تشخیصهای مولکولی هموفیلی B

Transcript

1 Journal of Shahid Sadoughi University of Medical Sciences Vol. 22, No.5, Nov-Dec 2014 Pages: هجل علوي پص شي دا شگا عل م پسشكي ش يد صدقي يسد در 22 شوار 5 آذر دی 3131 صفح : بررسی تنوع ژنتیکی مارکر در جمعیت اصفهان: یک مارکر آگاهیدهنذه در 1 2- كبضق بؾي اضقس غ تيك زا كگب انف بى انف بى ایطاى 2- اؾتبز گط غ تيك زا كگب انف بى انف بى ایطاى چكيد و فيلي هقده : اؾت. خ ف ب زض غى فبكت ض تبضید زضیبفت: 1392/10/30 تشخیصهای مولکولی هموفیلی 1* 2 3 پريسا دری اهيي كريوي صادق لياى برج ي تبضید پصیط: 1393/7/10 یك ثيوبضی غ تيکي ذ طیعی ز س هغل ة اثؿت ث خ ؽ بقي خ ف زض غى فبكت ض ه لک لي ایي ثيوبضی آ بليع هؿتقين خ ف بی غ ي ثبػث بكبضآهسی یب ػولکطز بزضؾت فبكت ض ا ؼقبزی ا ؼقبزی هيق س. ض ایس آل ثطای تكريم اؾت. اهب ثب ت خ ث تؼساز ثبالی خ ف بی ق بؾبیي قس زض غى هعث ض هكرم ج زى عيف خ ف بی قبیغ آى ا س ثعضگ غى عجيؼت ب وگي خ ف ب آ بليع هؿتقين خ ف ثؿيبض قتگيط پط عی اؾت. ث بثطایي ثطضؾي غيطهؿتقين خ ف ب ثب ض آ بليع پي ؾتگي ثب اؾتفبز هبضكط بی چ سقکلي زض بحي غ ي فبكت ض گعی ه بؾجي زض تكريم پيف ت لس تكريم بقليي و فيلي هيثبقس. رش بررسي: زض ایي هغبلؼ هبضكط چ سقکلي تك كلئ تيسی زض ای تطى 3 غى فبكت ض ثب ض Tetra-primer ARMS-PR ثب پطایوط بی اذتهبني خسیسا عطاحي قس زض 142 ظى ك تطل غيطذ یكب س زض خوؼيت انف بى تؼييي غ تيپ قس. ؾپؽ طمافعاض ENEPOP ثطای تؼييي فطاا ي آللي زضنس تطظیگ ؾيتي آظه ى ی جطگ اؾتفبز قس. تايج : فطاا ي آللي ثطای آلل بی ثطای ثطضؾي تؼبزل بضزی- ث تطتيت %71/83 %28/17 هحبؾج قس. تطظیگ ؾيتي هكب س قس %53/52 هيثبقس. ثطضؾي تؼبزل بضزی-ی جطگ كبى هيز س ك خوؼيت انف بى ثطای هبضكط زض تؼبزل اؾت. تيج گيری: تبیح كبى زاز س ك هبضكط آ بليع پي ؾتگي ق بؾبیي بقليي و فيلي زض و ای خوؼيت ایطا ي هؼطفي ق ز. ث ػلت تطظیگ ؾيتي ثبال هيت ا س ث ػ اى هبضكط تكريهي ه بؾت ثطای اش ای كليدی: و فيلي غى فبكت ض خوؼيت انف بى * ) یؿ س هؿئ ل( تلفي: پؿت الکتط يکي: svallian@sci.ui.sc.ir

2 پريسا دری وكاراى هقده و فيلي یك ثيوبضی ذ طیعی ز س هغل ة اثؿت ث X اؾت ك ت ؾظ كوج ز یب ب دبضی فبكت ض ا ؼقبزی ایدبز هيق ز. ایي ثيوبضی ث ع ض ػوس زض اثط خ ف زض غى فبكت ض ایدبز هيق ز) 1 2 (. قي ع آى 1 زض 25 تب 30 عاض پؿط هت لس قس گليک پطتئيي عجيؼي ظ س هيثبقس) 2 3 (. غى فبكت ض آهي اؾيسی ضا 415 ضهع یك هيك س ك ث ع ض زض پالؾوب خ ز زاضز یك خع ضطضی آثكبض ا ؼقبزی هيثبقس. ایي پطتئيي یك ؾطیي پطتئبظ اثؿت ث k یتبهيي خ ف بی اؾت) 4 (. ثيوبضیظای هرتلفي زض غى فبكت ض زض خوؼيت بی هرتلف ق بؾبیي قس اؾت. ایي زاه ؾيغ كبى ز س خ ف ب ب وگ ي ه لک لي ؾيغ زض ثيوبضاى و فيلي هيثبقس) 1 (. گطچ هطزاى ثيوبض ظ بى بقل هت لس هيق س اهب ثيف %50 ه اضز ث ػ اى تيد خ ف بی خسیس هيثبق س. ثيف 1000 خ ف ثيوبضیظای هرتلف ك ه دط ث ثيوبضی و فيلي ث ػال حسز اؾت. %3 هيق س زض ا ؿبى گعاض قس ثيوبضاى و فيلي ثعضگ زض غى فبكت ض ا ؼقبزی زاض س) 3 (. تكريم بقليي ظى تكريم پيف ت لس حصف بی ثيوبضی و فيلي هيت ا س زض ؾغح ؾيؼي ذب از ب ثب اؾتفبز تكريم هؿتقين خ ف بی ثيوبضیظا) mutations )ausative زض غى فبكت ض یب ض غيط هؿتقين ت ؾظ آ بليع پي ؾتگي ا دبم ق ز) 5 (. ث زليل ا س ثعضگ پيچيسگي غى فبكت ض عجيؼت ب وگي) Heterogenous ( ظهبى ثط گطاى قيوت اؾت) 6 7 (. خ ف ب ض هؿتقين ث بثطایي ثطضؾي پليه ضفيؿن بی غى فبكت ض ه بؾتتطیي ضا ثطای تكريم پيف ت لس تكريم بقليي و فيلي ث ظط هيضؾس. ذه نب زض ه اضزی ك ق بؾبیي خ ف غى ث آؾب ي اهکبىپصیط ج ز یب خ ف بق بذت ثبقس) 6 (. ثب اؾتفبز آ بليع پي ؾتگي خ ف غ ي )كطه ظم زاضای خ ف( زض یك قدط به ذبل ت ؾظ یك هبضكط پي ؾت ز جبل هيق ز. الظم اؾت هبضكط ه ضز اؾتفبز آگب يز س ثبقس. ث تطیي هبضكط بی آگب يز س 1525 ثبالیي زضخ هبضكط بی ثب هيعاى تطظیگ ؾيتي ثبال ثطضؾي ك اؾت ت خ قبثل ؿت س) 8 (. گ بگ ي غ تيکي پليه ضفيؿن هحسز ث ذب از بیي هيق ز ك ثيوبضی زض آى ذب از اضثي اؾت ع خ ف غ ي خسیس يؿت) 6 (. زض ثطضؾي غى فبكت ض هتغيط) Hypervariable ( خبیي ك يچ ت الي ثؿيبض زاذل یب عزیك غ ي خ ز ساضز 10 تب %15 ذب از ب ظ احتيبج ث هغبلؼبت تكريهي ثب هبضكط بی ذبضج غ ي پي ؾت یب تكريم ه تبؾي ى هؿتقين ثطای زؾتطؾي ث تبیح آگب يز س زاض س) 7 (. ترويي ظز هيق ز ك هبضكط بی چ سقکلي تك كلئ تيسی (SNP: Single Nucleotide Polymorphism) ث ع ض هت ؾظ یك زض ط 1000 خفت ثبظ غ م ضخ هيز س %90 ت ػبت ت الي زض غ م ا ؿبى ضا تكکيل هيز س. تؼساز ظیبز پبیساضی خ كي) stability SNPs)Mutational آ ب ضا هبضكط بی هفيسی ثطای هغبلؼبت غ تيك خوؼيت ثطای قك یبثي غى بی هؿتؼس ثيوبضی ثطای ثيوبضی بی پيچيس ؾبذت اؾت. هغبلؼ ػ اهل تؼيييك س غ تيکي ثيوبضی بی پيچيس ت ؾظ ض بی آؾبى ؾطیغ اضظاى ثب ػولکطز ثبال ثطای تؼييي غ تيپ SNP آؾبى قس ا س) 9 (. غى فبكت ض ا ؿبى يع قبهل چ سیي SNP اؾت ك ثيكتط آ ب ث ظیطگط قغؼبت چ سقکلي حبنل ضن آ عیوي RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphisms تؼلق زاض س) 10 (. ثب پيكطفت تک يك بی ق ی زض تكريم SNPs پيك بز قس اؾت ك SNPs هيت ا س ثطای ضایح ثيوبضی بی قك یبثي پي ؾتگي بهتؼبزل توبم غ م اؾتفبز ق س. فطاا ي آللي زضخ تطظیگ ؾيتي هبضكط بی چ سقکلي هؼو ال زض خوؼيت بی هرتلف هتفبت اؾت. ث بثطایي ث ه ظ ض هكرم و زى ه بؾت ث زى یك هبضكط خ ت SNP غطثبلگطی) Screening ( غ م زض یك خوؼيت الظم اؾت اثتسا ضؼيت آى هبضكط لحبػ تطظیگ ؾيتي ت ع آللي ث ع ض یػ ثطضؾي ق ز) 11 (. هجل دا شگا عل م پسشكي خدهات ب داشتي درها ي ش يد صدقي يسد در بيست دم شوار پ جن آذر دی 3131

3 1526 بررسی تنوع ژنتیکی مارکر در جمعیت اصفهان... ث ط حبل ثب ت خ ث تؼساز ثبالی خ ف بی ق بؾبیي قس زض غى فبكت ض هكرم ج زى عيف خ ف بی قبیغ آى ثطضؾي هبضكط بی چ س قکلي زض بحي غ ي فبكت ض گعی ه بؾجي زض تكريم پيف ت لس تكريم بقليي ثيوبضی و فيلي زض خوؼيت ایطا ي هيثبقس. زض ایي ضاثغ ق بؾبیي هبضكط بیي ثب هيعاى تطظیگ ؾيتي ت ع غ تيکي ثبال زض خوؼيت ایطا ي ضطضی هيثبقس. ثب ت خ ث ایي ك تبك ى هغبلؼ ای هج ي ثط ثطضؾي هبضكط بی آگب يز س هطتجظ ثب غى فبكت ض زض خوؼيت انف بى ا دبم كس اؾت ث بثطایي هغبلؼ حبضط ث ثطضؾي یػگي بی یکي هبضكط بی ایي غى زض خوؼيت انف بى هيپطزز. زض پبیگب زاز ب ALFRED( )NI SNPper هبضكط بی هرتلفي زض بحي غ ي فبكت ض هؼطفي قس اؾت ك پؽ ثطضؾي ثي ا ف ضهبتيکي ایي هبضكط ب هبضكط چ س قکلي تك كلئ تيسی / اقغ زض ای تطى قوبض 3 غى فبكت ض ثب ت الي خ ت هغبلؼ ثيكتط ذه نيبت آگب يز سگي هبضكط زض خوؼيت انف بى ا تربة گطزیس) (. زض هغبلؼ ای زض ایطاى ت ؾظ handil آللي زضنس تطظیگ ؾيتي هبضكط هعث ض ثب ض ثب اؾتفبز ضن آ عیوي ثب وکبضاى فطاا ي PR/RFLP XmnI حساقل یك فطظ س ثيوبض و فيلي ) زض 100 ظى بقل ایطا ي )ثب زض یك هغبلؼ زض خوؼيت سی ثط ضی هبضكط ض هحبؾج قس) 2 (. ث ػال PR/RFLP ت ؾظ هغل ة تطظیگ ؾيتي howdhury ثب وکبضاى فطاا ي آلل ذب از قبى كبى زاز قس) 7 (. زض پبیگب زاز فطاا ي آلل زض افطاز ثيوبض ALFRED تطظیگ ؾيتي ه ضز ا تظبض ثطای خوؼيت آفطیقبیي خوؼيت اضپبیي خوؼيت سی خوؼيت ثطظیلي خوؼيت هبلعیبیي گعاض قس اؾت) 12 (. وچ يي زض پبیگب زاز SNPPER فطاا ي آلل زضنس تطظیگ ؾيتي زض خوؼيتي يدطی خوؼيتي غاپي خوؼيتي چيي زض ؾبك يي ایبلت اتبا) Utah ( )زض آهطیکبی قوبلي( ثب تجبضی قوبل غطة اضپب گعاض قس اؾت) 13 (. تبیح ایي هغبلؼ هيت ا س زض تكريم بی پيف ت لس و فيلي وچ يي تق یت اعالػبت ؾبذتبضی غ تيکي خوؼيت ایطا ي ه ضز اؾتفبز قطاضگيطز. و بی اؾتفبز قس زض ایي هغبلؼ هطث ط ث خوؼيت انف بى هيثبقس. رش بررسي آ دبیي ك زض هغبلؼبت ثطضؾي ػسم تؼبزل پي ؾتگي و ای ث ا س 100 فطز غيطذ یكب س ضطضی اؾت) 15 ( زض هغبلؼ حبضط و گيطی ذ ى 142 ظى غيطذ یكب س ؾبلن ظط ثيوبضی و فيلي زض خوؼيت انف بى ا دبم قس و گيطی ث ع ض تهبزفي ا دبم قس. و ب كال خوؼيت انف بى گطفت قس ا س ث ػ اى و ای خوؼيت ایطاى زض ظط گطفت قس س. ث ایي ن ضت ك پؽ كؿت ضضبیت به كتجي توبم افطاز 10 هيليليتط ذ ى تبم فطز زض ل ل حبی یك هيليليتط EDTA ثب غلظت 0/5M خوغآضی پؽ ثجت اعالػبت افطاز ثط ضی آى تب ظهبى آظهبیف زض 20- زضخ ؾب تيگطاز گ ساضی قس. زض اؾترطاج غ هي ذ ى ض ضؾ ة وك اؾتفبز قس. ثطای ثطضؾي ذل ل غ هي ث ض كيفي غل آگبضظ %1 اؾتفبز قس ثط اؾبؼ قست ثب س ب هقساض و ه ضز اؾتفبز خ ت ا دبم اك ف PR ه ضز ترويي قطاض گطفت. اضظیبثي كوي اؾتفبز هيعاى خصة ض هحل ل حبی غ هي ثب زض ع ل ه ج 260 ب هتط ثب اؾتفبز زؾتگب اؾپکتطفت هتط ث زؾت آهس. زض ایي هغبلؼ ثب اؾتفبز اثعاض بی ثي ا ف ضهبتيکي )پبیگب زاز بی )NI SNPper ALFRED هبضكط بی اقغ زض بحي غ ي فبكت ض ثطضؾي قس س ثيي هبضكط بی ه خ ز هبضكط چ س قکلي تك كلئ تيسی قوبض 3 غى فبكت ض ا تربة گطزیس )12-14(. و بی / ثب ت الي غ هي ثب ض زض ای تطى خ ت هغبلؼ ثيكتط Tetra-primer ARMS- PR(Tetra-primer Amplification Refractory Mutation System-Polymerase hain Reaction) تؼييي غ تيپ قس س. تک يك Tetra-primer ARMS-PR یك ض ؾطیغ آؾبى اضظاى قيوت ثطای تؼييي غ تيپ هجل دا شگا عل م پسشكي خدهات ب داشتي درها ي ش يد صدقي يسد در بيست دم شوار پ جن آذر دی 3131

4 1527 پريسا دری وكاراى چ سقکلي بی تك كلئ تيسی هيثبقس. زض ایي تک يك ز خفت پطایوط ثطای تکثيط اك ف ز آلل هرتلف یك SNP ه فطز PR فبنل بی هتفبت كلئ تيس یك زض اؾتفبز هيق ز. ز پطایوط ذبضخي زض چ س قکل قطاض گطفت ا س ث ع ضی ك ز آلل گ بگ ى ثب ا س هرتلف ضا ایدبز هي وبی س. ث بثطایي هيت اى ز آلل هرتلف ا س ای SNP ضا ثط اؾبؼ اذتالف ك زاض س ث كوك الکتطف ضظ ثط ضی غل ق بؾبیي و ز) 9 16 (. ثب اؾتفبز پبیگب بی پطایوط ثطای تکثيط هبضكط اؾتفبز طمافعاض پطایوط Primer1 NI Oligo چ بض عطاحي قس ؾپؽ ثب ؿر 7/56 نحت ایي پطایوط ب ه ضز ثطضؾي قطاضگطفت) 9 17 (. ت الي چ بض پطایوط زاذلي پيكط) FI: )Forward Innerprimer آلل )RO: Reverse outerprimer( آلل )FO: Forward Outerprimer( )RI: Reverse Innerprimer( آلل آلل ذبضخي ذبضخي زاذلي پيط پيكط پيط زض خسل 1 كبى زاز قس اؾت. ثب ا دبم اك ف ظ ديط ای پليوط )PR( ز پطایوط ذبضخي RO FO وچ يي پطایوط بی هحه لي خ ت ك تطل هثجت ایدبز هيك س FO RI پطایوط بی آلل RO FI آلل ضا تکثيط هيك س. ا س هحه ل ثطای آلل : 186 آلل : 283 ز پطایوط ذبضخي: 420 هيثبقس. خسل 1: ت الي پطایوط بی عطاحي قس خ ت اؾتفبز زض ض Tetra-primer ARMS-PR ع ل پطایوط ( ) Tm (3 > 5 )ت الي كلئ تيسی 60/1 25 ATTTATTATATA ) پيكط آلل )زاذلي FI 61/4 23 AAAAAAATAAAT ) پيط آلل )ذبضخي RO 60/5 20 ATAATTAAA ) پيكط آلل )ذبضخي FO 62/1 26 AAAAATATAAAT ) پيط آلل )زاذلي RI RO: Reverse outer primer; FO: Forward outer primer; RI: Reverse inner primer, FI: Forward inner primer; PR تطه ؾبیکلط قطایظ اك ف ثط ضی و بی Eppendorf( -آلوبى( غ هي ثب اؾتفبز زؾتگب 2 عجق خسل PR قبهل: 1µl پطایوط FI ا دبم قس. 1/2µl )10Pm( پطایوط 0/3µl )10Pm( RI پطایوط 0/3µl )10Pm( FO پطایوط 0/5µl )10Pm( RO Taq Polymerase 1/5μl )5U/μl) 3/5μl )10mM) dntp mix 1µl )10X) PR uffer 1µl )50mM( Mgl 2 hromosome ك ثب ddh 2 O 25µl ث حدن ضؾب يس قس. كلي هحه الت اك ف ثط ضی غل آگبضظ 2 زضنس ث هست 1 ؾبػت ثب لتبغ 82 لت ضا س قس غل ث زؾت آهس ثب زؾتگب غل زاكي ه تيكي ػکؿجطزاضی قس. خسل 2: ثط به ث ي قس بیي زؾتگب تطه ؾبیکلط ثطای تکثيط هبضكط هدت زهاى 5 زقيق 30 ثب ي 50 ثب ي 50 ثب ي 10 زقيق هرحل دها ( ) Primery Denaturation -1 Denaturation -2 Annealing Extension تکطاض هطحل قوبض 2 تب )30 4 ؾيکل( 72 Final Extension -6 هجل دا شگا عل م پسشكي خدهات ب داشتي درها ي ش يد صدقي يسد در بيست دم شوار پ جن آذر دی 3131

5 1528 بررسی تنوع ژنتیکی مارکر در جمعیت اصفهان... زاز بی ث زؾت آهس تؼييي غ تيپ افطاز قبهل ترويي فطاا ي آللي زضخ تطظیگ ؾيتي فطاا ي غ تيپي هكب س قس ه ضز ا تظبض ف تيپ بی و ظیگ ت تطظیگ ت ثب اؾتفبز طمافعاض پبیگب تحليل قس) 18 (. ENEPOP تدعی تؼبزل بضزی-ی جطگ Hardy-( HWE: hi square ثب اؾتفبز آظه ى )Weinberg Equilibrium ) ثطای خبیگب هبضكط ( تؼبزل بضزی قس. زض خوؼيت انف بى ثطضؾي ی جطگ ثيبى هيك س ك زض خوؼيتي ثب خفتگيطی تهبزفي ثسى ا تربة خ ف یب ه بخطت فطاا ي- بی آللي فطاا ي بی غ تيپي ؿلي ث ؿل زیگط ثبثت ؿت س ث ػال یك اضتجبط ؾبز ثيي فطاا ي بی آللي فطاا ي بی غ تيپي خ ز زاضز) (. تايج و بی ثب ض Tetra-primer ARMS-PR هبضكط تؼييي غ تيپ قس س )قکل 1(. قکل 1: تؼييي غ تيپ هبضكط ثب ض Tetra-primer ARMS-PR زض و ای خوؼيت ایطاى )خوؼيت انف بى(. ثطای هحه الت PR ثط ضی غل آگبضظ %2. تفکيك قس س. ط ؾت ى كبىز س و PR یك فطز اؾت. ا س هحه ل PR ثطای آلل : 186bp آلل : 283bp ز پطایوط ذبضخي ث ػ اى ك تطل: 420bp هيثبقس ك زض ؾوت ضاؾت قکل قبثل هكب س اؾت. 1- تؼساز افطاز هكب س قس ه ضز ا تظبض زض ط غ تيپ ك زض خسل 3 كبى زاز قس اؾت. وبىع ض ك هكب س هيق ز 142 فطز 64 فط غ تيپ / 76 فط غ تيپ / 2 فط غ تيپ / زاقت س. پؽ تؼييي آلل بی 142 ظى ك تطل غيطذ یكب س زض خوؼيت انف بى غ تيپ افطاز ه ضز هغبلؼ ث ن ضت فبیل ضزی ث پبیگب ای تط تي قبهل ؾ قؿوت ث ز: ENEPOP زاز قس. تبیح حبنل خسل 3: ثطضؾي غ تيپ هبضكط زض و ای خوؼيت ایطاى )خوؼيت انف بى( ش تيپ ای ه رد ا تظار ش تيپ ای هشا د شد ش تيپ 73/ / / هجل دا شگا عل م پسشكي خدهات ب داشتي درها ي ش يد صدقي يسد در بيست دم شوار پ جن آذر دی 3131

6 1529 پريسا دری وكاراى -2 فطاا ي آللي هبضكط ث ع ضی ك فطاا ي هكب س قس ثطای آلل بی ث تطتيت %71/83 %28/17 ث ز. -3 تطظیگ ؾيتي و ظیگ ؾيتي هكب س قس ه ضز ا تظبض زض خسل 4 كبى زاز قس اؾت. چ ب چ هكب س هيق ز تطظیگ ؾيتي هكب س قس زض خوؼيت انف بى هبضكط آلل %53/52 هيثبقس. زض حبلي ك تطظیگ ؾيتي ه ضز ا تظبض ثطای خوؼيت انف بى %40/61 هحبؾج قس. ث ز جبل آى و ظیگ ؾيتي هكب س قس ثطای خوؼيت انف بى %46/47 هيثبقس. زض ن ضتي ك و ظیگ ؾيتي ه ضز ا تظبض خوؼيت انف بى %59/38 ث ز. خسل 4: فطاا ي آللي زضنس تطظیگ ؾيتي و ظیگ ؾيتي هبضكط زض و ای خوؼيت ایطاى )خوؼيت انف بى( فراا ي 0/7183 0/2817 ترزيگ سيتي )درصد( هشا د شد 53/521 وچ يي زض ایي هغبلؼ تؼبزل بضزی-ی جطگ ثطای خبیگب ه رد ا تظار 40/611 و زيگ سيتي )درصد( هشا د شد 46/478 ه رد ا تظار 59/388 زض خوؼيت ایطاى ت ؾظ آظه ى ثطضؾي قس. ثسیي ه ظ ض پؽ ترويي فطاا ي غ تيپ بی و ظیگ ت تطظیگ ت هبضكط ثب اؾتفبز ؾبیت ای تط تي هقساض ENEPOP هحبؾج گطزیس ثب هقساض حبنل خسل احتوبل ثب زضخ آظازی 0/05>p 1 هقبیؿ گطزیس. هقساض قس ثطای هبضكط ك هحبؾج هقساض حبنل خسل احتوبل ثب زضخ آظازی 0/05>p 1 ك چکتط ث ز. تبیح كبى هيز س هبضكط ی جطگ قطاض زاضز. بحث زض خوؼيت انف بى زض تؼبزل بضزی- ایي هغبلؼ ث ه ظ ض ثطضؾي ذه نيبت هبضكط زض خوؼيت انف بى ث ػ اى و ای خوؼيت ایطا ي ا دبم قس اؾت ك ذ ز ث ا تربة ه بؾت هبضكط بی ه ضز اؾتفبز زض تكريم ه لک لي خ ف بی غى فبكت ض ث ض غيطهؿتقين كوك هي وبیس. زض هغبلؼ حبضط تبیح حبنل تؼييي غ تيپ هبضكط ثب فطاا ي %71/83 آلل كبى ز س آلل )آلل غبلت( هغل ة( )آلل ثب فطاا ي %28/17 هيثبق س. ثط اؾبؼ اعالػبت پبیگب زاز ALFRED فطاا ي آلل ثطای خوؼيت آفطیقبیي ث تطتيت %88 %12 ثطای خوؼيت اضپبیي %78 %22 ثطای خوؼيت سی %94 %6 ثطای خوؼيت ثطظیلي %97 %3 ثطای خوؼيت هبلعیبیي %100 %0 گعاض قس اؾت) 12 (. وچ يي ثطاؾبؼ اعالػبت پبیگب زاز SNPPER فطاا ي آلل زض خوؼيتي يدطی %95 %5 زض خوؼيتي غاپي يع زض خوؼيتي چيي %100 %0 زض ؾبك يي ایبلت اتبا) Utah ( )زض آهطیکبی قوبلي( ثب تجبضی قوبل غطة اضپب %79 %21 گعاض قس اؾت) 13 (. هقبیؿ تبیح ث زؾت آهس ایي هغبلؼ ثب اعالػبت ه خ ز زض پبیگب زاز ALFRED آلل SNPPER كبى هيز س ك فطاا ي زض خوؼيت انف بى كوتط ؾبیط خوؼيت ب اؾت زض حبلي ك فطاا ي آلل وچ يي فطاا ي آللي ضن آ عیوي ثب زض هغبلؼ ای زض ایطاى ت ؾظ هبضكط هعث ض ثب ض ثيكتط ؾبیط خوؼيت ب handil اؾت. وکبضاى PR/RFLP XmnI فطظ س ثيوبض و فيلي ثب اؾتفبز زض 100 ظى بقل ایطا ي )ثب حساقل یك ) هحبؾج قس هغل ة آلل فطاا ي Frequency( )( )MAF: Minor Allele %21 گعاض قس اؾت) 2 (. ث ػال زض یك هغبلؼ زض خوؼيت سی ثط ضی هبضكط ثب ض وکبضاى فطاا ي آلل PR/RFLP هغل ة ذب از قبى كبى زاز قس )7(. ت ؾظ howdhury %18 )( زض افطاز ثيوبض هجل دا شگا عل م پسشكي خدهات ب داشتي درها ي ش يد صدقي يسد در بيست دم شوار پ جن آذر دی 3131

7 1530 بررسی تنوع ژنتیکی مارکر در جمعیت اصفهان... زضنس تطظیگ ؾيتي هكب س قس ثطای هبضكط زض خوؼيت انف بى %53/52 اؾت ك ثيكتط زضنس تطظیگ ؾيتي ه ضز ا تظبض )%40/61( هيثبقس. اعالػبت پبیگب زاز ALFRED اؾبؼ ثط تطظیگ ؾيتي ه ضز ا تظبض زض خوؼيت آفطیقبیي %21 زض خوؼيت اضپبیي %34 زض خوؼيت سی %11 زض خوؼيت ثطظیلي %6 زض خوؼيت هبلعیبیي %0 هيثبقس) 12 (. SNPPER ثط وچ يي اؾبؼ اعالػبت پبیگب زاز زضنس تطظیگ ؾيتي زض خوؼيتي يدطی %2 زض خوؼيتي غاپي يع زض خوؼيتي چيي %0 زض ؾبك يي اتبا ثب تجبضی قوبل غطة اضپب %9 هيثبقس) 13 (. ثطضؾي تطظیگ ؾيتي تطظیگ ؾيتي زض ایطاى ت ؾظ وکبضاى handil %38 howdhury ضا وکبضاى آضز س) 7 (. ضا ثط هعث ض هبضكط ثطای زض خوؼيت سی زض افطاز ثيوبض ذب از قبى اؾبؼ تبیح زضنس تطظیگ ؾيتي هبضكط ث زؾت آهس زض زاز) 2 (. كبى تطظیگ ؾيتي %23 هغبلؼ زض خوؼيت ثيكتط هقبزیط گعاض قس زض زیگط خوؼيت ب اؾت. ث زؾت حبضط انف بى پؽ ترويي فطاا ي بی آللي غ تيپي زاز ب خ ز تؼبزل بضزی-ی جطگ ثب اؾتفبز آظه ى گطفت. ثب هقبیؿ هقساض هحبؾج قس ثطای هبضكط ه ضز ثطضؾي قطاض ثب هقساض حبنل خسل احتوبل ثب زضخ آظازی 1 0/05>p هكرم قس ك ایي هبضكط زض خوؼيت انف بى زض تؼبزل بضزی-ی جطگ قطاض زاضز. ایي ه ض ع كبى هيز س ك ث احتوبل ظیبز ػ اهل ثط ن ظ س تؼبزل بضزی-ی جطگ وب س خ ف ا تربة ضا ف غ ي زاج بی غيطتهبزفي زض ایي خوؼيت ثطای خبیگب هبضكط ساقت س. اثط قبثل ت خ ي زض هدو ع ثب ت خ ث تبیح حبنل ایي هغبلؼ هبضكط اقغ زض بحي غ ي فبكت ض ث زليل فطاا ي آللي زضخ تطظیگ ؾيتي ثبال هيت ا س ث ػ اى هبضكط تكريهي ه بؾت زض آ بليع پي ؾتگي ق بؾبیي خ ف بی ثيوبضیظا زض ثيوبضی و فيلي هؼطفي ق ز. وچ يي ایي هبضكط هيت ا س زض ایدبز ثب ك اعالػبتي هبضكط بی ایطا ي خ ت هغبلؼبت خوؼيت ق بؾي ه لک لي ه ضز اؾتفبز قطاض گيطز. سپاسگساری ثسی ؾيل هؼب ت پػ كي زا كگب انف بى خ ت تأهيي ث زخ ایي پػ ف زض قبلت پػ ب تكکط قسضزا ي هيگطزز. قبثل شكط اؾت ك ایي هقبل ه تح پبیبى به كبضق بؾي اضقس غ تيك ه لک لي ذب ن پطیؿب زضی هيثبقس. References: 1- Mahajan A, havali S, Kabra M, howdhury M, haradwaj D. Molecular characterization of hemophilia in North Indian families: identification of novel and recurrent molecular events in the factor gene. Haematologica 2004; 89(12): handil P, Farhud D, Zeinali S, hadiri A. Diagnosis of Hemophilia arriers, Using Taq I and Xmn I Polymorphisms of the Factor ene in Iranian Individuals. Iran J Public Health 2003; 32(3): Yan S, Wu. Descriptively probabilistic relationship between mutated primary structure of coagulation factor and clinical severity of hemophilia. J Applied Res 2009; 9(3): Karimipour M, Zeinali S, raham Tuddenham E, Nafissi N, Lak M, reen P. Molecular haracterization of the Factor ene in 28 Iranian Hemophilia Patients. Iran J lood ancer 2009; 1(2): هجل دا شگا عل م پسشكي خدهات ب داشتي درها ي ش يد صدقي يسد در بيست دم شوار پ جن آذر دی 3131

8 1531 پريسا دری وكاراى 5- ezemer ID, Arellano AR, Tong H, Rowland M, Ireland HA, auer KA, et al. F9 Malmo, factor and deep vein thrombosis. Haematologica 2009; 94(5): Zahedmehr A, Delmaghani S, Sharifian R, Lak M, Zeinali S. The frequencies of three Factor -Linked restriction fragment length polymorphisms in Iranian patients with hemophilia. Iran J Med Sci 2004; 29(1): howdhury MR, Kabra M, Menon PS. Factor gene polymorphisms in Indian population. Am J Hematol 2001; 68(4): Mitchell, Mitchell, Krause A. New FATOR linked marker alleles in African Haemophilia patients. Haemophilia 2007; 13(5): Ye S, Dhillon S, Ke X, ollins AR, Day IN. An efficient procedure for genotyping single nucleotide polymorphisms. Nucleic Acids Res 2001; 29(17): e owen DJ. Haemophilia A and haemophilia : molecular insights. J lin Pathol Mol Pathol 2002; 55(2): han V, Yam I, Yip, Au P, Shing MK, Li K, et al. Single nucleotide polymorphisms of the factor gene for linkage analysis in the southern hinese population. r J Haematol 2000; 111(2): heung KH, Osier MV, Kidd JR, Pakstis AJ, Miller PL, Kidd KK. ALFRED: an allele frequency database for diverse populations and polymorphisms. Nucleic Acids Res 2000; 28(1): Riva A, Kohane IS. SNPper: retrieval and analysis of human SNPs. ioinformatics 2002; 18(12): Sherry ST, Ward MH, Kholodov M, aker J, Phan L, Smigielski EM, et al. dbsnp: the NI database of genetic variation. Nucleic Acids Res 2001; 29(1): Meng Z, Zaykin DV, Xu -F, Wagner M, Ehm M. Selection of genetic markers for association analyses, using linkage disequilibrium and haplotypes. Am J Human enet 2003; 73(1): Okayama N, Fujimura K, Nakamura J, Suehiro Y, Hamanaka Y, Hinoda Y. Evaluation of a new efficient procedure for single-nucleotide polymorphism genotyping: tetra-primer amplification refractory mutation systempolymerase chain reaction. lin hem Lab Med 2004; 42(1): ollins A, Ke X. Primer1: Primer Design Web Service for Tetra-primer ARMS-PR. Open ioinform J 2012; 6: Raymond M, Rousset F. ENEPOP (version 1.2): population genetics software for exact tests and ecumenicism. J Hered 1995; 86(3): uo SW, Thompson E. Performing the exact test of Hardy-Weinberg proportion for multiple alleles. iometrics. 1992;48(2): Engels WR. Exact tests for Hardy-Weinberg proportions. enetics 2009; 183(4): هجل دا شگا عل م پسشكي خدهات ب داشتي درها ي ش يد صدقي يسد در بيست دم شوار پ جن آذر دی 3131

9 1532 بررسی تنوع ژنتیکی مارکر در جمعیت اصفهان... enetic variation of marker in the Iranian Population: An informative marker for molecular diagnosis of hemophilia Dorri P(MSc) 1, Karimi A(MSc) 2, Vallian-orujeni S(PhD) *3 1-3 Department of iology, University of Isfahan, Isfahan, Iran Received: 20 Jan 2014 Accepted: 2 Oct 2014 Abstract Introduction: Hemophilia is an X-linked recessive genetic disease caused by mutations in the coagulation Factor gene. Mutations in the Factor gene result in dysfunction or deficiency of coagulation factor of. Direct mutation analysis involves the ideal method for molecular diagnosis of the disease. However, due to the high number of identified mutations in the gen, the lack of a common mutation spectrum, the large size of the gene, and the heterogeneous nature of its mutations, direct mutation analysis is regarded expensive and time-consuming. Alternatively, indirect investigation of the mutations by use of linkage analysis applying polymorphic markers present in the factor gene region could be considered as an appropriate approach for prenatal diagnosis and carrier detection of haemophilia. Methods: In the present study the single nucleotide polymorphic marker in the intron 3 of factor gene was genotyped by Tetra-primer ARMS-PR method with newly desingd specific primers on 142 unrelated control females in the Isfahan (a city in Iran) population. Then the allele frequency and degree of heterozygosity were estimated utilizing ENEPOP program. Moreover, test was applied in order to investigate the Hardy-Weinberg equilibrium. Results: Allele frequency was reported as 71.83% and 28.17%, respectively for and alleles. Observed heterozygosity was 53.52% and Analysis of deviations from Hardy-Weinberg equilibrium demonstrated that the Isfahanian population were in equilibrium for marker. onclusion: The study findings demonstrated that marker due to high heterozygosity could be suggested as an appropriate diagnostic marker in linkage analysis and carrier detection of hemophilia in regard with a sample of Iranian population. Keywords: Factor ene; Hemophilia ; Isfahan Population; Rs This paper should be cited as: Dorri P, Karimi A, Vallian-orujeni S. enetic variation of marker in the iranian population: an informative marker for molecular diagnosis of hemophilia. J Shahid Sadoughi Univ Med Sci 2014; 22(5): *orresponding author: Tel: , svallian@sci.ui.sc.ir هجل دا شگا عل م پسشكي خدهات ب داشتي درها ي ش يد صدقي يسد در بيست دم شوار پ جن آذر دی 3131