Troponin I. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Troponin I For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Troponin I English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of troponin I in serum, heparinized or EDTA plasma, as an aid in the diagnosis of acute myocardial infarction (AMI). Catalog Number: L2KTI2 (200 tests) Test Code: TPI Color: Light Gray Summary and Explanation Acute myocardial infarction (AMI) is usually diagnosed on the basis of chest pain, electrocardiographic changes, and elevations of markers of myocardial injury. The MB isoenzyme of creatine kinase (CK-MB) has been the preferred marker for two decades. 2 A study by Wu, et al. found excellent clinical sensitivity of the CK-MB assay between 6 and 24 hours following onset of AMI, with decreased sensitivity beginning in the 24 to 48-hour interval. 13 However, CK-MB levels can also increase in patients with acute or chronic muscle disease who lack apparent cardiac injury. In the same study, myoglobin, a muscle protein considered to be an early marker of AMI, became elevated within 6 hours of onset, achieved peak clinical sensitivity in the interval 6 to 12 hours following onset, and no longer offered diagnostic value by hour Myoglobin, although valuable for the early information it provides, also lacks specificity for cardiac injury. A marker specific for myocardial injury is therefore highly desirable. Cummins, et al. 6,7 reported the release of cardiac troponin I (ctni) in AMI. Many studies have focused on ctni as a candidate marker with acceptable sensitivity and specificity for AMI and other cardiac diseases. Troponin, a molecule that binds to the thin filament (actin) of striated muscle fibers, acts with intracellular calcium to control the interaction of the thin filament with the thick filament (myosin), thus regulating muscle contraction. Troponin consists of three subunits: T, which connects the troponin complex and tropomyosin (another cardiac muscle regulatory protein); I, which prevents muscle contraction in the absence of calcium; and C, which binds calcium. 8 Cardiac troponin I (MW 22.5 kda) and the two skeletal muscle isoforms of troponin I have considerable amino acid sequence homology, but ctni contains an additional N-terminal sequence 11 and is highly specific for myocardium. 1 Clinical studies report several desirable features of ctni as a marker of myocardial injury. ctni rises early in AMI patients and attains levels that are clearly separated from baseline values, so that by 7 hours following onset, the ctni test detects 95 percent of patients in whom AMI will be confirmed. 9 Plasma values of ctni remain elevated for several days, providing a long window for detection of cardiac injury. 3,13 ctni has also demonstrated value for predicting mortality risk in unstable angina and in non-q wave myocardial infarction. 5 ctni has demonstrated equivalent diagnostic accuracy for AMI when compared with lactate dehydrogenase type 1 and CK-MB, 3,10 and may clarify diagnosis in contexts where elevated CK-MB cannot be attributed with certainty to cardiac injury alone. 3 These include surgery, 4 traumatic injury, renal failure, seizures, and skeletal muscle myopathies. 1 In addition, a study on patients undergoing coronary artery bypass grafting (CABG) showed ctni to be a sensitive marker for perioperative myocardial infarction (PMI); the peak concentration and time of peak both served as diagnostic criteria. 12 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Troponin I is a solid-phase, enzyme-labeled chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-troponin I antibody. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal goat anti-troponin I antibody. 2 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

3 The patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, troponin I in the sample forms the antibody sandwich complex with monoclonal murine anti-troponin I antibody on the bead and the enzyme conjugated polyclonal goat anti-troponin I antibody in the reagent. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 1 30 minutes Time to First Result: 35 minutes Specimen Collection EDTA plasma yields lower assay results. When monitoring, the baseline sample and all subsequent samples should be collected using the same type of tubes, either plain, or EDTA, or heparinized. Do not interchange the type of tubes. Please see the Alternate Sample Type section for further information. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Icteric or grossly contaminated samples may give erroneous results. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Troponin I has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 100 µl serum or plasma Storage: 5 days at 2 8 C, 16 or 1 month at 20 C. 17 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. CAUTION! POTENTIAL BIOHAZARD Contains human source material. Each donation of human blood or blood component was tested by FDA-approved methods for the presence of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and type 2 (HIV-2) as well as for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibody to hepatitis C virus (HCV). The test results were negative (not repeatedly reactive). No test offers complete assurance that these or other infectious agents are absent; this material should be handled using good laboratory practices and universal precautions CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. H412 P273, P501 Harmful to aquatic life with long lasting effects. Avoid release to the environment. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: sodium azide; Troponin I Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 3

4 potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Troponin I Bead Pack (L2TI12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-troponin I. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KTI2: 1 pack Troponin I Reagent Wedge (L2TIA2) With barcode. 21 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal goat anti-troponin I antibody in buffer, with preservative, dispensed equally into chambers A and B. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KTI2: 1 wedge Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Troponin I Adjustors (LTIL, LTIH) Two vials (Low and High) of troponin I in a lyophilized nonhuman serum matrix, with preservative. Reconstitute each vial with 3.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Let stand for 30 minutes and use immediately, or aliquot and freeze. Stable at 20 C for 2 months (aliquotted) after reconstitution. L2KTI2: 1 set Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately containing undetectable to low levels of troponin I, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M1Z: 25 ml Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2M1Z: 3 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks Quality Control Samples: Follow government regulations or accreditation requirements for quality control frequency. Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of troponin I. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme. Multi-Diluent 1 For the on-board dilution of high samples. One vial of concentrated (ready-to-use) processed, normal human serum, 4 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

5 Expected Values Based on its relationship to IMMULITE Troponin I (see Method Comparison), the assay can be expected to have essentially the same reference ranges. A reference range study was conducted using the using the IMMULITE 2000 Troponin I assay (L2KTI) based on guidance from the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) Protocol C28-A3c. 18 The study, which used matched serum and lithium heparin plasma samples from 300 apparently healthy individuals, demonstrated a 99th percentile of 0.29 ng/ml (μg/l). The coefficient of variation (%CV) at this level is 10.3%. The value demonstrating a 10% CV is 0.32 ng/ml (µg/l). (See "Low-end Precision Profile/Functional Sensitivity" graph.) Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Interpretation of Results 2007 NACB IFCC Recommendation: The NACB IFCC Committee recommends using the 99th percentile of a normal population as the value above which a troponin value is considered elevated. Although a total imprecision (%CV) of 10% at the 99th percentile reference limit would be ideal, the NACB IFCC Committee recognizes that an imprecision of < 25% at the 99th percentile does not lead to significant patient misclassification when using a series of timed (serial) troponin orders. 19,20 Serial samples from a patient with a myocardial infarction will result in the classic rise and fall in cardiac troponin I concentration observed with other markers of myocardial infarction such as CK-MB. Unlike CK-MB, cardiac troponin-i values generally remain elevated above the reference range for several (5 9) days. 7,21,22 The National Academy of Clinical Biochemistry (NACB) recommends serial sampling at admission, 2 4 hours, 6 9 hours, and hours (optional) after the initial draw. 23 Clinical studies indicate that elevated levels of cardiac troponin I are a useful indicator of myocardial injury for a range of acute coronary syndromes including unstable angina, non Q-Wave and Q-wave myocardial infarction. 1,4,5,22,24 Each institution should establish its own reference interval and cutoffs to ensure proper representation of specific populations, taking into account current practice and criteria for diagnosing AMI at its institution. Other conditions which can lead to myocardial injury, such as cardiac contusion and myocarditis, have the potential to cause elevations in the circulating concentrations of proteins found in the myocardium, including cardiac troponin I. Factors such as these should be considered when interpreting results. 25 ESC/ACC Recommended Definition of AMI: A joint committee from the European Society of Cardiologists (ESC) and the American College of Cardiology (ACC) has recommended a redefinition of myocardial infarction (MI). The committee defines MI as the typical rise and gradual fall of troponin or more rapid rise and fall of CK-MB in conjunction with ischemic symptoms, pathologic ECG Q waves, ECG ST segment elevation/depression, and/or coronary artery intervention. The committee further recommends that an increased troponin level should be defined as a measurement exceeding the 99th percentile of the reference interval and that an acceptable imprecision (coefficient of variation) for measurements at the 99th percentile is < 10%. 26 The 99th percentile of the reference interval for the IMMULITE 2000 Troponin I assay method was determined to be 0.29 ng/ml (µg/l) and the 10% CV limit was estimated to be 0.32 ng/ml (µg/l). 26 Limitations The assay yields lower values when used with EDTA plasma. Please refer to the Alternate Sample Type section for more information. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 5

6 anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 0.2 to 180 ng/ml The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: 0.2 ng/ml High Dose Hook Effect: None up to 90,000 ng/ml Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Low-end Precision: To assess low-end precision, controls and a low ctni concentration serum sample panel were assayed in triplicate. Each sample and control were assayed in 20 runs over a 20-day period. (See "Low-end Precision Profile/Functional Sensitivity" graph.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three troponin I solutions (200, 400 and 900 ng/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for troponin I. (See "Specificity" table.) Alternate Sample Type: Samples (n = 12) were collected using plain and heparinized vacutainer tubes. Matched samples were spiked with troponin I. By linear regression: (Heparin) = 0.9 (Serum) ng/ml r = Means: 40 ng/ml (Serum) 37 ng/ml (Heparin) In another study, samples (n = 13) were collected using plain and EDTA vacutainer tubes. Matched samples were spiked with troponin I. By linear regression: (EDTA) = 0.8 (Serum) 3.1 ng/ml r = Means: 72 ng/ml (Serum) 55 ng/ml (EDTA) The results show that blood samples collected in EDTA vacutainer tubes yield lower troponin I results than blood samples collected in plain and heparinized tubes. Bilirubin: Would have an effect on the assay, causing a depression of values. (See "Bilrubin" table.) Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 512 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Method Comparison 1: The assay was compared to IMMULITE Troponin I on 162 patient samples. (Concentration range: approximately up to 120 ng/ml, as measured by IMMULITE Troponin I. See graph 1.) By linear regression: (IML 2000) = 0.91 (IML) ng/ml r = Means: 12.4 ng/ml (IMMULITE 2000) 12.9 ng/ml (IMMULITE) Method Comparison 2: The assay was compared to IMMULITE Troponin I on 128 samples out of 162 patient samples used for Method Comparison 1. (Concentration range: approximately up to 15 ng/ml, as measured by IMMULITE Troponin I. See graph 2.) By linear regression: (IML 2000) = 1.15 (IML) 0.06 ng/ml r = Means: 3.0 ng/ml (IMMULITE 2000) 2.7 ng/ml (IMMULITE) 6 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

7 References 1) Adams J, Bodor G, Davila-Roman V, Delmez JA, Apple FS, Ladenson JH, et al. Cardiac troponin I: a marker with high specificity for cardiac injury. Circulation 1993;88: ) Adams JE III, Abendschein DR, Jaffe AS. Biochemical markers of myocardial injury. Is MB creatine kinase the choice for the 1990's? Circulation 1993;88: ) Adams JE III, Schechtman KB, Landt Y, Ladenson JH, Jaffe AS. Comparable detection of acute myocardial infarction by creatine kinase MB isoenzyme and cardiac troponin I. Clin Chem 1994;40: ) Adams JE, Sicard G, Allan BT, Bridwell KH, Lenke LG, Davila-Roman VG, et al. More accurate diagnosis of periopertive myocardial infarction with measurement of cardiac troponin I. N Engl J Med 1994;330: ) Antman EM, Tanasijevic MJ, Thompson B, Schactman M, McCabe CH, Cannon CP, et al. Cardiac-specific troponin I levels to predict the risk of mortality in patients with acute coronary syndromes. N Engl J Med 1996;335: ) Cummins B, Cummins P. Cardiac specific troponin I release in canine experimental myocardial infarction: development of a sensitive enzyme-linked immunoassay. J Mol Cell Cardiol 1987;19: ) Cummins B, Auckland ML, Cummins P. Cardiac-specific troponin I radioimmunoassay in the diagnosis of acute myocardial infarction. Am Heart J 1987;113: ) Darnell J, Lodish H, Baltimore D. Molecular cell biology. New York: Scientific American Books, 1986: ) Fonarow GC. UCLA Clinical Practice Guideline 1996 July;2(3) on Internet at 10) Jaffe AS, Landt Y, Parvin CA, Abendschein DR, Geltman EM, Ladenson JH. Comparative sensitivity of cardiac troponin I and lactate dehydrogenase isoenzymes for diagnosing acute myocardial infarction. Clin Chem 1996;42: ) Larue C, Defacque- Lacquement H, Calzolari C, Nguyen DL, Pau B. New monoclonal antibodies as probes for human cardiac troponin I: epitopic analysis with synthetic peptides. Molec Immunol 1992;29: ) Mair J, Larue C, Mair P, Balogh D, Calzolari C, Puschendorf B. Use of cardiac troponin I to diagnose perioperative myocardial infarction in coronary artery bypass grafting. Clin Chem 1994;40: ) Wu AHB, Fen YJ, Contois JH, Pervaiz S. Comparison of myoglobin, creatine kinase-mb, and cardiac troponin I for diagnosis of acute myocardial infarction. Ann Clin Lab Sci 1996;26: ) Peetz D, Hafner G. Institute of Clinical and Laboratory Medicine, University of Mainz. Unpublished results. 15) Wong SS. Strategic utilization of cardiac markers for the diagnosis of acute myocardial infarction. Ann Clin Lab Sci 1996;26(4): ) Data on file. 17) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1995: ) CLSI. Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline - Third Edition. CLSI document C28-A3c. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; ) National Academy of Clinical Biochemistry and IFCC Committee for standardization of markers of cardiac damage laboratory medicine practice guidelines: analytical issues for biochemical markers of acute coronary syndromes. Clin Chem 2007; 53: ) Apple FS et al. Validation of the 99th percentile cutoff independent of assay imprecision (%CV) for cardiac troponin monitoring for ruling out myocardial infarction. Clin Chem 2005; 51: ) Bodor GS, Porter S, Landt Y, Ladenson JH. Development of monoclonal antibodies for an assay of cardiac troponin-i and preliminary results in suspected cases of myocardial infarction. Clinical Chemistry 1992; 38(11): ) Larue C, et al. Cardiac-specific immunoenzymometric assay of troponin-i in the early phase of acute myocardial infarction. Clinical Chemistry 1993; 39(6): ) Wu A, et al. National Academy of Clinical Biochemistry Standards of Laboratory Practice: Recommendationsfor the Use of Cardiac Markers in Coronary Artery Diseases. Clin Chem 1999;45(7): ) Bodor GS. Cardiac troponin-i: A highly specific marker for myocardial infarction. Journal of Clinical Immunoassay 1994; 17(1): ) Braunwald, E. et al. ACC/AHA Practice Guidelines: ACC/AHA Guideline Update for the Management of Patients With Unstable Angina and Non-ST Segment Elevation Myocardial Infarction. American College of Cardiologyand American Heart Association ) Myocardial Infarction redefined A consensus Document of the Joint European Society of Cardiology/ American College of Cardiology committee for the Redefinition of Myocardial Infarction. J Am Coll Cardiol 2000, 36 (3): ) Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR, 1988;37:377 82, ) Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS Document M29-A3. 29) Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 7

8 The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Specificity (ng/ml) Compound 1 Amount Added ng/ml 2 % Cross reactivity 3 Human Skeletal Troponin I 10 ND Human Skeletal Troponin I % Human Skeletal Troponin I % Human Skeletal Troponin T 10 ND Human Skeletal Troponin T 100 ND Human Skeletal Troponin T 1000 ND Human Cardiac Troponin T 10 ND Human Cardiac Troponin T 100 ND Human Cardiac Troponin T % ND: Not detectable 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % ιασταυρ.αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 % reaktywności Krzyżowej, 4 ND: Nieoznaczlne. Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Bilirubin Unspiked mg/l Conjugated 1 Unconjugated mg/l 100 mg/l 200 mg/l Česky. 1 Konjugovaný, 2 Nekonjugovaný, 3 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 εσμευμένη (άμεση), 2 Αδέσμευτη (έμμεση), 3 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Związana, 2 Niezwiązana, 3 Wyjściowa. 8 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

9 Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % 3 18 A % B % C % 4 27 A % B % C % 5 45 A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 ιάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Low-end Precision Profile/Functional Sensitivity Method Comparison 1 IMMULITE 2000 Troponin I IMMULITE Troponin I, ng/ml (IML 2000) = 0.91 (IML) ng/ml r = Method Comparison 2 IMMULITE 2000 Troponin I IMMULITE Troponin I, ng/ml (IML 2000) = 1.15 (IML) 0.06 ng/ml r = English. Troponin I. Česky. Troponin I. Ελληνικά. Τροπονίνη I. Polski. Troponina I. Česky IMMULITE 2000 Troponin I Použití : Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace troponinu I v séru, heparinizované nebo EDTA plazmě, jakožto pomůcky v diagnostice akutního infarktu myokardu (AMI). Katalogové číslo : L2KTI2 (200 stanovení) Kód metody : TPI Barva : Světle šedá IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 9

10 Shrnutí a vysvětlení Diagnóza akutního infarktu myokardu (AMI) je obvykle stanovená na základě bolesti na hrudníku, změn elektrokardiografu a zvýšené koncentrace markerů poškození myokardu. Dvě desetiletí byl jako marker preferován MB izoenzym kreatin kinázy (CK-MB). 2 Výzkum, který provedl Wu a kol. odhalil vynikající klinickou citlivost stanovení CK-MB 6 až 24 hodin od začátku AMI, která se v intervalu od 24 do 48 hodiny začíná snižovat. 13 Hladina CK-MB se ale může zvýšit i u pacientů s akutním nebo chronickým svalovým onemocněním, kteří žádné zjevné poškození srdce nemají. V rámci stejného výzkumu se hladina myoglobinu, svalového proteinu považovaného za časný marker AMI, zvýšila do 6 hodin od nástupu infarktu, maximální klinické citlivosti bylo dosaženo mezi 6 až 12 hodinou od nástupu a po 24 hodinách už myoglobin postrádal diagnostickou hodnotu. 13 I když je myoglobin významný pro poskytnutí časné informace, pro určení postižení srdce mu chybí specificita. Marker specifický vůči poškození srdce je proto nanejvýš žádoucí. Cummins a kol. 6,7 zveřejnili informaci o uvolňování srdečního troponinu I (ctni) při AMI. Na ctni jako na kandidáta na marker s vhodnou citlivostí a specificitou vůči AMI a dalším srdečním onemocněním se zaměřila celá řada studií. Troponin, molekula, která se váže na tenká vlákna (aktiny) příčně pruhovaného svalstva, řídí za přítomnosti vnitrobuněčného vápníku interakci tenkých vláken s hrubými vlákny (myozin), a tím i svalovou kontrakci. Troponin se skládá ze tří podjednotek : podjednotky T, která spojuje komplex troponinu a tropomyozin (další regulační protein srdečního svalu), dále podjednotky I, která zabraňuje kontrakci svalů v nepřítomnosti vápníku, a podjednotka C, která vápník váže. 8 Srdeční troponin I (molekulová hmotnost 22,5 kda) a dvě izoformy troponinu I v kosterních svalech, se vyznačují značnou homologií pořadí aminokyselin, ale ctni obsahuje navíc N-terminální část 11 a je silně specifický vůči myokardu. 1 Klinické studie upozorňují na několik žádoucích vlastností ctni jako markeru postižení srdce. ctni se u pacientů s AMI objevuje záhy a dosahuje koncentrací, které lze jasně odlišit od výchozích koncentrací, takže do 7 hodin od nástupu potíží ctni odhalí 95 procent pacientů, u kterých se později potvrdí AMI. 9 Koncentrace ctni v plazmě zůstává zvýšená několik dní, což vytváří značný prostor pro zjištění srdečního poškození. 3,13 ctni se rovněž osvědčil při předpovědi rizika úmrtí u nestabilní angíny a infarktu myokardu bez Q kmitu na EKG křivce. 5 ctni prokázal rovnocennou diagnostickou přesnost vůči AMI ve srovnání s dehydrogenázou laktátu typu 1 a CK-MB 3,10 a může pomoci upřesnit diagnózu v případech, kdy zvýšené množství CK-MB nelze s jistotou přiřadit pouze postižení srdce. 3 Sem patří operace, 4 traumatická poranění, selhání ledvin, záchvaty a myopatie kosterních svalů. 1 Studie dále prokázala, že u pacientů, kteří mají zaveden bypass koronární artérie (CABG), se ctni ukázal být citlivým markerem pro určení perioperativního infarktu myokardu (PMI). Maximální koncentrace ctni i čas jejího dosažení představují diagnostická kriteria. 12 Princip stanoveni Stanoveni IMMULITE 2000 Troponin I je enzymové imunologické stanovení s enzymem vázaným na chemilumiscent, v pevné fázi enzymu. Pevná fáze (kulička) je potažena monoklonální myší anti-troponin I protilátkou. Kapalná fáze se sestává z alkalické fosfatázy (telecího střeva) konjugované k polyklonální kozí protilátce proti troponinu I. Vzorek pacienta a reagencie s potaženou kuličkou jsou inkubovány společně po dobu 30 minut. Během této doby troponin I ve vzorku formuje protilátkový sendvičový komplex s monoklonální protilátkou proti troponinu I u kuličky a enzym konjuguje k polyklonální kozí protilátce proti-troponinu I v činidle. Nenavázané vzorky a konjugované enzymy jsou pak odstraněny centrivugálním propláchnutím. Nakonec, chemiluminescentní substrát je přidán do testovací jednotky, která obsahuje kuličku 10 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

11 a signál je stanoven úměrně k vázanému enzymu. Inkubační cykly : 1 30 minut Čas do prvního výsledku : 35 minut Odebírání vzorků EDTA plazma způsobuje nižší stanovenou koncentraci. Při monitorování je třeba výchozí vzorek a všechny následné vzorky odebírat do stejného typu zkumavky, buď obyčejné nebo EDTA nebo heparinizované. Jednotlivé typy zkumavek nezaměňujte. Další informace najdete v části Alternativní typ vzorku. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Žloutenkové nebo značně kontaminované vzorky můžou poskytovat chybné výsledky. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Troponin I na přístroji IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku : 100 μl séra nebo plazmy Skladování : 5 dní při teplotě 2 8 C 16 nebo 1 měsíc při teplotě 20 C. 17 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. POZOR! POTENCIÁLNÍ BIOHAZARD Obsahuje materiál lidského původu. Každé darování krve nebo jejích složek bylo testováno metodami schválenými FDA na přítomnost protilátek proti viru lidské imunodeficience typu 1 (HIV-1) a typu 2 (HIV-2) a také na povrchový antigen viru hepatitidy B (HBsAg) a protilátky proti viru hepatitidy C (HCV). Výsledky testu byly negativní (opakovaně nereaktivní). Žádný test však není absolutní zárukou nepřítomnosti uvedených nebo jiných infekčních zárodků ; s materiálem proto zacházejte podle zásad správné laboratorní praxe a dbejte obecných bezpečnostních opatření UPOZORNĚNÍ : Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. H412 P273, P501 Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje : azid sodný ; Troponin I kalibrátory Reagencie : Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 11

12 Chemiluminiscenční substrát : Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda : Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. Troponin I zásobník s kuličkami (L2TI12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti troponinu I. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KTI2 : 1 balení Troponin I reagencie (L2TIA2) Opatřeno čárovým kódem. 21 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální kozí protilátkou proti troponinu I v pufru s konzervačním prostředkem, rozděleny stejnoměrně do komory A a B. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KTI2 : 1 nádobka Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Troponin I kalibrátory (LTIL, LTIH) Dvě ampulky s vysokou a nízkou koncentrací troponinu I v lyofilizované nehumánní sérové matrici, s konzervačním prostředkem. Každou ampulku rekonstituujte přidáním 3,0 ml destilované nebo deionizované vody. Míchejte jemným kroužením nebo překlápěním až do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Ponechte v klidu po dobu 30 minut a upotřebte ihned, nebo rozděltě na alikvotní části a zmrazte. Stabilní 2 měsíce (rozdělené na alikvotní části) po rekonstituci při teplotě 20 C. L2KTI2 : 1 sada Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Multidiluent 1 K automatickému ředění koncentrovaných vzorků. Jedna ampulka koncentrovaného (připraveného k použití) zpracovaného, normálního lidského séra obsahujícího nezjistitelné až malé množství troponinu I, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2M1Z : 25 ml Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2M1Z : 3 štítky L2SUBM : Chemiluminiscenční substrát L2PWSM : Promývací roztok L2KPM : Čistící roztok na jehly LRXT : Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT : 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC : 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků Dále potřebujete Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy : přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi : 2 týdny Vzorky ke kontrole kvality : Pokud jde o četnost kontroly kvality, je třeba řídit se platnými předpisy a akreditačními požadavky. Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) troponinu I. Společnost Siemens Healthcare Diagnostics doporučuje používat obchodně dostupné materiály kontroly kvality o přinejmenším dvou 12 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

13 koncentracích vysoké a nízké. Vyhovující funkčnosti se dosahuje, pokud zjištěné hodnoty analytu leží uvnitř přijatelného kontrolního rozmezí analyzátoru nebo uvnitř rozmezí stanoveného příslušným interním systémem kontroly kvality dané laboratoře. Očekávané hodnoty Na základě příbuznosti metody se stanovením IMMULITE Troponin I (viz Srovnání metody), lze u stanovení očekávat prakticky stejné referenční rozmezí. Byla provedena studie referenčního rozsahu pomocí stanovení IMMULITE 2000 Troponin I (L2KTI) na základě návodu v protokolu Institutu pro klinické a laboratorní standardy (CLSI) C28-A3c. 18 Studie, která používala odpovídající si vzorky séra a plazmy s heparinátem lithným od 300 zjevně zdravých jedinců, ukázala hodnotu 99. percentilu 0,29 ng/ml (μg/l). Variační koeficient (VK %) na této úrovni je 10,3 %. Hodnota ukazující VK 10 % je 0,32 ng/ml (μg/l). (Viz graf Profil přesnosti na dolním konci rozsahu / funkční citlivost.) Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Vyhodnocení výsledků Doporučení NACB IFCC z roku 2007 : Komise NACB IFCC doporučuje jako hodnotu, nad níž je hodnota troponinu považována za zvýšenou, používat hodnotu 99. percentilu normální populace. I když by při referenčním limitu 99. percentilu byla ideální celková nepřesnost (VK) 10 %, komise NACB IFCC uznává, že nepřesnost u 99. percentilu < 25 % nevede při použití série časovaných (sériových) odběrů vzorků na stanovení troponinu k významné chybě klasifikace pacienta. 19,20 Sériové vzorky od pacienta s infarktem myokardu poskytnou klasické zvýšení a pokles koncentrace srdečního troponinu I pozorované u jiných markerů infarktu myokardu, jako je CK-MB. Na rozdíl od CK-MB zůstávají hodnoty srdečního troponinu I zvýšené nad referenčním rozsahem po dobu několika (5 9) dnů. 7,21,22 Národní akademie klinické biochemie (National Academy of Clinical Biochemistry NACB) doporučuje sériový odběr vzorků při příjmu, po 2 4 hodinách, 6 9 hodinách a hodinách (nepovinné) po prvním odběru. 23 Klinické studie ukazují, že zvýšené hladiny srdečního troponinu I jsou užitečným indikátorem poškození myokardu pro různé akutní koronární syndromy včetně nestabilní angíny a infarktu myokardu typu non-q a Q. 1,4,5,22,24 Každá instituce by si měla stanovit vlastní referenční interval a mezní hodnoty a zajistit si tak správnou reprezentaci specifických populací se zohledněním aktuální praxe a kritérií pro diagnostiku AIM v této instituci. Zvýšení koncentrací cirkulujících proteinů, které se nacházejí v myokardu, včetně srdečních troponinu I, mohou působit i další stavy, které mohou vést k poškození myokardu, jako je kontuze srdce a myokarditida. Takové faktory by měly být při interpretaci výsledků vzaty do úvahy. 25 Doporučená definice AIM od ESC/ACC : Spojená komise Evropské kardiologické společnosti (ESC) a Americké společnosti kardiologů (ACC) doporučily novou definici infarktu myokardu (IM). Komise definuje IM jako typické zvýšení a postupný pokles troponinu nebo rychlejší vzestup a pokles CK-MB ve spojení s ischemickými příznaky, patologickými vlnami Q na EKG, elevací nebo depresí ST segmentu na EKG anebo intervencí na koronárních tepnách. Komise dále doporučuje, aby byly zvýšené hladiny troponinu definovány jako měření převyšující 99. percentil referenčního intervalu a aby přijatelná nepřesnost (variační koeficient) pro měření u 99. percentilu byla < 10 %. 26 Tento 99. percentil referenčního intervalu pro metodu stanovení IMMULITE 2000 Troponin I byl stanoven na 0,29 ng/ml (µg/l) a 10 % limit CV byl odhadnut na 0,32 ng/ml (µg/l). 26 Omezení Při použití EDTA plazmy poskytuje stanovení nižší výsledky. Více informací najdete v části Alternativní typ vzorku. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 13

14 immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno ; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Reportable Range : 0,2 to 180 ng/ml Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost : 0,2 ng/ml High Dose Hook Effect : Do ng/ml žádný Přesnost : Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Přesnost na dolním konci rozsahu : Pro zhodnocení přesnosti na dolním konci rozsahu byly testovány kontroly a panel vzorků séra s nízkou koncentrací ctni v triplikátech. Každý vzorek a kontrola byly analyzovány ve 20 bězích po dobu 20 dnů. (Viz graf Profil přesnosti na dolním konci rozsahu / funkční citlivost.) Linearita : Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearita.) Zpětná výtěžnost : Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků troponinu I (200, 400 a 900 ng/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Zpětná výtěžnost.) Specificita : Protilátka je silně specifická vůči troponinu I. (Viz tabulka Specificita.) Alternativní typ vzorku : Vzorky (n = 12) byly odebrány do obyčejných a heparinizovaných vacutainer zkumavek. Do odpovídajících vzorků byl přidán troponin I. Podle lineární regrese : (Heparin) = 0,9 (Sérum) + 1,84 ng/ml r = 0,980 Střední hodnoty : 40 ng/ml (Sérum) 37 ng/ml (Heparin) V další studii byly vzorky (n = 13) odebrány do obyčejných a EDTA vacutainer zkumavek. Do odpovídajících vzorků byl přidán troponin I. Podle lineární regrese : (EDTA) = 0,8 (Sérum) 3,1 ng/ml r = 0,988 Střední hodnoty : 72 ng/ml (Sérum) 55 ng/ml (EDTA) Výsledek ukazuje, že ve vzorcích krve odebrané do EDTA vacutainer zkumavek byla naměřená koncentrace troponinu I nižší, než u vzorků krve odebraných do obyčejných a heparinizovaných zkumavek. Bilirubin : Přítomnost bilirubinu by způsobila snížení hodnot. (Viz tabulka Bilrubin.) Hemolýza : Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 512 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie : Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Srovnání metody 1 : Stanovení bylo porovnáno s testem Troponin I na analyzátoru IMMULITE od 162 vzorcích od pacientů. (Koncentrační rozsah: přibližně do 120 ng/ml, stanoveno pomocí testu Troponin I na analyzátoru IMMULITE. Viz graf 1.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 0,91 (IML) + 0,73 ng/ml r = 0,996 Střední hodnoty : 12,4 ng/ml (IMMULITE 2000) 12,9 ng/ml (IMMULITE) Srovnání metody 2 : Stanovení bylo porovnáno s testem Troponin I na analyzátoru IMMULITE od 128 vzorcích ze 162 vzorků od pacientů použitých v 14 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

15 metodě srovnání 1. (Koncentrační rozsah : přibližně do 15 ng/ml, měřeno testem Troponin I. IMMULITE Viz graf 2.) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 1,15 (IML) 0,06 ng/ml r = 0,995 Střední hodnoty : 3,0 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,7 ng/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Τροπονίνη I Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση της τροπονίνης στον ορό, στο ηπαρινισμένο και στο EDTA πλάσμα, σαν βοήθεια στην διάγνωση του οξέος εμφράγματος του μυοκαρδίου (AMI). Αριθμός καταλόγου: L2KTI2 (200 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: TPI Χρώμα: Ανοικτό Γκρι Περίληψη και επεξήγηση Η διάγνωση του οξέος εμφράγματος του μυοκαρδίου (AMI) γίνεται συνήθως βάσει πόνου στο στήθος, ηλεκτροκαρδιογραφικών αλλαγών και ανόδου των δεικτών των μυοκαρδικών βλαβών. Το ισοένζυμο MB της κρεατίνης κινάσης (CK-MB) ήταν για δύο δεκαετίες η προτιμούμενη ένδειξη. 2 Σύμφωνα με μια μελέτη των Wu, et al. η ανάλυση CK-MB παρουσιάζει εξαιρετική κλινική ευαισθησία για 6 με 24 ώρες μετά την έναρξη του AMI, ενώ η ευαισθησία μειώνεται στο διάστημα μεταξύ 24 και 48 ώρες. 13 Όμως τα επίπεδα του CK-MB μπορεί να είναι επίσης αυξημένα σε ασθενείς με οξεία ή χρόνια μυϊκή ασθένεια που δεν παρουσιάζουν εμφανή καρδιακή βλάβη. Στην ίδια μελέτη, η μυοσφαιρίνη, μια πρωτεΐνη των μυών που θεωρείται μία πρώτη ένδειξη για AMI, αυξήθηκε μέσα στις πρώτες 6 ώρες από την έναρξη του εμφράγματος, έφθασε την μέγιστη τιμή κλινικής ευαισθησίας στο διάστημα 6 με 12 ωρών ενώ δεν προσέφερε επιπλέον διαγνωστική αξία μέχρι την 24 ώρα. 13 Η μυοσφαιρίνη, παρά την σημασία της για τις πρώιμες πληροφορίες που παρέχει, δεν παρουσιάζει ειδικότητα για τις καρδιακές βλάβες. Συνεπώς, ένας δείκτης για τις καρδιακές βλάβες είναι ιδιαίτερα επιθυμητός. Οι Cummins, et al. 6,7 αναφέρονται στην απελευθέρωση καρδιακής τροπονίνης I (ctni) στο AMI. Πολλές μελέτες έχουν επικεντρωθεί στο ctni σαν έναν υποψήφιο δείκτη με αποδεκτή ευαισθησία και ειδικότητα για AMI και άλλες καρδιακές ασθένειες. Η τροπονίνη - ένα μόριο που δεσμεύεται στο λεπτό νημάτιο (ακτίνη) των γραμμωτών ινώδων μυών- δρα με το ενδοκυτταρικό ασβέστιο ώστε να ελεγχθεί η διαντίδραση των λεπτών νηματίων με τα χοντρά νημάτια (μυοσίνη) ώστε να ελεγχθεί η μυϊκή σύσπαση. Η τροπονίνη αποτελείται από τρεις υποενότητες: T, που ενώνει το σύμπλεγμα τροπονίνης με την τροπομυοσίνη (μια άλλη πρωτεΐνη ρυθμιστική των μυών); I, που αποτρέπει την σύσπαση των μυών όταν λείπει ασβέστιο; και C, που δεσμεύει ασβέστιο. 8 Η καρδιακή τροπονίνη I (MW 22,5 kda) και οι δύο σκελετικοί μύες ισόμορφοι της τροπονίνης I έχουν σημαντική ακολουθία ομολογίας αμινοξέων, αλλά η ctni περιέχει μια επιπρόσθετη N-τελική σειρά 11 και έχει υψηλή ειδικότητα για το μυοκάρδιο. 1 Κλινικές μελέτες έχουν επισημάνει αρκετά επιθυμητά χαρακτηριστικά της ctni ως δείκτη των μυοκαρδίκών βλαβών. Η τιμή της ctni αυξάνει νωρίς στους ασθενείς με οξύ έμφραγμα του μυοκαρδίου και φθάνει επίπεδα καθαρά διαφοροποιημένα από τις τιμές βάσης (baseline values). Συνεπώς μετά από 7 ώρες η ανάλυση ctni εντοπίζει το 95% των ασθενών στους οποίους μπορεί να επιβεβαιωθεί το οξύ έμφραγμα (AMI). 9 Οι τιμές της ctni στο πλάσμα παραμένουν αυξημένες για αρκετές ημέρες, και προσφέρουν ένα εκτεταμένο πλαίσιο για τον εντοπισμό της καρδιακής βλάβης. 3,13 Η ctni έχει επίσης αξία για την IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 15

16 πρόβλεψη του ρίσκου θνησιμότητας στις περιπτώσεις ασταθούς στηθάγχης και στο μη-q κύμα (non-q wave) του εμφράγματος του μυοκαρδίου. 5 Η ctni έχει επιδείξει ισότιμη διαγνωστική ακρίβεια για το οξύ έμφραγμα του μυοκαρδίου (AMI) όταν συγκρίθηκε με αφυδρογονάση άλατος γαλακτικού οξέος τύπου 1 και CK-MB, 3,10 και μπορεί να προσφέρει ξεκάθαρη διάγνωση στις περιπτώσεις που αυξημένες τιμές CK-MB δεν μπορούν να αποδοθούν με βεβαιότητα μόνο σε καρδιακή βλάβη. 3 Αυτές περιλαμβάνουν χειρουργείο, 4 τραυματισμούς, νεφρική ανεπάρκεια,προσβολές, και μυοπάθειες των σκελετικών μυών. 1 Επιπρόσθετα, μια μελέτη ασθενών που υπεβλήθησαν σε bypass της στεφανιαίας αρτηρίας (CABG) έδειξε ότι η ctni είναι ένας ευαίσθητος δείκτης προεγχειρητικού εμφράγματος του μυοκαρδίου (PMI). Η μέγιστη συγκέντρωση καθώς και η ώρα συγκέντρωσης της αποτελούν διαγνωστικά κριτήρια. 12 Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 IGF-I είναι μια στερεής φάσης, ενζυμική, χημειοφωταυγής, ανοσομετρική ανάλυση. TΗ στερεή φάση (σφαιρίδιο) επικαλύπτεται από μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-τροπονίνης ποντικού. Η υγρή φάση συνίσταται από αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συζευγμένη με πολυκλωνικό αντίσωμα αντί-τροπονίνης κατσίκας. Το δείγμα του ασθενούς και το αντιδραστήριο επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο στρώμα για 30 λεπτά.κατά την διάρκεια αυτού του χρόνου, η τροπονίνη Ι στο δείγμα σχηματίζει το σύμπλοκο τύπου sandwich με το μονοκλωνικό ανίσωμα αντι-τροπονίνης Ι ποντικού στο στρώμα και το συζευγμένο πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-τροπονίνης ποντικού στο αντιδραστήριο. Το μη συνδεδεμένο δείγμα ασθενούς και το ενζυμικό συζυγές απομακρύνονται ύστερα μέσω φυγοκεντρικών εκπλύσεων. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στον σωλήνα της αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το δεσμευμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 1 30 λεπτά Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 35 λεπτά Συλλογή δείγματος Το EDTA πλάσμα δίνει χαμηλότερες τιμές ανάλυσης. Κατά την παρακολούθηση, το δείγμα βάσης (baseline) και όλα τα μεταγενέστερα δείγματα πρέπει να συλλέγονται χρησιμοποιώντας τον ίδιο τύπο σωληναρίων, είτε απλά ή EDTA, ή ηπαρινισμένα. Να μην εναλλάσσεται ο τύπος δείγματος. Παρακαλείστε να δείτε την ενότητα Εναλλακτικοί Τύποι είγματος για περαιτέρω πληροφορίες. Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Τα αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. είγματα με ίκτερο ή πολύ μολυσμένα δείγματα μπορεί να δώσουν λάθος αποτελέσματα Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Τροπονίνη Ι δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 100 µl ορού ή πλάσματος Φύλαξη: 5 μέρες στους 2 8 C, 16 ή 1 μήνας στους 20 C IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

17 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ! ΥΝΗΤΙΚΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟΣ ΚΙΝ ΥΝΟΣ Περιέχει υλικό ανθρώπινης προέλευσης. Κάθε δωρεά ανθρώπινου αίματος ή συστατικού αίματος ελέγχθηκε με μεθόδους εγκεκριμένες από τον FDA για την ύπαρξη αντισωμάτων ενάντια στους ιούς της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου τύπου 1 (HIV-1) και τύπου 2 (HIV-2), καθώς και για επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β (HBsAg) και για αντισώματα ενάντια στον ιό της ηπατίτιδας C (HCV). Τα αποτελέσματα των εξετάσεων ήταν αρνητικά (όχι επανειλημμένα αντιδραστικά). Επειδή καμία εξέταση δεν παρέχει πλήρη διασφάλιση για την απουσία αυτών ή άλλων μολυσματικών παραγόντων, ο χειρισμός αυτού του υλικού θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις ορθές εργαστηριακές πρακτικές και γενικές προφυλάξεις ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. H412 P273, P501 Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: αζίδιο νατρίου, Ρυθμιστές τροπονίνης I Αντιδραστήρια: ιατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για τα επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας B και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl, έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε την μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (Βλέπε ένθετο.) Νερό: Χρησιμοποιείτε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Συσκευασία σφαιριδίων τροπονίνης Ι (L2TI12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού αντί-τροπονίνης I. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KTI2: 1 συσκευασία οχείο αντιδραστηρίου τροπονίνης I (L2TIA2) Με barcode. 21 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συνδεδεμένο με πολυκλωνικό αντίσωμα αντίτροπονίνης Ι κατσίκας, σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό, διανεμημένη ισότιμα στους θαλάμους Α και Β. Σταθερό στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KTI2: 1 δοχείο Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε τον ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές τροπονίνης I (LTIL, LTIH) ύο φιαλίδια (Χαμηλό και Υψηλό) τροπονίνης Ι σε λυοφιλοποιημένη μήτρα μη ανθρώπινου ορού, με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλίδιου με 3,0 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Αναμείξτε με απαλές κινήσεις ή με αναστροφή έως ότου το λυοφιλοποιημένο υλικό διαλυθεί πλήρως. Αφήστε για 30 λεπτά και χρησιμοποιήστε το αμέσως, ή διαχωρίστε και καταψύξτε. ιαχωρίστε και ψύξτε. Σταθερά στους 20 για 2 μήνες (διαχωρισμένοι) μετά την ανασύσταση. L2KTI2: 1 σετ IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 17

18 Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά Πολυαραιωτικό 1 Για την επί-του-αναλυτή αραίωση υψηλών δειγμάτων ασθενών. Ένα φιαλίδιο συμπυκνωμένου (έτοιμου για χρήση) κανονικού ανθρώπινου ορού, με συντηρητικό,που περιέχει μη ανιχνεύσιμα με χαμηλά επίπεδα τροπονίνης Ι, με συντηρητικό. Σταθερό για 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2M1Z: 25 ml Ετικέτες με ραβδοκώδικα παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. L2M1Z: 3 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου ιαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες είγματα ποιοτικού ελέγχου: Εφαρμόστε τους κρατικούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης για τη συχνότητα του ποιοτικού ελέγχου. Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου ή απλά δείγματα τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) τροπονίνης Ι. Η Siemens Healthcare Diagnostics συνιστά τη χρήση εμπορικά διαθέσιμων υλικών ελέγχου ποιότητας με τουλάχιστον 2 επίπεδα (χαμηλό και υψηλό). Ένα ικανοποιητικό επίπεδο απόδοσης επιτυγχάνεται όταν οι τιμές που προκύπτουν βρίσκονται εντός του αποδεκτού εύρους των υλικών ελέγχου για τον αναλυτή ή εντός ενός καθορισμένου εύρους που καθορίστηκε με βάση ένα κατάλληλο πλαίσιο εσωτερικού εργαστηριακού ποιοτικού ελέγχου. Αναμενόμενες τιμές Βασιζόμενη στην σχέση με την IMMULITE Troponin I (βλέπε Σύγκριση της Μεθόδου) η ανάλυση αναμένεται να έχει ουσιαστικά τα ίδια εύρη αναφοράς. Πραγματοποιήθηκε μελέτη εύρους αναφοράς με χρήση του προσδιορισμού IMMULITE 2000 Troponin I (L2KTI) σύμφωνα με τις οδηγίες του πρωτοκόλλου C28-A3c του Ιδρύματος Κλινικών και Εργαστηριακών Προτύπων (CLSI). 18 Από τη μελέτη, στην οποία χρησιμοποιήθηκαν αντίστοιχα δείγματα πλάσματος ορού και ηπαρινισμένου πλάσματος από 300 φαινομενικά υγιή άτομα, προέκυψε τιμή 99ου εκατοστημορίου 0,29 ng/ml (μg/l). Ο συντελεστής διακύμανσης (%Σ..) σε αυτό το επίπεδο είναι 10,3%. Η τιμή με 10% Σ.. είναι η 0,32 ng/ml (μg/l). (Βλ. γράφημα Προφίλ κάτω ορίου ακρίβειας/λειτουργικής ευαισθησίας.) Θεωρείστε αυτά στα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Σύσταση NACB IFCC 2007: Η Επιτροπή NACB IFCC συνιστά τη χρήση της τιμής του 99ου εκατοστημορίου ενός φυσιολογικού πληθυσμού, ως όριο πάνω από το οποίο μια τιμή τροπονίνης θεωρείται αυξημένη. Παρόλο που μια ολική ανακρίβεια (%Σ..) 10% στο όριο αναφοράς του 99ου εκατοστημορίου θα 18 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

19 ήταν ιδανική, η Επιτροπή NACB IFCC αναγνωρίζει ότι μια ανακρίβεια < 25% στο 99ο εκατοστημόριο δεν οδηγεί σε σημαντικό σφάλμα στην κατηγοριοποίηση του ασθενούς όταν πραγματοποιείται μια σειρά καθορισμένων χρονικά (σειριακών) εντολών προσδιορισμού της τροπονίνης. 19,20 Τα σειριακά δείγματα από έναν ασθενή με έμφραγμα του μυοκαρδίου θα παρουσιάσουν την κλασική αύξηση και μείωση στη συγκέντρωση της καρδιακής τροπονίνης I που παρατηρείται και σε άλλους δείκτες εμφράγματος μυοκαρδίου όπως η CK-MB. Σε αντίθεση με την CK- MB, οι τιμές της καρδιακής τροπονίνης I γενικά παραμένουν αυξημένες πάνω από το εύρος αναφοράς για αρκετές (5 9) ημέρες. 7,21,22 Η Εθνική Ακαδημία Κλινικής Βιοχημείας (NACB) συνιστά συνιστά σειριακή δειγματοληψία κατά την εισαγωγή, 2 4 ώρες, 6 9 ώρες και ώρες (προαιρετικά) μετά την αρχική αιμοληψία. 23 Από κλινικές μελέτες προκύπτει ότι τα αυξημένα επίπεδα καρδιακής τροπονίνης I είναι ένας χρήσιμος δείκτης μυοκαρδιακής βλάβης για ένα εύρος οξέων στεφανιαίων συνδρόμων μεταξύ των οποίων περιλαμβάνονται η ασταθής στηθάγχη, καθώς και το έμφραγμα μυοκαρδίου με κύμα Q και χωρίς κύμα Q. 1,4,5,22,24 Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει το δικό του διάστημα αναφοράς και τα όρια αποκοπής ώστε να εξασφαλίσει την κατάλληλη αντιπροσώπευση των συγκεκριμένων πληθυσμών, λαμβάνοντας υπόψη την τρέχουσα πρακτική και τα κριτήρια διάγνωσης του εμφράγματος μυοκαρδίου στο συγκεκριμένο εργαστήριο. Άλλες συνθήκες οι οποίες ενδέχεται να οδηγήσουν σε μυοκαρδιακή βλάβη, όπως καρδιακή κάκωση και μυοκαρδίτιδα, έχουν τη δυνατότητα να προκαλέσουν αυξήσεις στις κυκλοφορούσες συγκεντρώσεις των πρωτεϊνών που υπάρχουν στο μυοκάρδιο, συμπεριλαμβανομένων των καρδιακών τροπονίνης I. Παράγοντες όπως αυτοί θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη κατά την ερμηνεία των αποτελεσμάτων. 25 ESC/ACC Συνιστώμενος ορισμός του οξέος εμφράγματος μυοκαρδίου (AMI): Μια κοινή επιτροπή από την Ευρωπαϊκή Εταιρεία Καρδιολόγων (ESC) και American College Καρδιολογίας (ACC) συνιστά τον επανακαθορισμό του εμφράγματος του μυοκαρδίου (MI). Η επιτροπή ορίζει το έμφραγμα του μυοκαρδίου (MI) ως την τυπική άνοδο και σταδιακή πτώση της τροπονίνης ή την πιο ταχεία άνοδο και πτώση της CK-MB σε συνδυασμό με ισχαιμικά συμπτώματα, παθολογικά κύματα Q σε ΗΚΓ, άνοδο/πτώση του τμήματος ST του ΗΚΓ και/ή παρέμβαση στη στεφανιαία αρτηρία. Επιπλέον η επιτροπή συνιστά ότι ως αυξημένη τιμή τροπονίνης να ορίζεται μία μέτρηση που υπερβαίνει το 99ο εκατοστημόριο του διαστήματος αναφοράς και ότι η αποδεκτή ανακρίβεια (συντελεστής διακύμανσης) για τις μετρήσεις στο 99ο εκατοστημόριο είναι < 10%. 26 Το 99ο εκατοστημόριο του διαστήματος αναφοράς για τη μέθοδο του προσδιορισμού IMMULITE 2000 Troponin I προσδιορίστηκε στην τιμή 0,29 ng/ml (µg/l) και το όριο 10% Σ.. υπολογίστηκε ότι ήταν 0,32 ng/ml (µg/l). 26 Περιορισμοί Η ανάλυση δίνει χαμηλότερες τιμές όταν χρησιμοποιείται EDTA πλάσμα. Παρακαλείστε να δείτε την ενότητα Εναλλακτικοί Τύποι είγματος για περισσότερες πληροφορίες. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με in vitro ανοσοαναλύσεις. [Βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] είγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε, να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα αυτής της εξέτασης πρέπει πάντοτε να συνδυάζονται με την κλινική εξέταση, το ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 19

20 Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για δεδομένα αντιπροσωπευτικά της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Αναφερόμενο εύρος: 0,2 έως 180 ng/ml Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική ευαισθησία: 0,2 ng/ml Υψηλή δόση φαινομένου Hook: Καμιά επίδραση μέχρι τα ng/ml Ακρίβεια: Τα δείγματα υφίσταντο αναλύσεις εις διπλούν σε διάστημα 20 ημερών, δύο τρεξίματα την ημέρα, σε σύνολο 40 τρεξιμάτων και 80 επαναλήψεων. (Bλ. Πίνακα Precision.) Κάτω όριο ακρίβειας: Για να αξιολογηθεί το κάτω όριο ακρίβειας, υλικά ελέγχου και ένα πάνελ δειγμάτων ορού με χαμηλή συγκέντρωση ctni αναλύθηκαν εις τριπλούν. Κάθε δείγμα και υλικό ελέγχου αναλύθηκε σε 20 κύκλους μέτρησης για ένα διάστημα 20 ημερών. (Βλ. γράφημα Προφίλ κάτω ορίου ακρίβειας/λειτουργικής ευαισθησίας.) Γραμμικότητα: Ελέγχθηκαν δείγματα σε διάφορες αραιώσεις. (Βλ. Πίνακα Linearity για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα τροπονίνης Ι (200, 400 και 900 ng/ml) και αναλύθηκαν. (Βλ. Πίνακα Recovery για τα αντιπροσωπευτικά δείγματα.) Ειδικότητα: Τα αντισώματα έχουν υψηλή ειδικότητα για την τροπονίνη Ι. (Bλ. Πίνακας Specificity.) Εναλλακτικοί Τύποι είγματος: Συλλέχθηκαν δείγματα (n = 12) σε απλούς και ηπαρινισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες (vacutainers). Αντίστοιχα δείγματα εμπλουτίστηκαν με τροπονίνη I. Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (Ηπαρίνη) = 0,9 (ορός) + 1,84 ng/ml r = 0,980 Μέσοι όροι: 40 ng/ml (Ορός) 37 ng/ml (Ηπαρίνη) Σε μια άλλη μελέτη, συλλέχθηκαν δείγματα (n = 13) χρησιμοποιώντας απλούς και EDTA δοκιμαστικούς σωλήνες (vacutainers). Αντίστοιχα δείγματα εμπλουτίστηκαν με τροπονίνη I. Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (EDTA) = 0, 8 (Ορός) 3,1 ng/ml r = 0,988 Μέσοι όροι: 72 ng/ml (Ορός) 55 ng/ml (EDTA) Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα δείγματα αίματος που συγκεντρώθηκαν σε EDTA δοκιμαστικούς σωλήνες έδωσαν χαμηλότερες τιμές τροπονίνης I σε σχέση με τα δείγματα που συλλέχθηκαν σε απλούς και ηπαρινισμένους σωλήνες. Χολερυθρίνη: Θα μπορούσε να έχει επίδραση στην ανάλυση, προκαλώντας καταστολή των τιμών. (Βλ. πίνακα Bilrubin.) Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 512 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3000 mg/dl δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Σύγκριση της Μεθόδου 1: Η ανάλυση συγκρίθηκε με την ανάλυση IMMULITE Τροπονίνη I σε 162 δείγματα. (Εύρος συγκέντρωσης μέχρι 120 ng/ml, όπως μετρήθηκε με την IMMULITE Τροπονίνη I. ες γράφημα 1.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,91 (IML) + 0,73 ng/ml r = 0,996 Μέσοι όροι: 12,4 ng/ml (IMMULITE 2000) 12,9 ng/ml (IMMULITE) 20 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

21 Σύγκριση της Μεθόδου 2: Η ανάλυση συγκρίθηκε με την ανάλυση IMMULITE Troponin I σε 128 δείγματα από τα 162 δείγματα που χρησιμοποιήθηκαν για την σύγκριση της μεθόδου 1. (Εύρος συγκέντρωσης μέχρι 15 ng/ml, όπως μετρήθηκε με την IMMULITE Troponin I. ες γράφημα 2.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,15 (IML) 0,06 ng/ml r = 0,995 Μέσοι όροι: 3,0 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,7 ng/ml (IMMULITE) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Troponina I Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do ilościowego oznaczania poziomu troponiny I w surowicy oraz w osoczu heparynizowanym i z EDTA. Test przeznaczony jest do diagnostyki ostrego zawału mięśnia sercowego (ang. AMI). Numer katalogowy: L2KTI2 (200 testów) Kod testu: TPI Kolor: jasnoszary Wprowadzenie Ostry zawał mięśnia sercowego (ang. AMI) jest zazwyczaj diagnozowany na podstawie bólu w klatce piersiowej, zmian w EKG oraz podwyższonych poziomów markerów uszkodzenia serca. Przez 20 lat głównym markerem sercowym był izoenzym MB kinazy kreatynowej (CK-MB). 2 Badania Wu i współpracowników wykazały znakomitą czułość kliniczną pomiarów CK-MB pomiędzy 6 a 24 godziną od wystąpienia AMI, oraz ich malejącą czułość pomiędzy 24 a 48 godziną. 13 Ponadto CK-MB może również wzrastać u chorych z ostrą lub przewlekłą chorobą mięśni bez widocznego uszkodzenia mięśnia sercowego. W tych samych badaniach wykazano, że mioglobina, białko mięśniowe uważane za wczesny marker AMI, wzrastało w ciągu 6 godzin od wystąpienia objawów, osiągając największą czułość kliniczną między 6 i 12 godziną, tracąc wartość diagnostyczną po 24 godzinach. 13 Mioglobina będąc wczesnym markerem zmian, nie jest jednakże swosita dla uszkodzeń mięśnia sercowego. Bardzo istotne więc jest znalezienie markera swositego dla uszkodzeń serca. Cummins 6,7 i współpracownicy opisali uwalnianie sercowej troponiny I (ctni) w AMI. ctni poświęcono szereg badań widząc w niej możliwy do przyjęcia marker o wystarczającej czułości i swoistości dla AMI i innych chorób serca. Troponina jest cząsteczką, która wiąże się z cienkimi filamentami (aktyna) mięśni prążkowanych serca i wraz z wapniem wewnątrzkomórkowym reguluje współdziałanie cienkich i grubych (miozyna) filamentów, wpływając w ten sposób na skurcz serca. Troponina składa się z trzech podjednostek: T, która łączy kompleks troponiny z tropomiozyną (kolejne białko regulujące pracę mięśnia sercowego); I, która zapobiega skurczowi mięśnia przy braku wapnia; oraz C, która wiąże wapń. 8 Sercowa troponina I (masa 22,5 kda) oraz dwie izoformy mięśni szkieletowych wykazują znaczną homologię sekwencji aminokwasów, choć ctni posiada dodatkową sekwencję-n końcową 11 i jest wysoce specyficzna dla mięśnia sercowego. 1 Badania kliniczne wykazały kilka znaczących cech ctni jako markera uszkodzenia mięśnia sercowego. U chorych z AMI obserwuje się wczesny wzrost ctni do wartości znacząco różnych od poziomu podstawowego, tak, że w ciągu 7 godzin od wystąpienia objawów test ctni wykrywa 95% chorych, u których AMI zostaje następnie potwierdzony. 9 Poziom ctni w osoczu pozostaje podniesiony przez kilka dni stwarzając długi okres umożliwiający wykrycie uszkodzenia serca. 3,13 Test ma także wartość predykcyjną dla oceny ryzyka IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 21

22 umieralności w niestałej anginie i zawale serca bez załamka Q. 5 ctni wykazuje równoznaczną dokładność diagnostyczną jeśli chodzi o AMI w porównaniu z typem I dehydrogenazy mleczanowej i CK-MB. 3,10 Może ponadto weryfikować rozpoznanie w przypadku gdy podniesiony poziom CK-MB nie jest związany wyłącznie z uszkodzeniem mięśnia sercowego. 3 Sytuacje takie obejmują zabiegi chirurgiczne, 4 urazy, niewydolność nerek, napady padaczki oraz miopatie mięśni szkieletowych. 1 Dodatkowo badania chorych po wprowadzeniu bypassów naczyń wieńcowych (CABG) dowiodły, że ctni może być czułym markerem około operacyjnego zawału serca (PMI), przy czym wartość diagnostyczną posiadają zarówno wielkość jak i czas wystąpienia wartości maksymalnej (piku). 12 Zasada testu Test IMMULITE 2000 Troponina I to enzymatyczny, chemiluminescencyjny test immunometryczny w fazie stałej. Faza stała (perła) opłaszczona jest mysim przeciwciałem monoklonalnym przeciwko troponinie I. Faza ciekła składa się z fosfatazy alkalicznej (wyizolowanej z jelita cielęcego) sprzężonego z kozim przeciwciałem poliklonalnym przeciwko troponinie I. Próbkę pacjenta i odczynnik inkubuje się razem z opłaszczoną przeciwciałami perłą przez 30 minut. W tym czasie, troponina I znajdująca się w próbce tworzy kompleks przeciwciał typu kanapkowego z mysim przeciwciałem monoklonalnym przeciwko troponinie I na perle i z sprzężonym z enzymem kozim przeciwciałem poliklonalnym przeciwko troponinie I w odczynniku. Niezwiązaną część próbki pacjenta i koniugat enzymu usuwa się następnie przez ultrawirowanie. Ostatecznie, do probówki reakcyjnej, zawierajacej perłę dodaje się substrat chemiluminescencyjny i generowany jest sygnał proporcjonalny do ilości związanego enzymu. Cykle inkubacji: 1 30 minut Czas do pierwszego wyniku: 35 minut Preparatyka próbek Wyniki w osoczu z EDTA są zaniżone. W przypadku serii oznaczeń próbka wyjściowa i kolejne powinny być pobierane do tego samego rodzaju probówek: zwykłych, z EDTA lub z heparynizowanych. Nie stosować wymiennie różnych typów probówek. (Porównać z rozdziałem: Rodzaje pobieranego materiału.) Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Próbki żółtaczkowe i z silną kontaminacją mogą dawać błędne wyniki. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 Troponina I nie został określony. Wymagana objętość próbki: 100 µl surowicy lub osocza Przechowywanie: 5 dni w temp. 2 8 C. 16 lub 1 miesiąc w temp. 20 C IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

23 Ostrzeżenia i środki ostrożności Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA! POTENCJALNE ZAGROŻENIE BIOLOGICZNE Zawiera materiał pochodzenia ludzkiego. Każdą porcję ludzkiej krwi lub składnika krwi pochodzącą od dawców przetestowano metodami zaaprobowanymi przez FDA na obecność przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi nabytego niedoboru odporności typu 1 (HIV-1) i typu 2 (HIV-2), antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby typu B (HBsAg) i przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (HCV). Wyniki tych badań były ujemne (nie wykazały powtarzalnej reaktywności). Jednak żadne badanie nie gwarantuje całkowitej pewności, że te lub inne czynniki chorobotwórcze nie są obecne w materiale; z tym materiałem należy postępować zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej i stosować uniwersalne środki ostrożności PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. H412 P273, P501 Działa szkodliwie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Unikać uwolnienia do środowiska. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: azydek sodu; Troponina I kalibratory Odczynniki: Przechowywać w temp. 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku kiły, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Niektóre składniki zestawu mogą zawierać jako konserwant azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl. Wykorzystane odczynniki należy usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu się azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia się potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim działaniem światła słonecznego (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu stanowią komplet. Zestaw działa w oparciu o kod kreskowy. Troponina I jednostki testowe (L2TI12) Oznakowanych kodem kreskowym. 200 pereł opłaszczonych mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-troponina I. Stabilne w temp. 2 8 C do upływu daty ważności. L2KTI2: 1 opakowanie Troponina I klin odczynnikowy (L2TIA2) Z kodem kreskowym. 21 ml fosfatazy alkalicznej (wyizolowanej z jelita cielęcego) sprzęgniętej z kozim przeciwciałem poliklonalnym troponinie I w buforze, z konserwantem, rozpuszczonych równomiernie w komorach A i B. Stabilna w temp. 2 8 C do upływu daty ważności. L2KTI2: 1 klin Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelkę komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. Troponina I kalibratory (LTIL, LTIH) Dwie fiolki (niski i wysoki), zawierające liofilizowaną troponinę I w zwierzęcej surowicy z konserwantem. Zawartość każdej fiolki rekonstytuować w 3,0 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Mieszać delikatnie wirując lub obracając aż do cakowitego rozpuszczenia ise liofilizowanego materiału. Pozostawić przez 30 minut i użyć bezpośrednio lub rozporcjować równomiernie i zamrozić. Stabilne w temp. 20 C przez 2 miesiące (po rozpipetowaniu) po rekonstytucji. L2KTI2: 1 zestaw IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 23

24 Przed przystąpieniem do kalibracji na probówki należy nakleić odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (znajdujące się w zestawie) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Materiały nie znajdujące się w zestawie Multi-rozcieńczalnik MD1 Do automatycznego rozcieńczania wysokich próbek. Jedna fiolka skoncentrowanej (gotowej do użycia), spreparowanej prawidłowej surowicy ludzkiej, zawierającej nieoznaczalne do niskich poziomów troponiny I, z konserwantem. Stabilny w temp. 2 8 C przez 30 dni po otwarciu lub 6 miesięcy w temp. 20 C (po rozpipetowaniu. L2M1Z: 25 ml Wraz z rozcieńczalnikiem dostarczane są nalepki z kodami kreskowymi. Nalepkę nakleić na probówkę (16 x 100 mm), aby umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2M1Z: 3 nalepki L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Zestaw czyszczący LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik Ponadto niezbędne: woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole. Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie Próbki kontrolne: Przestrzegać przepisów państwowych i wymogów kontrolnych w zakresie częstotliwości kontroli jakości. Stosować kontrole lub pule surowic co najmniej o niskim i wysokim poziomie troponiny I. Siemens Healthcare Diagnostics zaleca stosowanie dostępnych w handlu próbek kontroli jakości o co najmniej 2 poziomach (niskim i wysokim). Uznaje się, że test przebiega prawidłowo, gdy uzyskane wartości analitu plasują się w przyjętym dla Kontroli zakresie dla danego analizatora lub w zakresie opracowanym w ramach wewnątrzlaboratoryjnego systemu zapewnienia jakości. Wartości spodziewane Opierając się na podobieństwie z testem IMMULITE Troponina I (patrz: Porównanie metod ) można oczekiwać, że zakresy wartości referencyjnych dla obu testów będą identyczne. Zakresy referencyjne dla testu IMMULITE 2000 Troponin I (L2KTI) ustalono w badaniach przeprowadzonych zgodnie ze wskazówkami zawartymi w Protokole C28-A3c Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). 18 W badaniu, w których porównywano próbki surowicy i osocza z heparyną litową, pochodzące od 300 osób bez objawów chorobowych uzyskano wartość 0,29 ng/ml (μg/l) dla 99. percentyla. Współczynnik zmienności (%CV) na tym poziomie wynosi 10,3%. Wartością charakteryzującą się 10% CV jest 0,32 ng/ml (μg/l). (Zob. wykres Profil precyzji przy niskich stężeniach/ Czułość funkcjonalna"). Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Interpretacja wyników Zalecenia NACB IFCC z roku 2007: Komitet NACB IFCC zaleca stosowanie wartości 99. percentyla zdrowej populacji jako poziomu, powyżej którego stężenie troponiny uznaje się za podwyższone. Choć ideałem byłaby całkowita nieprecyzja (%CV) 10% przy referencyjnej wielkości 99. percentyla, Komitet NACB IFCC przyznaje, że nieprecyzja < 25% przy 99. percentylu nie prowadzi do znaczących błędów w ocenie pacjentów poddanych serii oznaczeń troponiny w określonych odstępach czasu. 19,20 24 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

25 Seria próbek pobranych od pacjenta po zawale mięśnia sercowego wykazuje klasyczny wzrost, a następnie spadek stężenia troponiny I, obserwowany również w innych markerach zawału mięśnia sercowego, np. CK-MB. W przeciwieństwie do CK-MB, stężenie sercowej troponiny-i zwykle pozostaje powyżej poziomu referencyjnego przez szereg (5 9) dni. 7,21,22 Krajowa Akademia Biochemiii Klinicznej w USA (National Academy of Clinical Biochemistry, NACB) zaleca pobieranie kolejnych próbek w chwili przyjęcia, po 2 4 godzinach, po 6 9 godzinach i po godzinach (opcjonalnie) po pierwszym pobraniu. 23 Badania kliniczne wykazały, że zwiększenie stężenia troponiny sercowej I stanowi przydatny wskaźnik uszkodzenia mięśnia sercowego w szeregu ostrych chorób wieńcowych, w tym w niestabilnej dusznicy bolesnej i zawałach mięśnia sercowego bez załamka Q i z załamkiem Q. 1,4,5,22,24 Każde laboratorium powinno ustalić własne zakresy referencyjne i wartości odcięcia, właściwie odzwierciedlające stężenia swoiste dla danej populacji, z uwzględnieniem aktualnej praktyki i kryteriów rozpoznania ostrego zawału mięśnia sercowego w danej instytucji. Inne stany mogące prowadzić do uszkodzenia mięśnia sercowego, takie jak wstrząśnienie serca lub zapalenie mięśnia sercowego, mogą spowodować wzrost stężenia białek mięśnia sercowego w krążeniu, w tym troponiny-i sercowej. Czynniki takie należy uwzględnić przy interpretacji wyników. 25 Definicja ostrego zawału mięśnia sercowego wg. zaleceń ESC/ACC: Wspólny Komitet Europejskiego Stowarzyszenia Kardiologów (ESC) i Amerykańskiego Kolegium Kardiologów (ACC) zaproponował zmianę definicji zawału. Komitet definiuje zawał jako typowy wzrost, a następnie stopniowy spadek poziomu troponiny i gwałtowniejszy wzrost, a następnie spadek CK-MB w powiazaniu z objawami niedokrwiennymi, patologiczne załamki Q w EKG, wzniesienie/ spadek odcinka ST w EKG i/lub inwerwencja w tętnicy wieńcowej. Ponadto Komitet zaleca, aby za podwyższony poziom troponiny uznać stężenie przekraczające wartość 99. percentyla grupy referencyjnej, przy czym akceptowana nieprecyzja (CV) pomiarów na poziomie 99. pecentyla wynosi < 10% percentyl zakresu referencyjnego dla testu IMMULITE 2000 Troponin I ustalono na 0,29 ng/ml (µg/l), a granicę 10% CV oszacowano na 0,32 ng/ml (µg/l). 26 Ograniczenia Wyniki oznaczenia są zaniżone w przypadku osocza z EDTA (porównaj: Rodzaje pobieranego materiału ). Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin Chem 1988:34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi stanami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i na wykresach. Wyniki podano w ng/ml. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą surowicy, a próbki pobierano do probówek bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Zgłaszany zakres: 0,2 do 180 ng/ml Test wykazuje zgodność pomiarową z wewnętrznymi standardami wytwarzania dzięki zastosowaniu kwalifikowanych materiałów i metod pomiaru. Czułość analityczna: 0,2 ng/ml IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 25

26 Efekt wysokiej dawki Hook Effect: Nie występuje do stężenia ng/ml Precyzja: Próbki testowano przez okres 20 dni w duplikatach, dwa razy dziennie, co dało w sumie 40 serii i 80 powtórzeń. (Patrz: tabela Precyzja.) Precyzja przy niskich stężeniach: Dla oceny precyzji przy niskich stężeniach, kontrole i panele surowic o niskim stężeniu ctni oznaczano trzykrotnie w 20 seriach w ciągu 20 dni. (Zob. wykres Profil precyzji przy niskich stężeniach/ Czułość funkcjonalna.) Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom. (Patrz: tabela Liniowość.) Odzysk: Oznaczano próbki surowic wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 roztworami troponiny I o stężeniach, kolejno: 200, 400 i 900 ng/ml. (Patrz: tabela Odzysk.) Swoistość: Przeciwciało jest wysoce swoiste w stosunku do troponiny I. (Patrz: tabela Swoistość.) Rodzaje pobieranego materiału: Próbki (n = 12) pobierano do probówek zwykłych i z heparynizowanych. Wzbogacono je troponiną I. Uzyskano następujące równanie regresji liniowej: (Heparyna) = 0,9 (Surowica) + 1,84 ng/ml r = 0,980 Średnie: 40 ng/ml (Surowica) 37 ng/ml (Heparyna) W innych badaniach porównano wyniki oznaczeń wzbogaconych troponiną I próbek od 13 osób, u których pobrano krew na skrzep i na EDTA. Uzyskano następujące równanie regresji liniowej: (EDTA) = 0,8 (Surowica) 3,1 ng/ml r = 0,988 Średnie: 72 ng/ml (Surowica) 55 ng/ml (EDTA) Wyniki wykazały, że z krwi pobranej na EDTA uzyskuję się niższe wyniki niż z surowicy i osocza heparynizowanego. Bilirubina: Może zaniżać wyniki. (Patrz: tabela Bilirubina.) Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 512 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do 3000 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Porównanie metod 1: Wyniki porównywano z wynikami uzyskanymi przy zastosowaniu testu IMMULITE Troponina I w grupie 162 próbek. (Zakres stężeń do około 120 ng/ml, według pomiarów testem IMMULITE Troponina I. Porównaj wykres 1.) Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,91 (IML) + 0,73 ng/ml r = 0,996 Średnie: 12,4 ng/ml (IMMULITE 2000) 12,9 ng/ml (IMMULITE) Porównanie metod 2: Wyniki porównywano z wynikami uzyskanymi przy zastosowaniu testu IMMULITE Troponina I w grupie 128 próbek od 162 osób z poprzedniego porównania. (Zakres stężeń do około 15 ng/ml, według pomiarów testem IMMULITE Troponina I. Porównaj wykres 2.) Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 1,15 (IML) 0,06 ng/ml r = 0,995 Średnie: 3,0 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,7 ng/ml (IMMULITE) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom 26 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )

27 PIEL2KTI 4 {24} Changes in this Edition: cc#eu22651: 1) Under Warnings and Precautions, added biohazard symbol and potential biohazard statement, caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 2) Under References, added citations from the potential biohazard statement. 3) Changed Origin: UK to Made in: UK. 4) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 5) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent Symbol Definition En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! υνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, ) 27

28 LOT Symbol Definition En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: ιατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Health Hazard Cz: Zdravotní riziko El: Κίνδυνος για την υγεία Pl: Zagrożenie dla zdrowia En: Exclamation Mark Cz: Vykřičník El: Θαυμαστικό Pl: Wykrzyknik En: Corrosion Cz: Koroze El: ιάβρωση Pl: Działanie żrące BEAD PACK TEST UNIT REAG WEDGE REAG WEDGE A REAG WEDGE B REAG WEDGE D ADJUSTOR ADJUSTOR L ADJUSTOR H ADJUSTOR AB Symbol Definition En: Skull and Crossbones Cz: Lebka se zkříženými hnáty El: Νεκροκεφαλή με διασταυρούμενα οστά Pl: Czaszka i skrzyżowane piszczele En: Environment Cz: Prostředí El: Περιβάλλον Pl: Środowisko En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami En: Test Unit Cz: Testovací Jednotky El: Μονάδες ανάλυσης Pl: Jednostki testowe En: Reagent Wedge Cz: Reagencie El: οχείο Αντιδραστηρίων Pl: Klin odczynnikowy En: Adjustor Cz: Kalibrátor El: Ρυθμιστής Pl: Kalibrator En: Adjustor, low Cz: Kalibrátor, nízký El: Ρυθμιστής, χαμηλό Pl: Kalibrator, niski En: Adjustor, high Cz: Kalibrátor, vysoký El: Ρυθμιστής, υψηλό Pl: Kalibrator, wysoki En: Adjustor Antibody Cz: Protilátka proti kalibrátoru El: Ρυθμιστής αντισώματος Pl: Przeciwciało Kalibratora 28 IMMULITE 2000 Troponin I (PIEL2KTI-4 {24}, )