Intact PTH. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Intact PTH For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Intact PTH English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of intact parathyroid hormone (parathyrin, PTH) in EDTA plasma and serum, as an aid in the differential diagnosis of hypercalcemia and hypocalcemia. Catalog Number: L2KPP2 (200 tests), L2KPP6 (600 tests) Test Code: ipt Color: Dark Green Summary and Explanation Parathyroid hormone (parathyrin, PTH), a single-chain polypeptide (with a molecular mass of approximately 9,500 daltons) containing 84 amino acids, exerts significant influence in the maintenance of optimal calcium ion concentrations. PTH raises serum ionized calcium levels through direct action on bone and the kidneys: it increases the rate of calcium ion flow from bone to the extracellular fluid, and increases both the renal tubular reabsorption of ionized calcium and the renal excretion of phosphate. Long-term regulation of total body calcium by PTH occurs through its stimulation of vitamin D metabolism, which results in enhanced intestinal absorption of ionized calcium. 1 In healthy individuals, PTH is secreted in response to circulating calcium ion levels. Any dip below an individual's normal level triggers a pronounced increase in PTH secretion. Calcium levels returning to normal exert a negative feedback effect, thus inhibiting PTH secretion by the parathyroid glands. 1 PTH undergoes proteolysis to a lesser extent in the parathyroid glands but mostly peripherally especially in the liver but also in the kidneys and bone to yield N-terminal fragments and longer lived C-terminal and midregion fragments. The N-terminal fragment contains the region that confers bioactivity. C-terminal and N-terminal fragments are initially generated in equivalent amounts, but the N-terminal fragments disappear rapidly. The C-terminal fragment has a half-life of several hours. In renal failure, C-terminal fragment clearance by glomerular filtration is impaired, so that high levels are found. C-terminal assays (as well as midregion assays) are consequently likely to be especially unreliable in chronic renal failure, where increased PTH is typically just a reflection of impaired renal clearance. 1,2 For the intact hormone, the in vivo half-life is 2 to 5 minutes. 3 Intact PTH clearance is accomplished by both peritubular uptake and glomerular filtration followed by reabsorption. In normal renal function, intact PTH is the greatest part of circulating PTH-like bioactivity 4 and is present in the circulation at concentrations of to mol/l. 2 In hypercalcemia due to primary hyperparathyroidism or to ectopic PTH production (pseudohyperparathyroidism), the majority of patients have elevated PTH levels. By contrast, in hypercalcemia due to malignancy or other causes, the concentration of PTH in circulation is typically low or within normal reference range limits. PTH levels are also characteristically high in secondary hyperparathyroidism usually associated with renal failure as a result of constant stimulation of the parathyroid gland by low calcium levels. Hypocalcemia accompanied by a low PTH level, on the other hand, is to be expected in hypoparathyroidism, either postsurgical or idiopathic. 2,5,6 Immunoassays specific for various PTH fragments have been developed. Most rely on antisera specific for a discrete region: the C-terminal, N-terminal, or midmolecule. The antisera employed in such assays recognize not only the specific region, but similar fragments as well. 1,4 Recent assays for intact PTH have the necessary sensitivity for detecting circulating intact PTH in normals and for discriminating between normals and those with primary hyperparathyroidism. These assays also appear to discriminate better between primary hyperparathyroidism and hypercalcemia of malignancy compared 2 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

3 with previous assays, and do so virtually without any significant overlap between these groups. 4 Much improved clinical sensitivity is reported for PTH assays when dynamic reference intervals (based on a range of serum PTH values obtained by acute modification of serum calcium concentrations in healthy subjects) are used, rather than a gaussian reference range (based on PTH values seen in normocalcemic individuals). Using an immunoradiometric assay for intact PTH and applying a dynamic reference range, Lepage, et al. obtained average clinical sensitivity of up to 100 percent with primary hyper- and hypoparathyroid samples. Moreover, only the intact PTH assay allowed complete separation between primary hyperparathyroid and nonparathyroidal hypercalcemic patients. 7 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Intact PTH is a solidphase, two-site chemiluminescent enzyme-labeled immunometric assay. Incubation Cycles: 1 60 minutes. Specimen Collection Because of the nocturnal rise in intact PTH levels, samples should be collected in the morning, after 7 a.m., preferably after an overnight fast. (A study by Logue et al. suggests that sampling after 10 a.m. may optimize discrimination between normal subjects and patients with mild primary hyperparathyroidism. 8 ) Collect blood by venipuncture into plastic EDTA plasma tubes or plain plastic serum tubes (with or without gel barrier), avoiding hemolysis. Both plasma and serum should be separated from the cells as soon as possible. For EDTA plasma, keep specimens cold (2 8 C) throughout the collection and separation process. Separate the plasma from the cells, using a refrigerated centrifuge, if possible. Note that EDTA collection tubes must be filled to their capacity. Failure to completely fill the tube will result in excess concentration of EDTA which will interfere with the assay, causing a false depression of values. For serum, allow the specimens to clot at room temperature. Separate the serum from the cells, using a refrigerated centrifuge, if possible. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Lipemic, hemolyzed, icteric or grossly contaminated samples may give erroneous results. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Intact PTH has been tested with plastic BD Vacutainer TM tubes (plain serum, SST and EDTA). It has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 50 µl serum or plasma. Storage: Samples can be stored at 2 8 C for up to 8 hours after collection. For longer storage, aliquot and freeze up to 2 months at 20 C. IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 3

4 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. CAUTION! POTENTIAL BIOHAZARD Contains human source material. Each donation of human blood or blood component was tested by FDA-approved methods for the presence of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and type 2 (HIV-2) as well as for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibody to hepatitis C virus (HCV). The test results were negative (not repeatedly reactive). No test offers complete assurance that these or other infectious agents are absent; this material should be handled using good laboratory practices and universal precautions CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. H311, H302, H411 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312 P501 Danger! Toxic in contact with skin. Harmful if swallowed. Toxic to aquatic life with long lasting effects. Wear protective gloves/ protective clothing/eye protection/face protection. Avoid release to the environment. IF SWALLOWED: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. IF ON SKIN: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: sodium azide; Intact PTH Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Intact PTH Bead Pack (L2PP12) With barcode. 200 beads, coated with affinity-purified murine monoclonal anti- PTH (44-84) antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KPP2: 1 pack. L2KPP6: 3 packs. Intact PTH Reagent Wedge (L2PPA2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to affinity-purified goat polyclonal anti-pth (1-34) in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KPP2: 1 wedge. L2KPP6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Intact PTH Adjustors (LPHL, LPHH) Two vials (Low and High) of lyophilized, synthetic human intact PTH in a buffered matrix. Reconstitute each vial with 2.0 ml distilled or deionized water, then place Adjustors on ice immediately. Mix by gentle, intermittent swirling. Use only freshly reconstituted Adjustors for each assay. Do not freeze. L2KPP2: 3 sets. L2KPP6: 5 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. 4 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

5 Kit Components Supplied Separately Intact PTH Sample Diluent (L2PHZ) For on-board dilution of high samples. 25 ml of concentrated (ready-to-use) PTH-free buffer matrix. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader L2PHZ: 3 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LPHCM: Bi-level Intact PTH control, in a buffered matrix. Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: Use controls or patient sample pools with at least two levels (low and high) of intact PTH. Expected Values A reference range study was conducted on matched EDTA plasma and serum samples from 88 apparently healthy volunteers, collected into BD plastic Vacutainer TM tubes. The matched samples were analyzed on IMMULITE/IMMULITE 1000 Intact PTH and on IMMULITE 2000 Intact PTH assays. Analysis of the data indicated no statistically significant difference between platforms, although there was a clear difference in reference ranges between EDTA plasma and serum. The reference ranges suggested by this study for IMMULITE/IMMULITE 1000 Intact PTH and IMMULITE 2000 Intact PTH for both EDTA plasma and serum are shown in the following table. Median Central 95% Range (pg/ml) EDTA Plasma Serum The reference range for serum is in good agreement with a previous multi-site reference range study, conducted with IMMULITE 2000 Intact PTH on 255 serum samples from apparently healthy subjects. This population yielded a median of 32 pg/ml. The reference range suggested by this study is: pg/ml ( pmol/l). Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations The assay is intended strictly as an aid in the differential diagnosis of hypercalcemia and hypocalcemia, not for the diagnosis or management of malignancy. Because of the physiological relationship between circulating calcium and PTH, it is always important to interpret PTH results in the light of total or ionized calcium levels. 9,10 The finding of a persistently high-normal calcium accompanied by a high-normal PTH (alternatively, a low-normal calcium accompanied by a low-normal PTH) warrants further investigation; for the PTH, though itself within normal limits, may still be inappropriately high (or inappropriately low) relative to the circulating calcium level. 11 Indices of renal function, e.g. creatinine levels; measurement of albumin, as an adjunct to measurement of total calcium levels; and determinations of phosphorus, 14,16 chloride, 12 nephrogenous cyclic AMP 14,17,18 and possibly calcitonin, 14 may also (in certain circumstances) aid in the interpretation of PTH and calcium results. It should also be remembered that IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 5

6 hypercalcemia and hypocalcemia may be secondary to disordered vitamin D metabolism. 19 Lipemic, hemolyzed, icteric or grossly contaminated samples may give erroneous results. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1998:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in pg/ml. Unless otherwise specified, all performance data were generated with EDTA plasma samples. Conversion Factor: pg/ml pmol/l Calibration Range: Up to 2,500 pg/ml (263 pmol/l). The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: 3.0 pg/ml (0.3 pmol/l). High-Dose Hook Effect: None up to 500,000 pg/ml (50,000 pmol/l). Intraassay Precision: Statistics were calculated for samples from the results of 20 replicates in a single run. (See Intraassay Precision table.) Interassay Precision: Statistics were calculated for samples assayed in 10 different runs. (See Interassay Precision table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three intact PTH solutions (900, 3,600 and 7,200 pg/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for intact PTH. (See "Specificity" table.) Antibodies used in the kit were purified by affinity chromatography to achieve specificity for well-defined regions of the intact PTH molecule. The antibodies immobilized to the solid phase (coated bead) are specific for the C-terminal region (44-84) and have no detectable crossreactivity to the N-terminal region (1-34). Conversely, the enzyme-labeled antibody recognizes only the N-terminal region, and has no detectable crossreactivity to C-terminal or midmolecule regions. Accordingly, the assay, which requires binding by both enzyme-labeled and solid-phase antibodies, is able to recognize only intact PTH and very large PTH fragments that are nearly as long as intact PTH itself. One such fragment, PTH 7 84, exhibits significant crossreactivity (44.8%) 20 in the IMMULITE 2000 PTH assay. Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l may cause a depression of values. (See Bilirubin table.) Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 513 mg/dl may cause a depression of values. (See Hemolysis table.) Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl may cause a depression of values. (See Lipemia table.) Method Comparison 1: The assay was compared to a chemiluminescent immunometric assay (Kit A) on 79 serum samples. (Concentration range: approximately 3 to 1,300 pg/ml. See graph 1.) By linear regression: (IML 2000) = 0.90 (Kit A) 6.9 pg/ml r = Means: 224 pg/ml (IMMULITE 2000) 255 pg/ml (Kit A) 6 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

7 Method Comparison 2: The assay was also compared to a radioimmunometric assay (Kit B) on 99 serum samples. (Concentration range: approximately 3 to 1,300 pg/ml. See graph 2.) By linear regression: (IML 2000) = 0.98 (Kit B) pg/ml r = Means: 237 pg/ml (IMMULITE 2000) 237 pg/ml (Kit B) References 1) Armitage EK. Parathyrin (parathyroid hormone): metabolism and methods for assay. Clin Chem 1986;32: ) Blind E, Schmidt-Gayk H, Scharla S, Flentje D, Fischer S, Goehring U, Hitzler W. Two-site assay of intact parathyroid hormone in the investigation of primary hyperparathyroidism and other disorders of calcium metabolism compared with a midregion assay. J Clin Endocrinol Metab 1988;67: ) Kao PC, Grant CS, Klee GG, Khosla S. Clinical performance of parathyroid hormone immunometric assays. Mayo Clin Proc 1992;67: ) Measuring the PTH level. Lancet 1988 (Jan 16); ) Christensen MS. Radioimmunoassay of human parathyroid hormone. Dan Med Bull 1979;26: ) Hawker CD, Di Bella FP. Radioimmunoassays for intact and carboxylterminal parathyroid hormone: clinical interpretation and diagnostic significance. Ann Clin Lab Sci 1980;10: ) Lepage R, Whittom S, Bertrand S, Bahsali G, D'Amour P. Superiority of dynamic over static reference intervals for intact, midmolecule, and C-terminal parathyrin in evaluating calcemic disorders. Clin Chem 1992;38: ) Logue FC, Fraser WD, O'Reilly DStJ, Beastall GH. The circadian rhythm of intact parathyroid hormone (1-84) and nephrogenous cyclic adenosine monophosphate in normal men. J Endocrinol 1989;121:R1-R3. 9) Bowers GN, Brassard C, Sena SF. Measurement of ionized calcium in serum with ion-selective electrodes. Clin Chem 1986;32: ) Halvorsen JF, Gautvik VT, Gautvik KM. Improved diagnosis of primary hyperparathyroidism by defining the inverse relationship between serum immunoreactive parathyroid hormone and calcium. Scand J Clin Lab Invest 1986;46: ) Hawker CD, Clark SW, Martin KJ, Slatopolsky E, Di Bella FP. Radioimmunoassay of parathyroid hormone: clinical utility and interpretation. In: Thompson NW, Vinik AI, editors. Endocrine surgery update. New York: Grune & Stratton, 1983: ) Boyd JC, Ladenson JH. Value of laboratory tests in the differential diagnosis of hypercalcemia. Am J Med 1984;77: ) Groth TL, Ljunghall S, De Verdier C-H. Optimal screening for patients with hyperparathyroidism with use of serum calcium observation; a decision-theoretical analysis. Scand J Clin Lab Invest 1983;43: ) Kleeman K, Kleeman CR. Parathyroid hormone and calcitonin. Contemp Endocrinol 1985;2: ) Orwoll ES, Meier D. Alterations in calcium, vitamin D, and parathyroid hormone physiology in normal men with aging: relationship to the development of senile osteopenia. J Clin Endocrinol Metab 1986;63: ) Kao PC. Parathyroid hormone assay. Mayo Clin Proc 1982;57: ) Heath H. Tests of parathyroid function: utility and limitations. American Association for Clinical Chemistry: Continuing Education in Endocrinology and Metabolism. Endo (Feb) 1984;2(8):10 pages. 18) Johnson DR, Howarth AT. Differential diagnosis of hypercalcemia. CRC Crit Rev Clin Lab Sci 1984;21: ) Audran M, Kumar R. The physiology and pathophysiology of vitamin D. Mayo Clin Proc 1985;60: ) UK National External Quality Assurance Scheme (NEQAS) for PTH, ACTH, and Calcitonin. Distribution 65, ) Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR, 1988;37:377 82, ) Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS Document M29-A3. 23) Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Intraassay Precision (pg/ml) Mean 1 SD 2 CV % % % Česky. 1 Střední hodnota, 2 Směrodatná odchylka, 3 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Μέσος όρος, 2 SD, 3 CV. Polski. 1 Średnia, 2 SD, 3 CV. IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 7

8 Interassay Precision (pg/ml) Mean 1 SD 2 CV % % Česky. 1 Střední hodnota, 2 Směrodatná odchylka, 3 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Μέσος όρος, 2 SD, 3 CV. Polski. 1 Średnia, 2 SD, 3 CV. Linearity (pg/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Recovery (pg/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Specificity Compound 1 pg/ml Added 2 % Cross reactivity 3 PTH (1-34) 300 ND PTH (1-44) 100,000 ND PTH (44-68) 100,000 ND PTH (53-84) 100,000 ND Calcitonin 10,000 ND ND: Not detectable. 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % Διασταυρ Αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 % Reaktywności krzyżowej, 4 ND: nieoznaczalna. Bilirubin Unspiked mg/l Conjugated 1 Unconjugated mg/l 100 mg/l 200 mg/l ,556 1,108 1,182 1,183 1, ,234 1,832 1,663 1,736 1,641 English. Conjugated 1, Unconjugated 2, Unspiked 3. Česky. 1 Konjugovaný, 2 Nekonjugovaný, 3 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Δεσμευμένη (άμεση), 2 Αδέσμευτη (έμμεση), 3 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Związana, 2 Niezwiązana, 3 Wyjściowa. Hemolysis Hemoglobin Unspiked mg/dl 342 mg/dl 513 mg/dl ,575 1,460 1,425 1, ,234 2,002 1,937 1,963 English. Unspiked 1. Česky. 1 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Wyjściowa. 8 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

9 Lipemia Triglycerides Added 1 mg/dl Observed 2 Expected 3 %O/E % 1, % 2, % 3, % % 1, % 2, % 3, % % 1, % 2, % 3, % 4 1, ,463 1,536 95% 1,000 1,515 1, % 2,000 1,224 1,418 86% 3, ,339 47% 5 2, ,202 2, % 1,000 2,145 2, % 2,000 2,074 2, % 3,000 1,393 1,899 73% English. Triglycerides Added 1, Observed 2, Expected 3, %O/E 4. Česky. 1 Přidané triglyceridy, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Προστιθέμενα τριγλυκερίδια, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Dodane trójglicerydy, 2 Zmierzone, 3 Oczekiwane, 4 %Z/O. Method Comparison 1 IMMULITE 2000 Intact PTH 1,500 1,250 1, ,000 1,250 1,500 Kit A, pg/ml (IML 2000) = 0.90 (Kit A) 6.9 pg/ml r = Method Comparison 2 IMMULIET 2000 Intact PTH 1,500 1,250 1, ,000 1,250 Kit B, pg/ml (IML 2000) = 0.98 (Kit B) pg/ml r = English. Intact PTH. Česky. Intaktní PTH. Ελληνικά. Ακέραια PTH. Polski. Intact PTH. IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 9

10 Česky IMMULITE 2000 Intaktní PTH Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace intaktního paratyroidního hormonu (paratyrinu, PTH) v séru nebo EDTA plazmě, jakožto pomůcky při diferenční diagnóze hyperkalcémie a hypokalcémie. Katalogové číslo: L2KPP2 (200 stanovení), L2KPP6 (600 stanovení) Kód metody: ipt Barva: Tmavě zelená Shrnutí a vysvětlení Paratyroidní hormon (paratyrin, PTH) je nerozvětvený polypeptid (s molekulovou hmotností přibližně daltonů) složený z 84 aminokyselin, který má významný vliv na udržení optimální koncentrace iontů vápníku. Prostřednictvím přímého působení na kosti a ledviny zvyšuje PTH koncentraci ionizovaného vápníku v séru: zvyšuje míru proudění iontů vápníku z kostí do mimobuněčné tekutiny a zvyšuje jak renální tubulární reabsorpci ionizovaného vápníku, tak i renální vylučování fosfátu. Dlouhodobě PTH reguluje celkové množství kalcia v organizmu prostřednictvím stimulace metabolizmu vitaminu D, který má za následek zvýšenou absorpci ionizovaného vápníku v střevech. 1 U zdravých jedinců je PTH vylučován jako odpověď na množství iontů vápníku v cirkulaci. Každý pokles pod normální hladinu určitého jedince má za následek zřetelné zvýšení sekrece PTH. Návrat množství vápníku do normálu se projeví negativní zpětnou vazbou, kdy dojde k potlačení sekrece PTH příštítnou žlázou. 1 V menší míře prochází PTH proteolýzou v příštítných žlázách, nejvíce pak periferně zejména v játrech ale též ledvinách a kostech. Výsledkem jsou N-terminální fragment a C-terminální a střední fragmenty s delší životností. N-terminální fragment obsahuje oblast, která vykazuje bioaktivitu. Nejprve se tvoří stejné množství C-terminálního a N-terminálního fragmentu, ale N-terminální fragmenty rychle mizí. Poločas C-terminálního fragmentu je několik hodin. Při poškození ledvin je odstraňování C-terminálního fragmentu glomerulární filtrací narušené a zůstává ho tak v organizmu velké množství. Stanovení C-terminálního fragmentu (a též středního fragmentu) bude proto pravděpodobně velmi nespolehlivé při chronickém poškození ledvin, kdy je zvýšená koncentrace PTH pouhým projevem zhoršeného odbourávání v ledvinách. 1,2 In vivo poločas intaktního hormonu je 2 až 5 minut. 3 Odstraňování intaktního PTH se děje peritubulárním nabalováním a glomerulární filtrací následovanými reabsorpcí. Při správné činnosti ledvin tvoří intaktní PTH největší část bioaktivity odpovídající cirkulujícímu PTH 4 a v cirkulaci se vyskytuje v koncentraci až10-12 mol/l. 2 Při hyperkalcémii způsobené primárním hyperparatyroidizmem nebo ektopickou tvorbou PTH (pseudohyperparatyroidizmus) má většina pacientů zvýšenou hladinu PTH. Naproti tomu při hyperkalcémii způsobené zhoubným onemocněním nebo jinou příčinou je koncentrace PTH v cirkulaci typicky snížená nebo v rámci normálního referenčního rozmezí. Hladina PTH je rovněž charakteristicky zvýšená při sekundárním hyperparatyroidizmu obyčejně souvisejícím s poškozením ledvin jako výsledek stálé stimulace příštítné žlázy malým množstvím vápníků. Na druhé straně, hypokalcémií spojenou s nízkou koncentrací PTH je možné očekávat při hypoparatyroidizmu, ať už postoperačním nebo idiopatickém. 2,5,6 Existují stanovení specifická vůči různým fragmentům PTH. Většina z nich se opírá o antiséra specifická vůči jednotlivým oblastem: C-terminální, N-terminální nebo střední. Antiséra použitá v těchto testech rozeznají nejen konkrétní oblast, ale i podobné fragmenty. 1,4 Moderní testy intaktního PTH se vyznačují citlivostí potřebnou k detekci cirkulujícího intaktního PTH u zdravých jedinců i rozlišení mezi zdravými jedinci a těmi s primárním hyperparatyroidizmem. Ukazuje se, že tato stanovení ve srovnání s předešlými lépe rozlišují hyperparatyroidizmus a hyperkalcémii při zhoubném onemocnění a dělají tak v podstatě bez významnějšího překrývání se těchto skupin IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

11 Mnohem lepší klinická citlivost se udává u stanovení PTH při použití dynamického referenčního intervalu (založeném na řadě hodnot koncentrace PTH v séru získané pomocí akutní modifikace množství vápníku v séru u zdravých jedinců), než při aplikaci Gaussova referenčního rozmezí (založeném na koncentraci PTH jedinců s normální hladinou vápníku v krvi). Lepage a kol. pomocí imunoradiometrického stanovení intaktního PTH při použití dynamického referenčního rozmezí docílil klinické citlivosti až 100 percent s primárními hyper- a hypoparatyroidními vzorky. Navíc, pouze stanovení intaktního PTH umožnilo důkladné rozlišení pacientů s primárním hyperparatyroidizmem a neparatyroidálních hyperkalcemických pacientů. 7 Princip stanovení Stanovení Intaktní PTH na analyzátorech IMMULITE 2000 je oboustranná chemiluminiscenční enzymová imunochemická reakce v pevné fázi. Inkubační cykly: 1 60 minut. Odebírání vzorků Z důvodu růstu koncentrace intaktního PTH přes noc je třeba vzorky odebírat ráno, po 7. hodině, nejlépe po nočním půstu. (Logue a kol. ve své studii uvádí, že odběr vzorků po 10. hodině ranní může optimalizovat rozlišení mezi normálními subjekty a pacienty s mírným primárním hyperparatyroidizmem. 8 ) Krev odeberte venepunkcí do obyčejných sérových (bez činidel proti srážlivosti) nebo EDTA zkumavek, zamezte hemolýze. Sérum i plazmu je třeba co nejdřív oddělit od buněk. EDTA plazmu udržujte během celého procesu odběru a separace v chladu při teplotě 2 8 C. Plazmu oddělte od buněk, pokud možno použijte chlazenou centrifugu. Delší pobyt při vyšších teplotách může zapříčinit falešné zvýšení zjevné koncentrace PTH.Dbejte na to, aby odběrové EDTA zkumavky byly plné. Částečné naplnění zkumavky způsobí příliš vysokou koncentraci EDTA, který bude interferovat se stanovením a zapříčiní falešné snížení hodnot. Sérum nechte úplně vysrážet při pokojové teplotě. Sérum oddělte od buněk, pokud možno použijte chlazenou centrifugu. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Lipemické, hemolyzované, žloutenkové a značně kontaminované vzorky můžou poskytovat chybné výsledky. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Intaktní PTH na analyzátorech IMMULITE 2000 bylo testováno s plastovými BD Vacutainer TM zkumavkami (obyčejné sérové, SST a EDTA). Nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku: 50 μl séra nebo plazmy. Skladování: Vzorky séra i plazmy lze skladovat při teplotě 2 8 C až 8 hodin. Pro delší skladování rozpipetujte na alikvotní části a zmrazte na 20 C až na dobu 2 měsíců. IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 11

12 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. POZOR! POTENCIÁLNÍ BIOHAZARD Obsahuje materiál lidského původu. Každé darování krve nebo jejích složek bylo testováno metodami schválenými FDA na přítomnost protilátek proti viru lidské imunodeficience typu 1 (HIV-1) a typu 2 (HIV-2) a také na povrchový antigen viru hepatitidy B (HBsAg) a protilátky proti viru hepatitidy C (HCV). Výsledky testu byly negativní (opakovaně nereaktivní). Žádný test však není absolutní zárukou nepřítomnosti uvedených nebo jiných infekčních zárodků; s materiálem proto zacházejte podle zásad správné laboratorní praxe a dbejte obecných bezpečnostních opatření UPOZORNĚNÍ : Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. H311, H302, H411 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312 P501 Nebezpečí! Toxický při styku s kůží. Zdraví škodlivý při požití. Toxický pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ ochranné brýle/obličejový štít. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. PŘI POŽITÍ: Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. PŘI STYKU S KŮŽÍ: Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje: azid sodný; Intaktní PTH kalibrátory Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky na vnitřní krabici. Intaktní PTH zásobník s kuličkami (L2PP12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených afinitně čištěnou myší monoklonální protilátkou proti PTH (44-84). Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KPP2: 1 balení. L2KPP6: 3 balení. Intaktní PTH reagencie (L2PPA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s afinitně čištěnou kozí polyklonální protilátkou proti PTH (1-34) v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KPP2: 1 nádobka. L2KPP6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Intaktní PTH kalibrátory (LPHL, LPHH) Dvě ampulky s vysokou a nízkou koncentrací lyofilizovaného, syntetického lidského intaktního PTH v pufrovém matrixu. Každou ampulku rekonstituujte přidáním 2,0 ml destilované nebo deionizované vody, pak dejte kalibrátory ihned na led. Promíchejte jemným, přerušovaným kroužením. Pro každé stanovení používejte pouze čerstvě 12 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

13 rekonstituované kalibrátory. Nezmrazujte. L2KPP2: 3 sady. L2KPP6: 5 sad. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Intaktní PTH diluent vzorků (L2PHZ) K automatickému ředění koncentrovaných vzorků. 25 ml koncentrovaného (připraveného k použití) pufrového matrixu bez PTH. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy L2PHZ: 3 štítky L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků LPHCM: Dvojúrovňová kontrola Intact PTH v pufrovém matrixu. Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) intaktního PTH. Očekávané hodnoty Studie referenčního rozmezí byla provedena na vhodném souboru vzorků EDTA plazmy a séra od 88 zjevně zdravých dobrovolníků. Vzorky byly odebírány do BD plastových Vacutainer TM zkumavek. Poté byly stanoveny pomocí IMMULITE/IMMULITE 1000 Intaktní PTH metody a pomocí IMMULITE 2000 Intaktní PTH metody. Z analýzy naměřených dat vyplynul statisticky nevýznamný rozdíl mezi oběma metodami, i když je zde jasný rozdíl pro referenční rozmezí pro vzorky séra a EDTA plazmy. Referenční rozmezí doporučené na základě studie těchto metod pro sérové vzorky i EDTA plazmu jsou v následující tabulce: Medián Střední 95% rozsah (pg/ml) EDTA Plazma Sérum Na více místech byla provedena referenční studie pomocí stanovení Intaktní PTH na analyzátorech IMMULITE 2000 s použitím celkem 255 vzorků séra od zjevně zdravých jedinců. Tento soubor poskytl medián 32 pg/ml. Referenční rozmezí podle této studie je: pg/ml (1,3 6,8 pmol/l). Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Toto stanovení je určeno k použití výhradně jako pomůcka při diferenční diagnóze hyperkalcémie a hypokalcémie, a ne při stanovení diagnózy nebo léčbě zhoubného onemocnění. Protože existuje fyziologická souvislost mezi cirkulujícím vápníkem a PTH, je vždy důležité interpretovat naměřenou koncentraci PTH s ohledem na množství celkového nebo ionizovaného vápníku. 9,10 Nález stálé vysoké-normální koncentrace vápníku doprovázené vysokou-normální koncentrací PTH (eventuálně nízkounormální koncentrace vápníku doprovázené nízkou-normální koncentrací PTH) si vyžaduje další šetření. PTH totiž, i když sám se nachází v rámci normálního IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 13

14 rozmezí, se může vyskytovat v nepřiměřeně vysokém (nebo nízkém) množství ve srovnání s koncentrací vápníku. 11 Jednotlivé ukazatele fungování ledvin, např. koncentrace kreatininu, albuminu (jako doplněk měření množství celkového vápníku) a stanovení fosforu, 14,16 chloridu, 12 nefrogenního cyklického AMP 14,17,18 a případně kalcitoninu, 14 můžou (za jistých okolností) napomoci výkladu výsledků PTH a koncentrace kalcia. Je třeba si rovněž zapamatovat, že hyperkalcémie a hypokalcémie může být sekundárním projevem poruchy metabolizmu vitaminu D. 19 Lipemické, hemolyzované nebo značně kontaminované vzorky můžou poskytovat chybné výsledky. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1998:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v pg/ml. Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích EDTA plazmy. Konverzní faktor: pg/ml 0,1053 pmol/l Kalibrační rozsah: Do pg/ml (263 pmol/l). Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost: 3,0 pg/ml (0,3 pmol/l). High-Dose Hook Effect: Do pg/ml žádný ( pmol/l). Přesnost v rámci stanovení: Statistické výpočty byly počítány pro vzorky z výsledků 20 replikátů v jediném testu. (Viz tabulka Intraassay Precision.) Přesnost mezi stanoveními: Statistické údaje byly vypočítány pro vzorky v desíti různých testech. (Viz tabulka Interassay Precision.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearity.) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků intaktního PTH (900, a pg/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Recovery.) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči intaktnímu PTH. (Viz tabulka "Specificity".) Protilátky použité v této soupravě byly čištěné pomocí afinitní chromatografie, aby byla dosažena specificita vůči přesně stanoveným oblastem molekuly intaktního PTH. Protilátky imobilizované na pevné fázi (potažené kuličce) jsou specifické vůči C-terminální oblasti (44 84) a nemají zjistitelnou zkříženou reaktivitu s N-terminální oblastí (1 34). Naopak, enzymem značená protilátka rozeznává pouze N-terminální oblast a nemá zjistitelnou zkříženou reaktivitu s C-terminální nebo střední oblastí. Proto je toto stanovení které vyžaduje navázání enzymem značenou protilátkou i protilátkou v pevné fázi schopné rozeznat pouze intaktní PTH a velmi velké fragmenty PTH, které jsou téměř tak dlouhé, jako samotný intaktní PTH. Jeden takový fragment, PTH 7 84, se vyznačuje značnou zkříženou reaktivitou (44,8%) 20 při stanovení PTH na analyzátorech IMMULITE Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l může způsobit pokles hodnot. (Viz tabulka Bilirubin.) 14 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

15 Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 513 mg/dl může způsobit pokles hodnot. (Viz tabulka Hemolysis.) Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl může způsobit pokles hodnot. (Viz tabulka Lipemia.) Srovnání metody 1: Stanovení bylo porovnáno s chemiluminiscenčním imunochemickým testem (Kit A) na 79 vzorcích séra. (Koncentrační rozsah: přibližně 3 až pg/ml. Viz graf 1.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 0,90 (Kit A) 6,9 pg/ml r = 0,904 Střední hodnoty: 224 pg/ml (IMMULITE 2000) 255 pg/ml (Kit A) Srovnání metody 2: Stanovení bylo rovněž porovnáno s radioimunometrickým testem (Kit B) na 99 vzorcích séra. (Koncentrační rozsah: přibližně 3 až pg/ml. Viz graf 2.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 0,98 (Kit B) + 5,5 pg/ml r = 0,889 Střední hodnoty: 237 pg/ml (IMMULITE 2000) 237 pg/ml (Kit B) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Ακέραια PTH Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση της ακέραιας παραθυρεοειδούς ορμόνης (παραθυρίνη, PTH) σε πλάσμα με EDTA και σε ορό, ως βοήθημα στη διαφορική διάγνωση της υπερασβεσταιμίας και υπασβεσταιμίας. Αριθμός Καταλόγου: L2KPP2 (200 αναλύσεις), L2KPP6 (600 αναλύσεις) Κωδικός Ανάλυσης: ipt Χρώμα: Σκούρο πράσινο Περίληψη και Επεξήγηση Η παραθυρεοειδής ορμόνη (παραθυρίνη, PTH), ένα μονόκλωνο πολυπεπτίδιο (με Μοριακή Μάζα περίπου 9500 daltons) περιέχοντας 84 αμινοξέα, παίζει σημαντικό ρόλο στη διατήρηση των βέλτιστων συγκεντρώσεων των ιόντων ασβεστίου. Η PTH αυξάνει τα επίπεδα των ιόντων ασβεστίου στον ορό με άμεση δράση στα οστά και τους νεφρούς: αυξάνει το ποσοστό ροής των ιόντων ασβεστίου από τα οστά στο εξωκυτταρικό υγρό και αυξάνει τόσο την επαναπορρόφηση από τα νεφρικά σωληνάρια των ιόντων ασβεστίου, όσο και την έκκριση φωσφορικών από τους νεφρούς. Η μακρόχρονη ρύθμιση του ολικού ασβεστίου του σώματος από την PTH γίνεται μέσω της επαγωγής του μεταβολισμού της βιταμίνης D, ο οποίος έχει ως αποτέλεσμα την αυξημένη εντερική απορρόφηση των ιόντων ασβεστίου. 1 Σε υγιή άτομα, η PTH εκκρίνεται σε σχέση με τα επίπεδα των ιόντων ασβεστίου στην κυκλοφορία. Κάθε πτώση κάτω από τα κανονικά επίπεδα του κάθε ατόμου επάγει μια έντονη αύξηση της έκκρισης της PTH. Τα επίπεδα του ασβεστίου που επιστρέφουν στο κανονικό έχουν ανάδρομο αρνητικό αποτέλεσμα και καταστέλλουν την έκκριση της PTH από τους παραθυρεοειδείς αδένες. 1 Η PTH υφίσταται λιγότερο έντονη πρωτεόλυση στους παραθυρεοειδείς αδένες, αλλά κυρίως περιφερειακά ειδικά στο ήπαρ, αλλά επίσης στους νεφρούς και τα οστά ώστε να δημιουργηθούν αμινοτελικά θραύσματα και, καρβοξυτελικά και ενδότερα θραύσματα που έχουν μεγαλύτερο χρόνο ζωής. Το αμινοτελικό θραύσμα περιέχει την περιοχή που έχει την βιολογική δραστικότητα. Τα καρβοξυτελικά και τα αμινοτελικά θραύσματα αρχικά δημιουργούνται σε ίσες ποσότητες, αλλά τα αμινοτελικά θραύσματα εξαφανίζονται γρήγορα. Το καρβοξυτελικό θραύσμα έχει χρόνο ημίσειας ζωής μερικών ωρών. Σε νεφρική δυσλειτουργία, η κάθαρση του καρβοξυτελικού IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 15

16 θραύσματος με τη σπειραματική διήθηση δεν γίνεται σωστά, έτσι ώστε εμφανίζονται υψηλά επίπεδα. Με τον τρόπο αυτό μέθοδοι για τα καρβοξυτελικά άκρα (όπως και για τις ενδιάμεσες περιοχές) φαίνεται να είναι ιδιαίτερα αναξιόπιστες σε χρόνια νεφρική δυσλειτουργία, όπου η αυξημένη PTH είναι τυπικά μόνο μια αντανάκλαση της μη σωστής νεφρικής κάθαρσης. 1,2 Για την ακέραια ορμόνη, ο χρόνος ημίσειας ζωής στον οργανισμό είναι 2 με 5 λεπτά. 3 Η κάθαρση της ακέραιας PTH γίνεται τόσο με την περισωληνική απορρόφηση, όσο και με τη σπειραματική διήθηση, που ακολουθείται από την επαναπορρόφηση. Σε κανονική νεφρική λειτουργία, η ακέραια PTH έχει το μεγαλύτερο μέρος της βιοδραστικότητας από όλα τα άλλα μόρια που μοιάζουν με αυτή και είναι στην κυκλοφορία σε συγκεντρώσεις των με mol/l. 2 Στην υπερασβεσταιμία, εξαιτίας του πρωτογενούς υπερπαραθυρεοειδισμού ή της εκτοπικής παραγωγής της PTH (ψευδοϋπερπαραθυρεοειδισμός), η πλειονότητα των ασθενών έχουν ανεβασμένα επίπεδα PTH. Αντίθετα, στην υποασβεσταιμία λόγω κακοήθειας ή άλλων αιτιών, η συγκέντρωση της PTH στην κυκλοφορία είναι τυπικά χαμηλή ή σε κανονικά όρια αναφοράς. Τα επίπεδα της PTH είναι επίσης χαρακτηριστικά υψηλά σε δευτερογενή υπερπαραθυρεοειδισμό που σχετίζεται συνήθως με νεφρική δυσλειτουργία ως αποτέλεσμα της συνεχούς επαγωγής του παραθυρεοειδή αδένα από τα χαμηλά επίπεδα ασβεστίου. Η υπασβεσταιμία που συνοδεύεται από χαμηλό επίπεδο της PTH, από την άλλη μεριά, αναμένεται στον υποπαραθυρεοειδισμό, είτε μετεγχειρητικό είτε ιδιοπαθή. 2,5,6 Ανοσομέθοδοι ειδικές για διάφορα θραύσματα της PTH έχουν αναπτυχθεί. Οι περισσότερες βασίζονται σε αντιορούς ειδικούς για μια διακριτή περιοχή: το καρβοξυτελικό, το αμινοτελικό ή το ενδιάμεσο μόριο. Οι αντιοροί που εφαρμόζονται σε τέτοιες μεθόδους δεν αναγνωρίζουν μόνο τη συγκεκριμένη περιοχή, αλλά και παρόμοια θραύσματα επίσης. 1,4 Πρόσφατες μέθοδοι για την ακέραια PTH έχουν την απαραίτητη ευαισθησία για να ανιχνεύουν την ακέραια PTH στην κυκλοφορία σε υγιείς και για να διακρίνουν τους υγιείς από αυτούς που έχουν πρωτογενή υπερπαραθυρεοειδισμό. Αυτές οι μέθοδοι φαίνεται επίσης να διακρίνουν καλύτερα τον πρωτογενή υπερπαραθυρεοειδισμό και την υπερασβεσταιμία, από τον κακοήθη, συγκρινόμενες με προηγούμενες μεθόδους και το κάνουν χωρίς πρακτικά καμιά σημαντική επικάλυψη μεταξύ αυτών των ομάδων. 4 Περισσότερο βελτιωμένη κλινική ευαισθησία αναφέρεται για μεθόδους PTH όπου χρησιμοποιούνται δυναμικά μεσοδιαστήματα αναφοράς (βασισμένα σε ένα εύρος των τιμών της PTH στο ορό που παίρνονται με άμεση τροποποίηση των συγκεντρώσεων του ασβεστίου στον ορό σε υγιή δείγματα), από ότι ένα συγκεχυμένο εύρος αναφοράς (βασισμένο σε τιμές της PTH που φαίνονται σε άτομα με φυσιολογικές τιμές ασβεστίου στο αίμα). Χρησιμοποιώντας μια ανοσομετρική μέθοδο για την ακέραια PTH και εφαρμόζοντας ένα δυναμικό εύρος αναφοράς, ο Lepage, et al. πήρε μια μέση κλινική ευαισθησία μέχρι και 100% σε δείγματα με πρωτογενή υπερ- και υποπαραθυρεοειδισμό. Επιπλέον, μόνο η μέθοδος της ακέραιας PTH επέτρεπε τον ολοκληρωτικό διαχωρισμό ανάμεσα στους υπερασβεσταιμικούς ασθενείς με πρωτογενή υπερπαραθυρεοειδισμό και σε αυτούς που δεν έχουν καμία ασθένεια του παραθυρεοειδή. 7 Αρχή της Διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Ακέραια PTH είναι ξηρής φάσης, δύο θέσεων, χημειοφωταυγής ενζημοσημασμένη ανοσομετρική ανάλυση. Κύκλοι Επώασης: 1 x 60 λεπτά. Συλλογή Δείγματος Εξαιτίας των αυξήσεων των επιπέδων της ακέραιας PTH κατά τη διάρκεια της νύκτας, τα δείγματα θα πρέπει να συλλέγονται το πρωί, μετά τις 7 π.μ., κατά προτίμηση μετά από ολονύκτια νηστεία. (Μια μελέτη από τους Logue et al. προτείνει ότι η δειγματοληψία μετά τις 10 π.μ. μπορεί να ξεχωρίσει τα κανονικά δείγματα από αυτά των ασθενών με ήπιο πρωτογενή υπερπαραθυρεοειδισμό. 8 ) 16 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

17 Συλλέξτε το αίμα με φλεβοκέντηση σε σωλήνες με EDTA ή απλούς σωλήνες για ορό (χωρίς αντιπηκτικά), αποφεύγοντας την αιμόλυση. Όσον αφορά τον ορό και το πλάσμα διαχωρίστε τα από τα κύτταρα το συντομότερο δυνατόν. Όσον αφορά το EDTA πλάσμα, διατηρείστε τα δείγματα σε χαμηλή θερμοκρασία (2 8 C) κατά την διάρκεια της διαδικασίας της συγκέντρωσης και του διαχωρισμού. Μετά ξεχωρίστε το πλάσμα από τα κύτταρα, χρησιμοποιώντας μια ψυχόμενη φυγόκεντρο, ει δυνατόν. Σημειώστε ότι η συλλογή με σωλήνες με EDTA πρέπει να γίνεται μέχρι τη χωρητικότητά τους. Λάθος στην ολοκληρωτική πλήρωση του σωλήνα θα έχει ως αποτέλεσμα μεγαλύτερη συγκέντρωση EDTA, η οποία επιδρά στη μέθοδο προκαλώντας μια λανθασμένη μείωση των τιμών. Όσον αφορά τον ορό, αφήστε το δείγμα να πήξει σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά ξεχωρίστε τον ορό από τα κύτταρα, χρησιμοποιώντας μια ψυχόμενη φυγόκεντρο, αν είναι δυνατόν. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Λιπιδαιμικά, αιμολυμένα, έχοντα ίκτερο και μολυσμένα δείγματα μπορεί να δώσουν λάθος αποτελέσματα. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Ακέραια PTH έχει δοκιμαστεί με πλαστικά BD Vacutainer TM σωληνάρια (απλά ορού, SST και EDTA). Δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους πιθανούς τύπους σωληναρίων. Απαιτούμενος όγκος: 50 µl ορού ή πλάσματος. Φύλαξη: Τα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν μέχρι 8 ώρες μετά την συλλογή τους στους 2 8 C.Για μεγαλύτερη αποθήκευση, διαχωρίστε και καταψύξτε μέχρι 2 μήνες στους 20 C. Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ! ΔΥΝΗΤΙΚΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟΣ ΚΙΝΔΥΝΟΣ Περιέχει υλικό ανθρώπινης προέλευσης. Κάθε δωρεά ανθρώπινου αίματος ή συστατικού αίματος ελέγχθηκε με μεθόδους εγκεκριμένες από τον FDA για την ύπαρξη αντισωμάτων ενάντια στους ιούς της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου τύπου 1 (HIV-1) και τύπου 2 (HIV-2), καθώς και για επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β (HBsAg) και για αντισώματα ενάντια στον ιό της ηπατίτιδας C (HCV). Τα αποτελέσματα των εξετάσεων ήταν αρνητικά (όχι επανειλημμένα αντιδραστικά). Επειδή καμία εξέταση δεν παρέχει πλήρη διασφάλιση για την απουσία αυτών ή άλλων μολυσματικών παραγόντων, ο χειρισμός αυτού του υλικού θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις ορθές εργαστηριακές πρακτικές και γενικές προφυλάξεις ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 17

18 H311, H302, H411 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312 P501 Κίνδυνος! Τοξικό σε επαφή με το δέρμα. Επιβλαβές σε περίπτωση κατάποσης. Τοξικό για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/πρόσωπο. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΚΑΤΑΠΟΣΗΣ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: αζίδιο νατρίου, Ρυθμιστές Intact PTH Αντιδραστήρια: Φύλαξη στους 2 8 C. Υπόκεινται στην ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για τα επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας B και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl, έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών μεταλλικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. (Δες ένθετο). Νερό: Χρήση απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων Ακέραιας PTH (L2PP12) Mε barcode. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού αντί- PTH (44-84) υψηλής καθαρότητας. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KPP2: 1 συσκευασία. L2KPP6: 3 συσκευασίες. Δοχείο Αντιδραστήριου Ακέραιας PTH (L2PPA2) Με barcode. 11,5 ml αλκαλική φωσφατάση (έντερο μόσχου) συνδεδεμένη πολυκλωνικά αντισώματα κατσίκας αντί-pth (1-34) υψηλής καθαρότητας σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KPP2: 1 δοχείο. L2KPP6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές Aκέραιας PTH (LPHL, LPHH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) λυοφιλιμένης, συνθετικής ανθρώπινης ακέραιας PTH σε μήτρα ρυθμιστικού διαλύματος. Προσθέστε στο κάθε φιαλίδιο 2,0 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού και μετά τοποθετείστε τους ρυθμιστές αμέσως στον πάγο. Αναδεύστε με ήπια περιστροφή. Χρησιμοποιείτε μόνο πρόσφατα διαλυμένους ρυθμιστές για κάθε ανάλυση. Μην καταψύχετε. L2KPP2: 3 σετ. L2KPP6: 5 σετ. Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. 18 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

19 Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά Αραιωτικό δειγμάτων Aκέραιας PTH (L2PHZ) Για την επί-του-αναλυτή αραίωση υψηλών δειγμάτων. 25 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση) μήτρας ρυθμιστικού ελεύθερης από PTH. Διατήρηση: 30 ημέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. Ετικέτες με barcode παρέχονται για χρήση με το διαλύτη. Πριν τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα mm, έτσι ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα L2PHZ: 3 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος LPHCM: Δύο επιπέδων ορός ελέγχου ακέριας PTH, σε μήτρα ρυθμιστικού διαλύματος. Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, έλεγχοι. Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου ή δείγματα ορού τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) ακέραιας PTH. Αναμενόμενες Τιμές Μια μελέτη του εύρους αναφοράς έγινε σε δείγματα πλάσματος με EDTA και σε ορό από 88 φαινομενικά υγιείς εθελοντές. Τα δείγματα συλλέχθηκαν σε BD πλαστικούς Vacutainer TM σωλήνες. Τα αντίστοιχα δείγματα εξετάσθηκαν στο εργαστήριο χρησιμοποιώντας την IMMULITE 1000 Ακέραια PTH και την IMMULITE 2000 Ακέραια PTH. Η ανάλυση των αποτελεσμάτων δεν έδειξε σημαντική διαφοροποίηση μεταξύ των πλατφορμών,αν και ήταν καθαρή η διαφορά του εύρους αναφοράς μεταξύ του EDTA πλάσματος και του ορού. Τα εύρη αναφοράς που προτείνονται σε αυτήν την μελέτη για την IMMULITE/IMMULITE 1000 Ακέραια PTH και IMMULITE 2000 Ακέραια PTH για EDTA πλάσμα και ορό παρουσιάζονται στον παρακάτω πίνακα. Μέσοι όροι Κεντρικό 95% Εύρος (pg/ml) EDTA Πλάσμα Ορός Τα εύρη αναφοράς για τον ορό συμφωνούν με προηγούμενη πολλαπλή μελέτη των ευρών αναφοράς που διεξάχθηκε με IMMULITE 2000 Ακέραια PTH σε 255 δείγματα ορού από φαινομενικά υγιή άτομα. Αυτή η ομάδα ανθρώπων παρουσίασε μέσο όρο 32 pg/ml. Το προτεινόμενο εύρος αναφοράς σε αυτήν την μελέτη είναι: pg/ml (1,3 6,8 pmol/l). Θεωρείστε τα όρια αυτά μόνο σαν οδηγούς. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Η μέθοδος ενδείκνυται αυστηρά σαν βοήθεια στη διαφορική διάγνωση της υπερασβεσταιμίας και υπασβεσταιμίας, όχι για τη διάγνωση ή τον χειρισμό κακοηθειών. Εξαιτίας της φυσιολογικής σχέσης μεταξύ του ασβεστίου στην κυκλοφορίας και της PTH, είναι πάντα σημαντικό να χειρίζονται τα αποτελέσματα PTH υπό το φως των επιπέδων του ολικού ασβεστίου ή των ιόντων του. 9,10 Το εύρημα ενός επίμονου σε υψηλά φυσιολογικά επίπεδα ασβεστίου που συνοδεύεται από υψηλά φυσιολογικά IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 19

20 επίπεδα PTH (εναλλακτικά, ένα σε χαμηλά φυσιολογικά επίπεδα ασβέστιο που συνοδεύεται από μια σε χαμηλά φυσιολογικά επίπεδα PTH) απαιτεί περισσότερη έρευνα. Για την PTH, παρόλο που από μόνη της είναι στα φυσιολογικά όρια, μπορεί να είναι αφύσικα υψηλή (ή αφύσικα χαμηλή) σε σχέση με το επίπεδο του ασβεστίου στην κυκλοφορία. 11 Δείκτες της νεφρικής λειτουργίας, π.χ. επίπεδα της κρεατινίνης, μέτρηση της αλβουμίνης, ως μέρος της μέτρησης του επιπέδου του ολικού ασβεστίου και προσδιορισμός του φωσφόρου, 14,16 του χλωρίου, 12 του νεφρογενούς κυκλικού AMP 14,17,18 και πιθανόν της καλσιτονίνης, 14 μπορεί επίσης (σε συγκεκριμένες περιπτώσεις) να βοηθήσουν στο χειρισμό των αποτελεσμάτων της PTH και του ασβεστίου. Θα πρέπει επίσης να θυμάται κανείς ότι η υπερασβεσταιμία και η υπασβεσταιμία μπορεί να είναι δευτερογενείς σε διαταραχές του μεταβολισμού της βιταμίνης D. 19 Λιπιδαιμικά, αιμολυμένα, έχοντα ίκτερο και μολυσμένα δείγματα μπορεί να δώσουν εσφαλμένα αποτελέσματα. Τα ετεροφιλικά αντισώματα που περιέχονται στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιλαμβάνονται στα συστατικά της εξέτασης έχοντας ως αποτέλεσμα την παρεμβολή τους στις ανοσομετρικές εξετάσεις in vitro. [Βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα από ανθρώπους που εκτίθενται συχνά σε ζώα ή σε προϊόντα ορού ζώων μπορεί να έχουν τέτοια παρεμβολή και ως εκ τούτου λανθασμένο αποτέλεσμα. Τα αντιδραστήρια σχεδιάστηκαν έτσι ώστε να ελαχιστοποιείται αυτός ο κίνδυνος; παρόλα αυτά ενδεχόμενες αλληλεπιδράσεις μεταξύ κάποιων σπάνιων ορών και των συστατικών της εξέτασης μπορεί να συμβούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα αυτής της εξέτασης πρέπει πάντοτε να συνδυάζονται με την κλινική εξέταση, το ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για δεδομένα αντιπροσωπευτικά της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε pg/ml. Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα πλάσματος με EDTA. Παράγοντας Μετατροπής: pg/ml 0,1053 pmol/l Εύρος Καμπύλης: Μέχρι 2500 pg/ml (263 pmol/l). Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική Ευαισθησία: 3,0 pg/ml (0,3 pmol/l). Επίδραση υψηλής δόσης φαινομένου Hook: Καμία μέχρι τα pg/ml (50000 pmol/l). Ενδομεθοδική Ακρίβεια: Στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα από τα αποτελέσματα των 20 επαναλήψεων σε ένα απλό τρέξιμο. (βλ. Πίνακα Intraassay Precision ). Διαμεθοδική Ακρίβεια: Στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν σε 10 διαφορετικά τρεξίματα. (βλ. Πίνακα Interassay Precision.) Γραμμικότητα: Τα δείγματα δοκιμάστηκαν με διάφορες διαλύσεις. (βλ. Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ανάκτηση: Τα δείγματα 1 με 19 εμπλουτιστηκαν με τρία διαλύματα ακέραιας PTH (900, 3600 και 7200 pg/ml). (βλ. Πίνακα"Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα παρουσιάζει υψηλή ειδικότητα για την ακέραια PTH. (βλ. Πίνακα "Specificity".) Τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται με το kit καθαρίστηκαν με χρωματογραφία συγγένειας (affinity chromatography) για να επιτευχθεί ειδικότητα για καλά καθορισμένες περιοχές του μορίου της ακέραιας PTH. Τα ανοσοποιημένα αντισώματα στη στερεά φάση (επικαλυμμένα σφαιρίδια) είναι ειδικά για την καρβοξυτελική περιοχή (44 84) και δεν παρουσιάζουν καμία ανιχνεύσιμη 20 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

21 διασταυρούμενη αντίδραση με την αμινοτελική περιοχή (1 34). Αντίθετα, το ενζυμοσημασμένο αντίσωμα αναγνωρίζει μόνο την αμινοτελική περιοχή και δεν εμφανίζει ανιχνεύσιμη διασταυρούμενη αντίδραση με την καρβοξυτελική ή την ενδιάμεση περιοχή του μορίου. Σύμφωνα με τα παραπάνω, η μέθοδος, που απαιτεί σύνδεση τόσο των ενζυμοσημασμένων όσο και των αντισωμάτων στερεάς φάσης, είναι ικανή να αναγνωρίσει μόνο την ακέραια PTH και πολύ μεγάλα κομμάτια της PTH που είναι τόσο μεγάλα όσο σχεδόν η ακέραια PTH από μόνη της. Ένα τέτοιο κομμάτι,η PTH 7 84, παρουσιάζει σημαντική διασταυρούμενη αντίδραση (44,8%) 20 στην ανάλυση με IMMULITE 2000 PTH. Χολερυθρίνη: Παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l μπορεί να προκαλέσει μείωση των τιμών, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης (βλ. Πίνακα Bilirubin ). Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 513 mg/dl μπορεί να προκαλέσει μείωση των τιμών, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης (βλ. Πίνακα Hemolysis ) Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκερίδιων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3000 mg/dl μπορεί να προκαλέσει μείωση των τιμών, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης (βλ. Πίνακα Lipemia.) Σύγκριση της Μεθόδου 1: Η μέθοδος συγκρίθηκε με μια άλλη χημειοφωταυγή ανοσομετρική μέθοδο (Kit A) σε 79 δείγματα ορού. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 3 με 1300 pg/ml. Βλ. Γράφημα 1.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,90 (Kit A) 6,9 pg/ml r = 0,904 Μέσοι όροι: 224 pg/ml (IMMULITE 2000) 255 pg/ml (Kit A) Σύγκριση μεθόδου 2: Η μέθοδος συγκρίθηκε επίσης με μια ραδιοανοσομετρική μέθοδο (Kit B) σε 99 δείγματα ορού (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 3 με 1300 pg/ml. Βλ. Γραφ. 2.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα (IML 2000) = 0,98 (Kit B) + 5,5 pg/ml r = 0,889 Μέσοι όροι: 237 pg/ml (IMMULITE 2000) 237 pg/ml (Kit B) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Intact PTH Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczania poziomu kompletnego hormonu przytarczyc (parathormonu, PTH) w osoczu EDTA lub surowicy, przydatny w różnicowaniu hyper i hypokalcemii. Numery katalogowe: L2KPP2 (200 testów), L2KPP6 (600 testów) Kod testu: ipt Kolor: Ciemnozielony Wprowadzenie Hormon przytarczyc (parathormon, PTH), jednoniciowy polipeptyd (o masie około D) zbudowany z 84 reszt aminokwasowych odgrywa istotną rolę w utrzymaniu optymalnego poziomu jonów wapnia. PTH wpływa na wzrost poziomu jonów wapnia w surowicy oddziałując bezpośrednio na kości i nerki. Wzmaga tempo przepływu jonów z kości do płynu pozakomórkowego oraz zwiększa wchłanianie zwrotne wapnia w cewkach nerkowych i wydzielanie przez nerki fosforanu. Długofalowa regulacja zasobów wapnia w organizmie odbywa się poprzez stymulujący wpływ PTH na metabolizm witaminy D prowadzący do wzmożenia wchłaniania jelitowego jonów wapnia. 1 U osób zdrowych wydzielanie PTH zależne jest od poziomu krążącego wapnia. Każde odchylenie w dół od osobniczej normy inicjuje silny wzrost wydzielania hormonu. Osiągnięcie IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 21

22 normalnego poziomu wapnia wpływa hamująco na wydzielanie PTH przez przytarczyce na drodze negatywnego sprzężenia zwrotnego. 1 PTH ulega proteolizie do fragmentów o mniejszej długości. Tylko niewielka część hormonu ulega proteolizie w samych gruczołach przytarczycznych. Proteoliza zachodzi przede wszystkim obwodowo głównie w wątrobie i w mniejszym zakresie w nerkach i kościach. W wyniku proteolizy PTH degradowany jest do fragmentu N-końcowego, a także C-końcowego i środkowego o dłuższych okresach połowicznego zaniku. Aktywność biologiczna PTH związana jest z fragmentem N-końcowym. Oba fragmenty: N-końcowy i C-końcowy pojawiają się w równoważnych ilościach, lecz fragment N- końcowy zanika szybciej. Okres połowicznego zaniku fragmentu C-końcowego wynosi kilka godzin. Wysoki poziom fragmentu C-końcowego stwierdzany jest w niewydolności nerek jako konsekwencja upośledzenia klirensu fragmentu C na drodze filtracji kłębuszkowej. Tak więc oznaczenia fragmentu C-końcowego (i środkowego) PTH mogą być niemiarodajne zwłaszcza w przypadku chronicznej niewydolności nerek, dla której wzrost poziomu PTH na skutek upośledzonego klirensu jest typowy. 1,2 Czas połowicznego trwania in vivo kompletnego (nietkniętego) PTH wynosi 2 do 5 minut. 3 Klirens nietkniętej formy PTH zachodzi na drodze wychwytu cewkowego i filtracji kłębuszkowej a następnie absorpcji zwrotnej. Przy normalnie pracujących nerkach nietknięta forma PTH odpowiedzialna jest za większość aktywności biologicznej hormonu, 4 a jej ilość w krążeniu zawiera się pomiędzy i mol/l. 2 W hiperkalcemiach spowodowanych pierwotną nadczynnością przytarczyc lub ektopową produkcją PTH (rzekoma nadczynność przytarczyc) u większości pacjentów obserwuje się podniesiony poziom PTH. Przeciwnie, w hiperkalcemiach spowodowanych nowotworami złośliwymi lub innymi przyczynami poziom krążącego PTH na jest na ogół niski lub mieści się w zakresie normy. Wysoki poziom PTH charakterystyczny jest również dla przypadków wtórnej nadczynności przytarczyc, zwykle związanej z niewydolnością nerek. Jego powodem jest ciągła stymulacja gruczołów przytarczyc w skutek niskiego poziomu wapnia. Hipokalcemii, której towarzyszy niski poziom PTH, oczekiwać można natomiast w przypadkach niedoczynności przytarczyc - somoistnych lub będących skutkiem interwencji chirurgicznych. 2,5,6 Istnieją testy immunoenzymatyczne pozwalające na oznaczanie różnych fragmentów PTH. W większości z nich wykorzystuje się surowice specyficzne w stosunku do określonych fragmentów łańcucha PTH: C-końcowego, N- końcowego i środkowego. Surowice stosowane w takich testach rozpoznają jednak również podobne epitopy w innych cząsteczkach. 1,4 Najnowsze testy przeznaczone do badania poziomu PTH posiadają czułość pozwalającą na oznaczanie krążącego nietkniętego PTH u ludzi zdrowych oraz na odróżnienie osób zdrowych od osób z pierwotną nadczynnością przytarczyc. W porównaniu z testami poprzedniej generacji, nowe testy wydają się umożliwiać lepsze różnicowanie pomiędzy pierwotną nadczynnością przytarczyc i hiperkalcemią związaną z nowotworami złośliwymi, gdyż rozkłady wyników dla obu grup nie nakładają się na siebie w sposób istotny. 4 Poprawę czułości oznaczenia PTH uzyskuje się, przez odnoszenie wyników do dynamicznych zakresów referencyjnych opartych na wartościach poziomu PTH w surowicy zdrowych ludzi po drastycznych modyfikacjach poziomu wapnia. Alternatywna strategia opierała się na zastosowaniu gaussowskich zakresów u ludzi z normalnym poziomem wapnia. Zastosowanie dynamicznego zakresu referencyjnego i immunoradiometrycznej metody oznaczania nietkniętego PTH pozwala na uzyskanie nawet stuprocentowej czułości w rozpoznawaniu próbek od osób z pierwotną nadczynnością i niedoczynnością przytarczyc (Lepage i wsp.). Również jedynie oznaczenie nietkniętego PTH pozwala na ostre rozróżnienie pomiędzy pierwotną nadczynnością przytarczyc i hiperkalcemią niezależną od przytarczyc IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

23 Zasada testu IMMULITE 2000 Intact PTH jest immunoenzymatycznym, chemiluminescencyjnym, dwupunktowym testem (imunometrycznym) fazy stałej. Czas inkubacji: 1 x 60 minut Preparatyka próbek Ze względu na nocny wzrost poziomu nietkniętego PTH próbki krwi należy pobierać po 7 rano, najlepiej na czczo. Zgodnie z literaturą (patrz Logue i wsp.) pobranie próbki krwi po 10 rano optymalizuje skuteczność rozpoznania osób zdrowych od chorych na łagodną pierwotną nadczynność przytarczyc. 8 Krew żylną pobierać do probówek z EDTA lub bez antykoagulantu unikając hemolizy. Zarówno surowica jak i osocze powinny być jak najszybciej oddzielone od elementów morfotycznych. W przypadku oznaczeń w osoczu EDTA próbkę przechowywać i preparować w temperaturze 2-8 C. Jeżeli jest to możliwe odwirowywać w wirówce z chłodzeniem. Przedłużone przechowywanie w wyższej temperaturze może prowadzić do fałszywie wysokich wyników oznaczeń PTH. Należy zwrócić uwagę, by probówki z EDTA zostały wypełnione do ustalonego przez producenta poziomu. W przeciwnym razie zbyt duże stężenie EDTA może powodować obniżenie wyników. W przypadku surowicy wykrzepianie prowadzić w temperaturze pokojowej jednakże, jeżeli to możliwe, surowicę odwirowywać w wirówce z chłodzeniem. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Próbki lipemiczne, hemolizowane, żółtaczkowe lub z silna kontaminacją mogą dawać nieprawidłowe wyniki. Zalecane jest ultrawirowanie próbek lipemicznych. Na wynik oznaczenia może wpływać rodzaj probówek do których pobierana jest krew. Istotne znaczenia mają: producent i tworzywo oraz obecność lub brak bariery żelowej lub innego środka ułatwiającego oddzielenie surowicy, obecność aktywatorów skrzepu oraz brak/obecność antykoagulantów. Wpływ wszystkich wymienionych czynników na wynik testu IMMULITE 2000 Intact PTH nie jest znany (badano materiał pobierany do plastikowych probówek typu Vacutainer firmy Vacutainer czyste probówki, SST oraz z EDTA). Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test nie został określony. Wymagana objętość próbki: 50 µl surowicy lub osocza Przechowywanie materiału: zarówno surowicę jak i osocze EDTA można przechowywać w temp. 2 8 C do 8 godzin. W celu dłuższego przechowywania (do 2 miesięcy) próbki należy rozpipetować i zamrozić w 20 C. Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA! POTENCJALNE ZAGROŻENIE BIOLOGICZNE Zawiera materiał pochodzenia ludzkiego. Każdą porcję ludzkiej krwi lub składnika krwi pochodzącą od dawców przetestowano metodami zaaprobowanymi przez FDA na obecność przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi nabytego niedoboru odporności typu 1 (HIV-1) i typu 2 (HIV-2), antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby typu B (HBsAg) i przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (HCV). Wyniki tych badań były ujemne (nie wykazały powtarzalnej reaktywności). Jednak żadne badanie nie gwarantuje całkowitej pewności, że te lub inne czynniki chorobotwórcze nie są obecne w materiale; z tym materiałem należy postępować zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej i stosować uniwersalne środki ostrożności IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 23

24 PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. H311, H302, H411 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312 P501 Niebezpieczeństwo! Działa toksycznie w kontakcie ze skórą. Działa szkodliwie po połknięciu. Działa toksycznie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Stosować rękawice ochronne/odzież ochronną/ ochronę oczu/ochronę twarzy. Unikać uwolnienia do środowiska. W PRZYPADKU POŁKNIĘCIA: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: azydek sodu; Intact PTH kalibratory Odczynniki: Przechowywać w temp. 2-8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty- HCV. Niektóre składniki zestawu mogą zawierać azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl, użyty jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Intact PTH - pojemnik z kulkami (L2PP12) Oznakowany kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych oczyszczonym monoklonalnym mysim przeciwciałem anty-pth (aminokwasy 44-84). Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KPP2: 1 opakowanie; L2KPP6: 3 opakowania. Intact PTH - klin z odczynnikiem (L2PPA2) Oznakowany kodem kreskowym. 11,5 ml alkaicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) związanej z oczyszczonym kozim przeciwciałem poliklonalnym anty-pth (1 34) w buforowanym roztworze, z konserwantem. Stabilny w temp. 2 8 C do daty ważności. L2KPP2: 1 klin; L2KPP6: 3 kliny. Nie uszkadzając kodu kreskowego klina zerwij taśmę zabezpieczającą w okresie transportu przesuwne zamknięcie komór z odczynnikiem. Usuń tymczasowe foliowe uszczelnienie komór i wsuń zamknięcie komór na prowadnice w pokrywie klina. Intact PTH - kalibratory zestawu (LPHL, LPHH) Dwie fiolki (kalibrator niski i wysoki) zawierające liofilizowany, syntetyczny, ludzki intact PTH w buforowanej matrycy. Zawartość każdej fiolki rozpuścić w 2,0 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Należy natychmiast umieścić kalibratory w lodzie i wymieszać je przez delikatne, przerywane toczenie. Należy używać wyłącznie kalibratorów świeżo rozpuszczonych. Nie mrozić kalibratorów. L2KPP2: 3 zestawy; L2KPP6: 5 zestawów. Przed przystąpieniem do kalibracji umocuj na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. 24 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

25 Materiały dostarczane oddzielnie Intact PTH rozcieńczalnik próbek (L2PHZ) Do automatycznego rozcieńczania wysokich próbek. 25 ml skoncentrowanej, gotowej do użycia, buforowanej matrycy wolnej od PTH. Stabilny w temp. 2 8 C przez 30 dni (po otwarciu) lub 6 miesięcy w temp. 20 C (rozpipetowany). Nalepki z odpowiednimi kodami kreskowymi są dostarczane wraz z rozcieńczalnikiem. Nalepkę umieścić na probówce (16x100mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2PHZ: 3 nalepki L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik LPHCM: Dwupoziomowa kontrola intact PTH w buforowanej matrycy. Ponadto niezbędne: woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole. Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 4 tygodnie. Próbki kontrolne: stosować kontrole lub pule surowic, co najmniej o niskim i wysokim poziomie intact PTH. Oczekiwane wartości Wartości referencyjne wyznaczono na próbkach osocza EDTA i surowicy od 88 zdrowych ochotników (plastikowe probówki BD Vacutainer). Próbki oznaczano przy użyciu testu IMMULITE/IMMULITE 1000 Intact PTH oraz IMMULITE 2000 Intact PTH. Analiza danych nie wykazała znaczących różnic pomiędzy testami, istnieją jednak różnice w zakresach referencyjnych pomiędzy oznaczeniem w osoczu EDTA i w surowicy. Wyznaczone zakresy przedstawiono w tabeli poniżej. Mediana Środkowe 95% (pg/ml) Osocze EDTA Surowica Zakres referencyjny dla surowicy pokrywa się z poprzednio wyznaczonym przy użyciu testu IMMULITE 2000 Intact PTH na 255 próbkach surowicy od zdrowych osób. Dla tej populacji uzyskano medianę równą 32 pg/ml, a zakres referencyjny: pg/ml (1,3 6,8 pmol/l) Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Test przeznaczony jest wyłącznie do diagnostyki hiper i hypokalcemii i nie należy stosować go w diagnostyce i leczeniu nowotworów. Ze względu na istnienie fizjologicznego związku pomiędzy krążącym wapniem i PTH ważne jest, by wyniki oznaczenia PTH interpretować w odniesieniu do poziomu wapnia: całkowitego lub zjonizowanego. 9,10 Poziom wapnia trwale utrzymujący się w górnej granicy normy, któremu towarzyszy poziom PTH w górnej granicy normy (lub alternatywnie wapń i PTH równocześnie w dolnej granicy normy) stanowi przesłankę dla dalszego postępowania diagnostycznego; stężenie PTH mieszczące się w normie może być równocześnie nieodpowiednio wysokie (lub nieodpowiednio niskie) w stosunku do poziomu krążącego wapnia. 11 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 25

26 Wskaźniki funkcji nerek poziom kreatyniny, oznaczenie albumin poza pomiarami poziomu całkowitego wapnia, oznaczenia fosforu, 14,16 chloru, 12 nerkopochodnego camp 14,17,18 i możliwie kalcytoniny 14 mogą również (w pewnych okolicznościach) stanowić pomoc w interpretacji wyników oznaczeń PTH i wapnia. Pamiętać należy również, że hyperkalcemia i hypokalcemia mogą być wtórnie następstwem zaburzeń metabolizmu witaminy D. 19 Lipemia, hemoliza lub silna kontaminacja próbki mogą stać się powodem fałszywych wyników. Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin. Chem. 1988: 34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach. Wyniki podano w pg/ml. O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek osocza EDTA. Przelicznik: pg/ml x 0,1053 pmol/l Zakres kalibracji: Do pg/ml (263 pmol/l) Test wykazuje zgodność pomiarową z wewnętrznymi standardami wytwarzania dzięki zastosowaniu kwalifikowanych materiałów i metod pomiaru. Czułość analityczna: 3,0 pg/ml (0,3 pmol/l) Efekt wysokiej dawki Hook Effect: Nie występuje do stężenia pg/ml ( pmol/l) Powtarzalność (wewnątrz serii): Obliczenia statystyczne wykonywano dla próbek oznaczanych w 20 powtórzeniach w serii (patrz: tabela Intraassay Precision). Odtwarzalność (między seriami): Wykonano obliczenia dla próbek testowanych w 10 seriach (patrz: tabela Intraassay Precision). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom (Patrz: tabela Linearity). Odzysk: Badano próbki wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 roztworami intact PTH o stężeniach, kolejno: 900, i pg/ml (porównaj: tabela Recovery). Specyficzność: Przeciwciało jest wysoce specyficzne w stosunku do intact PTH (patrz: tabela Specificity). Przeciwciała zastosowane w teście zostały oczyszczone metodą chromatografii powinowactwa do uzyskania specyficzności w stosunku do ściśle określonych regionów nienaruszonej cząsteczki PTH. Przeciwciało związane z fazą stałą: kulką jednostki testowej, wykazuje specyficzność w stosunku do C-końcowego fragmentu PTH (44-84) przy braku widocznego powinowactwa w stosunku do fragmentu N-końcowego (1-34) i przeciwnie, przeciwciało sprzęgnięte z enzymem rozpoznaje wyłącznie fragment N-końcowy, nie wykazując wykrywalnego powinowactwa w stosunku do fragmentu C-końcowego i środkowego cząsteczki PTH. Test w którym zastosowano przeciwciała wyłapujące (związane z fazą stałą) i indykatorowe (sprzęgnięte z enzymem) o opisanym powyżej powinowactwie jest zdolny wyłącznie do rozpoznania nienaruszonej cząsteczki PTH lub bardzo dużych fragmentów PTH tylko nieznacznie od niego krótszych. Jedynie reaktywność krzyżowa fragmentu PTH (7-84) w teście IMMULITE 2000 PTH jest znacząca (44,8%) IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )

27 Bilirubina: Obecność bilirubiny związanej i wolnej w stężeniu do 200 mg/l może powodować zaniżenie wyników oznaczeń. (patrz: tabela Bilirubin) Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 513 mg/dl może powodować zaniżenie wyników oznaczeń (patrz: tabela Hemolysis). Lipemia: Obecność trójglicerydów w ilości do mg/dl może powodować zaniżenie wyników oznaczeń (patrz: tabela Lipemia). Porównanie metod 1: Wyniki porównywano z wynikami uzyskanymi przy zastosowaniu chemiluminescencyjnego testu immunoenzymatycznego (Kit A) w grupie 79 próbek surowicy (zakres stężeń od około 3 do pg/ml. Porównaj wykres 1.). Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,90 (Kit A) 6,9 pg/ml r = 0,904 Średnie: 224 pg/ml IMMULITE pg/ml Kit A Porównanie metod 2: Wyniki porównywano także z wynikami uzyskanymi przy zastosowaniu testu radioimmunologicznego (Kit B) w grupie 99 próbek surowicy (zakres stężeń od około 3 do pg/ml. Porównaj wykres 2.). Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,98 (Kit B) + 5,5 pg/ml r = 0,889 Średnie: 237 pg/ml IMMULITE pg/ml Kit B Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK PIEL2KPP 6 {21} Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom Changes in this Edition: cc#eu22526: 1) Under Warnings and Precautions, added biohazard symbol and potential biohazard statement, caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 2) Under References, added citations from the potential biohazard statement. 3) Changed Origin: UK to Made in: UK. 4) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 5) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, ) 27

28 Symbol Definition En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! Δυνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) LOT Symbol Definition En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: Διατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Health Hazard Cz: Zdravotní riziko El: Κίνδυνος για την υγεία Pl: Zagrożenie dla zdrowia En: Exclamation Mark Cz: Vykřičník El: Θαυμαστικό Pl: Wykrzyknik 28 IMMULITE 2000 Intact PTH (PIEL2KPP-6 {21}, )