Prínos prietokovej cytometrie v diagnostike vybraných indolentných lymfómov MUDr. Ľubica Váleková KHaT MFN a JLFUK Martin
Imunológia zaznamenáva veľký pokrok a jej vedecký prínos má obrovský význam v hematológii. POKROK V IMUNOLOGICKEJ FENOTYPIZÁCII prognostický význam v čase diagnózy PRESNEJŠIU KLASIFIKÁCIU MALÍGNYCH LYMFÓMOV priamy vplyv na stratifikáciu liečby
Úvod. Exaktná diagnóza indolentných lymfómov je založená na: morfologickom vzhľade, molekulárne biologických znakoch imunologických znakoch y Prietoková cytometria: Kľúčový moment v diagnostickom algoritme indolentných lymfómov
Prietoková Cytometria moderná laboratórna metóda umožňuje kvalitatívnu a kvantitatívnu analýzu fyzikálnych (optických) a chemických (fluorescenčných) vlastností bunky moderné prístroje umožňujú súbežnú analýzu až 13 parametrov (FSC, SSC a 11 fluorescenčných signálov) multiparametrová PC
Prietoková Cytometria definuje prítomnosť a množstvo molekúl na bb. doplňuje štandardnú morfológiu informáciami: o líniách buniek, o stupni ich diferenciácie, o klonalite buniek
Klonálne B-lymfocyty Benígna (polyklonálna) B-lymfoidná populácia: ly exprimujúce na svojom povrchu κ ľahký reťazec aj ly exprimujúce na svojom povrchu λ ľahký reťazec Pomer κ/λ: v PK a KD: 0,5-3,0 v LU: 1,2-2,7 Malígna (monoklonálna) B-lymfoidná populácia: ly exprimujúce na svojom povrchu κ ľahký reťazec alebo ly exprimujúce na svojom povrchu λ ľahký reťazec heterogénna expresia niektorých pan B-ly znakov (koexpresia T-ly znakov, slabá expresia CD20...)
Indolentné Lymfómy 40-50 % nonhodgkinových lymfómov (NHL) charakterizuje ich pomalá progresia choroby u neliečených pacientov, remitujúci alebo relabujúci priebeh u liečených pacientov a pokročilé klinické štádium pri stanovení dg. ochorenie dospelého veku výskyt stúpa s vekom považujú sa za liečiteľné ale nevyliečiteľné
Indolentné Lymfómy Heterogénna skupina ochorení. lymfoplazmocytový lymfóm (LPL), vlasatobunková leukémie (HCL), lymfómy z marginálnej zóny /splenický lymfóm z B buniek marginálnej zóny (SLVL)/
LPL 1-2 % NHL, M > Ž (61r) malígna proliferácia malých lymfocytov B- pôvodu(prevládajú), lymfoplazmocytoidných a plazmatických bb. prevažne v LU často prezentovaný uzlinovým a dreňovým postihnutím ak patologické bunky produkujú monoklonálny IgM, hovoríme o Waldenströmovej makroglobulinémii
Imunofenotyp LPL Nádor vždy infiltruje KD, imunofenotypový dôkaz infiltrácie KD na prietokovom cytometri je preto pre diagnózu zásadný. Infiltrácia KD je tvorená malými lymfocytmi s nízkym FSS/SSC. Charakteristický imunofenotyp.
Imunofenotyp LPL Bunky LPL exprimujú typické znaky: B-bunkové antigény: CD19+,CD20+,CD22+, CD24+,CD79a+ typicky CD5-,CD23-(CLL,MCL), CD10- (FL), HLA-Dr+, CD43+/- CD11c-/+, CD25-/+, CD103-
Imunofenotyp LPL Typickým znakom: výrazný cig (IgM) klonálna reštrikcia ľahkých reťazcov (κ/λ)
HCL 2% všetkých leukémií 2% všetkých LPO postihuje najmä mužov stredného a vyššieho veku malígna proliferácia malých vlasatých B-lymfocytov (tricholymfocytov) v PK(A) a KD(B) Charakteristická je výrazná splenomegália, pancytopénia a závažné infekcie a febrilné stavy spôsobené defektom imunity
Imunofenotyp HCL Nádor infiltruje difúzne KD a PK, menej často pečeň a LU Vlasaté bunky sú väčšie ako normálne lymfocyty Zvýšený SSC, na grafe CD45/SSC sú v monocytárnej oblasti.
Imunofenotyp HCL Bunky HCL exprimujú typické znaky: B-bunkové antigény: CD19+,CD20+,CD22+, CD79a+ typicky CD5-,CD23-(CLL,MCL), CD10- (FL), HLA-Dr+, CD24-,
Imunofenotyp HCL sig+ (všetky ťažké reťazce, najčastejšie IgM) s klonálnou reštrikciou ľahkých reťazcov (κ/λ) Typickým znakom: CD11c+, FMC7+, CD25+ znak CD103+ (od iných)
Kritériá pre imunologickú dg. HCL Stredný a heterogénny FSC, vysoký SSC, primeraná až silná (heterogénna) expresia znaku CD45, patologická populácia v monocytovom gate silná expresia znaku CD20 (intenzita expresie CD20 > CD19) Silná expresia znaku CD11c Negatívna expresia znaku CD24 Koexpresia znakov CD22/CD25/CD103 Silná expresia povrchových imunoglobulínov
Variantná forma HCL(vHCL) odlišný klinický priebeh, prognóza, odpoveď na liečbu charakteristická je leukocytóza, nereagujú na cladribín odlišný fenotyp: - pozitívna expresia CD103+ a CD11c+(často nízka) - negatívna expresia CD25- - nízka expresia FMC-7 -sig+ (IgG) kombinuje rysy klasickej HCL, PLL a lymfómu z marginálnej zóny
SLVL podobná incidencia než u HCL postihuje osoby okolo 70. roku života (pod 50 rokov výnimka) charakteristická je splenomegália bez LAP, lymfocytóza, monoklonálny Ig (IgM,IgD) cirkulujúce atypické vlasaté(vilózne) lymfocyty, výbežky cytoplazmy sú lokalizované len na jednom póle bunky, výbežky sú kratšie
Imunofenotyp SLVL Bunky exprimujú : B-bunkové znaky: CD19+, CD20+, HLA-Dr+ môžu byť : CD22+, CD24+, môžu byť : FMC-7+ a CD11c+ (častejšie CD11c-) Typicky sú: CD5-, CD10-, CD23-, CD25- a CD103- Odlíšiť SLVL od B-CLL a chcl imunofenotypizáciou je jednoduché. Odlíšiť SLVL od vhcl imunofenotypizáciou je obtiažnejšie. Odlíšiť SLVL od PLL imunofenotypizáciou je obtiažne, pomôže morfológia.
Imunofenotypové nálezy u HCL, vhcl, SLVL HCL vhcl SLVL CD11c + +/- variabilný CD25 + - variabilný CD103 + +/- variabilný CD123 + - variabilný TRAP + - variabilný sig IgM IgG IgM+IgD
Skórovací systém pre HCL podľa Matutes Marker Charakter expresie Skóre CD103 + 1 CD25 + 1 CD11c + 1 FMC-7 + 1 HCL má skóre 3-4. vhcl a SLVL majú skóre 0-2.
Záver. Morfologická diagnostika indolentných lymfómov je často obtiažna. Pre ich diagnostiku má zásadnú význam práve imunofenotypizácia. Imunofenotypizácia prietokovým cytometrom je spoľahlivá a rýchla metóda, ktorá dokáže vyšetriť veľké množstvo buniek a viac antigénov súčasne. V diagnostickom algoritme je prietokovocytometrické vyšetrenie a jeho korelácia s klinickým, cytologickým a histologickým vyšetrením kľúčový moment. Exaktná diagnostika lymfómov vyžaduje multidisciplinárny prístup.
Ďakujem za pozornosť. Lymfómová skupina Slovenska