HR P T3 OPIS IZUMA. Srodna prijava

Transcript

1 OPIS IZUMA Srodna prijava Ova prijava ima pravo prioriteta pod Naslovom (e) pred Privremenom Prijavom iz Sjedinjenih Država Br. 60/31,41, koja je podnesena 19 Prosinca 03. Pozadina izuma Delta-9-tetrahidrokanabinol ili Delta-9 THC, temeljni aktivni sastojak iz Cannabis sativa (marihuana) pripadnik je široke porodice lipofilnih spojeva (npr., kanabinoidi) koji posreduju u fiziološkim i psihotropnim učnicima što uključuje regulaciju apetita, imunosupresiju, analgeziju, upalu, emeziju, antinocicepciju, sedaciju i intraokularni tlak. Drugi pripadnici kanabinoid porodice uključuju endogene (dobiveni iz arahidonske kiseline) ligande, anandamide, 2-arahidonil glicerol i 2-arahidonil glicerol eter. Kanabinoidi djeluju kroz selektivno vezanje na i aktivaciju kanabinoid receptora koji su vezani na G-protein. Klonirana su dva tipa kanabinoid receptora, CB-1 (L. A. Matsuda, et. al., Nature, 346, (1990)) i CB-2 (S. Munro, et al., Mature, 36, 61-6 (1993)). CB-1 receptor se intenzivno ekspresira u središnjem i perifernom živčanom sustavu (M. Glass, et al., Neuroscience, 77, (1997)), dok se CB-2 receptor intezivno ekspresira u imunim tkivima, naročito u slezeni i krajnicima. CB-2 receptori također se intezivno ekspresiraju u drugim stanicama imunološkog sustava, kao što su limfne stanice {S. Galiegue, et. al., Eur J Biochem, 232, 4-61 (199)). Agonistička aktivacija kanabinoid receptora uzrokuje inhibiciju camp akumulacije, stimulaciju aktivnosti MAP kinaze i zatvaranje kalcijevih kanala. Postoji značajan dokaz da kanabinoidi reguliraju apetit. Stimulacija CB-1 aktivnosti djelovanjem anandamida ili Delta-9 THC rezultira u povećanom unosu hrane i povećanju težine kod raznih vrsta što uključuje ljude (Williams i Kirkham, Psychopharm., 143, (1999)). Genetički nedostatak CB-1 kod miševa koji su bili hipofagni i mršavi u vezi je sa pojavom mladunčadi divljeg tipa (DiMarzo, et al., Nature, 4, (01)). Objavljene studije sa malim molekulama kao antagonistima CB-1 pokazale su smanjen unos hrane i smanjenje tjelesne mase kod štakora (Trillou, et. al., Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol., R34-R33, (03)). Kronični unos AM-21 koji je antagonist CB-1 kroz dva tjedna rezultirao je sa značajnim smanjenjem tjelesne mase i smanjenjem mase masnog tkiva (Hildebrandt, et. al., Eur. J. Pharm, 4 62, (03)). Postoje raznovrsne studije koje su procjenjivale učinak Sanofijeva CB-1 antagonista na anoreksiju, SR (Rowland, et. al., Phγschopharm., 19, (01); Colombo, et. al., Life Sci., 63, (1998)). Postoje najmanje dva CB-1 antagonista u kliničkim ispitivanjima za regulaciju apetita, Sanofijev SR i Solvayev SLV-319. Objavljeni podaci Faze IIb pokazali su da je smanjenje mase kod ljudi podvrgnutih ispitivanju kroz 16 tjedana ovisilo o SR CB-1 antagonisti također su pokazali poticanje prestanka ovisnosti o pušenju. Faza II kliničkih ispitivanja o prestanku pušenja bila je prikazana u Rujnu 02 na Informacijskom susretu u organizaciji Sanofi-Synthelabo. Ovi podaci su pokazali da je.2% pacijenata liječenih sa najvišim dozama SR apstiniralo od cigareta u usporedbi sa 14.8% za placebo. Detaljan opis izuma Prikazana prijava opisuje spojeve u skladu sa Formulom I, farmaceutske sastave koji sadrže najmanje jedan spoj u skladu sa Formulom I i opcijski jedan ili više dodatnih terapeutskih agenasa i primjene za proizvodnju lijekova primjenom spojeva u skladu sa Formulom I ili u samostalnom obliku ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutskih sredstava. Spojevi imaju opću Formulu I što uključuje sve farmaceutski prihvatljive soli i stereoizomere, R 1, R 2, R 3, R 4, R, m i n su ovdje opisani: 2

2 DEFINICIJE Slijedeće definicije se primjenjuju na termine koji se upotrebljavaju u ovoj specifikaciji, osim ako nije drugačije ograničeno u specifičnim primjerima. Kao što se ovdje upotrebljava, termin "alkil" označava razgranate ili nerazgranate ugljikovodične lance koji sadrže 1 do ugljika, poželjnije 1 do 12 ugljika i još poželjnije 1 do 8 ugljika, u uobičajenim lancima kao što su metil, etil, propil, izopropil, butil, sec-butil, izo-butil, terc-butil, pentil, heksil, izoheksil, heptil, 4,4-dimetilpentil, oktil, 2,2,4-trimetipentil i slično. Dalje, alkilne skupine, kao što je ovdje definirano, mogu biti opcijski supstituirane na bilo kojem dostupnom ugljikovom atomu sa jednom ili više funkcionalnih skupina koje su uobičajeno pričvršćene na takve atome, kao što su, ali nije ograničeno, hidroksil, halo, haloalkil, merkapto ili tio, cijano, alkiltio, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, karboksil, karbalkoil, karboksamido, karbonil, alkenil, alkinil, nitro, amino, a1koksi, ariloksi, arilalkiloksi, heteroariloksi, amido, -OC(O) NR 8 R 9, -OC(O)R 8, -OPO 3 H, -OSO 3 H i slični koji tvore alkilne skupine kao što su trifluorometil, 3-hidroksiheksil, 2-karboksipropil, 2-fluoroetil, karboksimetil, cijanobutil i slično. Osim ako nije drugačije naznačeno, termin "alkenil" kao što se ovdje upotrebljava, samostalno ili kao dio druge skupine odnosi se na ravni ili razgranati lanac od 2 do ugljika, poželjno 2 do 12 ugljika i još poželjnije 2 do 8 ugljikovih atoma sa jednom ili više dvostrukih veza u uobičajenom lancu, kao što su vinil, 2-propenil, 3-butenil, 2-butenil, 4-pentenil, 3-pentenil, 2-heksenil, 3-heksenil, 2-heptenil, 3-heptenil, 4-heptenil, 3-oktenil, 3-nonenil, 4-decenil, 3-undecenil, 4-dodecenil, 4,8,12-tetradekatrienil i slično. Dalje, alkenilne skupine, kao što je ovdje definirano. Mogu biti opcijski supstituirane na bilo kojem dostupnom ugljikovom atomu sa jednom ili više funkcionalnih skupina koje su uobičajeno pričvršćene na takve lance, kao što su, ali nije ograničeno, halo, haloalkil, alkil, alkoksi, alkinil, aril, arilalkil, cikloalkil, amino, hidroksil, heteroaril, cikloheteroaril, alkanoilamino, alkilamido, arilkarbonilamino, nitro, cijano, tiol, alkiltio i/ili bilo koji od alkilnih supstituenata koji su ovdje prikazani. Osim ako nije drugačije naznačeno, termin "alkinil" kao što se ovdje upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine odnosi se na ravne ili razgranate lance od 2 do ugljika, poželjno 2 do 12 ugljika i još poželjnije 2 do 8 ugljika sa jednom ili više trostrukih veza u uobičajenom lancu, kao što su 2-propinil, 3-butinil, 2-butinil, 4-pentinil, 3-pentinil, 2-heksinil, 3-heksinil, 2-heptinil, 3-heptinil, 4-heptinil, 3-oktinil, 3-noninil, 4-decinil, 3-undecil, 4-dodecinil i slično. Dalje, alkinilne skupine, kao što je ovdje definirano, mogu biti opcijski supstituirane na bilo kojem dostupnom ugljikovom atomu sa jednom ili više funkcionalnih skupina koje su uobičajeno pričvršćene na takve lance, kao što su, ali nije ograničeno, halo, haloalkil, alkil, alkoksi, alkenil, aril, arilalkil, cikloalkil, amino, hidroksil, heteroaril, cikloheteroaril, alkanoilamino, alkilamido, arilkarbonilamino, nitro, cijano, tiol, alkiltio i/ili bilo koji alkilni supstituenti koji su ovdje spomenuti. Osim ako nije drugačije naznačeno, termin "cikloalkil" kao što se ovdje upotrebljava, samostalno ili kao dio druge skupine uključuje zasićeni ili djelomično nezasićeni (koji sadrži jednu ili više dvostrukih veza) ciklički ugljikovodik koji sadrži 1 do 3 prstena, koji su dodani ili vezani, što uključuje monociklički alkil, biciklički alkil i triciklički alkil, koji sadrže ukupno 3 do ugljika koji tvore prstene, poželjno 3 do ugljika, koji tvore prsten koji može biti povezan sa jednim ili dva aromatska prstena kao što je opisano za aril, što uključuje ciklopropil, ciklobutil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, ciklodecil i ciklododecil, cikloheksenil, 4 0 Dalje, svaki cikloalkil može biti opcijski supstituiran putem bilo kojih dostupnih ugljikovih atoma sa jednom ili više skupina koje su odabrane od vodik, halo, haloalkil, alkil, alkoksi, haloalkiloksi, hidroksil, alkenil, alkinil, aril, ariloksi, heteroaril, heteroariloksi, arilalkil, heteroarilalkil, alkilamido, alkanoilamino, okso, acil, arilkarbonilamino, amino, nitro, cijano, tiol i/ili alkiltio i/ili bilo kojeg od alkilnih supstituenata. Termin "cikloalkil" kao što se ovdje upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine odnosi se na alkilne skupine kao što je gore definirano koje imaju cikloalkilni supstituent, gdje spomenute "cikloalkil" i/ili "alkil" skupine mogu biti opcijski supstituirane kao što je gore definirano. Osim ako nije drugačije naznačeno, termin "aril" kao što se ovdje upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine odnosi se na monocikličke i bicikličke aromatske skupine koje sadrže 6 do ugljika u dijelu prstena (kao što su fenil ili naftil, uključujući 1-naftil i 2-naftil) i mogu opcijski uključivati jedan do tri dodatna prstena vezana na karbociklički prsten ili heterociklički prsten, npr., 3

3 1 Dalje, "aril", kao što se ovdje upotrebljava, može biti opcijski supstituiran sa jednom ili više funkcionalnih skupina, kao što su halo, alkil, haloalkil, alkoksi, haloalkoksi, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterociklil, heterocikloalkil, aril, heteroaril, arilalkil, ariloksi, ariloksialkil, arilalkoksi, alkoksikarbonil, arilkarboni1, arilalkenil, aminokarbonilaril, ariltio, arilsulfinil, arilazo, heteroarilalkil, heteroarilalkenil, heteroarilheteroaril, heteroariloksi, hidroksil, nitro, cijano, amino, supstituiran amino gdje amino uključuje 1 ili 2 supstituenta (koji su alkil, aril ili bilo koji drugi ari Ini spojevi spomenuti u definicijama), tiol, alkiltio, ariltio, heteroariltio, ariltioalkil, alkoksiariltio, alkilkarbonil, arilkarbonil, alkilaminokarbonil, arilaminokarbonil, alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, arilsulfinil, arilsulfini1alkil, arilsulfonilamino ili arilsulfonaminokarbonil i/ili bilo koji od alkilnih supstituentata koji su ovdje spomenuti. Osim ako nije drugačije naznačeno, termin "heteroaril" kao što se ovdje upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine odnosi se na aromatski prsten od ili 6 članova koji uključuje 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma kao što su dušik, kisik i sumpor. Takvi prsteni mogu biti vezani na aril, cikloalkil, heteroaril ili heterociklil i uključuju moguće N-okside kao što je opisano u Katrizky, A. R. i Rees, C. W., eds. Comprehensive Heterocyclic Chemistry: The Structure, Reactions, Synthesis and Uses of Heterocyclic Compounds 1984, Pergamon Press, New York, NY; and Katritzky, A. R., Rees, C. W., Scriven, E. F., eds. Comprehens ive Heterocyclic Chemistry II: A Review of the Literature , Elsevier Science, Inc., Tarrytown, NY; i reference koje su u nj ima. Dalje, "heteroaril", kao što je ovdje definirano, može biti opcijski supstituiran sa jednim ili više supstituenata kao što su supstituenti koji su uključeni gore u definiciji "supstituiranog alkila" i "supstituiranog arila". Primjeri heteroaril skupina uključuju slijedeće: i slično. 2 Termin "heteroarilalkil" kao što se ovdje upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine odnosi se na alkilnu skupinu kao što je gore definirano koja ima heteroarilni supstituent, gdje spomenuta heteroaril i/ili alkilna skupina može biti opcijski supstituirana kao što je gore definirano. Termin "heterociklo", "heterocikl", "heterociklil" ili "heterociklički prsten", kao što se ovdje upotrebljava, predstavlja nesupstituirani ili supstituirani stabilni monociklički sustav od 4 do 7 članova koji može biti zasićen ili nezasićen, i koji se sastoji od ugljikovih atoma, sa jednim do četiri heteroatoma koji su izabrani od dušika, kisika i sumpora i gdje dušikovi i sumporni heteroatomi mogu biti opcijski oksidirani i dušikov atom može biti opcijski kvaterniziran. Heterociklički prsten može biti pričvršćen na bilo koji heteroatom ili ugljikov atom što rezultira u stvaranju stabilne 4

4 1 2 strukture. Primjeri takvih heterocikličkih skupina uključuju, ali bez ograničenja, piperidinil, piperazinil, oksopiperazinil, oksopiperidinil, oksopirolidinil, oksoazepinil, azepinil, pirolil, pirolidinil, furanil, tienil, pirazolil, pirazolidinil, imidazolil, imidazolinil, imidazolidinil, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, oksazolil, oksazolidinil, izoksazolil, izoksazolidinil, morfolinil, tiazolil, tiazolidinil, izotiazolil, tiadiazolil, tetrahidropiranil, tiamorfolinil, tiamorfolinil sulfoksid, tiamorfolinil sulfon, oksadiazolil i druge heterocikle koji su opisani u Katritzkv, A. R. i Rees, C. W., eds. Comprehensive Heterocyclic Chemistry: The Structure, Reactions, Sγnthesis and Uses of Heterocyclic Compounds 1984, Pergamon Press, New York, NY; i Katritzky, A. R. Rees, C. W., Scriven, E.F., eds, Comprehensive Heterocyclic Chemistry II: A Review of the Literature , Elsevier Science, Inc., Tarrytown, NY; i reference koje su tamo navedene. Termin "heterocikloalkil" kao što se ovdje upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine odnosi se na alkilne skupine kao što je gore definirano koje imaju heterociklički supstituent, gdje spomenute heterociklil i/ili alkil skupine mogu biti opcijski supstituirane kao što je gore definirano. Termini "arilalkil", "arilalkenil" ili "arilalkinil" kao što se upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine odnose se na alkil, alkenil i alkinil skupine kao što je gore opisano koje imaju aril supstituent. Tipični predstavnici arilalkila uključuju, ali bez ograničenja, benzil, 2-feniletil, 3-fenilpropil, fenetil, benzhidril i naftilmetil i slično. Termini "alkoksi", "ariloksi", "heteroariloksi", "arilalkiloksi" ili "heteroarilalkiloksi" kao što su ovdje upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine uključuje alkilnu ili arilnu skupinu kao što je gore definirano koja je vezana putem kisikova atoma. Termin "halogen" ili "halo" kao što se ovdje upotrebljava samostalno ili kao dio druge skupine odnosi se na klor, brom, fluor i jod, poželjno sa bromom, klorom ili fluorom. Termin "cijano", kao što se ovdje upotrebljava, odnosi se na -CN s kupinu. Termin "metilen", kao što se ovdje upotrebljava, odnosi se na -CH 2 - skupinu Termin "nitro", kao što se ovdje upotrebljava, odnosi se na -NO 2 skupinu. Spojevi formule I mogu biti prisutni kao soli, koje su također unutar dosega izuma. Poželjne se farmaceutski prihvatljive (npr., netoksične, fiziološki prihvatljive) soli. Ako spojevi formule I imaju, npr., najmanje jedan bazični centar, tada mogu tvoriti soli uz dodatak kiseline. Takve se tvore, npr., sa jakim anorganskim kiselinama, kao što su mineralne kiseline, npr., sulfatna kiselina, fosfatna kiselina ili hidrohalogena kiselina, sa organskim karboksilnim kiselinama, kao što su alkankarboksilne kiseline od 1 do 4 ugljikova atoma, npr., octena kiselina, koje su nesupstituirane ili supstituirane, npr., sa halogenom kao klorooctena kiselina, kao što su zasićene ili nezasićene dikarboksilne kiseline, npr., oksalna, malonska, sukcinska, maleinska, fumarna, ftalna ili tereftalna kiselina, kao što su hidroksikarboksilne kiseline, npr., askorbinska, glikolna, mliječna, maleinska, vinska ili citratna kiselina, kao što su amino kiseline (npr., asparaginska ili glutaminska kiselina ili lizin ili arginin), ili benzojeva kiselina, ili sa organskim sulfonskim kiselinama, kao što su (C 1 -C 4 ) alkil ili arilsulfonske kiseline koje su nesupstituirane ili supstituirane, npr., halogenom, npr., metil- ili p-toluen sulfonska kiselina. Mogu se formirati odgovarajuće soli uz dodatak kiseline, ako se želi, ako imaju dodatni prisutni bazični centar. Spojevi formule I koji imaju najmanje jednu kiselu skupinu (npr., COOH) mogu također tvoriti soli sa bazama. Prikladne soli sa bazama su, npr., metalne soli, kao što su soli alkalijskih ili zemnoalkalijskih metala, npr., natrijeve, kalijeve ili magnezijeve soli, ili soli sa amonijakom ili organskim aminom, kao što su morfolin, tiomorfolin, piperidin, pirolidin, mono, di ili tri-niži alkilamini, npr., etil, tert-butil, dietil, diizopropil, trietil, tributil ili dimetil-propilamin, ili mono, di ili trihidroksi niži alkilamin, npr. mono, di ili trietanolamin. Dalje se mogu tvoriti odgovarajuće interne soli. Također su uključene soli koje su neprikladne za farmaceutske primjene, ali koje se mogu koristiti, npr., za izolaciju ili pročišćavanje slobodnih spojeva formule I ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Poželjne soli spojeva formule I koje sadrže baznu skupinu uključuju monohidrokloride, hidrogensulfate, metansulfonate, fosfate, nitrate ili acetate. Poželjne soli spojeva formule I koje sadrže kiselu skupinu uključuju natrijeve, kalijeve i magnezijeve soli i farmaceutski prihvatljive organske amine. Termin "modulator" odnosi se na kemijski spoj koji ima mogućnost da poveća (npr., "agonistička" aktivnost) ili djelomično poveća (npr., "djelomična agonistička" aktivnost ili inhibira (npr., "antagonistička" aktivnost ili "inverzna agonistička" aktivnost) funkcionalna svojstva biološke aktivnosti ili procesa (npr., enzimska aktivnost ili vezanje za receptor); takva povećanja ili inhibicija mogu imati utjecaj u odvijanju specifičnog događaja, kao što je aktivacija staze signalne transdukcije, i/ili se mogu očitovati samo u određenim tipovima stanica.

5 Termin "bioaktivni metabolit" kao što se ovdje upotrebljava, odnosi se na bilo koju funkcionalnu skupinu koja sadrži spoj formule I sa otvorenom valencijom za daljnju supstituciju gdje takva supstitucija može, nakon biotransformacije, davati spoj formule I. Primjeri takvih funkcionalnih skupina bioaktivnih metabolita uključuju, ali bez ograničenja, -OH, -NH ili funkcionalne skupine gdje se vodik može zamijeniti sa funkcionalnim skupinama kao što su -PO 3 H 2, npr., koji nakon biotransformacije daje -OH ili -NH funkcionalnu skupinu spoja formule I. Termin "esteri prolijekova" kao što se ovdje upotrebljava uključuje estere i karbonate koji se formiraju reakcijom jedne ili više hidroksilnih skupina spojeva formule I sa alkil, alkoksi ili aril supstituiranim acilacijskim agensima upotrebom postupaka koji su poznati osobama iz struke za dobivanje acetata, pivalata, metilkarbonata, benzoata i slično. Esteri prolijekova mogu također uključivati, ali bez ograničenje, skupine kao što su fosfatni esteri, fosfonatni esteri, fosfonamidat esteri, sulfatni esteri, sulfonatni esteri i sulfonamidat esteri gdje ester može biti dalje supstituiran sa skupinama koje mogu dati farmaceutsku prednost kao što je, ali nije ograničeno, poželjna topivost u vodi ili in vivo izloženost bioaktivnoj komponenti formule I. Termin "prolijek", kao što se ovdje upotrebljava uključuje funkcionalizaciju bioaktivnog amina- ili spojeva koji sadrže hidroksilnu skupinu za formiranje alkil-, acil-, sulfonil-, fosforil-, ili karbohidrat-supstituiranih derivata. Takvi derivati se formiraj u reakcijom spojeva formule I sa alkilirajućim-, acilirajućim-, sulfonirajućim-, fosforilirajućim reagensima primjenom postupaka koji su poznati osobama iz struke. Alkilacija amina formule I može rezultirati u, ali bez ograničenja, derivatima koji uključuju slobodne jedinice za druge dijelove prolijekova kao što su supstituirani alkoksimetil-, aciloksimetil-, fosforiloksimetil-, ili sulfoniloksimetil- skupine, Alkilacija amina formule I može rezultirati u stvaranju kvaternih aminskih soli koje djelovanjem in vivo osiguravaju bioaktivni agens (npr., spoj formule I). Termin "prolijek", kao što se ovdje upotrebljava uključuje prekursor do spoja formule I, koji nakon bioaktivacije, može tvoriti bioaktivni metabolit formule I. Primjeri takvih prolijekova mogu se pronaći u Design of Prodrugs, urednika H. Bundgaard, (Elsevier, 198) Chapter 1 "Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and Chemical entities" str uključujući podpoglavlje 6 "Ring-Opened derivatives as prodrugs for cyclic drugs" str. 1-. Poželjni prolijekovi sastoje se od spoja formule I gdje je pripadajući hidroksil fosforiliran za dobivanje fosfatnog derivata. Takav prolijek može također uključivati slobodnu skupinu između spoja formule I i fosfatne skupine, kao što je metilenoksi skupina. Postupci za dobivanje takvog prolijeka iz spoja formule I poznati su osobama iz struke i spomenuti su u niže navedenim referencama. Poželjni prolijekovi također se sastoje iz spoja formule I gdje je pripadni amin, kao što je piridin skupina, alkilirana sa skupinom, kao što je metil- ili aciloksimetilen-, za dobivanje iona kvaterne amonijeve soli. Postupci za dobivanje takvog prolijeka iz spoja formule I poznati su osobama iz struke i spomenuti su u niže navedenim referencama. Prolijek je bilo koji spoj koji se in vivo može konvertirati za osiguravanje bioaktivnog agensa (npr., spoj formule I). U struci su dobro poznati različiti oblici prolijekova. Detaljan opis derivata prolijekova i prolijeka opisani su u: The Practice of Medicinal Chemistrγ, Camille G. Wermuth et al., Ch 31, (Academic Press, 1996); Design of Prodrugs, od urednika H. Bundgaard, (Elsevier, 198); A Textbook of Drug Design and Development, P. Krogsgaard-Larson i H. Bundgaard, eds. Ch, pgs (Harwood Academic Publishers, 1991). Hydrolisis in Drug and Prodrug Metabolism, B. Testa and J.M.Mayer, (Verlag Helvetica Chimica Acta AG, Zürich, Switzeriand; Wiley-VCH, Weinheim, Federal Republic of Germany, 03) Ettmayer, P.; Amidon, G.L.; Clement, B.; Testa, B. "Lessons Learned from Marketed and Investigational Prodrugs" J.Med.Chem. 04, 47 (), Davidsen,.K. et al. "N-(Acyloxyalkil)pyridinium Salts as Soluble Prodrugs of a Potent Platelet Activating Factor Antagonist" J. Med. Chem. 1994, 37 (26), Unos terapeutskog agensa iz izuma uključuje davanje terapeutski učinkovite količine agensa iz izuma. "Terapeutski učinkovita količina" kao što se ovdje upotrebljava odnosi se na količinu terapeutskog agensa za liječenje ili prevenciju stanja koje se može liječiti davanjem sastava iz izuma. Ova količina je količina koja je dostatna za izazivanje uočljivog terapeutskog ili preventivnog, ili učinka ublažavanja. Učinak može uključivati, npr., liječenje ili prevenciju kod stanja koja su ovdje spomenuta. Precizna učinkovita količina kod subjekta ovisit će o veličini subjekta i njegovu zdravlju, prirodi i stupnju stanja koje se liječi, liječnikovim uputama za liječenje i terapeuticima ili kombinaciji terapeutika koja je odabrana za liječenje. 6

6 Razmatraju se svi stereoizomeri spojeva ovog izuma, bilo u smjesi ili u čistom ili pouzdano čistom obliku. Spojevi prikazanog izuma mogu imati centre asimetrije na bilo kojem od ugljikovih atoma uključujući bilo koji od R supstituenata. Radi toga, spojevi formule I mogu postojati u enantiomernim ili dijastereomernim oblicima ili u njihovim smjesama. Kao početni materijali za proces pripreme mogu se koristiti racemati, enantiomeri ili dijastereomeri. Kada se pripremaju dijastereomerni ili enantiomerni produkti, oni se mogu odvojiti primjenom konvencionalnih postupaka, npr., kromatografskim tehnikama, kiralnom HPLC ili frakcijskom kristalizacijom. Spojevi formule I iz izuma mogu se pripremiti kao što je prikazano u slijedećim reakcijskim prikazima i njihovim opisima, jednako kao i postupcima u odgovarajućoj objavljenoj literaturi koje mogu upotrijebiti osobe iz struke. Primjeri reagensa i postupci za ove reakcije pojavljuju se ovdje poslije i u radnim Primjerima. KRATICE U Prikazima, Primjerima i svuda drugdje koriste se slijedeće kratice: Ac = acetil AcOH = octena kiselina Boc = terc-butoksikarbonil DCM = diklorometan DIPEA = N,N-diizopropiletilamin DMF = N,N-dimetilformamid EtOAc = etil acetat Et 3 N = trietilamin Et 2 O = dietil eter HOBt = 1-hidroksibenzotriazol hidrat HPLC = tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti. LAH = litij aluminijev hidrid LC/MS = tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti i masena spektrometrija MeOH = metanol MS ili Mass Spec = masena spektometrija NMR = spektrometrija nuklearne magnetske rezonance PG = zaštitan skupina RT = sobna temperatura TFA = trifluorooctena kiselina THF = tetrahidrofuran min = minuta (minute) h = sat (sati) L = litra ml = mililitar µl = mikrolitar g = gram (i) mg = miligram (i) mol = mol (ovi) mmol = milimol (ovi) nm = nanomol Spojevi prikazanog izuma mogu se pripremiti postupcima koji su prikazani na popratnim prikazima. POSTUPCI PRIPREME 0 60 Spojevi prikazanog izuma mogu se pripremiti primjenom postupaka kao što su oni koji su prikazani na slijedećim prikazima i radnim primjerima, jednako kao i relevantnim postupcima iz objavljenje literature što koriste osobe iz struke. Osobe iz struke mogu odmah izabrati otapala, temperature, tlakove i druge reakcijske uvjete. Početni materijali su komercijalno dostupni, ili ih osobe iz struke mogu odmah pripremiti primjenom poznatih postupaka. Primjeri reagensa i postupaka za ove reakcije pojavljuju se ovdje poslije i u radnim primjerima. Zaštita i uklanjanje zaštitne skupine u postupcima niže mogu se provesti primjenom postupaka koji su općenito poznati u struci (vidjeti, npr., T.W.Greene and P.G.M.Wuts, "Protecting Groups in Organic Synthesis", 3 rd Edition, Wiley, 1999). Opći postupci organske sinteze i transformacija funkcionalne skupine pronađeni su u: Trost, B.M. i Fleming, I., urednici Comprehensive Organic Synthesis: Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry. 1991, Pergamon Press, New York, NY.; March, J., Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure. 4th ed. 1992, New York, NY: John Wiley & Sons; Katritzky, A.R., Meth-Cohn, O. and Rees, C.W., urednici Comprehensive Organic Functional Group Transformations. 1st ed. 199, Elsevier Science Inc., Tarrytown, NY., Larock, R.C., Comprehensive Organic Transformations. 1989, New York, NY: VCH Publishers, Inc.; i tamo navedene reference. Spojevi formula I- 7

7 XVII mogu se konvertirati u druge spojeve formula I-XVII radom osoba iz struke ili kao što je opisano u referencama i ovdje u primjerima. Za sve prikaze i spojeve koji su niže opisani, R 1, R 2, R 3, R 4, R 6, R 7, R 8, R 9 su kao što je opisano za spoj formule I. PRIKAZ I 1 Spojevi formule I prikazanog izuma mogu se sintetizirati iz spojeva formule II ili III gdje je L vodik, halid ili metaloid kao što su kositar, bor i slično primjenom reakcije sa metaloid spojevima kao što je n-butillitij, izopropilmagnezijev klorid, litijev naftalid, LiTMP i slično kao što je opisano, npr., u Mongin, F. i Queginer, G. Tetrahedron, 01, 7(19), ; Turck, A. et al. Tetrahedron, 01, 7 (21), ; pri čemu se dobiva spoj formule II gdje je L metaloid kao što su litij ili magnezij i slično, ili je takav metal zamijenjen za drugi metal, kao što su cink, kositar, paladij i slično. Reakcija sa drugom skupinom L, R 1 -L ili R 2 -L daje spojeve formule II koji mogu dalje reagirati pod sličnim uvjetima pri Čemu se dobiju spojevi formule I. PRIKAZ II Spojevi formule I iz izuma gdje je R -OR 6, -NR 8 R 9 ili -NR 8 S(O) p R 9 mogu se pripremiti kao što je prikazano na Prikazu II spajanjem spojeva formule IV gdje L predstavlja odlazeću skupinu, kao što je klor, fluor, trifluorosulfoniloksi- i slično, sa R -M ili prikladnim prekursorom R -M koji je poznat osobama iz struke gdje je M vodik ili metaloid, kao što su bor, kositar, cink, bakar, kalij, natrij i slično. Ovo spajanje može se opcijski olakšati katalizatorima kao što su Pd(O), Cu(I) i slično. Primjeri ovih transformacija mogu se pronaći ovdje i u: Wagaw, S. And Buchwald, S.L., J. Org. Chem., 1996, 61(21), ; Konno, S. et al., Chem. Pharm. Bull., 1982, (1), 12-17; Abdel-Rahman, R.M. i Ghareb, M., Indian J. Chem., 1987, 26B, ; Saad, H.A. et al., Indian J. Chem., 1998, 37B, ; Wolfe, J.P. et al., Acc. Chem. Res., 1998, 31 (12), ; Wolfe, J.P. et al., J. Org. Chem., 00, 6(4), ; Hartwig, J.F., Acc. Chem. Res., 1998, 31 (12), ; Alonso, D.A. et al., J. Org. Chem., 02, 67(46), 88-94; Mivaura, N. i Suzuki, A., Chem. Rev., 199, 9(7), ; Littke, A.F. et al., J. Am. Chem. Soc, 00, 122(17), ; Nishimura, M. et al., Tetrahedron, 02, 8, ; Miller, J.A. i Farrell, R.P., Tetrahedron Lett, 1998, 39(40), ; Mitchell, T.N., Synthesis, 1992(9), ; Sato, N. i Narita, N., Synthesis, 01(), 11-1; Nannini, G. et al., Eur. J. Med. Chem.-Chimica Therapeutica, 1979, 14(1), 3-60; Matsuda, T. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 01(11), ; Konno, S. et al., Chem. Pharm. Bull., 1982, (1), 12-17; Sato, N. i Narita, N., Synthesis, 01(), 11-1; i tamo navedene reference. Alternativno, spojevi formule IV gdje je L kisik ili dušik mogu se alkilirati, sulfonirati ili acilirati primjenom, npr., baze kao što je K 2 CO 3 i alkilirajućeg sredstva kao što je metiljodid ili aldehid i redukcijskog sredstva kao što je acetaldehid i natrijev cijanoborohidrid i slično kao što je opisano, npr., u Abdel-Magid, A.F.et al. J. Org. Chem. 1996, 61(11), Ili spojevi formule IV gdje je L kisik ili dušik mogu reagirati sa sufonirajućim reagensom kao što je 8

8 fenilsulfonilklorid, C1-S(O) P R 9 i slično, ili aoilacijsim sredstvom kao što je acetil klorid, metilkloroformat i slično, za dobivanje spojeva formule I gdje n označava dvostruku vezu i m označava jednostruku vezu. PRIKAZ 3 1 Spojevi formule V gdje je L odlazeća skupina kao što su klor, fluor, trifluorosulfoniloksi i slično, mogu reagirati sa nukleofilom kisika kao što su kalijeve soli trimetilsilanola ili natrijeva hidroksida i slično za stvaranje spojeva formule I gdje je R O i R 4 je H, ili pod bazičnim uvjetima u prisutnosti sredstva za alkilaciju, takvi međuspojevi se mogu dalje transformirati u spojeve formule I gdje je R O i R 4 je definiran u zahtjevu 1. Primjeri ovih transformacija mogu se pronaći ovdje i u: Nannini, G. et al. Eur. J. Med. Chem.-Chim. Ther. 1979, 14(1), 3-60; Yu et al. J. Med. Chem. 03, 46 (4), i referencama koje su tamo pronađene. PRIKAZ IV Spojevi formule VI mogu se alkilirati sa elektrofilom kao što je supstituirani benzil halid, alkilni halid, arilni halid, heteroaril halid i slično u prisutnosti baze kao što je K 2 CO 3 i otapala kao što je DMF, THF i slično, opcijski upotrebom katalizatora kao što su paladij, bakar i slično, pri čemu se dobiva spoj formule I. Primjeri takvih transformacija mogu se pronaći ovdje i u, Edinondson, S. D., Mastracchio, A., Parmee, E. R. Org. Lett. 00, 2 (8), i referencama koje su tamo navedene. 2 PRIKAZ V Spojevi formule VIII gdje je L odlazeća skupina kao što je klor, fluor, trifluorometilsulfonat i slično, mogu reagirati sa hidrazinom u otapalu kao što je DMF, piridin, THF i slično pri čemu se dobivaju spojevi formule VII kao što je objašnjeno ovdje i u Nannini, G. et al. Eur. J. Med. Chem. -Chim. Ther. 1979, 14 (1), 3-60 i referencama koje su tamo navedene. Spojevi formule VII mogu reagirati sa bis-aktiviranim karbonilom kao što je karboni1-1,1-diimidazol, fosgen i slično, pri čemu se dobivaju spojevi formule VI. 3 9

9 PRIKAZ VI 1 Spojevi formule X su opisani gdje je P definiran kao zaštitna skupina koja je poznata osobama iz struke; brojni primjeri za P mogu se pronaći u, T.W. Greene & P.G.M. Wuts, "Protecting Groups in Organic Synthesis", 3 rd Edition, Wiley, 1999 i postupci za umetanje i uklanjanje takvih zaštitnih skupina su uključeni u spomenutim referencama i tamošnjim citatima. Kada P pripada kisiku, tada je k jednostruka veza i l je dvostruka veza; alternativno, kada P pripada dušiku tada je k dvostruka veza i l je jednostruka veza. Zaštitna skupina, P, u spojevima formule X može se ukloniti pri čemu se dobivaju spojevi formule IX koji se dalje konvertiraju u spojeve formule VIII gdje je L odlazeća skupina kao što je fluor, klor, trifluorometisulfonat i slično. Npr., konverzija spoja formule X gdje je P opcijski supstituirana benzilskupina nastaje sa AlCl 3 u toluenu pri čemu se dobiva spoj formule IX. Tijekom ovih transformacija R 4, R, n i m mogu se konvertirati u druge skupine koje se odabrane iz definicija o R 4, R, n i m. Primjeri sličnih postupaka mogu se pronaći ovdje i u Nannini, G. et al. Eur. J. Med. Chem.-Chim. Ther. 1979, 14 (1), 3-60 i referencama koje su tamo navedene. Spojevi formule IX mogu reagirati sa POCl 3 pri čemu se dobiju spojevi formule VIII gdje je L klor. Primjeri sličnih transformacija mogu se pronaći ovdje i u, Yu et al. J. Med. Chem. 03, 46 (4), i referencama koje su tamo navedene. PRIKAZ VII 2 3 Spojevi formule XII gdje je L odlazeća skupina kao što su klor, brom i slično i P je definiran u opisu prikaza VI mogu se konvertirati u spojeve formule XI primjenom reakcije R 1 -M ili R 2 -M opcijskim kataliziranjem uz prijelazni metal kao što su paladij, bakar i slično. M je definiran kao metaloid kao što su kositar, bor, natrij, litij i slično ili M može biti aktivirani vodik koji je izdvojen nakon spajanja na spojeve formule XII ili XI. Spojevi formule XI mogu reagirati sa R 1 -M ili R 2 -M opcijski primjenom katalizatora od prijelaznog metala kao što su platina, bakar i slično pri čemu se dobivaju spojevi formule X. Primjeri takvih transformacija mogu se pronaći ovdje i u: Matysu, P. et al. Synlett 04, (7), ; Miyaura, N., Suzuki, A. Chem. Rev. 199, 9, ; Karmas, G. i Spoerri, P.E., J. Am. Chem. Soc., 196, 78 (), ; Matsuda, T. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett., 01 (11), ; Konno, S. et al., Chem. Pharm. Bull., 1982, (1), 12-17; Akita, Y., Shimazaki, M. i Ohta, A., Synthesis, 1981 (12), i tamo navedenim referencama. PRIKAZ VIII

10 Spojevi formule XVI gdje je L aktivirana skupina kao što je klor, brom i slično i Z je 0 ili N komercijalno su dostupni ili ih mogu sintetizirati osobe iz struke. Reakcija spoja formule XVI sa spojem formule XV, npr., hidrazinom (gdje je R 4 vodik), u otapalu kao što je DMF, voda ili THF, ili u odsutnosti pomoćnog otapala daje spoj formule XIV. Primjeri takvih transformacija mogu se pronaći ovdje i u: Chambers, R.D.; Musgrave, W.K.R.; Sargent, C.R. J. Chem. Soc. Perkin I, 1981, Spoj formule XIV gdje je R 4 vodik može se konvertirati u spoj formule XIII sa bazom kao što je K2CO 3 u otapalu kao što su DMF, THF i slično. Spoj formule XIII može se dalje transformirati sa bazom, kao što je K 2 CO 3 u otapalima kao što su DMF, THF i slično, pri čemu se dobivaju spojevi formule XII gdje je P definiran u raspravi prikaza VI. PRIKAZ IX 1 2 Spojevi formule I koji sadrže bioaktivni metabolit, kao što je gore definirano, mogu se konvertirati u prolijek formule XVII primjenom postupaka iz struke, uključujući postupke koji su opisani ili na koje se upućuje u gornjim citatima. Primjeri takvih transformacija uključuju, ali bez ograničenja, transformaciju -0H skupine u fosfat primjenom postupaka koji su poznati osobama iz struke i opisani u Haftendorn, R., Ulbrich-Hoffmann, R. Tetrahedron 199, 1 (4), , Design of Prodrugs, urednika H. Bundgaard, (Elsevier, 198) i referencama koje su tamo navedene. Spojevi formule I koji sadrže -NH skupinu mogu se sulfatirati kao što je opisano u Tschamber, T., Streith, J. Heterocycles 1990, (1), 1-9. Spojevi formule I koji sadrže dušikov atom mogu reagirati sa sredstvom za alkiliranje kao što je klororaetilacetat i slično pri čemu se dobiva prolijek koji nakon transformacije može prijeći u spojeve formule I. Standardne zaštitne skupine mogu se upotrijebiti u bilo kojem stupnju sinteze, npr., za manipulaciju funkcionalne skupine za konvertiranje jednog spoja formule I u drugi spoj formule I. Paralelna sinteza može su upotrijebiti u pripremi spojeva, npr., gdje međuspojevi imaju aktivirani reakcijski centar, kao Što je, ali bez ograničenja, dušik triazolona, dušik piridazinona, reaktivni heteroaril klorid za Suzuki kemijske reakcije spajanja ili karboksilna kiselina za kemijske reakcije spajanja amida. PRIMJERI Slijedeći Primjeri služe za bolji prikaz, ali bez ograničavanja, nekih od poželjnih ostvarenja izuma Analitički HPLC postupci koji su upotrebljavani u određivanju u primjerima Analitička HPLC/MS bila je izvedena na Shimadzu LCAS tekućim kromatografima i Waters ZMD masenim spektrometrima primjenom slijedećih postupaka: Osim ako nije drugačije naznačeno, postupak A se upotrebljavao u određivanju međuspojeva ili konačnih spojeva primjera koji su navedeni u primjerima ili u tablicama. Postupak A. Linearni gradijent od 0 do 0% otapala B kroz 4 minute, sa zadrškom od 1 minute kod 0% B; UV vizualizacija na 2 nm Kolona: Phenomenex Luna C x 0 mm Protok: 4 ml/min Otapalo A: 0.2% fosfatna kiselina, 90% voda, % metanol Otapalo B: 0.2% fosfatna kiselina, 90% metanol, % voda 11

11 PRIMJER 1 Priprema 7,8-Bis(4-klorofenil)-2-mβtil-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-diona PRIMJER 1A Priprema 4,-Dikloro-l,2-dihidropiridazin-3,6-diona 1 U tikvicu okruglog dna dodani su voda (170 ml) i sol hidrazin dihidroklorid (41.9 mg, mmol). Otopina je dovedena do refluksa i u obrocima je dodan dikloromandelinski anhidrid (66.6 mg, mmol). Reakcijska smjesa je miješana na refluksu kroz min. Nakon ovog vremena, otopina je ohlađena na sobnu temperaturu i krutina je sakupljena filtracijom pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 4,-dikloro-1,2-dihidropiridazin-3,6-dion (6 mg, 90% prinos) kao bijela krutina. MS (M+1)=181.0 PRIMJER 1B Priprema 2-Benzil-6-(benziloksi)-4,-dikloropiridazin-3(2H)-ona 2 U tikvicu okruglog dna dodani su 4,-dikloro-l,2-dihidropiridazin-3,6-dion ( mg, 73.8 mmol), DMF (0 ml), kalijev karbonat (.36 mg, mmol) i benzilbromid (1.14 mg, 88.6 mmol). Reakcijska smjesa je miješana na 0 C kroz 6 sati i tada miješana na sobnoj temperaturi tijekom noći. Nakon ovog vremena reakcijska smjesa je izlivena u smjesu voda: heksan, 1:1 (0 ml). Rezultirajuća smjesa je miješana na sobnoj temperaturi kroz 1 sat. Formirao se čvrsti talog i talog je sakupljen filtracijom pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 2-benzil-6-(benziloksi)-4,- dikloropiridazin-3(2h)-on (23.9 mg, 90% prinos) kao svijetlo žuta krutina. 1 H(DMSO-D6) 7.4 (m, 2H), 7.3 (m, 4H), 7. (m, 4H),.26 (s, 2H),.17 (s, 2H). PRIMJER 1C Priprema 2-Benzil-6-(benziloksi)-4,-bis(4-klorofenil)piridazin-3(2B)-ona 3 U tikvicu okruglog dna dodani su 2-benzil-6-(benziloksi)-4,-dikloropiridazin-3(2H)-on ( mg,.4 mmol), 4-klorofenilborna kiselina (19.07 mg, mmol), 2N otopina natrijeva karbonata (124.7 ml, mmol), toluen (0 ml) i Pd(PPh 3 ) 4 (3.2 mg, 2.77 mmol). Reakcijska smjesa je zagrijavana na 0 C kroz 36 sati. Nakon ovog vremena otopina je ohlađena na sobnu temperaturu i odvojen je organski sloj. Organski sloj je ispran sa vodom (0 ml), zasićenom vodenom otopinom NaCl (0 ml). Organski sloj je osušen (MgSO4), filtriran i koncentriran. Sirovi materijal je rekristaliziran iz metanola ( ml) na -2 C. Krutina je sakupljena filtracijom pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 2-benzil-6-(benziloksi)-4,-bis(4-klorofenil)piridazin-3(2H)-on, (19. mg, 70% prinos) kao svijetlo žuta krutina. MS (M+H) =

12 PRIMJER 1D Priprema 4,-Bis (4-Klorofenil)-1,2-dihidropiridazin-3,6-diona U tikvicu okruglog dna dodani su 2-benzil-6-(benziloksi)-4,-bis(4-klorofenil)piridazin-3(2H)-on (1. mg,.21 mmol), toluen (70 ml) i aluminijev klorid (.08 mg, 7.4 mmol). Reakcijska smjesa je zagrijavana na 90 C kroz 2 sata. Nakon ovog vremena reakcijska smjesa je ohlađena na 0 C i u smjesu je polagano dodavana voda (0 ml). Otopina je ekstrahirana sa etil acetatom (3L). Organski sloj je ispran sa vodom (0 ml) i zasićenom vodenom otopinom NaCl (0 ml). Organski sloj je osušen (MgSO4), filtriran i koncentriran. Spoj iz naslova, 4,-bis(4- klorofenil)-1,2-dihidropiridazin-3,6-dion dobiven je kao krutina i upotrebljavao se bez daljnjeg pročišćavanja. MS (M+H) = 3.9, PRIMJER 1D Priprema 3,6-Dikloro-4,-bis(4-klorofenil)piridazina 1 2 Spoju 4,-bis(4-klorofenil)-1,2-dihidropiridazin-3,6-dionu do kapa van j em je dodan POCl 3 (0 ml). Rezultirajuća reakcijska smjesa zagrijavana je na temperaturi refluksa kroz 2 sata. Reakcijska smjesa je ohlađena na početnu vrijednost. Nakon ovog vremena POCl3 je uklonjen pod smanjenim tlakom. Ostatku je polagano dodan led ( mg) nakon čega je uslijedio polagani dodatak vode ( ml). Formiran je kruti talog koji je tada sakupij en filtracij om pri čemu se dobiva produkt kao tamna krutina. Sirovi produkt je otopljen u CH 2 Cl 2 ( ml) i otopina je filtrirana kroz Celit ( ml). Filtrat je sakupljen i koncentriran pri čemu se dobiva smeđa krutina. Sirova krutina je rekristalizirana iz CH 2 Cl 2 ( ml) i heksana (00 ml) pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 3,-dikloro-4,-bis(4-klorofenil)piridazin kao bež krutina (.0 mg, 4% za dva koraka). MS; (M+H) = 368., 370. PRIMJER 1E Priprema 1-(6-Kloro-4,-bis(4-klorofenil)piridazin-3-il)hidrazina U tikvicu okruglog dna dodani su 3,-dikloro-4,-bis(4-klorofenil)piridazin (4. mg, 12.2 mmol), piridin ( ml) i hidrazin monohidrat (1.494 mg,.49 mmol). Reakcijska smjesa je zagrij avana na 1 C kroz 1 sat. Nakon ovog vremena reakcijska smjesa je ohlađena na sobnu temperaturu. Dodana je voda (400 ml) i krutina je istaložena. Otopina je filtrirana i krutina je sakupljena i osušena strujanjem zraka tijekom noći pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 1-(6- kloro-4,-bis(4-klorofenil)piridazin-3-il)hidrazin (3.7 mg, 83% prinos) kao krutina. MS (M+H)=364.9 PRIMJER 1F Priprema 6-Kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona 3 40 U tikvicu okruglog dna dodan je THF (0 ml) i karbonildiimidazol (CDI) (8.11 mg, 0 mmol). Nakon što je CDI kompletno otopljen, dodan je 1-(6-kloro-4,-bis(4-klorofenil)piridazin-3-il)hidrazin (3.6 mg, mmol) u četiri obroka kroz minuta. Reakcijska smjesa je miješana na sobnoj temperaturi kroz 2 sata. Nakon ovog vremena reakcijska smjesa je izlivena u vodu (0 ml). Otopina je filtrirana pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 6-kloro-7,8-bis(4- klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2h)-on (3.6 mg, 92% prinos) kao krutina. MS(M+H)-390.9, 392.9; 1 HNMR (DMSO-D6) (m, 4H), 7.28(m, 4H). 13

13 PRIMJER 1G Priprema 6-Kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-2-metil-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona U tikvicu okruglog dna dodani su 6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-2-metil-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-on (10 mg, mmol), DMF ( ml), kalijev karbonat (0.64 mg, 4.62 mmol) i jodometan (0.89 mg, 6.1 mmol). Reakcijska smjesa miješana je na sobnoj temperaturi kroz 4 sata. Nakon ovog vremena smjesi je dodana voda (0 ml) i istaložena je krutina. Krutina je sakupljena filtracijom pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-2-metil- [l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2h)-on (1.1 mg, 89% prinos). MS(M+H)=404.9, 406.9; 1 HNMR(DMSO-D6) 7.42 (m, 4H), 7.28(m, 4H), 3.6(s, 3H). 13 CNMR (DMO-D6) 147.9, , , 13.1, 133.9, , 131.8, 131.6, 131., , , , PRIMJER 1H Priprema 7,8-Bis(4-klorofenil)-2-metil-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-diona 1 2 U tikvicu okruglog dna dodan je 7,8-bis(4-klorofenil)-2-metil-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-dion (1.2 mg, 3.29 mmol), THF (1 ml) i kalijev trimetilsilanolat (1.7 mg, 13.2 mmol). Reakcijska smjesa je zagrijavana na temperaturi refluksa kroz 2 sata. Reakcijska smjesa tada je ohlađena na sobnu temperaturu i otopina je koncentrirana pod smanjenim tlakom. Ostatak je obrađen sa vodom ( ml) i ph je podešen na primjenom 1N HCl. Rezultirajućoj otopini dodani su etil acetat (1 ml) i heksani (1 ml) i otopina je miješana kroz min. Talog je sakupljen filtracijom pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 7,8-bis(4-klorofenil)-2-metil-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-dion (1.2 mg, 9%) prinos kao žuta krutina. MS(M+H)= H-NMR(DMSO-D6) (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.29 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.1 (d, 2H), 3.46 (s, 3H). PRIMJER 2 Priprema 7,8-Bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-dion 3 U tikvicu okruglog dna dodani su 6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-on (0 mg, 0.26 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primjeru 1F, THF ( ml) i kalijev trimetilsilanoat (132 mg, mmol). Reakcijska smjesa je miješana na 8 C kroz 1. sati. Nakon ovog vremena otopina je ohlađena na sobnu temperaturu i reakcijska smjesa je razrijeđena sa vodom (2 ml). Primjenom 1N HCL ph vrijednost otopine je podešena na 4. Rezultirajuća otopina je ekstrahirana sa EtOAc (3 ml). Udruženi organski slojevi bili su isprani sa vodom ( ml), zasićenom otopinom NaCl ( ml). Organski slojevi su osušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrirani pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-dion (90 mg, 9% prinos) kao žuta krutina. MS (M+H)=372.9 PRIMJER 3 Priprema 2-(4-(Trifluorometil)benzil)-6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona 40 Otopini 6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona (70 mg, 1.92 mmol), koja je pripremljena kao što je opisano u Primjeru 1F, u DMF ( ml) dodani su K 2 CO 3 (270 mg, 1.9 mmol) i 4-(trifluorometil)benzil bromid (4 60 mg, 1.92 mmol). Reakcijska smjesa je miješana na 7 C kroz 1 sat pod argonovom atmosferom. Ohlađena je na sobnu temperaturu, razrijeđena sa vodom (0 ml) i krutina je sakupljena filtracijom. Krutina je isprana sa vodom (2 ml x 2) i osušena u vakuum pećnici na 0 C tijekom noći pri čemu se dobiva spoj iz 14

14 naslova, 2-(4-(trifluorometil)benzil)-6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-on, (990 mg, 94%) kao žuti prah. HPLC : 4.23 min; MS: M+H = 49. PRIMJER 4 Priprema 2-(4-(Trifluorometil)benzil)-7,8-bis(4-klorofenil)-6-(metilamino)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona 1 Smjesa 2-(4-(trifluorometil)benzil)-6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona (0 mg, mmol), koja je pripremljena kao što je opisano u Primjeru 3 i 2.0 M metil amina u THF (0.4 ml) miješana je na temperaturi refluksa kroz 12 sati. Nakon ovog vremena reakcijska smjesa je ohlađena na sobnu temperaturu i razrijeđena sa vodom ( ml). Rezultirajuća otopina je ekstrahirana sa EtOAc ( ml x 3). Spojeni organski slojevi isprani su sa vodom ( ml x 2) nakon čega je uslijedila zasićena vodena otopina NaCl ( ml x 2). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentriran pri čemu se dobiva sirovi produkt. Sirovi produkt pročišćen je preparativnom reverznom fazom HPLC pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 2-(4-(trifluorometil)benzil)-7,8-bis(4-klorofenil)-6-(metilamino)- [1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-on (31. mg, 64%) kao blijedo žuta krutina. HPLC: 4.17 min; MS: M+H = 44; 1 HNMR (CDCl 3 ), ppm: 7. (2H, d, J=.0 Hz), 7.47 (2H, d, J=.0 Hz), 7.34 (2H, d, J=.0 Hz), 7.21 (2H, d, J=.0 Hz), 7.09 (2H, d, J=.0 Hz), 7.0 (2H, d, J=.0 Hz),.18 (2H, s), (1H, br), 2.9 (3H, d, J=.0 Hz). PRIMJER Priprema 7,8-Bis(4-klorofenil)-2-metil--((-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin- 3,6(2H,H)-diona PRIMJER A Priprema 2-(Klorometil)--(trifluorometil)piridina 2 Smjesa (-(trifluorometil)piridin-2-il)metanol HCl soli (293 mg, 1.4 mmol) i SOCI2 (1. ml) miješana je kroz minuta. Nakon ovog vremena otopina je koncentrirana pod smanjenim tlakom pri čemu se dobiva spoja iz naslova, 2-(klorometil)--(trifluorometil)piridin HCl sol. PRIMJER B Priprema 7,8-Bis(4-klorofenil)-2-metil--((-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin- 3,6(2H,H)-diona 3 40 Otopina 8-bis(4-klorofenil)-2-metil-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-diona (4 mg, 1.11 mmol), koja je pripremljena kao što je opisano u primjeru 1,2-(klorometil)--(trifluorometil)piridin(1.4 mmol), K 2 CO 3 (6 mg, 4. mmol) u DMF ( ml) zagrijavana je na 80 C kroz 1 sat. Nakon ovog vremena otopina je ohlađena na sobnu temperaturu i razrijeđena sa etil acetatom. Rezultirajuća otopina tada je isprana sa vodom. Organski sloj je osušen iznad Na2SO 4, filtriran i koncentriran pod smanjenim tlakom. Sirovi produkt pročišćen je primjenom kolonske kromatografije uz silica gel primjenom automatiziranog sustava eluiranjem sa gradijentom (-0% Etil acetat-heksani) pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 7,8-bis(4-klorofenil)-2-metil--((-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b] piridazin-3,6(2h,h)-dion (1 mg, 18%) kao žuta krutina. Pored toga, O-alilirani produkt, 7,8-bis(4-klorofenil)-2- metil-6-((-(trifluorometil)piridin-2-il)metoksi)-,6-dihidro-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2h)-on dobiven je HPLC 1

15 odvajanjem sirovog produkta. 7,8-Bis(4-klorofenil)-2-metil--((-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-[1,2,4]triazolo [4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-dion: MS, M+H=46; 1 H NMR (CDCl 3 ) δ 8.7(1H), 7.90(IH), 7.49(1H), 7.29(2H), (4H), 7.(2H), 6.1(2H), 3.3(3H). PRIMJER 6 Priprema 7,8-bis(4-klorofenil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-diona PRIMJER 6A Priprema 6-Kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksilmatil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona 1 Otopini 6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona (0.43 g, 1.1 mmol), pripremljena kao što je opisano u primjeru IP, u DMF (8 ml) na 0 C dodan je NaH (7 mg, 1.4 mmol). Nakon 1 min dodan je 2-trimetilsililetoksimetil klorid (0.2 ml, 1.4mmol). Reakcijska smjesa je miješana kroz pola sata na sobnoj temperaturi. Nakon ovog vremena dodana je voda. Rezultirajuća otopina je ekstrahirana sa etil acetatom. Organski sloj je osušen iznad Na 2 SO 4 i koncentriran pod smanjenim tlakom. Sirovi materijal je pročišćen kolonskom kromatografijom uz silica gel primjenom automatiziranog sustava eluiranjem sa gradijentom (Etil acetat-heksani) pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 6-kloro-7,8-bis{4-klorofenil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-on kao žuta pjena (0.48 g, 84%). PRIMJER 6B Priprema 7,8-bis(4-klorofenil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,B)-diona 2 Otopini 6-kloro-7,8-bis(4-klorofenil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3(2H)-ona (0.48 g, 0.92 mmol) u THF ( ml) dodan je kalijev trimetilsiloksid (TMSOK) (0.2 g, 1.9 mmol). Otopina je zagrijavana do refluksa. Nakon pola sata otopina je ohlađena na sobnu temperaturu i dodana je 1N otopina HCl sve dok reakcijska smjesa nije zakiseljena. Rezultirajuća otopina je ekstrahirana sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi osušeni su iznad Na2SO 4, filtrirani i koncentrirani pod smanjenim tlakom. Sirovi produkt je pročišćen primjenom kolonske kromatografije uz silica gel primjenom automatiziranog sustava pri čemu se dobiva spoj iz naslova, 7,8-bis(4- klorofenil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-[1,2,4]trlazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2h,h)-dion, (260 mg, 6%) kao žuta krutina. PRIMJER 7 Priprema -(4-(trifluorometil)benzil)-7,8-bis(4-klorofenil)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3,6(2H,H)-diona 3 16