بررسی اثر محیط کشت حاصل از سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی بر آسیب حاد کلیوی ناشی از جنتامایسین در موش صحرایی

Transcript

1 مقاله پژوهشي مجله سلول و بافت )علمي - پژوهشي( جلد 5 شماره 1 بهار بررسی اثر محیط کشت حاصل از سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی بر آسیب حاد کلیوی ناشی از جنتامایسین در موش صحرایی *1 اعظم عابدی کوشالشاهی M.Sc. مهناز آذرنیا Ph.D. منصور جمالی Ph.D. فریبرز معیر Ph.D. 1- کارشناس ارشد تکوینی جانوری دانشگاه خوارزمی )تربیت معلم( تهران ایران 2- گروه زیست شناسی دانشکده علوم زیستی دانشگاه خوارزمی )تربیت معلم( تهران ایران 3- گروه پاتولوژی دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تهران 4- گروه پاتولوژی دانشکده علوم پزشکی دانشگاه آزاد اسالمی واحد کرج * پست الکترونیك نویسنده مسئول: abedimasoomeh@yahoo.com تاريخ دريافت: 1991/11/9 تاريخ پذيرش: 1999/5/99 چکیده هدف: هدف از انجام اين تحقیق بررسی اثر فاکتورهای ترشحی سلولهای بنیاادی زاانیای ی انناانی بار آسای جنتازاينین در زوش صحرايی زیباشد. حااد کلیاوی ناشای از مواد و روشها: در اين تحقیق ابتدا آززايیی جهت دستیابی به زدل حیوانی استاندارد طراحی شد. سپس حیوانات باهطاور تصاادفی باه چهار گروه تقنیم شدند. يک گروه بهعنوان کنترل در نظر گرفته شد که هیچ تاريقی در حیوانات اين گروه صورت نگرفت سه گروه ديگار جنتازاينین را بهصورت داخل صفاقی با دوز 111 زیلیگرم بر کیلوگرم درشش روز زتوالی دريافت کردند. سپس به يکی از اين ساه گاروه زحیط کیت رويی سلولهای بنیادی زاانیی ی اننانی و به گروه ديگر زحیط کیت فاقد فاکتورهای ترشحی باهصاورت داخال صافاقی و بهزدت سه روز زتوالی تاريق شد. در نهايت در روزهای سوم پنجم و هیتم بعد از تاريق جنتازاينین ن ونههای کلیاه و خاون حیواناات ج ع آوری و زورد بررسیهای بافتشناسی و بیوشی یايی قرار گرفت. نتایج: نتايج گرچه به جا در زوردی خاص هیچ کاهش زعنیداری در زیاان بیوزارکرهای خونی حیوانات در گروه دريافت کنناده زحایط کیت رويی سلولهای بنیادی زاانیی ی اننانی ننبت به دو گروه ديگر نیان نداد. ازا بهبودی آسی بررسی زیاهده شده است. بافتی در تعدادی از روزهاای زاورد نتیجه گیری: نتايج تحقیق حاضر پیینهاد زیکند که فاکتورهای ترشحی سلولهای بنیادی زاانیی ی اننانی زیتوانناد در برابار آسای بافتی ناشی ازجنتازاينین اثر زحافظتی داشته باشند. واژگان کلیدی: آسی حاد کلیوی جنتازاينین فاکتورهای ترشحی 19

2 و 1 بررسی اثر محیط کشت حاصل از سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی بر... مقدمه ( کلیه يک اندام با پیچیدگی باا زایباشاد کاه بایش از 91 ناو سلول زختلا را در بخاشهاای زتفااوت زایساازد و دارای دو وظیفه زهم زیباشد: يکی پاک کردن بادن از زاواد زاياد کاه ياا خورده زیشوند يا توسط زتابولینم تولید زیشوند ع ل دوم که بهويژه جنبه حیاتی دارد کنترل حجم و ترکی زايعات بدن است زيرا تعادل آب و ع ال ت اام الکترولیاتهاا در بادن باین زقادار ورودی و خروجی تا حدود زيادی توسط کلیهها حفا زایشاود 9(. بی اریهای کلیاوی در زیاان زهامتارين علال زار و زعلولیت در بنیاری از کیورها در سراسر جهان زیباشند. آسی کلیوی حاد (AKI) يک بی اری سخت و زع و باا ياک ننابت زر و زیر با زیباشد که توسط زن وزیت يا اينک ی ناشی از شی ی درزانی آنتی بیوتیکها و شوک ايجاد شده توسط عفونت و جراحیهای زهم اتفاا زایافتاد )9 4 و 5(. AKI زایتواناد زنجر به ناکار آزدی و آپوپتوزيس و ه چنین نکروز در سلولهای اپیتلیال توبو ر کلیوی ه چنین کاهش در سلولهای اندوتلیال کلیوی شود )5(. در کل AKI با ياک کااهش ساريع در ننابت فیلتراسیون گلوزرولی شناخته زی شود که توسط کاهش هام در فاکتورهای رگی و هم توبو ر تعیین زایشاود و شاازل افااايش انبناط رگی کلیاوی کااهش خاود تنظی ای و انناداد توباو ر زیباشد )6 و 7(. آسی کلیوی حاد بطور بالقوه يک بی اری قابل برگیت است. در اکثريت بی اران AKI باهطاور زاوثری بهباود زیيابد و هیچگونه پیازد بالینی ندارد ازا در تعاداد زعادودی از بی اران AKI بهطور ناقص بهبوديافته و اين بی ااران ياا دياالیا زیکنند و يا بهسوی بی ااری کلیاوی زاازن (CKD) پییارفت زایکنناد کاه هام AKI و هام CKD دارای هايناه باا و باار بهداشتی برای جازعه هنتند. هفت درصد کل بی ااران بناتری شده در بخش زراقبتهای ويژه بهدلیل AKI بوده است )8( باه ه ین جهت جنتجو برای ايجاد روشهاای ناوين درزاان AKI صورت گرفته است. زطالعات اخیر تکنولوژی بر پايه سالولهاای بنیادی را زورد آززايش قارار دادهاناد کاه جنباههاای جاالبی از درزان قدر ت ند اندامهای آسی ديده شديد باهوسایله خاصایت زنحصر به فرد سلولهای بنیادی را ايجاد کارده اسات )9 11 و 11(. که در اين باین سالولهاای بنیاادی زاانیای ی )MSCs( سلولهای با قابلیات کاربردهاای درزاانی و ترزی ای باا بارای بافتهای آسی دياده زایباشاند کاه شاازل درزاان AKI نیاا زیشود )19 و 19(. ه چنین زحققان دريافتند که MSCs ياک تعداد از فاکتورهايی که بهعنوان فاکتورهای زحافظت کننده کلیه شناخته زیشوند را ترشح زیکنند و بدين وسیله زکانینامهاای پاراکرين و اندوکرين را ايجاد زیکند که احت ا از ه ین طرياق سلولهای بنیادی زاانیی ی اثارات تحرياک کنناده ترزی ای را اع ال زیکنند )14 15 و 16(. تعدادی از اين فاکتورهاا شاازل فاکتور رشد اپیدرزال (EGF( فاکتور رشد هپاتوسایت (HGF( فاکتور رشد شبه اننولین- 1 (IGF-1( فااکتور رشاد انادوتلیال رگی (VEGF( و غیره زیبااشاند )17 و 18(. ايان فاکتورهاای بیواکتیو زوج سرکوب سینتم اي نی زوضعی زهاار فیباروز و آپا اپتوز افا اايش (Angogenesis) و تحرياک تکثیا ر و ت ا ايا زیشوند )19(. چندين زطالعه توسط فاکتورهای رشد پلی پپتید در ح ايت از ترزیم کلیوی انجاام شاده اسات. در ياک زطالعاه زحیط کیت زفید medium( )Conditioned را از سالولهاای بنیاادی زیاتق شاده از زغاا اساتخوان زاوش جداساازی و باه زوشهاای دارای AKI القاا شاده باا (Cisplatin) تارياق شاد زیاهده کردناد کاه medium) (Conditioned بهباود دهناده ع لکرد کلیوی افاايش دهنده تکثیر سلولی توباو ر و زحادود کننده آپوپتوزيس سلولهای کلیاوی زایباشاند )15(. Togel و ه کارانش )91( نیا زعتقدند سلول بنیاادی زاانیای ی ز کان است در حفاظت از توبول کلیاوی شارکات کناد بادون ايانکاه بهطورزنتقی ی در ترزیم توبول دخالت کند. آنها نتیجه گرفتند تاريق سلولهاای بنیاادی زاانیای ی زایتواناد فااکتاور رشاد هپاتوسیت )HGF( فااکتاور رشاد انادوتلیال رگای )VEGF( و فاکتور رشد شبه اننولین 1 )IGF-1( را ترشح کند که زایتواناد داخل زوير های ريا آسی ديده جايگاين شود و آپوپتاوزيس را زهار کند. اين يک جنبه زهم از زحاافظات القاا شاده توساط MSC در برابااار( ischemia/reperfusion ( ARF و AKI از طريق ع ل پاراکرين زیباشد. شناسايی فاکتورهای protective خاص ترشاح شاده باهوسایله MSCs باا اساتفاده از روشهاای ژنوزیک يا پروتئوزیک ز کن است فرصتهاايی را بارای کیا راههای درزانی جديد و توسعه درزاانهاای زولکاولی و دارويای جديد فراهم آورد )91(. توانايی کلیهها بارای تغلای و زتاابولیاه زاواد شای یايی باعا زیشود کلیهها بهطور ويژهای زناتعد آسای توکنایک باشاند. آنتاای بیوتیااک جنتازاينااین از خااانواده آنتاایبیوتیااکهااای آزینوگلیکوزيد زیباشد که بهطاور وسایعی در درزاان اناواعی از عفونتها که توسط باکتریهای گارم زنفای و )Endocarditis( ايجاد زیشوند باهکاار زایرود. باا ايانحاال ارزش درزاانی آن بهوسیله نفروتوکنینتی زحدود زیشود و ايان اتفاا در 91 تاا 04

3 91 درصاد بی اارانی کاه جنتازايناین را دريافات کاردهاناد ر 951 گرم استفاده گرديد. يک گروه ششتايی از زوشها بهعنوان زایدهاد )99 و 99(. از ايان جهات بارای سااخت زادلهاای نفروتوکنینتی در زطالعات کیت سلول و حیوانات آززايیگاهی استفاده زیشود )94 95 و 96(. نفروتوکنیناتی جنتازايناین توسط آسی توبو ر پروکنی ال و زوال ع لکردی کلیه شناخته زیشود و زنجر به آپوپتوزيس نکروز و اتناا توباو ر زایشاود )99(. در اين زطالعه سعی شده است با استفاده از نفروتوکنیک شناخته شده بهناام جنتازايناین ابتادا زادل تايیاد شادهای از بی اری حاد کلیوی ساخته شود و سپس با تی ار حیوانات بی اار با زحیط کیت زفید حاصال از سالولهاای بنیاادی زاانیای ی medium( (MSCs - conditioned چگاونگی تااثیرات ايان زاده بر روند بی مواد و روشها اری حاد در کلیه زورد بررسی قرار گیرد. حیوانات: در اين زطالعاه تجربای از رت باالر نار ناژاد ويناتار rat( )wistar که در اتا حیوانات دانیاگاه خاوارززی نگاهداری شده بودند استفاده شد. رتها در اتا حیوانات با دزاای کنتارل شده 95±9 سانتیگاراد و دوره ناوری 19 سااعت روشانايی و 19 ساعت تااريکی نگاهداری شادند. آب و غاذای کاافی ه اواره در دسترس آنها قرار داشت. آززايیات روی ت ام گاروههاای زاورد بررسی در شرايط کازال يکنان و زطابق اصول اخالقای کاار باا حیوانات آززايیگاهی صورت گرفت. تهیه محیط کشت مفیدد حاصدل از سدلولهدای بنیدادی مزانشدیمی انسدانی Medium) :(hmsc - Conditioned بعد از اينکه سلولهای بنیادی زاانیی ی کازال سطح فالسک را پرکردناد 91 زیلایلیتار زحایط کیات تاازه Cat ( α-mem )No ,alpha MEM,Gibco حاااوی 11 درصااد ساارمگاااوی جنیناای serum:fbs( ()Fetal bovine Cat )No.SH ,Thermo Scientific,USA و 1 درصااد پنی سیلین و استرپتوزايناین No ,Gibco( )Cat بهزدت 48 ساعت در دزاای 97 درجاه ساانتی گاراد و 5 Co2 درصد برروی سلولها انکوبه شد. با ات ام ززان انکوباسیون زحیط رويی سلولها جهت تی ار حیوانات زاورد اساتفاده قارار گرفات. برای هر کیلاوگرم وزن بادن زحایط کیات حاصال از سلول در نظر گرفته شد و به حیوانات تاريق گرديد. ساخت مدل حیوانی: جهت دستیابی به زدل حیوانی استاندارد از تعدادی زوش صحرايی نر نژاد وينتار با وزن تقريبای 181 تاا گروه کنترل در نظر گرفته شد کاه در ايان گاروه هایچ تاريقای صورت نگرفت. در گروه دوم ده عدد زوش قرار گرفات کاه بارای شاش روز زتاوالی باه آنهاا داروی جنتازايناین باا دوز 111 زیلیگرم بر کیلوگرم بهصورت داخل صفاقی تارياق شاد. بعاد از اين دوره هر روز يک زوش جهت خونگیاری از قلا باا تارياق زحلول کتازین و زايالزين بیهوش شاد و باا تهیاه سارم خاون جانور زیاان کراتینین )Cr( و نیتروژن اوره خون )BUN( حیوان بهزدت ده روز زورد بررسی قرار گرفت. ه چنین کلیاه حیواناات بارای زطالعاات هیناتولوژيکی خاار و در فرزاالین 11 درصاد نگهداری شدند. )بهدلیل برداشت کلیه در گروهها و زار و زیار حیوانات ن ونهگیری از اين حیوانات لحظاتی قبل از زر صورت گرفت(. درگروه زدل آززايیات با شش بار تکرار صورت پذيرفت. درنهايت با بررسی زیاان نیتروژن اوره خون (BUN) کاراتینین )Cr( و ننبت بین اين دو با ترين زیاان آنهاا را طای دوره ده روزه بهدست آورده و بهعنوان روز او اثر داروی جنتازاينین در نظر گرفته شد که نیان دهنده بییترين زیاان آسی جاندار در اين روز زیباشد و بهعنوان دوره حاد بی اری تعري زیشود )باا بررسای نتاايج در ايان زطالعاه روز ساوم باهعناوان روز او اثار جنتازاينین در نظر گرفته شد(. تیمار حیوانات دارای آسیب حداد کلیدوی بدا اسدتفاده از محیط کشت مفید حاصل سلولهای بنیدادی مزانشدیمی medium( :(MSCs-conditioned پس از ايجاد زدل حیاوانی استاندارد حیوانات به چهار گروه 6 تايی تقنیم شدند. گروه اول بهعنوان کنترل در نظر گرفتاه شاد کاه هایچ تاريقای در آنهاا صورت نگرفت و به گاروه دوم بارای ايجااد زادل نارساايی حااد کلیوی تنها جنتازاينین تاريق شد که ايان دو گاروه در بخاش زدل سازی توضیح داده شدند. گروه سوم بهعنوان گاروه تجربای در نظر گرفته شد. درگروه تجربی عالوه بر تارياق جنتازايناین 94 MSCs-conditioned medium ساااعت قباال از تاريااق جنتازاينین و در سه روز زتاوالی باهصاورت داخال صافاقی باه حیوانات تاريق شد. درگروه چهارم که شم نازیده شد حیواناات جنتازايناین و کنتارل زاديا )زحایط کیات فاقاد فاکتورهاای ترشحی( را نیا زانند گروه قبل بهصورت داخل صفاقی 94 ساعت قبل از تاريق جنتازاينین و در سه روز زتاوالی دريافات کردناد. شاايان رکار اسات در ايان زطالعاه در ت اام گاروههاايی کاه جنتازاينین دريافت کردهاند عالوه بر بررسی در روز سوم پس از 01

4 تاريق که روز او تاثیر جنتازاينین بهحناب زیآيد روز پنجم و هیتم پس از تاريق جنتازاينین نیا زورد زطالعه قرار گرفت )در ه ه گروهها آززايیی شش بار تکرار صورت پذيرفت(. مطالعات بافتشناسی: ن وناههاای باافتی زطاابق روشهاای زع ول پردازش شده و پس از قال گیری با پارافین برشهای با ضخازت 4 تا 6 زیکرون از آنها تهیه شد. اساليدهای تهیه شده با روش ه اتوکنایلین _ ائاوزين رنا آزیاای و ساپس زیااان آسی بافتی با استفاده از استانداردهای تهیه شاده در زطالعاات قبلی زطابق با جدول ش اره 1 9 و 9 ک ی شاد و زاورد بررسای قرار گرفت. درجه آسی توبولی جدول 1: نحوه ازتیازدهی برای تعیین درجه تورم حاد سلولی و نکروز لولههای ادراری سلولهای جدار لولههای ادرای سالم بوده و هیچگونه تورم حادسلولی و نکروز ديده ن یشود در ک تر از يک سوم لولههای ش ارش شده تورم حاد سلولی و نکروز لولههای ادراری ديده زیشود. بین يک سوم تا دو سوم لولههای ش ارش شده تورم حاد سلولی و نکروز لولههای ادراری ديده زیشود. در بییتر از دو سوم لولههای ش ارش شده تورم حادسلولی ونکروز لوله های ادراری ديده زیشود *** در هر زقطع از کلیهها 151 لوله بهطور تصادفی ش ارش شدند. کنت هیالین جدول 9: نحوه ارزيابی کنت هیالین هیچ کنتی داخل لولهها ديده ن یشود. در ک تر از يک سوم لولهها کنت وجود دارد. در يک سوم تا دو سوم لولهها کنت وجود دارد. در بییتر از دو سوم لولهها کنت وجود دارد. *** برای ارزيابی کنت هیالن 11 شان زیکروسکوپی ش ارش گرديد. تج ع سلولهای آزاسی جدول 9 : نحوه ارزيابی تج ع سلولهای آزاسی هیچ تج عی از سلولهای آزاسی در فضای بین توبولی ديده ن یشود. در ک تر از يک سوم فضای بین توبولی تج ع سلولهای آزاسی تک هنته ديده زیشود بین يک سوم تا دو سوم فضای بین توبولی تج ع سلولهای تک هنته ديده زیشود در بییتر از دو سوم فضای بین توبولی تج ع سلول های تک هنتهای وجود دارد. *** برای ارزيابی تج ع سلولهای آزاسی 11 شان زیکروسکوپی ش ارش گرديد آزمونهای بیوشیمیایی سرم: پس از خونگیری و تهیه سارم حیوانات زورد نظار زیااان Cr )کاراتینین( و BUN )نیتاروژون اوره خون( که از زهامتارين زارکرهاای سارزی آسای کلیاوی زیباشند با استفاده از کیتهای تولیدی شرکت زينتشای ی و دستگاه آنالیار اندازهگیری شدند. آنالیزهدای آمداری: نتاايج باهدسات ازااده توساط نارم افااار نتایج صحت القای مدل زطالعات داروشناختی روی بی اریهای کلیه نیاززند دستیابی به زاادلهااای حیااوانی زناساا زاایباشااد کااه زقلااد شاارايط پاتوفیايولوژيک بی اری باشند. از ايانرو در ايان زطالعاه جهات اط ینان از صحت القای زدل آززايیی زطابق آنچه در روش کار ارايه ن وديم طراحی شد. نتايج پس از القای زدل نیاان داد کاه تاريق جنتازاينین با دوز 111 زیلیگارم بار کیلاوگرم در ياک دوره شش روزه باع افااايش زعنایدار )1/111 P( کاراتینین Post Hoc و آززون واريانس ياکطرفاه باا تنات SPSS.16 SE) آنالیا و بهصورت P( )1/15 و با سطح زعنیداری Tukey ± (Mean بیان شدند. 05

5 هیالین در گروه زدل )گروه دريافت کننده جنتازاينین( ننابت به گروه کنترل زیباشد )شکلC:1 D(. درحالی که بافت کلیاه در گروه کنترل کازال طبیعی بهنظر زیرسید و هیچ آسیبی ديده ن یشد )شکلB:1 A(. با توجه به زطالعاات گذشاته در القاای زاادل حاااد کلیااوی نتااايج زااا نیااان دادنااد اياان زیاااان از داروی جنتازايناین زایتواناد زادل زناسابی از بی ااری حااد کلیوی را القا کند. بهعبارتی يافتاههاای زاا زوياد صاحت روناد زا دلسا ازی انجا ام شا ده بودنااد از ايا نرو با ا القا ای بی ا اری بااهروش آززااوده شااده در زاادلسااازی و تی ااار حیوانااات بااا hmsc conditioned medium تااثیرآن بار بی ااری حااد کلیوی بررسی شد. )ن ودار 1 ( و نیتروژن اوره خاون )ن اودار 9 ( در روزهاای ساوم و پنجم پس از تاريق جنتازاينین ننابت باه گاروه کنتارل شاده است. ه چنین کراتینین درروز هیتم پس از تاريق جنتازاينین دارای سطح زعنی دار )1015 P( ننبت به گروه کنترل زیباشد )ن ودار 1 (. زم به رکر است با درنظار گارفتن باا ترين زقاادير BUN )نیتروژن اوره خون( کراتینین و ننبت بین ايان دو طای دوره ده روزه بررسی پس ازتارياق جنتازايناین روز ساوم روز او اثر جنتازاينین برحیوان زیباشاد کاه باهعناوان دوره حااد بی اری در نظر گرفته شد. نتايج حاصل از زارکرهای بیوشی یايی خون نیان دهناده القاای آسی بودند. زطالعاات بافاتشناسای نیاا حااکی از تاورم حااد سلولی نکروز لولههای ادراری تج ع سلولهای آزاسی و کنات ن ودار 1 : زیاان تغییرات کراتینین )زیلیگرم بر دسیلیتر( سرم خون طی دوره ده روز پس از تاريق جنتازاينین ننبت به گروه کنترل: )1/15>p*( )***p<1/111( )**p<1/11( ) ن ودار 9 : زیاان تغییرات نیتروژن اوره )زیلیگرم بر دسیلیتر( سرم خون طی دوره ده روز پس از تاريق جنتازاينین ننبت به گروه کنترل: )1/15>p*( )***p<1/111( )**p<1/11( زم به رکراست با درنظر گرفتن با ترين زقادير BUN کراتینین و ننبت بین اين دو طی دوره ده روزه بررسی پس از تاريق جنتازاينین روزسوم روز او اثرجنتازاينین برحیوان زیباشد که بهعنوان دوره حاد بی اری در نظر گرفته شد.( 01

6 رن شکل 1 : بررسی صحت القای آسی حاد کلیوی بهوسیله آنالیا بافت شناسی کلیه حیوانات زورد آززايش. A وB : زیکروگراف نوری ازکلیه حیوانات گروه کنترل بافت کلیه در ق نت قیر )A( و زدو )B( کازال طبیعی بهنظر زیرسد و هیچگونه آسیبی زیاهده ن یشود. C وD : زیکروگراف نوری از بافت کلیه حیوانات گروه دريافت کننده جنتازاينین )زدل( نکروز لولههای ادراری )پیکان سیاه( تورم حاد سلولی )پیکان آبی( و تج ع سلولهای آزاسی )پیکان نارنجی( در بخش قیری کلیه )شکل C( و ه چنین کنت هیالین )پیکان زرد( در بخش زدو کلیه )شکل D( بهوضوح قابل زیاهده زیباشد. آزیای ه اتوکنیلین-ائوزين باگن ايی 411. بررسی اثر محیط کشت مفید حاصل از سلولهای بنیدادی درگروه تجربی دارای کاهش باا ساطح زعنایداری )1/111>p( مزانشددیمی انسددانی) medium (hmsc -conditioned ننبت به گروه جنتازاينین و شم زیباشد )ن ودار 9 (. برمیزان نیتدروژون اوره خدون )BUN( وکدراتینی )Cr( سرمی بعد از تیمار با جنتامایسی بررسی اثر محیط کشت مفید حاصل از سلولهای بنیدادی مزانشیم انسانی بر تغییرات بافتی کلیه بعدد از تیمدار بدا بررسای در گاروههاای آززايیای در روز ساوم پاس از تارياق جنتازاينین نیان داد گرچاه در گاروه تجربای )جنتازايناین زحیط کیت زفید( کاهش اندکی در زیاان Cr سرم خون ننبت به گروه زدل )جنتازاينین( و شم صورت پذيرفته است. ازا فاقد سطح زعنیدار زیباشد )ن اودار 9 (. تغییارات BUN نیاا در روز سوم زطالعه گويای اين زطل زیباشد )ن اودار 4 (. درروز پانجم بعد ازتاريق جنتازاينین نیا هیچ کااهش زعنایداری در زیااان BUN وCr سرم خون ننبت باه گاروه زادل وشام دياده نیاد )ن ودار 9 و 4(. ه چنین زطالعاه در روز هیاتم پاس از تارياق جنتازاينین در چهار گروه آززايیی نیان داد زیااان BUN در گروه تجربی ننبت به گروه جنتازاينین و شم بادون هایچگوناه تغییر زعنیدار زی باشد )ن ودار 4 (. ازا زیاان کراتینین سرم خون جنتامایسی ن ونههای بافتی زطابق روشهای زع ول پردازش شده و پاس از قال گیری با پارافین برشهايی باا ضاخازت 4 تاا 6 زیکارون از آنها تهیه شد. اساليدهای تهیه شاده باا روش ه اتوکنایلین و ائوزين رن آزیای شده و زورد بررسی قرار گرفتند. زیااان تاورم حاد سلولی نکروز لوله های ادراری تج ع سلولهاای آزاسای و کنت هیالین زطابق جداول 9 1 و 9 ک ی شد. برطبق زطالعات کلیه سالم درگروه کنترل بدون هیچگونه آسی بافتی در ت ام قن ت هاای نفارون شاازل گلاوزرول لولاههاای پروکنای ال و ديناتال در ناحیاه قیاری _ زرکاای زایباشاد )شکل 1 : A(. B بررسیهای بافاتشناسای در روز ساوم پاس از 00

7 BUN mg/dl Cr mg/dl بررسی اثر محیط کشت حاصل از سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی بر... تاريق جنتازاينین درگروههای آززايیی نیان زایدهاد کاه در گروه تجربی برخالف انتظار تورم حاد سلولی و نکروز لولاههاای ادراری دارای افاايش زعنیدار )1/111>p( ننبت به گروه زادل و شم زیباشد. در حالیکه تج ع سلولهای آزاسی در گروهه یا آززايیی در اين روز تغییر چندانی را نیان ن یدهد. ازاا کنات هیاالین در گاروه تجربای دارای کااهش زعنای دار )1/111>p( ننبت به گروه جنتازاينین و شم زیباشد )ن ودار 5 و شکل 9 (. *** *** ** *** *** ** Control Genta Genta + Medium Genta+CM *** *** ن ودار 9 : بررسی اثر hmsc-cm برزیاان تغییرات کراتینین )زیلیگرم بر دسیلیتر( در روزهای سوم پنجم و هیتم پس از تاريق جنتازاينین: hmsc CM فقط در روز هیتم پس از تاريق جنتازاينین سب کاهش کراتینین باسطح زعنیداری )1/111>p ( درگروه تجربی ننبت به گروه جنتازاينین و شم شده است. درروزهای سوم وپنجم هیچ کاهش زعنیداری درگروه تجربی ننبت به گروه شم وکنترل زیاهده ن یشود. { )**p<1/11(و)***p<1/111( سطح زعنیداری گروههای آززايیی را ننبت به گروه کنترل نیان زیدهد.} *** *** *** *** *** *** Control Genta Genta+Medium Genta+CM *** *** * ن ودار 4 : بررسی اثر hmsc-cm برزیاان تغییرات نیتروژن اوره )زیلیگرم بر دسیلیتر( در روزهای سوم پنجم و هیتم پس از تاريق جنتازاينین: hmsc CM درهیچکدام از روزهای سوم پنجم و هیتم پس از تاريق جنتازاينین زنجر به کاهش زعنیداری درسطح BUN )زیلیگرم بر دسیلیتر( سرم خون در گروه تجربی ننبت به گروه جنتازاينین و شم نیده است.} )1/15>p*( )1/111>p***( سطح زعنیداری گروههای آززايیی را ننبت به گروه کنترل نیان زیدهد.} 05

8 ن ودار 5 : بررسی اثر hmsc-cm بر تغییرات بافتی کلیه در روز سوم پس از تاريق جنتازاينین: در گروه تجربی برخالف انتظار تورم حاد سلولی و نکروز لولههای ادراری دارای افاايش زعنیدار )1/111>p***( ننبت به گروه زدل وشم زیباشد. درحالیکه تج ع سلولهای آزاسی در گروههای آززايیی در اين روز تغییر چندانی را نیان ن یدهد. ازا کنت هیالین در گروه تجربی دارای کاهش زعنیدار )1/111>p***( ننبت به گروه جنتازاينین و شم زیباشد. A B C D شکل 9: تاثیرCM hmsc- برتغییرات بافتی کلیه در حیوانات زدل آسی حاد کلیوی القا شده با جنتازاينین در روز سوم زطالعه. A وB : فتوزیکروگراف از بافت کلیه درگروه جنتازاينین تی ار نیده با hmsc- CM نکروز لولههای ادراری تورم حاد سلولی و تج ع سلولهای آزاسی در بخش قیر کلیه )A( و ه چنین کنت هیالین در قن ت زدو )B( در اين روز زیهود زیباشد. C و D: فتوزیکروگراف از بخش قیر و زدو بافت کلیه در گروه تجربی که تنها نیاندهنده کاهش زعنیداری در زیاان کنت هیالین در بخش زدو حاد سلولی )پیکان آبی( تج ع سلولهای آزاسی )پیکان نارنجی( و کنت هیالین )پیکان زرد( {. رن در روز سوم زطالعه زی باشد. }نکروز لولههای ادراری )پیکان سیاه( تورم آزیای ه اتوکنیلین-ائوزين باگن ايی

9 Tissue injury score بررسی اثر محیط کشت حاصل از سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی بر... بررسیهای بافتشناسی در روز پنجم پس از تاريق جنتازاينین در گروههای آززايیی نیان زیدهد که تورم حاد سلولی نکاروز لولاههاای ادراری وکنات هیاالین در گاروه تجربای ننابت باه گروههای زدل و شم با سطح زعنایداری )1/1111>p( کااهش يافته است. درحالیکه تج ع سالولهاای آزاسای در گاروههاای آززايیی در اين روز هیچ گونه تغییر زعنیدار را نیان ن ایدهاد )ن ودار 6 و شکل 9(. Acute cell swelling Necrosis tubles Aggregation inflammatory cells Hyalin cast ن ودار 6 : بررسی اثر hmsc-cm بر تغییرات بافتی کلیه در روز پنجم پس از تاريق جنتازاينین: تاورم حااد سالولی نکاروز لولاههاای ادراری و کنات هیالین در گروه تجربی ننبت به گروههای زدل و شم با سطح زعنایداری )1/111>p***( کااهش يافتاه اسات. ازاا درتج اع سالولهاای آزاسای در گروههای آززايیی در اين روز هیچگونه تغییر زعنیداری زیاهده نیده است. A B C D شکل 9 : تاثیرCM hmsc- برتغییرات بافتی کلیه در حیوانات زدل آسی حاد کلیوی القاء شده با جنتازاينین در روز پنجم زطالعه. وB : A فتوزیکروگراف از بافت کلیه درگروه جنتازاينین تی ار نیده با hmsc- CM نکروز لولههای ادراری تورم حاد سلولی و تج ع سلولهای آزاسی در بخش قیر کلیه )A( و ه چنین کنت هیالین در قن ت زدو )B( زیهود زیباشد. C وD : فتوزیکروگراف از بخش قیر و زدو بافت کلیه گروه تجربی را نیان زیدهد که زیتوان کاهش قابل زالحظهای در زیاان تورم حاد سلولی و نکروز لولههای ادراری در بخش قیر کلیه وکنت هیالین در لولههای ج ع کننده ادراری ننبت به گروه زدل در روز پنجم زطالعه زیاهده کرد. { نکروز لولههای ادراری )پیکان سیاه( تورم حاد سلولی )پیکان آبی( تج ع سلولهای آزاسی )پیکان نارنجی( و کنت هیالین )پیکان زرد( {. رن آزیای ه اتوکنیلین-ائوزين باگن ايی

10 در روز هیتم پس از تاريق جنتازاينین نیا تاورم حااد سالولی نکروز لولههای ادراری تج ع سلولهای آزاسی و کنت هیاالین با سطح زعنیداری )1/111>p( در گروه تجربی ننبت باه گاروه زدل و شم کاهش يافته است )ن ودار 7 و شکل 4(. باا توجاه باه اين نتايج در روز سوم پس از تاريق جنتازاينین در گروه تجربی بهبودی قابل توجه در بافت کلیه زیاهده نیده است. ازاا بافات کلیه در روزهای پنجم و هیتم پاس از تارياق جنتازايناین در گروه تجربی ننبت به گروه جنتازاينین و شم ترزیم يافته است. ن ودار 7 : بررسی اثر hmsc-cm بر تغییرات بافتی کلیه در روز هیتم پس از تاريق جنتا زاينین: تورم حااد سالولی نکاروز لولاههاای ادراری تج اع سلولهای آزاسی کنت هیالین با سطح زعنیداری )1/111>p***( در گروه تجربی ننبت به گروه زدل و شم کاهش يافته است. A B C D شکل 4 : تاثیرCM hmsc- برتغییرات بافتی کلیه در حیوانات زدل آسی حاد کلیوی القا شده با جنتازاينین در روز هیتم زطالعه. : وB A فتوزیکروگراف از بافت کلیه درگروه جنتازاينین تی ار نیده با hmsc- CM نکروز لولههای ادراری تورم حاد سلولی و تج ع سلولهای آزاسی در بخش قیر کلیه )A( و ه چنین کنت هیالین در قن ت زدو )B( در روز هیتم زطالعه زیهود زیباشد. C و D: فتوزیکروگراف از بخش قیر و زدو بافت کلیه گروه تجربی را نیان زیدهد که زیتوان کاهش زعنیدار در ت ام زعیارهای آسی بافتی را در اين گروه ننبت به گروه زدل در روز زورد بررسی زیاهده کرد. { نکروز لولههای ادراری )پیکان سیاه( تورم حاد سلولی )پیکان آبی( تج ع سلولهای آزاسی )پیکان نارنجی( و کنت هیالین )پیکان زرد( {. رن آزیای ه اتوکنیلین-ائوزين باگن ايی

11 بحث س یت حاد کلیوی ناشی از زصرف جنتازاينین دربی اران زبتال به انواعی از عفونتها بهعنوان زثال عفونت های چی ی ريوی و رودهای ازج له عوارض جانبی زهم اين دارو زیباشاد کاه باعا زحدوديت زصارف آن زای شاود )99(. علایرغام اثارات سا ی ناخوشايند جنتازاينین بهدلیل ثبات شی یايی آنتی بیوتیکهای آزینوگلیکوزياد اثارات ضاد باکترياايی شاديد کااربرد تاوام باا آنتیبیوتیکهای ديگر زقاوزت کم و هاينه درزانی انادک بارای بی اران هنوز هم بهطور وسیعی بهکار زیروند )97(. در اين زطالعه برطبق تعدادی تحقیقات و زطالعات گذشته انتظار زیرفت که زحیط کیت حاصل از سلولهای بنیادی زاانیای ی اثرات زحافظتی در برابر س یت حاد کلیوی ناشی از جنتازاينین درزدل حیوانی زوش صحرايی داشته باشد. با اينکه زحیط کیت حاصل از سلولهای بنیادی زاانیی ی زوجا تارزیم باافتی در روزهای پنجم و هیتم پس از تاريق جنتازاينین درگروه تجربی شدند. ازا تقريبا هیچ تاثیر زعنایداری در کااهش بیوزارکرهاای شی یای سرم خون در روزهای زورد بررسی نداشتند. ازا تارزیم بافت کلیوی در روزهای زورد نظر در گاروه تجربای را زایتاوان نیانه اثارات زثبات و تارزیمکننادگی زحایط کیات حاصال از سلولهای بنیادی زاانیی ی بر بافت کلیاه دارای نارساايی حااد کلیوی ناشی از جنتازاينین داننت. بهعالوه نیان داده شاد کاه زحیط کیت فاقد فاکتورهای ترشحی اين سلولها از سلولهاای کلیه در برابر جنتازاينین زحافظت ن یکنند. آزینوگلیکوزيدها زتابولیاه ن یشوند و اساسا توسط فیلتراسایون گلوزرولی دفع زیشوند. بهطور ننبی زقاادير باا از دوز تارياق داخل رگی )حدود 11 درصد( درکورتکس کلیه تج ع زایياباد. درحالیکه توزيع ک ی از آزینو گلیکوزيدها داخل بافتهای ديگر گاارش شده است )98(. در کل زن وزیت توبو ر جنتازايناین بهدوصورت ظااهر زایشاود ياا جنتازايناین زوجا زار در سلولهای اپیتلیال توبو ر زی شود که ه راه با تولید ترکیباات التهابی زی باشد يا باع اختالل در ع لکارد ترکیباات کلیادی سلولی که درگیار در نقال وانتقاال آب و زاواد زحلاول هناتند زایشاود )99 و 91(. در واقاع جنتازايناین باا القاا نکاروز و آپوپتوزيس در سلولهاای اپایتلیاال توباو ر زنجار باه کااهش ع لکرد توبو ر و نقص در بازجذب زايع و الکترولیتها زیگردد. ايان رخاداد گرچاه زنجار باه هایچ کااهش زناتقی ی در GFR )ننبت فیلتراسیون گلوزرولی( ن یشود. ازا بهطور زنتقیم از طريق فعالسازی زکانینم TGF )ضاري تصافیه گلاوزرولی( زوج کاهش در سطوح GFR زیشود. از آنجا که فرآوردهاای زايد زتابولیک برای دفع به فیلتراسیون گلوزرولی وابنته هنتند. هر گاه GFR به زیاان 51 درصد کاهش يابد. کلیهها به صاورت گذرا فقط نی ی از کراتینین را تصفیه و دفع زایکنناد. بناابراين کراتینین در زايعات بدن تج ع يافته و غلظت پالس ايی آن باا زیرود. در بی اران زبتال به بی اریهای کلیوی که دچار کااهش زيادی در GFR هنتند غلظت اوره پالس ا بهطور بارزی افاايش زیيابد. به ايان ترتیا جنتازايناین باا کااهش GFR زوجا افاايش کراتینین و BUN درخون زیشود )91(. تعدادی از زطالعات پییاین زیاخص ن اوده اسات کاه تجاويا فاکتورهای رشد قبل و بعد از آسی کلیوی در زدلهای جانوری زوج بهبود آسی و افاايش ترزیم کلیوی زایشاود. علات آن زیتواند اثرات آنتی آپوپتوتیاک Prolifrative و پروآنژيوژنیاک آنهاا باشاد )99 و 99 (. اثباات شاده اسات کاه زحایط کیات حاصال از سالول هاای بنیاادی زاانیایم انناانی فعاال کنناده زنایر سایگنالین PI3K-AKT زایباشاد کاه کااهش دهناده آپوپتااوزيس و افاااايش دهنااده بقااا ساالولهااای اپیتلیااال توبا و ر پرکنای ال زایباشا د )94(. باهعناوان زثاال فااکتور رشد هپاتوسیت فااکتور رشاد انادوتلیال رگای EGF IGF-1 پروتئین phoshatidylinositol-3-kinase را فنافريله و فعاال زایکنناد کاه آن نیااAKT را فنافريله و فعاال زایکناد AKTسیگنالهای بقا را توسط چناد زکانینام زناتقل فاراهم زیکناد )95 96 و 97(. درايان زطالعاه زاا فارض کارديم اگار فاکتورهای زم برای ترزیم در هنگام بروز آسی در زحل حضور داشته باشند بییتر زیتوانند زفید واقاع شاوند. از طارف ديگار تاريق زحیط کیت زفید پیش از تارياق جنتازايناین احت اا زایتوانا د زوجا افا اايش پا روتئینها ای آنتایآپوپتوتیا ک و پروآنژيوژنیک ننبت به پروآپوپتوتیک و آنتیآنژيوژنیک شود کاه ز کن است اين افاايش که از قبل ايجاد شده در هنگاام تارياق جنتازاينین زفید واقع شود و از اثرات س ی آن بکاهد. در ززان حاضر زیخص ن یباشد که چطور فااکتورهاای ترشاح شده بهوسیله سلولهای بنیادی زاانیی ی زیتوانناد زحاافظات کلیوی را ارائه دهند. شناسايی و پا يش ايان فاا کتورهاا زنایر جدياادی را باارای درزااان داروياای AKI فااراهم زاای آورد و بدينوسیله از تاريق يک حجم زياادی از MSC-conditioned medium جلوگیری زایکناد )98(. باا اينحاال باا وجاود ه اه 09

12 اطالعاتی که در جريان زطالعات بهدست آزده هنوز ن ایتاوانیم يک نتیجه نهايی بهدست آوريم. که آيا اثرات سلولهاای بنیاادی زاانیی ی درگیر در تر زیم کلیه بهطور زنتقیم بهوسایله ت اايا سلولی زی باشند يا ناشی از ازتاا بین اين سلولها و سلولهای آسی ديده است. يا اينکه بهطاور غیار زناتقیم توساط اثارات پاراکرينی- اندوکرينی زتنو ايجاد شاده باهوسایله سالولهاای بنیادی زاانیی ی روی سلولهای توباو ر زایباشاد )99 41 و 41(. اگر اثرات زحافظتی بهواسطه ع لکرد اندوکرينی سلولهاا باشد تاريق خاود سالولهاا ضاروری باهنظار ن ایرساد بلکاه فاکتورهای ترشحی آنها هنتند که بايد هنگام آسی در زحال حاضر باشند. نتايج حاصل از اين زطالعه زانعکس کنناده اثارات زحافظتی سلولهای بنیاادی زاانیای ی باه واساطه ع الکارد اندوکرينی آنها زیباشد )15( که با تعدادی از زطالعات پییاین زطابقت دارد. به گوناه ای کاه Hui Zhang و ه کاارانش )49( تحت يک زطالعه بیان کردند فاکتورهاای سالولهاای بنیاادی و فاکتورهای تحريک کننده کلنی زاکروفاژ- گرانولوسایت باهطاور جائی زوج تحريک سلولهای زغاا اساتخوان و ايجااد اثارات درزانی در نکروز توبو ر حاد ناشی از جنتازاينین زایشاوند. در پژوهیاای ديگاار Parekkadan و ه کااارانش )49( حضااور فاااکتورهااای رشااد IGF-1 HGF VEGF و زولکااولهااای آنتایآپوپتوتیاک ديگار را در MSC-Conditioned medium آشکار کردند و نیان دادند اين زولکولهای بیواکتیاو زنجار باه افاااايش درصااد بقااا حیوانااات دريافاات کننااده زاایگااردد. گرچااااه Gheisari و ه کااااارانش )44( اثاااارات درزااااانی Conditioned media حاصل از سلولهای بنیاادی زاانیای ی زغا استخوان زاوش (MSC) و سالولهاای بنیاادی ساوزاتیک طناب خونی نافی اننانی (USSC) را بار نارساايی حااد کلیاوی زورد بررسی قرار دادند. در اين زطالعه هیچ اثر سودزندی بارای Conditioned media زیاتق شاده از ايان دو ناو سالول بار بهبودی نفروپاتی القا شده با سیس پالتین زیاهده نید )44(. نتیجه گیری نتايج تحقیق حاضر نیان داد که تی ار با زحیط کیت حاصال از سلولهای بنیادی زاانیی ی انناانی گرچاه زوجا کااهش در بیوزارکرهای شی یايی سرم خون در کلیاه دارای نارساايی حااد کلیوی با جنتازاينین )به جا در کراتینین سرم خون روزهیتم( ن یشود ازاا تقريباا باعا بهباودی بافات کلیاه در تعادادی از روزهای زورد بررسی در کلیه واجد آسای جنتازاينین زیشود. تشكر و قدرداني باافتی ناشای از القاا زولفین زرات سپاس خود را از زح ات فراوان خانم سارا طالا گلنتانی و خانم زرضیه قاس ی در انجام اين پروژه ابراز زیدارند. منابع 1. Pavenstadt H, Kriz W, Kretzler M. Cell biology of the glomerularpodocyte. Physiol Rev 2003; 83(1): Guyton A, Hall J. Test book of Medical physiology, 11th Ed, Volume1, Translated by: Farrokh shadan, M.D. Tehran, Chehr co, Bagshaw SM. Short- and long-term survival after acute kidney injury.nephrol Dial Transplant. 2008; 23: Humes HD, Szczypka MS. Advances in cell therapy for renal failure.transplimmunol 2004; 12(3-4): Patschan D, Plotkin M, Goligorsky MS. Therapeutic use of stem andendothelial progenitor cells in acute renal injury: caira. CurrOpinPharmacol 2006; 6: Kribben A, Edelstein CL, Schrier RW: Pathophysiology of acute renal failure. J Nephrol. 1999; 12(suppl 2): S142 S Schrier RW, Wang W, Poole B, Mitra A. Acute renal failure: definitions, diagnosis, pathogenesis, and therapy. J Clin Invest. 2004; 114(1): Brivet FG, Kleinknecht DJ, Loirat P, Landais PJ. Acute renal failure in intensive care units causes, outcome, and prognostic factors of hospitalmortality; a prospective, multicenter study. French Study Group on Acute Renal Failure.Crit Care Med. 1996; 24: Laflamme MA, Murry CE. Regenerating the heart. Nat Biotechnol. 2005; 23(7): Lindvall O, Kokaia Z. Stem cells for the treatment of neurologicaldisorders. Nature. 2006; 441(7097): Aejaz HM, Aleem AK, Parveen N, et al. Stem cell therapy Presentstatus. Transplant Proc. 2007; 39: Brooke G, Cooka M, Blair C, Han R, et al. Therapeutic applications of mesenchymal stromal cells.semin Cell DevBiol. 2007; 18(6):

13 13. Bussolati B, Hauser PV, Carvalhosa R, Camussi G. Contribution ofstem cells to kidney repair. Curr Stem Cell Res Ther. 2009; 4(1): Togel F, Weiss K, Yang Y, Hu Z, et al. Vasculotropic, paracrine actions of infused mesenchymal stem cells are important to the recovery from acute kidney injury. Am J Physiol Renal Physiol. 2007; 292: F1626-F B Bi, Schmitt R, Israilova M, Nishio H, et al. Stromal Cells Protect against Acute Tubular Injury via anendocrine Effect. J Am SocNephrol. 2007; 18(9): Humphreys BD, Duffield JD, Bonventre JV. Renalstem cells in recovery from acute kidney injury. MinervaUrologica e Nefrologica. 2006; 58: Fervenza FC, Tsao T, Rabkin R. Response of theintrarenal insulin-like growth factor-i axis to acute ischemicinjury and treatment with growth hormone and epidermalgrowth factor. Kidney Int. 1996; 49(2): Hise MK, L Li, Mantzouris N, et al. Differentialexpression of insulin-like growth factor system during renalinjury and hypertrophy. Am. J. Physiol. 269 (Renal Fluid Electrolyte Physiol ; F817 F Caplan AI, Dennis JE. Mesenchymal stem cells as trophic mediators. J Cell Biochem 2006; 98(5): Togel F, Hu Z, Weiss K, et al. Administered mesenchymal stem cells protect against ischemic acute renal failure through differentiationindependent mechanisms. Am J Physiol Renal Physiol 2005; 289:F31 F Julie A, William L. Stanford (eds), Stem Cells in Regenerative Medicine: Methods and protocols, vol. 482; 2009 Humana Press,a part of Springer Science+ Business Media. DIO: / Springerprotocols.com. 22. Chen LF, Kaye D. Current use for old antibacterial agents: polymyxins, rifamycins, and aminoglycosides. Infect Dis Clin North Am 2009; 23(4): Nakakuki M, Amasaki FY, Shinkawa T, Kudo M, et al. Protective effect of human ulinastatin against gentamicin-induced acute renal failure in rats. Fuji Central Research Laboratory, Mochida Pharmaceutical Co. Ltd., 722 Jimba-aza-Uenohara, Gotemba, Shizuoka 412, Japan. Can. J. Physiol. Pharmacol. 1996; 74: Laurent G, Carlier MB, Rollman B, et al. Mechanism aminoglycoside induced lysosomal phospholipidosis: in vitro and in vivo studieswith gentamicin and amikacin. BiochemPharmacol. 1982; 31(23): Laurent G, Kishore BK, Tulkens PM. Aminoglycoside-induced renalphospholipidosis and nephrotoxicity. BiochemPharmacol. 1990; 40: Kacew S, Bergeron MG. Pathogenic factors in aminoglycoside induced nephrotoxicity.nephrotoxicity.toxicollett. 1990; 51(3): Edson RS, Terrell CL. The aminoglycosides. Mayo ClinProc. 1999; 74(5): Nagai J, Takano M. Molecular aspects of renal handling of Aminoglycosides and strategies for preventing the nephrotoxicity. Drug Metab. Pharmacokineti. 2004: 19, Li J, Li QX, Xie XF, et al. Differential roles of dihydropyridine calcium antagonist nifedipine, nitrendipine and amlodipine on gentamicininduced renal tubular toxicity in rats. Eur J Pharmacol. 2009; 620: El Mouedden M, Laurent G, Mingeot-Leclercq MP, et al. Apoptosis in renal proximal tubules of rats treated with low doses of aminoglycosides. Antimicrob Agents Chemother2000; 44: Jose M, Lopez-N, Yaremi Q, Laura V, et al. New insights into the mechanism of aminoglycoside nephrotoxicity: an integrative point of view Kidney International. 2010; 79(1): 33 45; doi: /ki Hammerman MR. Growth factors and apoptosis in acute renal injury. Curr Opin Nephrol Hypertens. 1998; 7(4): Hammerman MR. New treatments for acute renal failure: growth factors and beyond. Curr Opin Nephrol Hypertens. 1997; 6: Kuwana H, Terada Y, Kobayashi T, Okado T, et al. The phosphoinositide-3 kinase gamma-akt pathway mediates renal tubular injury in cisplatin nephrotoxicity. Kidney Int. 2008; 73(4): Dai C, Yang J, Liu Y. Single injection of naked plasmid encoding hepatocyte growth factor prevents cell death and ameliorates acute renal failure in mice. J Am Soc Nephrol. 2002; 13: Logar CM, Brinkkoetter PT, Krofft RD, Pippin JW, et al. Darbepoetin alfa protects podocytes from apoptosis in vitro and in vivo. Kidney Int. 2007; 72: Amaravadi R, Thompson CB. The survival kinases Akt and Pim as potential pharmacological targets. J Clin Inves.t 2005; 115(10):

14 38. Fangming Lin. Renal repair: role of bone marrow stem cells-pediatrnephrol. 2008; 23: DOI /s Patrick C. Baer and Helmut Geiger-Renal repair: role of bone marrow stem cells-pediatrnephrol. 2008; 23: DOI /s Camargo FD, Finegold M, Goodell MA. Hematopoietic myelomonocytic cells are the major source of hepatocyte fusion partners. J Clin Invest. 2004; 113: Willenbring H, Bailey AS, Foster M, Akkari Y, et al. Myelomonocytic cells are sufficient for therapeutic cell fusion in liver. Nat Med. 2004; 10: Zhang Hui, Haitao Bai, Zhuwen Yi, Xiaojie He, et al. Effect of Stem Cell Factor and Granulocyte- Macrophage Colony-Stimulating Factor-Induced Bone Marrow Stem Cell Mobilization on Recovery from Acute Tubular Necrosis in Rats Renal Failure. 2012; 34(3); , Copyright Informa Healthcare USA,Inc.ISSN Xprint/ online.DOI: / X Parekkadan B, Van PD, Suganuma K, Carter EA, et al. Mesenchymal stem cell-derived molecules reverse fulminant hepatic failure. PLoS ONE 2007; 2:e Gheisari Y, Ahmadbeigi1 N, Naderi M, Nassiri S, et al. Stem Cell Conditioned Medium Can Not Protect Against Kidney Failure. Cell Biology International Immediate Publication. Publishe on 18 Oct 2010 as manuscript CBI DOI: / CBI

15 Journal of Cell & Tissue (JCT) Spring 2014; 5(1): Original Article Effect of Conditioned Media from Human Mesenchymal Stem Cells on Acute Kidney Injury Induced by Gentamicin in Rat Abedi A, MSc. 1*, Azarnia M, Ph.D. 2, Jamali M, Ph.D. 3, Moayer F, Ph.D MSc, Kharazmi (TarbiatMoallem) University, Tehran, Iran 2. Kharazmi (TarbiatMoallem) University, Tehran, Iran 3. Department of Pathology, Tehran University of Medical Sciences, Tehran 4. Department of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Islamic Azad University, Karaj, Iran * corresponding author: abedimasoomeh@yahoo.com Received: 28 Jan Accepted: 20 August Abstract Aim: The aim of this study was to investigate the effect of secretory factors of human mesenchymal stem cells on gentamicin-induced acute kidney injury in rats. Material and Methods: Firstly, an experiment was designed to achieve a standard animal model. Animals were randomly divided into four groups. One group was considered as control which received no injection. Three other groups were treated with intraperitoneal 100 mg/kg gentamicin for six consecutive days. Then one of the three groups was injucted with conditioned media of human mesenchymal stem cells and other group was injucted with medium without secretory factors intraperitoneally for three consecutive days. Finally, in the third, fifth and eighth days after gentamicin injection, kidney and blood samples from all animals were collected for histological and biochemical analysis. Result: Results, except in the special case, showed no significant decrease in the amount of blood biomarkers of animals in the group receiving the condition media of human mesenchymal stem cells compared to two another groups. The improvement of tissue damage, however, has been observed in the number of days. Conclusions: These findings suggest that secretory factors of human mesenchymal stem cells have aprotective effect against gentamicin-induced nephrotoxicity Keywords: Acute kidney injury, Gentamicin, Secretory factors Journal of Cell & Tissue, Spring 2014, 5(1) 118