Analiza'3D'struktur'makromolekul'in' modeliranje'

Σχετικά έγγραφα
Βάσεις δομικών δεδομένων βιολογικών μακρομορίων

Σύγκριση και κατηγοριοποίηση πρωτεϊνικών δομών

Ασκήσεις 3& 4. Πρωτεϊνική Αρχιτεκτονική. Πλατφόρμες Πρόβλεψης & Προσομοίωσης 2ταγούς Δομής. Μοριακή Απεικόνιση

Εισαγωγή στις πρωτεΐνες Δομή πρωτεϊνών Ταξινόμηση βάσει δομής Βάσεις με δομές πρωτεϊνών Ευθυγράμμιση δομών Πρόβλεψη 2D δομής Πρόβλεψη 3D δομής

ΔΟΜΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ. Σελίδα 1 ΒΙΟΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗ. Τ. Θηραίου

Αρχές Δοµικής Βιοπληροφορικής Πρωτεϊνών

ΔΟΜΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ II. Σελίδα 1 ΒΙΟΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗ. Τ. Θηραίου

Εισαγωγή. 1. Δομή πρωτεϊνών. Βιοπληροφορική ΙΙ «Ανάλυση Δομής Πρωτεϊνών» Παναγούλιας Ιωάννης, MSc,PhD

SABiosciences PCR Array Catalog #: PAHS-021 SA+ SCF 4h stimulaton AVG(Ct) Position Unigene Refseq Symbol Description shcontr shcontr-4h shgskβ A01

Αρχές οµικής Βιοπληροφορικής. Πρωτεΐνες. Αµινοξέα. (Υδρόφοβα)

Analysis of Protein Structure in Silico

Biokemija)večceličnih)sistemov)

Βιοπληροφορική. Ενότητα 21: Υπολογιστικός Προσδιορισμός Δομής (3/3), 1 ΔΩ. Τμήμα: Βιοτεχνολογίας Όνομα καθηγητή: Τ. Θηραίου

Υπερδευτεροταγής Δομή Πρωτεϊνών

Biokemija I, 25. predavanje 1. del, , A. Videtič Paska. Proteini - splošno

ΒΑΣΕΙΣ ΠΡΩΤΕΪΝΙΚΩΝ ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ. Δρ. Μαργαρίτα Θεοδωροπούλου

SEMINAR IZ MOLEKULSKEGA MODELIRANJA PRI FARMACEVTSKI KEMIJI III

Ασκήσεις 1 & 2. Βάσεις Δεδομένων. Εργαλεία Αναζήτησης ClustalW & Blast

vaja Kvan*ta*vno določanje proteinov. 6. vaja Kvan*ta*vno določanje proteinov. 6. vaja Kvan*ta*vno določanje proteinov

Πρόβλεψη δομής πρωτεϊνών

Κεφάλαιο 2 Βιολογικές Βάσεις Δεδομένων

Zaporedja. Matematika 1. Gregor Dolinar. Fakulteta za elektrotehniko Univerza v Ljubljani. 22. oktober Gregor Dolinar Matematika 1

Družina globinov pri človeku in bolezni.

Βιοπληροφορική. Ενότητα 14: Μοντέλα Πολλαπλής Στοίχισης (2/2), 1.5ΔΩ. Τμήμα: Βιοτεχνολογίας Όνομα καθηγητή: Τ. Θηραίου

ΔΕΥΤΕΡΟΓΕΝΕΙΣ ΒΑΣΕΙΣ ΠΡΩΤΕΪΝΙΚΩΝ. Δρ. Μαργαρίτα Θεοδωροπούλου

Βιοπληροφορική. Βάσεις Δεδοµένων 1ο εργαστήριο. Γρηγόρης Αµούτζιας

Πρόγνωση δομής πρωτεϊνών (Μέρος Ι)

Present and Future Prospects of Protein Structure Prediction

Βιοπληροφορική. Ενότητα 14: Μοντέλα Πολλαπλής Στοίχισης (2/2), 1.5ΔΩ. Τμήμα: Βιοτεχνολογίας Όνομα καθηγητή: Τ. Θηραίου

Βιοπληροφορική Ι. Παντελής Μπάγκος Αναπληρωτής Καθηγητής. Παν/μιο Θεσσαλίας Λαμία 2015

ZVIJANJE PROTEINOV, RAZGRADNJA IN USMERJANJE

ΒΙΟΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗ ΙΙ. Δυναμικός Προγραμματισμός. Παντελής Μπάγκος

Funkcije proteinov (pogojene s strukturo)

Logatherm WPL 14 AR T A ++ A + A B C D E F G A B C D E F G. kw kw /2013

Zaporedja. Matematika 1. Gregor Dolinar. Fakulteta za elektrotehniko Univerza v Ljubljani. 15. oktober Gregor Dolinar Matematika 1

13. Jacobijeva metoda za računanje singularnega razcepa

Ασκήσεις 5& 6. Διαμόρφωση Βιομορίων μέσω Φασματοσκοπίας NMR. Σύγκριση & Ανάλυση Δομών Βιομορίων

Molecular Structure: matching and kinematics

Γενετικά τροποποιημένοι μικροοργανισμοί στο περιβάλλον

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΔΙΑ ΒΙΟΥ ΜΑΘΗΣΗΣ ΑΕΙ ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΠΙΚΑΙΡΟΠΟΙΗΣΗ ΓΝΩΣΕΩΝ ΑΠΟΦΟΙΤΩΝ ΑΕΙ (ΠΕΓΑ)

Βιοπληροφορική. Ενότητα 20: Υπολογιστικός Προσδιορισμός Δομής (2/3), 1 ΔΩ. Τμήμα: Βιοτεχνολογίας Όνομα καθηγητή: Τ. Θηραίου

Celični'stiki' Vrsta&povezave:'' celica.celica' celica.matriks'

- Geodetske točke in geodetske mreže

ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ

Funkcijske vrste. Matematika 2. Gregor Dolinar. Fakulteta za elektrotehniko Univerza v Ljubljani. 2. april Gregor Dolinar Matematika 2

Supplementary Information

Προγνωστικές μέθοδοι με βάση αμινοξικές αλληλουχίες

Mehanizmidejstvaenzima. Himotripsin

Imunofluorescencija. vizualizacija molekula protutijela obilježenih fluorokromom vezanih za antigene na stanicama ili tkivnim preparatima

Ανάπτυξη οδηγού χρήσης του biojava για την ανάπτυξη εφαρμογών Βιοπληροφορικής. Παπαθεοδοσίου Μερσίνη

Ανάλυση / Σχεδίαση και Υλοποίηση Εφαρμογής Υποβοήθησης Καθηγητών

Προσομείωση ασύρματων δικτύων με τη χρήση του OPNET Modeler

8. Προσομοίωση Λειτουργίας Ασύρματων Δικτύων Υποδομής

diferencialne enačbe - nadaljevanje

Predictive and Experimental Approaches for Elucidating Protein Protein Interactions and Quaternary Structures

Ειδικά Κεφάλαια Βιοχηµείας

1. izpit iz Diskretnih struktur UNI Ljubljana, 17. januar 2006

Določanje strukture. mikrobne združbe

Tekočinska kromatografija

Matematično modeliranje 3. poglavje Dinamično modeliranje: diferencialne enačbe, sistemi diferencialnih enačb

Τι είναι η λογική αρχιτεκτονική

Overlapping sets of transcripts from host and non-host interactions of tomato are expressed early during non-host resistance

Iterativno reševanje sistemov linearnih enačb. Numerične metode, sistemi linearnih enačb. Numerične metode FE, 2. december 2013

Supplementary Information

TFDP2 TFDP1 SUMO1 SERTAD1 RPA3 RBBP8 RAD9A RAD17 RAD1 NBN MRE11A MNAT1 KPNA2 KNTC1 HUS1 HERC5 GTSE1 GTF2H1 GADD45A E2F4 DNM2 DDX11 CUL3 SKP2 RBL1 RB1

Βιοπληροφορική. Ενότητα 19: Υπολογιστικός Προσδιορισμός Δομής (1/3), 2 ΔΩ. Τμήμα: Βιοτεχνολογίας Όνομα καθηγητή: Τ. Θηραίου

HEMIJSKA VEZA TEORIJA VALENTNE VEZE

KODE ZA ODKRIVANJE IN ODPRAVLJANJE NAPAK

Supporting Information

NOVEL INTEGRAL MEMBRANE PROTEINS OF THE INNER NUCLEAR MEMBRANE

Funkcije. Matematika 1. Gregor Dolinar. Fakulteta za elektrotehniko Univerza v Ljubljani. 21. november Gregor Dolinar Matematika 1

Postavitev hipotez NUJNO! Milena Kova. 10. januar 2013

ZAKAJ? ZAKAJ? KAKO? KDAJ? KJE? METODE NUMERIýNEGA MODELIRANJA. Povrnimo se v otroštvo in postanimo ponovno radovedni in zvedavi!

ZBIRKA REŠENIH NALOG IZ MATEMATIKE I

SCIENTIA SILVAE SINICAE. a/ b. oldhamii). The length of cab2bo1 ( GenBank accession

POSTROJI ZA PRENOS IN TRANSFORMACIJO ELEKTRIČNE ENERGIJE

DNA G7444A, 2. Study on a new point mutation of nt7444 G A in the mitochondrial DNA in a type 2 diabetes mellitus family

Οξειδωτική ένταση και οξειδωτική βλάβη του DNA στη

Poglavje 5. Poglavje 5. Poglavje 5. c = 1! SPOMNIMO SE!!! Regulacijski sistemi. Regulacijski sistemi

Shefferjeva polinomska zaporedja

Diferencialna enačba, v kateri nastopata neznana funkcija in njen odvod v prvi potenci

TRANSMISIJSKI ELEKTRONSKI MIKROSKOP - TEM

STRUKTURNE LASTNOSTI AMINOKISLIN

«Σύγκριση δομών πρωτεϊνικού συμπλόκου και των μεμονομένων αλυσίδων του μετά από εξισορρόπηση με προσομοιώσεις μοριακής δυναμικής»

Structural and Biochemical Studies of Cotranslational Protein Transport across the Endoplasmic Reticulum

Izolacija za pravo ugodje doma

Γραφικές Παραστάσεις

ΣΗΜΑΤΑ ΔΙΑΚΡΙΤΟΥ ΧΡΟΝΟΥ

THE EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF11β-HSD 2 AND TNF-α IN PLACENTA WITH HYPERTENSION DISORDERS COMPLICATING PREGNANCY

Δευτεροταγής Δομή Πρωτεϊνών

Βιοπληροφορική Ι. Παντελής Μπάγκος Αναπληρωτής Καθηγητής. Παν/μιο Θεσσαλίας Λαμία 2015

Supporting Information

Realne funkcije. Elementarne funkcije. Polinomi in racionalne funkcije. Eksponentna funkcija a x : R R + FKKT Matematika 1

Molecular Structure: matching and kinematics

Inženjerska grafika geometrijskih oblika (5. predavanje, tema1)

ΤΙΜΟΚΑΤΑΛΟΓΟΣ ΕΛΑΧΙΣΤΗ ΠΑΡΑΓΓΕΛΙΑ (ΤΜΧ) ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ 36 ΡΟΛΛΑ/ΚΙΒ 9088 ΤΑΙΝΙΑ ΔΙΠΛΗΣ ΟΨΗΣ ΔΙΑΦΑΝΗΣ POLYESTER

Kombinatorika. rekurzivnih enačb in rodovne funkcije. FMF Matematika Finančna matematika. Vladimir Batagelj. Ljubljana, april

BMI/CS 776 Lecture #14: Multiple Alignment - MUSCLE. Colin Dewey

DNA in RNA: zgradba in vloga. Velika predavalnica IJS,

Αναστασία-Κωνσταντίνα Παπαδοπούλου Δέσποινα Μαλλιού Παρασκευή-Βίβιαν Αλευρογιάννη Περίληψη:

Transcript:

Univerza'v'Ljubljani,'Fakulteta'za'kemijo'in'kemijsko'tehnologijo' Univerzitetni%študijski%program%Biokemija,%2.%letnik,%študijsko%leto%2013/2014% Analiza'3D'struktur'makromolekul'in' modeliranje' Miha%Pavšič% 20.%5.%2014% Analiza'3D'struktur'makromolekul'in'modeliranje' Pregled'obravnavanih'tem:' 6. Primerjava%3D%struktur%makromolekul% b. Zvitje%in%klasifikacija%struktur% nadaljevanje'od'prejšnjič' c. Primerjanje%in%iskanje%podobnih%struktur% 7. Metode%za%določevanje%struktur%makromolekul%(nizka%ločljivost)% a. Ozkokotno%sipanje%rentgenske%svetlobe%(SAXS)% b. KrioREM% 8. Modeliranje%makromolekul% a. Modeliranje%posameznih%makromolekul% Modeliranje%na%osnovi%homologije%(homology'modeling)% Prepoznavanje%zvitja%(protein'threading)% Modeliranje%ab'ini1o%(ab'ini1o'modeling)% b. Modeliranje%zank%(loop'modeling)% c. FoldIt% d. Baze%modelov% e. CASP%(Cri1cal'Assesment'of'protein'Structure'Predic1on)% f. UmesYtev%(docking)%in%CAPRI%(Cri1cal'Assesment'of'PRedic1on'of'Interac1ons)% g. Simulacija%molekulske%dinamike%(molecular'dynamics'simula1ons)%

6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' PolipepYdne%verige%s%podobnim%akRzaporedjem%zavzamejo%podobno%3D%strukturo% % značilno%zvitje%(fold),%ki%ga%opišemo%z%zaporedjem%in%relayvno%orientacijo%elementov% sekundarne%strukture.% Dve%osnovni%klasifikaciji:% SCOP%R%Structural%ClassificaYon%of% Proteins%(nekoliko%zastarela%in% neosvežena;%nova%verzija%scop2)% CATH% %opis%nivojev%strukture:% CLASS%R%razred%(alfa,%beta,%mešano% alfa/beta,%ali%pa%z%malo%sekundarne% strukture)% ARCHITECTURE%R%arhitektura% (celotna%oblika%glede%na%orientacijo% elementov%sekundarne%strukture)% TOPOLOGY%R%topologija%(družina% zvitja)% HOMOLOGY%R%homologna% superdružina%(združuje%proteinske% domene)% nivoji%cat(h)% 6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' Klasifikacija'SCOP'(Structural%ClassificaYon%Of%Proteins):%hdp://scop2.mrcRlmb.cam.ac.uk% strukture%iz%pdb%!%ročna%klasifikacija% osnovna'enota'klasifikacije'je%domena' Pri%domenah%razlikujemo%zvitja'(fold):%pri'istem'zvitju'imamo'enake'glavne'elemente' sekundarne'strukture,'so'enako'urejeni'relasvno'en'glede'na'drugega,'enake'so'tudi' povezave'med'njimi'(topologija).% Primer'zvitja:'Rossmanovo'zvitje'(Rossman*fold)% Opis:%3%plasY%a/b/c,%paralelna%βRpovršina%iz%5%trakov%(vrstni%red%32145)% 3%alpha,20%betaR hydroxysteroid% dehydrogenase% (Streptomyces'exfoliatus)% UDPRgalactose%4R epimerase% (Escherichia'coli)% alcohol% dehydrogenase% (Equus'caballus)% mannitol%2r dehydrogenase% (Pseudomonas' fluorescens)%

6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' Klasifikacija'SCOP'(Structural%ClassificaYon%Of%Proteins)% Nivoji:% nivo' RAZRED%(class)% ZVITJE%(fold)% NADDRUŽINA%(superfamily)% DRUŽINA%(family)% PROTEIN% VRSTA%(species)% splošne%lastnosy%(npr.%samo%α,%samo%β,%α/β%in%α+β,% membranski%proteini,%majhni%proteini,%...),%ni% evolucijske%povezanosy% podobna%topologija,%morda%gre%za%evolucijsko% povezanost% jasna%strukturna%homolgija%*% jasna%homologija%na%osnovi%zaporedja%*% funkcionalna%podobnost% posamezna%zaporedja% *'Strukturna'podobnost'evolucijsko'oddaljenih'struktur'je'večja'kot'podobnost'njihovih' aminokislinskih'zaporedij.' 6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' Klasifikacija'SCOP'(Structural%ClassificaYon%Of%Proteins)% Primer:% razred% zvitje% naddružina% ime%je%lahko%enako% družina% 90 % protein:%glikolat%oksidaza% vrsta:%špinača%(spinacia'oleracea)%

6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' Klasifikacija'CATH'(ClassRArchitectureRTopologyRHomology)% SemiRavtomatska%klasifikacija% Primer:% superpozicija%struktur%iz%iste%naddružine:% 6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' SCOP'in'CATH' %primerjava%nivojev% SCOP' razred%(class)% CATH' razred%(class)% arhitektura% (architecture)% zvitje% (fold)% topologija% (topology)% naddružina% (superfamily)% naddružina%r% homolognost% (superfamily)% družina% (family)% zaporedje% (sequence)% zaporedje% (sequence)%

6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' MoSvi' supersekundarna%(nadsekundarna)%struktura,%ki%se%lahko%pojavlja%v%različnih%zvitjih% primeri:% βrlasnica% (βrhairpin)% grški%ključ% (Greek'key)% vijačnicarzavojrvijačnica% (helixfturnfhelix,'hth)% 6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' Shematski'prikaz'topologije' 'diagram'tops' ElemenY:% βrtrak% (smer%proy%nam)% βrtrak% (smer%stran%od%nas)% αrvijačnica% povezava% Primeri:% paralelna%βrpovršina% anyparalelna%βrpovršina% strukturo%orienyramo%tako,%da%so%βrtrakovi% pravokotno%na%ravnino/papir/ekran;% če%se%povezava%začne%za%objektom,%to%pomeni%od% spodaj,%če%je%pa%pred%njim,%pa%od%zgoraj%

6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' Povezava'podobno'zaporedje' 'podobna'struktura' HOMOLOGIJA:'20Z30'%'idenSčnost'(na'splošno)' Pozor% %odvisno%od%dolžine%zaporedij!% poravnave%kratkih%zaporedij%imajo%pogosto%>30%%idenyčnost% zaporedja,%krajša%od%10%akrostankov% %100%%idenYčnost%ni%signifikantna% Primer%za%homologna%zaporedja%modrih% bakerrvezavnih%proteinov:% RMSD%struktur%[Å]% idenyčnost%akrzaporedja%[%]% 6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' Povezava'podobno'zaporedje' 'podobna'struktura' Primer:'Sroglobulinske'domene'(TY)'različnih'človeških'proteinov'(1/2)' Poravnava%zaporedij:%

6.b.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%ZVITJE'IN'KLASIFIKACIJA'STRUKTUR' Povezava'podobno'zaporedje' 'podobna'struktura' Primer:'Sroglobulinske'domene'(TY)'različnih'človeških'proteinov'(2/2)' Strukture:% TY%p41% TY%IGFBPR1% TY%IGFBPR4% TY%IGFBPR2% TY%IGFBPR6% 6.c.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%PRIMERJANJE'IN'ISKANJE'PODOBNIH'STRUKTUR' Glavne'metode'za'primerjanje'struktur'(poravnava%struktur,'structural'alignment):% superpozicija'rigidnih'objektov'(rigid'body'superposi1on)' translacija% večih%struktur% ponavadi%transliramo% COM%(centerFofFmass)% pomaknemo%na%isto% izhodišče% idenyfikacija% ekvivalentnih% položajev% s%pomočjo%poravnave%akrzaporedij% ročno%(npr.%akyvno%mesto)% rotacija% struktur% (relayvno)% opymalna%poravnava% ekvivaletnih%položajev% metoda'na'osnovi'elementov'sekundarne'strukture' teorija:'delecije/insercije'se'zgodijo'predvsem'v'zankah'na'površini% implemenyrana%npr.%v%grath,%ssm;%precej%hitra%metoda% idenyfikacija% el.%sek.%str.% diagram%razdalj% in%kotov%med% njimi% primerjava% metoda'na'osnovi'razdalj'med'akzostanki'in'kontaks'med'njimi% implemenyrana%v%npr.%dali,%ce,%ssap% strukture% fragmeny% lokalna%geometrija,% razdalje,%medsebojni% kontaky% združitev%in% opymizacija%

6.c.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%PRIMERJANJE'IN'ISKANJE'PODOBNIH'STRUKTUR' DALI%(Distance%mAtrix%aLIgnment)% Metoda%na%osnovi%razdalj%med%akRostanki%in%kontakY%med%njimi% hdp://ekhidna.biocenter.helsinki.fi/dali_server/% Izračun%razdalj%med%akRostanki%!%karta%razdalj%!%primerjamo%razdalje%znotraj%heksapepYdov.% IdenYfikacija%parov%podobnih% heksapepydov.% karta%razdalj%za% protein%a%in%b% Primerjava%kart%razdalj% za%heksapepyde.% Dodajanje%fragmentov%in% opymizacija.% Izračun%RMSD%za% fragmente.% % Strežnik%DALI%že%ima%izdelane%matrike%razdalj%za%proteine%v%PDB.% hdp://whatrwhenrhow.com/proteomics/structurercomparisonrandrproteinrstructurerclassificayonsrproteomics/% 6.c.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%PRIMERJANJE'IN'ISKANJE'PODOBNIH'STRUKTUR' Vrednotenje'podobnosS'struktur' Vrednost'RMSD'(RMSD*score)' RMSD = Vrednost'Z'(Z2score)' 1 N N δ 2 i i=1 enota%dolžine%(å)% močno%odvisna%od%dolžine% občutljiva%za%kratke%nepodobne%fragmente%(npr.%zanke)% staysyčni%model% koliko%st.%deviacij%je%vrednost%poravnave%od%povprečja% Vrednost'GDT'(Global*Distance*Test*Total*Score,'GDT'TS)' glavna%ocena%kvalitete%modelov%pri%casp%( tekmovanje %v%modeliranju%struktur)% definirana%je%kot%največje%št.%atomov%c α %modela,%ki%so%oddaljeni%za%manj%kot%x%od% njihovih%položajev%v%eksperimentalni%strukturi% izračuna%se%za%več%vrednosy%x% konvergenca:%št.%atomov%se%z%naraščanjem%x%ne%spremeni%

6.c.%Primerjava%3D%struktur%makromolekul:%PRIMERJANJE'IN'ISKANJE'PODOBNIH'STRUKTUR' PDBeFold'(SSM)' hdp://www.ebi.ac.uk/msdrsrv/ssm/% ne%upošteva%akrzaporedja%oz.%poravnave%akrzaporedij% princip:%ujemanje%sekundarnih%struktur%(ssm% %Secondary%Structure%Matching)% vrednotenje:%vrednost%q%(poravnava%c α ),%P%(RMSD%+%dolžina%poravnave%+%vrzeli%+%ujemanje%v% elemenyh%sek.%strukture%+%povezave%med%el.%sek.%strukture),%z%(staysyčna%metoda),%rmds%in%%% idenyčnosy%akrzaporedja% uporaba:% primerjava%dveh%ali%večih%struktur% primerjava%strukture%s%strukturami%v%pdb%ali%bazo%scop% 7.%Metode%za%določevanje%struktur%makromolekul%(nizka%ločljivost)' Metode%nizkih%ločljivosY%so%posebej%pomembne%pri%raziskovanju%velikih'kompleksov,%ki% jih%z%rentgensko%kristalografijo%in%nmr%ne%moremo%proučevay%!%omejitve'za'umesstev.% Rentgenska' kristalografija' (XRray)% ločljivost'spično'<'3'å' Jedrska'magnetna' resonenca' (NMR)% Ozkokotno'sipanje' rtg.'svetlobe' (SAXS)% ločljivost'>'3'å' Krioelektronska' mikroskopija' (CryoREM)% struktura%podenot% struktura%podenot% oblika%podenot% oblika%podenot% oblika%podenot% oblika%podenot% syki%med% poenotami% syki%med% poenotami% syki%med% poenotami% syki%med% poenotami% razdalje%med% podenotami% razdalje%med% podenotami% razdalje%med% podenotami% razdalje%med% podenotami% stehiometrija% podenot% stehiometrija% podenot% stehiometrija% podenot% stehiometrija% podenot% simetrija%kompleksa% simetrija%kompleksa% simetrija%kompleksa% simetrija%kompleksa% oblika%kompleksa% oblika%kompleksa% oblika%kompleksa% oblika%kompleksa% struktura%kompleksa% struktura%kompleksa%

7.a.%Metode%za%določevanje%struktur%makromolekul%(nizka%ločljivost):%SAXS' intenziteta%sipanja% WAXS%(XRray)% makromolekula%je%v%raztopini% dobimo%podatke%o%obliki% kompleksa% gradnja%modela%z% umeščanjem%rigidnih%teles% (struktur%podenot)% detektor% vzorec% XRžarki% SAXS% Ozkokotno'sipanje'rengenske'svetlobe'(Small'Angle'XFray'ScaJering,%SAXS)% dummy'atom'model' rekonstrukcija% DOI%10.1038/nsmb.1836% 7.b.%Metode%za%določevanje%struktur%makromolekul%(nizka%ločljivost):%KrioZEM' KrioZelektronska'mikroskopija'(CryoZEM)% kriogeni%pogoji%(lqn2,%lqhe),%transmisijski%elektronski%mikroskop% običajna%em:%za%dosego%visoke%ločljivosy%bi%potrebovali%močan%tok%elektronov%!%poškodbe%vzorca% metode:% kriorelektronska%kristalografija%(sipanje%elektronov%na%urejenih%delcih,%skoraj%atomska% ločljivost)% kriorelektronska%tomografija%(posamezen%delec%slikamo%v%različnih%orientacijah%!% rekonstrukcija)% EM% jedrna%pora% (EMBL,%Beck):% surovi%podatki% procesiranje% rekonstrukcija% analiza%in%gradnja% modela%

8.a.%Modeliranje%makromolekul:%MODELIRANJE'POSAMEZNIH'MAKROMOLEKUL' Velikokrat%nimamo%na%voljo%modela%strukture%(atomske%ločljivosY)%na%osnovi% eksperimentalnih%podatkov%(xrray,%nmr)%!%modeliranje.% fizikalnorkemijske%omejitve% (dolžine%in%koy%med%vezmi,%...)% napoved%sekundarne%strukture% strukture%homolognih%proteinov% druge%omejitve%...ahgtycsplvrreqntsgalyw... akrzaporedje% model% Osnovni'pristopi'za'gradnjo'modelov'makromolekul:% modeliranje'na'osnovi'podobnoss' modeliranje%na%osnovi%homologije%(homology%modeling)% idenyfikacija%zvitja%(protein%threading)% modeliranje'ab*ini:o*oz.'de*novo'( od*začetka )' metode,%osnovane%na%enegijskih%potencialih% metode,%osnovane%na%iskanju%fragmentov% evolucijske%metode%za%napoved%sykov%v%prostoru% 8.a.%Modeliranje%makromolekul:%MODELIRANJE'POSAMEZNIH'MAKROMOLEKUL' akrzaporedje% podatkovna%baza% znanih%struktur% izbor%predloge%za%modeliranje,% idenyfikacija%zvitja% eksperimentalni% podatki% modeliranje% na%osnovi% homologije% modeliranje% ab'ini1o' hibridne% metode% validacija%in% evaluacija%modela% torzijski%koy,%neugodni%kontaky,%solvatacija,% sekundarna%struktura,%...%

8.a.%Modeliranje%makromolekul:%MODELIRANJE'POSAMEZNIH'MAKROMOLEKUL' Modeliranje'na'osnovi'homologije'(homology'modeling,'compara1ve'modeling)% Dejstva:% 1. 3DRstruktura%je%določena%z%akRzaporedjem% (načeloma).% 2. Evolucijsko%gledano%so%strukturne%spremembe% manjše%kot%spremembe%z%njo%povezanega%akr zaporedja.% podobno%zaporedje%!%podobna%struktura% Koraki:% 1. IdenYfikacija%predloge%in%priprava%poravnave%(prileganja).% 2. Gradnja%ogrodja%(backbone% %atomi%c α ).% 3. Modeliranje%zank.% 4. Modeliranj%stranskih%skupin%akRostankov.% 5. OpYmizacija%modela.% 6. Validacija%modela.% 8.a.%Modeliranje%makromolekul:%MODELIRANJE'POSAMEZNIH'MAKROMOLEKUL' Modeliranje'na'osnovi'homologije'(homology'modeling,'compara1ve'modeling)% tarčno'zaporedje' idenyfikacija%najbolj% ohranjenih%regij%!% večja%utežitev!% iskanje%homolognih% zaporedij% iskanje%homolognih%zaporedij% %znana%struktura%(predloge)% poravnava% gradnja%modelov% validacija,%evaluacija%

8.a.%Modeliranje%makromolekul:%MODELIRANJE'POSAMEZNIH'MAKROMOLEKUL' Modeliranje'na'osnovi'homologije'(homology'modeling,'compara1ve'modeling)% implemenyrano%je%v%mnogih%programih%za%modeliranje% programi%za%modeliranje%(tudi%taki,%ki%so%v%osnovi%ab'ini1o)%pogosto%sami%poiščejo,%ali% obstajajo%primerne%predloge%za%vsaj%kakšno%regijo/domeno% primeri%programov:%modeller,%swissrmodel,%phyre2,%...% Modeller' hdps://salilab.org/modeller/% lokalna%instalacija%ali%spletni%vmesnik% 8.a.%Modeliranje%makromolekul:%MODELIRANJE'POSAMEZNIH'MAKROMOLEKUL' IdenSfikacija'zvitja'(protein'threading)% Temelji%na%staYsYčni%analizi%struktur%v%PDB%in%tarčnim%zaporedjem.% Na%splošno:%uporabimo%ga%lahko%takrat,%ko%ne%najdemo%dobre%predloge%za%modeliranje%na% osnovi%homologije.% Osnovna%ideja:% v%naravi%je%omejeno%število%zviyj% izbor%izmed%možnih%zviyj%temelji%na%poznavanju%preferenc%posameznih%akrostankov,% da%se%nahajajo%v%določenih%strukturnih%okoljih% Ni%enako%modeliranju%na% osnovi%homologije% %metodo% lahko%uporabimo%na% zaporedjih,%za%katere%ne% obstaja%homologno%zaporedje% z%znano%3drstrukturo.% Orodja:%HHpred,%RAPTOR,% PHYRE2,%MUSTER,%...% Vir%slike:%hdp://www.bioscience.org/%

8.a.%Modeliranje%makromolekul:%MODELIRANJE'POSAMEZNIH'MAKROMOLEKUL' Modeliranje'ab*ini:o*/'de*novo'(ab'ini1o'/'de'novo'modeling)% fizikalnorkemijska%osnova%(+% evolucijska%kovarianca% intramolekulskih%sykov)% več%principov,%nor.%globalna% opymizacija%primerne%energijske% funkcije%(lerta%opisuje% intramolekulske%interakcije)% metoda%je%računsko%zelo%zahtevna% pogosto%hibridni%pristop% (kombinacija%metod,%npr.% modeliranje%na%osnovi%homologije% +%ab'ini1o)% uporabnost:% manjši%proteini% zanke%in%krajši%fragmeny% homolognih%modelov,%za% katere%nimamo%ustrezne% predloge% orodja:%rosetta,%irtasser% (QUARK),%...% 8.b.%Modeliranje%makromolekul:%MODELIRANJE'ZANK' Modeliranje'zank'(loop'modeling)% gre%predvsem%za%zanke%na%površini,%za%katere%pogosto%nimamo%homologne%predloge% najpogosteje%se%uporablja%pristop%na%osnovi%predlog:% v%bazi%fragmentov%(na%osnovi%znanih%struktur)%poiščemo%podobne%fragmente% opymizacija%(dihedralni%koy,%rotameri)%!%opymalno%pakiranje%in%energija% lahko%tudi%ab'ini1o' najpogosteje%hibridni%pristop:%fragmeny%+%delno%ab'ini1o' izračun%celega%ensembla%modelov% (različne%konformacije)% primeri%dobrih%modelov%+% XRray%struktur%

8.c.%Modeliranje%makromolekul:%FoldIt' FoldIt% hdp://fold.it% računalniška% igra,%pri%kateri%igralci%prispevajo%k%razvoju%znanosy% ročno%in%s%pomočjo%orodij%zvijemo%polipepydno%verigo%z%danim%zaporedjem% poseben%algoritem%za%točkovanje%(clashing'+'packing'+'hiding'+'bonding'+'backbone'+' sidechain'+'disulfides'...)% 8.c.%Modeliranje%makromolekul:%FoldIt' FoldIt% predzadnji%model% zadnji%model% struktura%(xrray)% Strukture%monomerne% retrovirusne%proteaze%ni% bilo%moč%rešiy%z% molekulsko%zamenjavo% (MR;%ena%izmed%tehnik% faziranja)%na%osnovi% znanih%homolognih% struktur.% Igralci%FoldIt%so%pripravili% dober%model%!%uspešna% molekulska%zamenjava%in% rešitev%kristalne% strukture.% nastajanje%modela%

8.d.%Modeliranje%makromolekul:%BAZE'MODELOV' Baze'modelov% obstajajo%že%izdelane%podatkovne%baze%modelov%struktur%za%zaporedja,%za%katera%ni% znane%eksperimentalno%določene%strukture% previdnost%pri%uporabi% %modeli%so%zgenerirani%popolnoma%avtomatsko!!!% največji%portal% %Protein%Model%Portal%(hdp://www.proteinmodelportal.org)% 8.e.%Modeliranje%makromolekul:%CASP' KriSčna'ocena'metod'za'napoved'strukture'proteinov' 'CASP' (CriYcal%Assesment%of%protein%Structure%PredicYon)% tekmovanje %algoritmov/programov%za%napoved%strukture% vsaki%dve%ley%od%leta%1994%naprej% objekyven%test;%niy%tekmovalci%niy%organizatorji%ne%poznajo% eksperimentalno%določenih%struktur%tarčnih%proteinov!% tarčne%strukture:%strukture%on'hold'v%pdb%ter%strukture,%ki%bodo% kmalu%rešene% zmagovalec%casp10%(2012):%irtasser%(zhang%lab)% hdp://predicyoncenter.org% CASP9' IZTASSER' napovedan%model%ab'ini1o' XRray%struktura%

8.f.%Modeliranje%makromolekul:%UMESTITEV'in'CAPRI' UmesStev%(docking)% napoved%kompleksov:% vezava%majhnih%molekul%na%protein%(farmacija!)% težje:%medproteinski%kompleksi%(ponavadi%večje%konformacijske%spremembe)% idenyfikacija%potencialnih%interakcijskih%regij%!%različne%relayvne%orientacije%komponent% kompleksa%!%ovrednotenje%različnih%oryentacij% fleksibilnost%stranskih%skupin%akrostankov;%fleksibilnost%pepydnega%ogrodja%navadno%ne% upoštevamo% najboljše%rezultate%dobimo,%če%uporabljamo%dodatne%omejitve%(restraints)% primer:%program%haddock:% podobno%kot%pri% modeliranju%posameznih% proteinov% %tekmovanje% CAPRI%(Cri1cal' Assesment'of'PRedic1on' of'interac1ons)% CLUSPRO%>%HADDOCK%>% GRAMMRX%>%...% 8.g.%Modeliranje%makromolekul:%MOLEKULSKA'DINAMIKA' Simulacija'molekulske'dinamike'(molecular'dynamics'simula1ons)% računalniška%simulacija%časovnega%razvoja%sistema% %študij%dinamičnih%procesov:% difuzije,%kemijskih%reakcij,%konformacijskih%sprememb,%minimizacija%struktur,% piljenje%interakcijskih%površin,%...% upoštevanje%fizikalnorkemijskih%principov%+%energijska%funkcija%(force'field)% pri%velikih%sistemih%zelo%veliko%št.%atomov%!%grobi%modeli%(coarse%grained%models);% npr.%ena%kroglica%predstavlja%več%atomov% primer:%proučevanje%homordimerizacije%transmembranskih%heliksov%