Ferritin. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Ferritin For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Ferritin English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of ferritin in serum, as an aid in the clinical diagnosis of iron deficiency and overload. Catalog Number: L2KFE2 (200 tests), L2KFE6 (600 tests) Test Code: FER Color: Aqua Summary and Explanation The ferritin molecule consists of a protein shell (MW 450,000) and a core of iron. 1,2 High concentrations are found in liver cells and in erythrocyte recycling centers (RE cells) of the liver, spleen and bone marrow. In these tissues, ferritin serves as the body's principal storehouse for surplus iron, protecting against the toxic effects of excess and maintaining a readily mobilized reserve for erythropoiesis. 3,4 Ferritin is also present in human plasma, where its concentration is normally a satisfactory index of body iron stores as measured by quantitative phlebotomy, iron absorption studies, liver biopsy and the microscopic examination of bone marrow aspirates for stainable iron deposits. 5,6 This relationship with iron stores can be seen in the pattern of serum ferritin values under a variety of physiological and pathological conditions. For individuals in good health the median level, slightly elevated at birth, reaches a low of about 30 ng/ml at six months, with the increase to adult levels taking place after puberty. 7 In males, the median level continues to climb from about 70 ng/ml at age eighteen to almost 200 ng/ml twenty-five years later whereas in females there is a plateau at 35 or 40 ng/ml throughout the childbearing years and a sharp increase thereafter. For adults in good health, the serum ferritin level has been variously reported to range from 20 (± 10) up to 300 (± 100) ng/ml for men, and 10 (± 5) up to 150 (± 50) ng/ml for women. Concentrations below 10 or 15 ng/ml are typical of uncomplicated iron deficiency anemia. For iron overload, values over 300 or 400 ng/ml are the rule, with levels in the 1,000 5,000 ng/ml range common in full-blown cases of hemochromatosis. Clinical applications of the serum ferritin assay have been extensively reviewed It has important roles to play in the diagnosis of iron deficiency and excess, and in the management of conditions and treatments posing a threat to iron balance. It has proved a valuable aid in discriminating iron deficiency anemia from anemias due to other causes 12 and in exposing the disappearance of iron reserves before the onset of anemia. Serial determinations have been employed to monitor, noninvasively, the progressive erosion of iron stores during pregnancy 13 and in patients undergoing regular dialysis treatment. 14 Both in company with other routine blood tests and on its own, the ferritin assay has been used to screen for iron deficiency in a variety of populations, ranging from blood donors 18,19 to unselected hospital patients. 20,21 It is also valuable in screening for precirrhotic hemochromatosis 22 and other forms of iron overload 23 and in monitoring patients who are receiving regular blood transfusions 24 or iron replacement therapy, 25 and thus in danger of accumulating excessive iron stores. Although iron depletion appears to be the only condition associated with reductions in the serum ferritin level, increases are observed not only in the presence of increased iron stores but also in several other situations, including liver disorders, inflammatory conditions, leukemia, Hodgkin's disease and certain other malignancies. Here, increased levels may reflect the escape of ferritin from damaged liver cells, impaired clearance of ferritin from the plasma, synthesis of ferritin by tumor cells, or an expansion of the iron storage compartment induced by ineffective erythropoiesis. Inflammation tends to raise the ferritin level while lowering the serum iron concentration by stimulating increased ferritin production in RE cells, using iron that would otherwise be released to plasma transport proteins In this condition and others, 2 IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, )

3 the correlation between iron stores and circulating ferritin continues to hold, but with a shift towards higher values necessitating an adjustment in the reference range if the ferritin assay is still to be used for distinguishing normal from depleted iron reserves. 29 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Ferritin is a solid-phase, two-site chemiluminescent immunometric assay. Incubation Cycles: 1 30 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Ferritin has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µl serum. Storage: 7 days at 2 8 C, or 2 weeks at 20 C. 30 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Ferritin Bead Pack (L2FE12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-ferritin. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KFE2: 1 pack. L2KFE6: 3 packs. Ferritin Reagent Wedge (L2FEA2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal goat anti-ferritin in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KFE2: 1 wedge. L2KFE6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Ferritin Adjustors (LFEL, LFEH) Two vials (Low and High), 2.5 ml each, of ferritin in a human protein-based matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening. Do not freeze. L2KFE2: 1 set. L2KFE6: 2 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) For the on-board dilution of patient samples. One vial, concentrated (ready-to- IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, ) 3

4 use), nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Storage: 30 days (after opening) at 2 8 C or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2M2Z: 3 labels L2M2Z4: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: Use controls or serum pools with at least two levels (low and high) of ferritin. Expected Values Reference ranges were generated using IMMULITE 2000 Ferritin in a study involving apparently healthy blood donors who had not donated blood within a year of this sampling. Central 95% Range n Males ng/ml 223 Females ng/ml 193 Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitation Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: ng/ml 2.2 pmol/l Calibration Range: up to 1,500 ng/ml. Standardized in terms of the WHO 2nd IS 80/578. Analytical Sensitivity: 0.4 ng/ml. High-Dose Hook Effect: None up to ng/ml. Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three ferritin solutions (1,000, 5,000 and 25,000 ng/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for ferritin. Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no 4 IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, )

5 effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of packed red blood cells in concentrations up to 30 µl/ml has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 5,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 15 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of ferritin, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 Ferritin procedure. (Heparin) = 0.95 (Serum) ng/ml r = (EDTA) = 0.93 (Serum) ng/ml r = (SST Tubes) = 0.99 (Plain Tubes) ng/ml r = Means: 61 ng/ml (Serum) 60 ng/ml (Heparin) 58 ng/ml (EDTA) 62 ng/ml (SST Tubes) Method Comparison: The assay was compared to IMMULITE Ferritin on 135 samples. (Concentration range: approximately 3 to 1,200 ng/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.15 (IML) 13.4 ng/ml r = Means: 314 ng/ml (IMMULITE 2000) 285 ng/ml (IMMULITE) For the 110 data pairs (out of 135) with results by both methods below 500 ng/ml: (IML 2000) = 1.07 (IML) 1.4 ng/ml r = For the 36 data pairs (out of 135) with results by both methods below 100 ng/ml: (IML 2000) = 0.96 (IML) ng/ml r = References 1) Drysdale J, et al. Human isoferritins in normal and disease states. Semin Hematol 1977;14: ) Harrison PM. Ferritin: an iron-storage molecule. Semin Hematol 1977;14: ) Hershko C. Storage iron regulation. Progress Hematol 1977;10: ) Munro H, Linder M. Serum ferritin: diagnostic uses. Physiol Rev 1978;58: ) Lipschitz D, et al. A clinical evaluation of serum ferritin as an index of iron stores. N Engl J Med 1974;290: ) Bezwoda WR, et al. The relationship between marrow iron stores, plasma ferritin concentrations and iron absorption, Scand J Haematol 1979;22: ) Dallman PR, et al. Iron deficiency in infancy and childhood. Am J Clin Nutr 1980;33: ) Jacobs A, et al. Ferritin in serum. N Engl J Med 1975;292: ) Alfrey CP. Serum ferritin assay. CRC Crit Rev Clin Lab Sci 1978;9: ) Worwood M. Serum ferritin. CRC Crit Rev Clin Lab Sci 1979;10: ) Halliday J, Powell L. Progress Hematol 1979;11: ) Seiler M, et al. Differentiation of iron deficiency from anemia of chronic disorders: use of serum ferritin assay. NucCompact 1978;9: ) Ances IG, et al. Serum ferritin as an early determinant of decreased iron stores in pregnant women. Southern Med J 1979;72: ) Eschbach JW, et al. Iron balance in hemodialysis patients. Ann Intern Med 1977;87: ) Hershko C, et al. Serum ferritin and mean corpuscular volume measurement in the diagnosis of β- thalassaemia minor and iron deficiency. Acta Haematol 1979;62: ) Meier F, Beck J. Predictive value theory and the role of serum ferritin in defining iron states. Ligand Rev 1980;2: ) Cook JD, et al. Evaluation of the iron status of a population. Blood 1976;48(3): ) Finch CA, et al. Effect of blood donation on iron stores as evaluated by serum ferritin. Blood 1977;50(3): ) Birgegård G, et al. Serum ferritin levels in male blood donors: relation to number of phlebotomies and iron supplementation. Vox Sang 1978;34: ) Ali MAM, et al. Serum ferritin concentration and bone marrow ironstores: a prospective study. J Can Med Assoc 1978;118: ) Lindstedt G, et al. Serum-ferritin and iron-deficiency anaemia in hospital patients. Lancet 1980; ) Powell LW, et al. Hemochromatosis: 1980 update. Gastroenterology 1980;78: ) Jacobs A. Iron overload clinical and pathologic aspects. Semin Hematol 1977;14: ) Letsky EA, et al. Serum ferritin in children with thalassaemia regularly transfused. J Clin Pathol 1974;27: ) Kaltwasser JP, et al. Serumferritin als Kontrollparameter bei oraler Eisentherapie. Deut Med Wochenschr 1977;102: ) Cartwright GE, Lee GR. The anaemia of chronic disorders. Brit J Haematol 1971;21: ) Elin RJ, et al. Effect of induced fever on serum iron and ferritin concentrations in man. Blood 1977;49: ) Birgegård G, et al. Serum ferritin during infection. Scand J Haematol 1978;21: ) Smith RJ, et al. Serum ferritin levels in the anemia of rheumatoid arthritis. J Rheumatol 1977;4: ) Tietz NW, editor. Clinical IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, ) 5

6 guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1995:234. Additional References Arosio P, et al. Ferritin: biochemistry and methods of determination. Ligand Quarterly 1981 Fall; 4(3): Cook JD. Clinical evaluation of iron deficiency. Semin Hematol 1982;19:6-17. Ellis D. Serum ferritin compared with other indices of iron status in children and teenagers undergoing maintenance hemodialysis. Clin Chem 1979;25: Finch CA, Huebers H. Perspectives in iron metabolism. N Engl J Med 1982;306: Grail A, Hancock BW, Harrison P. Serum ferritin in normal individuals and in patients with malignant lymphoma and chronic renal failure measured with seven different commercial immunoassay techniques. J Clin Pathol 1982;35: Halliday J, Powell L. Iron overload. Semin Hematol 1982;19: Kaltwasser JP. Indikation zur Serumferritin- Bestimmung. Deut Med Wochenschr 1980;105: Lundberg PE, Lindstedt G, et al. Increase in serum ferritin concentration induced by fasting. Clin Chem 1984;30: Valberg L. Plasma ferritin concentrations: their clinical significance and relevance to patient care. J Can Med Assoc 1980;122: Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % 5 1, % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 4 in % 2 in % 1 in % 2 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 3 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 4 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 5 16 in 16 1,121 8 in % 4 in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 16 v 16. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 16 στα 16. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 16 w IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, )

7 Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % 2 69 A % B % C % 3 91 A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Method Comparison (IML 2000) = 1.15 (IML) 13.4 ng/ml r = English. Ferritin Česky. Feritin. Ελληνικά. Φερριτίνη. Polski. Ferrytyna. Česky IMMULITE 2000 Feritin Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace feritinu v séru, jakožto pomůcky v klinické diagnostice nedostatku a přebytku železa. Katalogové číslo: L2KFE2 (200 stanovení), L2KFE6 (600 stanovení) Kód metody: FER Barva: tyrkysová Shrnutí a vysvětlení Molekula ferritinu se skládá z proteinového obalu (molekulová hmotnost ) a jádra ze železa. 1,2 Ve vysokých koncentracích se vyskytuje v buňkách jater a v jaterních centrech recyklace erytrocytů (RE buňky), slezině a kostní dřeni. V těchto tkáních slouží ferritin jako hlavní zásobárna přebytečného železa v organizmu, chrání před toxickými účinky z nadbytku a udržuje pohotovou rezervu pro erytropoiézu. 3,4 Feritin se rovněž nachází v lidské krevní plazmě. Za normálních okolností představuje jeho koncentrace v plazmě uspokojivý ukazatel zásoby železa v krvi, který lze měřit kvantitativní flebotomií, rozborem absorpce železa, jaterní biopsií a mikroskopickou zkouškou obarvitelných železných usazenin ve vzorku kostní dřeně. 5,6 Tato souvislost se zásobou železa je patrná v charakteru koncentrace ferritinu v séru při různých fyziologických a patologických stavech. U zdravých jedinců je střední hodnota koncentrace ferritinu při narození mírně zvýšená, v šesti měsících dosahuje spodní hranice kolem 30 ng/ml a po pubertě roste až na hodnotu obvyklou v dospělosti. 7 U mužů se střední hodnota dále zvyšuje z přibližně 70 ng/ml v osmnácti až na téměř 200 ng/ml za dvacet pět let zatímco u žen je množství ferritinu v plodném období konstantní na úrovni 35 nebo 40 ng/ml a pak strmě roste. U zdravých dospělých jedinců se udávané množství ferritinu v séru pohybuje od 20 (± 10) až do 300 (± 100) ng/ml u mužů a 10 (± 5) až do 150 (± 50) ng/ml u žen. Koncentrace menší než 10 nebo 15 ng/ml jsou typické pro nekomplikovanou anémií z nedostatku železa. Při přebytku železa se pravidelně vyskytují hodnoty nad 300 nebo 400 ng/ml, přičemž koncentrace na úrovni ng/ml je obvyká u plně rozvinuté hemochromatózy. Klinické využití stanovení ferritinu v séru prošlo rozsáhlou revizí Sehrává významnou úlohu při určení diagnózy přebytku a nedostatku železa a též při péči o stavy a léčby, které by mohly způsobit nevyvážené množství železa v IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, ) 7

8 organizmu. Představuje cennou pomůcku při rozlišení anémie z nedostatku železa od jiných typů anémie 12 a pomáhá odhalovat úbytek zásob železa ještě před nástupem anémie. Sériová měření se používají k neinvazivnímu sledování postupného vymílání zásob železa během těhotenství 13 a u pacientů pravidelně podstupujících dialýzu. 14 Stanovení ferritinu se používá ať už společně s dalšími běžnými krevními testy nebo samostatně ke screeningu nedostatku železa u různých skupin lidí od dárců krve 18,19 až po různé pacienty nemocnic. 20,21 Toto stanovení je rovněž cenné při screeningu precirhotické hemochromatózy 22 a dalších forem nadbytku železa 23 a k monitoringu pacientů, kteří pravidelně dostávají transfuzi krve 24 nebo podstupují substituční léčbu preparáty železa 25 a proto jim hrozí nebezpečí nahromadění nadbytečných zásob železa. I když je vyčerpání zásob železa zřejmě jediným stavem spojeným s redukcí množství ferritinu v séru, jeho zvýšení se objevuje nejen v přítomnosti zvýšených zásob železa, ale i v některých dalších situacích včetně jaterních poruch, zánětlivých onemocnění, leukémie, Hodgkinsnova syndromu a některých dalších zhoubných onemocnění. V tomto případě může zvýšené množství ferritinu v séru svědčit o jeho úniku z poškozených jaterních buněk, poruše odstraňování ferritinu z plazmy, syntéze ferritinu nádorovými buňkami nebo rozšíření místa uchovávání železa neúčinnými erytopoiézami. Zánět má tendenci zvyšovat množství ferritinu za současného snížení koncentrace železa v séru pomocí stimulace zvýšené tvorby ferritinu v RE buňkách za použití železa, které by jinak bylo uvolněno do transportních proteinů plazmy V tomto i v dalších případech stále platí korelace mezi zásobami železa a množstvím ferritinu v cirkulaci, ale dochází k posunu směrem k vyšším hodnotám. To si v případě, že stanovení ferrinu má i nadále sloužit k rozlišení normální zásoby železa od vyčerpané rezervy, vyžaduje úpravu referenčního rozmezí. 29 Princip stanovení Stanovení Feritin na analyzátorech IMMULITE 2000 je oboustranná chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi. Inkubační cykly: 1 30 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Feritin na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 10 μl séra. Skladování: 7 dní při teplotě 2 8 C nebo 2 týdny při teplotě 20 C. 30 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. 8 IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, )

9 Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky na vnitřní krabici. Feritin zásobník s kuličkami (L2FE12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti feritinu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KFE2: 1 balení. L2KFE6: 3 balení Feritin reagencie (L2FEA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální kozí protilátkou proti feritinu v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KFE2: 1 nádobka. L2KFE6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Feritin kalibrátory (LFEL, LFEH) Dvě ampulky po 2,5 ml s vysokou a nízkou koncentrací feritinu v matrixu na bázi lidského proteinu, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C. Nezmrazujte. L2KFE2: 1 sada. L2KFE6: 2 sady. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Multidiluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Pro automatické ředění vzorků. Jedna ampulka koncentrovaného (připraveného k použití), nehumánního bílkovinového/pufrovaného matrixu, s konzervačním prostředkem. Skladování: Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při teplotě 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2M2Z: 3 štítky L2M2Z4: 5 štítků L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) feritinu. Očekávané hodnoty Referenční rozmezí byla získána pomocí stanovení Feritin na analyzátorech IMMULITE 2000 v rámci výzkumu, který zahrnoval zjevně zdravé dárce krve, kteří rok před odběrem těchto vzorků nedarovali krev. IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, ) 9

10 Střední 95% rozmezí n Muži ng/ml 223 Ženy ng/ml 193 Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor: ng/ml 2,2 pmol/l Kalibrační rozsah: Do ng/ml. Standardizováno dle WHO 2nd IS 80/578. Analytická citlivost: 0,4 ng/ml. High-Dose Hook Effect: Do ng/ml žádný. Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Precision.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearity.) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků feritinu (1 000, a ng/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Recovery.) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči feritinu. Bilirubin: Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost červených krvinek oddělených od plazmy v koncentracích do 30 µl/ml nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K ohodnocení vlivu použití alternativních typů vzorků jsme odebrali krev od 15 dobrovolníků do obyčejných, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Do úměrných objemů odpovídajících vzorků byl přidán feritin různých koncentrací, aby výsledkem byly hodnoty napříč kalibračním rozsahem stanovení. Vzorky byly následně stanoveny pomocí testu Feritin na analyzátorech IMMULITE (Heparin) = 0,95 (Sérum) + 1,8 ng/ml r = 0,998 (EDTA) = 0,93 (Sérum) + 1,3 ng/ml r = 0,998 (SST zkumavky) = 0,99 (obyčejné zkumavky) + 1,3 ng/ml r = 0,997 Střední hodnoty: 61 ng/ml (Sérum) 60 ng/ml (Heparin) 58 ng/ml (EDTA) 62 ng/ml (SST zkumavky) Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno s testem Feritin na analyzátoru IMMULITE na 135 vzorcích. (Koncentrační rozsah: přibližně 3 až ng/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,15 (IML) 13,4 ng/ml r = 0,994 Střední hodnoty: 314 ng/ml (IMMULITE 2000) 285 ng/ml (IMMULITE) 10 IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, )

11 Pro 110 párů dat (z 135), u kterých výsledky stanovení podle obou metod byly pod 500 ng/ml, platí: (IML 2000) = 1,07 (IML) 1,4 ng/ml r = 0,986 Pro 36 párů dat (z 135) s výsledky podle obou metod pod 100 ng/m platí: (IML 2000) = 0,96 (IML) + 3,7 ng/ml r = 0,987 Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Φερριτίνη Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της φερριτίνης στον ορό, ως βοήθημα στην κλινική διάγνωση της σιδηροπενίας ή της υπερβολικής ποσότητας σιδήρου. Αριθμός καταλόγου: L2KFE2 (200 αναλύσεις), L2KFE6 (600 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: FER Χρώμα: Του νερού Περίληψη και Επεξήγηση Το μόριο της φερριτίνης αποτελείται από ένα πρωτεϊνικό περίβλημα (ΜΒ ) και από έναν πυρήνα σιδήρου. 1,2 Υψηλές συγκεντρώσεις εμφανίζονται στα κύτταρα του συκωτιού και στα κέντρα ανακύκλωσης των ερυθροκυττάρων (RE κύτταρα) του συκωτιού, της σπλήνας και του νωτιαίου μυελού. Σε αυτούς τους ιστούς, η φερριτίνη δρα σαν τον κύριο αποθηκευτικό χώρο του σώματος για την περίσσεια σιδήρου ως προστασία έναντι των τοξικών επιπτώσεων της υπερβολικής ποσότητας και διατηρώντας μια έτοιμη εφεδρική δύναμη για την ερυθροποίηση. 3,4 Η Φερριτίνη είναι επίσης παρούσα στο ανθρώπινο πλάσμα όπου οι συγκεντρώσεις της είναι συνήθως ένας ικανοποιητικός δείκτης των αποθεμάτων σιδήρου στο σώμα όπως μετρήθηκαν με ποσοτική φλεβοτομή, με μελέτες απορρόφησης του σιδήρου, με βιοψία του συκωτιού και από την μικροσκοπική εξέταση του νωτιαίου μυελού που αναρροφά χρωστικά ιζήματα σιδήρου. 5,6 Η παραπάνω σχέση με τα αποθέματα σιδήρου μπορεί να αποτυπωθεί στις τιμές της φερριτίνης στον ορό κάτω από διάφορες φυσιολογικές και παθολογικές καταστάσεις. Για άτομα με καλή υγεία η ενδιάμεση τιμή είναι ελαφρώς αυξημένη κατά την γέννα, φθάνει σε χαμηλό επίπεδο περίπου 30 ng/ml στους 6 μήνες, και αγγίζει τις τιμές των ενηλίκων μετά την εφηβεία. 7 Στους άντρες, η ενδιάμεση τιμή συνεχίζει να ανεβαίνει από 70 ng/ml στην ηλικία των 18 σε περίπου 200 ng/ml 25 χρόνια αργότερα ενώ στις γυναίκες υπάρχει ένα πλατώ 35 ή 40 ng/ml κατά την παραγωγική ηλικία και μετά παρατηρείται μια απότομη άνοδος των τιμών. Για υγιείς ενήλικες, οι τιμές της φερριτίνης στον ορό έχουν αναφερθεί να κυμαίνονται από 20 (± 10) μέχρι 300 (± 100) ng/ml για τους άντρες, και 10 (± 5) έως 150 (± 50) ng/ml για τις γυναίκες. Συγκεντρώσεις κάτω από 10 ή 15 ng/ml δείχνουν αναιμία λόγω ανεπάρκειας σιδήρου χωρίς επιπλοκές. Όταν υπάρχει περίσσεια σιδήρου, τιμές πάνω από 300 ή 400 ng/ml αποτελούν τον κανόνα, ενώ τιμές στο εύρος ng/ml παρατηρούνται συνήθως σε περιπτώσεις ακμάζουσας αιμοχρωμάτωσης. Έχει γίνει εκτεταμένος απολογισμός των κλινικών εφαρμογών της ανάλυσης της φερριτίνης ορού Η ανάλυση παίζει σημαντικό ρόλο στην διάγνωση της ανεπάρκειας και της περίσσειας σιδήρου και στον χειρισμό των καταστάσεων και θεραπειών που διαταράσσουν την ισορροπία του σιδήρου. Έχει αποδειχθεί πολύτιμος βοηθός στην διάκριση των αναιμιών λόγω ανεπάρκειας σιδήρου και των αναιμιών που οφείλονται σε άλλες αιτίες 12 και επίσης στην έκθεση της εξαφάνισης των αποθεμάτων σιδήρου πριν από την εμφάνιση αναιμίας. Χρησιμοποιούνται συνεχείς μετρήσεις ώστε να καταγραφεί,μη επεμβατικά, η προοδευτική διάβρωση των αποθεμάτων σιδήρου κατά την διάρκεια της εγκυμοσύνης 13 και σε ασθενείς που υποβάλλονται σε αιμοκάθαρση κατά τακτά χρονικά διαστήματα. 14 Η ανάλυση IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, ) 11

12 φερριτίνης, μόνη της ή σε συνδυασμό με άλλες αναλύσεις αίματος, έχει χρησιμοποιηθεί για την εξέταση έλλειψης σιδήρου σε διάφορες ομάδες όπως π.χ. οι δωρητές αίματος 18,19 ή ένα τυχαίο δείγμα ασθενών σε νοσοκομεία. 20,21 Επίσης η ανάλυση φερριτίνης είναι σημαντική για την εξέταση για προκιρρωτική αιμοχρωμάτωση 22 και για άλλες μορφές περίσσειας σιδήρου 23 και για την παρακολούθηση ασθενών που υποβάλλονται σε τακτική μετάγγιση αίματος 24 ή σε θεραπεία αναπλήρωσης σιδήρου, 25 και συνεπώς βρίσκονται σε κίνδυνο λόγω συσσώρευσης περίσσειας αποθεμάτων σιδήρου. Ενώ η μείωση των τιμών του σιδήρου εμφανίζεται ως η μοναδική κατάσταση που συνδέεται με μείωση του επιπέδου της φερριτίνης στον ορό, η αύξηση των τιμών παρατηρείται όχι μόνο λόγω της παρουσίας αποθεμάτων σιδήρου αλλά και λόγω άλλων καταστάσεων όπως στις διαταραχές του συκωτιού, στις φλεγμονώδεις ασθένειες,στη λευχαιμία, στην νόσο του Hodgkin και σε συγκεκριμένες άλλες κακοήθειες. Σε αυτή την περίπτωση, αυξημένες τιμές μπορεί να αντανακλούν την έκλυση φερριτίνης από τα κατεστραμμένα κύτταρα του συκωτιού, διαταραγμένη απομάκρυνση της φερριτίνης από το πλάσμα, σύνθεση της φερριτίνης από κύτταρα όγκου, ή την επέκταση του χώρου αποθήκευσης σιδήρου που προκλήθηκε από αποτυχημένη ερυθροποίηση. Η φλεγμονή τείνει να προκαλεί αύξηση των τιμών της φερριτίνης ενώ μειώνει την συγκέντρωση σιδήρου στον ορό, διεγείροντας την παραγωγή φερριτίνης στα κύτταρα RE, χρησιμοποιώντας σίδηρο που θα μπορούσε αλλιώς να απελευθερωθεί στις πρωτεΐνες-μεταφορείς του πλάσματος Στην περίπτωση αυτή αλλά και σε άλλες, η συσχέτιση μεταξύ των αποθεμάτων σιδήρου και της κυκλοφορούσας φερριτίνης συνεχίζει να υπάρχει αλλά με μια άνοδο των τιμών επιβάλλοντας έτσι μια ρύθμιση των ευρών αναφοράς αν η ανάλυση φερριτίνης συνεχίζει να χρησιμοποιείται για την διάκριση μεταξύ κανονικών και μειωμένων αποθεμάτων σιδήρου. 29 Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Φερριτίνη είναι μια ξηρής φάσης, δι-φασική χημειοφωταυγής ανοσομετρική εξέταση. Κύκλοι Επώασης: 1 30 λεπτά Συλλογή δείγματος Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Φερριτίνη δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορός. Φύλαξη: 7 μέρες στους 2 8 C, ή για 2 εβδομάδες στους 20 C. 30 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για διαγνωστική in vitro χρήση Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή 12 IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, )

13 αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά. Αζίδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl,σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. Προσφύγετε στο εσώκλειστο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρησιμοποιείτε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα υλικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Φερριτίνη σε συσκευασία σφαιριδίων(l2fe12) Με γραμμογράφηση. 200 σφαιρίδια καλυμμένα με μονοκλωνικά αντί Φερριτίνης αντισώματα ποντικού. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία L2KFE2: 1 συσκευασία. L2KFE6: 3 συσκευασίες. Δοχείο Αντιδραστηρίου Φερριτίνης(L2FEA2) Με γραμμογράφηση. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένης σε πολυκλωνικό αντί- Φερριτίνης αντίσωμα κατσίκας, σε ρυθμιστικό, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KFE2: 1 δοχείο. L2KFE6: 3 δοχεία. Πριν την χρήση, αφαιρέστε την διαφανή ταινία προσέχοντας να μην καταστραφεί το πλαστικό κάλυμμα ή η γραμμογράφηση. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές Φερριτίνης (LFEL, LFEH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και ψηλό), 2,5 ml το καθένα, που περιέχουν φερριτίνη σε μια μήτρα βασισμένη σε ανθρώπινη πρωτεϊνη με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα. Να μην καταψύχονται. L2KFE2: 1 σετ. L2KFE6: 2 σετ. Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από το κατάλληλο σύστημα. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά Πολυ-αραιωτικό 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Για την αραίωση δειγμάτων ασθενών. Ένα φιαλίδιο συμπυκνωμένου (έτοιμου για χρήση) μη ανθρώπινης μήτρας πρωτεΐνης/ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Αποθήκευση: 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Ετικέτες με barcode χορηγούνται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν την χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε δοκιμαστικό σωλήνα mm, έτσι ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από το κατάλληλο σύστημα. L2M2Z: 3 ετικέτες L2M2Z4: 5 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για το αραιωτικό δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες διάλυσης δείγματος Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, ) 13

14 στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου η δείγματα ορού τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) Φερριτίνης. Αναμενόμενες Τιμές Τα παρακάτω εύρη αναφοράς είναι αποτέλεσμα μελέτης χρησιμοποιώντας την ανάλυση IMMULITE 2000 Φερριτίνη σε φαινομενικά υγιείς αιμοδότες που δεν είχαν δώσει αίμα τον προηγούμενο χρόνο από την στιγμή της εξέτασης. Κεντρικό 95% Εύρος n Άντρες ng/ml 223 Γυναίκες ng/ml 193 Θεωρείστε αυτά τα όρια μόνο σαν οδηγούς. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε εργαστηριακές μεθόδους ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που, σαν ρουτίνα, εκτίθενται σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε, να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για δεδομένα αντιπροσωπευτικά της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς αντιπηκτικά ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Παράγοντας μετατροπής: ng/ml 2,2 pmol/l Εύρος καμπύλης: μέχρι 1500 ng/ml. Τυποποιημένο σύμφωνα με το WHO 2nd IS 80/578. Αναλυτική Ευαισθησία: 0,4 ng/ml. Επίδραση φαινομένου Hook: Κανένα μέχρι ng/ml. Ακρίβεια: Τα δείγματα υφίσταντο αναλύσεις εις διπλούν σε διάστημα 20 ημερών, δύο τρεξίματα την ημέρα, για σε σύνολο 40 τρεξιμάτων και 80 επαναλήψεων. (βλ. Πίνακα Precision.) Γραμμικότητα: Τα δείγματα υφίσταντο αναλύσεις σε διαφορετικά διαλύματα. (βλ. Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα). Ανάκτηση: Δείγματα εμπλουτίστηκαν 1 προς 19 και δοκιμάστηκαν με τρία διαλύματα φερριτίνης (1000, 5000 και ng/ml). (βλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή ειδικότητα για τη φερριτίνη (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Παρουσία ερυθρών αιμοσφαιρίων μέχρι 30 µl/ml δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για να αναλυθεί η επίδραση των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα 15 εθελοντών σε απλούς, ηπαρινισμένους, EDTA και Becton Dickinson SST 14 IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, )

15 δοκιμαστικούς σωλήνες (vacutainer). Ίδιες ποσότητες αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν (spiked) με διαφορετικές ποσότητες φερριτίνης, ώστε να υπάρχουν τιμές από όλο το εύρος καμπύλης, και όλα τα δείγματα μετά εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία της Φερριτίνης: (Ηπαρίνη) = 0,95 (Ορός) + 1,8 ng/ml r = 0,998 (EDTA) = 0,93 (Ορός) + 1,3 ng/ml r = 0,998 (SST Σωληνάρια) = 0,99 (Απλοί σωλήνες) + 1,3 ng/ml r = 0,997 Μέσοι όροι: 61 ng/ml (Ορός) 60 ng/ml (Ηπαρίνη) 58 ng/ml (EDTA) 62 ng/ml (SST Σωλήνες) Σύγκριση της μεθόδου: Η μέθοδος συγκρίθηκε με την μέθοδο IMMULITE Φερριτίνη σε 135 δείγματα (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 3 με 1200 ng/ml. Βλ. Γράφημα). Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,15 (IML) 13,4 ng/ml r = 0,994 Μέσοι όροι: 314 ng/ml (IMMULITE 2000) 285 ng/ml (IMMULITE) Για τα 110 ζεύγη δεδομένων(από τα 135) και των δύο μεθόδων με αποτελέσματα κάτω από 500 ng/ml: (IML 2000) = 1,07 (IML) 1,4 ng/ml r = 0,986 Για τα 36 ζεύγη δεδομένων(από τα 135) και των δύο μεθόδων με αποτελέσματα κάτω από 100 ng/ml: (IML 2000) = 0,96 (IML) + 3,7 ng/ml r = 0,987 Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Ferrytyna Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia ferrytyny w surowicy, przydatny w diagnozowaniu niedoborów i nadmiaru żelaza. Numery katalogowe: L2KFE2 (200 testów), L2KFE6 (600 testów) Kod testu: FER Kolor testu: Woda Wprowadzenie Cząsteczka ferrytyny zbudowana jest z zewnętrznej osłony białkowej (masa ) i części rdzeniowej z żelaza. 1,2 W wysokich stężeniach występuje w komórkach wątroby, a także w centrach obrotu krwinkami czerwonymi (komórki RE) wątroby, śledziony i szpiku kostnego. W miejscach tych ferrytyna pełni rolę magazynu nadmiaru żelaza chroniąc organizm przed jego toksycznym wpływem i zapewniając gotowy do użycia rezerwuar dla erytropoezy. 3,4 Ferrytyna jest ponadto obecna w osoczu, a jej stężenie w osoczu może być wystarczającym wskaźnikiem zapasów żelaza, określanym także poprzez ilościowy upust krwi, badania absorpcji żelaza, biopsję wątroby i mikroskopową ocenę aspiratów szpiku kostnego pod kątem barwliwych depozytów żelaza. 5,6 Zależność pomiędzy ilością ferrytyny a zapasami żelaza jest widoczna w przypadku badania stężenia ferrytyny w surowicy w różnych stanach fizjologicznych i patologicznych. U osób zdrowych wartość mediany, nieznacznie podniesiona przy narodzinach, osiąga dolny poziom około 30 ng/ml w szóstym miesiącu, a następnie wzrasta do wartości charakterystycznych dla dorosłych po okresie dojrzewania. 7 U mężczyzn wartość mediany narasta od około 70 ng/ml w wieku osiemnastu lat do prawie 200 ng/ml dwadzieścia pięć lat później podczas gdy u kobiet osiąga plateau 35 lub 40 ng/ml w okresie ciąży i porodu by następnie gwałtownie wzrosnąć. Podawane wartości poziomu IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, ) 15

16 ferrytyny u zdrowych dorosłych różnią się pozostając w zakresie od 20 (±10) do 300 (±100) ng/ml u mężczyzn i od 10 (±5) do 150 (±50) ng/ml u kobiet. Stężenia poniżej 10 lub 15 ng/ml są typowe dla nieskomplikowanej anemii z powodu niedoboru żelaza. Wartościami świadczącymi o przeładowaniu żelazem są stężenia powyżej 300 lub 400 ng/ml, z wynikami ng/ml częstymi w przypadkach zaawansowanej hemochromatozy. Kliniczne zastosowania pomiaru stężenia ferrytyny w surowicy mają duże piśmiennictwo Stwierdzono, że odgrywa ona znaczącą rolę w diagnozowaniu niedoborów i nadmiaru żelaza oraz w ocenie stanów i odpowiedzi na leczenie w przypadku wyrównywania poziomu żelaza. Udowodniono istotne znaczenie pomiaru ferrytyny dla różnicowania anemii wywołanej niedoborem żelaza od anemii innej etiologii oraz wykrycia zaniku rezerw żelaza przed ujawnieniem się anemii. 12 Seryjne pomiary używane są do nieinwazyjnego monitorowania uszczuplania zasobów żelaza w czasie ciąży 13 i u chorych poddawanych regularnym dializom 14. Pomiary stężenia ferrytyny wyłącznie lub w połączeniu z innymi badaniami krwi, używane są jako testy przesiewowe w kierunku niedoborów żelaza w różnych grupach: od dawców 18,19 krwi do pacjentów 20,21 hospitalizowanych. Oznaczenie to jest również ważnym testem przesiewowym w kierunku hemochromatozy przedmarskościowej 22, innych postaci przeładowania żelazem, 23 przy monitorowaniu chorych otrzymujących regularnie transfuzje krwi lub leczonych żelazem 24, czyli w przypadkach 25 zagrożenia utworzenia nadmiernych zapasów żelaza. Redukcja poziomu żelaza wydaje się być jedynym stanem związanym z obniżeniem poziomu ferrytyny w surowicy, natomiast wzrost poziomu ferrytyny obserwowany jest nie tylko w przypadku powiększenia zapasów żelaza lecz również w szeregu innych sytuacji obejmujących zaburzenia funkcji wątroby, stany zapalne, białaczkę, chorobę Hodgkin a i inne choroby o charakterze nowotworowym. W tych przypadkach podniesione stężenia ferrytyny odzwierciedlają jej ucieczkę z uszkodzonych komórek wątroby, upośledzone usuwanie ferrytyny z osocza, wytwarzanie ferrytyny przez komórki nowotworowe lub rozwój systemu magazynowania żelaza wywołany upośledzoną erytropoezą. W stanach zapalnych istnieje tendencja do wzrostu poziomu ferrytyny przy równoczesnym spadku stężenia żelaza w surowicy na skutek stymulacji komórek RE do produkcji ferrytyny która angażuje żelazo dostępne w normalnej sytuacji dla osoczowych białek transportujących W tym oraz innych stanach zależność pomiędzy magazynowaniem żelaza i poziomem krążącej ferrytyny jest stała z przesunięciem jednakże w kierunku wartości wyższych. Wymusza to konieczność korekcji zakresów referencyjnych w przypadku, gdy oznaczenie ferrytyny ma na celu różnicowanie normalnych i pomniejszonych rezerw żelaza. 29 Zasada testu IMMULITE 2000 Ferrytyna jest immunoenzymatycznym, chemiluminescencyjnym, dwupunktowym testem kanapkowym (imunometrycznym) fazy stałej. Czas inkubacji: 1 x 30 minut. Preparatyka próbek Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery 16 IMMULITE 2000 Ferritin (PIEL2KFE-3 {14}, )