: ک ی ن و ر ت ک ل ا ت س پ

3 9 3 1 م و د ه ر ا م ش م ه د ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب ر ک ی م ه ی ر ش ن 3 4 1 13 5 : 9 2 ی پ ا ی پ ر د ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب ی ر و ت س ا پ س و ک و ک و ل ی ف ا ت س ا ی ر ت ک ا ب ن ی م ا 2 *1 ی ن ی س ح ن ی م ا ر و خ ی ش ه د ن ا ی ز ر ب ل ا 1 س ا ن ش ر ا ک ن ی و ز ق ) ه ر ( ی ن ی م خ م ا م ا ی ل ل م ل ا ن ی ب ه ا گ ش ن ا د ی ز ر و ا ش ک ی ژ و ل و ن ک ت و ی ب د ش ر ا ن ی و ز ق ) ه ر ( ی ن ی م خ م ا م ا ی ل ل م ل ا ن ی ب ه ا گ ش ن ا د ی ز ر و ا ش ک ی ژ و ل و ن ک ت و ی ب ه و ر گ ی م ل ع ت ئ ی ه و ض ع 2 ن ا ر ی ا ن ی و ز ق ن ا ر ی ا ن ی و ز ق 2 9 3 1 ر و ی ر ه ش 6 : ت ف ا ی ر د خ ی ر ا ت 2 9 3 1 ن ا ب آ 9 2 : ش ر ی ذ پ خ ی ر ا ت ه د ی ک چ ی ا ه د ن و ی پ د ن ر د ا ق ه ک د ن ت س ه ا ه م ی ز ن آ ز ا ی ه و ر گ ) DNase( ا ه ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د د ن ر ا د ز ا ئ ل ک و ن ی ا ه م ی ز ن آ ه د ن ز ت ا د و ج و م م ا م ت ی ا ه ن و م ز آ و 16S rrna ر گ ن ا ش ن ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب Staphylococcus pasteuri ی ر ت ک ا ب د ن ن ک ش ب ا ر DNA ل و ک ل و م ر ت س ا ی د و ف س ف ی س ک ا د ی ا ه م ی ز ن آ ت ی ل ا ع ف د ی س ر ت ب ث ه ب NCBI/EMBL ه ا گ ی ا پ ن ژ ک ن ا ب ر د KC170006 ی س ر ت س د ه ر ا م ش ا ب و ی ی ا س ا ن ش ی ی ا ی م ی ش و ی ب ی س ر ر ب حلقوی و ی ط خ DNA ی و ر م ی ز ن آ ت ی ل ا ع ف ی ر ت م و ت و ف و ت ک پ س ا ش و ر ه س ا ب ه د م آ ت س د ب S pasteuri ی ر ت ک ا ب ر د ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ر ا ر ق ی س ر ر ب د ر و م ا ه م ی ز ن آ ت ی ل ا ع ف ی و ر ز ی ن Mg 2 Ca 2 و Mn 2 Ca 2 Mg 2 کاتیونهای و NaCl ت ظ ل غ ph ی ا ه ر ا م ی ت ر ث ا د ش ش ر ب ر د ی م ی ز ن آ ی ا ه ی س ر ر ب ت س ا ی و ق ل ح DNA ل و ک ل و م ه ن ا گ ی ش ر ب ه ب ر د ا ق S pasteuri ی ر ت ک ا ب ز ا حاصل DNase م ی ز ن آ ت ف ر گ ن ی ا pet21a () د ی م س ال پ ش ر ب ش ی ا م ز آ ر د ه ک ی ر و ط ه ب د ن ک ی م ل م ع ی ص ا ص ت خ ا ت ر و ص ب م ی ز ن آ ن ی ا ه ک د ا د ن ا ش ن حلقوی DNA ه ب ط و ب ر م ش ر ا ز گ ن ی ل و ا ن ی ا د ر ا د ن ا ر ه ت ش ر و د DNA ل و ک ل و م ش ر ب ی ی ا ن ا و ت DNase م ی ز ن آ ن ی ا د ا د ش ر ب ا ر ه ط ق ن ک ی ا ه ن ت م ی ز ن آ ر و ض ح ر د و ph 5/5 ر ال و م 0/6 ت ظ ل غ ا ب NaCl ر و ض ح ر د م ی ز ن آ ت ی ل ا ع ف ن ی ر ت ش ی ب ت س ا S pasteuri ی ر ت ک ا ب در DNase ی ا ه م ی ز ن آ د ش ه د ه ا ش م 1 mm ت ظ ل غ ا ب Mg 2 Ca 2 ی ا ه ن و ی ت ا ک ن ا م ز م ه 16S rrna DNase ت ی ل ا ع ف Staphylococcus pasteuri ی ر ت ک ا ب : ی د ی ل ک ت ا م ل ک 8 2 0 0 6 1 1 0 9 3 3 : ن ف ل ت ن ا ر ی ا ن ی و ز ق خ ی ش ه د ن ا ی ز ر ب ل ا ن ی م ا : ل و ئ س م ه د ن س ی و ن ن ی و ز ق ) ه ر ( ی ن ی م خ م ا م ا ی ل ل م ل ا ن ی ب ه ا گ ش ن ا د ی ز ر و ا ش ک ی ژ و ل و ن ک ت و ی ب ه و ر گ : س ر د آ aminalborzian@yahoocom : ک ی ن و ر ت ک ل ا ت س پ

9 2 ی پ ا ی پ 3 9 3 1 م و د ه ر ا م ش م ه د ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن 4 4 1 ه م د ق م ل ا س ر ر ر ر ر ر د ن ا ر ا ک م ه و و و و و و و ی ن س چ 9 9 1 ا ر Staphylococcus pasteuri س ن ج د ن د ر ک شناسایی Staphylococcus 2 ی ا ر ا د س و ک و ک و ل ی ف ا ت س ا ت ف ه ز ا ه 3 ن و گ ه 9 ن و گ سلولللهای است ه ه ه ه ه ه ی و س ن ی ا ت ب ث م گرم کوکسی غیرمتحرک ا ز ر و پ س ا ر ی غ ی ر ت ک ا ب 5 1 5 4 ο C ی ا ه ا م د ر د ی ی ا ت ر ا ه چ و جفت فرد ت ر و ص ب ز ا د ی س ک ا ت ب ث م ز آ ه ه ه ر و ا و ز ا ل ا ت ا ک د ن ک ی م د ش ر ه ج ر د و ز ر ا ک ا س ز ک و و و و و و و و ل گ ی ا ه د ن ق ف ر ص م ر د و ت س ا ی ی ف ن م ) )8 د ن ک ی م د ی ل و ت د ی س ا ز و ت ک و ر ف ن ی ل و ا ) DNase( ( ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ی ا ه م ی ز ن آ ی ی ا ی م ی ش و ی ب ت ر و ص ب 9 6 9 1 ل ا س ر د د ر و م ی س ر ر ب ر ا ر ق ر ا ب ت ی م ه ا ز ا ی ص ا ص ت خ ا ز ا ئ ل ک و ن و د ن ا ای ه زیم ن آ ) )3 د ن ت ف ر گ ن و ن ک ا ت و ند ت س ه ر ا د ر و خ ر ب DNA گ ن ی ن و ل ک ر د ی ا ه ژ ی و ت ف ا ی ز ی ا م ت م ی ش ر ب ی ل ا و ت 0 8 2 د و د ح ه د ش ه ع ل ا ط م و ج و ت ر ذ گیاهان در ا ه ز ا ئ ل ک و ن ت س ا ) 4 3 ( ( ( ( ) 9 2 و 0 1 ( د د ن ا ه ه د ش ا د ج ت ر ذ ع ع ا و ن ا ی خ ر ب ی ا ه ه ش ی ر ز ا II ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ز ا ئ ل ک و ن ن ی ا گردید خالص نسبی ر و ط ه ب و ا ت 5/4 7/0 د ا د نشان فعالیت ی ل و ک ل و م ن ز و ا ب ت ر ذ ه ش ی ر ت ن ج و م ه م ی ز ن آ ن ی ا د م آ ت س د ب ر د ز ا ر گ ی د م ی ز ن آ ک ی ت ی ل ا ع ف 6/2 ph ه ن ی ه ب ph ر د ر ا ز ه 1 3 ن و ت ل ا د ن ا ش ن ه ن ی ه ب د و ب DNA و RNA ی اا ا ههههههه ته ش ر ز ی ل و ر د ی ه ه ب ر د ا ق و د ا د د ی س ا ک ی ل ر ب ی ژ ا ب و ج ه د ش ف ص ن ر ذ ب ن د ر ک ه ب و ک ن ا ) 0 1 ( ت ف ا ب ر د ا ر ا ه ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د و ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ت ی ل ا ع ف ی ا م د ر د ا ه ش ن ک ا و ن ی ا د ا د ش ی ا ز ف ا ن ر و ل آ ه ج ر د 5 5 د ح ه ب 6 ph ی اک ر و خ چ ار ق ) 9 2 ( ( ( ( )) ( ( ( ( ( د ی س ر د و خ ه ن ی به ز ی ن Lentinus edodes ش ر ب ا ب ا ه م ی ز ن آ ن ی ا د ن ک می و ن و م ن ی ن ا و گ ز ا ئ ل ک و ن و د ه ت ش ر د ی ل و ت ) 5GMP( ( ( ( ت ا ف س ف Le1 ک ی DNA د ی ل و ت Le3 و ی ا ه ت ن ا و ) 8 1 ( د د ن ن ک ممی م Rhizoctonia stolonifer چ ر ا ق ر د ی ر گ ی د ی ا ه ز ا ئ ل ک و ن ی ا ه ن ن و ی ر ی ثث ث أ ت ت ح ت ه ک ت س ا شده بررسی ی ز ل ف ر ا ر ق ز ا آنزیم این د ر ی گ می ت س ا ل و ل س ن و ر ب ع و ن ک ی شدهانددد بررسی ز ی ن حشرات در ا ه ز ا ئ ل ک و ن ی ز ا ئ ل ک و ن ا ب ) 2 3 ( ( ( ( (( ( ( ه ن ی ه ب ph ت ی ل ا ع ف ه ه ه ه ر ش ح لاور محتوای ر د 0 1 5/ شد شناسایی ه ج ر د 5 5 ی ا م د ر د Spodoptera litura ع و ن ت DNase ی ا ه م ی ز ن آ )2( ممممممی م م م م م ن ا ش ن ی ی ا ل ا ب ر ا ی س ب ی ر ت ک ا ب ز ا ه د م آ ت س د ب DNase م ی ز ن آ ل ا ث م ی ا ر ب د ن ه د ر ی ا س ز ا Micrococcus pyogenes ی ا ر ب م ی ز ن آ ن ی ا ت س ا ت و ا ف ت م ا ا ا DNaseه ن و ی به فعالیت ر ا ی س ب Ca 2 و ال ا ب ی ا ه ا م د ه ب ی ا ه ظ ح ال م ل ب ا ق ر و ط ب و د ر ا د ز ا ی ن ph 8/6 ت س ا ت م و ا ق م ن ژ ک ی ا ه ن ت ن و ن ک ا ت ) )9 ( ی ر ت ک ا ب ر د و ه د ش ی س ر ر ب S aureus ه ن و گ ) 3 2 ( ت س ا ه د ش ن و ل ک ر د ز ا ئ ل ک و ن E coli ن ژ شدهترین حفاظت ریبوزومی RNA ه ب ط و ب ر م ن ژ ی ی ی ب ا ی ی ی ی ل ا و ت rrna ن ژ ) 6 3 ( ( ( ( ( ( ( ت س ا ل و ل س ر ه ن و ر د مختلف موجودات ز ا شده نوکلئوتیدی ن ی ا د ن ه د می ن ا ش ن شباهت توجهی ه ک بدست توالللیهای م ه ا ب د ن ن ا و ت می ه د آم ت ر و ص ه ب و ه د ش ه س ی ا ق م ک ی ن ژ و ل ی ف ی م و ن و س ک ا ت ن ی ی ع ت ی ا ر ب ی ل ا و ت ن ی ا ر ب ا بن د و ش ه اد ف ت س ا ا ه اکتررری ب ل م ا ک ت ط ب ا و ر د ن ا و ت می و ه ب ل ب ا ق ر ر ر و ط ت س ا ی ن ع م ن ی ا ه ب ف ل ت خ م موجوددددددددددات از ی ا ههههههه ه ه هه ه ه د ر ت س گ ن ی ب ع و ن ت ن ی م خ ت 16S rrna ن ا ش ن ا ر اا ا مممممه م سم ی ن ا گ ر ا و ر ک ی م ن ی ب ی ک ش ز پ و ی ط ی ح م ی ر ت ک ا ب ر ا ز ه 16S rrna ی ل ا و ت د ه د ی ژ و ی ب ت ا نن ع ال ط ا ی نن ل م ز نن ک ر م م م ت ی ا س ر د NCBI (http://wwwncbinlmnihgov) ت س ا د و ج و م ) 6 3 ( د ر ا د ل و ط د ی ت و ئ ل ک و ن 0 0 5 1 ر ظ ن د ر و م ی ل ا و ت ضر ا ح ق ی ق ح ت ف د ه ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب ی س اک د ی ز ک ا خ ی ر ت ک ا ب ) DNase( ( ( ( ( ( ( ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ن ی ل و ا ن ی ا ت س ا Staphylococcus pasteuri ش ر ا ز گ ه ن و گ ن ی ا ر د ریییییییبونوکلئازی داکسی ت ی ل ا ع ف د ور م ر د ت س ا ی ر ت ک ا ب

ت) رک ش ی) و ا ح تمام) شامل ی) و ا ح ت) ک ر ش 5 4 1 ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب ا ه ش و ر و د ا و م ی ر ت ک ا ب ی ز ا س ا د ج و ک ا خ ه ن و م ن ی ر و آ ع م ج 1 ی ا ه ه ن و م ن سطحی 0 خاک گرمی سازی رقیق ش و ر ا ب شد برداشته ی ر ت م 1 ق م ع ا ت در سریالی ی 0 ت ن ا س ب آ ر و ظ ن م ه ب ه ک د م آ ت س د ب ن و ی ل ی م ر د ک ی ت ظ ل غ ل ی ر ت س ا ی تر ک ا ب ت ش ک ل و ل ح م ت س ا ب س ا ن م ت ش ک ط ی ح م ی و ر ر ب ک ی ن ی ا ز ا ر رر ر ر ر ر ر رر ر ر ر ر ر یت ل ی ل می Luria ( ( ( آگار LB ) Bertani Broth, Miller, HIMEDIA, M1245 ت د م ه ب ه ج ر د 7 3 ی ا م د ر د و ت ش ک ه ب و ک ن ا هفته یک ف ل ت خ م ی اا ا ییییییییه ی ی ی یی ن و ل ک ه ت ف ه ک ی ت ش ذ گ ز ا د ع ب د ش صفات نظر ز ا ه د م آ ت س د ب ی ک ی ژ و ل و ف ر و م ت س ت د ن ن ا م گرممم باکتریییییهااای شدند بررسی ی ر ت ک ا ب ل ک ش و م ر گ ه ب )Staphylococcus اال ن م ت ح ا ( ل ک ن ش ی و ر ن ک و ت ن ب ث م ا ت ر ث ک ا د ح ص و ل خ ه ب ن د ی س ر ر و ظ ن م ) 1 ل و د ج ( د ن د ش ت ش ک ا و ه ب ا ش م ج ا ر خ ت س ا ل س ن 4 ش ن ک ا و م ا ج ن ا و DNA 16S rrna ه ع ط ق ر ی ث ک ت ر د ط ی ا ر ش ی را ب PCR ن م و ی ن ش و ر ز ا اا ا یه ر ت ک ا ب ز ا DNA ج ا ر خ ت س ا ی ا ر ب ک ی ر و ظ ظ ن م ن ی ا ی ا ر ب ) 8 2 ( شد استفاده ن ا ر ا ک م ه ی ل ی م و و د ی ا ر ب 0 0 0 8 g ر د ی ی ا ی ر ت ک ا ب سلول سوسپانسیون از ر ت ی ل ا ب ا ه ل و ل س ی و ر ع ی ا م ف ذ ح ز ا د ع ب د ش ژ و ی ف ی ر ت ن ا س ه ق ی ق د mm NaCl 001 mm( STE ر ف ا ب ر ت ی ل و ر ک ی م 0 0 4 ه ت س ش ر ا ب و د ) ph:8 و EDTA 1 mm و Tris/HCl01 د ن د ش ب و س ر و د ت د م ه ب 0 0 0 8 g ر د ا اا له ل ل ل ل ل و ل س س پ س ه د ا د ذف ح رویی مایع د ن د ش ر ف با ر ت ی ل و ر ک ی م 0 0 2 ر د ا اا ا ا به ب ب ب و س ر د ی د ر گ و ه ق ی ق د 0 1 mm( TE ph:8 و EDTA 1 mm Tris/HCl 0 5 ه ش ی ش ه ل و ل گ گرم میلی ه ز ا د ن ا ا ب ی ا و د ش ه ف ا ض ا ا ه ب و س ر ه ب ر ت م و ر ک ی م ا ب ه د ش ع ا ب ش ا ( سپس شدند حل 0 0 6 5 2 4 ل ن ف ر ت ی ل و ر ک ی م 0 0 1 ن ی ا ت ی ا ه ن ر د و د ش ه اف ض ا TrisHCl ه ل ح ر م ن ی ا ز ا د ع ب شد ورتکس ه ی ن ا ث 0 6 ت د م ه ب ل و ل ح م ی ا ر ب 0 0 0 3 1 g ر د اا ا هه ن و م ن ت د م ی ا م د ر د ه ق ی ق د 5 ی ی و ر ع ی ا م ز ا ر ت ی ل و ر ک ی م 0 6 1 و شدند سانتریفیوژ درجه ر ا د ق م د ن د ش ل ق ت ن م جدید میکروتیوب ه ب 4 ر ت ی ل و ر ک ی م 0 4 ه د ن ا س ر ر ت ی ل و ر ک ی م 0 0 2 ه ب م ج ح و ه ف ا ض ا ن آ ه ب TE ر ف ا ب ر ا د ق م د ش ه ف ا ض ا ل و ل ح م ه ب م ر ف و ر ل ک ر ر ت ی ل و ر ک ی م 0 0 1 ت د م ه ب 0 0 0 3 1 g ر د ل و ل ح م س پ س و ه د ش ر د ه ق ی ق د 5 ع ی ا م ز ا ر ت ی ل و ر ک ی م 0 5 1 د ن د ش ژ و ی ف ی ر ت ن ا س ه ج ر د 4 ی ا م د ص ل ا خ DNA ن ا و ن ع ب ی ی و ر گردید جدا و ر د ی ا م د ی د ع ب آزمایشششششششهااای برای ه ج ر د 0 2 ت ی م ک و ص و ل خ A 260 A/ 280 سنجی طیف د ش ا ب ا ب د ش ی ر ا د ه گ ن ن ی ی ع ت DNA و 27F ) 8 3 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ی ن ا ه ج ی ا ه ر گ ز ا غ آ ز ا ه د ا ف ت س ا 5AGAGTTTGATCATGGCTCAG3 27F( 1525R )5AAGGAGGTGATCCAACC3 1525R و 16S هههههه ه ه عه ط ق تکثیر برای ) ی ب و ن ج ه ر ک ر و ش ک Bioneer rrna ط ی ا ر ش ش ن ک ا و ق ب ا ط م PCR ت د م ه ب ه ج ر د 4 9 ه ی ل و ا سازی واسرشته ی ا م د د ش ن ی ی ع ت ر ی ز ت د م ه ب و ه ج ر د 49 چرخهها سازی واسرشته ی ا م د ت د م ه ب و ه ج ر د 4 5 ل ا ص ت ا ی ا م د ه ی ن ا ث ه ق ی ق د 3 0 3 ی ا م د ه ی ن ا ث 0 6 2 7 ی ی ا ه ن ر ی ث ک ت ی ا م د و ه ی ن ا ث 0 9 ت د م ه ب ه ج ر د 27 تکثیر 5 3 ش ن ک ا و چرخههای تعداد ه ق ی ق د 0 1 ت د م ه ب و ه ج ر د : ت ف ر ر ا ک ب ر ی ز د ا و م ش ن ک ا و ب و ی ت ر ه ر د د و ب 0 5 ng 0 2 pmol ت ف ر ر گ گ گ گ ز ا غ آ 0 2 pmol و گ ل ا DNA ر گ ز ا غ آ ت ش گ ر ب ت ی ک مستر میکرولیتر 7 و ه ز ی ن و ی د ب آ ر ت ی ل و ر ک ی م 0 1 KCl 0 5 mm PCR % 1 MgCl 2 2 mm ph 9 ا ب TrisHCl 0 1 mm ن و ت ی ر ت ) v/v( ل ر ت ن ک ) و گ ل ا ر ه ز ا ل و م و ر ک ی م 0 0 2 0X 0 1 ی گ ود ل آ عدم تایید ی ا ر ب ) ن ا ر ی ا ن اژ ن ی س ل ر ت ن ک و ز ا ر ی غ ه ب ش ن ک ا و ت ا ب ی ک ر ت م ا م ت ) dntp DNA ت ا ب ی ک ر ت ز ا ر ی غ ه ب س پ د ش م ا ج ن ا ش ن ک ا و ی ر س ر ه ر د ) ا ه ر گ ز ا غ آ ر ی ث ک ت ز ا

ت) خ ا س باز 0 جفت و) 9 2 ی پ ا ی پ 3 9 3 1 م و د ه ر ا م ش م ه د ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن 6 4 1 ی ز ا س ص ل ا خ و ب س ا ن م م ج ح ر د ر ظ ن د ر و م ه ع ط ق ل و ص ح م ص ل ا خ ت ی ک ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب PCR Accuprep شرکت به ی ب ا ی د و د ح آمده بدست ت ک ر ش ت س ی ز و و و پ ا ک ت ی ز ا س توالی برای ) Bioneer 0 5 1 ل و ص ح م شدند ارسسسسسال ت اش د ل و ط ه د ا د ه ا گ ی ا پ ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب شده خوانده توالیهای ی س ر ر ب د ر و م د ی د ر گ ص خ ش م ت س ت ک ی ژ و ل و ی ز ی ف س ن ج و گرفته قرار ه ن و گ و NCBI اا ا ییییییییه ییی ی ری ت ک ا ب و ک ی ژ و ل و ف ر و م ی ا اا ا ا ته تت ت ت ت ت ت ت ت تت ت س ت م گر ز ال ا نن ت ا ک ی ر ت ک ا ات ک ی تر ک ا ب ل شک ی ا ر ب کشت محیط ر د ک م ن د ص ر د ل م ح ت ) 1 ل و د ج ( د ش م ا ج ن ا ن ی ئ ت و ر پ ج ا ر خ ت س ا د ی ی ا تت ت ی ی ا ه ن ی ر د ا ه ب ش و ر ز ا ا ه باکتری ز ا ن ی ئ ت و ر پ ج ا ر خ ت س ا ی ا ر ب استخراج برای ) 4( ( ( ( ( د ش ه د ا ف ت س ا 3 8 9 1 : د ش ل م ع ر ی ز ل ح ا ر م ق ب ط ا ه ری ت ک ا ب ا د ت ب ا کشت محیط ( ر ر ر ا گ آ LB ن ی ئ ت و ر پ ز ا Luria Bertani ل ی ر ت س ا ) Broth, Miller, HIMEDIA, M1245 ه ی ه ت ی ا م د ا ب ر ر ز ی ر ف ر د شده ذخیره ک ت س ا ز ا ا ه ری ت ک ا ب د ش 0 8 ی و ر 2 ت د م ه ب ی ک ی ر ا ت و ه د ش ت ش ک ا اا نه آ ت 4 ع ا س ر د ی ا م د و ه ج ر د 7 3 ی ر ت ک ا ب ز ا س پ س د ش ه ب و ک ن ا ل ی ر ت س ا پ و ل ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب کلون تک ک ی ه ت ف ا ی د ش ر کشت مایع LB ط ی ح م ر د و ه ت ش ا د ر ب د ش ت د م ه ب ی ک ی ر ا ت ه ج ر د 7 3 ی ا م د ا ب شیکر انکوباتور ر د ت ع ا س سپس شد انکوبه 0 1 1 rpm ر و د ا ب ر ک ی ش ی ر ت اک ب ی ا م د د ش ر ه ت ف یا ر و د و ه ج ر د 4 ژ و ی ف ی ر ت ن ا س و ر ک ی م ز ا ه اد ف ت س ا ا ب 4 2 ی ل ی م 0 1 ای ر ب 0 0 0 4 1 rpm با ت ل پ و د ش ه ت خ ی ر ر و د ی ی و ر ع ی ا م د ش ه د ا د ب و س ر ر ت ی ل ه ق ی ق د 2 ه ی ه ت و 50 mm TrisHCl( ی و ا ح TE ر ف ا ب ر ت ی ل ی ل ی م 1 ر د ه د ش م ا د ک ر ه 52 mm NaEDTA و ز ا ه اد ف ت س ا ا ب ) ph 8 ی ر ت ک ا ب ب و س ر ی ا ر ب ا د د ج م گردید حل شدید ورتکس ژ و ی ف ی ر ت ان س ه ق ی ق د ی ر ت ک ا ب ی ا دم ا ب 1 ی ا ر ب 0 0 0 4 1 rpm و ه ج ر د 4 پلت شد ریخته ر و د رویی مایع د ش م ا ج ن ا ر د ل ص ا ح ر ت ی ل ی ل ی م 1 کی م ن ت ا ف فس ر ف با اا ا ب ژ ژ و ی ف ی ر ت ن ا س ا د د ج م د ش ل ح د ی د ش س ک ت ر و ا ب )PBS( د د د ش م ا ج ن ا ه ق ی ق د 1 ی ا ر ب 0 0 0 4 1 rpm و ه ج ر د 4 ی ا م د ی ل ی م 0 1 ر د ل ص ا ح ی ا ه ت ل پ د ش ه ت خ ی ر ر و د ی ی و ر ع ی ا م ت د م ه ب و ه د ش ل ح سرد خالص استون ر ت ی ل ه ی ن ا ث 0 2 4 ی ی ا م د اا ا ب سانتریفیوژ سپس شد انجام شدید ورتکس ع ای م د د ش م م م ا ج ن ا ه ق ی ق د 3 ی ی ی را ب 0 0 0 4 1 rpm و ه ه ج ر د ض ر ع م ر د ا ه ت ل پ و د ش ه ت خ ی ر ر و د ی م ا ر آ ه ب ی ی و ر % 1 SDS ل و ل ح م ر ت ی ل ی ل ی م 1 شدند خشک ا و ه ل و ل ح م ا ی ه ف ا ض ا خشک باکتریایی ت ل پ ه ب ) 0 0 2 mm ر ف ا ب ت ا ف س ف د ش ول ل ح م ا دد ج م س ک ت ر و ت مد ه ب د ی شد به ت د م و ه د ش م ا ج ن ا ه ی ن ا ث 0 2 ر د ه ق ی ق د 2 د ش ه ر خی ذ ق ا ت ا ی ا م د 0 0 0 4 1 rpm و ه ه ج ر د 4 ی ی ی ا م د ا اا ب ژ ژ ژ ژ ژ و ی ف ی تر ن ا س ی ی و ر ع ی ا م د ش م ا ج ن ا ه ق ی ق د 5 ی ا ر ب ن ی ئ ت و ر پ ن ا و ن ع ه ب شد منتقل جدید استریل ب و ی ت ه ب ت ق د ا ب شده استخراج م ج ح 1/3 ن د و ز ف ا ( % 0 5 ل و ر س ی ل گ ک ت س ا ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب و ن ی ئ ت و ر پ ک ت س ا ) ن ی ئ ت و ر پ ه ب گلیسرول استک ز ا 2 1 5/ ل% رو س ی ل گ د ن د ش ل ق ت ن م 20 ر ز ی ر ف به ی ز ا س ه ر ی خ ذ ت جه و شد ه ی ه ت ن ی ئ ت و ر پ ت ی ف ی ک و ت ی م ک ن ی ی ع ت ی ا ه ن ی ئ ت و ر پ ت ظ ل غ ی س ر ر ب صورت بردفورد ت خ ا س UV ش و ر با شده استخراج ی و ا ح ر ت م و ت و ف و ر ت ک پ س ا ه ا گ ت س د ) )7 ( ( ( ت ف ر گ 595 nm جذبببب در Labomed شرکتتتتتتت ن ا و ن ع ه ب ج ا ر خ ت س ا ر ف ا ب 0 2 µl ی و ا ح ه ن و م ن ز ا د ش م ا ج ن ا ه د ا ف ت س ا ا ب د ر ا د ن ا ت س ا ر ا د و م ن م س ر د ش ه د ا ف ت س ا صفر نمونه Sigma ت ک ر ش ( گاوی آلبومین سرم مختلف ر ی د ا ق م ز ا د ش م ا ج ن ا ) ن ا م ل آ Aldrich

و) د ل) و ل ح م 7 4 1 ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب ه ل ی س س س و ه ب ه د ش ج ا ر خ ت س ا ی ا ه ن ی ئ ت و ر پ ت ی ف ی ک ی س ر ر ب ل ی ر ک آ ی ل پ ل ژ ی و ر ی د و م ع ز ر و ف و ر ت ک ل ا ت ا ف ل و س ل ی س د و د م ی د س ی س ک ا د زیم ز ز ن آ ی س ر ر ب ز ر ا گ آ ی ا ر ج ا ق ب ط ش ی ا م ز آ ن ی ا )SDSPAGE( د ی م آ ی و ا ح 02( ( د ش م ا ج ن ا ل ژ ی و و و ر ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر دادهتوسط شرح روش ن ی ا ر د ) 6 1 ( ( ( د ش م ا ج ن ا 8 9 9 1 ن ا ر ا ک م ه و ن ی و ک ن و د ب شده استخراج ن ی ئ ت و ر پ ز ا ر ف ا ب SDS 0 0 2 mm ی ا ج ه ب ر د SDS ل ا ع ف ر ی غ ث ع ا ب SDS ا ر ی ز شد استفاده د د ر گ ممی م ر د ش ی ا م ز آ ن ی ا ب ا ی غ و ر و ض ح ر د pet21a () دو کاتتتیونهای ی ت ی ف ر ظ ش و ر ت ا ف س ف ) ج ج ج ج ج ا ر خ ت س ا ه ل ح ر م ن د ش ا ه م ی ز ز ز ن آ د ی مس ا ل پ و ی ط خ DNA ر ال و ن ن م ی ی ی ل ی م 1 Mn 2 Ca 2 ا ه م ی ز ز ن آ کوفاکتورهااای تا د ن د ش سری پالسمیدهای م ض ه Mg 2 و ) 9 3 ( ( ( ( گردند معرفی ع ق ا و ر د pet21a () ی ا ه ی ی ل ا و ت ن ا ی ب ی ال ا ب ح ط س و گ ن ی ن و ل ک طراحی هیستیدییییییییینی ی ل پ ه ل ا ب ن د ه ب ه د ش مع ج ت ل مح یک دارای پالسمید 4 4 5 د ی م س ال پ ن ی ا ه ز ا د ن ا ت س ا ر د ل ی ل د د ر مو ش ی ا م آز ن ی ا ی ش ر ب ه ا گ ی ا ج ی ا ر ا د ت 3 ف ج ی د ی ت پ پ ه د ش ت ه ج ل ص ت م این اند برشی جایگاههههههههههههای و د ه ب و ت س ا ز ا ب 1 ت تت ت ت ت ت ت ت ت تت ت ت ت ف ر گ ار ر ق ه د ا تف س ا انواع برای د ا ی ز ی ش ر ب م ی ز ن آ 2 ش ش ش ر ب ز ا جلوگیری و ن ا س آ کاربرد برای ط س و ت م ه ز ا د ن ا ر د ی ف د ا ص ت ی ا ه ت ا ت س ا ش ن ک ا و ب و ی ت ر ه 0 1 mm م 0 ی د س E یcoli ر ت ک ا ب ی م و ن ژ DNA 0 4 µg ph 4/6 ا ب pet21a() د ی م س ال پ 0 4 µg ا ی و Mn 2 Ca 2 ی اا ا نه ن ن و ی ت ا ک ز ا 1 mm و ی م ی ز ن آ ه ن و م ن 5 µl و ف ل ت خ م ی ا ه ر ا م ی ت ) ) ف ل ت خ م ر ا م ی ت Mg 2 د و ج و ه ب ن ا و ن ع ت ش ا د 7 3 ο C ی ا م د ر د ا ه ب و ی ت د و ب 5 2 µl ش ن ک ا و ی ی ا ه ن م ج ح ه ب ب و ی ت 3 ر ا م ی ت ر ه ی ا ر ب د ن د ش ه ب و ک ن ا ت ع ا س ک ی ی ا ر ب ی س ر ر ب ر ا ر ک ت ن ا و ن ع د ش م ا م ت ا ز ا س پ ر ه ز ا 0 1 µl د ش ی س ر ر ب % 0/8 آگارز ل ژ ز ر و ف و ر ت ک ل ا ه ل ی س و ه ب ه ن و م ن ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر داکسی آنزیم ی س ر ر ب ر ت م و ت و ف و ر ت ک پ س ا کوین روش ق ب ط ش ی ا م ز آ و د ق ا ف ن ی ئ ت و ر پ ز ا ز ی ن ش ی ا م ز آ ن ی ا ر د ) 6 1 ( ( ( د ش ل م ا ش و 1 ml ش ن ک ا و حجم شد استفاده م ا ج ن ا 8 8 9 1 ن ا ا ا ر ا ک م ه SDS DNA 0 4 µg ت ا ت س ا م و ی ن و م آ ر د ل و ل ح م ه د ش ه ت ش ر ک ت گاوی تیموس 0 5 mm ی ا ه ن و ی ت ت ت ا ک ت ظ ل غ ا ب Ca 2 Mg 2 و Mg 2 Mn 2 Ca 2 ه ب ph 5/5 ا ب 1 mm EDTA و 1 mm س پ د و ب ی م ی ز ن آ ه ر ا ص ع 0 2 µl ه ف ا ض ا ز ا ن د و م ن ه ف ا ض ا ر د ا ه ب و ی ت و ه د ش م ا ج ن ا شدید ورتکس ی م ی ز ن آ ه ر ا ص ع ر ا م ی ت ر ه د ن د ش ه ب و ک ن ا ه ق ی ق د 0 3 ت د م ه ب 7 3 ο C ی ا م د د و ب ر ا ر ک ت 3 ل م ا ش % 5 د ی س ا ک ی ر ل ک ر پ 1 ml گذاری گرما اتمام ز ا س پ خ ی ی و ر ش ن ک ا و ل و ل ح م ه ب ه ب ه د م آ ت س د ب ل و ل ح م د و ش ف ق و ت م ش ن ک ا و ا ت د ش ه ف ا ض ا ت د م ت ح ت ه ق ی ق د 5 1 g 0 0 0 1 س 0 پ س د ش ژ و ی ف ی ر ت ن ا س ل و ل ح م ز ا ر ت ی ل ی ل ی م ک ی ی و ا ح ر ف ص ه ن و م ن شد بررسی ر ت م و ن ا ن 0 6 2 ج و م ل و ط ر د ی م ی ز ن آ ه ر ا ص ع ز ج ب د ا و م م ا م ت د و ب ه ک ق ب ط کرد طی ش ی ا م ز آ ی ا ه ه ن و م ن د ن ن ا م م ا م ت ل ح ا ر م ا ر کوین نتایج و ب ذ ذ ذ ج ر د ه ق ی ق د ر ب 0/1 0 0 ف ال ت خ ا ر ه ) 6 1 ( ن ا ر ا ک م ه ت س ا ن ی ئ ت و ر پ ت ظ ل غ ر ب م ی ز ن آ د ح ا و ک ی ل د ا ع م )min((( ن ا م ز / ) mg/ml( ( ( ( ( ( ( ی م ی ز ن آ عصاره غلظت ی م ی ز ن آ د ح ا و ) U/ml( Δ0= 6 2 / ر ت م و ت و ف و ر ت ک پ س ا ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب ی م ی ز ن آ ی ا ه ی س ر ر ب ی ا ر ب ب ل ا ق ز ا ا ه ش ی ا م ز آ م ا م ت ر د ح ر ط ا ب صتادفی کاملا ر ا ز ف ا م ر ن ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب ا ه ه د ا د ل ی ل ح ت د ش ه د ا ف ت س ا ر ا ر ک ت ر ا ز ف ا م ر ن ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب اا ا رره ر ا د و م ن م س ر و SAS ل ی ل ح ت ر د د ش ام ج ن ا ب ی ر ض ز ا ج ی ا ت ن تمام واریانس 3 Excel د ش ه د ا ف ت س ا % 99 اطمینان

8 4 1 ن ش ر ی ه م ی ک ر و ب ی و ل و ژ ی د ا م پ ز ش ک ی / د و ر ه د ه م ش م ا ر ه د و م 1 3 9 3 پ ی ا پ ی 9 2 ج د و ل : 1 م ق ا ی س ه پ ا س خ ه ا ی ب ا ک ت ر ی Staphylococcus pasteuri ش ن ا س ا ی ی ش د ه د ر آ ز م ا ی ش ب ا 7 ا س ت ر ی ن ا ز ا ی ن ب ا ک ت ر ی )8 ) ت س ت ب ا ک ت ر ی ا و ر ه آ ز ر ش د ب ی ه و ا ز ی ق ط ر ک ل و ن ی > mm 5 * ر ن گ ی ز ه م ا ل ت و ز م ا ن ی ت و ل ا ک س ی د ا ز 8 7 6 5 4 S pasteuri 7 S pasteuri BM10426 6 S pasteuri BM10425 5 S pasteuri BM10507 4 S pateuri BM9363 3 S pasteuri BM9359 2 S pasteuri BM9357 1 3 2 1 8 BM10427 ن ت ا ی ج ب ا ک ت ر ی S pasteuri ش ن ا س ا ی ی ش د ه * ب ه م ع ن ا ی pigment ب ا ک ت ر ی : ن ت ی ج ه م ن ف ی : ن ت ی ج ه م ث ب ت DNase ر و ی DNA خ ط ی د ر ش ک ل 3 د ی د ه م ی ی ی ش و د ن ت ا ی ج ش ن ا س ا ی ی ب ا ک ت ر ی ب ا ن د ت ک ث ی ر ش د ه ا ز ژ ن 16S rrna ب ه ص و ر ت و ا ض ح ب د س ت آ م د ه و ا ن د ا ز ه آ ن ه ا ب ا اندازه مورد انتظار یعنی ج ف ت 0 0 5 1 ب ا ز م ط ا ب ق ت د ا ش ت ( ش ک ل ) 1 پ س ی ا ب ی ق ط ع ا ت ت ک ث ی ر ی ت و ا ل ی ی ی ی ی ی ی ی ی ی یییه ا ا ا د ر NCBI/EMBL م ور د ب ر ر س ی و ه م ر د ی ف ش د ند د ر ج ن س ن ه ا ی ت Staphylococcus و گ و ن ه ا ز ت و ا ل ی پ ا ی گ ا ه د ا د ه pasteuri ع ن و ا ن ن ز د ی ک ت ر ی ن باکتری طبق ن ت ا ی ج ه م ر د ی ف ی ت و ا ل ی 16S rrna ب د س ت آ م د ب ا ک ت ر ی گ ر م م ث ب ت ک و ک س ی ب ه شکل کاتاالز م ث ب ت و ا ک س ی د ا ز م ن ف ی ب و د و ت ا 5 1 د ر ص د ن م ک ر ا ت ح م ل ( ج د و ل ن م و د ) 1 ی ک ش ا خ ص م ه م درStaphylococcus ت ح م ل 5 1 د ر ص د ن م ک د ر م ح ی ط ک ش ت ا س ت )8 ) ژ ن 16S rrna ب ا ک ت ر ی د ر پ ا ی گ ا ه NCBI/EMBL ب ا ش م ا ر ه گ ر د ی د نتایج بررسی آ گ ا ر ز پ ر و ت ئ ی ن ه ا ی ا س ت خ ر ا ج ی آ ن ز ی م م مم م م مم ه ا ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri KC170006 ث ب ت DNase ر و ی ژ ل S pasteuri ر و ی ژ ل 2 1 SDSPAGE کیفیت خوبی% غ ل ظ ت پ ر و ت ئ ی ن ب د س ت آ م د ه ط ب ق ن ت ا ی ج ن ش ا ن د ا د ( ش ک ل ا س پ ک ر و ف و ت و م ت ر ) 2 8 5 4 84/ 1 µg/ml ب و د ن ت ا ی ج ب ر ر س ی ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م م م م م ه ا ی ه م ا ن ط و ر د ر ش ک ل د ی د ه م ی ش و د ه ی چ گ و ن ه ب ر ش ی د ر م و ل ک و ل DNA د و ر ش ت ه ا ی ج ا د ن ش د ه ا س ت ب ر ر س ی ه ض م DNA پ ال س م ی د ی ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز پ ل سا م ی د pet21a () انجام شد ب ر ر س ی ه ا ی ه ض م آ ن ز ی م ی پ ال س م ی د د ر ش ک ل 4 د ی د ه م ی ش و د د د ه ض م ی ا ب ر ش پ ل ا س یم د ب ا ت ی م ا ر ه ا ی مختلف کاتیونی ب ر ا ی تعین کوفاکتور ا خ ت ص ا ص ی آ ن ز ی م برشی صورت گرفت ا م ا د ر ن ه ا ی ت ه ی چ ا خ ت ل ا ف ی ب ر ش ب ا کوفاکتورهای مختلف م ش ا ه د ه ن ش د آ ن ز ی م ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri ب ا ع ث ا ف ز ا ی ش غ ل ظ ت ر ح ا ل ت ب ر ش ت ک ر ش ت ه ا ز پالسمید شده ک ه ا ی ن ب د ل ی ل و ج و د آنزیم نیکازاست ( ش ک ل ع ص ا ر ه ) 4 د ر ح ض و ر ت م ا م ک ا ت ی و ن ه ا ن ی ز ا ی ن ب ر ش دیده شد ب ا ت و ج ه ب ه ت ع د ا د ب ا ل یا ت ک را ر آ ز م ا ی ش و ن ی ز آ ز مو ن س ه کاتیون مختلف م ی ت و ا ن آ ن ز ی م ه ا ی ب ا ک ت ر ی ی ه ا ی S pasteuri ر ا ا ز ن و ع ن ی ک ا ز د ا ن س ت ن ی ک ا ز ه ا برش دهنده اختصاصی ی ک ک ال س ج د ی د ا ز آ ن ز ی م م ه ا ه س س س ت ن د ک ه ج ا ی گ ا ه ب ر ش ی ر ا ر و ی م و ل ک و ل DNA ت ش خ ی ص م ی د ه ن د و ت ن ه ا ی ک ر ش ت ه ا ز DNA ر ا ب ر ش م ی د ه ن د ا ز ا ی ن د س ت ه ا ز آ ن ز ی م ه ا ت ع د ا د ب س ی ا ر ک م ی ک ش ف ش د ه ا س ت ( 4 ) 2

د و) 9 4 1 ب ر ر س ی ف ع ا ل ی ت د ا ک س ی ر ی ب و ن و ک ل ئ ا ز ی ش ک ل 1: ب ا ن د م و ر د ا ن ت ظ ا ر ژ ن 6 1 S rrna ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز آ غ ا ز گ ر ه ا ی ش ک ل : 4 ه ض م م و ل ک و ل DNA پ ال س م ی د () pet21a ب ا آ ن ز ی م ه ا ی 1 پ ال س م ی د ب د و ن آ ن ز ی م S pasteuri ا ز ب ا ک ت ر ی DNase 2 پ ال س م ی د د ر ح ض و ر ع ص ا ر ه پ ر و ت ئ ی ن ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri DNA م ا ر ک ر M A پ ال س م ی د ب ر ش خ و ر د ه ب ا آ ن ز ی م ن ی ک ا ز B پ ال س م ی د ح ل ق ه ب ا ز C پ ال س م ی د خ ط ی ( ب ر ش ی ا ف ت ه ) D پ ال س م ی د س و پ ر ک و ی ل E پ ال س م ی د ح ل ق ه ا ی ت ک ر ش ت ه S pasteuri 1 DNA 1 kb م ا ر ک ر M 1525R و 27F ن ت ا ی ج ح ا ص ل ا ز ا س پ ک ت ر و ف و ت و م ت ر ی ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م DNase ع ص ا ر ه ب ا ک ت ر ی S pasteuri ش ک ل : 2 ع ص ا ر ه پ ر و ت ئ ی ن ی ا س ت خ ر ا ج ش د ه ا ز ب ا ک ت ر ی S pasteuri ر و ی ژ ل M SDSPAGE م ا ر ک ر م و ل ک و ل ی 1 و 2 ا ل گ و ی ب ا ن د ی پ ر و ت ئ ی ن ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri ت ک ر ا ر ) در حضور کاتیونهای م ن ی ز ی م ب ص و ر ت م ع ن ی دار کاهش ی ا ف ت د ر ح ض و ر ک ا ت ی و ن ه ا ی ک ل س ی م و م ن گ ن ز ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م ی ت غ ی ی ر م ع ن ی د ا ر ی ن ش ا ن ن د ا د ( ن م و د ا ر ) 1 ب ا ا ع م ا ل ت ی م ا ر 2 Mg 2 Ca د ر غ ل ظ ت 1 mm ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م ت ا چ ه ا ر ب ر ا ب ر ا ف ز ا ی ش ن ش ا ن د ا د غ ل ظ ت ه ا ی م خ ت ل ف ن م ک ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م DNase ا ی ن ب ا ک ت ر ی ر ا ب ط و ر م ع ن ی د ا ر د ر س ط ح % 9 9 ا ف ز ا ی ش د ا د غ ل ظ ت 0/6 م و ال ر ن م ک ب ا ع ث ب ی ش ت ر ی ن ا ف ز ا ی ش د ر ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م DNase ش د ف ع ا ل ی ت ph آ ن ز ی م DNase ب ط و ر م ع ن ی د ا ر ق ر ا ر ن ی ز ت ا ث ی ر ت ح ت 9 7 گ ر ف ت ن ش ا ن ت غ ی ی ر ی و ph ه ا ی د ر آ ن ز ی م ف ع ا ل ی ت ش ک ل : 3 ه ض م م و ل ک و ل DNA خ ط ی ب ا آ ن ز ی م ه ا ی DNase ا ز ب ا ک ت ر ی S 1 م و ل ک و ل DNA د و ر ش ت ه ب د و ن آ ن ز ی م DNA م ا ر ک ر M pasteuri 2 م و ل ک و ل DNA د و ر ش ت ه د ر ح ض و ر ع ص ا ر ه پ ر و ت ئ ی ن ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri 3 م و ل ک و ل DNA د و ر ش ت ه د ر ح ض و ر آ ن ز ی م EcoRI ن د ا د د ر ح ا ل ی ک ه د ر ph ه ا ی 3 و 5 ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م DNase ب ا ا ط م ی ن ا ن % 9 9 ک ا ه ش پ ی د ا ک ر د ب ح ث ب ا ک ت ر ی Staphylococcus pasteuri ا ز خ ا ک س ط ح ی ج د ا و خ ا ل ص س ا ز ی ش د ا ی ن ب ا ک ت ر ی ب ا ش م ا ر ه

0 5 1 ن ش ر ی ه م ی ک ر و ب ی و ل و ژ ی د ا م پ ز ش ک ی / د و ر ه د ه م ش م ا ر ه د و م 1 3 9 3 پ ی ا پ ی 9 2 NCBI/EMBL د س ت ر س ی KC170006 پ ا ی گ ا ه د ر ب ه آ ن ز ی م ا ی ن د ا د ب ر ش ب ر ش ت و ا ن ا ی ی م و ل ک و ل DNase ث ب ت ر س ی د آ ن ز ی م DNase ب ا ک ت ر ی S pasteuri ق ا د ر ب ه DNA د و ر ش ت ه ر ا ن د ا ر د ا ی ن ا و ل ی ن گ ز ا ر ش م ر ب و ط ب ه ر ش ت ه ب ر ش DNA آ ن ز ی م ا ی ن ا س ت ی گ ا ن ه ج ز ا ح ت م ا ال آ ن ز ی م ه ا ی ب ا ک ت ر ی د ر S pasteuri ا س ت DNase 0/6 آ ن ز ی م ه ا ی ا س ت ن ی ک ا ز ب ر ر س ی ه ا ی ب ر ش د ر آ ن ز ی م ی ب ی ش ت ر ی ن ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م د ر ح ض و ر NaCl ب ا غ ل ظ ت آ ن ز ی م ا ی ن ک ه م ی د ه د ن ش ا ن ح ل ق و ی ب ص و ر ت م و ال ر ز م ا ن ه م ح ض و ر د ر و ک ا ت ی و ن ه ا ی ph 5/5 DNA ا خ ت ص ا ص ی ع م ل م ی ک ن د ب ه ط و ر ی ک ه د ر آ ز م ا ی ش ب ر ش 2 Mg 2 Ca ب ا غ ل ظ ت 1 mm م ش ا ه د ه ش د پ ال س م ی د () pet21a ر ا ن ق ط ه ی ک ت ن ه ا آ ن ز ی م ا ی ن ن م و د ا ر : 1 ن م و د ا ر ه ا ی ن ت ا ی ج ت ی م ا ر ه ا ی م خ ت ل ف NaCl ph و ک ا ت ی و ن ر و ی ع ص ا ر ه آ ن ز ی م ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri 5 Bickle, TA, Krüger, DH (1993) Biology of DNA restriction FEMS Microbiology Reviews 57: 43450 6 Bourniquel, AA, Bickle, TA (2002) Complex restriction enzymes: NTPdriven molecular motors Biochimie 84: 104759 7 Bradford, MM (1976) A rapid and sensitive for the quantitation of microgram quantitites of protein utilizing the principle of proteindye binding Analytical Biochemistry 72: 24854 8 Chesneau, O, Morvan, A, Grimont, F, Labischinski, H, El Solh, N (1993) Staphylococcus pasteuri sp nov, isolated from human, animal, and food specimens International Journal of Systematbica Cteriologay 43: 23744 م ن ا ب ع 1 Abdurashitov, MA, Belitchenko, OA, Shevchenko, AV, Degtiarev, S (1996) NBstSE a sitespecific nickase from Bacillus stearothermophilus SE589 Journal of Molecular Biology 30: 1261 7 2 Ahmad, NS, Hadi, SM (1983) Purification and properties of a glycoprotein alkaline nuclease from the larvae of the army worm Spodoptera litura Insect Biochemistry 13: 391401 3 Bernard, EA (1969) Ribonucleases Annual Review of Biochemistry 38: 677 82 4 Bhaduri, S, Paul, HD (1983) Simple and rapid method for disruption of bacteria for protein studies Applied and Environmental Microbiology 46: 9413

1 5 1 ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب 19 Kunitz, M (1940) Crystalline ribonuclease The Journal of General Physiology 24: 1530 20 Laemmli, UK, Favre, M (1973) Gel electrophoresis of protein Journal of Molecular Biology 80: 57599 21 Lai, B, Li, Y, Cao, A, Lai, L (2003) Metal ion binding and enzymatic mechanism of Methanococcus jannaschii RNase HII Biochemistry 42: 78591 22 Laskowski, M (1959) Enzymes hydrolyzing DNA Annals of the New York Academy of Sciences 81: 77683 23 Lin, LF, Posfai, J, Roberts, RJ, Kong, H (2001) Comparative genomics of the restrictionmodification systems in Helicobacter pylori Proceedings of the National Academy of Sciences 98: 27405 24 McCleland, SE, Sczcelkun, MD (2004) The type I and III restriction endonucleases: structural elements in molecular motors that process DNA Nucleic Acids and Molecular Biology 14: 11135 25 Morgan, RD, Calvet, C, Demeter, M, Agra, R, Kong, H (2000) Characterization of the specific DNA nicking activity of restriction endonuclease NBstNBI The Journal of Biological Chemistry 381: 11235 26 Murray, NE (2000) Type I restriction systems: sophisticated molecular machines (a legacy of Bertani and Weigle) Microbiology and Molecular Biology Reviews 64: 41234 27 Neumann, B, Pospiech, A, Schairrer, HU (1992) Rapid isolation of genomic DNA from gramnegative bacteria Trends in Genetics 8: 3323 28 Patel, JB (2001) 16S rrna gene sequencing for bacterial pathogen identification in the clinical laboratory Journal of Molecular Diagnostics 6: 31321 29 Pingoud, A, Fuxreiter, M, Pingouda, V, Wende, W (2005) Type II restriction endonucleases: structure and 9 Cunningham, L, Laskowski, M (1953) Presence of two different por desoxyribonucleode polymerases in veal kidney Biochimica et Biophysica Acta 11: 5901 10 Curtis, MW (1968) Plant nucleases I separation and purification of two ribonucleases and one nuclease from corn Plant Physiology 43:13328 11 Desreux, V, Hacha, R, Fredericq, E (1962) Activation of deoxyribonucleases by divalent cations Journal of General Physiology 45: 93 102 12 Feinstein, R N (1960) Activation of the neutral deoxyribonuclease The Journal of Biological Chemistry 235: 7313 13 Goedken, ER, Marqusee, S (2001) Cocrystal of Escherichia coli RNase HI with Mn 2 ions reveals two divalent metals bound in the active site The Journal of Biological Chemistry 276: 726671 14 Higgens, LS, Besnier, C, Kong, H (2001) The nicking endonuclease NBstNBI is closely related to type IIs restriction endonucleases MlyI and PleI Nucleic Acids Research 29: 2492501 15 Keck, JL, Goedken, ER, Marqusee, S (1998) Activation/attenuation model for RNase H A onemetal mechanism with secondmetal inhibition The Journal of Biological Chemistry 273: 3412833 16 Kevin, PB, Will, F, Baron, W, Henzel, J, Steven, AS (1998) Molecular cloning and characterization of human and murine DNase II Gene 215: 2819 17 Kobayashi, H, Fumi, K, Tadashi, I, Takashi, K, Norio, I (2000) Nuclease Lel 1 and 2 Study Bioscience, Biotechnology, Biochemistry 64: 94857 18 Koerner, JF, Sinsheimer, RL (1957) Deoxyribonuclease from calf spleen I Purification and properties The Journal of Biological Chemistry 228: 1039

9 2 ی پ ا ی پ 3 9 3 1 م و د ه ر ا م ش م ه د ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن 2 5 1 40 Xia, YN, Morgan, R, Schildkraut, I, Van Etten, JL (1988) A sitespecific single strand endonuclease activity induced by NYs1 virus infection of a Chlorellalike green alga Nucleic Acids Research 16: 947787 41 Zhang, Y, Nelson, M, Nietfeldt, J, Xia, Y, Burbank, D, Ropp, S, Van Etten, JL (1998) Chlorella virus NY 2A encodes at least 12 DNA endonuclease/methyltransferase genes Virology 240: 36675 42 Zheleznaya, LA, Perevyazova, TA, Zheleznyakova, EN, Matvienko, NI (2002) Some properties of sitespecific nickase bspd6i and the possibility of its use in hybridization analysis of DNA Biochemistry 67: 498502 mechanism Cellular and Molecular Life Sciences 62: 685707 30 Raleigh, EA, Brooks, JE (1998) Restriction modification systems: where they are and what they do Bacterial Genomes 7892 31 Rangrajan, S, Shankar, V (1999) Extracellular nuclease from Rhizopus stolonifer purification and characteristics of single strand preferential deoxyribose nuclease activity Biochimica et Biophysica Acta 1473: 293304 32 Roberts, RJ, Belfort, M, Bestor, T, Bhagwat, AS, Bickle, TA, Bitinaite, J et al (2003) A nomenclature for restriction enzymes, DNA methyltransferases, homing endonucleases and their genes Nucleic Acids Research 31: 180512 33 Roberts, RJ, Vincze, T, Posfai, J, Macelis, D (2005) REBASE restriction enzymes and DNA methyltransferases Nucleic Acids Research 33: 2302 34 Shimomura, M, Laskowski, M (1957) Purification of deoxyribonuclease II from spleen Biochimica et Biophysica Acta 26: 198 35 Torsvik, V, Jostein, G (1990) High Diversity in DNA of Soil Bacteria Applied and Environmental Microbiology 56: 7827 36 Van Etten, JL (2003) Unusual life style of giant chlorella viruses Annual Review of Genetics 37: 15395 37 Virginia, W, Campbell, D, Jackson A (1980) The effect of divalent cations on the mode of action of DNase I Journal of Biologic Chemistry 255: 372635 38 Weisburg, WG, Barns, SM, Pelletier, DA, Lane DJ (1991) 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study Journal of Bacteriology 173: 697703 39 Wiberg, JS, (1958) On the mechanism of metal activation of deoxyribonuclease I Archives of Biochemistry and Biophysics 73: 337

Journal of Veterinary Microbiology, Volume 10, Issue 2, 2014 A Study on the Staphylococcus pasteuri Deoxyribonuclease Activity AlborzianDehSheikh, A* 1, Hosseini, R 2 1 MSc of Agricultural Biotechnology, Imam Khomeini International University Qazvin, Qazvin, Iran 2 Faculty member of Agricultural Biotechnology, Imam Khomeini International University Qazvin, Qazvin, Iran Received Date:29 August 2013 Accepted Date: 16 November 2013 Abstract: All organisms have nuclease Deoxyribonucleases (DNase) are from enzyme group that are able to hydrolase phosphodiester bounds of DNA molecule bonds Staphylococcus pasteuri identified by 16S rrna marker and biochemical tests, and submitted to GenBank/EMBL with KC170006 accession number The activity of DNase enzyme was detected through three spectrophotometric, detection of DNase activity on circular and double strand DNA molecule on agarose gel methods The effects of ph, NaCl and cations like Mg2, Ca2,Mn2andMg2Ca2 treatments were considered S pasteuri DNase was able to cut single strand of circular DNA S pasteuri DNase was able to cut single strand DNA Studies on circular DNA showed that the enzyme may nick specifically, whereas pet 21a () was restricted to one point The DNase does not cut double strand DNA This is the first report about S pasteuri DNase activity The most important activity of enzyme was observed in the presence of 06 M NaCl, 1mM Mg2Ca2 and ph 55 Keywords: Staphylococcus pasteuri, DNase activity, 16S rrna *Corresponding author: AlborzianDehSheikh, A Address: Imam Khomeini International University Qazvin, Qazvin, Iran Tel: 02833901160 Email: aminalborzian@yahoocom