 ιl buffer Y, 1,25 ιl δζαθφιαημξ 100x BSA ηαζ 1 ιl δζαθφιαημξ ημο εκγφιμο SmaI (10 4 /ml, Fermentas). Tδκ επυιεκδ ιένα ηα plugs ημπμεεηήεδηακ ζημοξ 4 μ C βζα 10 min. To δζάθοια ημο εκγφιμο αθαζνέεδηε ηαζ ηάεε plug ηαθφθεδηε ιε 250 ιl 0,5x TBE (Sigma-Aldrich), βζα κα ελζζμννμπδεεί πνζκ ηδκ δθεηηνμθυνδζδ. Παναζηεοάζεδηε πήηηςια αβανυγδξ 1,2% ηαζ δ δθεηηνμθυνδζδ έβζκε ζε δζάθοια 0,5x TBE, οπυ ηζξ ελήξ ζοκεήηεξ: ηάζδ 6 V/cm, εενιμηναζία : 14 μ C, ζοκμθζηυξ πνυκμξ δθεηηνμθυνδζδξ 23 χνεξ ηαζ, βζα ηζξ πνχηεξ δέηα χνεξ, ανπζηυξ πνυκμξ 5 sec ηαζ ηεθζηυξ 35 sec, βζα ηζξ επυιεκεξ 13 χνεξ ανπζηυξ πνυκμξ εκαθθαβήξ ημο πεδίμο 15 sec ηαζ ηεθζηυξ 60 sec. Ωξ ιάνηονεξ ιμνζαημφ αάνμοξ πνδζζιμπμζήεδηακ lamda ladder concatamers (New England Biolabs). Μεηά ηδκ δθεηηνμθυνδζδ, ημ πήηηςια ειααπηίζεδηε δζάθοια 0,5 ιg/ml ανςιζμφπμο αζεζδίμο ηαζ ζηδ ζοκέπεζα θςημβναθήεδηε ιε θςημβναθζηή ιδπακή ζοκδεδειέκδ ιε Σελίδα 117

118 δθεηηνμκζηυ οπμθμβζζηή οπυ οπενζχδδ αηηζκμαμθία. ηεθέπδ πμο δζέθενακ ηαηά πέκηε ή πενζζζυηενα εναφζιαηα DNA ηαηαηάπεδηακ ζε δζαθμνεηζημφξ ηφπμοξ, εκχ ζηεθέπδ ιε έκα έςξ ηέζζενα δζαθμνεηζηά εναφζιαηα DNA ηαηαηάπεδηακ ζε δζαθμνεηζημφξ οπυηοπμοξ ημο ίδζμο ηφπμο (van Belkum, Tassios et al. 2007). Υνδζζιμπμζχκηαξ ημ πνυβναιια θμβζζιζημφ GelCompar II, ηαηαζηεοάζηδηε δεκδνυβναιια μιμζμηήηςκ ηςκ δθεηηνμθμνδηζηχκ ζπδιάηςκ, αάζεζ ημο ζοκηεθεζηή Dice ηαζ ημο αθβμνίειμο UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean). Σελίδα 118

119 2) ΑΠΟΣΔΛΔΜΑΣΑ I. ύγθξηζε ηεο απόδνζεο ηωλ ζπζηεκάηωλ Phoenix θαη Vitek 2 ωο πξνο ηελ ηαπηνπνίεζε θιηληθά ζεκαληηθώλ εηδώλ ζηαθπινθόθθωλ Γζα ηδ ζφβηνζζδ ηδξ απυδμζδξ ηςκ ζοζηδιάηςκ Phoenix ηαζ Vitek 2 ςξ πνμξ ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ηθζκζηά ζδιακηζηυηενςκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ, ιεθεηήεδηακ ζοκμθζηά 147 ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ δζαθμνεηζηχκ αζεεκχκ, πμο είπακ απμιμκςεεί απυ πμζηίθα ηθζκζηά δείβιαηα. Θεςνχκηαξ ςξ μνζζηζηή ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ πμο πνμέηορε απυ ηδκ RFLP ακάθοζδ ημο βμκζδίμο tuf ηαζ ημκ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο 16S rrna (βζα ηα είδδ S. epidermidis, S. hominis, S. sciuri ηαζ S. lugdunensis), ημ ζφζηδια Vitek 2 ηαοημπμίδζε ζςζηά 144 απυ ηα 147 ζηεθέπδ ηδξ ιεθέηδξ (Πίκαηαξ 6). Γζα ηνία ζηεθέπδ πνμέηορακ θακεαζιέκεξ ηαοημπμζήζεζξ: δφμ ζηεθέπδ S. hominis ηαοημπμζήεδηακ ςξ S. lugdunensis ηαζ S. saprophyticus, εκχ έκα ζηέθεπμξ S. saprophyticus ηαοημπμζήεδηε ςξ S. lugdunensis. ηδκ επακάθδρδ, ιυκμ ημ ζηέθεπμξ S. saprophyticus ηαοημπμζήεδηε θάεμξ, αοηή ηδ θμνά ςξ S. hominis. Γεκ πνμέηορακ απμηεθέζιαηα «παιδθήξ δζάηνζζδξ» ιεηαλφ δφμ ή πενζζζυηενςκ εζδχκ. οκμθζηά, ημ 100% ηςκ ζηεθεπχκ S. aureus, ημ 100% ηςκ S. epidermidis ηαζ ημ 93,3% ηςκ οπυθμζπςκ ημαβημοθάζδανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαοημπμζήεδηακ ζςζηά. Υνδζζιμπμζχκηαξ ημ ζφζηδια Phoenix ιε ημ ηαεζενςιέκμ πνςηυημθθμ ημο 0,5 McFarland εκαζςνήιαημξ, πνμέηορακ 132 ζςζηέξ, 11 θακεαζιέκεξ ηαζ ηέζζενζξ ιδ ηαοημπμζήζεζξ (Πίκαηαξ 6). Ακαθοηζηά, μζ θακεαζιέκεξ ηαοημπμζήζεζξ αθμνμφζακ ζε ηέζζενα ζηεθέπδ S. epidermidis πμο ηαοημπμζήεδηακ ςξ S. hominis, S. lugdunensis, S. saprophyticus ηαζ S. hyicus, έκα ζηέθεπμξ S. hominis πμο ηαοημπμζήεδηε ςξ S. haemolyticus, ηνία ζηεθέπδ S. cohnii πμο ηαοημπμζήεδηακ ςξ S. saprophyticus (ηα δφμ) ηαζ S. xylosus (ημ έκα), έκα ζηέθεπμξ S. lugdunensis πμο ηαοημπμζήεδηε ςξ S. haemolyticus, έκα ζηέθεπμξ S. saprophyticus πμο ηαοημπμζήεδηε ςξ S. hominis ηαζ έκα ζηέθεπμξ S. simulans πμο ηαοημπμζήεδηε ςξ S. pasteuri. Οζ ιδ ηαοημπμζήζεζξ αθμνμφζακ ηνία ζηεθέπδ S. epidermidis ηαζ έκα ζηέθεπμξ S. hominis. οκμθζηά, ιε ημ πνςηυημθθμ αοηυ ηαοημπμζήεδηακ ζςζηά ημ 100% ηςκ ζηεθεπχκ S. aureus, ημ 86% ηςκ S. epidermidis ηαζ ημ 82,2% ηςκ οπυθμζπςκ ημαβημοθάζδ-ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Με ημ κευηενμ πνςηυημθθμ εκαζςνήιαημξ 0,25 McFarland ημ ζφζηδια Phoenix έδςζε 135 ζςζηέξ, έλζ θακεαζιέκεξ ηαζ έλζ ιδ ηαοημπμζήζεζξ (Πίκαηαξ 6). Ακαθοηζηά, μζ θακεαζιέκεξ Σελίδα 119

120 ηαοημπμζήζεζξ αθμνμφζακ ζε έκα ζηέθεπμξ S. epidermidis πμο ηαοημπμζήεδηε ςξ S. haemolyticus, δφμ ζηεθέπδ S. hominis πμο ηαοημπμζήεδηακ ςξ S. epidermidis ηαζ S. haemolyticus, δφμ ζηεθέπδ S. cohnii πμο ηαοημπμζήεδηακ ςξ S. kloosii ηαζ S. epidermidis ηαζ έκα ζηέθεπμξ S. lugdunensis πμο ηαοημπμζήεδηε ςξ S. haemolyticus. Οζ ιδ ηαοημπμζήζεζξ αθμνμφζακ ζε ηνία ζηεθέπδ S. epidermidis, έκα ζηέθεπμξ S. haemolyticus, έκα ζηέθεπμξ S. hominis ηαζ έκα ζηέθεπμξ S. simulans. οκμθζηά, ιε ημ πνςηυημθθμ ημο 0,25 McFarland εκαζςνήιαημξ ηαοημπμζήεδηακ ζςζηά ημ 100% ηςκ ζηεθεπχκ S. aureus, ημ 92% ηςκ S. epidermidis ηαζ ημ 82,2% ηςκ οπυθμζπςκ ημαβημοθάζδ-ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί, επίζδξ, υηζ πνμέηορακ ηαζ δέηα ηαοημπμζήζεζξ «παιδθήξ δζάηνζζδξ» ιεηαλφ δφμ ή πενζζζυηενςκ πζεακχκ εζδχκ, ηα μπμία ζε ηάεε πενίπηςζδ ζοιπενζθάιαακακ ηαζ ημ ζςζηυ είδμξ. Οζ ηαοημπμζήζεζξ αοηέξ αθμνμφζακ ζοπκυηενα ζηα οπυθμζπα είδδ ηςκ ημαβημοθάζδ-ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ (8/45 ζηεθέπδ ζοιπενζθαιαακμιέκςκ, ηεζζάνςκ ζηεθεπχκ S. hominis, ηνζχκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis ηαζ εκυξ ζηεθέπμοξ S. cohnii, 17,8%) εηηυξ ημο S. epidermidis (2/50 ζηεθέπδ, 4%). Γζα 22 ζοκμθζηά ζηεθέπδ (ηα μπμία θαίκμκηαζ ακαθοηζηά ζημκ Πίκαηα 7) πνμέηορακ πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ ιε ημ έκα ή ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα ημο Phoenix. Απυ ηα 22 αοηά ζηεθέπδ, δέηα (ζηεθέπδ 1-10) έδςζακ πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ (μηηχ θακεαζιέκεξ ηαζ δφμ ιδ ηαοημπμζήζεζξ) ιε ημ πνςηυημθθμ ημο 0,5 McFarland εκαζςνήιαημξ, επηά (ζηεθέπδ 11-17) έδςζακ πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ (ηέζζενζξ θακεαζιέκεξ ηαζ ηνεζξ ιδ ηαοημπμζήζεζξ) ιε ημ πνςηυημθθμ ημο 0,25 McFarland εκαζςνήιαημξ ηαζ πέκηε (ζηεθέπδ 18-22) έδςζακ πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα (ηνεζξ θακεαζιέκεξ ηαζ δφμ ιδ ηαοημπμζήζεζξ ιε ημ πνςηυημθθμ ημο 0,5 McFarland εκαζςνήιαημξ ηαζ δφμ θακεαζιέκεξ ηαζ ηνεζξ ιδ ηαοημπμζήζεζξ ιε ημ πνςηυημθθμ ημο 0,25 McFarland εκαζςνήιαημξ). Aλίγεζ, ιάθζζηα, κα ζδιεζςεεί υηζ εκκέα απυ ηα 22 αοηά ζηεθέπδ (9/22, 40,9%) ακήηακ ζημ είδμξ S. epidermidis. Σα 22 ζηεθέπδ επακελεηάζηδηακ ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα ημο Phoenix. Απυ ηα ζηεθέπδ πμο έδςζακ ανπζηά πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ ιε ημ πνςηυημθθμ ημο 0,5 McFarland εκαζςνήιαημξ, πέκηε ζηεθέπδ έδςζακ ζςζηέξ (ζηεθέπδ 1-5) ηαζ πέκηε ζηεθέπδ ελαημθμφεδζακ κα δίκμοκ πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ (ζηεθέπδ 6-10) ζηδκ επακάθδρδ ιε ημ ίδζμ πνςηυημθθμ. Μάθζζηα, βζα ηα ζηεθέπδ αοηά πμο δεκ ηαοημπμζήεδηακ ζςζηά μφηε ζηδκ επακάθδρδ, δφμ θακεαζιέκεξ ηαοημπμζήζεζξ ιε ημ 0,5 McFarland πνςηυημθθμ έβζκακ ιδ ηαοημπμζήζεζξ (ζηεθέπδ Σελίδα 120

121 6-7) ηαζ ηνεζξ θακεαζιέκεξ ηαοημπμζήζεζξ πανέιεζκακ ςξ είπακ (ζηεθέπδ 8-10). Ζ επακάθδρδ ηςκ ζηεθεπχκ ηδξ μιάδαξ αοηήξ ιε ημ 0,25 McFarland πνςηυημθθμ ακέδεζλε ιία κέα ιδ ηαοημπμίδζδ (ζηέθεπμξ 8) ηαζ δφμ κέεξ θακεαζιέκεξ ηαοημπμζήζεζξ (ζηεθέπδ 9-10). Απυ ηα ζηεθέπδ πμο έδςζακ ανπζηά πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ ιε ημ πνςηυημθθμ ημο 0,25 McFarland εκαζςνήιαημξ, πέκηε ζηεθέπδ έδςζακ ζςζηέξ (ζηεθέπδ 11-15) ηαζ δφμ ζηεθέπδ ελαημθμφεδζακ κα δίκμοκ πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ (ζηεθέπδ 16-17) ζηδκ επακάθδρδ ιε ημ ίδζμ πνςηυημθθμ. Μάθζζηα, βζα ηα ζηεθέπδ πμο δεκ ηαοημπμζήεδηακ ζςζηά μφηε ζηδκ επακάθδρδ, ιία ανπζηά θακεαζιέκδ ηαοημπμίδζδ πανέιεζκε ςξ είπε (ζηέθεπμξ 16) ηαζ ιία έβζκε ιδ ηαοημπμίδζδ (ζηέθεπμξ 17). Ζ επακάθδρδ ηςκ ζηεθεπχκ ηδξ μιάδαξ αοηήξ ιε ημ 0,5 McFarland πνςηυημθθμ ακέδεζλε ιία κέα θακεαζιέκδ ηαοημπμίδζδ (ζηέθεπμξ 17). Απυ ηα ζηεθέπδ πμο έδςζακ ανπζηέξ πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα, ζηδκ επακάθδρδ ηνία ζηεθέπδ έδςζακ ζςζηέξ ηαοημπμζήζεζξ ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα (ζηεθέπδ 18-20), έκα ζηέθεπμξ έδςζε ιδ ηαοημπμζήζεζξ (ζηέθεπμξ 21, ημ ζηέθεπμξ αοηυ έδςζε ιδ ηαοημπμίδζδ ηαζ ηζξ δφμ θμνέξ ιε ημ 0, 5 McFarland πνςηυημθθμ, εκχ δ θακεαζιέκδ ηαοημπμίδζδ ιε ημ 0,25 McFarland πνςηυημθθμ έβζκε ιδ ηαοημπμίδζδ) ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα ηαζ έκα ζηέθεπμξ έδςζε θακεαζιέκεξ ηαοημπμζήζεζξ ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα (ζηέθεπμξ 22, ημ ζηέθεπμξ αοηυ έδςζε ηδκ ίδζα θακεαζιέκδ ηαοημπμίδζδ ιε ημ 0,5 McFarland πνςηυημθθμ, εκχ ιε ημ 0,25 McFarland πνςηυημθθμ δ ανπζηή ιδ ηαοημπμίδζδ έβζκε θακεαζιέκδ ηαοημπμίδζδ). οκμθζηά, δ επακάθδρδ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα ημο Phoenix «δζυνεςζε» μηηχ απυ ηζξ 15 ηαζ μηηχ απυ ηζξ 12 πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ ιε ηα πνςηυημθθα ημο 0,5 McFarland ηαζ 0,25 McFarland εκαζςνήιαημξ, ακηίζημζπα, εκχ ακέδεζλε, επζπθέμκ, ηέζζενζξ κέεξ πνμαθδιαηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ (ηνεζξ θακεαζιέκεξ ηαζ ιία ιδ ηαοημπμίδζδ). Δκχ δ ηαοημπμίδζδ ημο S. aureus ήηακ επζηοπήξ ζε πμζμζηυ 100%, ηυζμ ιε ημ Vitek 2, υζμ ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα ημο Phoenix, ζηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ημαβημοθάζδ-ανκδηζηχκ εζδχκ παναηδνήεδηακ δζαθμνέξ ιεηαλφ ηςκ ηνζχκ ιεευδςκ. Σμ Vitek 2 οπενείπε ζε ααειυ ζηαηζζηζηά ζδιακηζηυ ημο 0,5 McFarland πνςημηυθθμο ημο Phoenix (92/95 έκακηζ 80/95, σ 2 =9,60 ηαζ p=0,002), ηαεχξ επίζδξ ηαζ ημο 0,25 McFarland πνςημηυθθμο ημο Phoenix (92/95 έκακηζ 82/95, σ 2 =7,36 ηαζ p=0,007). Ακηίεεηα, δ ζφβηνζζδ ηςκ δφμ πνςημηυθθςκ ημο Phoenix ιεηαλφ ημοξ δεκ ακέδεζλε ηαιία ζηαηζζηζηά ζδιακηζηή δζαθμνά (σ 2 =0.529 ηαζ p=0,467). Σελίδα 121

122 II. Αλάπηπμε κεζνδνινγίαο PCR γηα ηελ ηαπηνπνίεζε ηνπ είδνπο S. lugdunensis θαη επηθύξωζε ηεο δηαγλωζηηθήο επαηζζεζίαο θαη εηδηθόηεηάο ηεο Οζ εηηζκδηέξ Fbl1 ηαζ Fbl2 πμθθαπθαζίαζακ ημ ακαιεκυιεκμ πνμσυκ, ιεβέεμοξ 390 bp, ημο βμκζδίμο fbl απυ υθα ηα ηθζκζηά, ηαεχξ ηαζ απυ ημ πνυηοπμ ζηέθεπμξ S. lugdunensis (Δζηυκα 7). Ζ ακηίδναζδ ήηακ επζηοπήξ ιε υθεξ ηζξ εενιμηναζίεξ οανζδζζιμφ ηαζ ιε υθεξ ηζξ ζοβηεκηνχζεζξ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ πμο δμηζιάζηδηακ. Γζα ημκ έθεβπμ ηςκ οπμθμίπςκ (ηθζκζηχκ ηαζ πνυηοπςκ) ζηεθεπχκ ηδξ ιεθέηδξ ημ πνςηυημθθμ εθανιυζηδηε ιε εενιμηναζία οανζδζζιμφ 50 o C ηαζ ζοβηέκηνςζδ εηηζκδηχκ 20 pmol. Ζ ελέηαζδ ηςκ ζηεθεπχκ αοηχκ, πμο ακηζπνμζχπεοακ 11 επζπθέμκ είδδ ζηαθοθμηυηηςκ, ηνία είδδ ζηνεπημηυηηςκ, ηνία είδδ εκηενμηυηηςκ ηαζ 11 είδδ gram ανκδηζηχκ ααηηδνίςκ, δεκ έδςζε ηακέκα ιδ εζδζηυ πνμσυκ πμθθαπθαζζαζιμφ (Δζηυκα 7). Ζ δμηζιαζία ηδξ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ ήηακ εεηζηή βζα μηηχ απυ ηα 17 (47%) ζηεθέπδ S. lugdunensis πμο ελεηάζηδηακ (υθα ηα ζηεθέπδ πμο έδςζακ εεηζηυ απμηέθεζια ήηακ ηθζκζηά). ΗΗΗ. Αλάπηπμε πνιππιεθηηθήο PCR γηα ηελ ηαπηόρξνλε αλίρλεπζε ηνπ γνληδίνπ meca θαη νθηώ εηδώλ ζηαθπινθόθθωλ Σμ πνςηυημθθμ ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR πμο ζπεδζάζηδηε, πμθθαπθαζίαζε επζηοπχξ ηα ακαιεκυιεκα πνμσυκηα απυ υθα ηα ηθζκζηά ζηεθέπδ S. aureus (n=67), S. epidermidis (n=73), S. lugdunensis (n=18), S. haemolyticus (n=16), S. hominis (n=10), S. saprophyticus (n=6), S. capitis (n=4) ηαζ S. simulans (n=2), πμο ζοιπενζθήθεδηακ ζηδ ιεθέηδ. Δπζπθέμκ, ηα ακαιεκυιεκα πνμσυκηα πμθθαπθαζζάζηδηακ ηαζ απυ ηα ακηίζημζπα πνυηοπα ζηεθέπδ ηςκ εζδχκ αοηχκ. Ζ πμθοπθεηηζηή ιέεμδμξ, ζε πθήνδ ζοιθςκία ιε ηα απμηεθέζιαηα ηδξ ιμκμπθεηηζηήξ PCR πμο είπε πνμδβδεεί βζα ηδκ ακίπκεοζδ ημο βμκζδίμο meca, παναηηήνζζε 96 απυ ηα ηθζκζηά ζηεθέπδ (29 S. aureus, 49 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus ηαζ 4 S. hominis), ηαεχξ ηαζ ημ πνυηοπμ ζηέθεπμξ S. aureus ATCC ςξ ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ. ε υθεξ ηζξ πενζπηχζεζξ, ηα πνμσυκηα πμο πνμέηοπηακ ηυζμ απυ ημκ πμθθαπθαζζαζιυ ηςκ εζδζηχκ βζα ηα είδδ βμκζδίςκζηυπςκ, υζμ ηαζ απυ ημκ πμθθαπθαζζαζιυ ημο βμκζδίμο meca, απεζημκίγμκηακ ςξ δζαηνζηέξ ηαζ εφημθα αλζμθμβήζζιεξ γχκεξ ζηδκ δθεηηνμθυνδζδ αβανυγδξ (Δζηυκα 8). Ζ πμθοπθεηηζηή ακηίδναζδ, εηηυξ απυ εοαίζεδηδ, απμδείπεδηε ηαζ εζδζηή, δεδμιέκδξ ηδξ απμοζίαξ Σελίδα 122

123 πμθθαπθαζζαζιμφ ιδ εζδζηχκ πνμσυκηςκ απυ ηα οπυθμζπα 47 ηθζκζηά ηαζ πνυηοπα ζηεθέπδ, ζηα μπμία δμηζιάζηδηε ηαζ ακηζπνμζχπεοακ πέκηε επζπθέμκ (ηςκ μηηχ πμο πενζθάιαακε) ζηαθοθμημηηζηά ηαζ 17 ιδ ζηαθοθμημηηζηά είδδ. IV. Δθαξκνγή ηεο πνιππιεθηηθήο PCR ζε πιηθό ζεηηθώλ αηκνθαιιηεξγεηώλ Σα πνμηαηανηηζηά πεζνάιαηα πμο δζεκενβήεδηακ ιε ζημπυ ηδκ εηπφθζζδ ααηηδνζαημφ βεκεηζημφ οθζημφ απυ ηνεζξ ηεπκδηά εκμθεαθιζζιέκεξ (ιε ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ ζηεθέπδ S. aureus) αζιμηαθθζένβεζεξ, ήηακ ακεπζηοπή ιε ημ πνςηυημθθμ έηπθοζδξ ιε αθηαθζηυ δζάθοια ηαζ εενιζηήξ θφζδξ, ιε ημ πνςηυημθθμ έηπθοζδξ ημο ααηηδνζαημφ ζγήιαημξ ιε απεζηαβιέκμ κενυ βζα ηδκ απμιάηνοκζδ ηςκ ακαζηαθηχκ ηδξ PCR ηαζ ιε ημ High Pure PCR Template Preparation Kit (Roche). Ζ ιέεμδμξ εηπφθζζδξ ζηδκ μπμία δ έηπθοζδ ημο ααηηδνζαημφ ζγήιαημξ πναβιαημπμζήεδηε ιε δζάθοια BSA έδςζε απκά πνμσυκηα βζα δφμ απυ ηζξ ηνεζξ θζάθεξ. αθείξ ηαζ έκημκεξ γχκεξ ζηδκ δθεηηνμθυνδζδ αβανυγδξ πνμέηορακ απυ ηδκ εηπφθζζδ ηαζ ηςκ ηνζχκ αζιμηαθθζενβεζχκ ιε ηδκ μνβακζηή ιέεμδμ αεκγοθζηήξ αθημυθδξ/εεζμηοακζμφπμο βμοακζδίκδξ, δ μπμία ηαζ επζθέπεδηε ςξ δ ηαηαθθδθυηενδ βζα ηδ ζοκέπεζα ηδξ ιεθέηδξ. Υνδζζιμπμζχκηαξ ημ μνβακζηυ πνςηυημθθμ βζα ηδκ απμιυκςζδ ααηηδνζαημφ βεκεηζημφ οθζημφ απεοεείαξ απυ ηζξ 24 ηεπκδηά εκμθεαθιζζιέκεξ (ιε έκα πνυηοπμ ηαζ δφμ ηθζκζηά ζηεθέπδ ηαεεκυξ ηςκ εζδχκ S. aureus, S. epidermidis, S. lugdunensis, S. haemolyticus, S. hominis, S. saprophyticus, S. capitis ηαζ S. simulans) θζάθεξ αζιμηαθθζενβεζχκ, δ πμθοπθεηηζηή PCR έδςζε ηα ακαιεκυιεκα απμηεθέζιαηα ζε υθεξ ηζξ πενζπηχζεζξ (Δζηυκα 9). ηζξ 29 εεηζηέξ αζιμηαθθζένβεζεξ (13 αενυαζεξ, 12 ακαενυαζεξ ηαζ ηέζζενζξ παζδζαηνζηέξ) αζεεκχκ πμο ελεηάζηδηακ πνμμπηζηά ηαζ πμο αάζεζ ηδξ gram πνχζδξ πενζείπακ gram εεηζημφξ ηυηημοξ ζε μιάδεξ, δ πμθοπθεηηζηή ακηίδναζδ (ζε ζοκδοαζιυ ιε ηδκ μνβακζηή ιέεμδμ εηπφθζζδξ βεκεηζημφ οθζημφ), ακίπκεοζε έκα ζηέθεπμξ S. aureus (εοαίζεδημ ζηδ ιεεζηζθθίκδ), 20 ζηεθέπδ S. epidermidis (έλζ εοαίζεδηα ηαζ 14 ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ), ηνία ζηεθέπδ S haemolyticus (ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ), έκα ζηέθεπμξ S. capitis (εοαίζεδημ ζηδ ιεεζηζθθίκδ) ηαζ ηέζζενα ζηεθέπδ S. hominis (έκα εοαίζεδημ ηαζ ηνία ακεεηηζηά ζηδ ιεεζηζθθίκδ) (Δζηυκα 10). Σα ζοβηεηνζιέκα απμηεθέζιαηα ήηακ απυθοηα ζφιθςκα ιε αοηά ημο Vitek 2 βζα ηα ακηίζημζπα ζηεθέπδ (ηυζμ απυ πθεονάξ ηαοημπμίδζδξ, υζμ ηαζ ακημπήξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ). Ο πνυκμξ θήρδξ ηςκ απμηεθεζιάηςκ ιε ημ πνςηυημθθμ ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR ακηζζημζπμφζε Σελίδα 123

124 ζηζξ έλζ χνεξ ιεηά ηδ ζήιακζή ημοξ ςξ εεηζηέξ απυ ημ BACTEC. οβηενζιέκα, μζ δζάνηεζεξ ηδξ εηπφθζζδξ βεκεηζημφ οθζημφ, ηδξ πμθοπθεηηζηήξ ακηίδναζδξ ηαζ ηδξ δθεηηνμθυνδζδξ ηςκ πνμσυκηςκ οπμθμβίζηδηακ ζε ιία, ηνεζξ ηαζ δφμ χνεξ, ακηίζημζπα. V. Αλαδξνκηθόο έιεγρνο απνκόλωζεο ζηειερώλ S. lugdunensis i) Aλαδήηεζε ηωλ ζηειερώλ Απυ ηδκ δθεηηνμκζηή ακαγήηδζδ ζηδ αάζδ δεδμιέκςκ ημο Δνβαζηδνίμο εκημπίζηδηακ 34 ζηεθέπδ, πμο πνμένπμκηακ απυ 16 αζεεκείξ (απυ έλζ αζεεκείξ απμιμκχεδηακ ηέζζενα ζηεθέπδ ηαζ απυ δέηα αζεεκείξ απμιμκχεδηε έκα ζηέθεπμξ) ηαζ είπακ ηαοημπμζδεεί ςξ S. lugdunensis απυ ημ ζφζηδια Phoenix, ζημ πθαίζζμ ηδξ νμοηίκαξ ημο Δνβαζηδνίμο. Απυ αοηά, 15 ζηεθέπδ πνμένπμκηακ απυ ηαθθζένβεζεξ πφμο, 16 ζηεθέπδ απυ ηαθθζένβεζεξ αίιαημξ, έκα ζηέθεπμξ απυ ηαθθζένβεζα μφνςκ, έκα ζηέθεπμξ απυ ηαθθζένβεζα εηαθάζηδζδξ ηανδζαηήξ ααθαίδαξ ηαζ έκα ζηέθεπμξ απυ ηαθθζένβεζα ζθαβζηζδζημφ ηαεεηήνα. Δλεηάζηδηε έκα ηοπαία επζθεβιέκμ ζηέθεπμξ ακά αζεεκή. ii) Μνξηαθή θαη θαηλνηππηθή ηαπηνπνίεζε ηωλ ζηειερώλ, απνηειέζκαηα βηνρεκηθώλ δνθηκαζηώλ θαη κνξθνινγία ηωλ απνηθηώλ Με αάζδ ημκ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο 16S rrna βμκζδίμο 14 απυ ηα 16 ζηεθέπδ ηαοημπμζήεδηακ ςξ S. lugdunensis, έκα ζηέθεπμξ ηαοημπμζήεδηε ςξ S. epidermidis ηαζ έκα ζηέθεπμξ ηαοημπμζήεδηε ςξ S. simulans. ε υ,ηζ αθμνά ηα ειπμνζηά ζοζηήιαηα, ημ API Staph έδςζε ηαοημπμζήζεζξ απυθοηα ζφιθςκεξ ιε αοηέξ ηδξ ιμνζαηήξ ιεευδμο. Ακηίεεηα, ημ ζφζηδια Phoenix ηαοημπμίδζε έκα ζηέθεπμξ S. lugdunensis ςξ S. capitis ssp. ureolyticus, ημ ζηέθεπμξ S. epidermidis ςξ S. lugdunensis ηαζ ημ ζηέθεπμξ S. simulans ςξ S. saprophyticus. Ζ εθανιμβή ηςκ αζμπδιζηχκ δμηζιαζζχκ έδεζλε υηζ ηα 14 ζηεθέπδ S. lugdunensis πμο ελεηάζηδηακ ήηακ εεηζηά ζηδ δμηζιαζία ηδξ ηαηαθάζδξ ηαζ ανκδηζηά ζηδ δμηζιαζία ηδξ εθεφεενδξ ημαβημοθάζδξ. Μυκμ επηά ζηεθέπδ έδςζακ εεηζηυ απμηέθεζια ζημκ έθεβπμ ηδξ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ. Όθα ηα ζηεθέπδ S. lugdunensis ήηακ εεηζηά ζηζξ δμηζιαζίεξ Σελίδα 124

125 οδνυθοζδξ ηδξ L-ποννμθζδμκοθ-α-καθεοθαιίκδξ ηαζ απμηαναμλοθίςζδξ ηδξ μνκζείκδξ. Σα απμηεθέζιαηα ηςκ ιεευδςκ ηαοημπμίδζδξ ηαζ ηςκ αζμπδιζηχκ δμηζιαζζχκ θαίκμκηαζ ζημκ Πίκαηα 8. Όθα ηα ζηεθέπδ S. lugdunensis ήηακ α-αζιμθοηζηά ηαζ πανήβαβακ ηίηνζκδ πνςζηζηή. Δκκέα απυ ηα 14 ζηεθέπδ ειθάκζζακ πμζηζθμιμνθία ημο ιεβέεμοξ ηαζ ημο ααειμφ ηδξ αζιυθοζδξ ηςκ απμζηζχκ ημοξ, ιεηά απυ εζημζζηεηνάςνδ επχαζδ (Δζηυκα 11). ηζξ 48 χνεξ επχαζδξ, δ πμζηζθμιμνθία έηεζκε κα ελαθεζθεεί, εκχ δ παναβςβή α-αζιυθοζδξ ηαζ ηίηνζκδξ πνςζηζηήξ βζκυηακ εκημκυηενδ. Σέθμξ, ιεηά ημ δεφηενμ εζημζζηεηνάςνμ υθα ηα ζηεθέπδ πμο ελεηάζηδηακ πανμοζίαγακ ιζα παναηηδνζζηζηή μζιή θεοηακηζημφ. iii) Έιεγρνο επαηζζεζίαο ηωλ ζηειερώλ S. lugdunensis H ιέεμδμξ ηδξ δζάποζδξ ηςκ δίζηςκ ακέδεζλε έκα ζηέθεπμξ ακεεηηζηυ ζηζξ ηζκμθυκεξ, έκα άθθμ ζηδ βεκηαιζηίκδ ηαζ ηνία άθθα ζηδκ πεκζηζθθίκδ. Ζ παναβςβή α-θαηηαιάζδξ βζα ηα ηνία ηεθεοηαία ζηεθέπδ επζαεααζχεδηε ιε ηδ δμηζιαζία ηδξ κζηνμζεθίκδξ, εκχ μζ ακηίζημζπεξ εθάπζζηεξ ακαζηαθηζηέξ ποηκυηδηεξ ηδξ πεκζηζθθίκδξ ηοιαίκμκηακ απυ 1 έςξ ηαζ > 32 ιg/ml. Έκα απυ ηα ηνία αοηά ζηεθέπδ πανμοζίαγε ακημπή ηαζ ζηδκ μλαηζθθίκδ (εθάπζζηδ ακαζηαθηζηή ποηκυηδηα ιε ημ Δ-test ίζδ ιε 32 ιg/ml). Ο θαζκμηοπζηυξ ηαζ βμκμηοπζηυξ έθεβπμξ ακίπκεοζδξ ημο βμκζδίμο meca απέαδ ανκδηζηυξ ζε υθα ηα ζηεθέπδ. Σα απμηεθέζιαηα ηδξ εοαζζεδζίαξ ηςκ ζηεθεπχκ θαίκμκηαζ ζημοξ πίκαηεξ 9, 10 ηαζ 11). iv) Πξνζδηνξηζκόο ηεο θιηληθήο ζεκαζίαο ηωλ ζηειερώλ S. lugdunensis Σα δδιμβναθζηά, ενβαζηδνζαηά ηαζ ηθζκζηά δεδμιέκα ηςκ 14 αζεεκχκ απυ ημοξ μπμίμοξ απμιμκχεδηε S. lugdunensis θαίκμκηαζ ζοκμπηζηά ζημκ Πίκαηα 12. Ο S. lugdunensis απμιμκχεδηε απυ ηζξ αζιμηαθθζένβεζεξ ηεζζάνςκ αζεεκχκ (αζεεκείξ Νμ2, Νμ3, Νμ4 ηαζ Νμ9, ζηδκ αζεεκή Νμ2 απμιμκχεδηε ηαζ απυ εηαθάζηδζδ ηανδζαηήξ ααθαίδαξ), απυ ηζξ ηαθθζένβεζεξ πφμο μηηχ αζεεκχκ (αζεεκείξ Νμ1, Νμ5, Νμ6, Νμ8, Νμ10, Νμ11, Νμ13 ηαζ Νμ14), απυ ηδκ μονμηαθθζένβεζα ιζαξ αζεεκμφξ (αζεεκήξ Νμ7) ηαζ απυ ηδκ ηαθθζένβεζα ημο ζθαβζηζδζημφ ηαεεηήνα ιζαξ άθθδξ αζεεκμφξ (αζεεκήξ Νμ12). Δπμιέκςξ, ημ ζοκδεέζηενμ ηθζκζηυ δείβια ήηακ ημ πφμκ ηαζ ιάθζζηα, ζε επηά απυ ημοξ μηηχ αζεεκείξ, είπε θδθεεί απυ ηα ηάης άηνα. Σελίδα 125

126 ε επηά απυ ημοξ 14 αζεεκείξ ηδξ ιεθέηδξ δ απμιυκςζδ ημο S. lugdunensis εεςνήεδηε ηθζκζηά ζδιακηζηή: ζε δφμ αζεεκείξ απμηέθεζε αίηζμ εκδμηανδίηζδαξ (αζεεκείξ Νμ2 ηαζ Νμ4), ζε δφμ αζεεκείξ απμηέθεζε αίηζμ ααηηδνζαζιίαξ (αζεεκείξ Νμ3 ηαζ Νμ9), ζε δφμ αζεεκείξ απμηέθεζε αίηζμ θμίιςλδξ ανενμπθαζηζηήξ (αζεεκείξ Νμ1 ηαζ Νμ10) ηαζ ζε ιία αζεεκή απμηέθεζε αίηζμ μονμθμίιςλδξ (αζεεκήξ Νμ7). Ζ απμιυκςζή ημο απυ ηα ηθζκζηά δείβιαηα ηνζχκ αζεεκχκ (αζεεκείξ Νμ5, Νμ8 ηαζ Νμ14) ήηακ αιθίαμθδξ ηθζκζηήξ ζδιαζίαξ, ηαεχξ ζε αοηά ακαπηφπεδηακ ηαζ άθθμζ ιζηνμμνβακζζιμί πμο εεςνήεδηακ ςξ ηα ηονίςξ παεμβυκα. Γζα δφμ αηυια αζεεκείξ (αζεεκείξ Νμ11 ηαζ Νμ12) πςνίξ ζοιπηχιαηα ηαζ ζδιεία θμίιςλδξ μ S. lugdunensis ηνίεδηε, ιε αεααζυηδηα, ςξ απθυξ απμζηζζηήξ. Σέθμξ, δ ηθζκζηή ημο ζδιαζία ήηακ άβκςζηδ βζα δφμ αζεεκείξ (αζεεκείξ Νμ6 ηαζ Νμ13), πμο ελεηάζηδηακ ζημ Σιήια Δπεζβυκηςκ Πενζζηαηζηχκ ημο Νμζμημιείμο ηαζ βζα ημοξ μπμίμοξ δεκ οπήνπε ζαηνζηυξ θάηεθμξ. Οζ ηθζκζηέξ πθδνμθμνίεξ βζα ημοξ παναπάκς αζεεκείξ παναηίεεκηαζ ζηδ ζοκέπεζα. Αζζελήο Νν1: Δπνυηεζημ βζα άκδνα δθζηίαξ 31 εηχκ, μ μπμίμξ πνμ δζεηίαξ είπε οπμαθδεεί ζε ανενμζημπζηή ακηζηαηάζηαζδ πνυζεζςκ πζαζηχκ ζοκδέζιςκ ζημ δελί βυκαημ ιεηά απυ αηφπδια ηαζ πανμοζζάζηδηε ζημ κμζμημιείμ ιε θμίιςλδ ηαζ ζονίββζμ ηδξ ακηίζημζπδξ πενζμπήξ. Ακηζιεηςπίζηδηε ιε πμνήβδζδ αακημιοηίκδξ, ηθζκδαιοηίκδξ ηαζ ηνζιεεμπνίιδξζμοθθαιεεμλαγυθδξ, ηαεχξ ηαζ ιε πεζνμονβζηή πανμπέηεοζδ ηδξ άνενςζδξ. Απυ επηά δείβιαηα πμο εθήθεδζακ δζεβπεζνδηζηά, έκα δείβια ακέπηολε S. epidermidis, ηνία δείβιαηα ακέπηολακ S. aureus, ηέζζενα δείβιαηα ακέπηολακ S. lugdunensis ηαζ έκα ήηακ ζηείνμ. Οζ S. aureus ηαζ S. lugdunensis ζοκοπήνπακ ζε δφμ δείβιαηα, ιε ημκ S. aureus κα εεςνείηαζ ςξ ημ ηφνζμ παεμβυκμ ηαζ ημκ S. lugdunensis ςξ επίζδξ παεμβυκμ. Ο αζεεκήξ ζοκέπζζε κα θαιαάκεζ ακηζιζηνμαζαηή αβςβή απυ ημο ζηυιαημξ βζα ηνεζξ ιήκεξ ιεηά ημ πεζνμονβείμ (ηθζκδαιοηίκδ ηαζ ηνζιεεμπνίιδζμοθθαιεεμλαγυθδ) ηαζ δεκ πανμοζίαζε οπμηνμπή. Αζζελήο Νν2: ηδκ πενίπηςζδ αοηή μ S. lugdunensis απμηέθεζε αίηζμ εκδμηανδίηζδαξ. Σμ πενζζηαηζηυ αθμνμφζε πνυκζα αζιμηαεαζνυιεκδ βοκαίηα δθζηίαξ 51 εηχκ, δ μπμία ειθάκζζε αζθκίδζα δοζανενία ηαζ πάνεζδ πνμζςπζημφ κεφνμο ηαζ ακηζιεηςπίζηδηε ςξ πζεακυ αββεζαηυ εβηεθαθζηυ επεζζυδζμ ζε άθθμ κμζμημιείμ. Μεηά δφμ εαδμιάδεξ, ζηδ δζάνηεζα ηςκ μπμίςκ ακέπηολε ζφβποζδ, θήεανβμ ηαζ θεοημηοηηάνςζδ, δ αζεεκήξ ιεηαθένεδηε ζημ «ΑΣΣΗΚΟΝ», βζα πεναζηένς δζενεφκδζδ (14/10/2004). Σμ ζαηνζηυ ζζημνζηυ ηδξ πενζθάιαακε απυ πεκηαεηίαξ ακηζηαηάζηαζδ ηδξ αμνηζηήξ ααθαίδαξ, ηδξ αμνηζηήξ νίγαξ ηαζ ηδξ ακζμφζαξ αμνηήξ (ιε ηδκ ηεπκζηή Bentall), οπένηαζδ ηαζ οπενθζπζδαζιία. Καηά ηδκ εζζαβςβή ζημ «ΑΣΣΗΚΟΝ», μ Σελίδα 126

127 ενβαζηδνζαηυξ έθεβπμξ ακέδεζλε /mm 3 θεοηά ζηδ βεκζηή αίιαημξ (ιε 83% πμθοιμνθμπφνδκα, 10% θειθμηφηηανα ηαζ 7% ιμκμηφηηανα) ηαζ ηαπφηδηα ηαείγδζδξ ενοενχκ ίζδ ιε 130 mm/h. Έκα γεφβμξ αζιμηαθθζενβεζχκ πμο εθήθεδ ηαηά ηδκ εζζαβςβή ακέπηολε S. lugdunensis ηαζ απυ ηζξ δφμ θζάθεξ (αενυαζα ηαζ ακαενυαζα). Απυ ηδκ πνχηδ ιένα ηδξ κμζδθείαξ, δ αζεεκήξ εηέεδ ζε αβςβή ιε αακημιοηίκδ (1 g ηάεε ηέζζενζξ ιένεξ εκδμθθέαζα ιεηά ηδκ αζιμηάεανζδ), νζθαιπζηίκδ (600 mg απυ ημο ζηυιαημξ διενδζίςξ) ηαζ ζζπνμθθμλαζίκδ (200 mg εκδμθθέαζα δφμ θμνέξ ηδκ διένα). Σμ δζμζζμθάβεζμ ηαζ δζαεςναηζηυ οπενδπμβνάθδια ακέδεζλακ ιζα ιεβάθδ (18 x 12 ιι) ηζκδηή δμιή ζημ ζδιείμ ελυδμο ηδξ ανζζηενήξ ημζθίαξ ζοιααηή ιε εηαθάζηδζδ ή ενυιαμ, εκχ ζηδκ αλμκζηή ημιμβναθία απμηαθφθεδηακ πμθθαπθέξ εζηίεξ ζδπηζηήξ ειαμθήξ ζημκ εβηέθαθμ, ημοξ πκεφιμκεξ ηαζ ημ ζπθήκα. Έκα αηυια γεφβμξ αζιμηαθθζενβεζχκ πμο εθήθεδ ηδκ πέιπηδ ιένα ηδξ κμζδθείαξ (18/10/2004) ακέπηολε επίζδξ S. lugdunensis (ιυκμ απυ ηδκ αενυαζα θζάθδ). Όηακ έβζκακ δζαεέζζια ηα απμηεθέζιαηα εοαζζεδζίαξ απυ ημ πνχημ εεηζηυ γεφβμξ αζιμηαθθζενβεζχκ (16/10/2004), δ ανπζηή ακηζιζηνμαζαηή αβςβή ηνμπμπμζήεδηε ιε δζαημπή ηδξ ζζπνμθθμλαζίκδξ ηαζ έκανλδ κεηζθιζζίκδξ βζα δφμ ιυκμ διένεξ (150 mg εκδμθθέαζα διενδζίςξ) ηαζ ζηδ ζοκέπεζα βεκηαιζηίκδξ (80 mg εκδμθθέαζα διενδζίςξ). Ζ αζεεκήξ ιεηαθένεδηε ζε άθθμ κμζμημιείμ (18/10/2004) βζα επείβμοζα πεζνμονβζηή πανέιααζδ, δ μπμία πναβιαημπμζήεδηε ηδκ αιέζςξ επυιεκδ ιένα ηδξ δζαημιζδήξ (19/10/2004). Καηά ηδ δζάνηεζα ηδξ επέιααζδξ δ ιδπακζηή αμνηζηή ααθαίδα δεκ ακηζηαηαζηάεδηε. Πναβιαημπμζήεδηε ιυκμ εηημιή ηδξ εηαθάζηδζδξ, απυ ηδκ ηαθθζένβεζα ηδξ μπμίαξ ακαπηφπεδηε S. lugdunensis. Πέκηε ιένεξ ιεηεβπεζνδηζηά, δ πμνεία ηδξ αζεεκμφξ επζπθέπεδηε απυ πκεοιμκία θυβς P. aeruginosa, βζα ηδκ μπμία πνμζηέεδηε ζημ ακηζιζηνμαζαηυ ζπήια ζιζπεκέιδ (250 mg εκδμθθέαζα δφμ θμνέξ ηδκ διένα) βζα δφμ εαδμιάδεξ. Ζ βεκηαιζηίκδ ζοκεπίζηδηε βζα ηνεζξ εαδμιάδεξ ηαζ δ αακημιοηίκδ ιε ηδ νζθαιπζηίκδ (ηδξ μπμίαξ δ δυζδ αολήεδηε ζηα 900 mg απυ ημο ζηυιαημξ) βζα έλζ εαδμιάδεξ ιεηεβπεζνδηζηά. Σεθζηά, δ αζεεκήξ ιεηαθένεδηε λακά ζημ «ΑΣΣΗΚΟΝ» υπμο ηαζ ακάννςζε πθήνςξ. Πέκηε πνυκζα ανβυηενα, πέεακε απυ αζαεζημπμζδηζηή μοναζιζηή ανηδνζμπάεεζα. Αζζελήο Νν3: Σμ πενζζηαηζηυ αοηυ αθμνμφζε αζεεκή δθζηίαξ 80 εηχκ, ιε οπμηείιεκμ ιοεθμδοζπθαζηζηυ ζφκδνμιμ, μ μπμίμξ κμζδθεφηδηε ζημ «ΑΣΣΗΚΟΝ» βζα δζενεφκδζδ ειπονέημο. Ο αζεεκήξ είπε οπμαθδεεί πνμ δφμ ιδκχκ ζε ημπμεέηδζδ θαβμκμιδνζαίμο ιμζπεφιαημξ ηαζ ακέπηολε S. lugdunensis ζε δφμ γεφβδ αζιμηαθθζενβεζχκ (ηαζ απυ ηζξ ηέζζενζξ Σελίδα 127

128 θζάθεξ) πμο εθήθεδζακ ηαηά ηδκ εζζαβςβή ημο. Ζ ααηηδνζαζιία εεςνήεδηε υηζ μθείθεηαζ πζεακχξ ζε θμίιςλδ ημο ιμζπεφιαημξ, πμο, υιςξ, δεκ ήηακ δοκαηυκ κα ακηζηαηαζηαεεί πεζνμονβζηά. Ζ ακηζιεηχπζζδ ήηακ ζοκηδνδηζηή ιε ζοκδοαζιυ αακημιοηίκδξ ηαζ ιμλζθθμλαζίκδξ, μ αζεεκήξ απονέηδζε ηαζ μζ επυιεκεξ αζιμηαθθζένβεζέξ ημο ήηακ ζηείνεξ. Αζζελήο Νν4: ηδκ πενίπηςζδ αοηή μ S. lugdunensis απμηέθεζε αίηζμ εκδμηανδίηζδαξ. Σμ πενζζηαηζηυ αθμνμφζε βοκαίηα δθζηίαξ 86 εηχκ, δ μπμία εζζήπεδ ζημ «ΑΣΣΗΚΟΝ» (12/4/2007) ιε ακαθενυιεκμ ειπφνεημ (ιέπνζ 38,8 o C) απυ 45διένμο, ζοκμδεουιεκμ απυ νίβδ ηαζ εθζδνχζεζξ. Σμ ζαηνζηυ ζζημνζηυ πενζθάιαακε πνυκζα ηανδζαηή ακεπάνηεζα ηαζ ημπμεέηδζδ αδιαημδυηδ πνμ δζεηίαξ βζα δεοηένμο ααειμφ ημθπμημζθζαηυ απμηθεζζιυ. ηδκ εζζαβςβή, δ ηθζκζηή ελέηαζδ ηδξ αζεεκμφξ ακέδεζλε εενιμηναζία ζχιαημξ ίζδ ιε 38 o C, πςνίξ άθθα παεμθμβζηά εονήιαηα, εκχ ενβαζηδνζαηά δζαπζζηχεδηακ /mm 3 θεοηά απυ ηδ βεκζηή αίιαημξ (ιε 82% πμθοιμνθμπφνδκα, 13% θειθμηφηηανα ηαζ 5% ιμκμηφηηανα), ηαζ ηαπφηδηα ηαείγδζδξ ενοενχκ ίζδ ιε 79 mm/h. Γφμ γεφβδ αζιμηαθθζενβεζχκ πμο εθήθεδζακ ημ πνχημ ηδκ διένα ηδξ εζζαβςβήξ ηαζ (12/4/2007) ηαζ ημ δεφηενμ ηνεζξ διένεξ ιεηά (15/4/2007) ακέπηολακ S. lugdunensis ηαζ απυ ηζξ ηέζζενζξ θζάθεξ. Σμ δζμζζμθάβεζμ ηαζ δζαεςναηζηυ οπενδπμβνάθδια ακέδεζλακ ιζα ιεβάθδ ηζκδηή εηαθάζηδζδ (7 x 16 mm) ζημ δθεηηνυδζμ ημο αδιαημδυηδ. Oζ αλμκζηέξ ημιμβναθίεξ εχναημξ ηαζ ημζθίαξ ήηακ θοζζμθμβζηέξ. Ζ αζεεκήξ έθααε ανπζηά εκδμθθέαζα (19/4/2007) αακημιοηίκδ (500 mg ηέζζενζξ θμνέξ διενδζίςξ) ηαζ βεκηαιζηίκδ (80 mg ηνεζξ θμνέξ διενδζίςξ) ηαζ απυ ημο ζηυιαημξ νζθαιπζηίκδ (900 mg διενδζίςξ). Πανά ηδκ ανπζηή ηθζκζηή αεθηίςζδ, ηα ζοιπηχιαηα επέιεζκακ ηαζ δ αζεεκήξ ιεηαθένεδηε ζε άθθμ κμζμημιείμ (3/5/2007) βζα ηδκ αθαίνεζδ ημο αδιαημδυηδ (ιε ηδκ ηεπκζηή locking stylet). Kαηά ηδκ επακεζζαβςβή ζημ «ΑΣΣΗΚΟΝ» (6/5/2007), κέμ δζαεςναηζηυ οπενδπμβνάθδια ακέδεζλε εηαθαζηήζεζξ ζηδκ ηνζβθχπζκα ααθαίδα, μζ μπμίεξ δεκ πνμτπήνπακ. Γζα ημ θυβμ αοηυ, ςξ διένα έκανλδξ ηδξ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ εεςνήεδηε δ διένα αθαίνεζδξ ημο αδιαημδυηδ (4/5/2007). Ζ βεκηαιζηίκδ δζαηυπδηε ιεηά απυ 19 διένεξ εεναπείαξ (7/5/2007) ηαζ δφμ ιένεξ ανβυηενα, θυβς επζδείκςζδξ ηδξ κεθνζηήξ θεζημονβίαξ, δ αακημιοηίκδ ακηζηαηαζηάεδηε απυ ιμλζθθμλαζίκδ (400 mg διενδζίςξ εκδμθθέαζα), εκχ δ πμνήβδζδ νζθαιπζηίκδξ ζοκεπίζηδηε. Ζ ηαηάζηαζδ ηδξ αζεεκμφξ αεθηζχεδηε άιεζα ηαζ ελήθεε ζηζξ 21/5/2007, ζοκεπίγμκηαξ ηδκ απυ ημο ζηυιαημξ θήρδ ιμλζθθμλαζίκδξ (400 mg διενδζίςξ) ηαζ νζθαιπζηίκδξ (900 mg διενδζίςξ) βζα αηυια 15 διένεξ, πςνίξ κα πανμοζζάζεζ οπμηνμπή. Σελίδα 128

129 Αζζελήο Νν5: Σμ πενζζηαηζηυ αοηυ αθμνμφζε αζεεκή δθζηίαξ 18 εηχκ ιε ζζημνζηυ πεζνμονβδεέκημξ ηαημήεμοξ πμκδνμαθαζηχιαημξ βυκαημξ, μ μπμίμξ πνμζήθεε ζημ κμζμημιείμ ιε ζονίββζμ ζηδκ άνενςζδ ηαζ εζηυκα ημπζηήξ θθεβιμκήξ. Γφμ δείβιαηα πφμο ακέπηολακ S. lugdunensis ημ πνχημ ηαζ P. aeruginosa ιαγί ιε S. epidermidis ημ δεφηενμ. Ο αζεεκήξ ακηζιεηςπίζηδηε επζηοπχξ ιε ζοκδοαζιυ πεζνμονβζημφ ηαεανζζιμφ ηαζ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ (αακημιοηίκδ ηαζ ζζπνμθθμλαζίκδ), ακ ηαζ δ ηθζκζηή ζδιαζία ημο S. lugdunensis εεςνήεδηε ααέααζδ. Αζζελήο Νν6: Γζα ημκ αζεεκή αοηυ δεκ οπήνπακ δζαεέζζιεξ ηθζκζηέξ πθδνμθμνίεξ. Αζζελήο Νν7: ηδκ πενίπηςζδ αοηή μ S. lugdunensis εεςνήεδηε αίηζμ μονμθμίιςλδξ. Δπνυηεζημ βζα ιζα βοκαίηα δθζηίαξ 80 εηχκ πμο εζζήπεδ ζημ κμζμημιείμ ιε δζαηνμπακηήνζμ ηάηαβια ανζζηενμφ ζζπίμο ηαζ ηαηέθδλε θυβς πκεοιμκίαξ απυ εζζνυθδζδ δφμ ιένεξ ανβυηενα. Πανά ημ υηζ μ εάκαημξ πνμέηορε απυ άθθδ αζηία, μ S. lugdunensis εεςνήεδηε ηθζκζηά ζδιακηζηυξ, δεδμιέκμο υηζ δ βεκζηή μφνςκ ηδξ αζεεκμφξ ακέδεζλε πομζθαίνζα η.μ.π. ηαζ άθεμκμοξ ιζηνμμνβακζζιμφξ, εκχ ζηδκ ηαθθζένβεζα ακαπηφπεδηε ιυκμ S. lugdunensis (>10 5 CFU/ml). Αζζελήο Νν8: Σμ πενζζηαηζηυ αοηυ αθμνμφζε βοκαίηα δθζηίαξ 74 εηχκ, ιε ζζημνζηυ πενζθενζηήξ ανηδνζμπάεεζαξ, πμο ειθάκζζε μλεία ζζπαζιία ηάης άηνμο. Έκα πνυζθαηα ημπμεεηδιέκμ ιδνμ-ζβκοαηυ ιυζπεοια εεςνήεδηε φπμπημ βζα απυθναλδ ηαζ δ αζεεκήξ οπμαθήεδηε ζε πεζνμονβζηή επέιααζδ βζα ενμιαεηημιή. Μία ηαθθζένβεζα πφμο, πμο εθήθεδ δζεβπεζνδηζηά απυ ηδ θθεβιαίκμοζα πενζμπή, ακέπηολε S. epidermidis ηαζ S. lugdunensis ιε ααέααζδ ηθζκζηή ζδιαζία. Ζ ηθζκζηή ηαηάζηαζδ ηδξ αζεεκμφξ αεθηζχεδηε ηαπέςξ ιεηά ημ πεζνμονβείμ, εκχ ηαθφθεδηε ιε ζζπνμθθμλαζίκδ απυ ημο ζηυιαημξ βζα δφμ εαδμιάδεξ. Αζζελήο Νν9: ηδκ πενίπηςζδ αοηή μ S. lugdunensis εεςνήεδηε αίηζμ ααηηδνζαζιίαξ. Σμ πενζζηαηζηυ αθμνμφζε βοκαίηα δθζηίαξ 55 εηχκ, πμο εζζήπεδ ζημ «ΑΣΣΗΚΟΝ» ιε ορδθυ πονεηυ, ζφβποζδ ηαζ αοπεκαθβία. ε ηνία γεφβδ αζιμηαθθζενβεζχκ, πμο εθήθεδζακ ηζξ ηνεζξ πνχηεξ ιένεξ ηδξ κμζδθείαξ (απυ ημ πνχημ γεφβμξ ηαζ μζ δφμ θζάθεξ ήηακ εεηζηέξ, εκχ απυ ηα δφμ επυιεκα εεηζηή ήηακ ιυκμ δ αενυαζα θζάθδ), απμιμκχεδηε S. lugdunensis. Σμ ζζημνζηυ ηδξ αζεεκμφξ πενζθάιαακε αανζά επζπεπθεβιέκμ ζαηπανχδδ δζααήηδ ηφπμο 2, εκχ ζοκοπήνπε δμεζήκςζδ εθδααίμο ζε απμδνμιή πμο εεςνήεδηε ςξ πζεακή πφθδ εζζυδμο ημο S. lugdunensis. Ζ ακηζιεηχπζζδ ήηακ ζοκηδνδηζηή ιε ζοκδοαζιυ αακημιοηίκδξ, ζζπνμθθμλαζίκδξ ηαζ ηνζιεεμπνίιδξ-ζμοθθαιεεμλαγυθδξ ηαζ δ έηααζδ ηδξ θμίιςλδξ άνζζηδ. Σελίδα 129

130 Αζζελήο Νν10: Σμ πενζζηαηζηυ αθμνμφζε βοκαίηα δθζηίαξ 70 εηχκ, ιε εθεφεενμ ζαηνζηυ ζζημνζηυ, δ μπμία οπμαθήεδηε ζε ακαεεχνδζδ ανενμπθαζηζηήξ βυκαημξ, θυβς ιδπακζηήξ παθάνςζδξ. Μέζα ζηδκ πνχηδ ιεηεβπεζνδηζηή εαδμιάδα, δ αζεεκήξ ειθάκζζε εζηυκα αανζάξ ζοζηδιαηζηήξ θμίιςλδξ ιε ζπδιαηζζιυ απμζηήιαημξ ηαζ ακηζιεηςπίζηδηε επζηοπχξ ιε πεζνμονβζηή πανμπέηεοζδ ηδξ άνενςζδξ ηαζ πμνήβδζδ ζοκδοαζιμφ ζζπνμθθμλαζίκδξ ηαζ ηθζκδαιοηίκδξ. Ο S. lugdunensis ακαπηφπεδηε ιαγί ιε S. epidermidis απυ ηέζζενα δείβιαηα πφμο, πμο εθήθεδζακ ζηδ δζάνηεζα ηδξ δεφηενδξ επέιααζδξ ηαζ εεςνήεδηε ςξ ημ ηονίςξ οπεφεοκμ παεμβυκμ βζα ηδ αανζά εζηυκα ηδξ αζεεκμφξ. Αζζελήο Νν11: Σμ πενζζηαηζηυ αθμνμφζε ζε έκακ, ηαηά ηα άθθα οβζή, άκδνα δθζηίαξ 41 εηχκ, πεζνζζηή ζηαπηζηχκ ιδπακδιάηςκ, μ μπμίμξ εζζήπεδ ζημ κμζμημιείμ βζα δζενεφκδζδ ζοκδνυιμο πνυκζμο ποεθζημφ άθβμοξ. Ζ ιαβκδηζηή ημιμβναθία έεεζε ηδκ οπυκμζα ηδξ ιομζίηζδαξ ζηδκ πενζμπή ημο ποεθζημφ δαηηοθίμο ηαζ αημθμφεδζε ακμζπηή αζμρία ιουξ βζα κα επζαεααζχζεζ ηδ δζάβκςζδ. Σα ζζημθμβζηά εονήιαηα ήηακ υκηςξ ζοιααηά ιε ακαβεκκδηζημφ ηφπμο ιεηαηναοιαηζηή ιομζίηζδα πμο απμδυεδηε ζηδ πνυκζα ιδπακζηή ηαηαπυκδζδ ηδξ ποεθζηήξ γχκδξ, πζεακχξ θυβς ημο επαββέθιαημξ ημο αζεεκμφξ. Ζ απμιυκςζδ ημο S. lugdunensis απυ έκα δζεβπεζνδηζηυ δείβια πμο εθήθεδ ηαηά ηδ δζεκένβεζα ηδξ ακμζπηήξ αζμρίαξ εεςνήεδηε επζιυθοκζδ ηαζ δε ζοκμδεφηδηε απυ πμνήβδζδ ακηζαζμηζηήξ αβςβήξ Αζζελήο Νν12: Ζ πενίπηςζδ αοηή απμιυκςζδξ S. lugdunensis αθμνμφζε ιζα αζεεκή δθζηίαξ 69 εηχκ, ιε ζζημνζηυ πνυκζαξ αζιμνναβίαξ απυ ημ μνευ, ζηδκ μπμία δζαβκχζηδηε ηανηίκςια ζζβιμεζδμφξ. Ο S. lugdunensis ακαπηφπεδηε ζε ιζα ηαθθζένβεζα ζθαβζηζδζημφ ηαεεηήνα, πμο εζηάθδ ςξ ελέηαζδ νμοηίκαξ ζηδ δζάνηεζα ηδξ κμζδθείαξ ηδξ ηαζ εεςνήεδηε απθυξ απμζηζζιυξ, δεδμιέκδξ ηδξ απμοζίαξ ζδιείςκ θμίιςλδξ. Αζζελήο Νν13: Γζα ημκ αζεεκή αοηυ δεκ οπήνπακ δζαεέζζιεξ ηθζκζηέξ πθδνμθμνίεξ. Αζζελήο Νν14: Σμ πενζζηαηζηυ αθμνμφζε βοκαίηα δθζηίαξ 41 εηχκ, ιε ζζημνζηυ απμθναηηζηήξ ενμιααββεζίηζδαξ, πμο εζζήπεδ ζημ κμζμημιείμ ιε κεηνςηζηέξ αθθμζχζεζξ άηνμο πμδυξ. Γφμ δείβιαηα πφμο απυ ηδκ πενζμπή ηδξ αθάαδξ ακέπηολακ, ακηίζημζπα, S. maltophilia, πμο ηνίεδηε ςξ παεμβυκμ ηαζ S. lugdunensis, πμο εεςνήεδηε αιθίαμθδξ ηθζκζηήξ ζδιαζίαξ. Ζ αζεεκήξ έθααε ζοκδοαζιυ πζπεναηζθθίκδξ-ηαγμααηηάιδξ ηαζ ηνζιεεμπνίιδξζμοθθαιεεμλαγυθδξ ηαζ ακάννςζε πθήνςξ απυ ηδ θμίιςλδ. v) Tππνπνίεζε ηωλ ζηειερώλ S. lugdunensis κε ηε κέζνδν PFGE Σελίδα 130

131 οκμθζηά 23 δζαεέζζια ζηεθέπδ S. lugdunensis απυ ημοξ 14 αζεεκείξ ηδξ ιεθέηδξ (έκα ζηέθεπμξ απυ ηαεέκακ απυ ημοξ αζεεκείξ Νμ3, Νμ5, Νμ6, Νμ7, Νμ8, Νμ11, Νμ12, Νμ13 ηαζ Νμ14, δφμ ζηεθέπδ απυ ημοξ αζεεκείξ Νμ1 ηαζ Νμ4, ηνία ζηεθέπδ απυ ημοξ αζεεκείξ Νμ2 ηαζ Νμ9 ηαζ ηέζζενα ζηεθέπδ απυ ηδκ αζεεκή Νμ10), ηαεχξ ηαζ ημ πνυηοπμ ζηέθεπμξ S. lugdunensis ATCC , ελεηάζηδηακ ιε ηδκ PFGE. Με αάζδ ηδ ιέεμδμ αοηή, ηα ζηεθέπδ ηδξ πανμφζαξ ιεθέηδξ ηαηεηάβδζακ ζε έλζ ηφπμοξ A-F: ηα ζηεθέπδ ημο αζεεκμφξ Νμ1 ακήηακ ζημκ ηφπμ Α, ηα ζηεθέπδ ηςκ αζεεκχκ Νμ2 ηαζ Νμ3 ζημκ ηφπμ Β, ηα ζηεθέπδ ηςκ αζεεκχκ Νμ4, Νμ5, Νμ6, No7, No8 ηαζ Νμ9 ζημκ ηφπμ C, ηα ζηεθέπδ ηςκ αζεεκχκ Νμ10 ηαζ Νμ11 ζημκ ηφπμ D, ηα ζηεθέπδ ημο αζεεκμφξ Νμ12 ζημκ ηφπμ Δ ηαζ ηα ζηεθέπδ ηςκ αζεεκχκ Νμ13 ηαζ Νμ14 ζημκ ηφπμ F. Ακαβκςνίζηδηακ, επίζδξ, ηέζζενζξ οπυηοπμζ (C1-C4) εκηυξ ημο ηφπμο C (ζημκ οπυηοπμ C1 ακήηακ ηα ζηεθέπδ ηςκ αζεεκχκ No4, No5 ηαζ Νμ6, ζημκ οπυηοπμ C2 ακήηε ημ ζηέθεπμξ ηδξ αζεεκμφξ Νμ7, ζημκ οπυηοπμ C3 ακήηε ημ ζηέθεπμξ ηδξ αζεεκμφξ No8 ηαζ ζημκ οπυηοπμ C4 ακήηακ ηα ζηεθέπδ ηδξ αζεεκμφξ Νμ9) ηαζ δφμ οπυηοπμζ (D1-D2) εκηυξ ημο ηφπμο D (ζημκ οπυηοπμ D1 ακήηακ ηα ζηεθέπδ ηδξ αζεεκμφξ Νμ10 ηαζ ζημκ οπυηοπμ D2 ακήηε ζημ ζηέθεπμξ ημο αζεεκμφξ No11). Γδθαδή, ηα ζηεθέπδ πμο πνμένπμκηακ απυ ημκ ίδζμ αζεεκή ακήηακ ζημκ ίδζμ ηφπμ ηαζ οπυηοπμ. Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ υθα ηα ζηεθέπδ πμο πανήβαβακ α-θαηηαιάζδ (ηςκ αζεεκχκ No4, No5 ηαζ Νμ6) ακήηακ ζημκ οπυηοπμ C1. Σα απμηεθέζιαηα ηδξ PFGE θαίκμκηαζ ζοκμπηζηά ζημκ Πίκαηα 13, εκχ μζ Δζηυκεξ 13 ηαζ 14 δείπκμοκ ημ βεκεηζηυ απμηφπςια ηςκ ζηεθεπχκ πμο ελεηάζηδηακ. Ζ PFGE αθ εαοηήξ δεκ ήηακ δοκαηυκ κα ιαξ μδδβήζεζ ζε αζθαθή ζοιπενάζιαηα πενί ημζκήξ πνμέθεοζδξ ζηεθεπχκ πμο ακήηακ ζημκ ίδζμ (οπυ)ηοπμ, δεδμιέκδξ ηδξ έθθεζρδξ ακηίζημζπςκ επζδδιζμθμβζηχκ δεδμιέκςκ (ηα ζηεθέπδ πνμένπμκηακ απυ αζεεκείξ πμο είπακ κμζδθεοεεί ζε δζαθμνεηζηέξ πνμκζηέξ πενζυδμοξ ηαζ ηθζκζηέξ ημο κμζμημιείμο). Καηέδεζλε, ςζηυζμ, ιζα ιέζδ βεκεηζηή πμζηζθμιμνθία βζα αοηυκ ημκ πθδεοζιυ ζηεθεπχκ S. lugdunensis, ιε δείηηδ πμζηζθμιμνθίαξ (αν. οπμηφπςκ[n=10] / αν. ζηεθεπχκ [n=23]) 43%. Σελίδα 131

132 3) ΤΕΖΣΖΖ Όπςξ είκαζ βκςζηυ, μζ ζηαθοθυημηημζ ζοβηαηαθέβμκηαζ ιεηαλφ ηςκ ιζηνμμνβακζζιχκ πμο απμιμκχκμκηαζ ζοπκυηενα ζημ Μζηνμαζμθμβζηυ Δνβαζηήνζμ ςξ παεμβυκα, απμζηζζηέξ ή επζιμθφκζεζξ ηςκ ηθζκζηχκ δεζβιάηςκ. Ο S. aureus ακαδείπεδηε πνχημξ ςξ είδμξ ιείγμκμξ ηθζκζηήξ ζδιαζίαξ, ζοιιεηέπμκηαξ ζε έκα ελαζνεηζηά εονφ θάζια δζεζζδοηζηχκ θμζιχλεςκ, ηυζμ ζηδκ ημζκυηδηα, υζμ ηαζ ζημ κμζμημιεζαηυ πενζαάθθμκ (Casey, Lambert et al. 2007). ημκ ακηίπμδα, ημ παεμβυκμ δοκαιζηυ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ εεςνείηαζ ζαθχξ παιδθυηενμ, ιε ηζξ θμζιχλεζξ πμο πνμηαθμφκ κα αθμνμφκ ζοκδεέζηενα ακμζμηαηεζηαθιέκμοξ αζεεκείξ ηαζ πνυςνα κεμβκά. Δίδδ ιε επζαεααζςιέκδ ηθζκζηή ζδιαζία ηονίςξ ζε θμιχλεζξ πμο ζπεηίγμκηαζ ιε λέκα ζχιαηα είκαζ μζ S. epidermidis ηαζ S. haemolyticus, πμο ηαηαβνάθμοκ ηαζ ηδ ιεβαθφηενδ ζοπκυηδηα απμιυκςζδξ ιεηαλφ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Ο S. saprophyticus δζαδναιαηίγεζ, επίζδξ, ζαθή νυθμ ζηζξ θμζιχλεζξ ημο μονμπμζδηζημφ ζοζηήιαημξ βοκαζηχκ ακαπαναβςβζηήξ δθζηίαξ, εκχ άθθμζ δοκδηζηά παεμβυκμζ ημαβημοθάζδ ανκδηζημί ζηαθοθυημηημζ πενζθαιαάκμοκ ηα είδδ S. hominis, S. lugdunensis, S. warneri, S. capitis, S. simulans, S. cohnii ηαζ S. schleiferi (Layer, Ghebremedhin et al. 2006; Winn, Allen et al. 2006). Ζ μνεή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζημ Δνβαζηήνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ είκαζ απαναίηδηδ βζα ηδ ιεθέηδ ηδξ ηθζκζηήξ ζδιαζίαξ ηαζ επζδδιζμθμβίαξ ηάεε είδμοξ, ηαεχξ επίζδξ ηαζ βζα ηδκ εκδεπυιεκδ ακαβκχνζζδ επζδδιζχκ ζημ πενζαάθθμκ ημο κμζμημιείμο (Kluytmans, Berg et al. 1998; Chaves, Garcia-Alvarez et al. 2005; Ross, Fuss et al. 2005). Δπζπθέμκ, δεδμιέκμο υηζ ηα υνζα ακημπήξ ζηδκ μλαηζθθίκδ δζαθένμοκ ιεηαλφ ηςκ S. aureus ηαζ S. lugdunensis (MIC 4 ιg/ml) ηαζ ηςκ οπμθμίπςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ (MIC 0,5 ιg/ml) (CLSI 2013), δ αηνζαήξ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ ζε επίπεδμ είδμοξ ηαείζηαηαζ ακαβηαία ηαζ βζα ηδ ζςζηή ενιδκεία ηςκ απμηεθεζιάηςκ εοαζζεδζίαξ ημοξ ηαζ ηδ πμνήβδζδ ηδξ ηαηάθθδθδξ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ. Σμ πνςηυημθθμ ηςκ Kloos ηαζ Schleifer (Kloos and Schleifer 1975) ιε ηδκ ηεθεοηαία ηνμπμπμίδζή ημο απυ ημοξ Becker ηαζ von Eiff (Becker and von Eiff 2011) απμηεθεί ημκ αθβυνζειμ ακαθμνάξ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ υθςκ ηςκ, ιέπνζ ζήιενα βκςζηχκ, εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ, αθθά είκαζ ελαζνεηζηά πμθφπθμημ ηαζ πνμκμαυνμ βζα κα εθανιμζηεί ζε αάζδ νμοηίκαξ. Γζα ημ ζημπυ αοηυ, ηα ζφβπνμκα Δνβαζηήνζα πνδζζιμπμζμφκ ηα δζάθμνα, ειπμνζηά δζαεέζζια, διζ- ηαζ πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκα Σελίδα 132

133 ιζηνμαζμθμβζηά ζοζηήιαηα, ιε ηα ηεθεοηαία κα ηενδίγμοκ ζήιενα υθμ ηαζ πενζζζυηενμ έδαθμξ, πνμζθένμκηαξ επζπθέμκ ηδ δοκαηυηδηα βζα ηαοηυπνμκμ έθεβπμ εοαζζεδζίαξ ημο οπυ ελέηαζδ ζηεθέπμοξ. Οζ ζζπονυηενμζ ζφβπνμκμζ ακηαβςκζζηέξ ζηδ αζμιδπακία ηςκ πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκςκ ιζηνμαζμθμβζηχκ μνβάκςκ είκαζ ημ Vitek 2 ηδξ εηαζνείαξ BioMérieux, πμο απυ ημ 2004 θεζημονβεί ιε ηζξ κέεξ πνςιαημιεηνζηέξ ηάνηεξ ηαοημπμίδζδξ ηαζ ημ Phoenix ηδξ Becton Dickinson, πμο ηοηθμθυνδζε ιυθζξ ημ φιθςκα ιε ιία πνυζθαηδ ιεηα-ακάθοζδ, δ απυδμζδ ηςκ ζοζηδιάηςκ Vitek 2 ηαζ Phoenix, ςξ πνμξ ηδκ μνεή ηαοημπμίδζδ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ ζε επίπεδμ είδμοξ θεάκεζ ημ 98,22% ηαζ ημ 99,78%, ακηίζημζπα, βζα ημκ S. aureus ηαζ ημ 91,89% ηαζ ημ 88,42%, ακηίζημζπα, βζα ηα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ (Chatzigeorgiou, Sergentanis et al. 2011). Καζ ιε ηα δφμ ζοζηήιαηα δ ηαοημπμίδζδ ημο S. aureus είκαζ πενζζζυηενμ αλζυπζζηδ ζοβηνζηζηά ιε αοηήκ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ (ηαζ ιάθζζηα ιε ημ Phoenix ζε ααειυ ζηαηζζηζηά ζδιακηζηυ). ηδ ιεηα-ακάθοζδ ζδιεζχκεηαζ, επίζδξ, υηζ μζ ιεθέηεξ αλζμθυβδζδξ ηυζμ ημο Vitek 2, υζμ ηαζ ημο Phoenix, πμο ζηδνίγμκηαζ ζε θαζκμηοπζηέξ ιεευδμοξ ακαθμνάξ, ηείκμοκ κα ηαηαβνάθμοκ ζδιακηζηά ηαθφηενα απμηεθέζιαηα, ζε ζπέζδ ιε υζεξ ζηδνίγμκηαζ ζε ιμνζαηέξ ηεπκζηέξ. Γεδμιέκμο υηζ μζ θαζκμηοπζηέξ ιεθέηεξ πνδζζιμπμζμφκ ζοκδεέζηενα ηάπμζμ απυ ηα ζοζηήιαηα API ςξ ιέεμδμ ακαθμνάξ, οπάνπεζ ημ εκδεπυιεκμ κα ηαηαβνάθμκηαζ ςξ μνεά ηαοημπμζδιέκα ζηεθέπδ, πμο ζηδκ πναβιαηζηυηδηα έπμοκ ηαοημπμζδεεί θακεαζιέκα, ηυζμ απυ ημ ΑPI, υζμ ηαζ απυ ημ οπυ αλζμθυβδζδ υνβακμ. Σμ βεβμκυξ αοηυ εέηεζ οπυ αιθζζαήηδζδ ηδκ αλζμπζζηία ηςκ απμηεθεζιάηςκ ημοξ ηαζ ηαεζζηά ακαβηαία ηδκ επζθμβή ηάπμζαξ ιμνζαηήξ ηεπκζηήξ βζα ηδκ αλζμθυβδζδ ηςκ ζοζηδιάηςκ Vitek 2 ηαζ Phoenix (Chatzigeorgiou, Sergentanis et al. 2011). ε αοηυ ημ πθαίζζμ, ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή, δ απυδμζδ ηςκ δφμ μνβάκςκ ςξ πνμξ ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ εηηζιήεδηε πνδζζιμπμζχκηαξ ιζα ιεβάθδ ζοθθμβή ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ, ηςκ μπμίςκ δ ηαοημπμίδζδ μνζζηζημπμζήεδηε ιε ακάθοζδ RFLP ημο βμκζδίμο tuf ηαζ ιενζηυ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο 16S rrna (βζα ζηεθέπδ S. epidermidis, S. hominis ηαζ S. sciuri). οκμθζηά, ζοιπενζθήθεδηακ 147 ζηεθέπδ, απυ ηα μπμία 52 ακήηακ ζημ είδμξ S. aureus, 50 ζημ είδμξ S. epidermidis ηαζ 45 ζε άθθα επηά ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ (S. haemolyticus, S. hominis, S. cohnii, S. lugdunensis, S. saprophyticus, S. sciuri ηαζ S. simulans). Σελίδα 133

134 Ζ ηαοημπμίδζδ ιε ηδ πνςιαημιεηνζηή ηάνηα ID-GP ημο ζοζηήιαημξ Vitek 2 ήηακ επζηοπήξ ζημ 100% ηςκ ζηεθεπχκ S. aureus ηαζ S. epidermidis ηαζ ζημ 93,3% ηςκ οπμθμίπςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ. Ζ απυδμζδ ημο Vitek 2 βζα ημοξ ζηαθοθμηυηημοξ (ιε ηδκ ηάνηα ID-GP) έπεζ, ιέπνζ ζήιενα, αλζμθμβδεεί ζε ηέζζενζξ ιεθέηεξ, ζηζξ μπμίεξ πνδζζιμπμζήεδηακ ςξ ιμνζαηέξ ιέεμδμζ ακαθμνάξ μ πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ ηςκ βμκζδίςκ soda (Dupont, Sivadon-Tardy et al. 2010) ηαζ 16S rrna (Kim, Heo et al. 2008), δ RFLP ακάθοζδ ημο βμκζδίμο gap (Layer, Ghebremedhin et al. 2006) ηαζ δ μθζβμκμοηεθμηζδζηή ιζηνμζοζημζπία Staph array (Delmas, Chacornac et al. 2008). Οζ ιεθέηεξ αοηέξ εζηζάζηδηακ ζημοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ, ηαηαβνάθμκηαξ πμζμζηά επζηοπμφξ ηαοημπμίδζδξ, πμο ηοιαίκμκηακ απυ 88,7% έςξ 100% βζα ημκ S. epidermidis ηαζ απυ 73,4% έςξ 90,9% βζα ηα οπυθμζπα είδδ. Ακαθμνζηά ιε ημκ S. aureus ιυκμ πέκηε ηθζκζηά ζηεθέπδ ημο είδμοξ ζοιπενζθήεδηακ ζηδ ιεθέηδ ηςκ Delmas ηαζ ζοκ. ηαζ ακαβκςνίζηδηακ ζςζηά ζε υθεξ ηζξ πενζπηχζεζξ. φιθςκα ιε ηα δεδμιέκα αοηά, αθθά ηαζ ηα απμηεθέζιαηα ηδξ πανμφζαξ δζδαηημνζηήξ δζαηνζαήξ, ημ Vitek 2 θαίκεηαζ πενζζζυηενμ αλζυπζζημ ζηδκ ακαβκχνζζδ ηςκ ζοπκυηενςκ παεμβυκςκ, S. aureus ηαζ S. epidermidis, εκχ δζαεέηεζ ζαθή πενζεχνζα αεθηίςζδξ βζα ηα οπυθμζπα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ. Μάθζζηα, δ ηνέπμοζα αλζμθυβδζδ ηαηέβναρε ζοκμθζηά ορδθυηενεξ επζδυζεζξ βζα ημ ζφζηδια, εκχ δε ζδιεζχεδηακ ηαοημπμζήζεζξ «παιδθήξ δζάηνζζδξ» ιεηαλφ δφμ ή πενζζζμηένςκ εζδχκ. Σέημζμο ηφπμο ηαοημπμζήζεζξ απαζημφκ ηδκ εηηέθεζδ πνυζεεηςκ δμηζιαζζχκ ηαζ ηαεοζηενμφκ ηδκ μνζζηζημπμίδζδ ηςκ απμηεθεζιάηςκ. ηζξ πνμδβμφιεκεξ ιεθέηεξ ηαηαβνάθδηακ ζε πμζμζηυ 0% έςξ 10,7% ηςκ οπυ ελέηαζδ ζηεθεπχκ ηαζ αθμνμφζακ ηυζμ ημκ S. epidermidis, υζμ ηαζ άθθα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ (υπςξ S. hominis, S. lugdunensis, S. simulans, S. saprophyticus, S. warneri, S. haemolyticus, S. auricularis, S. pasteuri ηαζ S. equorum). Δηηυξ απυ ημ Vitek 2, ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή αλζμθμβήεδηε ηαζ δ απυδμζδ ημο ζοζηήιαημξ Phoenix βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Σμ Phoenix, ιε ημ ηαεζενςιέκμ πνςηυημθθμ ημο 0,5 McFarland εκαζςνήιαημξ, ακέδεζλε πμζμζηά επζηοπίαξ 100% βζα ημκ S. aureus, 86% βζα ημκ S. epidermidis ηαζ 82,2% βζα ηα οπυθμζπα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ. Βζαθζμβναθζηά ακεονέεδηακ ηνεζξ ιεθέηεξ αλζμθυβδζδξ ημο ζοζηήιαημξ, πμο ζηδνίπεδηακ ζε ιμνζαηέξ ηεπκζηέξ ακαθμνάξ ηαζ ζοιπενζέθααακ ιυκμ ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ. ηδ ιεθέηδ ηςκ Layer ηαζ ζοκ. επζθέπεδηε ςξ ιέεμδμξ ζφβηνζζδξ δ RFLP ακάθοζδ ημο βμκζδίμο gap ηαζ ηαηαβνάθδηακ πμζμζηά ζςζηήξ ηαοημπμίδζδξ 76,2% βζα ημκ S. epidermidis Σελίδα 134

135 ηαζ 86,4% βζα ηα οπυθμζπα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ (Layer, Ghebremedhin et al. 2006). Σα ακηίζημζπα πμζμζηά οπμθμβίζηδηακ απυ ημοξ Dupont ηαζ ζοκ. ζημ 89,3% ηαζ 75,6%, πνδζζιμπμζχκηαξ ςξ ιέεμδμ ακαθμνάξ ημκ πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο βμκζδίμο soda (Dupont, Sivadon-Tardy et al. 2010), εκχ μζ Heikens ηαζ ζοκ., πμο πνμζδζυνζζακ ηδκ αθθδθμοπία ηνζχκ βμκζδίςκ (16S rrna, tuf ηαζ soda) βζα ηδκ μνζζηζηή ηαοημπμίδζδ ηςκ ζηεθεπχκ, εηηίιδζακ ηα πμζμζηά επζηοπμφξ ηαοημπμίδζδξ ζημ 41,9% ηαζ 93,4% βζα ημκ S. epidermidis ηαζ ηα οπυθμζπα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ, ακηίζημζπα (Heikens, Fleer et al. 2005). οιπεναζιαηζηά, ζε ζπέζδ ιε ηζξ ηνεζξ πνμδβμφιεκεξ ιεθέηεξ, δ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή ακέδεζλε ηαθφηενα απμηεθέζιαηα βζα ημκ S. epidermidis, εκχ επζαεααίςζε ηα πμζμζηά μνεήξ ηαοημπμίδζδξ ηςκ οπμθμίπςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ. Ζ άνζζηδ απυδμζδ ημο Phoenix ςξ πνμξ ηδκ ακίπκεοζδ ημο S. aureus πμο απμηοπχεδηε ζηδκ ηνέπμοζα αλζμθυβδζδ, ήνεε ζε πθήνδ ζοιθςκία ιε ηα απμηεθέζιαηα ηδξ ιεθέηδξ ηςκ Ishii ηαζ ζοκ., ζηδκ μπμία 34 αζμπδιζηά άηοπα (ανκδηζηά ςξ πνμξ ηδ γφιςζδ ηδξ ιακκζηυθδξ ή ηδκ παναβςβή ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ) ζηεθέπδ ημο είδμοξ ηαοημπμζήεδηακ απυ ημ ζφζηδια ιε απυθοηδ επζηοπία, πνδζζιμπμζχκηαξ ςξ ιέεμδμ ακαθμνάξ ιζα εζδζηή ηαοημπμζδηζηή PCR πναβιαηζημφ πνυκμο (Ishii, Alba et al. 2006). Μία δοκαηυηδηα πμο πνμζηέεδηε πνυζθαηα ζημ ζφζηδια Phoenix είκαζ δ πνήζδ εκαζςνήιαημξ εμθενυηδηαξ 0,25 McFarland, δ μπμία πνμηείκεηαζ απυ ηδκ ηαηαζηεοάζηνζα εηαζνεία βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ιζηνμμνβακζζιχκ ιε θηςπή ακάπηολδ ζηα ζηενεά ενεπηζηά οθζηά. Σμ κέμ αοηυ πνςηυημθθμ πνμμνίγεηαζ, έηζζ, κα επζηαπφκεζ ημκ έθεβπμ ζηεθεπχκ, πμο ηακμκζηά εα απαζημφζακ επακεπχαζδ, πςνίξ, υιςξ, κα επδνεάγεηαζ δ πμζυηδηα ηςκ παναβυιεκςκ απμηεθεζιάηςκ. ηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή ημ πνςηυημθθμ ημο 0,25 McFarland εκαζςνήιαημξ ηαοημπμίδζε επζηοπχξ ημ 100% ηςκ ζηεθεπχκ S. aureus, ημ 92% ηςκ ζηεθεπχκ S. epidermidis ηαζ ημ 82,2% ηςκ οπμθμίπςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ. Μάθζζηα, ζηζξ μνεέξ ηαοημπμζήζεζξ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηεθεπχκ πνμζιεηνήεδηακ ηαζ δέηα ηαοημπμζήζεζξ «παιδθήξ δζάηνζζδξ» ιεηαλφ δφμ ή πενζζζμηένςκ εζδχκ, πμο αθμνμφζακ ηονίςξ είδδ εηηυξ ημο S. epidermidis. Σα απμηεθέζιαηα ηδξ πανμφζαξ δζδαηημνζηήξ δζαηνζαήξ επζαεααίςζακ αοηά ηδξ ιμκαδζηήξ πνμδβμφιεκδξ αλζμθυβδζδξ ημο πνςημηυθθμο ημο 0,25 McFarland εκαζςνήιαημξ απυ ημοξ Brigante ηαζ ζοκ. Οζ ζοβηεηνζιέκμζ ενεοκδηέξ πνδζζιμπμίδζακ ημ ζφζηδια API ID32 Staph ςξ ηφνζα ιέεμδμ ακαθμνάξ (ιυκμ ημ 11,5% ηςκ ζηεθεπχκ ηδξ ιεθέηδξ ημοξ οπμαθήεδηακ ζε ιμνζαηή ηαοημπμίδζδ ιε πνμζδζμνζζιυ ηδξ αθθδθμοπίαξ ηςκ βμκζδίςκ 16S rrna ή tuf) βζα ηδκ Σελίδα 135

136 ηαοημπμίδζδ 100 ζηεθεπχκ S. epidermidis ηαζ 100 ζηεθεπχκ άθθςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ ηαζ οπμθυβζζακ ηα πμζμζηά επζηοπμφξ ηαοημπμίδζδξ ηςκ ζηεθεπχκ αοηχκ ιε ημ κευηενμ πνςηυημθθμ ημο Phoenix ζε 96% ηαζ 85%, ακηίζημζπα (Brigante, Menozzi et al. 2008). Ζ ζφβηνζζδ ηδξ απυδμζδξ ημο κευηενμο πνςημηυθθμο ημο ζοζηήιαημξ ιε ημ ηαεζενςιέκμ πνςηυημθθμ ημο 0,5 McFarland εκαζςνήιαημξ δεκ ακέδεζλε ηαιία ζηαηζζηζηά ζδιακηζηή δζαθμνά. Ωζηυζμ, ηαηά ημκ ανπζηυ έθεβπμ ηα πνςηυημθθα απέδςζακ δζαθμνεηζηέξ ηαοημπμζήζεζξ ζε 13 ζηεθέπδ ηδξ ιεθέηδξ (πμζμζηυ 8,8%), εκχ μ επακέθεβπμξ 22 ζοκμθζηά ζηεθεπχκ πμο ανπζηά δεκ ηαοημπμζήεδηακ ζςζηά ιε ημ έκα ή ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα ακέδεζλε ηνεζξ κέεξ αζφιθςκεξ ηαοημπμζήζεζξ. Μάθζζηα, ημ ζοπκυηενμ είδμξ ιεηαλφ ηςκ 22 αοηχκ ζηεθεπχκ ήηακ μ S. epidermidis (ζε πμζμζηυ 40,9%), βεβμκυξ ημ μπμίμ ζπεηίγεηαζ ιε ηδκ ορδθυηενδ ζοπκυηδηα απμιυκςζήξ ημο ιεηαλφ ηςκ οπμθμίπςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ ηαζ ηαοηυπνμκα επζαεααζχκεζ ηα παιδθά πμζμζηά ηαοημπμίδζδξ (41,9% ηαζ 76,2%, ακηίζημζπα) πμο ζδιεζχεδηακ βζα ημ είδμξ αοηυ ζηζξ ιεθέηεξ ηςκ Heikens ηαζ ζοκ. ηαζ Layer ηαζ ζοκ. Σέθμξ, δ ζφβηνζζδ ηδξ απυδμζδξ ημο Vitek 2 ηαζ ιε ηα δφμ πνςηυημθθα ημο Phoenix ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή ακέδεζλε οπενμπή ημο πνχημο, ηυζμ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ημο S. epidermidis (πμζμζηυ μνεήξ ηαοημπμίδζδξ 100% ιε ημ Vitek 2 έκακηζ 86% έςξ 92% ιε ημ Phoenix), υζμ ηαζ ηςκ οπμθμίπςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ (πμζμζηυ μνεήξ ηαοημπμίδζδξ 93,3% ιε ημ Vitek 2 έκακηζ 82,2% ιε ημ Phoenix). Ακηίζημζπα είκαζ ηα εονήιαηα απυ ηδκ άιεζδ ζφβηνζζδ ηςκ ζοζηδιάηςκ ζηδ ιεθέηδ ηςκ Layer ηαζ ζοκ., εκχ μζ Dupont ηαζ ζοκ. δζαπίζηςζακ μνζαηή οπενμπή ημο Vitek 2 βζα ημκ S. epidermidis ηαζ ημο Phoenix βζα ηα οπυθμζπα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά είδδ. Ωξ εη ημφημο δ ελαβςβή ζηένεςκ ζοιπεναζιάηςκ βζα ηδκ απυδμζδ ηςκ δφμ μνβάκςκ απαζηεί ηδ δζεκένβεζα πνυζεεηςκ ιεθεηχκ ζοβηνζηζηήξ αλζμθυβδζήξ ημοξ, ελεηάγμκηαξ ιε ιμνζαηέξ ιεευδμοξ ιεβαθφηενμ ανζειυ ζηεθεπχκ, πμο ακήημοκ ζε δζάθμνα είδδ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Όπςξ βίκεηαζ ακηζθδπηυ, δ θαζκμηοπζηή ηαοημπμίδζδ ζδζαίηενα ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ ιε ηα αοημιαημπμζδιέκα ιζηνμαζμθμβζηά ζοζηήιαηα πανμοζζάγεζ ανηεηέξ δοζημθίεξ. Αοηέξ μθείθμκηαζ, ηαηά ηφνζμ θυβμ, ζηδκ πμζηζθυιμνθδ έηθναζδ ηςκ αζμπδιζηχκ παναηηήνςκ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ εζδχκ, αθθά ηαζ ζημ αναδφ ιεηααμθζηυ νοειυ ημοξ, μ μπμίμξ, ζε ζοκδοαζιυ ιε ημκ πενζμνζζιέκμ πνυκμ επχαζήξ ημοξ εκηυξ ηςκ αοημιαημπμζδιέκςκ μνβάκςκ, ιπμνεί κα μδδβήζεζ ζε αιθίαμθεξ ή ρεοδχξ εεηζηέξ ακηζδνάζεζξ (Spanu, Sanguinetti et al. 2003; Heikens, Fleer et al. 2005). Με ζηυπμ ηδκ ελαζθάθζζδ υζμ ημ Σελίδα 136

137 δοκαηυ πζμ αλζυπζζηςκ απμηεθεζιάηςκ, μθέκα ηαζ πενζζζυηενα Μζηνμαζμθμβζηά Δνβαζηήνζα νμοηίκαξ επζπεζνμφκ ζήιενα κα ακαπηφλμοκ ιμνζαηέξ ηεπκζηέξ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ ηθζκζηά ζδιακηζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ. Ακαιθζζαήηδηα, δ πζμ δζαδεδμιέκδ ιέεμδμξ είκαζ μ πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ βμκζδίςκ, υπςξ ημ 16S rrna, ημ gap, ημ tuf, ημ hsp60, ημ rpob ηαζ ημ sodα (Ghebremedhin, Layer et al. 2008), πμο, υιςξ, παναηηδνίγεηαζ απυ ορδθυ ηυζημξ ηαζ ιπμνεί κα εηηεθεζηεί ιυκμ απυ απυθοηα ελεζδζηεοιέκμ πνμζςπζηυ. Μία ζαθχξ απθμφζηενδ ηαζ θεδκυηενδ εκαθθαηηζηή απμηεθεί δ RFLP ακάθοζδ βμκζδίςκ υπςξ ηo gap (Yugueros, Temprano et al. 2001), ημ tuf (Kontos, Petinaki et al. 2003), ημ groel (Barros, Iorio et al. 2007) ηαζ ημ 16S-ITS rrna (Sudagidan, Yenidunya et al. 2005), δ μπμία, ςζηυζμ, είκαζ πνμκμαυνμξ θυβς ηδξ απαζημφιεκδξ επχαζδξ ιε ηζξ πενζμνζζηζηέξ εκδμκμοηθεάζεξ ηαζ ζοπκά ακαδεζηκφεζ πμζηζθμιμνθία ζηδκ αθθδθμοπία ηςκ βμκζδίςκ-ζηυπςκ εκηυξ ημο ίδζμο είδμοξ, πμο δοζπεναίκεζ ηδκ ενιδκεία ηςκ απμηεθεζιάηςκ. Με ζηυπμ κα παναηαιθεμφκ ηα ιεζμκεηηήιαηα ηςκ δφμ αοηχκ βμκμηοπζηχκ ηεπκζηχκ, ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή επζπεζνήεδηε δ ακάπηολδ ιζαξ πμθοπθεηηζηήξ PCR βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ μηηχ ζδιακηζηυηενςκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ ηαζ ημκ ηαοηυπνμκμ έθεβπμ ηδξ ακημπήξ ημοξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ. Σα εηηζκδηζηά ιυνζα βζα ηα είδδ πμο ζοιπενζθήθεδηακ ζηδκ ακηίδναζδ, ηαεχξ ηαζ ημ βμκίδζμ meca ακαγδηήεδηακ αζαθζμβναθζηά, ιε ηδκ ελαίνεζδ ημο S. lugdunensis, ημο μπμίμο δ ιμνζαηή ηαοημπμίδζδ δεκ είπε ιέπνζ εηείκδ ηδ ζηζβιή απαζπμθήζεζ ημοξ ενεοκδηέξ. Έηζζ, δ ακεφνεζδ ημο ηαηάθθδθμο βεκεηζημφ ζηυπμο βζα ηδκ ακίπκεοζδ ημο ζοβηεηνζιέκμο είδμοξ απμηέθεζε ημ πνχημ αήια βζα ημ ζπεδζαζιυ ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR. Σμ βμκίδζμ fbl πμο ηςδζημπμζεί ηδκ μιχκοιδ πνςηεΐκδ ζφκδεζδξ ιε ημ ζκςδμβυκμ (Fbl) ημο S. lugdunensis αλζμπμζήεδηε ςξ εζδζηυξ ζηυπμξ βζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ημο. Ζ Fbl ζοκδέεηαζ ζηδκ ίδζα πενζμπή ημο ηαναμλοηεθζημφ άηνμο ηδξ β-αθοζίδαξ ημο ζκςδμβυκμο, υπςξ ηαζ μ πανάβμκηαξ ζοβηυθθδζδξ ClfA ημο S. aureus. Μάθζζηα, ηα ηιήιαηα ηςκ δφμ πνςηεσκχκ (ηιήιαηα Ν2 ηαζ Ν3 ηδξ πενζμπήξ Α), πμο ηονίςξ δζαιεζμθααμφκ ηδ ζοκδεζδ αοηή, πανμοζζάγμοκ ηαηά 60% υιμζα αιζκμλζηή αθθδθμοπία (Mitchell, Tristan et al. 2004). ε αοηυ ημ πθαίζζμ, βζα ημ ζπεδζαζιυ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ ημο S. lugdunensis ζημπεφεδηε ηαηά ηφνζμ θυβμ ημ ηιήια Ν1 ηδξ πενζμπήξ Α (ιε 19% αιζκμλζηή μιμθμβία ιεηαλφ ηςκ Fbl ηαζ ClfA) ηαζ ιζηνυ ιυκμ ιένμξ ημο ηιήιαημξ Ν2. ε ζοιθςκία ιε δφμ πνμδβμφιεκεξ ιεθέηεξ, πμο είπακ ακζπκεφζεζ ημ fbl ζε 20 ζηεθέπδ S. lugdunensis, δ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή επζαεααζχζε ηδκ πανμοζία ημο ζε 17 επζπθέμκ ζηεθέπδ ημο είδμοξ (Mitchell, Tristan et al. 2004; Nilsson, Σελίδα 137

138 Bjerketorp et al. 2004). Ακηίεεηα, ημ βμκίδζμ δεκ ακζπκεφεδηε ζε 28 άθθα είδδ gram εεηζηχκ ηαζ gram ανκδηζηχκ παεμβυκςκ (ζοιπενζθαιαακμιέκςκ αηυια 11 εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ) πμο ελεηάζηδηακ. Ο ζοκδοαζιυξ ηςκ δεδμιέκςκ αοηχκ ακέδεζλε ηδ πνδζζιυηδηα ημο fbl ςξ ζηυπμο βζα ηδκ εζδζηή ηαοημπμίδζδ ημο S. lugdunensis, ζοιπέναζια ζημ μπμίμ ηαηέθδλακ θίβμ ανβυηενα ηαζ μζ Pereira ηαζ ζοκ. (Pereira, Oliveira et al. 2010). Μάθζζηα, ημ επίπεδμ έηθναζδξ ημο βμκζδίμο πζεακχξ δζαθένεζ εκηυξ ημο είδμοξ, ηαεχξ ιυκμ ημ 47% ηςκ ζηεθεπχκ ηδξ πανμφζαξ δζδαηημνζηήξ δζαηνζαήξ ήηακ εεηζηά ζηδ δμηζιαζία ηδξ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ. Ωζηυζμ, ημ ζοβηεηνζιέκμ πμζμζηυ ηοιαίκεηαζ ηαζ ακάθμβα ιε ημ ειπμνζηυ ακηζδναζηήνζμ πμο πνδζζιμπμζείηαζ ιεηαλφ 6,7% ηαζ 60% (Personne, Bes et al. 1997), βεβμκυξ ημ μπμίμ πζεακχξ ακηακαηθά ηαοηυπνμκα ηαζ ηδ παιδθή εοαζζεδζία ημο BBL Staphyloslide Latex test (Becton Dickinson), πμο πνδζζιμπμζήεδηε ζηδκ ηνέπμοζα ιεθέηδ. Σέθμξ, αλίγεζ κα ακαθενεεί υηζ έκαξ αηυια ηαηάθθδθμξ ζηυπμξ πμο έπεζ πνδζζιμπμζδεεί ιέπνζ ζήιενα βζα ηδ βμκμηοπζηή ακίπκεοζδ ημο S. lugdunensis είκαζ ημ βμκίδζμ tana. Σμ βμκίδζμ αοηυ ηςδζημπμζεί ημ έκγοιμ ηακκάζδ, ημ μπμίμ οδνμθφεζ ιζα μιάδα οδαημδζαθοηχκ πμθοθαζκμθζηχκ ααηηδνζμζηαηζηχκ μοζζχκ, πμο μκμιάγμκηαζ ηακκίκεξ. Ζ ηακκάζδ πανάβεηαζ απυ πμζηζθία ιοηήηςκ ηαζ ααηηδνίςκ, ιεθχκ ηδξ πθςνίδαξ ημο βαζηνεκηενζημφ ζςθήκα ακενχπςκ ηαζ γχςκ ηαζ πνυζθαηα απμιμκχεδηε ζε ζηεθέπδ S. lugdunensis απυ ηυπνακα ηαζ μνεζηά επζπνίζιαηα αζεεκχκ ιε πνμπςνδιέκμ ηανηίκμ ημο παπέμξ εκηένμο (Noguchi, Ohashi et al. 2007). Όπςξ ημ fbl, ημ βμκίδζμ tana ημο S. lugdunensis ιπμνεί ηαζ αοηυ κα πνδζζιεφζεζ ςξ εζδζηυξ ζηυπμξ βζα ηδκ ηαοημπμίδζή ημο ιε απθή PCR (Noguchi, Goto et al. 2010). Μεηά ημ ζπεδζαζιυ εζδζηχκ εηηζκδηχκ ιμνίςκ βζα ημκ S. lugdunensis αημθμφεδζε δ ακάπηολδ ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR, ιε πνχημ αήια ηδκ επζθμβή ηαηάθθδθςκ εηηζκδηχκ βζα ηα είδδ S. aureus, S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, S. saprophyticus, S. capitis ηαζ S. simulans, ηαεχξ ηαζ βζα ημ βμκίδζμ meca. Σα γεφβδ ηςκ εηηζκδηχκ επζθέπεδηακ ιε ζηυπμ α) κα πμθθαπθαζζάγμοκ πνμσυκηα δζαθμνεηζημφ ιεβέεμοξ (χζηε αοηά κα δζαηνίκμκηαζ εφημθα ηαηά ηδκ δθεηηνμθυνδζδ), α) κα δζαεέημοκ πανυιμζα αέθηζζηδ εενιμηναζία οανζδζζιμφ (χζηε κα είκαζ ελίζμο απμηεθεζιαηζηυξ μ πμθθαπθαζζαζιυξ υθςκ ηςκ ακαιεκυιεκςκ πνμσυκηςκ ζηδ εενιμηναζία ηδξ πμθοπθεηηζηήξ ακηίδναζδξ) ηαζ β) κα ιδκ πανμοζζάγμοκ ζδιακηζηή μιμθμβία ιεηαλφ ημοξ (χζηε κα απμθεφβεηαζ μ ζπδιαηζζιυξ δζιενχκ ηςκ εηηζκδηχκ ή άθθςκ ιδ εζδζηχκ πνμσυκηςκ ηαηά ηδκ PCR) (Markoulatos, Siafakas et al. 2002). ηδκ ακηίδναζδ ζημπεφεδηακ ζοκμθζηά έλζ βμκίδζα: ημ fema βζα ημκ S. aureus ηαζ ημκ S. saprophyticus, ημ soda βζα ημκ S. Σελίδα 138

139 haemolyticus, ημκ S. capitis ηαζ ημκ S. simulans, ημ fbl βζα ημκ S. lugdunensis, ημ 16S rrna βζα ημκ S. hominis, έκα πνςιμζςιζηυ ηιήια άβκςζηδξ ηςδζηήξ ζδιαζίαξ βζα ημκ S. epidermidis ηαζ ημ meca βζα ηδκ ακίπκεοζδ ηδξ ακημπήξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ. Σα ιεβέεδ ηςκ πνμσυκηςκ ηοιαίκμκηακ απυ 85 bp έςξ 829 bp ηαζ πμθθαπθαζζαζιυξ ημοξ ήηακ ελίζμο απμηεθεζιαηζηυξ ιε εενιμηναζία οανζδζζιμφ 45 o C ηαζ ίζεξ ζοβηεκηνχζεζξ υθςκ ηςκ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ. Ζ πνμζεήηδ εηηζκδηζηχκ ιμνίςκ εζδζηχκ βζα ημ βέκμξ Staphylococcus δεκ επζπεζνήεδηε βζα κα ιδ δοζπενάκεζ ηδ αεθηζζημπμίδζδ ηςκ ζοκεδηχκ ημο πνςημηυθθμο. ηυπμξ ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR πμο ζπεδζάζηδηε ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή ήηακ δ ηαοημπμίδζδ ζε επίπεδμ είδμοξ ημο ζοκυθμο ζπεδυκ ηςκ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ, πμο απμιμκχκμκηαζ ζημ Μζηνμαζμθμβζηυ Δνβαζηήνζμ, ιε ηαοηυπνμκμ έθεβπμ ηδξ ακημπήξ ημοξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ. ε αοηυ ημ πθαίζζμ, εηηυξ απυ ημκ S. aureus, ζηδκ ακηίδναζδ ζοιπενζθήθεδηακ ηα ζοπκά απακηχιεκα ημαβημοθάζδ ανκδηζηά παεμβυκα S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis ηαζ S. saprophyticus, μ παιδθυηενδξ ζοπκυηδηαξ S. lugdunensis, πμο, υιςξ, δζαεέηεζ πανυιμζμ παεμβυκμ δοκαιζηυ ιε αοηυ ημο S. aureus ηαζ ηα ακαδουιεκα είδδ S. capitis ηαζ S. simulans, πμο ζπεηίγμκηαζ ιε δζεζζδοηζηέξ θμζιχλεζξ, ηονίςξ εκδμηανδίηζδα. Έκα ακηίζημζπα εηηεηαιέκμ πμθοπθεηηζηυ πνςημηυθθμ δδιμζζεφεδηε πνυζθαηα απυ ηδκ μιάδα ηςκ Hirotaki ηαζ ζοκ., ιε ζηυπμ ηδκ ακαβκχνζζδ ηςκ εζδχκ S. aureus, S. capitis, S. caprae, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, S. lugdunensis, S. saprophyticus ηαζ S. warneri. Σα εηηζκδηζηά ιυνζα βζα υθα ηα είδδ ζπεδζάζηδηακ πάκς ζε ηαηάθθδθα επζθεβιέκεξ αθθδθμοπίεξ ημο βμκζδίμο ηδξ εενιμκμοηθεάζδξ nuc, εκχ ζηδκ ακηίδναζδ δε ζημπεφεδηε ημ meca (Hirotaki, Sasaki et al. 2011). Πανυιμζα πμθοπθεηηζηή PCR (ιε εηηζκδηέξ βζα ημ βμκίδζμ nuc), ακαπηφπεδηε απυ ηδκ ίδζα μιάδα ενεοκδηχκ ηαζ βζα ηα ημαβημοθάζδ εεηζηά είδδ S. aureus, S. intermedius, S. schleiferi subsp. coagulans, S. delphini μιάδαξ A ηαζ Β, S. hyicus ηαζ S. pseudointermedius, πμο απμιμκχκμκηαζ απυ γχα (Sasaki, Tsubakishita et al. 2010). Οζ Vanuffel ηαζ ζοκ. ζοκδφαζακ ζηδκ ίδζα ακηίδναζδ έκακ ημζκυ πνυζεζμ (forward) ηαζ έκακ δζαθμνεηζηυ βζα ηάεε είδμξ ακάζηνμθμ (reverse) εηηζκδηή ημο βμκζδίμο fema, ιε ζηυπμ ηδκ ηαοημπμίδζδ ηςκ S. aureus, S. epidermidis, S. hominis, S. saprophyticus ηαζ S. simulans (Vannuffel, Heusterspreute et al. 1999), εκχ μζ Iwase ηαζ ζοκ. πνδζζιμπμίδζακ ηνία γεφβδ εηηζκδηχκ ημο sodα βζα ηα είδδ S. capitis, S. haemolyticus ηαζ S. warneri (Iwase, Seki et al. 2007). Όπςξ ζοκέαδ ηαζ ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή, δζαθμνεηζηέξ πνςιμζςιζηέξ πενζμπέξ ζημπεφεδηακ ζηα πμθοπθεηηζηά πνςηυημθθα ηςκ Μorot-Bizot ηαζ ζοκ. βζα ηα είδδ S. xylosus, S. saprophyticus, S. epidermidis Σελίδα 139

140 ηαζ S. aureus (ζηδκ ακηίδναζδ ζοιπενζθήθεδηακ ηαζ εηηζκδηέξ εζδζημί βζα ηδκ ακίπκεοζδ ημο βέκμοξ Staphylococcus) (Morot-Bizot, Talon et al. 2004) ηαζ Pereira ηαζ ζοκ. βζα ηα είδδ S. aureus, S. epidermidis ηαζ S. haemolyticus (ζηδκ ακηίδναζδ ζοιπενζθήθεδηακ ηαζ εηηζκδηέξ βζα ημ βμκίδζμ meca) (Pereira, Schuenck et al. 2010). ηεκυηενμο εφνμοξ πμθοπθεηηζηέξ PCR έπμοκ ζπεδζαζηεί χζηε κα δζαηνίκμοκ ιυκμ ημκ S. aureus απυ ημοξ οπυθμζπμοξ ζηαθοθμηυηημοξ, πνδζζιμπμζχκηαξ εζδζημφξ εηηζκδηέξ βζα ημ βέκμξ Staphylococcus ηαζ βζα ηάπμζμ βεκεηζηυ ζηυπμ ημο S. aureus, υπςξ ημ βμκίδζμ ηδξ ημαβημοθάζδξ coa (Schmitz, Mackenzie et al. 1997), ημ βμκίδζμ ημο πανάβμκηα ζοβηυθθδζδξ Α clfa (Mason, Blevins et al. 2001) ηαζ ημ βμκίδζμ ηδξ εενιμκμοηθεάζδξ nuc (Maes, Magdalena et al. 2002). Έκα ζδιακηζηυ πθεμκέηηδια ηδξ πμθοπθεηηζηήξ ακηίδναζδξ, πμο ακαπηφπεδηε ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή, αθμνά ζηδκ απεοεείαξ εθανιμβή ηδξ ζε οθζηυ εεηζηχκ αζιμηαθθζενβεζχκ, βζα ηζξ μπμίεξ δ gram πνχζδ ακαδεζηκφεζ ηδκ πανμοζία ζηαθοθμηυηηςκ. Όπςξ είκαζ βκςζηυ, μζ αζιμηαθθζένβεζεξ ζοβηαηαθέβμκηαζ ιεηαλφ ηςκ ζδιακηζηυηενςκ ελεηάζεςκ, πμο δζεκενβμφκηαζ ζημ Μζηνμαζμθμβζηυ Δνβαζηήνζμ βζα ηδκ ακίπκεοζδ ηςκ αζηζμθμβζηχκ παναβυκηςκ δζαθυνςκ ηθζκζηά ζδιακηζηχκ θμζιχλεςκ. Ωζηυζμ, δ πανμοζία ιέζα ζηα δείβιαηα αοηά μοζζχκ, πμο δνμοκ ςξ ακαζηαθηέξ ηδξ PCR, δοζπεναίκεζ ηδ ιμνζαηή ιεθέηδ ημοξ ιε ηζξ ηεπκζηέξ πμθθαπθαζζαζιμφ ηςκ κμοηθεσηχκ μλέςκ. Οζ μοζίεξ πμο πενζέπμκηαζ ζηζξ αζιμηαθθζένβεζεξ ηαζ έπμοκ ιέπνζ ζήιενα ηαοημπμζδεεί ςξ ακαζηαθηζηέξ βζα ηδκ PCR, πενζθαιαάκμοκ δζάθμνα θοζζηά ζοζηαηζηά ημο ακενχπζκμο αίιαημξ (υπςξ ηδκ αζιμζθαζνίκδ, ημ θεοημηοηηανζηυ DNA, ηδκ IgG ακμζμζθαζνίκδ ηαζ ηδ θαηημθενίκδ), ηαεχξ ηαζ πμζηίθμοξ ακηζπδηηζημφξ πανάβμκηεξ (υπςξ ηδκ δπανίκδ ηαζ ημ EDTA), πμο πνμζηίεεκηαζ ζημοξ ειπμνζηά δζαεέζζιμοξ γςιμφξ εκμθεαθιζζιμφ απυ ηζξ ηαηαζηεοάζηνζεξ εηαζνείεξ (Al-Soud and Radstrom 2001). Έκαξ ηέημζμξ πανάβμκηαξ, ιάθζζηα, μ μπμίμξ έπεζ ζδζαίηενα ιεθεηδεεί θυβς ηδξ ζζπονήξ ακαζηαθηζηήξ ημο δνάζδξ είκαζ ηαζ δ μοζία SPS (sodium polyanetholsulfonic acid), πμο πνδζζιμπμζείηαζ ζηζξ θζάθεξ ηςκ αζιμηαθθζενβεζχκ ηυζμ βζα ηζξ ακηζπδηηζηέξ, υζμ ηαζ βζα ηζξ ακηζζοιπθδνςιαηζηέξ ημο ζδζυηδηεξ. Σμ SPS είκαζ έκα ορδθμφ ιμνζαημφ αάνμοξ πμθοακζυκ, δζαθοηυ ζημ κενυ, αθθά αδζάθοημ ζηδκ αθημυθδ, πμο ηαηά ηδκ εηπφθζζδ ηείκεζ κα ηαεαίνεηαζ ιαγί ιε ημ DNA, ιε απμηέθεζια κα ηαηαθήβεζ ιέζα ζημ ιίβια ηδξ PCR. ε αοηυ ημ πθαίζζμ, ιζα ζεζνά ιεευδςκ απμιυκςζδξ ααηηδνζαημφ βεκεηζημφ οθζημφ έπμοκ ακαπηοπεεί ιε ζηυπμ ηδκ αναίςζδ, αδνακμπμίδζδ ή απμιάηνοκζδ ημο SPS ή άθθςκ ακαζηαθηχκ ηδξ ακηίδναζδξ πμο πενζέπμκηαζ ζηζξ εεηζηέξ αζιμηαθθζένβεζεξ (Fredricks and Relman 1998; Millar, Jiru et al. 2000). Σελίδα 140

141 Δπζπθέμκ, πμζηίθμο ααειμφ εοαζζεδζία ζηδκ επίδναζδ ηέημζςκ μοζζχκ παναηδνείηαζ ηαζ ιεηαλφ ηςκ δζαθυνςκ εενιμακεεηηζηχκ DNA πμθοιεναζχκ, ακηακαηθχκηαξ άιεζα ζηδκ απυδμζδ ηδξ ακηίδναζδξ (Al-Soud and Radstrom 2001). ηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή, μ ζοκδοαζιυξ ηδξ μνβακζηήξ ιεευδμο εηπφθζζδξ ιε αεκγοθζηή αθημυθδ ηαζ εεζμηοακζμφπμ βμοακζδίκδ ιε ηδ HotStar DNA πμθοιενάζδ ακαδείπεδηε απμηεθεζιαηζηυξ βζα ηδκ απεοεείαξ εθανιμβή ηδξ πμθοπθεηηζηήξ PCR ζε οθζηυ εεηζηχκ αζιμηαθθζενβεζχκ. Σέθμξ, ημ πνςηυημθθμ πμο ακαπηφπεδηε ιείςζε ημκ απαζημφιεκμ πνυκμ βζα ηδκ αζηζμθμβζηή δζάβκςζδ ιζαξ ζηαθοθμημηηζηήξ ααηηδνζαζιίαξ ζηζξ έλζ ιυθζξ χνεξ (μζ δζάνηεζεξ ηδξ εηπφθζζδξ ημο ααηηδνζαημφ βεκεηζημφ οθζημφ, ημο πμθθαπθαζζαζιμφ ηαζ ηδξ δθεηηνμθυνδζδξ ηςκ πνμσυκηςκ οπμθμβίζηδηακ ζε ιία, δφμ ηαζ ηνεζξ χνεξ, ακηίζημζπα). ημκ ακηίπμδα, δφμ ιε ηνία εζημζζηεηνάςνα είκαζ απαναίηδηα ζοκμθζηά βζα ηδκ ακάπηολδ ημο ζηαθοθμηυηημο ζηα ζηενεά ενεπηζηά οθζηά ηαζ ημ θαζκμηοπζηυ ημο έθεβπμ ιε ημ αοημιαημπμζδιέκμ ζφζηδια Vitek 2. Γεδμιέκμο υηζ ιυκμ απυ ηδ ζοιααηζηή ιεεμδμθμβία επελενβαζίαξ ιζαξ εεηζηήξ αζιμηαθθζένβεζαξ ιπμνεί κα πνμηφρεζ ημ πθήνεξ ακηζαζυβναιια ημο παεμβυκμο ζηεθέπμοξ, αθθά ηαζ κα δζενεοκδεεί δ πζεακυηδηα ηοπυκ πμθοιζηνμαζαηήξ θμίιςλδξ, δ PCR πμο ζπεδζάζηδηε δεκ ιπμνεί κα ηδκ ακηζηαηαζηήζεζ, αθθά κα ηδκ εκζζπφζεζ. Ζ εθανιμβή ηδξ πμθοπθεηηζηήξ ακηίδναζδξ βζα ηδκ ηαπεία ακαβκχνζζδ ημο είδμοξ ηαζ ηδξ ακημπήξ ζηδ ιεεζηζθθίκδ εκυξ ηθζκζημφ ζηεθέπμοξ ζηαθοθμηυηημο, πμο απμιμκχκεηαζ απυ ιζα εεηζηή αζιμηαθθζένβεζα ηαζ δ έβηαζνδ πανμπή ηςκ πθδνμθμνζχκ αοηχκ ζημοξ ηθζκζημφξ ζαηνμφξ ακαιέκεηαζ κα μδδβήζεζ ζε αιεζυηενδ έκανλδ ή αθθαβή ηδξ πμνδβμφιεκδξ ακηζιζηνμαζαηήξ αβςβήξ, ιείςζδ ηδξ εκδηυηδηαξ ηςκ αζεεκχκ, εθάηηςζδ ημο πνυκμο κμζδθείαξ ημοξ, ηαζ πηχζδ ηδξ ζοκμθζηήξ δζαβκςζηζηήξ ηαζ εεναπεοηζηήξ δαπάκδξ πμο ημοξ αθμνά (Trenholme, Kaplan et al. 1989; Doern, Vautour et al. 1994; Barenfanger, Drake et al. 1999). Δπζπθέμκ, δ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή εζηζάζηδηε ζε έκα κέμ είδμξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφ ζηαθοθμηυηημο, ημκ S. lugdunensis, ημο μπμίμο ηυζμ ηα ιζηνμαζμθμβζηά παναηηδνζζηζηά, υζμ ηαζ ημ παεμβυκμ δοκαιζηυ πνμζμιμζάγμοκ ιε αοηά ημο S. aureus. Ακ ηαζ δ επίπηςζή ημο ζημ ζφκμθμ ηςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ ηοιαίκεηαζ ιεηαλφ 0,7% ηαζ 7,3% (De Paulis, Predari et al. 2003; Shin, Jung et al. 2007; Kleiner, Monk et al. 2010; Liu, Shen et al. 2012), δ απμιυκςζδ ημο S. lugdunensis απυ ηα ηθζκζηά δείβιαηα εεςνείηαζ ςξ ακηζπνμζςπεοηζηή θμίιςλδξ ζε πάκς απυ 80% ηςκ πενζπηχζεςκ (Kleiner, Monk et al. 2010; Wu, Wang et al. 2011). Μάθζζηα, ζηζξ ηαθθζένβεζεξ οθζηχκ απυ ιδ ζηείνεξ πενζμπέξ μ S. Σελίδα 141

142 lugdunensis εεςνείηαζ ημ πθέμκ παεμβυκμ ημαβημοθάζδ ανκδηζηυ είδμξ, αθήκμκηαξ πίζς ημο ημοξ S. saprophyticus, S. epidermidis ηαζ S. haemolyticus (Tan, Ng et al. 2006). ηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή ιεθεηήεδηακ ακαδνμιζηά 14 ζηεθέπδ S. lugdunensis, πμο απμιμκχεδηακ ζηδ δζάνηεζα ιζαξ ηνζεηίαξ ζημ Δνβαζηήνζμ Κθζκζηήξ Μζηνμαζμθμβίαξ ημο Πακεπζζηδιζαημφ Γεκζημφ Νμζμημιείμο «ΑΣΣΗΚΟΝ», ιε ζημπυ ημκ έθεβπμ ηδξ επάνηεζαξ ηδξ ζοιααηζηήξ δζαβκςζηζηήξ ιεεμδμθμβίαξ, αθθά ηαζ ημκ πνζδζμνζζιυ ημο θάζιαημξ ηςκ θμζιχλεςκ ημο κέμο αοημφ παεμβυκμο. Γζα ηδκ ηαοημπμίδζδ ημο S. lugdunensis, ζηδκ πανμφζα ιεθέηδ εθέβπεδηε δ αλζμπζζηία ηςκ ειπμνζηχκ ζοζηδιάηςκ Phoenix ηαζ API Staph, ηαεχξ ηαζ εκυξ ζφκημιμο ζοιααηζημφ πνςημηυθθμο πμο πενζθάιαακε ηζξ δμηζιαζίεξ εθεφεενδξ ηαζ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ, ποννμθζκμδάζδξ ηαζ απμηαναμλοθάζδξ ηδξ μνκζείκδξ. Ωξ ιέεμδμξ ακαθμνάξ βζα ηδκ ακαβκχνζζδ ημο είδμοξ πνδζζιμπμζήεδηε μ πνμζδζμνζζιυξ ηδξ αθθδθμοπίαξ ημο 16S rrna βμκζδίμο. Πανά ημ ιζηνυ ανζειυ ζηεθεπχκ πμο ελεηάζεδηακ, μζ θακεαζιέκεξ ηαοημπμζήζεζξ πμο πνμέηορακ ιε ημ ζφζηδια Phoenix οπμδεζηκφμοκ υηζ ιε αοηυ, υπςξ ηαζ ιε ηα ζοζηήιαηα Vitek 2, Crystal ηαζ Wider (Mateo, Maestre et al. 2005), είκαζ πζεακυ κα παναηδνδεμφκ πνμαθήιαηα εοαζζεδζίαξ ηαζ εζδζηυηδηαξ ακαθμνζηά ιε ηδκ ηαοημπμίδζδ ημο S. lugdunensis. Σμ ίδζμ ιπμνεί κα ζοιαεί ηαζ ιε ημ API Staph (De Paulis, Predari et al. 2003; Shin, Jung et al. 2007), ακ ηαζ ζηδκ ηνέπμοζα ιεθέηδ ημ ζφζηδια ακαβκχνζζε υθα ηα ζηεθέπδ ημο είδμοξ. Πένα, υιςξ, απυ ηζξ ειπμνζηά δζαεέζζιεξ διζ- ηαζ πθήνςξ αοημιαημπμζδιέκεξ πθαηθυνιεξ, δ ακίπκεοζδ ημο S. lugdunensis ζημ Δνβαζηήνζμ νμοηίκαξ είκαζ εθζηηή ιε ηδ πνήζδ ηνζχκ ιυκμ αζμπδιζηχκ δμηζιαζζχκ. οβηεηνζιέκα, ηάεε ζηέθεπμξ ανκδηζηυ ςξ πνμξ ηδκ παναβςβή εθεφεενδξ ημαβημοθάζδξ ηαζ εεηζηυ ςξ πνμξ ηζξ δναζηζηυηδηεξ ηδξ ποννμθζκμδάζδξ ηαζ απμηαναμλοθάζδξ ηδξ μνκζείκδξ ιπμνεί ιε απυθοηδ αλζμπζζηία κα ηαοημπμζδεεί ςξ S. lugdunensis (Tan, Ng et al. 2008). Ζ εεηζηή δμηζιαζία ηδξ ιακκυγδξ ιπμνεί κα πνδζζιμπμζδεεί βζα ηδκ ηεθζηή ακαβκχνζζδ ημο είδμοξ, απμθεφβμκηαξ ηδ ζφβποζδ ιε ημκ επίζδξ ποννμθζκμδάζδ εεηζηυ S. haemolyticus, ημο μπμίμο ζπάκζα ζηεθέπδ απμηαναμλοθζχκμοκ ηδκ μνκζείκδ (Schnitzler, Meilicke et al. 1998). Σέθμξ, δ ακίπκεοζδ ζοκδεδειέκδξ ημαβημοθάζδξ ζε ζηεθέπδ πμο δεκ πανάβμοκ εθεφεενδ ημαβημοθάζδ ιπμνεί κα ηαηεοεφκεζ ημκ Κθζκζηυ Μζηνμαζμθυβμ πνμξ ηδκ ηαοημπμίδζδ ημο S. lugdunensis, ακ ηαζ ημ πμζμζηυ ηςκ ζηεθεπχκ πμο ακεονίζημκηαζ εεηζηά ηοιαίκεηαζ απυ 36% ςξ 100% (Ebright, Penugonda et al. 2004; Mateo, Maestre et al. 2005; Hellbacher, Tornqvist et al. 2006). Σελίδα 142

143 Απυ πθεονάξ ιμνθμθμβζηχκ παναηηδνζζηζηχκ, ζδιακηζηυ πμζμζηυ (64%) ηςκ ζηεθεπχκ ηδξ πανμφζαξ δζδαηημνζηήξ δζαηνζαήξ πανμοζίαζακ έκημκδ απμζηζαηή πμζηζθμιμνθία ηαηά ημ πνχημ εζημζζηεηνάςνμ, πμο μοζζαζηζηά ελαθείθεδηε ιεηά ηδκ πάνμδμ 48 ςνχκ. Σαοηυπνμκα, υθα ηα ζηεθέπδ ειθάκζζακ ελανπήξ α-αζιυθοζδ, παναβςβή ηίηνζκδξ πνςζηζηήξ ηαζ μζιή θεοηακηζημφ, παναηηδνζζηζηά ηα μπμία εκηάεδηακ ιε ηδκ πανάηαζδ ηδξ επχαζδξ. Ζ ιμνθμθμβζηή πμζηζθμιμνθία ημο S. lugdunensis έπεζ ηαηαβναθεί ήδδ απυ ηδκ ανπζηή ημο πενζβναθή, ζηδκ μπμία ακαθένεηαζ υηζ δ δζάιεηνμξ ηςκ απμζηζχκ ημο είδμοξ πμζηίθεζ απυ 1 mm έςξ 4 mm (Freney, Brun et al. 1988), εκχ ηαζ ιεηαβεκέζηενα επζζδιαίκεηαζ δ φπανλδ ζδιακηζημφ πμζμζημφ ζηεθεπχκ ιε ιζηημφξ ιμνθυηοπμοξ, μζ μπμίμζ, ιάθζζηα, παναιέκμοκ ιεηά απυ δζαδμπζηέξ ακαηαθθζένβεζεξ (Leung, Nuttall et al. 1998). Σμ πνχια ηςκ απμζηζχκ ημο S. lugdunensis ηοιαίκεηαζ απυ ιπεγ-ηνειχδεξ ιέπνζ ηίηνζκμ-πνοζυ ηαζ εκηείκεηαζ ηαηά ηδ δζάνηεζα ηδξ επχαζδξ (Freney, Brun et al. 1988), εκχ ηάπμζμζ ενεοκδηέξ ακαθένμοκ υηζ είκαζ παναηηδνζζηζηά θεοηυηενμ απυ αοηυ ηςκ οπμθμίπςκ ημαβημοθάζδ ανκδηζηχκ ζηαθοθμηυηηςκ (Bellamy and Barkham 2002; Kleiner, Monk et al. 2010). Ακαθμνζηά ιε ηδ α-αζιυθοζδ, αζαθζμβναθζηά ηαηαβνάθεηαζ ζε πμζμζηυ ιεβαθφηενμ ημο 85% ηςκ ζηεθεπχκ ημο είδμοξ (Tan, Ng et al. 2008; Kleiner, Monk et al. 2010), εκχ έκα αηυια παναηηδνζζηζηυ πμο επζαεααζχκεηαζ ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή είκαζ δ παναβςβή παναηηδνζζηζηήξ μζιήξ πμο ιμζάγεζ ιε αοηή ηδξ Eikenella corrodens (Bocher, Tonning et al. 2009). Ακαθμνζηά ιε ηδκ ακημπή ημο ζημοξ ακηζιζηνμαζαημφξ πανάβμκηεξ, δ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή ακέδεζλε έκα πμθοεοαίζεδημ θαζκυηοπμ βζα ημκ S. lugdunensis, δεδμιέκμο υηζ ακεονέεδηε έκα ζηέθεπμξ ακεεηηζηυ ζηζξ ηζκμθυκεξ, έκα ζηδ βεκηαιζηίκδ, δφμ ζηδκ πεκζηζθθίκδ ηαζ έκα ζηδκ πεκζηζθθίκδ ηαζ ηδκ μλαηζθθίκδ. ε ακηίεεζδ ιε ημοξ πενζζζυηενμοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ, μ S. lugdunensis έπεζ παναιείκεζ εοαίζεδημξ ζε έκα εονφ θάζια ακηζιζηνμαζαηχκ (Frank, Del Pozo et al. 2008), ιε ηα ορδθυηενα πμζμζηά ακημπήξ κα ηαηαβνάθμκηαζ βζα ηδκ πεκζηζθθίκδ ηαζ κα θεάκμοκ ιέπνζ ηαζ ημ 80% ζηζξ ΖΠΑ (Klotchko, Wallace et al. 2011), ημ 53% ζηδκ Αζία (Wu, Wang et al. 2011) ηαζ ημ 24% ζηδκ Δονχπδ (van der Mee-Marquet, Achard et al. 2003). Με ηδκ ελαίνεζδ ιίαξ ιεθέηδξ (Klotchko, Wallace et al. 2011), δ ακημπή ημο S. lugdunensis ζηδκ μλαηζθθίκδ δεκ λεπενκά ημ 5% (Hellbacher, Tornqvist et al. 2006; Tan, Ng et al. 2008; Kleiner, Monk et al. 2010) ηαζ απμδίδεηαζ ζηδκ ηνμπμπμζδιέκδ πεκζηζθθζκμδεζιεοηζηή πνςηεΐκδ PBP2a, πμο δζαεέηεζ ιεζχιεκδ ζοββέκεζα βζα υθα ηα α- θαηηαιζηά ακηζαζμηζηά ηαζ ηςδζημπμζείηαζ απυ ημ βμκίδζμ meca. Γεδμιέκμο υηζ ζημ μλαηζθθίκδ Σελίδα 143

144 ακεεηηζηυ ζηέθεπμξ ηδξ πανμφζαξ δζδαηημνζηήξ δζαηνζαήξ μ ιμνζαηυξ έθεβπμξ βζα ηδκ ακίπκεοζδ ημο βμκζδίμο αοημφ απέαδ ανκδηζηυξ, δζεκενβήεδηε πεναζηένς ένεοκα χζηε κα δζενεοκδεμφκ πζεακμί εκαθθαηηζημί ιδπακζζιμί ακημπήξ, υπςξ δ οπενπαναβςβή α-θαηηαιάζδξ ή πανμοζία ηνμπμπμζδιέκςκ θοζζμθμβζηχκ PBPs. Σεθζηά, δζαπζζηχεδηε υηζ ημ ζηέθεπμξ δζέεεηε ιεηαθθαβιέκδ ηδκ πνςηεΐκδ PBP1A/1B, ιε αιζκμλζηέξ ηαζ ζοκαηυθμοεεξ δμιζηέξ αθθαβέξ ζημ εκενβυ ηέκηνμ ηδξ ηνακζπεπηζδάζδξ (Kotsakis, Tzouvelekis et al. 2012). ε υ,ηζ αθμνά ηδκ ηθζκζηή ημο ζδιαζία, ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή, μ S. lugdunensis εεςνήεδηε ςξ πνςηεφμκ αίηζμ θμίιςλδξ ζημ 58% ηαζ ςξ πζεακυ ζοκ-παεμβυκμ ζημ 25% ηςκ αζεεκχκ ιε εεηζηέξ ηαθθζένβεζεξ (ηαζ δζαεέζζιμ ζαηνζηυ ζζημνζηυ). Σα απμηεθέζιαηα αοηά ζοιααδίγμοκ ιε ηα αζαθζμβναθζηά δεδμιέκα ςξ πνμξ ημ ζαθχξ πζμ εκζζποιέκμ παεμβυκμ δοκαιζηυ ημο είδμοξ, ζε ζπέζδ ιε ημοξ οπυθμζπμοξ ημαβημοθάζδ ανκδηζημφξ ζηαθοθμηυηημοξ. ε ακηίζημζπεξ ιεθέηεξ ιε 50, 42 ηαζ 57 αζεεκείξ, ακηίζημζπα, μζ Herchline ηαζ ζοκ, Kleiner ηαζ ζοκ. ηαζ Wu ηαζ ζοκ. ακαθένμοκ υηζ δ απμιυκςζδ ημο S. lugdunensis απυ ημ ζφκμθμ ηςκ ηθζκζηχκ δεζβιάηςκ αλζμθμβήεδηε ςξ ζδιακηζηή ζε πενζζζυηενμ απυ ημ 80% ηςκ πενζπηχζεςκ (Herchline and Ayers 1991; Kleiner, Monk et al. 2010; Wu, Wang et al. 2011). Μάθζζηα, ζηζξ ίδζεξ ακαθμνέξ οπμβναιιίγεηαζ δ φπανλδ ζμαανμφ οπμηείιεκμο κμζήιαημξ (υπςξ ηαημήεεζαξ, κεθνζηήξ ακεπάνηεζαξ ή ζαηπανχδμοξ δζααήηδ) ή πνμδβδεείζαξ πεζνμονβζηήξ επέιααζδξ ή ηναοιαηζζιμφ ζηδκ πθεζμρδθία ηςκ αζεεκχκ ιε ηθζκζηά ζδιακηζηή θμίιςλδ, παναηήνδζδ δ μπμία επζαεααζχκεηαζ ηαζ ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή. Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ ζε υθεξ ηζξ πενζπηχζεζξ πμο μ S. lugdunensis απμιμκχεδηε απυ αζιμηαθθζένβεζεξ εεςνήεδηε ηθζκζηά ζδιακηζηυξ ηαζ ζηζξ ιζζέξ ακηζζημζπμφζε ζε εκδμηανδίηζδα. Σα πενζζηαηζηά απθήξ ααηηδνζαζιίαξ ακηζιεηςπίζηδηακ ιε ακηζιζηνμαζαηή αβςβή, εκχ ζηα ακηίζημζπα ηδξ εκδμηανδίηζδαξ δζεκενβήεδηακ επζπθέμκ επείβμοζεξ πεζνμονβζηέξ πανειαάζεζξ ηαζ δ έηααζδ υθςκ ηςκ αζεεκχκ οπήνλε απυθοηα ζηακμπμζδηζηή. Ακ ηαζ δ απθή ααηηδνζαζιία δζαδνάιεζ ήπζα ηαζ εεςνείηαζ, ςξ επί ημ πθείζημκ, ηαθήξ πνυβκςζδξ (Ebright, Penugonda et al. 2004; Zinkernagel, Zinkernagel et al. 2008; Choi, Chung et al. 2010), δ εκδμηανδίηζδα απυ S. lugdunensis ζπεηίγεηαζ ιε ζμαανέξ επζπθμηέξ ηαζ ορδθή εκδηυηδηα (Anguera, Del Rio et al. 2005; Liu, Huang et al. 2010) ηαζ εα πνέπεζ κα απμηθείεηαζ ζε ηάεε πενίπηςζδ απμιυκςζδξ ημο είδμοξ απυ εεηζηέξ αζιμηαθθζένβεζεξ. Σέθμξ, ζηδκ πανμφζα δζδαηημνζηή δζαηνζαή ηαηαβνάθδηακ δφμ αηυια πενζζηαηζηά θμζιχλεςκ ανενμπθαζηζηχκ βυκαημξ, ηαεχξ ηαζ ιία μονμθμίιςλδ, πμο ακ ηαζ ζπάκζα ακαθένμκηαζ ζηδ αζαθζμβναθία (Haile, Hughes et al. 2002; Shah, Osmon et al. 2010). Σελίδα 144

145 Ζ ηοπμπμίδζδ ηςκ 23 ζηεθεπχκ S. lugdunensis ακέδεζλε έλζ ηφπμοξ ζηδκ PFGE, ηέζζενζξ εη ηςκ μπμίςκ πενζείπακ ζηεθέπδ πενζζζυηενςκ ημο εκυξ (δφμ έςξ έλζ) αζεεκχκ. Με δεδμιέκμ υηζ μζ αζεεκείξ είπακ κμζδθεοεεί ζε δζαθμνεηζηέξ πνμκζηέξ πενζυδμοξ ηαζ ηθζκζηέξ ημο κμζμημιείμο, ημ είδμξ θαίκεηαζ κα δζαεέηεζ παιδθή βεκεηζηή πμζθζημιμνθία, υπςξ ζδιεζχκεηαζ ηαζ απυ άθθμοξ ενεοκδηέξ (van der Mee-Marquet, Achard et al. 2003; Hellbacher, Tornqvist et al. 2006; Kleiner, Monk et al. 2010; Pereira, Oliveira et al. 2010). Μάθζζηα ζε ζοιθςκία ιε ιία πνμδβμφιεκδ ιεθέηδ (van der Mee-Marquet, Achard et al. 2003), υθα ηα ακεεηηζηά ζηδκ πεκζηζθθίκδ ζηεθέπδ ηδξ πανμφζαξ δζδαηημνζηήξ δζαηνζαήξ ακήηακ ζημκ ίδζμ ηφπμ ηαζ οπυηοπμ (C1) ηδξ PFGE. οιπεναζιαηζηά, μ S. lugdunensis απμηεθεί έκα ακαδουιεκμ ημαβημοθάζδ ανκδηζηυ είδμξ ιε αζοκήεζζηα εκζζποιέκμ παεμβυκμ δοκαιζηυ, ιε ημ μπμίμ είκαζ απαναίηδημ κα ελμζηεζςεεί ηυζμ μ ενβαζηδνζαηυξ, υζμ ηαζ μ ηθζκζηυξ ζαηνυξ. Ζ μνεή ακαβκχνζζή ημο ιε ηδ πνήζδ απθχκ αζμπδιζηχκ δμηζιαζζχκ, ιπμνεί κα ηαηαζηήζεζ εθζηηυ ημκ αηνζαέζηενμ πνμζδζμνζζιυ ηδξ ζοπκυηδηάξ ημο ηαζ κα επζηνέρεζ ηδκ εκδεθεπή ιεθέηδ ηςκ θμζιχλεςκ ζηζξ μπμίεξ εκέπεηαζ. Σέθμξ, δ δζανηχξ αολακυιεκδ ηθζκζηή ζδιαζία ημο S. lugdunensis επζαάθεζ ηδ ζηεκή επζηήνδζδ ηδξ ακημπήξ ημο ζημοξ ακηζιζηνμαζαημφξ πανάβμκηεξ, αθθά ηαζ ηδκ ακεφνεζδ ηαηάθθδθςκ ενβαθείςκ ηοπμπμίδζήξ ημο, δεδμιέκδξ ηδξ παιδθήξ βεκεηζηήξ ημο πμζηζθμιμνθίαξ. Σελίδα 145

146 4) ΠΑΡΑΡΣΖΜΑ Δζηυκα 1: Βαζζηή δμιή ηςκ α-θαηηαιζηχκ ακηζαζμηζηχκ, πμο πενζθαιαάκμοκ ηζξ πεκζηζθθίκεξ, ηζξ ηεθαθμζπμνίκεξ, ηζξ ιμκμααηηάιεξ ηαζ ηζξ ηανααπεκέιεξ (μ α-θαηηαιζηυξ δαηηφθζμξ θαίκεηαζ ιε ιπθε πνχια). Σελίδα 146

147 Δζηυκα 2: Μδπακζζιυξ δνάζδξ ηςκ α-θαηηαιζηχκ ακηζαζμηζηχκ. Ζ πεπηζδμβθοηάκδ ημο ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ ηςκ ααηηδνίςκ απμηεθείηαζ απυ εκαθθαζζυιεκα ιυνζα Ν-αηεηοθμβθοημγαιίκδξ (NAG) ηαζ Ν-αηεηοθμ-ιμοναιζημφ μλέμξ (ΝΑΜΑ). Οζ ηνακζπεπηζδάζεξ ηδξ ααηηδνζαηήξ ηοηηανζηήξ ιειανάκδξ ηαηαθφμοκ ηδ ζφκδεζδ ηςκ πεπηζδζηχκ αθοζίδςκ βεζημκζηχκ ιμνίςκ Ν-αηεηοθμ-ιμοναιζημφ μλέμξ ιε βέθονεξ πεκηαβθοηίκδξ (5 gly). Οζ α- θαηηάιεξ απμηεθχκηαξ πδιζηυ ακάθμβμ ημο δζπεπηζδίμο ηδξ D-αθακίκδξ (D-ala-D-ala), πμο ανίζηεηαζ ζημ ηεθζηυ άηνμ ηςκ πεπηζδζηχκ αθοζίδςκ ημο Ν-αηεηοθμ-ιμοναιζημφ μλέμξ, ζοκδέμκηαζ ιε ηδκ ακηίζημζπδ ηνακζπεπηζδάζδ ηαζ ακαζηέθθμοκ ημ ζπδιαηζζιυ ηδξ βέθοναξ πεκηαβθοηίκδξ ηζ, έηζζ, ημκ πμθοιενζζιυ ηδξ πεπηζδμβθοηάκδξ ηαζ ηδ ζφκεεζδ ημο ααηηδνζαημφ ηοηηανζημφ ημζπχιαημξ. Σελίδα 147

148 Δζηυκα 3: Ρφειζζδ ηδξ ακημπήξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδκ πεκζηζθθίκδ ηαζ ηδ ιεεζηζθθίκδ, ιέζς ηςκ μπενμκίςκ bla ηαζ mec, ακηίζημζπα. a) Δπαβςβή ηδξ ζφκεεζδξ α-θαηηαιάζδξ πανμοζία πεκζηζθθίκδξ: I) Ζ πνςηεΐκδ ζφκδεζδξ ιε ημ DNA BlaI ζοκδέεηαζ ιε ηδκ αθθδθμοπία-πεζνζζηή (operator) ημο μπενμκίμο, ηαηαζηέθθμκηαξ ηδ ιεηαβναθή ηςκ βμκζδίςκ blaz ηαζ blar1-blai (απμοζία πεκζηζθθίκδξ ημ επίπεδμ έηθναζδξ ηδξ α-θαηηαιάζδξ είκαζ πμθφ παιδθυ). II-IV) Ζ ζφκδεζδ ηδξ πεκζηζθθίκδξ ζημ ελςηοηηάνζμ ηαναμλοηεθζηυ άηνμ ηδξ δζαιειανακζηήξ πνςηεΐκδξ BlaR1, πμο θεζημονβεί ςξ ιεηαβςβέαξ ζήιαημξ, μδδβεί ζε απμημπή ηιήιαημξ ημο εκδμηοηηάνζμο αιζκμηεθζημφ ηδξ άηνμο. Σμ ηιήια αοηυ, ιυκμ ημο ή ιε ηδ αμήεεζα ιζαξ επζπθέμκ πνςηεΐκδξ, ηδξ BlaR2, δζαζπά ηαζ απεκενβμπμζεί ηδκ BlaI, επζηνέπμκηαξ ηδκ έκανλδ ηδξ ιεηαβναθήξ ηςκ blaz ηαζ blar1-blai. V-VII) Ζ παναβυιεκδ α-θαηηαιάζδ, πμο ηςδζημπμζείηαζ απυ ημ βμκίδζμ blaz οδνμθφεζ ημ α-θαηηαιζηυ δαηηφθζμ ηδξ πεκζηζθθίκδξ ηαεζζηχκηαξ ηδκ ακεκενβή. b) Μδπακζζιυξ ακημπήξ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ζηδ ιεεζηζθθίκδ: Ζ ζφκεεζδ ηδξ πνςηεΐκδξ PBP2a αημθμοεεί πανυιμζα μδυ ιε αοηή πμο πενζβνάθεηαζ βζα ηδ α-θαηηαιάζδ. Ζ έηεεζδ ζημ α- θαηηαιζηυ πανάβμκηα επάβεζ ηδ ζφκεεζδ ηδξ MecR1 ηαζ ηδ ζοκαηυθμοεδ απεκενβμπμίδζδ ημο ηαηαζημθέα MecI (πμο ηςδζημπμζμφκηαζ απυ ηα ακηίζημζπα βμκίδζα, mecr1 ηαζ meci), ιε απμηέθεζια ηδκ έκανλδ ηδξ ιεηαβναθήξ ημο meca (πμο ηςδζημπμζεί ηδκ PBP2a). Σελίδα 148

149 Δζηυκα 4: Απθμπμζδιέκμξ αθβυνζειμξ ηαοημπμίδζδξ ηθζκζηχκ ζηεθεπχκ ζηαθοθμηυηηςκ απυ ημοξ Iorio ηαζ ζοκ. φιαμθα ηαζ ζοκημιμβναθίεξ: FOS, αθηαθζηή θςζθαηάζδ // CF, πανάβμκηαξ ζοβηυθθδζδξ // NOV, ακημπή ζηδ κμαμαζμηίκδ // DEF, ακημπή ζηδ δεζθεννζμλαιίκδ // URE, μονεάζδ // MAN, D-ιακκυγδ // TRE, D-ηνεπαθυγδ // XYL, D-λοθυγδ // +, εεηζηυ απμηέθεζια // -, ανκδηζηυ απμηέθεζια // s, εοαίζεδημ // r, ακεεηηζηυ. Οζ ανζειμί ακηζζημζπμφκ ζηα είδδ ηςκ ζηαθοθμηυηηςκ ςξ ελήξ: 1 S. epidermidis, 2 S. haemolyticus; 3 S. lugdunensis, 4 S. schleiferi subsp. schleiferi, 5 S. hominis subsp. hominis, 6 S. hominis subsp. novobiosepticus, 7 S. saprophyticus, 8 S. warneri, 9 S. cohnii subsp. cohnii, 10 S. cohnii subsp. urealyticus, 11 S. capitis subsp. capitis, 12 S. capitis subsp. urealyticus, 13 S. xylosus, 14 S. sciuri ηαζ 15 S. aureus. Σελίδα 149

150 Δζηυκα 5: Αθβυνζειμξ ηαοημπμίδζδξ 11 ηθζκζηά ζδιακηζηχκ εζδχκ ζηαθοθμηυηηςκ ιε RFLP ακάθοζδ ημο βμκζδίμο tuf. Καηαβνάθμκηαζ ηα ιήηδ ηςκ πνμσυκηςκ πμο πνμηφπημοκ ιεηά απυ πέρδ ηιήιαημξ ημο βμκζδίμο ιήημοξ 370 bp ιε ηζξ πενζμνζζηζηέξ εκδμκμοηθεάζεξ BstZ17I, MseI, BseNI ηαζ HinfI. Σελίδα 150

151 Δζηυκα 6: (a) Γμιζηή μνβάκςζδ ηςκ πνςηεσκχκ Fbl ημο είδμοξ S. lugdunensis ηαζ ClfA ημο S. aureus (ηαηαβνάθμκηαζ ηα εηαημζηζαία πμζμζηά μιμζυηδηαξ ηδξ αιζκμλζηήξ αημθμοείαξ ηςκ ακηίζημζπςκ ηιδιάηςκ ηςκ δφμ ιμνίςκ). (b) ημίπζζδ ηςκ αιζκμλζηχκ αθθδθμοπζχκ ηςκ πνςηεσκχκ ιε ημ θμβζζιζηυ CLUSTALW (ηα ηαηάθμζπα πμο είκαζ ζδιακηζηά βζα ηδ ζφκδεζδ ημοξ ιε ημ ζκςδμβυκμ θαίκμκηαζ ημκζζιέκα ηαζ οπμβναιιζζιέκα). Σελίδα 151

152 Δζηυκα 7: Απμηεθέζιαηα ακίπκεοζδξ ημο βμκζδίμο fbl ζε ζηεθέπδ ηδξ ιεθέηδξ. Θέζδ 1: δείηηδξ ιμνζαημφ αάνμοξ, εέζδ2: ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, εέζδ 3: S. lugdunensis ATCC , εέζεζξ 4-5: ηθζκζηά ζηεθέπδ S. lugdunensis, εέζδ 6: S. aureus ATCC 25923, εέζδ 7: S epidermidis ATCC 12228, εέζδ 8: S. haemolyticus ATCC 29970, εέζδ 9: S. saprophyticus ATCC 49453, εέζδ 10: S. simulans ATCC 27851, εέζδ 11: S. capitis subsp. capitis ATCC 35661, εέζδ 12: S. warneri ATCC 49454, εέζδ 13: S. sciuri subsp. sciuri ATCC S. lugdunensis 390bp S. lugdunensis 390bp S. lugdunensis 390bp Σελίδα 152

153 Δζηυκα 8: Απμηεθέζιαηα multiplex PCR ιε ηθζκζηά ζηεθέπδ ζηαθοθμηυηηςκ. Θέζδ 1: δείηηδξ ιμνζαημφ αάνμοξ, εέζδ 2: S. aureus meca(+), εέζδ 3: S. epidermidis meca(+), εέζδ 4: S. hominis meca(+), εέζδ 5: S. saprophyticus, εέζδ 6: S. capitis, εέζδ 7: S. simulans, εέζδ 8: S. aureus, εέζδ 9: S. lugdunensis, εέζδ 10: S. hominis, εέζδ 11: S. epidermidis meca(+), εέζδ 12: S. haemolyticus meca(+), εέζδ 13: S. lugdunensis, εέζδ 14: δείηηδξ ιμνζαημφ αάνμοξ. Σελίδα 153

154 Δζηυκα 9: Απμηεθέζιαηα εθανιμβήξ ηδξ multiplex PCR ζε ηεπκδηά εκμθεαθιζζιέκεξ θζάθεξ αζιμηαθθζενβεζχκ. Θέζδ 1: δείηηδξ ιμνζαημφ αάνμοξ, εέζδ 2: πνυηοπμ ζηέθεπμξ S epidermidis ATCC 12228, εέζδ 3: ηθζκζηυ ζηέθεπμξ S. epidermidis meca(+), εέζδ 4: πνυηοπμ ζηέθεπμξ S. lugdunensis ATCC , εέζδ 5: πνυηοπμ ζηέθεπμξ S. haemolyticus ATCC 29970, εέζδ 6: πνυηοπμ ζηέθεπμξ S. saprophyticus ATCC 49453, εέζδ 7: ηθζκζηυ ζηέθεπμξ S. lugdunensis, εέζδ 8-9: ηθζκζηά ζηεθέπδ S. haemolyticus meca(+), εέζδ 10: ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, εέζδ 11: δείηηδξ ιμνζαημφ αάνμοξ. meca 533bp meca 533bp S. saprophyticus 326bp meca 533bp S. lugdunensis 390bp S. epidermidis 124bp S. lugdunensis 390bp S. haemolyticus 85bp S. haemolyticus 85bp S. epidermidis 124bp S. haemolyticus 85bp Σελίδα 154

155 Δζηυκα 10: Απμηεθέζιαηα εθανιμβήξ ηδξ multiplex PCR ζε θζάθεξ εεηζηχκ αζιμηαθθζενβεζχκ αζεεκχκ. Θέζδ 1: δείηηδξ ιμνζαημφ αάνμοξ, εέζδ 2-3: S. epidermidis meca(+), εέζδ 4: S. epidermidis, εέζδ 5: S. haemolyticus meca(+), εέζδ 6: S. epidermidis, εέζδ 7: S. aureus, εέζδ 8-9: S epidermidis, εέζδ 10: S. hominis, εέζδ 11: S. hominis meca(+), εέζδ 12: S. capitis, εέζδ 13: ανκδηζηυξ ιάνηοναξ, εέζδ 14: δείηηδξ ιμνζαημφ αάνμοξ. S. hominis 829bp meca 533bp meca 533bp meca 533bp S. hominis 829bp meca 533bp S. epidermidis 124bp S. aureus 463bp S. haemolyticus 85bp S. capitis 208bp S. epidermidis 124bp S. epidermidis 124bp S. epidermidis 124bp S. epidermidis 124bp S. epidermidis 124bp Σελίδα 155

156 Δζηυκα 12: Μμνθμθμβζηή πμζηζθμιμνθία ζηεθέπμοξ S. lugdunensis ιεηά απυ εζημζζηεηνάςνδ επχαζδ (α), δ μπμία ελαθείθεδηε ζηζξ 48 χνεξ (α). (α) (α) Σελίδα 156

157 Δζηυκα 13: Γεκεηζηά απμηοπχιαηα ζηεθεπχκ S. lugdunensis ιεηά απυ PFGE. m: δείηηδξ ιμνζαημφ αάνμοξ Α1: αζεεκήξ Νμ1, Α2: αζεεκήξ Νμ2, Α3: αζεεκήξ Νμ3, Α5: αζεεκήξ Νμ5, Α6: αζεεκήξ Νμ6, Α7: αζεεκήξ Νμ7, Α8: αζεεκήξ Νμ8, Α9: αζεεκήξ Νμ9, Α11: αζεεκήξ Νμ11, Α12: αζεεκήξ Νμ12, Α13: αζεεκήξ Νμ13, Α14: αζεεκήξ Νμ14. Σελίδα 157

158 Δζηυκα 14: Οιμζυηδηεξ ηαζ δζαθμνέξ ηςκ δθεηηνμθμνδηζηχκ ηφπςκ, ιεηά απυ PFGE, ηςκ ζηεθεπχκ S. lugdunensis. Α1: αζεεκήξ Νμ1, Α2: αζεεκήξ Νμ2, Α3: αζεεκήξ Νμ3, Α4: αζεεκήξ Νμ4 Α5: αζεεκήξ Νμ5, Α6: αζεεκήξ Νμ6, Α7: αζεεκήξ Νμ7, Α8: αζεεκήξ Νμ8, Α9: αζεεκήξ Νμ9, Α10: αζεεκήξ Νμ10, Α11: αζεεκήξ Νμ11, Α12: αζεεκήξ Νμ12, Α13: αζεεκήξ Νμ13, Α14: αζεεκήξ Νμ14. Σελίδα 158