MIKROBIOLOŠKI PRAKTIKUM Školska 2015/2016 KATEDRA ZA MIKROBIOLOGIJU Nastavnici: Prof. dr Jelena Knežević-Vukčević, šef Katedre Prof. dr Branka Vuković-Gačić Prof. dr Slaviša Stanković Prof. dr Tanja Berić tanjab@bio.bg.ac.rs Doc. dr Biljana Nikolić biljanan@bio.bg.ac.rs Saradnici: dr Dragana Mitić-Ćulafić dr Stoimir Kolarević stoimirk@bio.bg.ac.rs dr Ivica Dimkić ivicad@bio.bg.ac.rs Ivan Nikolić ivan.nikolic@bio.bg.ac.rs Bojana Jovanović bojana.jovanovic@bio.bg.ac.rs Tamara Janakiev tamara.janakiev@bio.bg.ac.rs Karolina Sunjog sunjogkarolina@yahoo.com Jovana Kostić kosticjovana@hotmail.com Marina Jovanović marina.rajic.jovanovic@gmail.com
Literatura: Berić, T., Nikolić, B. (2014) Mikrobiološki praktikum. Biološki fakultet, Univerzitet u Beogradu. ISBN 978-86-7078-115-3. Program praktičnih vežbi i predavanja za školsku 2015/2016: 1. Hranljive podloge (Priprema podloga, sterilizacija, razlivanje) 2. Određivanje krive rasta bakterija 3. Izolovanje i identifikacija bakterija (Bacillus sp.); Izolacija producenta antibiotika i određivanje antimikrobnog spektra izolata 4. Mikrobiološki pregled vode, vazduha i hrane. Studentski projekti (svi studenti će biti podeljeni u tri grupe i učestvovaće u izradi projekata na kraju kursa) 1. Identifikacija nepoznate bakterijske kulture do nivoa roda/vrste 2. Virusi: priprema stoka infekcijom osetljivog soja i određivanje titra virusa 3. Uticaj fizičkih i hemijskih faktora na rast mikroorganizama Termini predavanja i vežbi: Predavanja počinju 22.10.2015. Sreda vežbe Četvrtak vežbe 17:15 20:15 h 11:15-14:15 h * Četvrtak vežbe (05.11.2015) 11:15-19:15 h * Petak - vežbe (20.11.2015) 8:00-10:00 h * samo za navedene datume. Napomena: Vežbe u nedelji od 09.11 12.11. neće biti održane zbog državnog praznika Vežbe i predavanja će se odvijati na Fizičkom fakultetu (Ul. Cara Dušana 13) u Sali 58 (tzv. Mikroskopska sala), ukoliko drugačije nije navedeno. Obnoviti poglavlja iz praktikuma Metode u mikrobiologiji I: 1., 2., 3., 4., 5., 6, 7.1., 7.2., 12.
I predavanje (22.10. četvrtak u 11:15) Identifikacija mikroorganizama II predavanje (29.10. četvrtak u 11:15) Gajenje i rast Vežba 1 (04.11. sreda) Hranljive podloge (Priprema podloga, sterilizacija, razlivanje) Uvodno predavanje: Hranljive podloge, kriva rasta, indirektne metode za određivanje broja mikroorganizama. *Vežba 2 (05.11. četvrtak) Eksperimentalno određivanje krive rasta bakterija. III predavanje (06.11. petak u 8:15) Kontrola rasta mikroorganizama Vežba 3 (18.11. sreda) Izolacija bakterija. Kriva rasta. Uvodno predavanje: Crtanje krive, Izolacija producenta antibiotika, Izolovanje bakterija roda Bacillus. Crtanje krive rasta, kalibrisanje krive optičke gustine i određivanje vremena generacije rezultati. Izolacija producenta antibiotika zasejavanje uzoraka zemlje. Izolovanje bakterija roda Bacillus (obogaćivanje i pravljenje išaranih ploča). Studenti su u obavezi da donesu uzorak zemlje, dovoljna je minimalna količina poput grumena tj. nekoliko grama. IV predavanje (13.11. petak u 8:15) Virusi metode izučavanja; λ fag Vežba 4 (19.11. četvrtak) Izolacija bakterija nastavak. Određivanje bakteriološke ispravnosti vode i vazduha I. Uvodno predavanje: Određivanje bakteriološke ispravnosti vode i vazduha. Eksperimentalno određivanje bakteriološke ispravnosti vode (određivanje ukupnog broja bakterija u vodi, određivanje prisustva koliformnih bakterija-test A). Eksperimentalno određivanje brojnosti bakterija u vazduhu/m 3.
Izolovanje bakterija roda Bacillus (posmatranje izraslih kolonija Bacillus sp., katalaza test, presejavanje na nove išarane ploče). Izolacija producenta antibiotika presejavanje u tečni medijum i priprema osetljivih sojeva za antimikrobni spektar izolata. Overa praktikuma vežbe (Kriva rasta - Mikrobiološki praktikum str. 9-14). Studenti su u obavezi da donesu uzorak vode. * Vežba 5 (20.11. petak) Određivanje bakteriološke ispravnosti vode i vazduha. Izolovanje bakterija roda Bacillus (posmatranje izraslih kolonija Bacillus sp., katalaza test, bojenje po Gramu i Šefer-Fultonu i mikroskopiranje, tj. potvrda) rezultati. Određivanje antimikrobnog spektra izolata metod dvojne kultivacije prvi deo. Eksperimentalno određivanje bakteriološke ispravnosti vode Test B. Eksperimentalno određivanje brojnosti bakterija u vazduhu/m 3 rezultati. Vežba 6 (25.11. sreda) Mikrobiološki pregled hrane. Uvodno predavanje: IMViC test, mikrobiološki pregled hrane. Određivanje bakteriološke ispravnosti vode IMViC test (Test C). Izolacija Lactobacillus sp., Sulfitoredukujuće klostridije, Salmonella sp. Određivanje antimikrobnog spektra izolata metod dvojne kultivacije drugi deo. Vežba 7 (26.11. četvrtak) Mikrobiološki pregled hrane i vode nastavak. Određivanje bakteriološke ispravnosti vode IMViC test rezultati. Izolacija Lactobacillus sp., Sulfitoredukujuće klostridije rezultati. Salmonella sp. presejavanje na SS agar. Priprema kultura za API test.
Određivanje antimikrobnog spektra izolata metod dvojne kultivacije rezultati. Overa praktikuma vežbe (Izolovanje bakterija roda Bacillus i Izolacija producenta antibiotika i određivanje antimikrobnog spektra izolata - Mikrobiološki praktikum str. 128-132; 136-139 ). Vežba 8 (02.12. sreda) Savremene metode za identifikaciju pojedinih grupa mikroorganizama Uvodno predavanje: Savremene metode za identifikaciju pojedinih grupa mikroorganizama API 20E i API 50 CHB Salmonella sp. potvrdni test Overa praktikuma vežbe (Mikrobiološki pregled vode, vazduha - Mikrobiološki praktikum str. 112-122). Vežba 9 (03.12. četvrtak) Konsultacije za studentske projekte Priprema podloga za studentske projekte API Rezultati Salmonella sp. potvrdni test- rezultati Napomena: Studenti koji se opredele za projekat sa virusima, u ovom terminu rade i infekciju osetljivog soja Vežba 10 (09.12. sreda) Studentski projekti 1. Identifikacija nepoznate bakterijske kulture do nivoa roda/vrste bojenje po Gramu i zasejavanje uzoraka. 2. Virusi: priprema stoka infekcijom osetljivog soja i određivanje titra virusa 3. Uticaj fizičkih i hemijskih faktora na rast mikroorganizama zasejavanje uzoraka.
Vežba 11 (10.12. četvrtak) Studentski projekti 1. Identifikacija nepoznate bakterijske kulture do nivoa roda/vrste rezultati. 2. Virusi: priprema stoka infekcijom osetljivog soja i određivanje titra virusa rezultati. 3. Uticaj fizičkih i hemijskih faktora na rast mikroorganizama rezultati. Overa praktikuma vežbe (Mikrobiološki pregled hrane - Mikrobiološki praktikum str. 105-111) Vežba 12 (11.12. petak ili 16.12. sreda) Studentski projekti Odbrana studentskih projekata i prezentacija rezultata. Završni kolokvijum (termin kolokvijuma biće naknadno definisan prema dogovoru).