Elektroforéza sérových bielkovín laboratórna prax a klinický význam Hunáková A., Kabelíková Z., Štefanec F., Oddelenie klinickej biochémie a hematológie Nemocnice s poliklinikou Skalica Kleiblove lekárske dni, Skalica, 2008
Obsah Laboratórna prax pri elektroforéze sérových bielkovín technické prevedenie a zhodnotenie vyšetrenia Klinický význam prípady patologických obrazov elektroforetických typov v našom laboratóriu Pozoruhodné čísla štatistické zhodnotenie záchytu paraproteínov v našom laboratóriu
Princíp elektroforetického delenia bielkovín elektroforéza je pohyb elektricky nabitých častíc (iónov, molekúl) v poli jednosmerného elektrického prúdu. pohyb jednotlivých bielkovín v elektrostatickom poli určuje ich výsledný elektrický náboj: katodický pohyb anodický pohyb veľkosť molekuly čím je molekula menšia, tým je pohyb rýchlejší
Technické vybavenie modulárny ELFO systém sebia hydragel protein K20 Systémový aplikátor K20 - umožňuje kvalitnú aplikáciu vzoriek biologického materiálu do nosiča - agarózového gélu rozhodujúci význam na kvalitu delenia ELFO - komora K20 separácia bielkovín na agarózových géloch v alkalickom tlmivom roztoku (ph 8,5) programovateľný zdroj MG 300 zdroj jednosmerného elektrického prúdu definovaných podmienok Počítačový program Phoresis - pre svoju činnosť potrebuje program bežný počítač a skener EPSON PRO 1680
Schéma rozdelenia sérových bielkovín v agarózovom géle Alb Alb α 1 α 1 α 2 β 1 β 2 γ α 2 β 1 β 2 γ Frakcie, okrem albumínovej, sú zmesou rozličných bielkovín spoločný majú iba elektroforetický pohyb
Softwarové denzitometrické vyhodnotenie elektroforézy sérových bielkovín pomocou programu Phoresis firmy sebia. Pre svoju činnosť potrebuje program bežný počítač a skener EPSON PRO 1680
Elektroforetická pohyblivosť sérových bielkovín frakcie denzitometrický záznam
Prednosti používaného elektroforetického systému Vysoká kvalita separácie sérových bielkovín Vysoká reprodukovateľnosť výsledkov Rýchlosť vyšetrení (14 vzoriek do 2 hodín) Efektívne zhodnotenie výsledkov kvalitatívne kvantitatívne
Elektroforéza sérových bielkovín Klinický význam Patologické stavy nárast podielu niektorej frakcie pokles podielu frakcie resp. jej vymiznutie nová frakcia s atypickou pohyblivosťou Klinická interpretácia výsledkov vyšetrenia je daná dlhoročnými skúsenosťami s klasickými elektroforetickými frakciami (Alb, α 1,α 2, β a γ) Elektroforetické typy charakteristické zmeny podielu elektroforetických frakcií priradené určitým chorobným stavom na základe dlhoročnej empírie poukazujú obvykle na skupinu chorôb alebo stav spoločný väčšiemu počtu nozologických jednotiek
Elektroforetický gél po separácii sérových bielkovín 1 2 3 4 5 6 7 Polyklonálna gamapatia akútna fáza zápalu, zvýšené α1, α 2, znížený albumín Hypogamaglobulinémia Monoklonálna gamapatia
Elektroforetický profil sérových bielkovín u zdravého človeka
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta s nefrotickým syndrómom
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta s akútnym zápalom
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta s hypogamaglobulinémiou
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta s chronickou hepatitídou polyklonálna gamapatia
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta s cirhózou pečene polyklonálna gamapatia β - γ mostík
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta s plazmocytómom monoklonálna gamapatia
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta s monoklonálnou gamapatiou najvyššia doposiaľ detegovaná koncentrácia paraproteínu
Elektroforetický profil sérových bielkovín pri biklonálnej gamapatii
Laboratórny postup pri detekcii paraproteínu v elektroforetickom profile bielkovín 1. jednoznačná prítomnosť paraproteínu (vyššie koncentrácie), resp. podozrenie na jeho prítomnosť (nízke koncentrácie v oblasti γ, resp. podozrenie na prítomnosť vo frakcii β, resp. vzácne v α2) 2. Stanovenie koncentrácie imunoglobulínov v sére (IgG, IgM, IgA) zvyčajne výraznejší nárast koncentrácie jedného z imunoglobulínov a pokles (až vymiznutie) iného (nie vždy) 3. Imunofixácia potvrdenie prítomnosti paraproteínu a určenie typu paraproteínu (metóda je založená na princípe imunoprecipitačnej reakcie elektroforeticky rozdelených bielkovín s antisérami s rozdielnou špecificitou (anti-igg, anti IgM, anti-iga a anti kappa a anti lambda ťažkým a ľahkým reťazcom)
Imunofixácia potvrdenie prítomnosti paraproteínu určenie typu IgG - kappa Paraproteín neprítomný
Imunofixácia potvrdenie prítomnosti paraproteínu určenie typu IgM - kappa IgG - lambda
Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 2007 podľa tried 25 23 20 15 10 5 6 3 2 0 IgM IgG IgA IgG + IgM
Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 2007 podľa veku 25 22 20 15 12 10 5 0 do 60r nad 60r
Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 2007 v populácii mužov a žien ženy 47% muži 53%
Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 2007 očakávané a náhodné záchyty "Očakávané" záchyty 29% Náhodné záchyty 71%
Paraproteíny v roku 2007 imunofixáciou potvrdené, nepotvrdené a eliminované (podozrenie) nepotvrdené 15% potvrdené po čase eliminované 11% potvrdené 74%
Elektroforéza sérových bielkovín v súčastnosti: Atribúty: kvalita reprodukovateľnosť rýchlosť Klinický význam: elektroforetické typy priradené určitým chorobným stavom na základe dlhoročnej empírie významné skríningové vyšetrenie prítomnosť paraproteínu v sére
Ak chceme objaviť nové krajiny, musíme najprv sústredene veľmi dlhý čas pozorovať pobrežie a vnímať aj jeho najjemnejšie zákonitosti Ďakujem za pozornosť Kleiblove lekárske dni, Skalica, 23.1.2008