MIKROBIOLOŠKI PRAKTIKUM Školska 2013/2014 KATEDRA ZA MIKROBIOLOGIJU Nastavnici: Prof. dr Branka Vuković-Gačić, šef Katedre Prof. dr Jelena Knežević-Vukčević Prof. dr Slaviša Stanković Doc. dr Tanja Berić tanjab@bio.bg.ac.rs Doc. dr Biljana Nikolić biljanan@bio.bg.ac.rs Saradnici: dr Dragana Mitić-Ćulafić Stoimir Kolarević stoimirk@bio.bg.ac.rs Ivica Dimkić ivicad@bio.bg.ac.rs Diana Šević dianasevic@bio.bg.ac.rs Bojana Jovanović bojana.jovanovic@bio.bg.ac.rs
Program praktičnih vežbi i predavanja za školsku 2013/2014: 1. Hranljive podloge (Priprema podloga, sterilizacija, razlivanje) 2. Određivanje krive rasta bakterija 3. Virusi: određivanje titra i morfologija plaka T7 faga 4. Izolovanje i identifikacija bakterija (Bacillus sp.); Izolacija producenta antibiotika i određivanje antimikrobnog spektra izolata 5. Mikrobiološki pregled vode, vazduha i hrane. Studentski projekti (svi studenti će biti podeljeni u tri grupe i učestvovaće u izradi projekata na kraju kursa) 1. Identifikacija nepoznate bakterijske kulture do nivoa roda/vrste 2. Izolacija bakterijskih mutanata rezistentnih na antibiotike 3. Uticaj fizičkih i hemijskih faktora na rast mikroorganizama Termini vežbi i predavanja: Ponedeljak - vežbe I gr. 08:30 11:30h I grupa: molekularni biolozi + ekolozi II gr. 12:30 15:30h II grupa: biolozi *(Sreda - vežbe: 14:30-17:30h) Zajednička grupa. * samo gde je naglašeno u rasporedu. Četvrtak - vežbe Zajednička grupa: 08:00 11:00h Četvrtak predavanja Zajednička grupa: 11:00-13:00h Vežbe i predavanja će se odvijati na Fizičkom fakultetu (Ul. Cara Dušana 13), ukoliko drugačije nije navedeno. Obnoviti poglavlja iz praktikuma: 1., 2., 3., 4., 5., 6, 7.1., 7.2., 12.
I predavanje (31.10. četvrtak) Kriva rasta i faktori rasta mikroorganizama Vežba 1 (04.11. ponedeljak) Hranljive podloge (Priprema podloga, sterilizacija, razlivanje) Uvodno predavanje: Hranljive podloge, kriva rasta, indirektne metode za određivanje broja mikroorganizama. Vežba 2 (06.11. sreda*) Eksperimentalno odreďivanje krive rasta bakterija. OdreĎivanje titra T7 faga Određivanje titra virusa iz dobijenog stoka. Studenti će biti podeljeni u 4 grupe po 2 h. Grupa I: 10.30 12.30; Grupa II: 12.30 14.30; Grupa III: 14.30 16.30; Grupa IV: 16.30 18.30. *Samo u okviru ove vežbe je izvršena ovakva podela po grupama. Vežba 3 (11.11. ponedeljak) Izolacija bakterija. Uvodno predavanje: Crtanje krive, Izolacija producenta antibiotika, Izolovanje bakterija roda Bacillus. Crtanje krive rasta, kalibrisanje krive optičke gustine i određivanje vremena generacije rezultati. Računanje broja infektivnih virusnih čestica rezultati. Izolacija producenta antibiotika zasejavanje uzoraka zemlje. Izolovanje bakterija roda Bacillus (obogaćivanje i pravljenje išaranih ploča). Studenti su u obavezi da donesu uzorak zemlje, dovoljna je minimalna količina poput grumena. Vežba 4 (14.11 četvrtak) Izolacija bakterija nastavak. Uvodno predavanje: Određivanje bakteriološke ispravnosti vode i vazduha.
Eksperimentalno određivanje bakteriološke ispravnosti vode (određivanje ukupnog broja bakterija u vodi, određivanje prisustva koliformnih bakterija-test A + Metod membranske filtracije vode pokazno). Eksperimentalno određivanje brojnosti bakterija u vazduhu/m 3. Izolovanje bakterija roda Bacillus (posmatranje izraslih kolonija Bacillus sp., katalaza test, presejavanje na nove išarane ploče). Izolacija producenta antibiotika presejavanje u tečni medijum i priprema osetljivih sojeva za antimikrobni spektar izolata. Studenti su u obavezi da donesu uzorak vode. II predavanje (14.11 četvrtak) Obogaćivanje, izolacija i identifikacija grupa mikroorganizama. Metode ekološke mikrobiologije. Vežba 5 (18.11. ponedeljak) OdreĎivanje bakteriološke ispravnosti vode i vazduha. Izolovanje bakterija roda Bacillus (posmatranje izraslih kolonija Bacillus sp., katalaza test, bojenje po Gramu i Šefer-Fultonu i mikroskopiranje, tj. potvrda) rezultati. Određivanje antimikrobnog spektra izolata metod dvojne kultivacije prvi deo. Eksperimentalno određivanje bakteriološke ispravnosti vode Test B. Eksperimentalno određivanje brojnosti bakterija u vazduhu/m 3 rezultati. Overa praktikuma vežbe (Kriva rasta, Virusi). Vežba 6 (21.11. četvrtak) Mikrobiološki pregled hrane. Uvodno predavanje: IMViC test, mikrobiološki pregled hrane. Određivanje bakteriološke ispravnosti vode IMViC test (Test C). Izolacija Lactobacillus sp., Sulfitoredukujuće klostridije, Salmonella sp. Određivanje antimikrobnog spektra izolata metod dvojne kultivacije drugi deo.
III predavanje (21.11 četvrtak) Načini čuvanja mikroorganizama i kontrola rasta. Antibiotici mehanizmi delovanja Vežba 7 (25.11. ponedeljak) Mikrobiološki pregled hrane i vode nastavak. Određivanje bakteriološke ispravnosti vode IMViC test rezultati. Izolacija Lactobacillus sp., Sulfitoredukujuće klostridije rezultati. Salmonella sp. presejavanje na SS agar. Priprema kultura za API test. Određivanje antimikrobnog spektra izolata metod dvojne kultivacije rezultati. Overa praktikuma vežbe (Izolovanje bakterija roda Bacillus i Izolacija producenta antibiotika i odreďivanje antimikrobnog spektra izolata). Vežba 8 (28.11. četvrtak) Savremene metode za identifikaciju pojedinih grupa mikroorganizama Uvodno predavanje: Savremene metode za identifikaciju pojedinih grupa mikroorganizama API 20E i API 50CHL Salmonella sp. potvrdni test Overa praktikuma vežbe (Mikrobiološki pregled vode, vazduha). IV predavanje (28.11. četvrtak) Virusi metode izučavanja; λ fag Vežba 9 (02.12. ponedeljak) Konsultacije za studentske projekte Priprema podloga za studentske projekte API Rezultati Salmonella sp. potvrdni test- rezultati
Vežba 10 (04.12. sreda*) Studentski projekti 1. Identifikacija nepoznate bakterijske kulture do nivoa roda/vrste bojenje po Gramu i zasejavanje uzoraka. 2. Izolacija bakterijskih mutanata rezistentnih na antibiotike zasejavanje na gradient plate šolje. 3. Uticaj fizičkih i hemijskih faktora na rast mikroorganizama zasejavanje uzoraka. Vežba 11 (05.12. četvrtak) Studentski projekti 1. Identifikacija nepoznate bakterijske kulture do nivoa roda/vrste rezultati. 2. Izolacija bakterijskih mutanata rezistentnih na antibiotike presejavanje u tečni medijum sa antibioticima. (Rezultate pogledati u toku sutrašnjeg dana na Katedri za Mikrobiologiju). 3. Uticaj fizičkih i hemijskih faktora na rast mikroorganizama rezultati. Overa praktikuma vežbe (Mikrobiološki pregled hrane) Vežba 12 (09.12. ponedeljak) Studentski projekti Odbrana studentskih projekata i prezentacija rezultata. Kolokvijumi (termin kolokvijuma biće naknadno definisan prema dogovoru).